JPS61286400A - 新規ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 療剤、筋弛緩剤薯医薬として期待できる新規ペプチドに
関する。

従来の技術 高血圧症の９５チが本態性高血圧であり、その半分がＮ
ａ感受性高血圧である。この種の高血圧は、生体内Ｎａ
容量調節系によって制御されて因る可能性がある。この
Ｎａ利尿作用に関係する因子は、ＧＦＲ　（糸球体濾過
率）、アルデストロン以外に未知の液性因子（第３因子
）の存在が推定されてきた。第３因子にはＮａ　−ＫＡ
ＴＰａ　ｓ　＠１を阻害するものと阻害しないものがあ
り、これらの解明は本態性高面圧の原因解明及び治療に
画期的な新局面を開くものと期待される。

１９８３年秋より第３因子の一個（Ｎａ−ＫＡＴＰａａ
ｅ阻害能なし）で、心房より分泌されるＮａ利尿ホル°
モンの構造決定が次々に発表された。本物質は強力なＮ
ａ利尿作用と筋弛緩作用を有する。人心房より単離され
たＮａ利尿ホルモンの一種ｉｔ、ｈＡＮＰ（ｈｕｍａｎ
　ａｔｒｌａｌ　ｎａｔｒｌｕｒｅｔｌｃ　ｐｅｐｔｉ
ｄｅの略称）と呼ばれ、次の構造式を有する。

また、ラット心房より単離されたＮａ利尿ホルモンの一
種は、ｒＡＮＰ　（ｒａｔ　ａｔｒｉａｌ　ｎａｔｒｌ
ｕｒｅｔｌｃｐａｐｔｌｄｅの略称）と呼ばれ、その一
つ、α−ｒＡＮＰ［４−２８］は、次の構造式を有する
。

−８ｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＯＴ（本発明者は
新しい薬剤のリード化合物として期待されるｈＡＮＰ　
Ｋ注目し、それらの新規関連化合物を合成し、よりすぐ
れｆｒ、−８ゾチド系循環器系薬剤の開発を試みた。そ
して、その内容を特許出願するとともに、第２２回ペプ
チド討論会において「ヒト心房性ナトリウム利尿ぜプチ
ド（α−ｈＡＮＰ　）と関連ペプチドの合成」との表題
で発表した。

高血圧症の治療には、古くから降圧利尿剤が第一選択薬
剤として多用されてきた。しかるに近年、その心臓疾患
に及ぼす副作用が明らかになり、見直しが求められてい
る。より安全性が高く、確実な作用を示す新しい薬剤の
開発が、臨床現場より強く求められている。

ｈ　ＡＮＰげ、内因性物質であり、また、−ξプチドで
もあり、その安全性は極めて高いと推定される。

しかるに、一方ではペプチドであるが故に、Ｋプチター
ゼによる分解、短い作用時間、不安定な物性等々そのま
ま薬剤として開発するには多くの問題点も考えられる。

本発明者は、先に開発した４プチドに加えて、その少な
くとも一つのアミノ酸残基がＤ一体であってもこの４デ
チドがやはり利尿剤、高血圧症治療剤、心臓病治療剤、
筋弛緩剤等の医薬として期待できることを確認するとと
もに９番目のグリシンがアラニンであってもあるいは欠
如していてもやはり同様の薬効が期待できることを見出
して本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、一般式 で示される新規ペプチドに関するものである。ただし、
式中、 リン酸残基を、ＺはＧｕｙまたはＡｌａを、ｍ、ｎ、ｐ
は０または１を、 −Ａｒｇ−８ｅｒ−８ｅｒを、 ＢはＡｓｎ　、　Ａｓｎ−８ｅｒ　、　Ａｓｎ−８ｅｒ
−Ｐｈｅ　、　ＡＡｓｎ−８ｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｒまたは
Ａｓｎ−８Ａｓｎ−８ｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｒを、それぞれ
表わし、ｈＡＮＰを含むものは除外される。

各アミノ酸残基はＬ一体であってもよく、Ｄ一体であっ
てもよい。

Ｄ一体アミノ酸残基の数及びぜデチド（τおける位置は
問わ力いが、Ｄ一体アミノ酸残基を含む場合には通常は
１個ないし数個程邸である。

この一般式で表わされるペプチドのなかには一般式 で示されるペプチドが含まれる。ただし、式中、２はＧ
ｌｙまたはＡｌｍを、ｐはＯまたは１を、ＢはＡａｎ−
８ｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ　またはＡｓｎ−８Ａｓｎ−８
ｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｒを、それぞれ表わす。

本発明のペプチドの具体例は次の如くである。

−ＯＨ［α−ｈＡＮＰｔ７−２７）ＩＦＡｒｇ−Ｔｙｒ
−ＯＨ［（ｒ）−Ａｌａ９）α−ｈＡＮＰ（７−２８）
］−（）Ｈ［（ｄｅａＧＩｙ９）α−ｈＡＮＰ（７−２
８）］これらのなかでは薬理作用等の点で　α−ｈ　Ａ
ＮＰ（７−２７）、（ｒ′）４１ａ　）α−ｂＡＮｐ（
７−２８）及び（Ｌ−Ａｌａ　）α−ｂＡＮＰ（７−２
８）　　が特に好ましい。

本発明のペプチドにお−て、アミノ基、カル？キシル基
、水酸基、グアニジル基等官能基を有する場合ペプチド
合成化学上慣用される保護基によりその官能基のすべて
またけ一部が保護されていてもよく、これらも本発明の
ペプチドに含唸れる。

保護基による保護方法、保護している保護基の脱離方法
は４プチド合成上慣用されている手段を採用すればよい
。

本発明のペプチドは、ナトリウム、カリウム、リチウム
、カルシウム等の金属塩、有機塩基による塩の形態であ
ってもよい。有機塩基としては、アンモニア（アンモニ
ウム塩）、ジシクロヘキシルアミン等のアミンや塩基性
アミノ酸、例えはリジン、アルギニンを採用することが
できる。

また、本発明のペプチドは塩酸、硫酸、リン酸等の鉱酸
、あるいは酢酸、マレイン酸等の有機酸との塩の形態で
あってもよい。

もちろん、本発明のペプチドを利尿剤等の医薬に使用す
るときは、遊離形または医薬的に許容し得る塩あるいは
保護基を有するものは無毒性が要求される。

本発明のペプチドは後述の実施例に基づき、さらに被プ
チト９合成において常用されている方法や公知文献、沙
１１えは赤堀ら共編タンノ’？り質化学１アミノ酸・ペ
プチド、井守出版（昭和４４年）を利用して製造するこ
とができる。

作用 後述の実施例からも明らかな如く、本発明のペプチドが
利尿剤、心臓病治療剤等循環器系薬剤としての使用が期
待できる。

本願明細書において使用される略称、略号の意義は次の
如くである。

１、アミノ酸残基について、 Ｐｈ８：フェニルアラニン、Ｇｌｙ；グリシン、Ａｒｇ
　：アルギニン、Ａｓｐ　：アスパラギン酸、Ｔｌｅ：
インロイシン、Ａｌａ　：アラニン、Ｇｌｎ　：グルタ
ミン、Ｓｅｒ　：セリン、Ｌｅｕ　：　０イシン、Ｍｅ
ｔ：メチオニン、Ｃｙｓ　ニジスティン、Ａｓｎ　：ア
スパラギン、Ｔｙｒ　：チロシン、Ｃｙｓ−己Ｓ：シス
チン２保睦基について、 Ｂｏａ　：　ｔ−ブチルオキシカルがニル、ｚ：ペンジ
ルオキシカルボニル、４−　ＣＨ３ＢＺ１　：　ｐ−メ
チルベンジル、Ｂｚｌ　：ペンジル、Ｔｏｓ　：　）シ
ル、Ｃｌ２Ｂｚｌ　：　２．６−ジクロルベンジル、Ｅ
ｔ：エチノペＭｅ：メチル、Ｐａｃ　：フェナシル、Ｓ
ｕニスクシイミド、Ｃｈｘニジクロヘキシル ３、試薬について、 ＤＭＦ　ニジメチルホルムアミド、Ａｃ０Ｅｔ　：酢酸
エチル、ＴＦＡニトリフルオロ酢酸、Ｅｔ２０：エーテ
ル、ＨＯＢｔ　：　１−ハイドロキシベンゾトリアゾー
ル、ＣＨ２Ｃｌ２ニジクロルメタン、ＷＳＣＩ　：水溶
性カルボジイミド、ＡｃＯＨ：酢酸、ＨＣＩ：塩化水素
または塩酸、ＮａＨＣｏ　５：重曹、ｎ−ｈｅｘａｎｅ
　：　ｎ　−ヘキサン、ＴｓＯＨ：　ｐ−トルエンスル
ホン酸、ＨＦ：フッ化水素、ＮａＯＨ：水酸化ナトリウ
ム、ＮＥｔ３：　トリエチルアミン、ＭｇＳＯ４：　（
ｒ＆酸マグネシウム、ＭｅＯＨ：メタノール、ＣＨＣｌ
３：クロロホルム、ＮＭＰ　：　Ｎ　−メチル２−ピロ
リドン、Ｐ２Ｏ５：五酸化リン、Ｎａ２ＳＯ４：硫酸ナ
トリウム 実施例 以下、実施例により本発明の詳細な説明する。

実絢例１ α−ｈＡＮＰ（７−２７）の合成 Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−８ｅｒ−Ｐ
ｈｅ−Ａｒｇ−ＯＢｚｌ７２４１１ｕ　（０，２５ｍＭ
　）をＴＦ’Ａ　１０−で冷却１０分、室温で４０分処
理した。５．９　Ｎ−ＨＣｌ　／ジオキサン０．２ｍ１
（５倍モル）添加し、溶媒及び過剰の酸を留去した。残
渣にｐＨ２０を加えて析出した粉末を戸数し、水酸化ナ
トリウム上で一夜減圧乾燥した。

ＭｅＢｚ１ 上記粉末をＢｏａ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−
ＯＨ１５４ｍ９（１，０５倍モル）、ＨＯＢｔ　３７■
（１，１倍モル）とともにＮＭＰ　１０　ｍｌに溶解し
、冷却下に、ＷＳＣｌ　５０μ＃（１，１倍モル）を滴
下し一夜攪拌した。

翌日、寒天化した溶液のフルオロレスカミンテストは陰
性であった。

この溶液に水を加え、寒犬状をつき砕いてｐ取した。こ
れを水洗し、続いてｎ−ヘキサレ、Ｅｔ２０で洗浄し、
乾燥した。Ｔ）ＭＦに懸濁後Ｍｅ　ＯＨを加えでつき砕
き、Ｐ増援Ｐ２Ｏ５上で乾燥して保護基の結合している
未環化のＡＮＰ（７−２７）　７３５■（８７４係）を
得た。

加水分解物のアミノ酸分析 （６Ｎ−ＨＣｌ　、　１０８℃、２２時間、フェノール
添加）Ａｒｇ　Ｏ，９７Ｘ３　、Ａ＋＋ｐ　Ｏ，９９Ｘ
２　、　Ｓｅｒ　（１，８７Ｘ２　。

Ｇｌｕ　１．０２　、　Ｇｌｙ　Ｏ，９９ｘ２　、　Ａ
ｌａ　１．０２　、　Ｃｙａ　（１３４Ｘ２゜Ｍｅｔ　
Ｏ，７２、ＩＩ＠（１，９２、Ｌｅｕ　１．００　、　
Ｐｈｅ　（１，９７Ｘ２元累分析ＣＨＯＮＳ・１．５Ｈ
２（＞ ＣＨＮ 理論値　５７，０２　６．３９　　１３．２２実測値　
５７．０３　６３８　１３．０８上記の保護基を有する
ペプチド４３７ｒｎ？（０，１３ｍＭ）をＴＦＡ　５−
で６０分間処理し、５Ｎ　ＨＣ１／ジオキサン０．１−
を加えた後溶媒を留去した。残渣にｐＨ２０を加えて析
出した粉末をｐ取し、ＮａＯＨ上で一夜乾燥した。この
粉末をアニソール１．２５ｍ／ｉ在下ＨＦ１ｔｄで−２
〜−１℃、６０分間処理し、Ａ剰のＨＦを留去した。３
０　％　ＡｃＯＨに溶かし、ｐＨ２０で３回洗浄後Ｔ’
）ｏｖｔｅｘ　Ｉ　Ｘ２　（Ａｃ０−型Ｃａ４５ｍｊり
を素通りさせた。ｌＮＡｃ０ＴＴで溶出してパクリ試験
陽性画分を集め凍結乾燥した。得られた２ＳＨ体全常法
通り環化させ粗製ジスルフィド体とした。このもの’ｆ
−（１，（１５Ｍ　（ｐＨ４，７）→０．４５　Ｍ　（
Ｐ”　４．８　）　Ｉ’Ｊｒ（４０Ａｃでｉ　出ｆるＣ
Ｍ−セルロースカラムによる精製０→２３Ｔｏ　ＣＴ（
ｓ　ＣＮ　／　５４　Ａ　ｃ　ＯＨで溶出するＨＰ−２
０カラムによる精製及び（１，５ＮＡｅＯＨで溶出する
セファデックスＬＨ−２０カラムによる枡製で精製し目
的物２９■を得た。

アミノ酸分析（６ＮＨＣｔ、　１０８℃、　２２．５　
ｈ　）Ａｒｇ　　１．０４Ｘ３　、Ａｓｐ　　１．００
Ｘ２　、Ｓｅｒ　　Ｏ，９０Ｘ２　、ＧｌｕＯ，９７、
Ｇｌｙ　　１．００Ｘ５　、　Ａｌａ　　１．（ｌ　Ｏ
、Ｃｙｓ　　Ｏ，８７Ｘ２　、　ＭｅｔＯ，８６、Ｉｌ
ｅ　　（１，９５、Ｌｅｕ　　Ｏ，９７、Ｐｈｅ　　１
．００Ｘ２元素分析Ｃ９１Ｈ１４４０２８Ｎ３２Ｓ３・
２ＡｃＯＨ・８Ｈ２０ＣＨＮ 計ａ−値　４６．２３　６．７４　１８．１６実測値　
４６．３７　６６９　１８．００実施例２ ［ＤＡ１ｍ’］ＡＮＰ（７−２８）の合成（１）　Ｂｏ
ａ−Ｄ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＢｚｌの合成りｐｅ−Ｄ−
Ａｌａ−ＯＨ５，６８１（３０ｍＭ）及びＨ−Ｇｌｙ−
ＯＢｚｌ・ＴｏａＯＴ（１（１，６１／　（１，０５ｅ
ｑ）をＣｌｌ２Ｃｔ２４ｏ−に懸濁し、冷却下ＷＳＣＩ
’　６ｍｌ　（１，１ｅｑ）を滴下して一夜攪拌した。

ＣＨ２Ｃｌ２を留去後ＡｅＯＥｔ　５００−に溶かし、
ｌＮＨＣｌ。

Ｈ２Ｏ，５’ｌＮａＨＣＯ３，Ｈ２ＯＴ順に洗浄してＮ
ａ２ＳＯ４Ｔ乾燥した。Ａｃ０Ｅｔを留去後Ａｃ０Ｅｔ
　／　ｎ−ｈｅｘａｎｅから２回結晶化し、目的物９．
１６．１９（１，７％）を得た。

（２）　Ｈｏｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＢｚ
ｌの合成りｏｅ−Ｄ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＢｚｌ　３．
３６　、！ｉ’　（１０ｍＭ）をＴＦＡＩＯ−で冷却下
１０分間、室温で３０分間攪拌した。

５．０ＮＨＣｔ／ジオキザン２．４ｍ（１，２ｅｑ）を
加えた後溶媒を留去し、ｐＨ２０−ｎ−ｈａｘａｎｅで
油状とし、傾瀉後ＮａＯＨ上で３時間乾燥した。これを
Ｂｏａ−Ｐｈｅ２．６５ｇ（１ｅｑ）　、ＨＯＢｔ　１
．４２Ｊｉ’（１，０５ｅｑ）と共にＤＭＦ’１２ゴに
溶かし、冷却下ＷＳＣＩ　１．９２１ｄ　（１，０５ｅ
ｑ）を滴下して一夜攪拌した。Ａｃ０Ｅｔ　１５０ｔｎ
ｔを加え、ｌＮＨＣｌ、　Ｈ２Ｏ，５４ＮａＨＣＯ３，
Ｈ２Ｏで順に洗浄し、Ｎａ　２　Ｓ　０４で乾燥した。

Ａｃ０Ｅｔを留去後、ＡｅＯＥｔＡ２ｔ　２０　。

Ｍｅ　ＯＨ／’Ｅ　ｔ　２０から結晶化し目的物２．５
７＃を得た。

（３）　Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ｒ）−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＨ
の合成りｏｃ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＢｚｌ
　２．４　ｇ（４，９６ｍＭ）をＭｅＯＴｆ　５０　ｍ
ｌ　Ｋ　ｌｆ’ｊかし、Ｐｄ−ｃ存在下Ｈ２ガスを４時
間通じた。Ｐｄ−Ｃをｐ別ｐ　ＭｅＯｒ（を留去し、Ｍ
ｅＯＨ／Ｅｔ２０・ｎ−ｈｅｘａｎｅを加えて析出した
粉末をＰ取し、Ａｃ０Ｅｔ／ｎ−ｈｅｘａｎｅから再沈
し、目的物１．９５ｇ（はぼ］］０係）を得た。

”　　４ＭｅＢｚ１ Ｚ−Ｃｙａ−Ｐｈｅ−ｒ）−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＨの合
成りｏｃ−ｐｈｅ−ｒ）−Ａｌａ−Ｃ１ｙ−ＯＨ］、　
５８　ｇ（４ｍＭ）をＴＦＡｌｏｍｌで冷却下１０分間
室潟で３０分間処理し、過剰のＴＦＡを留去した。ＥＬ
２ｏを加えて粉末とし、ｐ増援Ｎａ１ｌ　Ｊ：で６時間
乾燥した。ＤＭＦ　５　ｄ　−ＮＭＰ３０ｍｌの混合液
ＶＣ懸濁し、冷却下ＮＥｔ、　０．５６−を加えた。次
いで、Ｚ−Ｃｙｓ（４−ＭｅＢｚｌ　）−０Ｓｕ　２　
、！／　（１，１ｅｑ）を加え、−夜攪拌した。透明な
溶液（フルオロレスカミンテスト陰＋ｔ）を希Ｈｃｌ水
溶液中に注いで粉末とし、Ｆ取後、Ｈ２Ｏ，ｎ−ｈｅｘ
ａｎａで洗浄した。Ｍｅ　０Ｔ（−ＣＩＩＣＺ　５混合
液に溶かしトルエンフラッシュ後Ａｃ０Ｅｔ／／ＦＪｔ
２０．　ｎ−ｈｅｘａｎｅから２凹粉末化し、目的物１
．８６．９（７２，４％）を得た。

アミノ酸分析（６ＮＨＣｔ／ＰｈｏＨ、１０８℃、２２
．５ｈ）Ｇｌｙ　１１．９９　、　Ａｌａ　　１．００
　、　Ｃｙｓ小ピーク、　Ｐｈｅ　　１．００元素分析
　Ｃ，３Ｔ（５８０，Ｎ４Ｓ　−Ａ　Ｈ２０ＣＨＮ 計算値　ｆｉ２，００　６．０７　８．７６実測値　６
１，８８　６，０４　　９．０３（５）保護ＣＤ−Ａｌ
ａ９］ＡＮＰ（７−２８）の合成６４４１Ｖ（（１，２
ｍＭ）をＴＦＡ　５−で冷却下１０分間、室温で５０分
間処理した。５．０　Ｎ　Ｉ（Ｃｔ／ジオキサン０１−
を加えた後溶媒を留去し、残渣にＥｔ２０を加えて粉末
とした。Ｐ増援ＮａＯＨ上で一夜乾燥した。

ＭｅＢｚｌ 曇 これをＺ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＨ
１３３ｍｚ　（１，０５ｅｑ）。

ＨＯＢｔ　３０■（１，１ｅｑ）　ト共［ＮＭＰ８−に
溶カＬ、、冷却下ＷＳＣＴ　４１　ｌｉｅ　（１，１ｅ
ｑ）を加えて６時間攪拌した。寒天化した溶液（フルオ
ロレスカミンテスト陰性）ｖＣＨ２０を加え、つき砕い
て戸数後、Ｈ２Ｏ。

ｎ−ｈｅｘａｎｅ　、　Ｅｔ２０．　ＭｅＯＨの順で洗
浄して乾燥した。

ＤＭＦ　Ｋ懸濁後ＭｅＯＨを加えてつき砕いてＰをした
。

これをＭｅＯｆＴで洗い、目的物６４０■（８５，７％
　）を得た。

アミノ酸分析（６ＮＴ（Ｃｔ／ＰｈｏＩ（、１０８℃、
　２２ｈ　ＩＡｒｇ　１．０１Ｘ３　、　Ａｓｐ　１．
（ｌＯＸ２　、　Ｓｅｔ　（１，８９Ｘ２　、　Ｇｌｕ
ｌ、０１　　、Ｇｌｙ　　１．００Ｘ４　、Ａｌａ　　
１．００Ｘ２　、Ｃｙ８小ピーク。

Ｍｅｔ、　　０．６４　　、Ｔｉｅ　　Ｏ，９６，Ｌｅ
ｕ　　（１，９９，Ｔｙｒ　　（１，８６゜Ｐｈｅ　Ｏ
，９８Ｘ２ 元素分析　Ｃ５８，■２２５０３８Ｎ５６Ｓ６Ｃ１２・
２Ｈ２０ＣＨＮ 計算値　５７，６６　６．１２　１２．２６実６１１（
ｆ＃　　　　５７６２　　　　６１０　　　　１２．０
３１．２５ｍ１存在下ＨＦ’　７−で−１”Ｃ、６０分
間処理した。

過剰のＨＦを留去後、Ｉ　ＮＡｃ０’Ｈ−ＡｅＯＨ混合
液に溶か踵Ｅｔ２０で３回洗浄後ＤｏｗｅｘｌＸ２（Ａ
ｃＯθ、Ｃａ５（Ｊｍ／）を素通りさせ（ＩＮＡｃＯＨ
溶出）凍結乾燥した。得られた２ＳＨ体を常法通り環化
し、粗製ジスルフィド体とした。このものを０．０５　
Ｍ　（ｐ１４４．７　）→０５Ｍ（ｐＩ（４，８）　Ｎ
Ｈ４０Ａｃで溶出するＣＭ−セルロースカラム、　０　
→２８４　ＣＨ３ＣＮ１５％Ａｃ　ＯＨで溶出するＨＰ
−２０カラム及び０．５ＮＡｅＯＨで溶出するセファデ
ックスＬＨ−２０カラムで精製し目的物２３■を得た。

アミノ酸分析（６ＮＨＣ１，１０８℃、２２ｈ）Ａｒｇ
　１．０ＯＸ３　、　Ａｍｐ　１．０２Ｘ２　、　Ｓｅ
ｒ　Ｏ，９２Ｘ２　、　Ｇｌｕｌ、００　、　Ｇｌｙ　
１．０３Ｘ４　、　Ａｌｍ　１．００Ｘ２　、　Ｃ３Ｆ
！＋　（１，８２Ｘ２　。

Ｒｂｔ　Ｏ，８３，１１ａ　Ｏ，９５，Ｌ＠ｕ　Ｏ，９
９，Ｔｙｒ　Ｏ，９５、Ｐｈｅｌ、０２Ｘ２ 元素分析　Ｃ，。、Ｈ，，５０，６Ｍ５．Ｓ３’　２Ａ
ｃＯＨ・１１Ｈ，、ＯＣＩＮ 理論値　４６゜２６　６．８４　１６．９６実測値　４
６．４１　６．７５　１６．７３実施例３ ［ｄｅａ　Ｇｌｙ　ＩＡＮＰ（７−２８）の合成（１）
　Ｂｏａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＢｚｌの合成りｏａ−Ｐ
ｈｅ−ＯＨ７９，６、！ｉ’　（０，３Ｍ　）　、　Ｇ
ｌｙ−ＯＢｚｌ−ＴｏｓＯＨ１１１、！ｉ’（１，１ｅ
ｑ）、ＨＯＢｔ４４．６．！ｉ’（１，１ｅｑ）をＤＭ
’Ｆ３００＋＋＋７！に溶かし、冷却下ｗＳ（Ｊ　６　
ｎ、４　ｍｌ　（１，１ｅｑ）を滴下し、−夜攪拌した
。ＤＭＦを留去後ＣＨＣｌ３に溶かし、５．Ｘ１ＮａＴ
（Ｃ１３，１（Ｌ％Ｎａ２ＣＯ３，Ｈ２Ｏ，ＩＮＨ’Ｃ
７゜Ｈ２Ｏで洗浄しＭｇＳＯ４で乾燥した。ＣＨＣｌ、
、を留去後Ｅｔ２０を加え粉末化し、Ａ　ｃ　ＯＥ　ｔ
　／Ｅ　ｔ　２０から２回再結晶し目的物５９ｇを得た
。

（２）　Ｂｏａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−０）Ｔの合成りｏａ
−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＢｚｌ　６．２１　（１５ｍＭ）
をＭｅＯＨ８０ｍ／−ＡｃＯＨ混合ｉ＃３０−に懸濁［
７、Ｐｄ−Ｃ存在下Ｈ２ガスを４時間連じた。ｐｄ−ｃ
　ｐ別後、溶媒を留去し、Ａｃ０Ｅｔ／ｎ−ｈｅｘａｎ
ａから２回結晶化して目的物４４９、！ｉ’（９２，８
係）を得た。

（３）４−ＭａＢｚ＋ ― Ｚ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨの合成りｏａ−Ｐｈ
ｅ−Ｇｌｙ−ＯＨ１，２９１１（４ｍＭ）をＴＩ”Ａ　
１０　ｄで冷却下１（）分間、室温で２５分間処理し、
ＴＦＡを留去した。これをＥｔ２０−　ｎ−ｈｅｘａｎ
ｅ混合液で粉末化し、ｐ増援ＮａＯＨ上２，５時間乾燥
した。ＤＭＦ’　９−に溶かし、冷却下ＮＥｔ３で中和
した。これにＺ−Ｃｙｓ（４−ＭｓＢｚ＋）−０−８ｕ
　２．１　！ｌ　（１，１５ｅｑ）を加え２０時間攪拌
した。Ａｃ０Ｅｔ　５０−を加え、ＩＮＨＣ７，Ｈ２Ｏ
で洗浄後Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。Ａｃ０Ｅｔを留去し
、Ａｃ０Ｅｔ、　ＭｅＯＨ，Ｅｔ２（Ｌ　ｎ−ｈｅｘａ
ｎｅから２回粉末化し、目的物１．５　ｇ（６６，７係
）を得た。

アミノ酸分析　（６ＮＨＣｌ／ＰｈＯＨ，１０８℃、２
２ｈ）Ｇｌｙ　　１．００　、Ｃｙａ小ピーク、　Ｐｈ
ｅ　　Ｏ，９９元素分析　Ｃ３ｏＨ３３０６Ｎ３Ｓ ＣＨＮ 理論値　６３．９２　　５，９０　７．４５実測値　６
３，８９　６，０５　７．４６（４）保護［ｄｓ＋ｓ　
Ｇｌｙ’］ＡＮＰ（７−２８）の合成６４４　Ｗ　（０
，２ｍＭ）をＴＦＡ　５−で冷却下１０分間。

室温で４０分間処理し、５．０ＮＨＣ１／ジオキザン０
１−を加えた後溶媒を留去した。これにＥｔ２０を加え
て粉末化しｐＷｊｌ後Ｎ＠ＯＨ上で一夜乾燥した。

）ＴＯＲｔ　３０　ｍ’？　（１，１ｅｑ）と共にＮＭ
Ｐ　８−に溶かし、冷却下ＷＳＣＴ　４１μｂ　（１，
１ｓｑ）を加えて一夜攪拌した。

寒天化した溶液（フルオロレスカミンテスト陰性）にＨ
２Ｏを加えてつき砕き、戸数後Ｈ２０，Ｅｔ２０で洗浄
した。ＤＭＦに懸濁し、ＭｅＯＨでつき砕いた後戸数し
てＭｅＯＨで洗い、目的物６４０■（８７，３１を得た
。

アミノ酸分析　（６ＮＴ（Ｃ１／ＰｈＯＨ、１０Ｂ”Ｃ
，、２２ｈ　）Ａｒｇ　１．００Ｘ３　、　Ａｓｐ　１
．００Ｘ２　、　Ｓｅｒ　０．９０Ｘ２　。

Ｇｌｕ　　１．（１５、Ｇｌｙ　　１．００Ｘ４　、Ａ
ｌａ　　１．００　。

Ｃｙｓ小ピーク、Ｍｅｔ　（１，５８、Ｉｌｅ　　（１
，９７、Ｌｅｕ　　１．０１　。

Ｔｙｒ　＋１．８０　、　Ｐｈｅ　Ｏ，９５Ｘ　２元素
分析　Ｃ１７８Ｈ２２００５７Ｎ３２Ｓ６Ｃ１２°３Ｈ
２０計嘗値　５７．５１　　６．１３　１２．（１６実
測値　５７．７２　６．４６　１１．６４（５）　［ｄ
ｅｓＧＩｙ９］ＡＮＰ（７−２８）の合成保１ｉＩ−！
！プチド４７６ｍ９（（１，１３ｍＭ）をアニソール１
．２５−存在下ＨＦ７ｍｅで一１℃６０分間処理した。

過剰のＨＦを留去後、Ｉ　ＮＡａＯＨ−ＡｃＯＨ混合液
に溶かしＥｔ２０で３回洗浄後Ｄｏｗｓｘ　Ｉ　Ｘ２　
（Ａｃｔ”）、　Ｃａ　５　（Ｌ７）を素通りさせ（Ｉ
ＮＡｃＯＨ溶出）凍結乾燥した。得られた２ＳＨ体を常
法通り環化し、粗製ジスルフィド体とした。このものを
０．０５　Ｍ　（ｐｉ（４，７）→０．５Ｍ（ｐＨ４，
８）　ＮＨ４０Ａ　ｃで溶出するＣＭ−セルロースカラ
ム、０→２７％ＣＨ３ＣＮ１５係Ａｃ０Ｔ（で溶出する
ＨＰ　−２０カラム及びｌＮＡｃＯＨで溶出するセファ
デックスＬＨ−２０カラムで精製し、目的物３０．７■
を得た。

アミノ酸分析　（６Ｎ１４Ｃｔ、　１０８℃、２２ｈ）
Ａｒｇ　１．０１Ｘ３　、Ａｓｐ　１．００Ｘ２　、　
Ｓｏｒ　Ｏ，９０Ｘ２　。

Ｇｌｕ　Ｏ，９７、Ｇｌｙ　１．０ＩＸ４　、ＡＬａ　
１．０１　、ＣｙｓＯ，８６Ｘ２　、Ｍｅｔ　ｎ、８１
　、　ＩＩｓ　（１９４、Ｌｅｕ　Ｏ，９９。

Ｔｙｒ　Ｏ，９５、Ｐｈｅ　１．０１Ｘ２　。

元素分析　Ｃ２８Ｈ，５００２９Ｎ５２８３　’　２Ａ
ｃＯＨ’　１０Ｈ２０計算値　４６．４６　６．８０　
　１７．００実測値　４６．２１　６．５８　１６．８
６実施例４ ［Ｄ−Ａｓｐ１６］α−ｈＡＮＰ（７−２８）の合成ｏ
ｓ Ｂｏｃ−Ａｒｇ４１ｅ−Ｇｌｙ−ＯＰａｃ　１　、！？
　（１，３９ｍＭ）　Ｋ　ＴＦＡｌ（１ｍｌを加え５０
分攪拌した。ＴＦＡを留去し残渣ＶＣ５，９Ｎ−ＨＣ１
／ジオキサン０．３５ｍｌ　（２，１ｍＲ４）を加えよ
く攪拌［７たのちＥｔ２０を加えた。析出した沈澱をＦ
取し幹［保接、沈＃ｆ　ＤＮＦ　８　ｍｌ　Ｋ　溶かし
、−１５℃冷却下ＨＯＨｔ　２１６　Ｆ’　（１，６ｍ
Ｍ）　、　　　　□Ｂｚ１Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｓｐ−ＯＨ ５１７ＴｒＱ　（１，６ｍＭ３．ＷＳＣＩ　Ｏ２９ｍｅ
　（１，６ｍＭ）を加えた。

３時間で反応は終了したので１ｙ応ｆＰＩにＲ２０を加
えた。析出した沈澱をＰ増援ＭｅＯＨ−Ｅｔ２（’）で
再沈澱した。取計１．１．９（８６，６％） ＴＦＡ　Ｉ　Ｏｄを加え５０分間攪拌した。ＴＦＡを留
去し、残渣に５．９　Ｎ−ＨＣｌ／ジオキザン０．２８
　ｍｌ　（１，６２ｍＭ）を加え、よく攪拌したのちＥ
ｔ２０を加えた。析出した沈澱をＰ増し乾燥後、沈澱を
Ｄｈ伊１０ｔｎｅに溶かし一１５℃冷却下）（ＯＢｔ　
１６２ｍＱ　（１，２ｍＭ）、Ｂｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ２
９９之（１，２ｍＭ）　、ＷＳＣＩ　（１，２２ｒｄ　
（１，２ｍＭ）を加えた。

５時間攪拌したのち反応液にＩ■２０を加え、析出した
沈澱をｐ液抜Ｍａ　０Ｈ−Ｅ　ｔ　２０で再沈澱した。

収量９６０■（８４，２係） ｍＭ）にＴＦＡ　５−を加え５０分攪拌した。ＴＦＡを
留去し、残渣に５．９Ｎ−ＨＣ１／ジオキサン０．２２
ｍ（１，３ｍＭ）を加えよく攪拌したのちＥｔ２０を加
えた。析出した沈澱を１取し乾燥後、沈澱をＤＭＦ１０
ｍＫ溶かし一１５℃冷却下、ＨＯＢｔ　１４９ｍ９（１
，１ｍＭ）　。

を加えた。３時間後、反応液ＶＣＨ２０を加え、析出し
た沈澱をＰｕｖ後、Ｍｅ　ＯＨ−Ｅｔ　２０で再沈澱し
た。収ｔ７５０ｍＱ（６４，７ｑＡ） Ｉ　１　ｅ　−Ｇｌ　ｙ−ＯＰａｃの合成（（１，４８
ｍＭ）にＴＦＡ　５−を加え５０分攪拌した。

ＴＦＡ　ｆ留去し残渣に５Ｎ−ＨＣＩ　／ジオキサン０
．１４ｍ１（０，７２ｍＭ）を加えよく攪拌したのちＥ
ｔ２０を加えた。析出した沈澱をＰをし乾燥後、沈澱を
ＤＭＦ　５−に溶かし一１５℃冷却下ＨＯＢｔ　７２　
ｍ’ｉ　（０，５３ｍＭ）　。

４−ＣＨ３Ｂｚ　１ Ｈｏｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ３１１
ｒＩＱ　（０，５３ｍＭ　）　、ＷＳＣＩｏ、　１　ｍ
ｌ（（１，５３ｍＭ）を加えた。４時間後反応液にＲ２
０を加え、析出した沈澱をｐ増援、沈澱をＭｅ　ＯＨで
再沈澱した。収積７２０■（８１，９％）−Ｇｌｙ−Ｏ
Ｈの合成 Ｇｌｙ−ＯＰａｅ　６９０ｒｒＱ（（１，３７ｍＭ）を
ＡｃＯＨ４（１−に溶がし亜鉛末１１１を加え４５℃で
１時間攪拌した。

Ｚｎ末をｐ去し、ＡｃＯＨを留去したのち残渣にＲ２゜
を加え、析出した沈澱をｐ増援、沈澱をＭｅＯＨで再結
晶した。収量５００即（７８９係）（６）保瞳（Ｄ−Ａ
ｓｐ１３）−α−ｈＡＮＰ（７−２８）を加え５０分間
攪拌した。ＴＦＡを留去し残渣に５．　ＯＮ−）ＩＣ７
／ジオキサ７３０　ｐｉ　（０，１３ｍＭ）を加えよく
攪拌したのちＥｔ２０を加えた。析出した沈澱を戸数し
乾燥後、沈澱をＮＭＰ　８−に溶かし、−１５℃冷却下
、ＨＯＲｔ　１３．５〜９　（０，１ｍＭ）。

Ｇｌｙ−ＯＴ（１６０ｋ２　（＋１．１　ｍＭ）を加え
た。１６時間攪拌したのち反応液にＨ２Ｏを加え、析出
した沈澱をｐ聖徒、沈澱をＭｅＯＴ（で２回環流した。

収量２８０ｍｇ（９４，５係） （７）　　（Ｔ）−Ａｓｐ”）−α−ｈＡＮＰ（７−２
８）の合成保護（Ｄ−Ａｓｐ　）−α−ｈＡＮＰ（７−
２８）　２７０ｍ９　（０，０７３ｍＭ）にＴＦＡ　５
　ｍｌを加え５０分間攪拌した。ＴＦＡを留去したのち
、残渣にＥｔ２０を加え、析出した沈澱を沢液抜ＮａＯ
Ｈ上デシケーター内にて１６時間乾燥した。

沈澱にアニソール０．５−、Ｔ（Ｆ’５−を加え一１℃
で６０分反応させた。ＨＦ留去後残渣にＥｔ２０を加え
析出した沈澱を２Ｎ−ＡｃＯＨで抽出した。Ｅｔ２０で
洗浄しＤｏｗｅｘ　Ｉ　Ｘ２　（Ａｃｔ−）カラムに通
した後凍結乾燥した。得られた粉末全量を８ｍ７！のｌ
Ｎ−Ａｃ０’Ｈに溶かしこの溶液を７２　ｍｌ　Ｉ　Ｍ
　ＮＨ４０Ａｃ　／　８　Ｍ尿素とに３Ｆｅ（ＣＮ）６
３４ｒｎ９’　（０，１０２ｍＭ）の溶液に滴下した。

この際反応液は１０係ＮＨ４ＯＨでｐｉ（を７，４に調
整した。２０分で滴下を終了したのち反応液にＡｃＯＨ
を加え〆１４５にした。次いで、ＴＲＡ−４５（ｃｚ−
）カラム５０−に通しＩＮ−ＡａＯＨで洗浄した。洗液
をｒ）ＴＡＴＯＮ　Ｔ（Ｐ−２（１カラムで脱塩したの
ち凍結乾燥した。得られた粉末全量をｏ、　０５　Ｍ　
ＮＨｎＯＡｅ　（ｐＨ５）　５００−からｏ、４　Ｍ　
ＮＴ（４０Ａｃ（ｐ）１６）５ｏｏ−のグラジェントの
ＣＭＣによるクロマトグラフィーで精製した。フラクシ
ョン３５−４２を集め凍結乾燥後ついでＤＩＡＩＯＮ　
Ｔ（Ｐ−２０カラム（５％　〜２５４　ＣＨｓ　ＣＮ　
／　５　％　Ａ　ｃＯＨで溶出）で精製した。

フラクシヨン７５−８７を集め凍結乾燥後粉末をｌＮ−
ＡｃＯＨに溶かしＤｏｖｉｅｘ　Ｉ　Ｘ２　（Ａｃｔ−
）カラムに通したのち凍結乾燥した。粉末をＬＨ−２０
（ｌＮ−ＡｃＯＨで溶出）カラムで脱塩したのち凍結乾
燥することにより２１■の目的物を得た。

アミノ酸分析値（６Ｎ−ＨＣｌ、　１１０℃、２２ｈｒ
）ＮＴ（３２，６６、Ａｒｇ　１．０３Ｘ３．Ａｓｐ　
１．００Ｘ２，５ｅｒ０．８９Ｘ２　、Ｇｌｕ　　（１
，９ｆｉ　、Ｇｌｙ　　１．０１　ｘｓ　、Ａｌａ　　
１．００　。

％（Ｃｙｓ）２０．８’３Ｘ２　、Ｍｅｔ　Ｏ，８５、
Ｉｌｅ　　Ｏ，９５、ＬｅｕＯ，９７、Ｔｙｒ　　ｎ、
９５　、Ｐｈｅ　　１．（ｌＯＸ２ＨＰＬＣ：　２５係
ＣＨ３ＣＮ１０．１係ＴＦＡの溶離液（カラム。

Ｎｕｃｌｅｏｓｌｌ　５Ｃ１Ｂ）で６２分に溶出された
。

実施例５ 薬効評価試験 薬効評価試験結果は次のとおりである。

α−ｈＡＮＰ［１−２８１１００１０＋ｌ　　　１（１
０１００α−ｈＡＮＰ（７−２７）　　　７３．７（２
）　　２０＋１（５’１　１１７　９７．２（１）（実
施例１） Ｄ−Ａｌａ’α−ｈＡＮＰ　　　１２　］（４）　　　
３４４（３）　　１８６　１２５（２）（７−２８）（
実〃帥１夕ｌｌ２） ＆）効力比は、同一標本を使用して各化合物のＥＴ′）
５ｏ値を求め、標準化合物（α−ｈＡＮＰ［１−２８］
）を基準に計算した。

ｂ）　　Ｎａ利尿作用は、麻酔をかけたラットで評価し
た。

発明の効果 本発明のペプチドは、高血圧症の治療、特に降圧利尿剤
としての使用が期待でき、故に本発明は産業上極めて有
用である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される新規ペプチド。ただし、式中、 ＸはＭｅｔ、Ｍｅｔ（Ｏ）またはＮｌｅを、▲数式、化
   学式、表等があります▼は、シスチン残基またはα−ア
   ミノスベリン酸残基を、ＺはＧｌｙまたはＡｌａを、ｍ
   、ｎ、ｐは０または１を、 ＡはＳｅｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ
   、Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｌｅｕ−Ａｒｇ−
   Ａｒｇ−Ｓｅｒ−ＳｅｒまたはＳｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ
   −Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒを、ＢはＡｓｎ、Ａｓｎ−Ｓ
   ｅｒ、Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ、Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｐｈ
   ｅ−ＡｒｇまたはＡｓｎ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔ
   ｙｒを、それぞれ表わし、ｈＡＮＰを含むものは除外さ
   れる（２）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第１項記載の新規ペプチド。 ただし、式中、ＺはＧｌｙまたはＡｌａを、ｐは０また
   は１を、Ｂは Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−ＡｒｇまたはＡｓｎ−Ｓｅｒ
   −Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒを、それぞれ表わす。