KR970005473B1 - 산에 대한 불안정한 고정 그룹을 사용하는 고체상 방법에 의한 펩티드 아미드의 합성방법 - Google Patents

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Abstract

내용없음.

Description

산에 대한 불안정한 고정 그룹을 사용하는 고체상 방법에 의한 펩티드 아미드의 합성방법
본 발명은 신구의 스페이서(spacers) 및 이의 제조 방법, 및 이들 산에 대해 불안정한 고정 그룹(archoring group)을 사용하는 고체상 방법에 의한 펩티드 아미드의 합성방법에 관한 것이다.
고체상 합성방법(solid phase synthesis)에 의한 펩티드 아미드의 제조시에는 예를 들어, 문헌[참조 ; J, P. Tam et al., Tetrahedron Lett. 22, 2851(1981)]에 기술되어 있는 벤즈하이드릴아민 수지 또는 메틸벤즈 하이드릴아민 수지가 통상적으로 사용된다. 다른 방법은 담체-결합된 펩티드 벤질 에스테르의 가암모니아 분해를 포함한다[참조; C. Ressler et al., J. Am. Chem. Soc. 76, 3107(1951)]. 상기 두 방법의 특징은 스페이서, 부반응물 또는 불완전한 분해물을 절단시키기 위해 강산(예 : 액체 불화 수소 또는 트리플루오로메탄설폰산)을 필요로 한다는 것이다.
따라서 본 발명의 목적은 담체 수지로부터 펩티드 아미드를 보다 온화하게 보다 잘 절단시키는 신규의 스페이서를 발견함에 기초한다.
본 발명의 목적은 하기 화학식(I) 화합물을 제공하는 것이다.
Figure kpo00001
상기식에서, R1은 (C1-C8)-알킬 또는 치환되거나 비치환된 (C6-C14)-아릴이고, R2는 수소, 또는 염기에 의해 절단될 수 있는 아미노 보호 그룹에 의해 보호된 아미노산 잔기이며, R3는 수소 또는 (C1-C4)- 알킬이고, Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8,및 Y9은 동일하거나 상이하게 수소, (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-알콕시 또는 -O-(CH2)n-COOH이나, 하나의 라디칼은 -O-(CH2)n-COOH 이어야 하며, n은 1내지 6의 정수이다.
화학식(I)의 바람직한 화합물은R1이 메틸이고 n이 1,2 또는 3의 정수인 화합물이다.
마찬가지로 상기 화학식(I)의 바람직한 화합물은, R2가 우레탄 보호 그룹, 특히 Fmoc로 보호된 아미노산 잔기이고 R3이 수소인 화합물이다.
또한 라디칼 Y1내지 Y9는 특히 메틸 또는 에톡시이거나, 이들 라디칼중 하나의 라디칼은 -O-(CH2)n-COOH이고 이들중 4개 이상이 수소이다.
Y1, Y3, Y5, Y7또는 Y8이 라디칼 -O-(CH2)n-COOH인 것이 바람직하다.
알킬 및 알콕시는 직쇄 또는 측쇄일 수 있다.
(C6-C14)-아릴의 예로는 페닐, 나프틸, 비페닐릴 또는 플루오레닐이 있으며 페닐이 바람직하다.
R2는 아미노산, 바람직하게는 α- 아미노산(키랄인 경우에는 D- 또는 L- 형태일 수 있다)이다. 바람직한 잔기는 천연 아미노산, 이의 에난티오머 동족체, 유도체 및 단순한 대사물질이다. [참조; Wunsch et al., Houben-Wey1 15/1 and 2, Stuttgart, Thieme 1974]. 따라서 다음과 같은 것들일 적합한 예이다:
Aad, Abu, γAbu, ABz, 2ABz; εAca, Ach, Acp, Adpd, Ahb, Aib,
ΒAib, △Ala, βAla, Alg, All, Ama, Amt, Ape, Apm, Apr,
Arg, Asn, Asp, Asu, Aze, Azi, Bai, Bph, Can, Cit, Cys,
Cyta, Daad, Dab, Dadd, Dap, Dapm, Dasu, Djen, Dpa, Dtc,
Fel, Gln, Clu, Gly, Guv, hCys, His, hSer, Hyl, Hyp, 3Hyp,
Ile, Ise, Iva, Kyn, Lant, Lcn, Leu, Lsg, Lys, βLys, △Lys,
Met, Mim, Min, nArg, Nle, Nva, Oly, Orn, Pan, Pec, Pen,
Phe, Phg, Pic, Pro, △Pro, Pse, Pya, Pyr, Pza, Qin, Ros,
Sar, Sec, Sem, Ser, Thi, βThr, Thr, Thy, Thx, Tia, Tle,
Tly, Trp, Trta, Tyr, Val 및 상응하는 에난티오머 D-아미노산의 잔기.
상기 언급한 아미노산 잔기의 측쇄상의 작용그룹은 보호될 수 있다. 적합한 보호그룹은 문헌[참조 ; Hubbuch, Kontakte(Merck) 1979, No. 3, pages 14-23, and Bullesbach, Kontakte(Merck) 1980, No. 1, pages 23-35]에 기술되어 있다.
염기에 대해 불안정하거나 또는 약산에 대해 불안정한 보호그룹은, 특히 Fmoc, Ddz, Bpoc, Msc, Peoc, Pse 및 Tse와 같은 우레탄 보호그룹이며 바람직하게는 Fmoc이다[참조; Hubbuch, Kontakte(Merck) 1979, No. 3, pages 14-23]이다.
본 발명은 또한 a)화학식2의 화합물과 화학식3의 화합물을 반응시키거나, b)화학식4의 화합물과 하이드록실아민을 반응시켜 화학식5의 화합물을 수득한 후, 옥심을 바람직하게는 빙초산중에서 아연을 사용하여 아민으로 환원시키고[참조; S. Gaehde, G. Matsueda, Int. J. Peptide Protein Res, 18, 451 (1981)], 적합한 경우 이의 유도체로 전환시킴을 포함하는 화학식1 화합물의 제조방법에 관한 것이다.
Figure kpo00002
Figure kpo00003
Figure kpo00004
Figure kpo00005
상기식에서, R1은 (C1-C8)-알킬 또는 치환되거나 비치환된 (C6-C14)-아릴이고, R2는 수소 또는, 약산 또는 염기에 의해 절단될 수 있는 아미노 보호그룹에 의해 보호된 아미노산 잔기이고, R3는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이며, Y1,Y2,Y3,Y4,Y5,Y6,Y7,Y8및 Y9는 동일하거나 상이하게 수소, (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-알콕시 또는 -O-(CH2)n-COOH이나, 이중 하나의 라디칼은 -O-(CH2)n-COOH이어야 하며, n은 1 내지 6의 정수이다.
화학식2 화합물과 화학식3화합물의 반응은 바람직하게는 0℃ 내지 반응 혼합물의 비점에서 극성 양성자성 용매(예:아세트산)중에서 수행한다.
화학식2 화합물은 신규한 화합물이다.
화학식2의 화합물은 예를들면 화학식4의 벤조 페논 유도체를 케토 그룹에 대해 선택적인 적절한 환원제, 예를들어 수소화부소나트륨으로써 환원시켜 수득한다.
Figure kpo00006
상기식에서, R1,Y1내지 Y9은 상기 정의한 의미이다.
화학식4의 벤조페논 유도체는
a) R1이 상기 정의한 바와 같고, Y1내지 Y9가 수소, (C1-C4)-알콕시이며, Y1내지 Y9중 하나의 라디칼이 하이드록실인 화학식4의 벤조 페논을 화학식4의 ω-할로게노지방산이 또는 이의 에스테르와 반응시키며, 에스테르의 경우에는 후속적으로 예를들어 수산화 나트륨용액으로 에스테르 그룹을 알칼리성 가스분해시키거나, [참조;M. Prashad et al, Indian J. Chem. 17B, 496-498(1979)],
b) 예를들어 화학식7의 벤조일 클로라이드를 루이스 촉매(예:알루미륨 트리클로라이드 또는 티탄 테트라클로라이드)를 사용하여 화학식8의 ω-페녹시 알카노산과 반응시키거나[참조; Organikum 13th edition, page 354(1974)],
c) 화학식7의 적절한 벤조일 클로라이드를 적절히 치환된 화학식9의 페놀과 반응시켜 화학식10의 상응하는 페닐 에스테르를 수득하고, 후속적으로 티탄 테트라클로라이드와 같은 루이스 산으로 이를 프리스(Fries) 이성체화[참조; R. Martin dt. al., Monatxh. Chemie 110, 1057-1066(1979)]시킨후 화학식6의 ω-할로게노 지방산 추가로 반응시킴으로써 수득된다.
Hal-(CH2)n-COOH (Ⅵ)
Figure kpo00007
Figure kpo00008
Figure kpo00009
상기식에서, Hal은 할로겐이고, n은 상기 정의한 바와 같고, R1,Y1내지 Y9및 n은 반은 a)에서 정의한 바와 같고, R4는 (C1-C8)-알킬, 바람직하게는 메틸 또는 에틸이다.
화학식8의 화합물은, 화학식9의 상응하는 페놀을 적절한 ω-할로게노알카노산 에스테르 예를들면, 디메틸포름아미드(DMF)중에서 수소화나트륨과 반응시키거나 아세톤중에서 탄산칼륨과 반응시켜 제조한다.
Figure kpo00010
또한, 화학식1 화합물에 상응하는 화학식7, 8, 9 및 10 화합물도 유사한 방법으로 제조할 수 있다.
또한, 본 발명은 추가로 펩티드 화학분야의 통상적인 커플링제를 사용하여, 화학식1 화합물을 -O-(CH2)n-COOH그룹을 통해 수지에 커플링시키고 아미노산 R2상의 보호그룹을 절단 제거시키고 염기에 대해 불안정하거나 약산에 대해 불안정한 아미노 보호 그룹에 의해 일시적으로 보호되고, 경우에 따라 활성화된 유도체 형태의 q-p α-아미노산을 단계별로 커플링시켜 합성을 종결시킨 후, 증등도의 강산으로 처리하여 수지로부터 화학식11의 펩티드를 분리시키고, 일시적을 도입된 측쇄 보호그룹을 상기 절단 반응과 동시에 또는 이어서 적합한 방법에 의해 다시 절단시킴을 포함하는 고체상 합성방법에 의한 화학식11의 화합물의 제조방법 및 화학식11의 화합물을 고체상 합성하는데 있어서, R2가 수소가 아닌 화학식1 화합물의 용도에 관한 것이다.
P-R2-NH-R3(XI)
상기식에서, P는 q≤p+1α-아미노산으로 이루어지는 펩티드 잔기이고, R2는 약산 또는 염기에 의해 절단될 수 있는 아미노 보호그룹에 의해 보호된 아미노산 잔기이며, R3는 상기 정의한 바와 같다.
부반응을 방지하거나 특정 펩티드를 합성하기 위해 필요하다면, 아미노산의 측쇄상의 작용그룹을 적절한 보호그룹에 의해 추가로 보호시킬 수 있으며[참조; T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, New York, John Wiely Sons, 1981]이때 주로 사용되는 보호그룹은 Arg(Tos), Arg(Mts), Arg(Mtr), Asp(OBut), Cys(4-MeBzl), Cys(Acm), Cys(SBut), Glu(OBut)m His(Tos), His(Fmoc), His(Dnp), His(Trt), Lys(Cl-2), Lys(Boc), Met(O), Ser(Bzl), Ser(But), Thr(Bzl), Thr(But)이다.
담체물질로 사용되는 수지는 시판품으로 구입이 가능하거나 또는, 본 발명자들에 의해 제조되며 예를들면 알콕시벤질알콜 수지, 아미노메틸 수지 또는 벤즈하이드릴 아미노 수지를 들 수 있다. 벤즈하이드릴아미노 수지(BHA) 및 메틸-O-벤즈하이드릴아미노수지(MBHA)가 바람직하다. 부하는 아미노산 분석 및/또는 원소분석에 의해 측정된다.
화학식1 화합물 및 추가의 아미노산 유도체에 대한 커플링제로는 펩티드 합성에 사용되는 모든 가능한 활성화제[참조; Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie(Methods of Organic Chemistry), volume 15/2], 특히, 예를들어, N,N'-디사이클로헥실 카보디이미드, N,N'-디이소프로필카보디 이미드 또는 N-에틸-N'-(2-디메틸아미노프로필)카보디 이미드와 같은 카보디이미드를 사용할 수 있다. 이러한 커플링 반응은 아미노산 유도체를 활성화제 및 경우에 따라, 라세미화-억제용 첨가제, 예를들어, 4-디메틸아미노 피리딘, 1-하이드록시벤조트리아졸(HOBt)[참조; W. Konig, R. Geiger, Chem. Ber. 103, 708(1970)]또는 3-하이드록시-4-옥소-3,4-디하이드로 벤조트리아진(HOObt)[참조; W. Konig, R.Geiger, Chem. Ber. 103, 2054(1970)]과 함께 수지에 직접 가하거나, 대칭성 무수물로서의 아미노산 유도체, 또는 HOBt-또는 HOObt-에스테르를 별도로 예비활성화 시킨후, 적절한 용매 중의 활성화물의 용액을 커플링할 펩티드-수지에 가하여 수행할 수 있다.
상기 언급된 활성화제 중의 하나를 사용하는 화학식1 화합물 및 아미노산 유도체의 커플링 및 활성화는 디메틸포름아미드, 메틸렌 클로라이드 또는 이들의 혼합물중에서 수행할 수 있다. 활성화된 아미노산 유도체는 통상적으로 1.5 내지 4배 과량으로 사용한다. 불완전한 커플링이 일어나는 경우에는, 진행순서상 다음 차례인 아미노산의 커플링에 필요한, 펩티드-수지의 α-아미노 그룹을 미리 차단시키지 않고 커플링 반응을 반복한다.
커플링 반응의 성공적인 완결은 문헌[참조 ; 예, E. Kaiser et al., Anal. Biochem. 34 595(1970)]에 기술된 닌하드린 반응에 의해 확인할 수 있다. 합성 반응은, 또한, 예를들면 모델 430A 펩티드 합성기(제조사 : Applied Biosystem)를 사용하여 자동적으로 수행될 수도 있으며, 기기의 제조자에 의해 제공된 합성 프로그램 또는 사용자 자신에 의해 설계된 합성 프로그램을 사용할 수 있다. Fmoc 그룹으로 보호된 아미노산 유도체를 사용하는 경우에는 특히, 후자의 방법을 사용한다.
양이온 포착제(traps)로서 페놀, 크레졸, 티오크레졸, 아니솔, 티오아니솔, 에탄디티올, 디메틸 설피드, 에틸 메틸 설피드 또는 고체상 합성에 있어서 통상적인 유사한 양이온 포착제와 같은 물질을 단독으로 또는 이들 보조제의 둘이상의 혼합물을 가함과 동시에 펩티드 합성에 통상적으로 사용되는 중등도의 강산(예 ; 트리 플루오로아세트 산)으로 처리하여 펩티드 아미드를 수지로부터 분해제거시킬 수 있다. 이와 관련하여, 예를들어, 메틸렌 클로라이드와 같은 적절한 용매로 희석된 트리플루오로아세트산을 사용할 수 있다. 측쇄 보호그룹은, 스페이서가 수지로부터 분해제거됨과 동시에 분해제거된다.
이러한 방법으로 수득된 조 펩티드를, 세파덱스(
Figure kpo00011
Sephadex)상에서의 크로마토그라피, 이온교환수지 또는 HPLC에 의해 정제한다.
하기 기술된 실시예는 본 발명을 제한함이 없이 본 발명을 예시하기 위해 제공된다.
[실시예 1]
메틸-4-(4-메톡시벤조일)페녹시아세타이트
알루미늄 클로라이드(무수) 64g을 1,2-디클로로에타 160㎖에 용해시키고, 4-메톡시벤조일클로라이드 71.6g을 가한다. 메틸페녹시아세테이트 57.6㎖를 교반하면서 천천히 적가한 다음 반응 혼합물을 50℃에서 4시간동안 가열한다. 혼합물을 빙수에 적가하며, 이때 오일이 분리된다. 수성상을 분리제거하고, 잔사를 물과 함께 교반하여 3회 추출하고 메탄올을 사용하여 결정화시킨다. 침전물을 여과하여 제거하고 에틸 아세테이트로부터 재결정화시킨다.
수득량; 94.9g(이론치의 53%)
융 점; 146℃(148℃, 에틸 아세테이트)
[실시예 2]
4-(4-메톡시벤조일)페녹시아세트산
메틸 에스테르(실시예 1) 9.0g을 1,2-디메톡시에탄/물(4 : 1, v : v) 120㎖에 용해시키고 2N NaOH 15㎖를 가한다. 혼합물을 3시간 동안 교반하고 3N HCl로 pH가 3이 되도록 조정한다. 유기용매를 진공중에서 증발시켜 제거하고 침전된 생성물을 여과하고 물로 세척하여 고진공하에서 건조시킨다.
수득량; 8.4g(이론치의 98%)
융 점; 181-182℃
[실시예 3]
(4-카복시메톡시페닐)-4-메톡시페닐카비놀
4-(4-메톡시벤조일)페녹시아세트산 11.2g을 80% 농도 메탄올 600㎖에 환류하에 용해시키고 N-메틸모르폴린 4.4㎖를 가한다. 수소화붕소나트륨 6g을 2시간에 걸쳐 조금씩 가하여 환류상태 하에서 3시간 동안 계속해서 반응시킨다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 3N HCl로 pH 2.5가 되도록 산성화 시킨다. 메탄올을 증류제거하고 에틸 아세테이트로 수성상을 추출하여 유기상을 염수로 세척하고 황산나트륨상에서 건조시킨다. 증류하여 에틸 아세테이트를 제거하면 백색의 무정형 분말이 남는다. 생성물은 다음 반응에 직접 사용된다.
수득량; 9.3g(이론치의 83%)
[실시예 4]
메틸 2메틸페녹시아세테이트
2-메틸페놀 108g을 무수 아세톤 500㎖에 용해시키고, 탄산칼륨 분말 165.8g을 가한다. 메틸 브로모 아세테이트 113㎖를 교반시킨 현탁액에 가하고, 혼합물을 수분을 제거하여 실온에서 교반시킨다. 반응이 완결된후, 염을 흡인여과하여 아세톤으로 세척하고, 여액을 농축시킨다. 잔사를 에틸 아세테이트에 용해시키고 유기상을 물로 세척하여 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축시킨다.
수득량; 즉시 추가로 더 반응시킨 오일상 액체 180g
[실시예 5]
메틸 4-(4-메톡시벤조일)-2-메틸페녹시아세테이트
무수 알루미늄 트리클로라이드 146.6g을 1,2-디클로로에탄 500㎖에 용해시킨다. 0℃에서 4-메톨시 벤조일 클로라이드 187g 및 메틸 2-메틸페녹시아세테이트 180g을 연속적으로 적가한다. 혼합물을 50℃에서 가열하여 반응을 완결시킨다. 혼합물을 얼음상에 붓고 2N HCl로 pH가 되도록 조절한다. 침전된 생성물을 흡인 여과하고 물 및 소량의 에테르로 세척한다. 소량의 활성탄을 가하면서 침전을 뜨거운 에틸 아세테이트에 용해시키고, 혼합물을 여과하여 -10℃에서 결정화시킨다. 생성물을 흡인여과하여 에테르로 세척하고 고진공하에서 건조시킨다.
수득량; 172.8g(이론치의 55%)
융 점; 92-95℃
[실시예 6]
메틸 4-(4-메톡시벤조일)-2-메틸페녹시아세테이트
4-하이드록시-3-메틸-4´-메톡시벤조페논[참조; R. Martin et al. Monatsh. Chemie 110, 1057-1066(1979)] 50g 무수 DMF 200㎖에 용해시키고, N2하에서 광유중의 55% 수소화나트륨 현탁액 9g을 조심스럽게 가한다. 이어서, 교반하면서, 메틸 브로모아세테이트 19.5㎖를 적가하고, 혼합물을 실온에서 밤새도록 정치시킨다. 침전된 염을 흡인 여과하고, 여액을 진공에서 농축시킨다. 잔사를 에틸아세테이트에 용해시키고, 용액을 중탄산나트륨 및 물로 세척한다. 유기상을 황산 마트네슘 상에서 건조시키고, 용매를 진공중에서 제거한다. 잔사를 에테르로 연마시키고 흡인여과하여 건조시킨다.
수득량; 38.9g (이론치의 60%)
융 점; 96-98℃
[실시예 7]
메틸 4-(4-메톡시벤조일)-페녹시아세테이트
4-하이드록시-4'-메톡시벤조페논[참조; R. Martin et al. Monatsh. Chemie 110, 1057-1066(1979)] 29.1g을 무수 아세톤 400㎖에 용해시킨다. 이어서 교반하면서, 미분된 K2CO319.3g 및 메틸브로모아세테이트 16㎖를 가하고 혼합물을 실온에서 교반한다. 이틀 경과후 반응이 완결된다. 염과 물질의 침전 혼합물을 흡인여과하고, 여액을 농축시킨다. 두 종류의 잔사를 물에 현탁시키고, 2N HCl로 pH가 3이 되도록 조정한다. 고형물을 흡인여과하고 물로 세척하여 고진공하에서 건조기에 건조시킨다.
수득량; 35.7g(이론치의 98%)
융 점; 143-145℃
[실시예 8]
4-(4-메톡시벤조일)-2-메틸페녹시아세테이트
메틸 4-(4-메톡시벤조일)-페녹시아세테이트 35.8g을 실온에서, 이옥산 240㎖와 0.5N NaOH 240㎖의 혼합물과 함께 교반한다. 반응을 완결시킨 후, 유기용매를 진공에서 제거하고 수성상을 2N HCl로 pH 3이 되도록 조정하고 에틸아세테이트로 추출한다. 유기상을 물로 씻어내고 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축시킨다. 담황색 결정이 남는다.
수득량; 30.2g(이론치의 83%)
융 점; 149-151℃
[실시예 9]
(4-카복시메톡시-3-메틸페닐)-4-메톡시페닐카비놀
(4-4-메톡시벤조일)-2-메틸페녹시아세트산 22.5g을 디옥산 100㎖와 물 200㎖의 혼합물에 용해시키고, 1N NaOH를 가하여 pH 9가 되도록 한다. 수소화붕소나트륨 2.8g을 교반된 용액에 조금씩 가하고 혼합물을 밤새도록 정치시킨다. 이어서 디옥산을 진공중에서 제거하고 2N HCl로 수성상을 pH 3이 되도록 조정하여 에틸 아세테이트로 추출한다. 유기상을 황산 마그네슘상에서 건조시키고 농축시킨다. 무색 거품이 남으며 이를 n-헥산으로 연마시켜 무정형 분물을 수득한후, 흡인여과한다. 생성물은 다음 반응에 그대로 사용된다.
수득량; 19.2g(이론치의 84%)
[실시예 10]
메틸 2,6-디메틸페녹시아세테이트
메틸 2,6-디메틸페놀 65g을 부수 DMF 200㎖에 용해시키고 N2하에서,광유중의 55% 수소화나트륨 현탁액 23.2g을 조금씩 가한다. 이어서, 교반하면서 메틸 브로모아세테이트 50.4㎖를 적가하고 혼합물을 밤새도록 정치시킨다. 침전된 염을 흡인여과하고 여액을 농축시킨다. 잔사를 에틸 아세테이트에 용해시키고 용액을 물로 추출한다. 유기상을 황산마그네슘상에서 건조시키고 농축시킨다. 오일상 액체가 남으며 이는 다음 반응에 그대로 사용된다.
수득량; 95.8g(이론치의 92%)
[실시예 11]
메틸 2,6-디메틸-4-(4-메톡시벤조일)페녹시아세테이트
메틸 2,6-디메틸페녹시아세테이트 19.4g을 사용하여 실시예 5와 유사한 방법으로 수행하여 상기 화합물을 합성한다.
수득량; 17.4(이론치의 54%)
[실시예 12]
(4-카복시메톡시-3,5-디메틸페닐)-4-메톡시페닐카비놀
메틸 2,6-디메틸-4-(4-메톡시벤조일)페녹시 아세테이트 16.4g을 0.5N NaOH 100㎖와 디옥산 100㎖의 혼합물중, 실온에서 교반한다. 메틸에스테르를 가수분해시키후, 수소화붕소나트륨 1.89g을 가하고 혼합물을 밤새도록 정치시켜 반응시킨다. 그다음, 소량의 불용성 물질을 흡인여과하고 여액을 농축시키고 남은 잔여수용액을 1N HCl로 산성화시킨다. 이를 에틸 아세테이트로 추출하고 유기상을 물로 세척하여 황산 마그네슘상에서 건조시키고 농축시킨다. 무정형 분말이 남으며 이는 다음 반응에 직접 사용된다.
수득량; 11.3g(이론치의 71%)
Nα-Fmoc-아미노산의 (4-카복시메톡시페닐)-4-메톡시페닐메틸아미드 및, Nα-Fmoc-아미노산의(4-카복시메톡시-3-메틸페닐)-4-메톡시페닐메틸아미드 및, Nα-Fmoc-아미노산의 (카복시메톡시-3,5-디메틸페닐)-4- 메톡시페닐메틸아미드의 일반적인 제조공정은 하기와 같다.
Nα-Fmoc-아미노산 아미드 10mmol 및 적절한 카비놀 10mmol을 필요량의 빙초산에 용해시키고 진한 황산 5 내지 10방울을 가한다. 분자체 2g을 가하고 혼합물을 밤새도록 방치하여 정치시킨다. 생성물의 일부가 침전되면 분자체를 흡인여과하고 여액을 다량의 물로 희석한다. 수성상을 에틸아세테이트로 추출하고 유기상을 물로 진탕하여 추출한다. 황산마그네슘 상에서 건조 및 농축시킨후에 남은 물질을 재결정화시킨다. 하기 화합물들은 상기 언급한 일반적인 공저에 따라 제조된다.
[실시예 13]
Nα-Fmoc-글라이신의 (4-카복시메톡시페닐)-4-메톡시페닐메틸아미드
수득량; 65%
융 점; 136-138℃
[실시예 14]
Nα-Fmoc-페닐알라닌의 (4-카복시메톡시페닐)-4-메톡시페닐메틸아미드
수득량; 65%
융 점; 159-162℃
[실시예 15]
Nα-Fmoc-글라이신의 (4-카복시메톡시-3-메틸페닐)-4-메톡시페닐메틸아미드
수득량; 60%
융 점; 135-140℃
[실시예 16]
Nα-Fmoc-발린의 (4-카복시메톡시-3-메틸페닐)-4-메톡시페닐메틸아미드
수득량; 81%
융 점; 172-175℃
[실시예 17]
Nα-Fmoc-글라이신의 (4-카복시메톡시-3,5-디메틸페닐)-4-메톡시페닐메틸아미드
수득량; 70%
융 점; 122-126℃
[실시예 18]
실시예 13에 기술된 고정제를 사용하는, 옥시토신
Figure kpo00012
의 합성
본 합성은 라보텍(Labotec)에 의해 제공된 펩티드 합성기내에서 수행한다.
우선, 메틸렌 클로라이드중 트리플루오로 아세트산을 사용하여 Boc-Val-수지(부하 0.76mmol/g) 1.5g으로부터 보호그룹을 제거한다. 수지를 디클로로 메탄 및 에닐디이소프로필아민으로 세척하고 다시 디클로로메탄으로 세척한 다음 건조시킨다. 이어서 실시예 13에서 제조된 고정제 2.1mmol을, 무수 DMF 20㎖에 용해된 HOBt 3.15mmol과 함께 수지에 가하고, 디이소프로필카보디이마이드 2.3mmol을 가한다. 혼합물을 천천히 교반하면서 밤새도록 실온에 방치시켜 반응시킨다. 닌하이드린 반응(Kaiser 시험)을 사용하여 반응이 완결되었는지 조사한다. 그다음 수지를 흡인여과하고 DMF로 세척한 다음, 이어서 하기의 단계를 주기적으로 수행하여 수지상에서 펩티드를 합성한다 :
- Fmoc 보호그룹을 DMF중의 20% 피페리딘으로 분해시키고
- DMF로 수지를 세척하고
- Fomc-아미노산을 활성화제로서 디이소프로필 카보디이마이드를 사용하여 활성화반응 단계내에서 HOBt 에스테르와 커플링(아미노산 2.1mmol, 3.15mmol, 디이소프로필카보디이마이드 2.3mmol)시키고
- DMF로 수지를 세척한다.
커플링이 불완전한 경우(Kaiser시험), 커플링 단계를 반복한다.
사용되는 측쇄 보호그룹은, 티로신에 대해서는 3급-부틸 및 시스테인에 대해서는 3급-부틸티오이다.
합성반응이 완결된 후, 우선 Fmoc 보호그룹을 절단하고, 이어서 수지를 DMF, 디클로로메탄, 이소프로판올, 디클로로메탄 및 3급-부틸에틸 에테르로 연속적으로 세척하고, 고진공하에서 건조시켜 펩티드-수지 2.4g을 수득한다. 상기 절단 반응은 실온에서, 트리플루오로아세트산/티오아니솔/에탄디티올(80/15/5)의 혼합물을 사용하여 수행한다. 2시간 경과후, 혼합물을 3급-부틸메틸에테르중에서 흡인여과하고 침전된 조펩티드를 원심분리하여 제거하고 3급-부틸메틸에테르로 3회 세척한다. 3급-부틸티오 보호그룹을, pH 7.3에서 트리풀루오로에탄올/물중의 트리부틸포스핀으로 절단시킨다. 60% 농도의 아세트산중의 요오드를 사용하여 S-H 펩티드를 폐환시키고 메탄올중, 세파텍스(
Figure kpo00013
sephadex) LH 20상에서 크로마토그라피하여 정제한다. 옥시토신 수율 33%(대조용 샘플과 동일).

Claims (9)

  1. 다음 화학식1의 화합물
    Figure kpo00014
    상기식에서, R1은 (C1-C8)-알킬 또는 치환되거나 비치환된 (C6-C|14)-아릴이고, R2는 수소이거나 약산 또는 염기에 의해 절단될 수 있는 아미노 보호 그룹에 의해 보호된 아미노산 잔기이고, R3는 수소, 또는 (C1-C4)- 알킬이고, Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8,및 Y9은 수소, (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-알콕시 또는 -O-(CH2)n-COOH이고, 이들 라디칼은 동일하거나 상이할 수 있으나 하나의 라디칼은 -O-(CH2)n-COOH이며, n은 1내지 6의 정수이다.
  2. 제1항에 있어서, R1이 메틸이고 n은 정수 1,2 또는 3인 화학식(I)의 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R2가 우레탄 보호그룹으로 보호된 아미노산 잔기이고, R3는 수소인 화학식1의 화합물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서 Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8및 Y9가 메틸 또는 메톡시이고, 이들 라디칼중 하나는 -O-(CH2)n-COOH이고, 4개 이상은 수소인 화학식1의 화합물
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 라디칼 Y1, Y3, Y4, Y7또는 Y8이 라디칼 -O-(CH2)n-COOH인 화학식1의 화합물.
  6. 화학식2의 화합물은 화학식3의 화합물과 반응시킴을 포함하는, 제1항의 화학식1의 화합물의 제조방법.
    Figure kpo00015
    상기식에서 R1은 (C1-C8)-알킬 또는 치환되거나 비치환된 (C6-C|14)-아릴이고, R2는 수소이거나 약산 또는 염기에 의해 절단될 수 있는 아미노 보호그룹에 의해 보호된 아미노산 잔기이며, R3는 수소, 또는 (C1-C4)- 알킬이며, Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8및 Y9은 수소, (C1-C4)-알킬, (C1-C|4)-알콕시 또는 -O-(CH2)n-COOH이고, n은 1내지 6의 정수이다.
  7. R2가 수소가 아닌 제1항의 화학식1 화합물을 수지에 커플링시키고, 아미노산 R2상의 보호그룹을 절단제거하고, 염기에 대해 불안정하거나 약산에 대해 불안정한 아미노보호 그룹에 의해 일시적으로 보호된 경우에 따라 활성화된 유도체 형태의 q-p α-아미노산을 단계별로 커플링시켜, 합성 반응을 종결시킨후, 중등도의 강산으로 처리하여 수지로부터 화학식11의 펩티드를 분리시키고, 상기 분리반응과 동시에 또는 이어서 적합한 방법에 의해 일시적으로 도입된 측쇄 보호 그룹을 다시 절단제거시킴을 포함하는 고체상 합성방법에 의해 하기 화학식(XI)의 펩티드를 제조하는 방법.
    P-R2-NH-R2(XI)
    상기식에서, P는 q≤p+1 α-아미노산으로 이루어진 펩티드 잔기이고, R2가 아미노산 잔기이며, R3는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이다.
  8. 다음 화학식2의 화합물.
    Figure kpo00016
    상기식에서 R1은 (C1-C8)-알킬 또는 치환되거나 (C6-C14)- 이릴이고, Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8및 Y9은 수소, (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-알콕시 또는 -O-(CH2)n-COOH이고, n은 1내지 6의 정수이다
  9. 화학식4의 화합물을 하이드록실아민과 반응시켜 화학식5의 화합물을 수득한 다음, 수득된 옥심을 아민으로 환원시킴을 포함하는 제1항의 화학식1의 화합물의 제조방법.
    Figure kpo00017
    상기식에서, R1, R2, R3, Y1내지 Y9은 제6항에서 정의된 바와 동일하다.
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