EA000743B1

EA000743B1 - Производные фосфоновой кислоты, обладающие ингибирующей активностью в отношении металлопептидаз

Info

Publication number: EA000743B1
Application number: EA199800470A
Authority: EA
Inventors: Габриеле Норчини; Даниела Ботта; Франческо Сантанджело
Original assignee: Замбон Груп С.П.А.
Priority date: 1995-11-23
Filing date: 1996-11-11
Publication date: 2000-02-28
Also published as: JP2000501079A; US6548480B1; IL124021A; DE69626846D1; CN1127513C; EA199800470A1; PT868428E; KR19990071550A; BR9611465A; EP0868428A1; ITMI952430A0; IT1276161B1; DK0868428T3; EP0868428B1; SI0868428T1; DE69626846T2; CZ291926B6; AU7568996A; ITMI952430A1; AU707570B2

Description

Настоящее изобретение относится к производным фосфоновой кислоты, пригодным для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, в частности оно относится к производным фосфоновой кислоты, пригодным для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, в качестве ингибиторов металлопептидаз. Интерес к изучению молекул, обладающих способностью ингибировать металлопептидазы, с точки зрения фармакологии обусловлен ролью указанных ферментов, проявляющейся на уровне сердечнососудистой системы.

Хорошо известным является тот факт, что соединения, которые обладают ингибирующей активностью в отношении ангиотензинпревращающего фермента (АСЕ), весьма перспективны для лечения гипертензии, сердечной недостаточности и постинфарктного состояния благодаря тому, что они ингибируют образование ангиотензина II, представляющего собой вещество, которое увеличивает кровяное давление.

Соединения, обладающие ингибирующей активностью в отношении эндотелинпревращающего фермента (ЕСЕ), пригодны в качестве антисосудосуживающих агентов, поскольку они ингибируют образование эндотелина, представляющего собой состоящий из 21 аминокислот пептид, обладающий сосудосуживающей активностью.

И, наоборот, соединения, обладающие ингибирующей активностью в отношении такого фермента, как нейтральная эндопептидаза (NEP), который также называют энкефалиназой, пригодны в качестве сосудорасширяющих агентов и диуретиков, поскольку фермент NEP ответственен за инактивацию не только эндогенного энкефалина, но также и некоторых натрийуретических факторов, среди которых, например, следует отметить предсердный натрийуретический фактор, сосудорасширяющий гормон, секретируемый сердцем.

Таким образом, с учетом их разных механизмов действия на сердечно-сосудистую систему соединения, обладающие ингибирующей активностью в отношении металлопротеаз, обычно используются по отдельности или в комбинации для лечения гипертензии, почечной недостаточности, застойной сердечной недостаточности и постинфарктоного состояния.

В патенте США 4432972 (E.R. Squibb & Sons, Inc.) описаны фосфорилированные производные аминокислот, такие как, в частности, фосфонамидаты, обладающие ингибирующей активностью в отношении АСЕ и ингибирующей активностью в отношении энкефалиназы.

Эти соединения описаны для применения в качестве гипотензивных агентов и анальгетиков.

В Европейской заявке 0518299 (Takeda Chemical Industries, Ltd.) описаны некоторые производные фосфоновой кислоты, которые обладают ингибирующей активностью в отношении ЕСЕ и которые пригодны для лечения гипертензии, сердечных заболеваний и заболеваний сосудов головного мозга и болезней почек.

Согласно настоящему изобретению были выявлены производные фосфоновой кислоты, которые обладают ингибирующей активностью в отношении ангиотензинпревращающего фермента, а также нейтральной эндопептидазы (двойная ACE/NEP-ингибирующая активность), что делает их особенно пригодными для сердечно-сосудистой терапии.

Таким образом, объектом настоящего изобретения являются соединения формулы

О R2

II I * *

R-X-CH-P-N-CH-CONH-CH-COOH (I)

III I

Rl ОН R3 CH2-R4 где

R обозначает ^-С^лкильную группу с прямой или разветвленной цепью, необязательно замещенную одним или несколькими атомами фтора, арильную или арилалкильную группу с 1 -6 атомами углерода в алкильном фрагменте, где арил обозначает фенильную, 1 -нафтильную или 2-нафтильную группу или 5- или 6-членный ароматический гетероцикл с 1 или 2 гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу, необязательно замещенные одним или несколькими одинаковыми или различными заместителями, выбранными из группы, включающей атомы галогена, гидроксильные группы, алкильную, алкокси-, алкилтио-, алкилсульфонильную или алкоксикарбонильную группы с 1 -3 атомами углерода в алкильном фрагменте, карбоксильные группы, аминокарбонильные группы, ациламиногруппы, аминосульфонильные группы, моно- или диалкиламинокарбонильные группы с 1 -3 атомами углерода в алкильном фрагменте;

R₁ и R₂ имеют одинаковое или различное значение и обозначают атом водорода или С₁С4алкильную группу с прямой или разветвленной цепью;

R₃ обозначает С₁-С₆алкильную группу с прямой или разветвленной цепью или арилалкильную группу с 1 -6 атомами углерода в алкильном фрагменте, где арил обозначает фенильную, 1 -нафтильную или 2-нафтильную группу или 5- или 6-членный ароматический гетероцикл с 1 или 2 гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу, необязательно замещенные, как указано для R;

R4 обозначает 5- или 6-членную ароматическую гетероциклическую группу с одним или двумя гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу, необязательно замещенную 5- или 6-членной ароматической гетероциклической группой с одним или двумя гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу, или фенильной группой, или он обозначает фенильную группу, замещенную 5- или 6-членной ароматической гетероциклической группой с одним или двумя гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу, причем, фенильная и гетероциклические группы необязательно могут быть замещены одним или несколькими одинаковыми или различными заместителями, выбранными из группы, включающей атомы галогена, алкильную, алкокси-, алкилтио- или алкоксикарбонильную группы с 1-3 атомами углерода в алкильном фрагменте;

Х обозначает простую связь или группу -O-CONH- или -CONH; атом углерода, помеченный звездочкой, представляет собой асимметричный атом углерода;

и их фармацевтически приемлемые соли, при условии, что R₄ не обозначает имидазолильную или индолильную группу.

Соединения формулы I содержат, по крайней мере, два асимметричных атома углерода и поэтому могут находиться в форме стереоизомеров.

Таким образом, объектом настоящего изобретения являются соединения формулы I в форме стереоизомерной смеси, а также в форме отдельных стереоизомеров.

Предлагаемые соединения формулы I проявляют двойную ACE/NEP-ингибирующую активность и пригодны для лечения сердечнососудистых заболеваний.

В контексте настоящего описания, если не указано иное, под понятием алкильная группа подразумевают алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, такую как метил, этил, нпропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, третбутил, изобутил, н-пентил, 2-пентил, 3-пентил, изопентил, трет-пентил, н-гексил и изогексил; под понятием алкоксигруппа подразумевают алкоксигруппу с прямой или с разветвленной цепью, такую, как метокси, этокси, н-пропокси и изопропокси; под понятием галоген подразумевают атом фтора, хлора, брома или йода; под понятием ацил подразумевают ацильную группу, происходящую из алифатической или ароматической карбоновой кислоты, такой как уксусная, пропионовая, масляная и бензойная кислота; под понятием арил подразумевают ароматическую группу, такую как фенильная, 1 нафтильная или 2-нафтильная группа, или 5или 6-членную ароматическую гетероциклическую группу с 1 или 2 гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу, такую как тиазол, изоксазол, оксазол, изотиазол, пиразол, имидазол, тиофен, пиррол, пиридин, пиримидин, пиразин и фуран, необязательно сконденсированный с бензольным кольцом.

Примерами фармацевтически приемлемых солей соединений формулы I являются соли щелочных или щелочно-земельных металлов и соли фармацевтически приемлемых органических оснований.

Предпочтительными соединениями формулы I являются соединения, в которых R₄ обозначает фенильную группу, замещенную в положении 4 гетероциклической группой.

Особенно предпочтительными в этом классе являются соединения формулы I, в которых R₁ и R₂ обозначают атом водорода и R₃ обозначает С₁-С₄алкильную группу с прямой или с разветвленной цепью.

Примерами предпочтительных фармацевтически приемлемых солей соединений формулы I являются соли щелочных металлов, таких как натрий, литий и калий.

Конкретные примеры предпочтительных предлагаемых в изобретении соединений формулы I включают:

^(№-пропилфосфониллейцил)-[4-(2-фурил)] фенилаланин;

^(№-пропилфосфониллейцил)-[4-(3-фурил)] фенилаланин;

^(№-пропилфосфониллейцил)-[4-(2-тиенил)]фенилаланин;

^(№-пропилфосфониллейцил)-[4-(3-тиенил)]фенилаланин;

^(№-пропилфосфониллейцил)-[4-(№'-метил-2-пирролил)]фенилаланин;

^(№-пропилфосфониллейцил)-[4-(№'-метил-3 -пирролил)] фенилаланин;

^(№-пропилфосфониллейцил)-[4-(2-тиазолил)]фенилаланин;

^(№-пропилфосфониллейцил)-[4-(2-пиридил)]фенилаланин;

^(№-пропилфосфониллейцил)-[4-(3-пиридил)]фенилаланин;

^(№-пропилфосфониллейцил)-(4-пиразинил)фенилаланин;

^(№-пропилфосфониллейцил)-[4-(5-пиримидинил)]фенилаланин;

^(№-пропилфосфонилвалил)-[4-(2-фурил)]фенилаланин;

^(№-пропилфосфонилвалил)-[4-(3-фурил)]фенилаланин;

^(№-пропилфосфонилвалил)-[4-(2-тиенил)]фенилаланин;

^(№-пропилфосфонилвалил)-[4-(3-тиенил)]фенилаланин;

^(№-пропилфосфонилвалил)-[4-(№'-метил-2-пирролил)]фенилаланин;

^(№-пропилфосфонилвалил)-[4-(№'-метил-3 -пирролил)] фенилаланин;

^(№-пропилфосфонилвалил)-[4-(2-тиазолил)]фенилаланин;

^(№-пропилфосфонилвалил)-[4-(2-пиридил)]фенилаланин;

^(№-пропилфосфонилвалил)-[4-(3-пиридил)]фенилаланин;

^(№-пропилфосфонилвалил)-(4-пиразинил)фенилаланин;

^(№-пропилфосфонилвалил)-[4-(5-пиримидинил)]фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил)фосфониллейцил][4-(2-фурил)]фенилаланин;

Ы-[№-(2-тиенилметил) фосфониллейцил][4-(3-фурил)] фенилаланин;

Ы-[№-(2-тиенилметил) фосфониллейцил][4-(2-тиенил)] фенилаланин;

Ы-[№-(2-тиенилметил) фосфониллейцил][4-(3-тиенил)] фенилаланин;

Ы-[№-(2-тиенилметил) фосфониллейцил][4-(N -метил-2-пирролил)] фенилаланин;

Ы-[№-(2-тиенилметил) фосфониллейцил][4-(N -метил-3 -пирролил)] фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфониллейцил][4-(2-тиазолил)] фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфониллейцил][4-(2-пиридил)] фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфониллейцил][4-(3-пиридил)] фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфониллейцил](4-пиразинил)фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфониллейцил][4-(5-пиримидинил)] фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфонилвалил]-[4(2-фурил)]фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфонилвалил]-[4(3-фурил)] фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфонилвалил]-[4(2-тиенил)] фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфонилвалил]-[4(3-тиенил)] фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфонилвалил]-[4(N -метил-2-пирролил)] фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфонилвалил]-[4(N -метил-3 -пирролил)] фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфонилвалил]-[4(2-тиазолил)]фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфонилвалил]-[4(2-пиридил)]фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфонилвалил]-[4(3-пиридил)] фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфонилвалил]-(4пиразинил)фенилаланин;

^[№-(2-тиенилметил) фосфонилвалил]-[4(5-пиримидинил)] фенилаланин;

^[№-(бензило ксикарбониламиноме тил)фосфониллейцил]-[4-(2-фурил)]фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфониллейцил] -[4-(3 -фурил)] фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфониллейцил]-[4-(2-тиенил)]фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфониллейцил] -[4-(3 -тиенил)] фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфониллейцил]-[4-(№'-метил-2-пирролил)] фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфониллейцил] - [4-(N -метил-3 -пирролил)] фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфониллейцил]-[4-(2-тиазолил)]фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфониллейцил]-[4-(2-пиридил)]фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфониллейцил] -[4-(3 -пиридил)] фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфониллейцил]-(4-пиразинил)фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфониллейцил]-[4-(5-пиримидинил)]фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфонилвалил] -[4-(2-фурил)] фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфонилвалил] -[4-(3 -фурил)] фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфонилвалил] -[4-(2-тиенил)] фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфонилвалил] -[4-(3 -тиенил)] фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфонилвалил]-[4-(№'-метил-2-пирролил)] фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфонилвалил]-[4-(№'-метил-3-пирролил)] фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфонилвалил] -[4-(2-тиазолил)] фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфонилвалил] -[4-(2-пиридил)] фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфонилвалил] -[4-(3 -пиридил)] фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфонилвалил]-(4-пиразинил)фенилаланин;

^[№-(бензилоксикарбониламинометил) фосфонилвалил] -[4-(5-пиримидинил)] фенилаланин;

^[№-(ацетиламинометил)фосфониллейцил]-[4-(2-фурил)]фенилаланин;

^[№-(ацетиламинометил)фосфониллейцил]-[4-(3 -фурил)] фенилаланин;

^[№-(ацетиламинометил)фосфониллейцил]- [4-(2 -тиенил)] фенилаланин;

^[№-(ацетиламинометил)фосфониллейцил]-[4-(3 -тиенил)] фенилаланин;

^[№-(ацетиламинометил)фосфониллейцил]-[4-(№' -метил-2 -пирролил)] фенилаланин;

^[№-(ацетиламинометил)фосфониллейцил]-[4-(№' -метил-3 -пирролил)] фенилаланин;

^[№-(ацетиламинометил)фосфониллейцил]-[4-(2-тиазолил)]фенилаланин;

^[№-(ацетиламинометил)фосфониллейцил]-[4-(2-пиридил)]фенилаланин;

^[№-(ацетиламинометил)фосфониллейцил]-[4-(3 -пиридил)] фенилаланин;

^[№-(ацетиламинометил)фосфониллейцил]-(4-пиразинил)фенилаланин;

^[№-(ацетиламинометил)фосфониллейцил]-[4-(5 -пиримидинил)] фенилаланин;

^[№-(ацетиламинометил)фосфонилвалил]-[4-(2-фурил)]фенилаланин;

^[№-(ацетиламинометил)фосфонилвалил]-[4-(3 -фурил)] фенилаланин;

^[№-(ацетиламинометил)фосфонилвалил]-[4-(2-тиенил)] фенилаланин;

^[№-(ацетиламинометил)фосфонилвалил]-[4-(3 -тиенил)] фенилаланин;

^[№(ацетиламинометил)фосфонилвалил ]-[4-(№'-метил-2-пирролил)]фенилаланин;

^[№(ацетиламинометил)фосфонилвалил]-[4-(Н-метил-3-пирролил)] фенилаланин;

^[№(ацетиламинометил)фосфонилвалил]-[4-(2 -тиазолил)] фенилаланин;

Х-[№(ацетиламинометил)фосфонилвалил]-[4-(2-пиридил)]фенилаланин;

Х-[№(ацетиламинометил)фосфонилвалил]-[4-(3-пиридил)]фенилаланин;

Х-[№(ацетиламинометил)фосфонилвалил] -(4-пиразинил)фенилаланин;

Х-[Х'-(ацетиламинометил)фосфонилвалил]-[4-(5 -пиримидинил)] фенилаланин.

Получение соединений формулы I по изобретению включает взаимодействие между фосфорилированным производным формулы о

II

R-X-CH-P-W (П)

I I Rl ΟΥ где

R, Ri и Х имеют указанные выше значения, W обозначает атом галогена, предпочтительно хлора, a Y обозначает защитную группу, предпочтительно С₁-С₄алкил, фенил или фенилалкил с 1-4 атомами углерода в алкильном фрагменте, и дипептидным производным формулы

R2 j * *

HN-CH-CONH-CH-COOH (Ш)

I I

R3 CH2-R4 где R2, R3 и R4 имеют указанные выше значения.

Фосфорилированное производное формулы II может быть получено из соответствующего соединения формулы

О

II

R-X-CH-P-Z (IV)

I I Rl Z

R, R₁ и Х имеют указанные выше значения, a Z обозначает или W-, или OY-группу, где W и Y имеют указанные выше значения.

Получение соединений формулы II из соответствующих соединений формулы IV осуществляют общепринятыми способами путем взаимодействия с галогенирующим агентом или с соединением формулы YOH, где Y имеет указанные выше значения.

Пример получения соединений формулы II, в которых Х обозначает простую связь или группу -O-CONH-, можно найти, например, у D.S. Karanewsky и др., J. Med. Chem., 1988, 31, 204-212, и у В.Р. Morgan и др., J. Am. Chem. Soc., 1991, 113, 297-307.

Соединения формулы II, в которых Х обозначает группу -CONH-, могут быть получены, например, из соответствующих соединений формулы II, в которых Х обозначает группу -OCONH- и R обозначает бензил, путем гидрогенолиза карбаминовой группы (R-O-CONH-) и последующего взаимодействия с соединением формулы

R-COW1 (V) в которой R имеет указанные выше значения, a W1 обозначает атом хлора или брома.

В свою очередь дипептидные производные формулы III могут быть получены с помощью реакции конденсации между аминокислотой формулы

R2 I *

HN-CH-COOH (VI)

I

R3 в которой R₂ и R₃ имеют указанные выше значения, и производным аланина формулы *

H2N-CH-COOH (νπ)

I

CH2-R4 в котором R₄ имеет указанные выше значения.

Реакцию конденсации проводят в соответствии со способами, общепринятыми в химии пептидов.

До проведения реакции может оказаться целесообразным соответствующим образом защитить необязательно реакционноспособные группы, которые могут препятствовать взаимодействию.

Необязательную защиту проводят общепринятыми способами.

Например, в реакции между фосфорилированным производным формулы II и дипептидным производным формулы III может оказаться целесообразным защищать свободную карбоксильную функцию соединения формулы III, а также гидроксильную функцию фосфоновой группы.

Кроме того, в реакции между аминокислотой формулы VI и производным аланина формулы VII может оказаться целесообразным защищать реакционноспособную аминогруппу производного формулы VI и карбоксильную функцию производного формулы VII.

Оценка необходимости защиты, а также выбор приемлемого типа защиты, соответствующего проводимой реакции и функциональным группам, подлежащим защите, являются хорошо известными специалистам в данным области.

Удаление необязательных защитных групп проводят в соответствии с общепринятыми способами.

Общие примеры применения защитных групп в органической химии можно найти у Theodora W. Greene и Peter G.M. Wuts в Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, Inc., 2-е изд., 1991.

Соединения формул VI и VII являются известными или легко могут быть получены известными методами.

Примеры получения соединений формул VI и VII описаны, например, в способах синтеза у W.C. Shieh и T.R. Bailey в J. Org. Chem. 1992, 57, 379-381 и в Tetrahedron Letters, 1986, 27, 4407-441 0 соответственно.

Соединения формулы I по изобретению также могут быть получены в соответствии с альтернативной схемой синтеза, которая включает взаимодействие между фосфорилированным производным формулы

OR2 II I *

R-X-CH-P-N-CH-COOH (VHI)

111 .

Rl OY R3 в котором R, R_1? R₂, R₃, X и Y имеют указанные выше значения, и производным аланина формулы VII.

Аналогично указанному ранее в вышеприведенной реакции также может оказаться целесообразной защита общепринятыми способами возможных функциональных групп, которые могут препятствовать реакции.

Соединения формулы VIII являются известными или легко могут быть получены известными методами.

Например, соединения формулы VIII могут быть получены с помощью реакции между фосфорилированным производным формулы II и аминокислотой формулы VI в соответствии с общепринятыми методами химии пептидов.

В соответствии с вышеприведенными обозначениями для специалиста в данной области техники должно представляться очевидным, что получение соединений формулы I, в которых Х обозначает группу -CONH-, необязательно может проводиться с использованием в качестве исходных веществ соответствующих соединений формулы I, в которых Х обозначает группу -O-CONH-, a R обозначает бензил, полученных в соответствии с одним из приведенных выше способов синтеза.

Соединения формулы I в форме отдельных стереоизомеров получают с помощью стереоселективного синтеза или путем разделения стереоизомерных смесей в соответствии с общепринятыми способами.

Также получение солей соединений формулы I по изобретению осуществляют в соответствии с общепринятыми способами.

Ингибирующую активность соединений формулы I оценивали в частности в опытах in vitro и ex vivo.

Ингибирующую активность соединений формулы I в опытах in vitro оценивали в сравнении с известными соединениями, проявляющими ингибирующую активность в отношении АСЕ или NPE (пример 3).

В качестве эталона для сравнения, ингибирующей активности в отношении АСЕ использовали каптоприл, являющийся соединением, известным как обладающее наилучшей ингибирующей активностью в отношении АСЕ при оральном введении (The Merck Index, изд. ХЕ№ 1773, стр. 267-268).

В качестве эталона для сравнения ингибирующей активности в отношении NEP использовали тиорфан [DL-(3-меркапто-2-бензилпропионил)глицин], известное соединение, которое считается исходным соединением для ингибиторов NEP и впервые описано Roques и др. в Nature, том 288, стр. 286-288 (1980).

Двулитиевую соль ^[У-(4-фенил)бутилфосфонилФ-фенилаланил]Ф-фенилаланина (обозначенную в настоящем описании как соединение R-1 ), приведенную в качестве примера в вышеуказанном патенте США 4432972, рассматривали в качестве дополнительного эталона для сравнения при оценке in vitro ингибирующей активности соединений формулы I.

Ингибирующая активность in vitro соединений формулы I, выраженная в виде значения IC₅₀-показателя, является важной с фармакологической точки зрения в том случае, когда соединение применяется в диапазоне наномолярных (нМ) концентраций.

Полученная активность оказалась по крайней мере сопоставимой с активностью каптоприла, поэтому может рассматриваться как ингибирующая активность в отношении АСЕ, и сопоставимой с активностью тиорфана, поэтому может рассматриваться как ингибирующая активность в отношении NEP.

Однако двойная ACE/NEP-ингибирующая активность соединений формулы I оказалась существенно более высокой по сравнению с активностью соединения R-1 .

Как указано выше, ингибирующую активность соединений формулы I также оценивали с помощью экспериментов ex vivo, используя приведенное выше соединение R-1 в качестве эталона для сравнения (пример 4).

Двойная ACE/NEP-ингибирующая активность соединений формулы I в опытах ех vivo оказалась существенно более высокой по сравнению с активностью эталонного соединения.

Для практического применения в терапии соединения формулы I могут быть изготовлены в виде твердых или жидких фармацевтических композиций, пригодных для орального или парентерального введения.

Таким образом, фармацевтические композиции, содержащие терапевтически эффективное количество соединения формулы I в смеси с носителем, предназначенным для фармацевтического применения, являются еще одним предметом настоящего изобретения.

Конкретными примерами фармацевтических композиций по настоящему изобретению являются таблетки, таблетки с покрытием, капсулы, грануляты, растворы и суспензии, пригодные для орального введения, растворы и суспензии, пригодные для парентерального введения.

Фармацевтические композиции, являющиеся объектом настоящего изобретения, получают в соответствии с общепринятыми способами.

Хотя соединения формулы I сами по себе являются активными, с целью придать определенные терапевтические или фармацевтические свойства может оказаться целесообразным превращать их в соответствующие биологические предшественники (пролекарства).

Таким образом, в соответствии с общепринятыми способами получения пролекарств фосфорилированных амидных производных пригодные пролекарства могут быть получены, например, с помощью этерификации карбоксильной функции или фосфоновой функции.

Под объем настоящего изобретения также подпадают соединения формулы I в форме пролекарства, в частности соединения, полученные путем этерификации карбоксильной или фосфоновой функции, а также фармацевтические композиции, которые содержат соединения формулы I в форме пролекарства, в частности, которые содержат соединения формулы I, в которых карбоксильная или фосфоновая группы могут быть этерифицированы.

Суточная доза соединения формулы I или соответствующего пролекарства может зависеть от ряда факторов, таких, как серьезность заболевания, индивидуальная реакция пациента или тип композиции, но она обычно находится в диапазоне от 0,01 до 20 мг на кг веса тела, и она может применяться в виде однократной дозы или может быть разделена на несколько суточных доз.

Ниже изобретение проиллюстрировано на примерах.

Если не указано иное, быструю хроматографию проводят с использованием силикагеля для быстрой хроматографии компании Baker (код 7024-00).

Сравнительный пример 1 .

Двулитиевая соль Ы-[№-(4-фенил)бутилфосфонил-Е-фенилаланил]-Е-фенилаланина (соединение R-1).

Это соединение получали в соответствии со способом, описанным в патенте США 4432972 (пример 36).

Пример 1 .

Двулитиевая соль Ы-(№-пропилфосфонилЕ-лейцил)-[4-(2-фурил] -L-фенилаланина (соединение 1 ).

а) Получение метилового эфира N-[N'(трет-бутоксикарбонил-Ь-лейцил]-[4-(2-фурил]L-фенилаланина.

Дициклогексилкарбодиимид (1,75 г; 8,50 ммоля) добавляли к раствору моногидрата N(трет-бутоксикарбонил)-Ь-лейцина (0,98 г; 3,93 ммоля) и N-гидроксисукцинимида (0,45 г; 3,93 ммоля) в 1,4-диоксане (40 мл). Реакционную смесь выдерживали при перемешивании в течение 1 часа при комнатной температуре и затем отфильтровывали образовавшуюся дициклогексилмочевину. Затем к полученному раствору добавляли метиловый эфир (2-фурил)-Ьфенилаланина (0,75 г; 3,27 ммоля), полученный в соответствии с методом, описанным у W.C. Shieh в J. Org. Chem., 1992, 57, 379-381. Реакционную смесь выдерживали при перемешивании в течение 1 8 ч и затем растворитель выпаривали при пониженном давлении. Полученный остаток объединяли с этиловым эфиром и смесь вновь фильтровали. Растворитель также выпаривали при пониженном давлении и образовавшийся неочищенный продукт очищали с помощью быстрой хроматографии на силикагеле (петролейный эфир:этилацетат в соотношении 75:25; давление азота 0,1 атм), получая метиловый эфир ^[№-(трет-бутоксикарбонил-Ьлейцил]-[4-(2-фурил]-Ь-фенилаланина (0,98 г; выход 30%) в виде твердого вещества белого цвета.

Ή-ЯМР (200 МГц, CDCl₃) δ (част./млн): 0,85-0,93 (2d, 6H); 1,4 (s, 9Н); 1,50-1,70 (m, 3Н); 3,00-3,20 (m, 2Н); 3,70 (m, 3H); 4,00-4,12 (m, 1H); 4,70-4,90 (m, 2H); 6,52 (d, 1H); 6,41-7,41 (m, ЗН); 7,1-7,6 (m, 4H).

б) Получение гидрохлорида метилового эфира ^(Ь-лейцил)-[4-(2-фурил)]-Ь-фенилаланина.

Тионилхлорид (0,31 мл; 4,28 ммоля) добавляли при 0°С к раствору метилового эфира ^[№-(трет-бутоксикарбо нил-Ь-лейцил |-|4-(2фурил]-Ь-фенилаланина (0,98 г; 2,14 ммоля), полученного в соответствии с примером 1а, в метаноле (20 мл). Реакционную смесь выдерживали при перемешивании в течение 24 ч при комнатной температуре и затем растворитель выпаривали при пониженном давлении, получая гидрохлорид метилового эфира ^(Ь-лейцил)[4-(2-фурил)]-Ь-фенилаланина (0,79 г; 93%), который использовали в неочищенном виде для следующей реакции.

в) Получение метилового эфира N-[N'(фенокси)(пропил)фосфорил-Ь-лейцил]-[4-(2фурил]-Ь-фенилаланина.

Раствор фенола (0,28 г; 3,00 ммоля) и триэтиламина (0,42 мл; 3,00 ммоля) в метиленхлориде (17 мл) медленно добавляли по каплям к раствору пропилфосфонового дихлорида (0,37 мл; 3,00 ммоля) в метиленхлориде (4 мл) при охлаждении до 0°С и в атмосфере азота. Затем к реакционной смеси по каплям добавляли смесь гидрохлорида метилового эфира ^(Ь-лейцил)[4-(2-фурил)]-Ь-фенилаланина (0,79 г; 2,00 ммоля), полученного в соответствии с примером 1б, и триэтиламина (0,7 мл; 5,00 ммолей) в метиленхлориде (5 мл), выдерживали при перемешивании при комнатной температуре в течение 3 ч и затем охлаждали до 0°С. Реакционную смесь выдерживали при перемешивании в течение 3 ч при комнатной температуре и затем добавляли воду. Фазы разделяли и органическую фазу сушили над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении. Образовавшийся остаток очищали с помощью быстрой хроматографии на силикагеле (элюент петролейный эфир : этилацетат в соотношении 1:1, давление азота 0,1 атм), получая метиловый эфир Ы-[№-(фенокси) (пропил)фосфорил-Ь-лейцил]-[4-(2-фурил]-Ьфенилаланина (0,4 г; выход 40%) в виде твердого вещества белого цвета.

¹Н-ЯМР (200 МГц, ΟΌΟ1₃) δ (част./млн): 0,70-1,90 (m, 16Н); 2,90-3,20 (m, 2Н); 3,35-3,51 (m, 1H); 3,65 (s, 3Н); 3,70-3,90 (m, 1H); 4,65-4,80 (m, 1H); 6,70-6,85 (m. 1H); 6,40-7,40 (m, 3Н); 7,00-7,60 (m, 9H).

г) Получение двулитиевой соли N-(N'пропилфосфонил-Г-лейцил)-[4-(2-фурил]-Ьфенилаланина.

Раствор моногидрата гидроксида лития (90 мг; 2,16 ммоля) в воде (2 мл) добавляли к раствору метилового эфира ^[№-(фенокси)(пропил)фосфорил-Г-лейцил]-[4-(2-фурил]-Ь-фенилаланина (0,4 г; 0,72 ммоля), полученного в соответствии с примером 1в, в тетрагидрофуране (5 мл). Реакционную смесь выдерживали при перемешивании при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем смесь упаривали при пониженном давлении и полученный остаток объединяли с этанолом и вновь упаривали, повторяя этот процесс дважды.

Остаток после этого объединяли с этилацетатом и смесь выдерживали при перемешивании при комнатной температуре в течение 24

ч. Затем смесь фильтровали, получая двулитиевую соль ^(№-пропилфосфонил-Ь-лейцил)-[4(2-фурил]-Ь-фенилаланина (0,3 г; выход 90%) в виде твердого вещества белого цвета.

Ц-ЯМР (200 МГц, ODOls) δ (част./млн): 0,58-0,73 (m, 9H); 0,98-1,46 (m, 7Н); 2,71-3,11 (m, 2Н); 3,26-3,38 (m, 1H); 4,27-4,33 (m, 1H); 6,39 (dd, 1H); 6,63 (d, 1H); 7,33 (d, 1H); 7,10-7,52 (m, 4H).

Пример 2.

Двулитиевая соль ^(№-пропилфосфонилГ-валил)-[4-(2-тиазолил)]-Ь-фенилаланина (соединение 2).

Работая аналогично примеру 1 , стадии а-г, получали следующие соединения.

а) Метиловый эфир ^[№-(трет-бутоксикарбонил)-Ь-валил]-[4-(2-тиазолил)]-Ь-фенилаланина.

Ц-ЯМР (200 МГц, CDC1₃) δ (част./млн): 0,80-0,95 (m, 6H, СН₃-СН-СН₃); 1,42 [s, 9H, С(СН₃)₃]; 2,00-2,19 (m, 1H, СН₃-СН-СН₃); 3,033,22 (m, 2H, СН2-фенилен); 3,70 (m, 3H, СООСН₃); 3,83-3,93 (m, 1H, NH-CH-CH); 4,725,05 (m, 2H, NHCOO, CHCOO); 6,40 (bd, 1H, NH-CH-COO); 7,13-7,90 (m, 6H, арил).

б) Гидрохлорид метилового эфира N-(Lвалил)-[4-(2-тиазолил)]-Ь-фенилаланина.

Ц-ЯМР(200 МГц, D₂O) δ (част./млн): 0,770,83 (m, 6H, СЩ-СН-СНД; 1,93-2,10 (m, 1H, СН3-СН-СН3); 2,96-3,21 (m, 2H, СН2-фенилен);

3,55 (s, 3H, СООСН₃); 3,62 (d, 1H, CH-NH₂); 4,60-4,70 (m, 1H, CH-COO); 7,25-7,74 (m, 4H, фенилен); 7,64-7,87 (m, 2H, тиазолил).

в) Метиловый эфир ^[№-(фенокси)(пропил)фосфорилТ-валил] -[4-(2-тиазолил)]Тфенилаланина.

Ή-ЯМР (200 МГц, СDС1₃) δ (част./млн): 0,70-1,07 (m, 9H, СН₃-СН-СН₃, СЩ-СН₂); 1,502,00 (m, 5H, CH₂-CH₂-P-NH-CH-CH); 2,90-3,18 (m, 2H, СН₂-фенилен); 3,22-3,70 (m, 2H, P-NHCH); 3,64 (s, 3H, СООСН₃); 4,71-4,87 (m, 1H, CH-COO); 6,75-6,86 (m, 1H, NHCO); 7,05-7,89 (m, 11H, арил).

г) Двулитиевая соль ^(№-пропилфосфонилТ-валил)-[4-(2-тиазолил)]Т-фенилаланина.

'H-ЯМР (200 МГц, D₂O) δ (част./млн): 0,40-0,80 (m, 9H, СН3-СН-СН3, СН3-СН2); 1,001,70 (m, 5H, CH₂-CH₂-P-NH-CH-CH); 2,75-3,24 (m, 2H,P-NH-CH, СН2-фенилен); 4,25-4,39 (m, 1H, CH-COO); 7,16-7,70 (m, 6H, арил).

Пример 3.

Оценка фармакологической активности in vitro.

а) Ингибирующая активность в отношении

NEP.

Ингибирующую активность в отношении NEP оценивали на мембранах коркового слоя почки крыс, полученных в соответствии со способом, описанным у Т. Maeda и др. в Biochim. Biophys. Acta 1983, 73(1), 115-120.

У крыс линии Sprague-Dawley весом примерно 300 г удаляли почки, работая при 0-4°С. Корковый слой осторожно отсекали, тонко измельчали и суспендировали в гомогенизирующем буфере (10 мМ фосфат натрия, рН 7,4, содержащий 1мМ MgC1₂, 30 мМ NaCl, 0,02% №N₃) в соотношении 1:15 мас./об. Затем ткань гомогенизировали в течение 30 с с использованием гомогенизатора типа Ultra-Turrax. Приблизительно 1 0 мл гомогената наслаивали на 1 0 мл сахарозы (41% мас./об.) и центрифугировали при 31200 об/мин в течение 30 мин при 4°С с фиксированным углом ротора. Мембраны собирали с поверхности буфера/сахарозы, дважды промывали 50 мМ трис-HC1-буфером (рН 7,4) и ресуспендировали в этом же буфере для хранения. Мембраны перед использованием хранили в виде небольших аликвотных количеств при -80°С. Ингибирующую активность в отношении NEP оценивали в соответствии с методом, описанным у С. Llorens и др. в Eur. J. Pharmacol. 69, (1981), 113-116, как представлено в данном описании. Аликвотные количества суспензии мембран, полученной по описанной выше методике (концентрация 5 мкг/мл протеинов), предварительно инкубировали в присутствии ингибитора аминопептидазы (Бестатин 1мМ) в течение 10 мин при 30°С. Добавляли [³H] ^и⁵]-энкефалин (15 нМ) и трис-HC1-буфер с рН 7,4 (50 мМ) таким образом, чтобы получить конечный объем 100 мкл. Инкубацию (20 мин при 30°С) прекра15 щали, добавляя 0,1М НС1 (100 мкл). После отделения не вступившего в реакцию субстрата с помощью хроматографии на полистироловых колонках (Porapak Q) количественно оценивали образование метаболита [³Н]Туг-О1у-О1у, измеряя относительную радиоактивность с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика. Процент ингибирования образования метаболита в препаратах мембран, обработанных соединениями формулы I и соединениями-эталонами, по сравнению с необработанными препаратами мембран выражали в виде значения 1С₅₀ (нМ).

б) Ингибирующая активность в отношении

АСЕ.

Ингибирующую активность в отношении АСЕ оценивали в соответствии с методом, известным из литературы (B. Holmquist и др. Analytical Biochemistry, 1979, 95, 540-548).

мкМ АСЕ (250 миллиед./мл, выделенный из легкого кролика, КФ 3.4.15.1, фирма SIGMA) предварительно инкубировали в термостатированных кюветах при 37°С с 50 мкл соединения формулы I или соединения-эталона. Реакцию начинали добавлением 0,8мМ фурилакрилоилфенилаланилглицил-глицина (FAPGG-SIGMA). Одновременно с помощью спектрофотометра типа Beckman DU-50, снабженного программой для расчета дельта А/мин и коэффициентов регрессии кривых, описывающих кинетику фермента, регистрировали непрерывно в течение 5 мин поглощение при 340 нм. Ингибирование ферментативной активности соединениями формулы I и соединениями-эталонами выражали в виде значения IC₅₀(нМ).

Соединения формулы I тестировали в виде солей лития.

Значения IC₅₀ (нМ), соответствующие ингибирующей активности в отношении АСЕ и ингибирующей активности в отношении NEP соединений 1 и 2 и соединений-эталонов R-1, тиорфана и каптоприла, приведены ниже в таблице 1 .

Таблица 1

NEP-ингибирующая и АСЕ-ингибирующая активность, выраженная в виде значения IC₅₀ (нМ) соединений 1 и 2 и соединений-эталонов R-1 ,

тиорфана и каптоприла
Соединение	АСЕ- ингибирующая активность IC₅₀(нМ)	NEP- ингибирующая активность IC50 (нМ)
1	5,7	6,0
2	9,4	2,7
R-1	20,0	5,5
Тиорфан	98,6	11,3
Каптоприл	2,8	Не активно

Данные, приведенные в таблице 1, показывают, что соединения формулы I по изобретению обладают выраженной двойной ACE/NEPингибирующей активностью. Выявленная активность сопоставима с активностью каптоприла в отношении АСЕ-ингибирующей активности и с активностью тиорфана в отношении NEP-ингибирующей активности.

Однако двойная ACE/NEP-ингибирующая активность, выявленная для соединений формулы I, оказалась существенно более высокой по сравнению с таковой соединения R-1 .

Пример 4.

Оценка фармакологической активности ex vivo.

а) Ингибирующая активность в отношении

NEP.

Ингибирующую активность в отношении NEP ex vivo оценивали в соответствии с методом, известным из литературы (М. Orlowsry и др., Biochemistry 1981, 20, 4942-4950.

Ингибирующую активность соединений формулы I и соединения R-1 оценивали в почках крыс со спонтанной гипертензией (SHR) через 5 мин после внутривенной инъекции тестируемых соединений (21 мкмоль/кг). После удаления почек у SHR почечную ткань гомогенизировали и инкубировали в течение 1 5 мин при 37°С в присутствии глутарил-А1а-А1а-Рhе-2нафтиламида (GAAP) в качестве субстрата и аминопептидазы М при рН 7,6.

Реакцию прекращали, добавляя 1 0%-ный водный раствор трихлоруксусной кислоты. Высвобождающийся 2-нафтиламин выявляли добавлением в качестве красителя быстрого темно-красного (2 мл). Скорости ферментативной реакции определяли, измеряя увеличение оптической плотности при 524 нм (ОП₅₂₄) по сравнению со стандартом, полученным для комплекса 2-нафтиламина и быстрого красного.

Ингибирующую активность в отношении NEP соединений формулы I и соединения R-1 выражали в виде процента ингибирования в почках SHR.

б) Ингибирующая активность в отношении

АСЕ.

Ингибирующую активность в отношении АСЕ ex vivo оценивали в соответствии с радиометрическим методом, известным из литературы (J. W. Ryan и др., Biochem. J. 1977, 167, 501504).

Ингибирующую активность соединений формулы I и соединения R-1 оценивали в легких крыс со спонтанной гипертензией (SHR) через 5 мин после внутривенной инъекции тестируемых соединений (21 мкмоль/кг). После удаления легких у SHR ткань легкого гомогенизировали и инкубировали в течение 2 ч при 37°С в присутствии [³Н]Щр^1у^1у в качестве субстрата. Реакцию прекращали добавлением соляной кислоты. Высвободившуюся гиппуровую кислоту, меченную радиоактивной меткой, экстрагировали этилацетатом и с помощью жидкостной сцинтилляционной спектрометрии в соответствии с общепринятыми методами определяли уровень радиоактивности.

Ингибирующую активность в отношении АСЕ соединений формулы I и соединения R-1 выражали в виде процента ингибирования в легких SHR. Процент ингибирования NEP и ингибирования АСЕ, выявленный в почках и легких SHR соответственно соединением I и соединением R-1, представлен ниже в таблице 2.

Таблица 2

NEP-ингибирующая и АСЕ-ингибирующая активность, выраженная в виде процента ингибирования в почках и легких SHR соответственно после внутривенной инъекции (21 мкмоль/кг) соединения 1 и соединения R-1

Соединение	NEP - ингибирующая активность (в почках) % ингибирования	ACE - ингибирующая активность (в легких) % ингибирования
1	70	88
R-1	20	25

Данные, приведенные в таблице 2, ясно показывают, что соединения формулы I по изобретению обладают выраженной двойной ACE/NEP-ингибирующей активностью, более высокой, чем активность соединения R-1 .

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы OR2

II I * *

R-X-CH-P-N-CH-CONH-CH-COOH (I)

III I

Rl ОН R3 CH2-R4 где

R обозначает С₁-С₆алкильную группу с прямой или с разветвленной цепью, необязательно замещенную одним или несколькими атомами фтора, арильную или арилалкильную группу с 1 -6 атомами углерода в алкильном фрагменте, где арил обозначает фенильную, 1 нафтильную или 2-нафтильную группу или 5или 6-членный ароматический гетероцикл с 1 или 2 гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу, необязательно замещенные одним или несколькими одинаковыми или различными заместителями, выбранными из группы, включающей атомы галогена, гидроксильные группы, алкильную, алкокси-, алкилтио-, алкилсульфонильную или алкоксикарбонильную группы с 1-3 атомами углерода в алкильном фрагменте, карбоксильные группы, аминокарбонильные группы, ациламиногруппы, аминосульфонильные группы, моно- или диалкиламинокарбонильные группы с 1-3 атомами углерода в алкильном фрагменте;

R₁ и R₂ имеют одинаковое или различное значение и обозначают атом водорода или С₁С₄алкильную группу с прямой или с разветвленной цепью;

R₃ обозначает С_гС₆алкильную группу с прямой или с разветвленной цепью или арилалкильную группу с 1 -6 атомами углерода в алкильном фрагменте, где арил обозначает фенильную, 1 -нафтильную или 2-нафтильную группу или 5- или 6-членный ароматический гетероцикл с 1 или 2 гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу, необязательно замещенные, как указано для R;

R4 обозначает 5- или 6-членную ароматическую гетероциклическую группу с одним или двумя гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу, необязательно замещенную 5- или 6-членной ароматической гетероциклической группой с одним или двумя гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу, или фенильной группой, или он обозначает фенильную группу, необязательно замещенную 5- или 6членной ароматической гетероциклической группой с одним или двумя гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу, причем, фенильная и гетероциклические группы необязательно могут быть замещены одним или несколькими одинаковыми или различными заместителями, выбранными из группы, включающей атомы галогена, алкильную, алкокси-, алкилтио- или алкоксикарбонильную группы с 1 -3 атомами углерода в алкильном фрагменте;

Х обозначает простую связь или группу -O-CONH- или -CONH;

атом углерода, помеченный звездочкой, представляет собой асимметричный атом углерода;

и их фармацевтически приемлемые соли, при условии, что Rzl· не обозначает имидазолильную или индолильную группу.
2. Соединение по п.1, в котором R₄ обозначает фенильную группу, замещенную в положении 4 5- или 6-членной ароматической гетероциклической группой с одним или двумя гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу.
3. Соединение по п.2, в котором R₁ и R₂обозначают атом водорода и R₃ обозначает С₁-С₄алкильную группу с прямой или разветвленной цепью.
4. Соединение по п.1 в форме соли щелочного металла, выбранного из группы, включающей натрий, литий и калий.
5. Способ получения соединения формулы

I по п.1 , включающий взаимодействие между фосфорилированным производным формулы о

I!

R-X-CH-P-W (П)

I I Rl ΟΥ где

R, Ri и X имеют значения, указанные в п.1, W обозначает атом галогена, a Y обозначает защитную группу, выбранную из С₁-С₄алкила, фенила или фенилалкила с 1 -4 атомами углерода в алкильном фрагменте, и дипептидным производным формулы

HN-CH-CONH-CH-COOH (Ш)

I I

R3 CH2-R4 где R₂, R₃ и R4 имеют значения, указанные в п. 1.
6. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы I по п.1 в смеси с фармацевтически пригодным носителем.
7. Фармацевтическая композиция по п.6 для лечения сердечно-сосудистых заболеваний.
8. Способ лечения сердечно-сосудистых заболеваний, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения формулы I по п. 1.
9. Соединение формулы I по п.1, выбранное из К-(К'-пропилфосфонил-Е-лейцил)-[4-(2фурил)]-Ь-фенилаланина и К-(К'-пропилфосфонил-Е-валнл)-[4-(2-тиазолил)]-Ь-фенилаланина.