DK175624B1 - Diphenylmethanderivater, fremgangsmåde til deres fremstilling og benzhydroler, som anvendes ved fremgangsmåden - Google Patents

Description

DK 175624 B1 i

Opfindelsen angår hidtil ukendte diphenylmethanderivater, en fremgangsmåde til deres fremstilling og benzhydroler, som anvendes ved fremgangsmåden. Diphenylmethanderivaterne kan anvendes til syntese af peptidamider ved hjælp af en 5 fastfasemetode, idet de anvendes som syrelabile ankergrupper.

Til fremstillingen af peptidamider ved hjælp af fastfasesyntesen anvendes i almindelighed benzhydryl-amin- eller methylbenzhydrylaminharpikser, såsom de, der f.eks. er beskrevet af J.P. Tam et al., i Tetra-10 hedron Lett. 22, 2851 (1981). En yderligere metode består i ammonolyse af bærestofbundne peptidbenzyl-estere (C. Ressler et al., J. Am. Chem. Soc. 76, 3107 (1951)). Begge metoder er karakteriseret ved den til fraspaltning af spaceren nødvendige stærke syre (flyden-15 de hydrogenfluorid eller trifluormethansulfonsyre), bireaktioner eller ufuldstændig fraspaltning.

Det er således opfindelsens formål at finde hidtil ukendte spacere, der muliggør en mildere og bedre fraspaltning af peptidamider fra bæreharpiksen.

20 Dette formål opfyldes ifølge opfindelsen med diphenyl-

methanderivater, som er ejendommelige ved, at de har formlen I

r2 r3 25 Y8 Y9 Y1 Y? Y7 γ6 γ5 γ4 30 i hvilken R1 betyder C^g-alkyl eller C6-14~ary1, R3 betyder hydrogen eller en aminosyrerest, der er beskyttet med en svagt sur eller basisk fraspaltelig 35 aminobeskyttelsesgruppe, R^ betyder hydrogen eller C^_^-alkyl,

DK 175624 B1 I

Y1, Y2, Y3, Y4, Y5/ Y6, Y7, γδ og Y9 betyder hydrogen, I

C1_4~alkyl/ Cj_4-alkoxy eller -0-(CH2)n-COOH, hvorved I

grupperne er ens eller forskellige, idet én gruppe dog er -0-(CH2)n-C00H, og 5 n betyder et helt tal fra 1 til 6.

Foretrukne er forbindelser med den almene formel I

I, i hvilken betyder methyl, og n betyder et helt I

tal på 1, 2 eller 3. I

Ligeledes foretrukne er forbindelser med den I

2 I

10 almene formel I, i hvilken R betyder en aminosyrerest,

der er beskyttet med en urethanbeskyttelsesgruppe, især I

FmoC, og R3 betyder hydrogen. I

19 I

Endvidere betyder grupperne Y -Y især methyl eller me-

thoxy, hvorved dog én gruppe betyder -0-(CH2)n“-C00H, I

15 og mindst 4 af disse grupper betyder hydrogen. I

Fortrinsvis betyder Y1, Y3, Y5, Y7 eller Y8 grup- I

pen -O-(CH2)n-C00H. I

Alkyl og alkoxy kan være ligekædet eller forgrenet.

C6_i4~Aryl er f.eks. phenyl, naphthyl, biphenylyl I

20 eller fluorenylj fortrinsvis phenyl. I

2 I

R betyder resten af en aminosyre, fortrinsvis en

o-aminosyre, der, såfremt den er chiral, kan foreligge I

i D- eller L-formen. Foretrukne er rester af naturligt H

forekommende aminosyrer og deres enantiomere, homologe, H

25 derivater og enkle metaboliter (jf. f.eks. Wiinsch et al., H

Houben-Weyl 15/1 og 2, Stuttgart, Thieme 1974). I betragt- I

ning kommer således f.eks.: H

Aad, Abu, yAbu, ABz, 2ABz, £Aca, Ach, Acp, Adpd, Ahb, Aib, I

£Aib, Ala, ØAla, <aAla, Alg, All, Ama, Amt, Ape, Apm, Apr, I

30 Arg, Asn, Asp, Asu, Aze, Azi, Bai, Bph, Can, Cit, Cys,

Cyta, Daad, Dab, Dadd, Dap, Dapm,Dasu, Djen, Dpa, Dtc, I

Fel, Gin, Glu, Gly, Guv, hCys, His, hSer, Hyl, Hyp, 3Hyp, I

Ile, Ise, Iva, Kyn, Lånt, Len, Leu, Lsg, Lys, &Lys, 4Lys, I

Met, Mim, Min, nArg, Nle, Nva, Oly, Orn, Pan, Pec, Pen, I

35 Phe, Phg, Pic, Pro, dPro, Pse, Pya, Pyr, Pza, Qin, Ros, I

Sar, Sec, Sem, Ser, Thi, 0Thi, Thr, Thy, Thx, Tia, Tie, I

3 DK 175624 B1

Tly, Trp, Trta, Tyr, Val samt resterne af de tilsvarende enantiomere D-aminosyrer.

Funktionelle grupper i de nævnte aminosyreresters sidekæder kan være beskyttede. Egnede beskyttelsesgrupper 5 er beskrevet af Hubbuch, Kontakte (Merck) 1979, nr. 3, side 14-23, og Bullesbach, Kontakte (Merck), 1980, nr.

1, side 23-35.

Baselabile eller mod svage syrer labile beskyttelsesgrupper er især urethanbeskyttelsesgrupper, såsom .

10 Fmoc, Ddz, Bpoc, Msc, Peoc, Pse og Tse, fortrinsvis Fxaoc (jf. f.eks. Hubbuch, Kontakte (Merck) 1979, nr. 3, side 14-23) .

Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af et diphenylmethanderivat med formlen I ifølge 15 opfindelsen, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at

a) en benzhydrol med formlen II

γθ y9qh y 1 γ2 20 R'-°^r^H^r^-Y3 <m γ7 γ6 γ5 γ-4 i hvilken 25 R1, γΐ, Y2, Y3, Υ4, Υ5, Υ6, Υ7, Υ8 og Υ9 har den ovenfor angivne betydning,

omsættes med en forbindelse med formlen III

A„A

H

hvilken 2 35 R2 og R3 har den ovenfor angivne betydning, eller 3

b) en benzophenon med formlen IV

I DK 175624 B1 I

I I

I γΒ y9q γΐ γ2 I

i Υ3 (IV) i

I γ7 γ6 γ5 γ4 I

I omsættes med hydroxylamin til en forbindelse med formlen I

I V I

I 10 I

I OH I

I γθ γ9 I γΐ γ2 I

I R1-o^£-^uY3 <V) I

I ^ γ7 γ6 γ5 γ4 I

I i hvilken R1, Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8 og Y9 er I

I defineret som ovenfor, I

I 20 hvorefter oximen reduceres til en amin, fortrinsvis med I

I zink i iseddikesyre (S. Gaehde, G. Matsueda, Int. J. I

I Peptide Protein Res. 18, 451 (1981)), og aminen eventuelt I

I omdannes til derivater heraf. I

I Omsætningen af en forbindelse med formlen II med I

I 25 en forbindelse med formlen III gennemføres fortrinsvis I

I i et polært, protisk opløsningsmiddel, såsom eddikesyre, I

I ved en temperatur på mellem 0°C og reaktionsblandingens I

I kogepunkt. I

I Benzhydrolerne med formlen II er hidtil ukendte. I

I 30 Opfindelsen angår således også et benzhydrolderivat, I

I som er ejendommeligt ved, at det har formlen II I

I γθ γ9 γΐ γ2 I

»

I γ7 γ6 yS γ4 I

5 DK 175624 B1 i hvilken R1, Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8 og Y9 har den ovenfor angivne betydning.

Forbindelser med formlen II fås f.eks. ved reduk-5 tion af benzophenon-derivater med formlen IV

YB γ9 Y1 γ2

Rl-°^-C^lfY3 (IV> 10 γ7 γ6 γ5 γ4 i hvilken R1, Υ1, Υ2, Υ3, Υ4, Υ5, Υ6, Υ7, Υ8 og Υ9 er defineret som ovenfor, med egnede, dvs. for ketogruppen 18 selektive reduktionsmidler, såsom natriumborhydrid. Benzophenon-derivater med formlen IV fås a) ved omsætning af benzophenoner med formlen IV, i hvilken R3, er som ovenfor defineret, og Υ3·, Y^, Y3, Y4, Υ5, Υ6, Y7, Y8 og Y9 betyder hydrogen, C1_4-alkyl,

20 Cj_4~alkoxy, og én af grupperne Y3-Y9 betyder hydroxyl, med ω-halogenfedtsyrer med formlen VI

Hal-(CH2)n-COOH (VI) 25 i hvilken Hal betyder halogen, og n er som ovenfor defineret, eller en ester heraf, hvorved der i tilfældet med en ester dernæst sker en alkalisk forsæbning af estergrupperingen f.eks. med en vandig natriumhydroxidopløsning (M. Prashad et al., Indian J. Chem. 17B, 30 496-498 (1979)),

b) f.eks. ved omsætning af benzoesyrechlorider med formlen VII

35 wf?

Rl'°y^"”c'ci <v"> Υ7 γ6

I DK 175624 B1 I

I 6 I

i

I med cu-phenoxyalkansyrer med formlen VIII I

I γ1 γ2 I

I Η 0- < CH2) n-C00R4 (VIII) I

I γ5 γ4 I

I i hvilken R1, Y1, Y2, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8, Y9 og n er I

4 I

10 defineret som under a), og R betyder C^_g-alkyl, for- I

I trinsvis methyl eller ethyl/ I

I under anvendelse af en Lewis-katalysator/ såsom aluminium- I

I trichlorid eller titantetrachlorid (Organikum, 13. oplag/ I

I s. 354 (1974)), eller I

15 c) ved omsætning af de tilsvarende benzoesyrechlorider I

I med formlen VII med tilsvarende substituerede phenoler I

I med formlen IX til de tilsvarende phenylestere med I

I formlen X I

20 I

Υθ γ9 γ2 γ 1 I

°° I

γ7 γ6 γ4 γ5 I

25 I

hvorefter der udføres en Fries-forskydning med Lewis- I

syrer, såsom titantetrachlorid (R. Martin et al., I

Monatsh. Chemie 110, 1057-1066 (1979)) og der omsættes I

30 yderligere med or-halogenf ed tsyrer med formlen VI, hvori I

Hal og n er defineret som ovenfor. I

Forbindelser med formlen VIII fremstilles ved I

omsætning af tilsvarende phenoler med formlen IX I

Y1 Y2 I

35 )—( I

H ; f °H (,x> I

γ5 Y4 I

7 DK 175624 B1 med de tilsvarende ^-halogenalkansyreestere, f.eks. med natriumhydrid i dimethylformamid (DMF) eller kalium-carbonat i acetone.

Analogt hermed kan også forbindelserne med formlen i 5 VII, VIII, IX og X, der svarer til den almene formel I, ' i fremstilles. i

Forbindelser med formlen I, i hvilken R2 ikke betyder hydrogen, er anvendelige ved fastfasesyntesen af forbindelser j

med formlen XI

10 p-r2-nh-r3 (XI) i hvilken P betyder en peptidrest af en q < p+1 a-amino-syrer, ,R betyder en aminosyrerest, der er beskyttet 15 med en svagt sur eller basisk fraspaltelig aminobeskyt-telsesgruppe, og R3 er som ovenfor defineret, hvorved en forbindelse med formlen I kobles med i peptidkemien gængse koblingsreagenser via -O-(CH2)n-COOH-grupperingen til en harpiks, og beskyttelsesgruppen for aminosyren R2 fraspaltes, 20 og q-p trinvis påkobles med baselabile eller mod svage syrer labile aminobeskyttelsesgrupper midlertidigt beskyttede a-aminosyrer, eventuelt i form af deres aktiverede derivater, og forbindelsen, efter endt opbygning af peptidet med formlen XI, frigøres ved behandling med en middelstærk syre fra 25 harpiksen, hvorved der samtidig eller ved hjælp af egnede foranstaltninger derpå igen fraspaltes midlertidigt indførte sidekædebeskyttelsesgrupper.

Såfremt det er nødvendigt til'hindring af sidereaktioner eller til syntesen af specielle peptider, 30 er de funktionelle grupper i aminosyrernes sidekæde yderligere beskyttet med egnede beskyttelsesgrupper {jf. f.eks. T.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis",

New York, John Wiley & Sons, 1981), hvorved der først og fremmest anvendes Arg(Tos), Arg(Mts), Arg(Mtr), 35 Asp(OBzl), Asp(OBut), Cys(4-MeBzl), Cys(Acm), Cys(SBut),

I DK 175624 B1 I

I i

I ° I

I Glu(OBzl), Glu(OBut), His(Tos), His(Fmoc), His(Dnp), I

I His(Trt), Lys(Cl-2), Lys(Boc), Met(O), Ser(Bzl), Ser(But), I

I Thr(Bzl), Thr(But). I

De som bæremateriale anvendte harpikser kan fås I

I 5 kommercielt eller kan fremstilles, såsom alkoxybenzylalko- I

holharpikser, aminomethylharpikser eller benzhydrylamino- I

I harpikser. Foretrukne er benzhydrylamino-(BHA) og me- I

I thylbenzhydrylamino-harpikser (MBHA). Belastningen be- I

I stemmes ved aminosyreanalyse og/eller elemetaranalyse. I

I 10 Som koblingsreagens for forbindelsen med formlen I

I I og for de yderligere aminosyrederivater kan der an- I

I vendes alle mulige i peptidsyntesen anvendte aktiverings- I

reagenser, jf. f.eks. Houben-Weyl, Methoden der organischen I

Chemie, bind 15/2, især dog carbodiimider, såsom Ν,Ν'- I

I 15 -dicyclohexylcarbodiimid, Ν,Ν1-diisopropylcarbodiimid I

I eller N-ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimid. I

I Koblingen til harpiksen kan derved gennemføres direkte I

I ved addition af et aminosyrederivat med et aktiverings- I

I reagens, og eventuelt med en tilsætning, der undertrykker I

I 20 racemisering, f.eks. 4-dimethylaminopyridin, 1-hydroxy- I

I benzotriazol (HOBt) (W. Konig, R. Geiger, Chem. Ber. I

I 103, 708 (1970)) eller 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro- I

I benzotriazin (HOObt) (W. Konig, R. Geiger, Chem. Ber. I

I 103, 2054 (1970)), eller også kan foraktiveringen af I

I 25 aminosyrederivatet som symmetrisk anhydrid eller HOBt- I

I eller HOObt-ester udføres separat., og opløsningen af I

I de aktiverede materialer i et egnet opløsningsmiddel I

I sættes til en koblingsdygtig peptidharpiks. I

I Koblingen eller aktiveringen af en forbindelse I

I 30 med formlen I og af aminosyrederivaterne med et af de I

I ovenfor nævnte aktiveringsreagenser kan gennemføres i I

I dimethylformamid eller methylenchlorid eller en blanding I

af begge. Det aktiverede aminosyrederivat anvendes i I

almindelighed i et 1,5 til 4-dobbelt overskud. I de I

35 I

9 I

DK 175624 B1 I

° I

tilfælde, hvor der optræder en ufuldstændig kobling, I

gentages koblingsreaktionen uden først at gennemføre I

den til koblingen af den efterfølgende aminosyre nød- I

vendige afblokering af peptidharpiksens α-aminosyre- I

5 gruppe. I

Det vellykkede forløb af koblingsreaktionen kan I

undersøges ved hjælp af ninhydrin-reaktionen, f.eks. I

som beskrevet af E. Kaiser et al., Anal. Biochem. 34_, I

595 (1970). Syntesen kan også gennemføres automatisk, I

10 f.eks. med en peptidfremstiller model 430A fra Applied I

Biosystems, hvorved der enten kan anvendes de fra I

apparatfremstiIleren fastlagte synteseprogrammer eller I

også af brugeren selv fremstillede synteseprogrammer. I

I Sidstnævnte anvendes især ved anvendelse af med Fmoc- I

I 15 gruppen beskyttede aminosyrederivater. I

I Fraspaltningen af peptidamiderne fra harpiksen I

I sker ved behandling med i peptidsyntesen i almindelighed I

I anvendte middelstærke syrer (f.eks. trifluoreddikesyre), I

I hvorved der som kationbinder anvendes substanser, såsom I

I 20 phenol, cresol, thiocresol, anisol, thioanisol, ethan- I

I dithiol, dimethylsulfid, ethylmethylsulfid eller lign- I

I ende i fastfasesyntesen gængse kationbindere, hvor disse I anvendes enkeltvis eller som en blanding af to eller I flere af disse hjælpemidler. Trifluoreddikesyren kan 25 derved også anvendes fortyndet med egnede opløsnings- I midler, såsom methylenchlorid.

I Ved fraspaltningen af spaceren fra harpiksen ud- føres fraspaltningen af sidekædebeskyttelsesgrupperne samtidig.

I 30 Oprensningen af de således opnåede rå peptider I udføres ved hjælp af chromatografi på "Sephadex" - ion- I bytterharpikser eller ved HPLC.

I De nedenstående eksempler tjener til illustration I af den ovenfor beskrevne opfindelse, uden at opfindelsen 35 begrænses heraf.

I DK 175624 B1

I 10 I

I ° I

I Eksempel 1 I

4-(4’-Methoxybenzoyl)-phenoxyeddikesyiremethylester, I

64 g Aluminiumchlorid (vandfrit), oplyses i 16Q I

I ml 1,2-dichlorethan, og hertil sættes 71,6 g 4-methqxy-- ·. I

I 5 benzoylchlorid. Hertil dryppes 57,6 ml phenoxyeddike- I

syremethylester langsomt under omrøring, og reaktions- I

I blandingen opvarmes i 4 timer til 50^0, Blandingen dryp·«' I

pes til isvand, hvorved der udskilles en olie. Vand- I

I fasen skilles fra, og remanensen udrøres tre gange med I

I 10 vand, og der krystalliseres med methanol, Udfældningen I

I frafiltreres, og der omkrystalliseres ud fra. ethylace- I

I tat. I

I Udbytte: 54,9 g (53% af teorien) I

I Smeltepunkt; 146°C (148°C, ethylace tat.), I

i I

I Eksempel 2 I

4-(4'-Methoxybenzoyl)-phenoxyeddikesyre, I

I - 9,0 g af methylesteren fra eksempel 1 opløses i I

I 120 ml 1,2-dimethoxyethan/vand (4;1, v?v), og hertil I

20 sættes 15 ml 2N NaOH. Blandingen omrøres i 3 timer( I

hvorefter pH indstilles på 3 med 3 N HCl, Det organiske I

I opløsningsmiddel afdampes under vakuum, og det udfældede I

I produkt frafiltreres, hvorefter det vaskes med vand og I

I tørres under højvakuum. I

I 25 Udbytte: 8,4 g (98% af teorien) I

I Smeltepunkt: 181-182°C. I

I Eksempel 3 I

I (4-Carboxymethoxyphenyl)-4'-methoxyphenylcarbinol, I

30 11,2 g 4-(4*-methoxybenzoyl)-phenoxyeddikesyre op- I

løses i 600 ml 80%*s methanol (tilbagesvaling), og her- I

til sættes -4,4 ml N-methylmorpholin, Til blandingen sættes I

portionsvis i løbet af 2 timer 6 g natriumborhydrid, og I

reaktionen videreføres i 3 timer under tilbagesvalings- I

35 betingelser. Blandingen afkøles til stuetemperatur, og I

den gøres sur med 3 N HCl til pH 2,5. Methanolen fra- I

destilleres, og den vandige fase ekstraheres med ethyl- I

11 DK 175624 B1 o acetat, hvorefter der vaskes med en kogsaltopløsningr og der tørres over natriumsulfat. Efter fradest.il lering af ethylacetatet bliver et hvidt amorft pulver tilbage.

Produktet anvendes direkte til den næste reaktion * 5 Udbytte; 9,3 g (83% af teorien)·

Eksempel 4 2-MethyIphenoxyeddikesyremethylester, 108 g 2-methylphenol opløses i 5QQ ml tør acetone, io og hertil sættes 165,8 g pulveriseret kaliumcarbonat,

Til den omrørte suspension sættes 113 ml bromeddikesyre·!' methylester, og blandingen videreomrøres ved stuetempe·^ ratur under udelukkelse af fugtighed.. Efter afsluttet reaktion frafiltreres saltet ved sugning, og der efter-15 vaskes med acetone, og filtratet koncentreres. Der op— tages i ethylacetat, hvorefter der vaskes med vand, og den organiske fase tørres over magnesiumsulf.at, og den koncentreres.

Udbytte: 180 g af en olieagtig væske, der direkte videre— 20 omsættes.

Eksempel 5 4- (4'-Methoxybenzoyl)-2-methylphenoxyeddikesyrernethylester, 146,6 g vandfrit aluminimtrichlorid opløses i 500 25 ml 1,2-dichlorethan. Ved 0°C dryppes hertil efter hinanden 187 g 4-methoxybenzoylchlorid og 180 g 2-methylphe-noxyeddikesyremethylester. Til fuldstændiggørelse af reaktionen opvarmes der til 50°C. Blandingen hældes på is, og pH indstilles på 2 med 2 Ν’ HC1. Det udfældede 30 produkt frafiltreres ved sugning, og det vaskes med vand og noget ether. Udfældningen opløses under varme i ethylacetat under tilsætning af noget aktivt kul, hvorefter der filtreres, og der krystalliseres ved -10°C. Produktet frafiltreres ved sugning, hvorefter det vaskes med 35 ether, og der tørres under højvakuum.

Udbytte: 172,8 g (55% af teorien)

Smeltepunkt: 92-95°C.

I DK 175624 B1 I

I 12 I

lo I

I Eksempel 6 I

I 4- (4' -Methoxybenzoyl) -2Tmethylph.enoxyeddl.ke.5^remethy lester. I

I 50 g 4-Hydroxy-3-methyl-41-methoxybenzophenon I

I (R. Martin et al. Monatsh. Chemie 11Q, 1057-^1066 (19791).. I

I 5 opløses i 200 ml tør DMF, og hertil sættes under Nj for- I

I sigtigt 9 g af en 55%'s dispersion af natriumhydrid i I

I mineralolie. Til blandingen dryppes herefter under om- I

I røring 19,5 ml bromeddikesyremethylester, og blandingen I

I tillades at henstå natten over ved stuetemperatur. Det I

I 10 udfældede salt frafiltreres ved sugning, og filtratet I

I koncentreres under vakuum. Remanensen optages i ethyl- I

I acetat, og der vaskes med en natriumhydrogencarbonat- I

I opløsning og vand. Den organiske fase tørres oyer I

I magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet udtrækkes. Remanen- I

I 15 sen udrives med ether, hvorefter der frafiltreres ved I

I sugning og der tørres. I

I Udbytte: 38,9 g (60% af teorién). I

I Smeltepunkt: 96-98°C. I

20 Eksempel 7 I

4-(4 1 -Methoxybenzoyl) -phenoxyeddikesyremeth.ylester. I

I 29,1 g 4-Hydroxy-4'-methoxybenzophenon (R. Martin I

I et al. Monatsh. Chemie 110 , 1057-1066 (1979)). opløses I

I i 400 ml tør acetone. Herefter sætter man under omrøring I

I 25 19,3 g finpulveriseret I^CO^ og 16 ml hromeddikesyreme- I

I thylester til blandingen, og den omrøres ved stuetempera- I

I tur. Efter 2 dage er reaktionen afsluttet. Den udfældede I

I salt-substansblanding frafiltreres ved sugning, hvorefter I

I filtratet koncentreres. Begge remanenser, suspenderes i I

I 30 vand, og pH indstilles på 3 med 2 N HC1. Der frafiltreres I

I ved sugning, hvorefter der vaskes med vand, og der tørres I

I i exsikkator under højvakuum. I

I Udbytte: 35,7 g (98% af teorien) I

I Smeltepunkt; 143-145°C. I

I 35

DK 175624 B1 I

13 I

° I

Eksempel 8 I

4_ (4 i -Methoxybenzoy 1). -2-methylphenQxye.ddikesyre. I

35,8 g 4- (4' ~Methoxybenzoyl) ^2-methylphenoxyeddi~ I

• kesyremethylester omrøres med en blanding af 240 ml I

5 dioxan og 240 ml 0,5 N NaOH ved stuetemperatur. Efter I

endt reaktion udtrækkes det organiske opløsningsmiddel, I

I og den vandige fase indstilles på pH. 3 med 2 N HC1, I

I hvorefter der ekstraheres med ethylacetat, Der vaskes I

I med vand, hvorefter der tørres over magnesiumsulfat, I

I 10 og der koncentreres. Tilbage bliver der bleggule kry- I

I staller. I

I Udbytte: 30,2 g (83% af teorien). I

I Smeltepunkt; 149-151°C. I

I 15 ..... Eksempel 9 I

I (4-Carboxymethoxy-3-methylphenyl) -4 ’ -metho.xyphenylcar- I

I bind. I

I 22,5 g 4- (41 -Methoxybenzoyl)-2-methylph.enQXy- I

I eddikesyre opløses i en blanding af 1QQ ml dioxan og I

I 20 200 ml vand under tilsætning af 1 N NaOH til pH 9, I Til den omrørte opløsning sættes portionsvis 2,8 g I natriumborhydrid, og blandingen tillades at henstå I natten over. Derefter udtrækkes dioxanet, og vandfasen I indstilles på pH 3 med 2 N HC1, og·der ekstraheres med I 25 ethylacetat. Den organiske fase tørres over magnesium- I sulfat, og der koncentreres. Tilbage bliver' et farve- I løst skum, der udrives med n-hexan til et amorft pulver, I hvorefter der frafiltreres ved sugning. Produktet an- I vendes direkte i den næste reaktion.

I 30 Udbytte: 19,2 g (84% af teorien).

I 35 I DK 175624 B1

I 14 I

I ° I

I Eksempel 10 I

I 2,6-Dimethylphenoxyeddikesyremethylester. I

I 65 g 2,6-Dimethylphenol opløses i 200 ml tør DMF, I

I og under ^ sættes portionsvis 23,2 g af en 55%'s sus- I

I 5 pension af natriumhydrid i mineralolie til blandingen. I

Herefter dryppes 50,4 ml bromeddikesyremethylester under I

I omrøring til blandingen, og den tillades at henstå nat- I

I ten over. Det udfældede salt frafiltreres ved sugning, I

I og filtratet koncentreres. Remanensen optages i ethyl- I

10 acetat, og der ekstraheres med vand. Den organiske fase I

tørres over magnesiumsulfat, og den koncentreres. Til- I

I bage bliver én olieagtig væske, der anvendes direkte i I

I den følgende reaktion. I

I Udbytte: 95,8 g (92% af teorien). I

I 15 I

I Eksempel 11 I

I 2,6-Dimethyl-4-(41-methoxybenzoyl)-phenoxyeddikesyre- I

I methylester. I

I Syntesen udføres analogt med eksempel 5 med 19,4 I

I 20 g 2,6-dimethylphenoxyeddikesyremethylester. I

I Udbytte: 17,4 g (53% af teorien). I

Eksempel 12 I

I (4-Carboxymethoxy-3,5-dimethylphenyl)-4’-methoxyphenyl- I

I 25 carbinol. I

I 16,4 g 2,6-Dimethyl-4-(4*-methoxybenzoyl)-phenoxy- I

I eddikesyrernethylester orarøres i en blanding af 100 ml I

0,5 N NaOH og 100 ml dioxan ved stuetemperatur. Efter I

I afsluttet forsæbning af methylesteren sættes 1,89 g 'I

I 30 natriumborhydrid til blandingen, og den tillades at I

I reagere natten over. Herefter frafiltreres noget uopløst I

I materiale, hvorefter filtratet koncentreres, og den til- I

I ' bageblevne vandig opløsning gøres sur med 1 N HCl. Der I

I ekstraheres med ethylacetat, hvorefter den organiske I

I 35 fase vaskes med vand, og der tørres over magnesiumsul- I

I fat, hvorefter blandingen koncentreres. Tilbage bliver I

I der et amorft pulver, der anvendes direkte til den efter- I

I følgende' omsætning. I

15 DK 175624 B1

O

Udbytte: 11,3 g (71% af teorien).

Almen forskrift til fremstilling af Na^Fmoc^aminoi-· syre- (4-carboxymethoxy-phenyl-4' -methoxyphenyl)methyl~ 5 amidet samt Να-Fmoc-aminosyre-(4-carboxymethoxy-3' -methylphenyl-4*-methoxyphenyl)-methylamidet og Na·^ -Fmoc-aminosyre- (4-ca rboxyme thoxy-3,5-dirne thylpheny 1·^4 ' ~ -methoxyphenyl)-roethylamidet, 10 iniriol Να-Fmoc-aminosy'reamid og 10 mmol af den 10 tilsvarende carbinol opløses i den nødvendige mængde vandfri iseddikesyre, og hertil sættes 5^1Q dråber kon~ centreret svovlsyre. Til blandingen sættes endnu 2 g molekyl-sigte, og blandingen tillades at henstå natten over.

Herefter frafiltreres molekylsigten ved sugning, og 15 filtratet fortyndes med meget vand, hvorved produktet delvis udfælder. Den vandige fase ekstraheres med ethyl-acetat, hvorefter den organiske fase udrystes med vand.

Den substans, der bliver tilbage efter tørring over natriumsulfat og koncentrering, omkrystalliseres.

20 Efter den ovenstående gængse forskrift fremstilles følgende forbindelser:

Eksempel 13

Na-Fmoc-Glycin-(4-carboxymethoxyphenyl-4'-methoxyphe-25 nyl)methylamid.

Udbytte: 65% . Smeltepunkt: 136-138°C.

Eksempel 14 30 Να-Fmoc-Phenylalanin-(4-carboxymethoxyphenyl-4'-methoxy- pheny1)methylamid.

Udbytte: 65%

Smeltepunkt: 159-162°C.

35 I DK 175624 B1 I 16 i

Eksempel 15 Να-Fmoc-Glycin-(4-carboxymethoxy-3-methylphenyl-'4 1 - -methoxyphenyl)methylamid.

I Udbytte: 60% 5 Smeltepunkt; 135-140°C.

I Eksempel. 16 I

Να-Fmoc-Valin- (4-carboxymethoxy-3-methylph.enyl-<-4 ' - -methoxyphenyl)methylamid.

10 Udbytte: 81% I Smeltepunkt; 172-175^(2,

Eksempel 17 H Na-Fmoc-Glycin-(4~carboxymethoxy-3,5-dimethylphenyl~ 15 -41-methoxyphenyl)methylamid.

I Udbytte: 70% I Smeltepunkt: 122-126°C.

I Eksempel 18 I 20 Syntese af oxytocin.

H-Cys-Tyr—Ile-Gln-Asn-'-Cys^Pro-Leu-Gly-NH,, I_l under anvendelse af det i eksempel i3 beskrevne anker.

I 25 Syntesen udføres i et organ til peptidsyntese fra. Fa, I labotec.

I Fra 1,5 g Boc-Val-harpiks (belastning Q,76 mmol/g) fjernes først beskyttelsesgruppen med triflporeddikesyre I i methylenchlorid. Efter vask med dichlormethan og I 30 ethyldiisopropylamin og igen med dichlormethan.tørres harpiksen. Herefter sættes 2,1 mmol af det i eksempel 13 I fremstillede anker sammen med 3,15 mmol H0£t opløst i I 20 ml tør DMF til harpiksen, og hertil hældes 2,3 mmol I diisopropylcarbodiimid. Under langsom gennemblanding I 35 tillades blandingen at reagere natten over ved stuetem- I peratur. Reaktionens fuldstændighed undersøges ved hjælp I af ninhydrin-reaktionen (Kaiser-test). Herefter frafiltreres 17 DK 175624 B1

O

harpiksen ved sugning, og der vaskes med DMF, hvorefter peptidet opbygges på harpiksen, hvorved man cyclisk gennemløber følgende trin: - Fmoc-beskyttelsesgruppen fraspaltes med 20% piperidin 5 i DMF, - harpiksen vaskes med DMF, * - Fmoc-aminosyren tilkobles under in situ-aktivering som HOBt-ester under anvendelse af diisopropylcarbodiimid som aktiveringsreagens (2,1 mmol aminosyre, 3,15 10 mmol HOBt, 2,3 mmol diisopropylcarbodiimid), - harpiksen vaskes med DMF.

Såfremt koblingen er ufuldstændig (Kaiser-test), gentages koblingstrinnet.

Som sidekædebeskyttelsesgrupper anvendes tert.butyl 15 for tyrosin og tert.butylthio for cystein.

Efter afsluttet syntese fraspaltes først Fmoc-beskyttelsesgruppen, og herefter vaskes harpiksen med i rækkefølge DMF, dichlormethan, isopropanol, dichlormethan og tert.buty1-methylether, hvorefter der tørres under høj-20 vakuum. Der fås 2,4 g peptidharpiks. Fraspaltningen udføres ved stuetemperatur med en blanding af trifluoreddike-syre/thioanisol/ethandithiol (80/15/5). Efter 2 timer frafiltreres der ved sugning i tert.buty1-methylether, og det udfældede rå peptid fracentrifugeres, og det vaskes 25 tre gange med tert.buty1-methylether. Fraspaltningen af tert.butylthio-beskyttelsesgruppen udføres ved hjælp af tributylphosphin i trifluorethanol/vand ved pH 7,3. S-H-, -peptidet ringsluttes med iod i en 60%'s vandig eddikesyre, og peptidet oprenses ved hjælp af chromatografi på "Sepha- • 30 dex LH 20" i methanol.

Oxytocin-udbyttet er på 33%, hvor oxytocin er iden- . tisk med en autentisk sammenligningsprøve.

35

Claims (7)

1. Diphenylmethanderivat, kendetegnet ved, at I I det har formlen I I I 5 r2 r3 ' I I V I I γ8 γ9 γ1 γ2 I I r1-°-^-ch-^-y3 u> I I γ7 γ6 γ5 γ4 I I 10 I i hvilken | I R^ betvder C^_g-alkyl eller Cg_^4-arylf I I ^1 I 15 betyder hydrogen eller en aminosyrerest, der er be- I I skyttet med en svagt surt eller basisk fraspaltelig amino- I I beskyttelsesgruppe, I I 3 H I R betyder hydrogen eller C^_^-alkyl, I Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, γ8 og Y9 betyder hydrogen, I I 20 Cj,_4-alkyl, C^_4-alkoxy eller -0-(C^^-COOH, hvor I I grupperne er ens eller forskellige, idet én gruppe I I dog er -O- (C^) n“C00H, og I I n betyder et helt tal fra 1 til 6. I

2. Forbindelse med formlen I ifølge krav 1, k e η - I I 25 detegnet ved, at betyder methyl, og n betyder I I et helt tal på 1, 2 eller 3. I

3. Forbindelse med formlen I ifølge ét eller flere . I I 2 I I af kravene 1-2, kendetegnet ved, at R betyder I en aminosyrerest, der er beskyttet med en urethanbeskyt- · I 30 telsesgruppe, og R3 betyder hydrogen. I

4. Forbindelse med formlen I ifølge ét eller flere I I af kravne 1-3, k e nd e te g ne t ved, at grupperne I Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8 og Y9 betyder methyl I eller methoxy, idet dog én af disse grupper betyder I 35 -0-(CH2)n~C00H, og mindst 4 af disse grupper betyder I hydrogen. H

5. Forbindelse med formlen I ifølge ét eller flere I DK 175624 B1 af kravene 1-4, kendetegnet ved, at grupperne Y1, Y3, Y5, Y7 eller Y8 betyder gruppen -0-(CH2)n“cooH.

6. Fremgangsmåde til fremstilling af et diphenyl-methanderivat med formlen I ifølge ét eller flere af kravene ‘ 5 1-5, kendetegnet ved, at a) en benzhydrol med formlen II yS y9oh y1 y2 io r1_0^^ch^^y3 (H) γΤ γ6 γ5 γ4 ι 15. hvilken R1, Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8 og Y9 har den i krav 1 angivne betydning, omsættes med en forbindelse med formlen III 20 2 3 \ /R (III) t H 25. hvilken R2 og R3 har den i krav 1 angivne betydning, eller b) en benzophenon med formlen IV YB γ9 Y1 γ2

30 W< ii W{ _ (IV) r1 Y γ7 γ6 γ5 γ4 35 omsættes med hydroxylamin til en forbindelse med formlen V

20 I DK 175624 B1 I OH I γΒ γ9 I γ1 γ2 I 5 <v) . i γΤ γβ γ5 γ4 i hvilken R1, Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8 og Y9 er som I defineret under a), I 10 hvorefter oximen reduceres til en amin, og aminen eventuelt I omdannes til derivater heraf. I

7. Benzhydrolderivat, kendetegnet ved, at I det har formlen II I 15 γθ γ9 γΐ γ2 I ™ I γ7 γ6 γ5 γ4 I 20. hvilken I R1, Y1, Y2, Υ3, Υ4, Υ5, Υ6, Υ7, Υ8 og Υ9 har den i krav 1 I angivne betydning. I