JP2928408B2 - セリン誘導体 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はセリン誘導体に関するも
のである。詳しくは、特定の基で置換されたフエニル基
により保護されたリン酸基を有する新規なセリン誘導体
に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】生体内での種々の反応に蛋白質リン酸化
酵素が重要な役割を担っていることが次第に明らかにさ
れており、これに伴い研究手段としてリン酸化されたペ
プチドの必要性が増大している。特定の部位がリン酸化
されたペプチドを得る最も確実な方法は、保護基で保護
されたリン酸基を有するアミノ酸誘導体を用いて目的と
するペプチドを製造することである。しかしながら、従
来知られているリン酸基がフェニル基で保護されたセリ
ン誘導体はフツ化水素処理により分解され易いため、目
的とするリン酸化されたペプチドを収率よく得ることが
できなかった。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、フツ化水素
処理によリ分解され難く、安定な保護基を有する新規な
セリン誘導体を提供することを目的とするものである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するた
めに種々の保護基で保護されたリン酸基を有するセリン
誘導体を探索した結果、特定の置換基を有するフエニル
基で保護されたリン酸基をもつ新規なセリン誘導体がフ
ツ化水素処理により分解され難く、リン酸化されたペプ
チドを製造するうえで極めて有用であることを見い出
し、本発明を達成した。即ち、本発明の要旨は、請求項
１における式（１）で表されるセリン誘導体に存する。

【０００５】以下、本発明を詳細に説明する。なお以下
の説明で用いる記号は、夫々次のものを示す。；Ｓｅ
ｒ：Ｌ−セリン；Ｂｏｃ：ｔ−ブチルオキシカルボニル
基；Ｂｚｌ：ベンジル基；Ｒ：炭素数１〜４のアルキル
基で置換されたフエニル基；Ｔｏｓ：ｐ−トルエンスル
ホニル基；２−ＣｌＺ：２−クロロベンジルオキシカル
ボニル基；ＭＢＨＡ樹脂：ｐ−メチルベンツヒドリルア
ミン樹脂。本発明のセリン誘導体は、Ｌ−セリン（Ｓｅ
ｒ）のヒドロキシル基が、炭素数１〜４のアルキル基で
置換されているフエニル基（Ｒ）により保護されたリン
酸基と結合し、アミノ基がｔ−ブチルオキシカルボニル
基（Ｂｏｃ）により保護され、カルボキシル基は遊離で
あるか又はベンジル基（Ｂｚｌ）により保護されている
構造のものであり、次に示す式Ｂｏｃ−Ｓｅｒ〔ＰＯ
（ＯＲ）_２］−ＯＨ又はＢｏｃ−Ｓｅｒ（ＰＯ（ＯＲ）
_２〕−ＯＢｚｌで表すことができる。即ち、前記請求項
１における（１）で示される構造のものである。

【０００６】本発明のセリン誘導体を製造するには、例
えば、ＨＯ−Ｒで示されるフエノール類にホスホリルク
ロライド（ＰＯＣｌ_３）を反応させてＣｌ−ＰＯ（Ｏ
Ｒ）
_{２とし、これに周知の化合物であるＢｏｃ−Ｓｅｒ−Ｏ
Ｂｚｌを反応させてＢｏｃ−Ｓｅｒ〔ＰＯ（ＯＲ） ２}〕
−ＯＢｚｌとすればよい。これらのセリン誘導体を引続
き加水素分解すれば、式Ｂｏｃ−Ｓｅｒ〔ＰＯ（ＯＲ）
_２〕−ＯＨで示される化合物が得られる。

【０００７】本発明のセリン誘導体は、セリンを含むペ
プチド中の特定部位のセリンがリン酸化されたホスホペ
プチドを得るための中間体として有用である。即ち、こ
のようなホスホペプチドは、ペプチド中のセリンを後か
らリン酸化しても得ることができるが、この方法では不
特定の部位のセリンがリン酸化され、特定部位のセリン
を選択的にリン酸化することができない。また酵素によ
りリン酸化する方法もあるが、リン酸化されるペプチド
が限られ、一般的な方法としては不適当である。しかる
に、リン酸化された特定部位のセリンとして本発明のセ
リン誘導体を使用し、周知の固相法によるペプチド合成
法に従い、ＭＢＨＡ樹脂を自動ペプチド合成機にセット
して所定のアミノ酸誘導体を供給して順次縮合させれ
ば、特定部位のセリンがリン酸化された所望のホスホペ
プチドを選択的に得ることができる。

【０００８】

【発明の効果】本発明の新規なセリン誘導体は、フツ化
水素等の酸性媒体中での安定性に優れており、特定部位
のセリンがリン酸化されたホスホペプチドの製造用中間
体として極めて有用である。

【実施例】以下本発明を実施例について更に詳細に説明
するが、本発明はその要旨を超えない限りこれ等の実施
例に限定されるものではない。

【０００９】実施例１ Ｃｌ−ＰＯ（ＯＲ）_２の製造：（ａ）ホスホリルクロラ
イド１７．５ｍｌ（１８８ｍｍｏｌ）、マグネシウム切
屑０．１６ｇ（６．６ｍｍｏｌ）及び２−メチルフェノ
ール３１ｍｌ（３００ｍｍｏｌ）を混合して１２０℃の
油浴中で還流下加熱した。１２０℃で１時間加熱した
後、油浴の温度を１８０℃に上昇して３時間加熱を続行
した。こうして得られた粘稠な油状物を蒸留して沸点１
４５〜１５０℃／０．０３ｍｍＨｇのビス〔（２−メチ
ルフェニル）オキシ〕ホスホリルクロライドを６７％の
収率で得た。

【００１０】（ｂ）上記実施例１の（ａ）において使用
した２−メチルフェノールの代りに２−ｔ−ブチルフェ
ノールを使用した以外は、（ａ）と同様に処理して沸点
１８５〜１９０℃／０．２ｍｍＨｇのビス〔（２−ｔ−
ブチルフェニル）オキシ〕ホスホリルクロライドを４３
％の収率で得た。（ｃ）上記実施例１の（ａ）において
使用した２−メチルフェノールの代りに２，６−ジメチ
ルフェノールを使用した以外は、（ａ）と同様に処理し
て沸点１７３℃／０．２ｍｍＨｇのビス〔（２，６−ジ
メチルフェニル）オキシ〕ホスホリルクロライドを５３
％の収率で得た。

【００１１】実施例２ Ｂｏｃ−Ｓｅｒ〔ＰＯ（ＯＲ）_２〕−ＯＢｚｌの製造：
（ａ）５ｇ（１６．９ｍｍｏｌ）のＢｏｃ−Ｓｅｒ−Ｏ
Ｂｚｌを含むピリジン溶液に、実施例１の（ａ）で得た
ビス〔（２−メチルフェニル）オキシ〕ホスホリルクロ
ライド１．１当量を０℃で加え室温で１２〜２０時間攪
拌した。反応混合物を酢酸エチル２００ｍｌで希釈した
後、２Ｍ塩酸（２００ｍｌ×２）及び食塩水（２００ｍ
ｌ×３）で逐次洗浄した。分液して有機層を採取し無水
芒硝で乾燥したのち溶媒を除去し、残留油を酢酸エチル
−ヘキサンを溶媒としてシリカゲルを用いたカラムクロ
マトグラフィーにより精製し、ヘキサンで再結晶してＢ
ｏｃ−Ｓｅｒ〔ＰＯ（ＯＲ）_２〕−ＯＢｚｌ（Ｒ：２−
メチルフェニル）で示されるセリン誘導体を６９％の収
率で得た。この物質のマススペクトル（ＭＳ）及びＮＭ
Ｒは次の通りであった。ＭＳ４５４（１００％），５５
５（Ｍ^＋，１７．９％）；^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ
１_３），１．４２（ｓ，９Ｈ），２．２０（ｓ，６
Ｈ），４．５４（ｄｄｄ，Ｊ＝９．５，６．０，２．９
Ｈｚ，１Ｈ），４．５８（ｄｔｄ，Ｊ＝８．０，２．
９，２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６５（ｄｄｄ，Ｊ＝９．
５，６．０，２．９Ｈｚ，１Ｈ），５．０５（ｄ，Ｊ＝
１２．２Ｈｚ，１Ｈ），５．１５（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈ
ｚ，１Ｈ），５．３５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），
７．０６−７．２７（ｍ，８Ｈ），７．３１（ｍ，５
Ｈ）

【００１２】 （ｂ）上記実施例２の（ａ）において使
用したビス〔（２−メチルフェニル）オキシ〕ホスホリ
ルクロライドの代わりにビス〔（２−ｔ−ブチルフェニ
ル）オキシ〕ホスホリルクロライドを使用し、かつ触媒
量のジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を添加した以
外は（ａ）と同様に処理して、油状のＢｏｃ−Ｓｅｒ
〔ＰＯ（ＯＲ）_２〕−ＯＢｚｌ（Ｒ：２−ｔ−ブチルフ
ェニル）で示されるセリン誘導体を６８％の収率で得
た。この物質のＭＳ及びＮＭＲは次の通りであった。Ｍ
Ｓ４８２（１００％），５８３（Ｍ^＋，０．３％）；^１
Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３），１．３７（ｓ，９Ｈ），
１．３８（ｓ，９Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ），４．５
３（ｍ，２Ｈ），４．６３（ｄｄｄ，Ｊ＝９．６，５．
１，２．６Ｈｚ，１Ｈ），４．９２（ｄ，Ｊ＝１２．２
Ｈｚ，１Ｈ），５．１１（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，１
Ｈ），５．２８（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１
１（ｄｄｄｄ，Ｊ＝７．９，６．２，５．０，１．８Ｈ
ｚ，２Ｈ），７．１６（ｄｄｄｄ，Ｊ＝７．９，６．
２，６．２，１．８Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｍ，２
Ｈ），７．３（ｍ，３Ｈ），７．３６（ｄｄｄｄ，Ｊ＝
７．９，４．６，１．８，１．８Ｈｚ，２Ｈ），７．５
０（ｄｄ，Ｊ＝１６．７，７．９Ｈｚ，２Ｈ）

【００１３】 （ｂ）上記実施例２の（ａ）において使
用したビス〔（２−メチルフェニル）オキシ〕ホスホリ
ルクロライドの代わりにビス〔（２，６−ジメチルフェ
ニル）オキシ〕ホスホリルクロライドを使用し、かつ触
媒量のＤＭＡＰを添加した以外は（ａ）と同様に処理し
て、油状のＢｏｃ−Ｓｅｒ〔ＰＯ（ＯＲ）_２〕−ＯＢｚ
ｌ（Ｒ：２，６−ジメチルフェニル）で示されるセリン
誘導体を７６％の収率で得た。この物質のＭＳ及びＮＭ
Ｒは次の通りであった。ＭＳ４８２（１００％），５８
３（Ｍ^＋，０．３％）；^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３），
１．４２（ｓ，９Ｈ），２．２８（ｓ，６Ｈ），２．２
９（ｓ，６Ｈ），４．４６（ｍ，２Ｈ），４．５５（ｄ
ｄｄ，Ｊ＝９．３，５．８，２．５Ｈｚ，１Ｈ），５．
０２（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），５．０５（ｄ，
Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），５．１２（ｄ，Ｊ＝１２．３
Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｍ，６Ｈ），７．３１（ｍ，
５Ｈ）

【００１４】実施例３ Ｂｏｃ−Ｓｅｒ〔ＰＯ（ＯＲ）_２〕−ＯＨの製造：
（ａ）酢酸エチル中に実施例２の（ａ）で得たセリン誘
導体と、活性炭に担持したパラジウム触媒（Ｐｄ／Ｃ）
とを加えて水素気流中で室温で２時間攪拌した。反応混
合物をセライトを用いて濾過し、濾液を減圧下濃縮して
油状のＢｏｃ−Ｓｅｒ〔ＰＯ（ＯＲ）_２〕−ＯＨ（Ｒ：
２−メチルフェニル）で示されるセリン誘導体を定量的
収率で得た。本品のＭＳ及びＮＭＲは次の通りであっ
た。ＭＳ２７６（１００％），４６５（Ｍ^＋，２．８
％）；^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３），１．４２（ｓ，９
Ｈ），２．１９（ｓ，３Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ），
４．５５（ｍ，２Ｈ），４．６７（ｍ，１Ｈ），５．５
４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．３０（ｂｒ．
ｓ，１Ｈ），７．０７（ｍ，２Ｈ），７．１３（ｔ，Ｊ
＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈ
ｚ，２Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）

【００１５】（ｂ）上記実施例３の（ａ）において使用
したセリン誘導体の代りに、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ〔ＰＯ（Ｏ
Ｒ）〕_２−ＯＢｚｌ（Ｒ：２−ｔ−ブチルフェニル）で
示されるセリン誘導体を使用した以外は実施例３の
（ａ）と同様に処理して、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ〔ＰＯ（Ｏ
Ｒ）_２〕−ＯＨ（Ｒ：２−ｔ−ブチルフェニル）で示さ
れるセリン誘導体を定量的収率で得た。本品のＭＳ及び
ＮＭＲは次の通りであった。ＭＳ４７５（１００％），
５４９（Ｍ^＋，２．５％）；^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ
ｌ_３），１．３１（ｓ，９Ｈ），１．３６（ｓ，９
Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ），４．２８（ｂｒ．ｓ，１
Ｈ），４．３６（ｍ，１Ｈ），４．６７（ｍ，１Ｈ），
５．２０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），５．５４（ｄ，Ｊ＝６．
７Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄｔ，Ｊ＝７．６，７．５
Ｈｚ，２Ｈ），７．１２（ｄｔ，Ｊ＝１４．０，７．５
Ｈｚ），７．３２（ｄｄ，Ｊ＝１６．０，７．６Ｈｚ，
２Ｈ），７．４６（ｄｄ，Ｊ＝２５．８，７．５Ｈｚ，
２Ｈ）

【００１６】（ｃ）上記実施例３の（ａ）において使用
したセリン誘導体の代りに、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ〔ＰＯ（Ｏ
Ｒ）_２〕−ＯＢｚｌ（Ｒ：２，６−ジメチルフェニル）
で示されるセリン誘導体を使用した以外は実施例３の
（ａ）と同様に処理して、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ〔ＰＯ（Ｏ
Ｒ）_２〕−ＯＨ（Ｒ：２，６−ジメチルフェニル）で示
されるセリン誘導体を定量的収率で得た。本品のＭＳ及
びＮＭＲは次の通りであった。ＭＳ３９２（１００），
４９３（Ｍ^＋，６％）；^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３），
１．４２（ｓ，９Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ），２．２
７（ｓ，３Ｈ），４．３７（ｍ，１Ｈ），４．４５
（ｍ，１Ｈ），４．５３（ｍ，１Ｈ），５．２３（ｄ，
Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｍ，６Ｈ），７．
８９（ｂｒ．ｓ）

【００１７】参考例１ （イ）Ｈ−Ｌｙｓ（２−ＣｌＺ）−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−
Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ〔ＰＯ（Ｏ
Ｒ）_２〕−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｐｒｏ
−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＭＢ
ＨＡ樹脂の製造： ＭＢＨＡ樹脂０．９４ｇ（アミン含
量０．６４ｍｍｏｌ／ｇ樹脂）をバイオサーチ社製９５
００型自動ペプチド合成機にセットし、これにＢｏｃ−
Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−
ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、
Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−Ｏ
Ｈ、Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、実施例３の（ａ）で得たＢ
ｏｃ−Ｓｅｒ〔ＰＯ（ＯＲ）_２〕−ＯＨ（Ｒ：２−メチ
ルフェニル）、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｐｒｏ
−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｓ
ｅｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ及びＢｏｃ−Ｌｙｓ（２−Ｃｌ
Ｚ）−ＯＨを供給して順次縮合させて上記の側鎖保護ペ
プチド−ＭＢＨＡ樹脂２．５ｇを得た。

【００１８】 （ロ）フッ化水素処理： 上記（イ）で得た側鎖保護ペプチド−ＭＢＨＡ樹脂中の
０．５ｇを採取し、これを蛋白質研究奨励会ペプチド研
究所製のフッ化水素反応装置にセットし、１ｍｌのアニ
ソールの存在下で１０ｍｌのフッ化水素と０℃で１時間
反応させた。反応終了後、フッ化水素を減圧下留去し、
残留物を酢酸エチルで洗浄した後、２Ｍ酢酸１００ｍｌ
で抽出処理して、Ｈ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ ＣＰＯ（ＯＲ）_２〕−Ｐｒｏ−Ｇｌ
ｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−ＮＨ_２
で表されるリン酸基を保護した粗ペプチド１３５ｍｇを
得た。

【００１９】これを３０％酢酸２０ｍｌに溶解してセフ
ァデックスＧ−２５のカラム（内径５ｃｍ、長さ１００
ｃｍ）にかけ、同じ溶媒を用いて溶出して目的物を含む
画分を集めた。次いでこれを小量の蒸留水に溶解し、Ｏ
ＤＳ（オクタデシルシラン）をシリカに結合した逆相系
のカラム（内径２ｃｍ、長さ２５ｃｍ）を用いたＨＰＬ
Ｃ（高速液体クロマトグラフィー）によリ精製した。溶
出は０．１％トリフルオロ酢酸中３０分で５％から６５
％までのアセトニトリルの濃度勾配をかけることにより
行った。精製物の収量は６５ｍｇであった。本物質のマ
ススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）及び酸加水分解物中のア
ミノ酸比率は次の通りであった。ＦＡＢ−ＭＳ〔Ｍ＋
Ｈ〕^＋１４７４，計算値（Ｃ_６３Ｈ_９７Ｎ_１８Ｏ_２１Ｐ
＋Ｈ）１４７４；Ｔｈｒ０．９３（１），Ｓｅｒ３．１
０（４），Ｐｒｏ２．７０（３），Ｇｌｙ３．００
（３），Ｌｙｓ０．９８（１），Ａｒｇ１．００（１）

【００２０】（ハ）加水素分解：上記（ロ）で得たリン
酸基を保護したペプチド６０ｍｇ及び酸化白金１００ｍ
ｇ（触媒）を１ｍｌの酢酸と混合して５〜６気圧の水素
圧下、室温で１２時間攪拌した後、触媒を濾去した。濾
液を凍結乾燥し、分取ＨＰＬＣにより精製して最終目的
物であるＨ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ
−Ｓｅｒ〔ＰＯ（ＯＨ）_２〕−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ
−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−ＮＨ_２で表される
ホスホペプチド３５ｍｇを得た。本物質の構造は、以下
に示すＦＡＢ−ＭＳ、アミノ酸分析及び配列分析により
確認された。ＦＡＢ−ＭＳ〔Ｍ＋Ｈ〕^＋１２９４，計算
値（Ｃ_４９Ｈ_８５Ｎ_１８Ｏ_２１Ｐ＋Ｈ）１２９４；Ｔｈ
ｒ１．１０（１），Ｓｅｒ３．３０（４），Ｐｒｏ３．
１６（３），Ｇｌｙ２．９０（３），Ｌｙｓ１．０２
（１），Ａｒｇ１．０６（１）

Claims (1)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次の式（１） 【化１】 （式中、Ｗはｔ−ブチルオキシカルボニル基を示し、Ｘ
   及びＹは炭素数１〜４のアルキル基又は水素原子を示
   し、かつＸ及びＹの少なくとも一方は炭素数１〜４のア
   ルキル基であり、Ｚはベンジル基又は水素原子を示す）
   で表されるセリン誘導体。