DK175344B1

DK175344B1 - Peptider med bradykininantagonistisk virkning og fysiologisk acceptable salte deraf, deres fremstilling og anvendelse samt farmaceutiske midler indeholdende peptiderne

Info

Publication number: DK175344B1
Application number: DK198903840A
Authority: DK
Inventors: Bernward Schoelkens; Gerhard Breipohl; Jochen Knolle; Hans-Wolfram Fehlhaber; Hiristo Anagnostopulos; Stephan Henke; Jens Stechl
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1988-11-24
Filing date: 1989-08-04
Publication date: 2004-08-30
Also published as: EP0370453A3; SK279315B6; DE122008000066I1; MX9203277A; KR0139632B1; ATE107318T1; CY2008022I1; LU91499I2; FI893738A; FI94353C; NO177597B; LV10720B; PT91692A; FI94353B; PT91692B; CN1035006C; CY2008022I2; NL300359I2; LV10720A; EP0370453B1

Description

i DK 175344 B1

Den foreligende opfindelse angår hidtil ukendte peptider med bradykininantagonistisk virkning, en fremgangsmåde til deres fremstilling, deres anvendelse og farmaceutiske midler indeholdende sådanne peptider.

5 Bradykininantagonistiske peptider er beskrevet i international patentansøgning nr. wo 86/07263, hvor bl.a.

L-Pro i stilling 7 i peptidhormonet bradykinin eller andre bradykininanaloge er erstattet med en D-aminosyre, såsom D-Phe, D-Thi, D-Pal, CDF, D-Nal, MDY, D-Phg, D-His, D-Trp, 10 D-Tyr, D-hPhe, D-Val, D-Ala, D-His, D-Ile, D-Leu og DOMT.

Det hår været formålet med opfindelsen at tilvejebringe hidtil ukendte, virksomme peptider med bradykininantagonistisk virkning.

Til opfyldelse af dette formål angår opfindelsen et 15 peptid, som er ejendommeligt ved, at det har formlen I A-B-C-E-F-K-(D)-Tic-G-M-F'-I (I), hvor A betyder a-±) hydrogen, (Ci-Cg)-alkyl, (C1-Cg)-alkanoyl, (Cg-Cg) - 20 alkoxycarbonyl eller (C^-Cg)-alkylsulfonyl, hvor l, 2 eller 3 hydrogenatomer i en af disse grupper eventuelt er erstattet med 1, 2 eller 3 ens eller forskellige grupper fra rækken carboxy, amino, (C1-C4)-alkyl, (C1-C4)- alkylamino, hydroxy, (Ci~C4)-alkoxy, halogen, di-(Ci-C4)-25 alkylamino, carbamoyl, sulfamoyl, (0^-04)-alkoxycarbonyl, (C6-C12)-aryl og (C6-C12)-aryl-(Ci-Cg)-alkyl, eller hvor et hydrogenatom i en af disse grupper eventuelt er erstattet med en gruppe fra rækken (Cg-Cg)-cycloalkyl, (Ci~ C4)-alkylsulfonyl, (C1-C4)-alkylsulfinyl, (Cg-C12)-aryl- (Ci-30 C4)-alkylsulfonyl, (Cg-C12)-aryl-(C1-C4)-alkylsulfinyl, (Cg-

Ci2)-aryloxy, (C3-C9)-heteroaryl og (C3-C9)-heteroaryloxy, og 1 eller 2 hydrogenatomer er erstattet med 1 eller 2 ens eller forskellige grupper fra rækken carboxy, amino, (C±-35 C4)-alkylamino, hydroxy, (C1-C4) -alkoxy, halogen, di-(C1-C4)- alkylamino, carbamoyl, sulfamoyl, (C1-C4)-alkoxycarbonyl, I DK 175344 B1

I I

I (Cg-Cl2)‘^y1 °9 (Cg-C12)-aryl-(Ci-Cs)-alkyl, I

I a2) (C3-C8)-cycloalkyl, eventuelt ved nitrogenatomet med I

I (ci"Cg)-alkyl eller (Cg-C12)-aryl substitueret carbamoyl, I

I (Cg-C12)-aryl, (C7-C13)-aryloyl, (Cg-C12)-arylsulfonyl, I

I 5 (C3-Cg)-heteroaryl eller (C3-Cg)-heteroaryloyl, I

I idet de under a-^) og a2) definerede grupper aryl, heteroaryl, I

I aryloyl, arylsulfonyl og heteroaryloyl hver især eventuelt I

I er substitueret med 1, 2, 3 eller 4 ens eller forskellige I

grupper fra rækken carboxy, amino, nitro, (C1-C4)-alkylami- I

I 10 no, hydroxy, (C1-C4)-alkyl,.(C1-C4)-alkoxy, halogen, cyano, I

I di--alkylamino, carbamoyl, sulfamoyl og (C1-C4)-alko- I

xycarbonyl, eller I

I a3) en gruppe med formel II I

I R1 - N - CH - C - (II) I

I is i i, 11

R2 R3 O I

I hvor I

r! er defineret som A under aj) eller a2), I

I R2 betyder hydrogen eller methyl, I

I 20 R3 betyder hydrogen eller (C3-Cg)-alkyl, fortrinsvis I

I (Ci-C4)-alkyl, som eventuelt er monosubstitueret med amino, I

substitueret amino, hydroxy, carboxy, carbamoyl, guanidino, I

H substitueret guanidino, ureido, mercapto, methylmercapto, I

I phenyl, 4-chlorphenyl, 4-fluorphenyl, 4-nitrophenyl, 4-me- I

25 thoxyphenyl, 4-hydroxyphenyl, phthalimido, 4-imidazolyl, 3- I

indolyl, 2-thienyl, 3-thienyl, 2-pyridyl, 3-pyridyl eller I

I cyclohexyl, I

I idet substitueret amino står for en forbindelse -NH-A-, og I

substitueret guanidino står for en forbindelse -NH-C(NH)- I

I 30 NH-A, hvor A er som defineret under a^ eller a2) , I

I B betyder Arg, Lys, Orn, 2,4-diaminobutyroyl eller en I

I L-homoargininrest, idet amino- eller guanidinogruppen i I

I sidekæden kan være substitueret med A som beskrevet under I

I a^) eller a2), I

I 35 C betyder en forbindelse med formel Illa eller Illb I

I G'-G'-Gly G'-NH-(CH2)n-C0 I

I (Illa) (Illb), I

3 DK 175344 B1 hvor

G' uafhængigt af hverandre betyder en gruppe med formel IV

5 R4 R5 O

I I II

-N - CH - C - (IV) hvor R4 og R5 sammen med de atomer, som bærer dem, danner et 10 heterocyclisk, mono-, bi- eller tricyclisk ringsystem med 2-15 carbonatomer, og n er 2-8, E betyder en phenylalaninrest, som eventuelt er sub stitueret med halogen i 2-, 3- eller 4-stilling, tyrosin, 0-methylthyrosin, 2-thienylalanin, 2-pyridylalanin eller 15 naphthylalanin, F uafhængigt af hverandre betyder resten af en neutral, sur eller basisk, aliphatisk eller aromatisk aminosyre, som kan være substitueret i sidekæden, eller betyder en direkte binding, 20 (D)-Tic betyder en gruppe med formel V 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 G er som ovenfor defineret for G' eller betyder en 2 direkte binding, 3 F' betyder en rest af de basiske aminosyrer Arg eller 4

Lys i L- eller D-form eller en direkte binding, idet guanidi- 5 no- eller aminogruppen i sidekæden kan være substitueret med 6 A som defineret under a}) eller a2) , eller betyder en gruppe 7 -NH-(CH2)n-, hvor n er 2-8, eller betyder en direkte binding, 8 hvis G ikke betyder en direkte binding, 9 I betyder -OH, -NH2 eller -NHC2H5, 10 K betyder en gruppe -NH-(CH2)x-CO-, hvor x er 1-4, eller 11 en direkte binding, og M er som defineret for F, samt deres fysiologisk acceptable salte.

I DK 175344 B1 I

I 4 I

I Opfindelsen angår desuden en fremgangsmåde til frem- I

I stilling af et peptid ifølge opfindelsen, hvilken fremgangs- I

I måde er ejendommelig ved, at man I

I a) omsætter et fragment med C-terminal, fri carboxylgrup- I

I 5 pe eller et aktiveret derivat deraf med et tilsvarende frag- I

ment med N-terminal, fri aminogruppe, eller I

I b) opbygger pept idet trinvis, I

I i den ifølge a) eller b) fremstillede forbindelse I

I eventuelt fraspalter en eller flere, til beskyttelse af I

I 10 andre funktioner midlertidigt indførte beskyttelsesgrupper I

I og eventuelt overfører de således fremstillede forbindelser I

I med formel I i et fysiologisk acceptabelt salt deraf. I

I Opfindelsen angår endvidere anvendelsen af et peptid I

I ifølge opfindelsen til fremstilling af et lægemiddel til I

I 15 behandling af patologiske tilstande, som formidles, udløses I

I eller understøttes af bradykinin og med bradykinin beslægtede I

I peptider. I

I Opfindelsen angår endelig også et farmaceutisk middel, I

I som er ejendommeligt ved, at det indeholder et peptid ifølge I

I 20 opfindelsen. I

I Hvis ikke andet er angivet, står forkortelsen for en I

I aminosyrerest uden en stereobetegnelse for resten i L-form I

I (jfr. Schroder, Liibke, The Peptides, bind I, New York 1965, I

I side XXII-XXIII; Houben-Weyl, Methoden der Organischen Che- I

I 25 mie, bind XV/1 og 2, Stuttgart 1974), f.eks. Aad, Abu, -rAbu, I

I ABz, 2ABz, eAca, Ach, Acp, Adpd, Ahb, Aib, SAib, Ala, SAla, I

I Ala, Alg, All, Ama, Amt, Ape, Apm, Apr, Arg, Asn, Asp, Asu, I

I Aze, Azi, Bai, Bph, Can, Cit, Cys, Cyta, Daad, Dab, Dadd, I

I Dap, Dapm, Dasu, Dj en, Dpa, Dtc, Fel, Gin, Glu, Gly, Guv, I

I 30 hAla, hArg, hCys, hGln, hGlu, His, hlle, hLeu, hMet, hPhe, I

I hPro, hSer, hThr, hTrp, hTyr, Hyl, Hyp, 3Hyp, Ile, Ise, I

I Iva, Kyn, Lånt, Len, Leu, Lsg, Lys, £Lys, Lys, Met, Mim, I

I Min, nArg, Nle, Nva, Oly, Orn, Pan, Pec, Pen, Phe, Phg, I

I Pic, Pro, Pro, Pse, Pya, Pyr, Pza, Qin, Ros, Sar, Sec, Sem, I

I 35 Ser, Thi, SThi, Thr, Thy, Thx, Tia, Tie, Tly, Trp, Trta, I

I Tyr, Val. I

5 DK 175344 B1 I betragtning som resten af et heterocyclisk ringsystem med formel IV kommer især rester af heterocycliske forbindelsen for følgende gruppe: pyrrolidin (A) ; piperidin (B) ; tetrahydroisoquinolin (C) ; 5 decahydroisoquinolin (D) ; octahydroindol (E); octahydrocyclo-penta [b]pyrrol (F); 2-aza-bicyclo [2,2,2]-octan (G); 2-azabi-cyclo[2,2,2]heptan (H); 2-azaspiro[4,5]decan (i); 2-azabpi-ro[4,4]nonan (J) ; spiro-[(bicyclo[2,2,1]heptan)-2,3-pyrro-lidin] (K); spiro-[(bicyclo[2,2,2]octan)-2,3-pyrrolidin] 1Q (L); 2-azatricyclo[4;3,0,l6,9]decan (M); decahydrocyclohep-ta[b)pyrrol (N); octahydroisoindol (O); octahydrocyclopen-ta[c]pyrrol (P); 2,3(3a,4,5,7a-hexahydroindol (Q); tetrahy-drothiazol (R) ; 2-azabicylo[3,1,0]hexan (S); isoxazolidin (T) ; pyrazolidin (U) og hydroxyprolin (V) , som alle eventuelt 15 kan være substitueret. 1 I DK 175344 B1

I I

i 5 c~y~c°~ f=s:r^Tt—^—co- —co-

I ? 1 l=5^JS^N^ I

I QS- Q%- ^»-

I 10 f U {* CO- I

„ vV

I * £ 12 1 j 1 κ I

I jo V ^¾^°- c^-c°- ^-od- I

I 1 L 1 Η < H 's ^co. Sø*co-Q>- sØ-C0-

' o ' I 8 1 S · ** I

30 ΓΛ r~\ H0\_ I

%>c°- %>c°- Cu 2 u v I 1 7 DK 175344 B1

De heterocycliske forbindelser, som ligger til grund for de ovenfor nævnte rester, er f.eks. kendt fra US-patenskrift nr. 4.344.949, 4.374.847 og 4.350.704, EP

offentliggørelsesskrift nr. 50.800, 31.741, 51.020, 49.658, 5 49.605, 29.488, 46.953, 52.870 og 271.865, DE offentliggørelsesskrift nr. 32.26.768, 31.51.690, 32.10.496, 32.11.397, 32.11.676, 32.27.055, 32.42.151, 32.46.503 og 32.46.757.

Endvidere er nogle af disse heterocycliske forbindelser foreslået i DE offentliggørelsesskrift nr. 38.18.850.3.

10 Hvis der i de enkelte tilfælde ikke er angivet andet, kan alkyl være ligekædet eller forgrenet. Tilsvarende gælder for deraf afledede grupper, såsom alkoxy, aralkyl eller alkanoyl.

(Cg-C12)-aryl betyder fortrinsvis phenyl, naphthyl 15 eller biphenylyl. Tilsvarende er deraf afledede grupper, såsom aryloxy, aralkyl eller aroyl, formuleret.

Halogen står for fluor, chlor, brom eller iod, fortrinsvis chlor.

I betragtning som salte kommer især alkali- eller 20 jordalkalimetalsalte, salte med fysiologisk acceptable aminer og salte med uorganiske eller organiske syrer, f.eks. HC1, HBr, H2SO4, H3PO4, maleinsyre, fumarsyre, citronsyre, vinsyre og eddikesyre.

Foretrukket er peptider med formel I, hvor 25 B betyder Arg, Orn eller Lys, idet guanidinogruppen eller aminogruppen i sidekæden er usubstitueret eller kan være substitueret med (C^-Cg)-alkanoyl, (C7-C33)-aryloyl, (C3-C9)-heteroaryloyl, (C^-Cg)-alkylsulfonyl eller (Cg-C^)-arylsulfonyl, idet aryl-, heteroaryl-, aryloyl-, arylsulfo-30 nyl-og heteroaryloylgrupperne eventuelt kan være substitueret som beskrevet under a2) med 1, 2, 3 eller 4 ens eller forskellige grupper, E betyder phenylalanin, 2-chlorphenylalanin, 3-chlorphe- nylalanin, 4-chlorphenylalanin, 2-fluorphenylalanin, 3-fluor-35 phenylalanin, 4-fluorphenylalanin, tyrosin, O-methyltyrosin eller β-(2-thienyl)-alanin, I DK 175344 B1

I K betyder en direkte binding, og I

I M betyder en direkte binding. I

I Særligt foretrukket er peptider med formel I, hvor I

I A betyder hydrogen, (D) - eller (L)-Η-Arg, (D) - eller I

I 5 (L)-H-Lys eller (D)- eller (L)-H-Orn,

I B betyder Arg, Orn eller Lys, idet guanidinogruppen I

I eller aminogruppen i sidekæden er usubstitueret eller kan I

I være substitueret med (C^-Cg)-alkanoyl, (CyC^)-aryloyl, I

(C3-C9)-heteroaryloyl, (CyCg) -alkylsulfony 1 eller (Cg-Cg^)- I

10 arylsulfonyl, idet aryl-, heteroaryl-, aryloyl-, arylsulfo- I

nyl- og heteroaryloylgrupperne eventuelt kan være substitue- I

ret med l, 2, 3 eller 4 ens eller forskellige grupper fra I

rækken methyl, methoxy og halogen, I

I C betyder Pro-Pro-Gly, Hyp-Pro-Gly eller Pro-Hyp-Gly, I

I 15 E betyder Phe eller Thia, I

I F betyder Ser, hser, Lys, Leu, Val, Nle, Ile eller Thr, I

K betyder en direkte binding, I

Η M betyder en direkte binding, I

G betyder resten af et heterocyclisk ringsystem med I

20 formel IV valgt blandt de heterocycliske grupper pyrrolidin I

(A), piperidin (B); tetrahydroisoguinolin (C); cis- og trans- I

decahydroisoquinolin (D); cis-endo-octahydroindol (E); cis- I

exo-octahydroindol (E), trans-octahydroindol (E), cis- I

endo-, cis-exo-, trans-octahydrocyclopentano[b]pyrrol (F) I

I 25 eller hydroxypyrolin (V), I

F1 betyder Arg, og I

I I betyder OH. I

Ganske særlige foretrykket er et peptid med formel I

I, valgt blandt I

I 30 H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH, I

I H-(D)-Arg-Arg-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-(D) -Tic-Oic-Arg-OH, I

I H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH, I

I H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH og I

I H-(D)-Arg-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH. I

I 35 Opfindelsen angår endvidere en fremgangsmåde til I

fremstilling af peptider med formel I, hvilken fremgangsmåde I

9 DK 175344 B1 er ejendommelig ved, at man a) omsætter et fragment med C-terminal, fri carboxylgrup- pe eller et aktiveret derivat deraf med et tilsvarende fragment med N-terminal, fri aminogruppe, eller 5 b) opbygger peptidet trinvis, i den ifølge a) eller b) fremstillede forbindelse eventuelt fraspalter en eller flere, til beskyttelse af andre funktioner midlertidigt indførte beskyttelsesgrupper og eventuelt overfører de således fremstillede forbindelser 10 med formel I i et fysiologisk acceptabelt salt deraf.

Peptiderne ifølge opfindelsen fremstilles ved alment kendte metoder i peptidkemien, se f.eks. Houben-Weyl, Me-thoden der organischen Chemie, bind 15/2, fortrinsvis ved hjælp af fastfasesyntese, f.eks. som beskrevet af B. Merri-15 field, J.Am.Chem.Soc. 85, 2149 (1963), eller R.C. Sheppard,

Int.J. Peptide Protein Res. 21, 118 (1983), eller ved ækvivalente, kendte metoder. Som a-aminobeskyttelsesgrupper anvendes urethanbeskyttelsesgrupper, f.eks. en tert.-butyl-oxycarbonyl- (Boc) eller en fluorenylmethyloxycarbonylsbe-20 skyttelsesgruppe (Fmoc). Hvis det er nødvendigt til forhindring af side reaktioner eller til syntesen af specielle peptider, er de funktionelle grupper i sidekæden i aminosyrer desuden beskyttet ved hjælp af egnede beskyttelsesgrupper (se f.eks. T.w. Greene, "Protective Groups in Organic 25 Synthesis"), idet der i første række anvendes Arg(Tos), Arg(Mts), Arg(Mtr), Arg(PMC), Asp(OBzl), Asp(OBut), Cys(4-MeBzl), Cys(Acm), Cys(SBut), Glu(OBzl), Glu(OBut), His(Tos),

His(Fmoc), His(Dnp), His(Trt), Lys(Cl-Z), Lys(Boc), Met(O), Ser(Bzl), Ser(But), Thr(Bzl), Thr(But), Trp(Mts), Trp(CHO), 30 Tyr(Br-Z), Tyr(Bzl) eller Tyr(But).

Fastfasesyntesen begynder ved den C-terminale ende af peptidet med koblingen af en beskyttet aminosyre til en tilsvarende harpiks. Sådanne udgangsmaterialer kan fremstilles ved sammenknytning af en beskyttet aminosyre med en med 35 en chlormethyl-, hydroxymethyl-, benzhydrylamino- (BHA) eller methylbenzhydrylaminogruppe (MBHA) modificeret polystyren- I DK 175344 B1 H eller polyacrylamidharpiks via en ester- eller amidbinding.

De som bærermateriale anvendte harpikser er kommercielt tilgængelige. BHA- og MBHA-harpikser anvendes sædvanligvis, når det syntetiserede peptid ved C-terminalen skal indeholde 5 en fri amidgruppe. Hvis peptidet skal indeholde en sekundær amidgruppe ved den C-terminale ende, anvendes en chlormethyl- eller hydroxymethylharpiks, og fraspaltningen gennemføres med de tilsvarende aminer. Hvis man f.eks. vil fremstille ethylamidet, kan peptidet fraspaltes fra harpiksen med ethyl- 10 amin, idet fraspaltningen af sidekædebeskyttelsesgrupperne derefter sker ved hjælp af andre, egnede reagenser. Hvis tert-butylbeskyttelsesgrupperne i aminosyresidekæden skal H bibeholdes i peptidet, gennemføres synstesen med Fmoc-beskyt- H telsesgruppen til midlertidig blokering af cr-aminogruppen i H 15 aminosyren under anvendelse af f.eks. den af R.C. Sheppard, H J. Chem. Soc., Chem. Comm. 1982, 587, beskrevne metodik, idet guanidinofunktionen i argininet beskyttes ved protonisering med pyridiniumperchlorat, og beskyttelsen af de andre, i sidekæden funktionaliserede aminosyrer sker med benzylbeskyt- 2 0 telsesgrupper, som kan fraspaltes ved katalytisk overførings- hydrogenering (A. Felix et al. J. Org. Chem. 13., 4194 (1978) eller med natrium i flydende ammoniak (VJ. Roberts, J. Am.

I Chem. Soc. 76, 6203 (1954)).

I Efter fraspaltning af aminobeskyttelsesgruppen på 25 den til harpiksen koblede aminosyre med et egnet reagens, f.eks. trifluoreddikesyre i methylenchlorid, hvor der er tale om en Boc-beskyttelsegruppe, eller en 20%'s opløsning I af piperidin i dimethyl formamid, hvor der er tale om en H Fmoc-beskyttelsesgruppe, kobles de efterfølgende, beskyttede I 30 aminosyrer på efter hverandre i den ønskede rækkefølge. De I intermediært opstående, N-terminalbeskyttede peptidharpikser I afblokeres før sammenknytningen med det efterfølgende amino- I syrederivat ved hjælp af de ovenfor beskrevne reagenser.

I Som koblingsreagens kan der anvendes alle mulige, i I 35 peptidsyntesen anvendte aktiveringsreagenser, se f.eks.

I Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, bind 15/2, 11 DK 175344 B1 men især carbodiimider, f.eks. N, N'-dicyclohexylcarbodiimid, N,N'-diisophropylcarbodiimid eller N-ethyl-N'- (3-dimethylami-nopropyl)-carbodiimid. Derved kan koblingen gennemføres, ved at aminosyrederivat adderes direkte til harpiksen med 5 aktiveringsreagenset og eventuelt en tilsætning, som undertrykker racemiseringen, f.eks. 1-hydroxybenzotriazol (HOBt) (W.Konig, R. Geiger, Chem. Ber. 103, 708 (1970), eller 3- hydroxy-4-oxo-3,4-dihydrobenzotriazin (HOObt) (W. Konig, R.Geiger, Chem.Ber. 103. 2054 (1970)), eller foraktiveringen 10 af aminosyrederivatet som symmetrisk anhydrid eller HOBt-eller HOObt-ester kan ske separat, og opløsningen af' den aktiverede forbindelse i egnet opløsningsmiddel sættes til den koblingsdygtige peptidharpiks.

Koblingen eller aktiveringen af aminosyrederivaterne 15 med et af de ovenfor nævnte aktiveringsreagenser kan gennemføres i dimethyl formamid, N-methylpyrrolidon eller methylen-chlorid eller en blanding af de nævnte opløsningsmidler.

Det aktiverede aminosyrederivat anvendes sædvanligvis i et overskud på fra 1,5 til 4 gange. I tilfælde, hvor der ind-20 træder en ufuldstændig kobling, gentages koblingsreaktionen, uden at den til koblingen af den næstfølgende aminosyre nødvendige afblokering af α-aminogruppen i peptidharpiksen gennemføres.

Det resultatrige forløb af koblingsreaktionen kan 25 afprøves ved hjælp af ninhydrin-reaktionen, f.eks. som beskrevet af E. Kaiser et al., Anal. Biochem. 34.# 595 (1970). Syntesen kan også gennemføres automatiseret, f.eks. med en peptidsyntetisator model 430 A fra firma Applied Biosystems, idet der enten kan anvendes det af apparaturfabrikanten for-30 udsete synteseprogram, eller der kan anvendes et program, som brugeren selv har opstillet. Sidstnævnte anvendes især ved anvendelsen af aminosyrederivater, som er beskyttet med Fmoc-gruppen.

Efter syntese af peptidet på den ovenfor beksrevne 35 måde kan peptidet fraspaltes fra harpiksen med reagenser, f.eks. flydende hydrogenflourid (fortrinsvis ved de ifølge I DK 175344 B1

Boc-metoden fremstillede peptider) eller trifluoreddikesyre H (fortrinsvis ved de efter Fmoc-metoden syntetiserede pep- H tider). Disse reagenser fraspalter ikke alene peptidet fra harpiksen, men også de yderligere sidekædebeskyttelsesgrup- H 5 per i aminosyrederivaterne. På denne måde fås, bortset fra H anvendelsen af BHA- og MBHA-harpikser, peptidet i form af H den frie syre. Ved BHA- eller MBHA-harpikser får man ved fraspaltningen med hydrogenfluorid eller trifluormethansul- fonsyre peptidet som syreamid. Yderligere fremgangsmåder 10 til fremstilling af peptidamider er beskrevet i DE patentan- søgningerne nr. P 37.11.866.8 og P 37.43.620.1. Her sker fraspaltningen af peptidamiderne fra harpiksen ved behand- H ling med i peptidsyntesen gængs anvendte, middelstærke syrer H (f.eks. trifluoreddikesyre), idet der som kationindfangende H 15 midler tilsættes sådanne stoffer som phenol, cresol, thiocre- sol, anisol, thioanisol, ethandithiol, dimethylsulfid, ethyl-.

methylsulfid eller lignende, i fastfasesyntesen gængse kati- onindfangende midler enkeltvis eller som en blanding af 2 eller flere af disse hjælpestoffer. Derved kan trifluoreddi- 20 kesyren også anvendes fortyndet ved hjælp af egnede opløs- ningsmidler, f.eks. methylenchlorid.

Hvis tert-butyl- eller benzylsidenkædebeskyttelses- grupperne skal bibeholdes i peptiderne, gennemføres fraspalt - ningen af det på en særlig modificeret bæreharpiks syntetise- 25 rede peptid med 1%'s trifluoreddikesyre i methylenchlorid, f.eks. som beskrevet af R.C. Sheppard, J. Chem. Soc., Chem.

I Comm. 1982, 587. Hvis enkelte tert-butyl- eller benzylside- kædebeskyttelsesgrupper skal bibeholdes, anvendes en egnet kombination af syntese- og fraspaltningsmetoderne.

I 30 Til syntesen af peptider med en C-terminal amidgruppe- I ring eller en ω-amino- eller ω-guanidinoalkylgruppering I anvendes ligeledes den af Sheppard beskrevne, modificerede bærerharpiks. Efter syntesen fraspaltes det i sidekæden fuldt beskyttede peptid fra harpiksen og omsættes derefter ved kla- 35 sisk opløsningssyntese med den tilsvarende amin eller ω-ami- I noalkylamino eller ω-guanidinoalkylamin, idet eventuelt 13 DK 175344 B1 tilstedeværende, yderligere, funktionelle grupper kan beskyttes midlertidigt på kendt måde.

En yderligere fremgangsmåde til fremstilling af peptider med en ω-aminoalkylgruppering er beskrevet i DE patent-5 ansøgning nr. P.36.35.670.0.

Peptiderne ifølge opfindelsen syntetiseres fortrinsvis under anvendelse af fastfaseteknikken efter 2 generelle beskyttelsesgruppetaktikker:

Syntesen sker med en automatisk peptidsyntetisator 10 model 430 A fra firma Applied Biosystems under anvendelse af Boc- eller Fmoc-beskyttelsesgrupper til midlertidig blokering af a-aminogruppen.

Ved anvendelsen af Boc-beskyttelsesgruppen benyttes til syntesen de af fabrikanten af apparaturet i forvejen 15 programmerede syntesecyklusser.

Syntesen af peptiderne med en fri carboxylgruppe ved den C-terminale ende sker på en med den tilsvarende Boc-aminosyre funktionaliseret 4-(hydroxymethyl)-phenylacetamido-methylpolystyrenharpiks (R.B. Merrifield, J. Org. Chem. 43.

20 2845 (1978)) fra firma Applied Biosystems. Til fremstillingen af peptidamiderne anvendes en MBHA-harpiks fra samme firma.

Som aktiveringsreagenser tjener N,N1-dicyclohexylcar-bodiimid eller N,N'-diisopropylcarbodiimid. Aktviveringen sker som symmetrisk anhydrid, som HOBt-ester eller HOObt-25 ester i CH2CI2/ blandinger af CH2Cl2 og DMF eller NMP. Til koblingen anvendes 2-4 ækvivalenter aktiveret aminosyrederi-vat. I de tilfælde, hvor koblingen forløber ufuldstændigt, gentages reaktionen.

Ved anvendelsen af Fmoc-beskyttelsesgruppen til mid-30 lertidig beskyttelse af α-aminogruppen anvendes til syntesen med den automatiske peptidsyntisator model 430A fra firma Applied Biosystems egne synteseprogrammer. Syntesen sker på en p-benzyloxybenzylalkoholharpiks (S. Wang, J.Am.Chem.

Soc. £5, 1328 (1973)) fra firma Bachem, som ved en kendt 35 metode (E. Atherton et al., J.C.S. Chem. Comm. 1981, 336) er forestret med den tilsvarende aminosyre. Aktiveringen af I DK 175344 B1 I 14 aminosyrederivaterne som HOBt- eller HOObt-ester sker direkte i den af apparaturfabrikanten leverede aminosyrepatron ved

tilsætning af en opløsning af diisopropylcarbodiimid i DMF

til den i forvejen indvejede blanding af aminosyrederivat 5 og HOBt eller HOObt. Anvendes kan ligeledes i substans frem- stillede Fmoc-aminosyre-OObt-estere, således som de er be- skrevet i EP patentansøgning nr. 87.107.634.5. Fraspaltningen af Fmoc-beskyttelsesgruppen sker med en 20%'s opløsning af piperidin i DMF i reaktionsbeholderen. Det anvendte overskud 10 af reaktivt aminosyrederivat andrager 1,5-2,5 ækvivalenter.

H Hvis koblingen ikke er fuldstændig, gentages den som ved

Boc-metoden.

H De her omhandlede peptider har enkeltvis eller i kombination en bradykininantagonistisk virkning, som kan 15 afprøves ved forskellige modeller (se Handbook of Exp.

H Pharmacol., bind 25, Springer Verlag, 1970, side 53-55), H f.eks. på isoleret rotteuterus, på marsvineileum eller på H den isolerede pulmonalarterie fra marsvin.

Til afprøvningen af de her omhandlede peptider på H 20 den isolerede arteria pulmonalis dræbes marsvin (Dunkin

Hartley) med en vægt på 400-450 g ved nakkeslag.

Brystkassen åbnes og arteria pulmonalis udpræpareres forsigtigt. Det omliggende væv fjernes omhyggeligt, og arte- ria pulmonalis opskæres i spiralform i en vinkel på 45°.

I 25 Karstrimlerne med en længde på 2,5 cm og en bredde på 3-4 mm fikseres i et organbad, som rummer 10 ml, og som er fyldt med Ringer-opløsning.

Sammensætning af opløsningen i mmol/liter:

NaCl 154 30 KC1 5,6 I CaCl2 1,9 I NaHCOj 2,4

Glucose 5,0 1 35 Opløsningen gennembobles med 95% o2 og 5% C02 og I opvarmes til 37°C. pH-værdien andrager 7,4, og forbelastning- 15 DK 175344 B1 en på strimlerne andrager 1,0 g.

De isotoniske kontraktionsændringer opfanges med en løfteforsats og et HF-modem (vejmåleapparat) fra Hugo Sachs og registreres på en kompensationsskriver (BEC, Goerz metra-5 watt SE 460) .

Efter 1 times ækvilibrering påbegyndes forsøget.

Efter at karstrimlerne har nået deres maksimale følsomhed overfor 2 x 10-7 mol/liter bradykinin - bradykinin fører til en kontraktion af karstrimlerne - bringes peptiderne 10 til indvirkning i hver især 10 minutter i doser fra 5 x 10“ 3 til 1 x 10"5 mol/liter, og efter fornyet tilsætning af bradykinin sammenlignes nedgangen i effekten af bradykinin sammenlignet med kontrollen.

Til erkendelse af en delagonistisk virkning anvendes 15 peptiderne i doser fra 1 x 10"5 til 1 x 10"3 mol/liter.

De ud fra dosis-virkning-kurverne udregnede IC50-værdier for peptiderne ifølge opfindelsen er vist i tabel I.

20 25 1 35 I DK 175344 B1 I 16

Tabel τ

Forbindelse ifølge eksempel ic50 ΓΜ1 I 1 4.6 x 10* 3 2.1 x 10* 5 4 1.2 x10* I 5 2.4 x 10* 6 2.5 x 10‘7 7 3.7 x 10* 8 1.9 x 10'7 9 4.6 x 10* I 10 13 6.0x10* 19 3.4 x 10* 23 4.8 x 107 24 1.1 x 10* 27 2.5 x 10* 29 3.7 X 10‘7 38 6.0 X 10* 39 1.7x10* I 44 3.9 x 10'7 I 45 4.8 x 10’7 47 1.7 x 10’7 48 9.5 x 10* 54 8.9 x 10* I 20 56 8.0 x 10'7 57 6.2 x 10*.

I 58 2.6 x 10* 59 5.4 x 10* I 60 4.2 x 10* 64 6.8 x 10* I 25 67 6·4 x ΐσβ 72 1.8x10* 73 3.0 X 10* 74 4.8 X 10*

75 3.0 x 10* I

76 3.2 x 10'7 I

77 7.0 x 10* I

30 78 2.5 x 10‘7 I

79 3.5 X 10* I

35 I

17 DK 175344 B1

Tabel I (fortsat)

Forbindelse ifølge eksempel IC50 fMl 159 7.8x 10·® 162 7.2 x 10"7 5 165 3.0x 10·® 166 4.6x10·® 167 2.8x 1 O*7 168 3.2x 10'7 169 2.0 x 10'7 170 6.8 x 10"® 171 5.0 x10'5 10 172 1.8 ΧΙΟ-6 173 2.6 x 10'5 174 1.3x10·® 175 1.7x10*® 176 3.6 x 10®* 177 1.1 x 10‘7 15 178 1.3 x 10’7 179 1.8 x 10’7 180 1.8 x 10"7 181 2.4 x 10‘7 182 2.9 x 10*7 183 8.0 x 10"® 184 2.3x 10·® 20 185 4.4 x 10·® 186 3.2 x 10*7 187 3.4 x 10’7 188 1.6x10·® 189 6.6 x 10’9 190 1.2x10·® 25 191 1.5 x 10‘7 192 8.9 x ΙΟ"® 194 4.2x 10-® 1 35 I DK 175344 B1 I 18

Den terapeutiske udnyttelse af de her omhandlede I

H peptider omfatter alle patologiske tilstande, som formidles, I

udløses eller understøttes af bradykinin eller med bradykinin I

beslægtede peptider. Disse tilstande omfatter bl.a. trauma- I

5 tiske tilstande, såsom sar, forbrændinger, eksem, erythemer, I

ødemer, angina, arthritis, astma, allergier, rhinitis, chok, betændelser, lavt blodtryk, smerte, irriterende kløe og ændret spermamotilitet,

Opfindelsen angår derfor tillige anvendelsen af pepti- H 10 der med formel I som lægemidler og pharmaceutiske præparater, som indeholder disse forbindelser.

Pharmaceutiske præparater indeholder en virksom mængde af det aktive stof med formel I, enkeltvis eller i kombinati- on, sammen med et uorganisk eller organisk, pharmaceutisk 15 anvendeligt bærerstof.

Anvendelsen kan ske enteralt, parenteralt, f.eks.

subkutant, intramuskulært eller intravenøst, sublingualt, epicutant, nasalt, rectalt, intravaginalt, intrabuccalt eller ved inhalering. Doseringen af det aktive stof afhænger af 20 arten af varmblodet dyr, legemsvægten, alderen og tilførsel- I måden.

De pharmaceutiske præparater ifølge opfindelsen frem- stilles ved i sig selv kendte opløsnings-, blandings-, granu- H lerings- eller drageringsmetoder.

25 Til den orale anvendelsesform eller til påføring på H slimhuden blandes de aktive forbindelser med de dertil gængse I tilsætningsstoffer, såsom bærerstoffer, stabilisatorer eller I indifferente fortyndingsmidler, og bringes ved gængse metoder I på egnede indgivelsesformer, såsom tabletter, drageer, stik- 30 kapsler, vandige, alkoholiske eller oliebaserede suspensioner eller vandige, alkoholiske eller oliebaserede opløsninger.

Som indifferente bærerstof fer ,kan f.eks. anvendes gummiarabi- cum, magnesiumoxid, magnesiumcarbonat, kaliumphosphat, mælke- I sukker, glucose, magnesiumstearylfumarat eller stivelse, I 35 især majsstivelse. Derved kan tilberedningen ske både som I tør- og fugtiggranulat. I betragtning som oliebaserede bærer- 19 DK 175344 B1 stoffer eller opløsningsmidler kommer f.eks. vegetabilske eller animalske olier, såsom solsikkeolie og levertran.

Et præparat til topisk anvendelse kan foreligge som vandig eller oliebaseret opløsning, lotion, emulsion eller 5 gele, salve eller fastsalve eller, om muligt, i sprayform, idet hæftningen eventuelt kan forbedres ved tilsætning af en polymer.

Til den intranasale anvendelsesform blandes forbindelserne med de dertil gængse tilsætningsstoffer, såsom stabili-10 satorer eller indifferente fortyndingsmidler, og bringes ved gængse metoder på egnede indgivelsesformer, såsom vandige, alkoholiske eller oliebaserede suspensioner eller vandige, alkoholiske eller oliebaserede opløsninger. Til vandige, intranasale præparater kan der sættes chelatdannere, ethylen-15 diamin-Ν,Ν,Ν',N'-tetraeddikesyre, citronsyre, vinsyre eller salte deraf. Påføringen af nasalopløsningerne kan ske ved hjælp af dosisforstøvere eller som næsedråber med en viskositet s forøgende andel af henholdsvis næsegel eller næsecreme.

I Til anvendelse ved inhalering kan der benyttes forstø- I 20 vere eller trykgaspakninger under anvendelse af indifferente I bærergasser.

I Til intravenøs, subcutan, epicutan eller intradermal I anvendelse bringes de aktive forbindelser eller fysiologisk I acceptable salte deraf i opløsning, suspension eller emul- I 25 sion, om ønsket sammen med de farmaceutisk gængse hjælpestof- I fer, f.eks. til isotonisering eller pH-værdiindstilling samt I opløsningsformidlere, emulgatorer eller andre hjælpestoffer.

I På grund af de korte halveringstider for nogle af de I beskrevne lægemidler i legemsvæsker er anvendelsen af in- I 30 jicerbare retardpræparater på sin plads. Som lægemiddel- I former kan der f.eks. anvendes oliebaserede krystalsuspensi- I oner, mikrokapsler, stænger eller implantater, idet disse I sidstnævnte kan være opbygget af vævsforenelige polymere, I især bionedbrydelige polymere, f.eks. på basis af polymælke- I 35 syre-polyglycolsyre-copolymere eller humanalbumin.

I Et egnet dosisområde for topiske anvendelsesformer I DK 175344 B1 20 H eller anvendelsesformer til inhalering er opløsninger med H 0,01-5 mg/ml, og ved systemiske anvendelsesformer er 0,01- 10 mg/kg egnet.

5 Liste over forkortelser

De for aminosyrer anvendte forkortelser svarer til den i peptidkemien gængse trebogstavkode, således som den H er beskrevet i Europ. J. Biochem. 138, 9 (1984). Yderligere H anvendte forkortelser er angivet i det følgende 10 Acm Acetamidomethyl e-Ahx e-Aminohexanoyl

Aoc cis-endo-2-Azabicyclo(3,3,0]octan-3-S-carbonyl I

Boc tert-Butyloxycarbonyl I

But tert-Butyl 15 Bzl Benzyl

Cl-Z 4-Chlorbenzyloxycarbonyl I

H DMF Dimethylformamid I

Dnp 2,4-Dinitrophenyl I

Fmoc 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl I

20 Me Methyl I

4-Mebzl 4-Methylbenzyl I

Mtr 4-Methoxy-2,3,6-trimethylphenylsulfonyl I

Mts Mesitylen-2-sulfonyl I

NMP . N-Methylpyrrolidin I

25 Oic cis-endo-0ctahydroindol-2-carbonyl I

Opr Isoxazolidin-3-ylcarbonyl I

I Pmc 2,2,5,7,8-Pentamethylchroman-6-sulfonyl I

TFA Trifluoreddikesyre I

I Tes 4-Methylphenylsulfonyl I

I 30 Thia 2-Thienylalanyl I Tic 1,2,3,4-Tetrahydroisoguinolin-3-ylearbonyl

I Trt Trityl I

I De efterfølgende eksempler skal tydeliggøre de fore- I

trukne metoder til fastfasesyntese af de her omhandlede I

I 35 peptider, uden at opfindelsen skal være begrænset hertil. I

Der er anvendt følgende aminosyrederivater: I

21 DK 175344 B1

Fmoc-Arg (Mtr) -OH, Boc- (D) -Arg-OH, Fmoc-Arg (Pmc) -OH, Fmoc-Hyp-OH, Fmoc-Pro-OObt, Fmoc-Gly-OObt, Fmoc-Phe-OObt, Fmoc-Ser(tBu)-OObt, Fmoc-(D)-Tic-OH, Fmoc-Gln-OH, Fmoc-Aoc-OH, Fmoc-Thia-OH, Fmoc-Opr-OH, Fmoc-(D)-Asn-OH, Fmoc-E-Ala-OH, 5 Fmoc-Oic-OH.

Eksempel 1

H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Phe-Arg-OH

Opbygges trinvis med en syntetisator model 430A fra 10 firma Applied Biosystems under anvendelse af Fmoc-metoden på en med Fmoc-Arg (Mtr)-OH forestret p-benzyl oxybenzyl al kohol harpiks fra firma Novabiochem (belastning ca. 0,5 mmol/g harpiks). Der anvendes 1 g af harpiksen, og syntesen gennemføres ved hjælp af et til Fmoc-metoden modificeret syntese-15 program.

I patronen på syntetisatoren indvej es 1 mmol af hver af aminosyrederivaterne med fri carboxylgruppe sammen med 0,95 mmol HOObt. Foraktiveringen af disse aminosyrer sker direkte i patronerne ved opløsning i 4 ml DMF og tilsætning 20 af 2 ml af en 0,55 M opløsning af diisopropylcarbodiimid i DMF.

HOObt-estrene er de andre aminosyrer opløses i 6 ml NMP og kobles derefter ligesom de in situ foraktiverede aminosyrer på den i forvejen med 20% piperadin i DMF afbloke-25 rede harpiks. Efter endt syntese fraspaltes peptidet fra harpiksen under samtidig fjernelse af sidekædebeskyttelses-grupperne med trifluoreddikesyre under anvendelse af thioani-sol og ethandithiol som kationindfangende middel. Den efter fjernelse af trifluoreddikesyren opnåede remanens digereres 30 flere gange med ethylacetat og centrifugeres. Den tilbageblivende remanens chromatograferes på "Sephadex® LH20" med 10%'s eddikesyre. De fraktioner, som indeholder det rene peptid, forenes og frysetørres.

MS(FAB): 1294 (M+H).

35 Peptiderne i nedenstående eksempler 2-24 er blevet fremstillet og renset analogt med eksempel l.

I DK 175344 B1 I

I 22 I

I Eksempel 2 I

I H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-(D)-Ser-(D)-Tic-Phe-Arg-OH. I

MS(FAB): 1294 (M+H) I

I 5 Eksempel 2 I

I H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Thia-Arg-OH. I

MS(FAB): 1306 (M+H). ' I

Eksempel 4 I

I 10 H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Phe-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1294 (M+H). I

I Eksempel S I

I H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Gi n -(D)-Tic-Phe-Arg-OH. I

I 15 MS(FAB): 1335 (M+H). I

Eksempel 6 I

I H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Pro-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1244 (M+H). I

I 20 I

I Eksempel 7 I

I H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Trp-(D)-Tic-Phe-Arg-OH. I

MS(FAB): 1393 (M+H). I

25 Eksempel 8 I

H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Pro-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1250 (M+H). I

Eksempel 9 I

I 30 H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-(D)-Asn-(D)-Tic-Thia-Arg-OH. I

MS(FAB): 1333 (M+H). I

I Eksempel 10 I

I H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Opr-(D)-Tic-Thia-Arg-OH. I

I 35 MS(FAB): 1301 (M+H). I

^.....-tæ^ ......................................

DK 175344 B1 23

Eksempel 11 H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-(D)-Gin-(D)-Tic-Thia-Arg-OH.

MS(FAB): 1347 (M+H).

5 Eksempel 12 H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Pro-Arg-OH.

MS(FAB): 1307 (M+H).

Eksempel 13 10 H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Pro-Phe-OH.

MS(FAB): 1241 (M+H).

Eksempel 14 H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Pro-Phe-Arg-OH.

15 MS(FAB): 1397 (M+H).

Eksempel 15 H- (D) -Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-S-Ala- (D) -Tic-Pro-Arg-OH.

MS(FAB): 1321 (M+H).

20

Eksempel 16 H- (D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Gly-(D)-Tic-Pro-Arg-OH.

MS(FAB): 1220 (M+H).

25 Eksempel 17 H-(D)-Arg-Arg-Aoc-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Thia-Arg-OH.

MS(FAB): 1330 (M+H).

Eksempel 18 30 H-(D)-Arg-Arg-Pro-Aoc-Gly-Thia-Ser-(D) -Tic-Thia-Arg-OH.

MS(FAB): 1330 (M+H).

Eksempel 19 H- (D) -Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser- (D) -Tic-Aoc-Arg-OH.

35 MS(FAB): 1290 (M+H).

I DK 175344 B1 I

I 24

I Eksempel 20 I

I H-(D)-Arg-Arg-Opr-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Pro-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1236 (M+H). I

I 5 Eksempel 21 I

I H-(D)-Arg-Arg-Pro-Opr-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Pro-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1236 (M+H). I

I Eksempel 22 I

I 10 H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Opr-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1252 (M+H). I

I Eksempel 23 I

I H-(D)-Arg-(D)-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I 15 MS(FAB): 1290 (M+H). I

I Eksempel 24 I

I H- (D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1290 (M+H). I

I 20 I

I Eksempel 25-27 I

I H-(D)-Arg-Arg(Mtr)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Phe-Arg-OH I

I og I

I H- (D) -Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser- (D) -Tic-Phe-Arg (Mtr) -OH I

I 25 og I

I H-(D)-Arg-Arg (Mtr)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Phe-Arg (Mtr) - I

I OH I

I Fremstilles analogt med eksempel 1, idet fraspaltning- I

I en af sidekædebeskyttelsesgrupperne og peptidet fra harpiksen I

I 30 ved hjælp af trifluoreddikesyre indskrænkes til 30 minutter I

I ved stuetemperatur. Under de således valgte betingelser I

I finder der kun en negligerbar fraspaltning af Mtr-beskyttel- I

I sesgruppen ved arginin sted. De delvist afblokerede peptider I

I adskilles og renses ved chromatografi på omvendt-fase-mate- I

I 35 riale. I

25 DK 175344 B1 25: H- (D) -Arg-Arg(Mtr)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Phe-

Arg-OH.

MS(FAB): 1506 (M+H).

26: H- (D)-Arg-Arg(Mtr)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Phe- 5 Arg(Mtr)-OH.

MS(FAB): 1718 (M+H).

27: H - (D) - Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser- (D) -Tic-Phe-

Arg (Mtr) -OH.

MS(FAB): 1506 (M+H).

10 Peptiderne i de efterfølgende eksempler 28-31 fremstilles og renses analogt med eksemplerne 25-27.

Eksempel 28 H-(D)-Arg-Arg(Mtr)-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Pro-Arg-OH.

15 MS(FAB): 1462 (M+H).

Eksempel 29 H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Pro-Arg(Mtr)-OH. MS(FAB): 1462 (M+H).

20

Eksempel 30 H-(D)-Arg-Arg(Mtr)-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Pro-Phe-OH. MS(FAB): 1453 (M+H).

25 Eksempel 31 H-(D)-Arg-Arg(Mtr)-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH. MS(FAB): 1502 (M+H).

Eksempel 32 30 H-(D)-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Phe-NH-(CH2)4-NH2 ·

Peptidsyntesen sker på 1 g af en aminomethylharpiks, som er modificeret med en i EP offentliggørelsesskrift nr. 264.802 beskrevet ankergruppe af typen

/C=C

35 Fmoc-NH- (CH2)4-NH-C0-0-CH2-C^ ^t-0-CH2-CO-

I DK 175344 B1 I

I 26 I

I under anvendelse af Fmoc-aminosyre-OObt-estere med en automa- I

I tisk peptidsyntetisator (model 430A fra firma Applied Biosy- I

I stems) og selvmodificerede synteseprogrammer. Dertil indvejes I

I 1 mmol af det tilsvarende aminosyrederivat i de af fabrikan- I

I 5 ten leverede patroner, og Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Fmoc-Hyp-OH og I

I Fmoc-(D)-Tic-OH indvejes i patronerne sammen med 0,95 mmol I

I HOObt. Foraktiveringen in situ af disse aminosyrer sker I

I direkte i patronerne ved opløsning i 4 ml DMF og tilsætning I

I af 2 ml af en 0,55 M opløsning af diisopropylcarbodiimid i I

I 10 DMF. HOObt-estrene af de andre aminosyrer opløses i 6 ml NMP I

I og kobles derefter ligesom de in si tu foraktiverede aminosy- I

I rer på den i forvejen med 20% piperadin i DMF af blokerede I

I harpiks, idet de in situ aktiverede aminosyrer kobles dob- I

I belt. Efter syntese fraspaltes peptid-4-aminobutylamidet I

I 15 fra harpiksen under samtidig fjernelse af sidekædebeskyttel- I

I sesgrupperne med trifluoreddikesyre, som indeholder thioani- I

I sol og m-cresol som kationopfangende midler. Den efter fjer- I

I nelse af trifluoreddikesyren opnåede remanens digereres flere I

I gange med ethylacetat og centrifugeres. Den tilbageblivende I

I 20 remanens chromatograferes på "Sephadex® G25" med IN eddi- I

I kesyre. De fraktioner, som indeholder det rene peptid, for- I

I enes og frysetørres. I

I Analogt med eksempel 32 fremstilles forbindelser i I

I eksemplerne 33-35. I

I 25 I

I Eksempel 33 I

I H-D-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Phe-NH-(CH2)4-NH2· I

I MS(FAB): 1208 (M+H). I

I 30 Eksempel 34 I

I HOOC- (CH2) 2 -CO-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser- (D) -Tic-Phe-NH- (CH2) 4- I

I NH2. MS(FAB): 1152 (M+H). I

I Eksempel 35 I

I 35 HOOC-(CH2 ) 2-CO-(D)-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Phe-NH- I

I (CH2)4-NH2. MS(FAB): 1308 (M+H). I

^-: .« ! ':;t<rjff,;jt ................................................ ι· DK 175344 B1 27

Eksemplerne 36-161 syntetiseres ved den i eksempel 1 beskrevne metode.

Eksempel 36 5 H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-Gly-(D)-Tic-Pro-Arg-OH.

MS(FAB): 1307 (M+H).

Eksempel 37 H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-Gly-(D)-Tic-Pro-Arg-OH.

10 MS(FAB): 1307 (M+H).

Eksempel 38 H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Pro-Phe-OH.

MS(FAB): 1241 (M+H).

15

Eksempel 39 H- (D) -Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-S-Ala- (D) -Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1361 (M+H).

20 Eksempel 40 H- (D) -Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-S-Ala- (D) -Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1361 (M+H).

Eksempel 41 25 H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Pro-Phe-Arg-OH.

MS(FAB): 1397 (M+H).

Eksempel 42 H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Pro-Phe-Arg-OH.

30 MS(FAB): 1397 (M+H).

Eksempel 43 H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Gly-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1260 (M+H).

35

I DK 175344 B1 I

I 28 I

I Eksempel 44 I

I H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Gly-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1260 (M+H). I

I 5 Eksempel 45 I

I H-(D)-Arg-(D)-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I MS(PAB): 1290 (M+H). I

I Eksempel 46 I

I 10 H-(D)-Arg-(D)-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1290 (M+H). I

I Eksempel 47 I

I H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Tic-Arg-OH. I

I 15 MS(FAB): 1312 (M+H). I

I Eksempel 48 I

I H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Tic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1312 (M+H). I

I 20 I

I Eksempel 49 I

I H-(D)-Arg-Arg-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1274 (M+H). I

I 25 Eksempel 50 I

I H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-(D) -Tic-Aoc-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1203 (M+H). I

I Eksempel 51 I

I 30 H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Aoc-Ser-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1274 (M+H). I

I Eksempel 52 I

I H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-S-Ala-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I 35 MS(FAB): 1274 (M+H). I

Eksempel 53 H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-fi-Ala-(D) -Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1274 (M+H).

29 DK 175344 B1 5 Eksempel 54 H- (D) -Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Asp-Ser- (D) -Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1252 (M+H).

Eksempel 55 10 H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Asp-Ser-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1252 (M+H).

Eksempel 56 H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Trp-Ser-(D) -Tic-Aoc-Arg-OH.

15 MS(FAB): 1323,7 (M+H).

Eksempel 57 H-(D)-Tyr-Arg-Pro-Hyp--Gly-Thia-Ser- (D) -Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1297,7 (M+H).

20

Eksempel 58 H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D) -Tic-(D)-Oic-Arg-OH. MS(FAB): 1304,6 (M+H).

25 Eksempel 59 H- (D) -Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser- (D) -Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1304,6 (M+H).

Eksempel 60 30 H-(D)-Arg-Arg-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-(D) -Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1289 (M+H).

Eksempel 61 H-(D)-Arg-Lys-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D) -Tic-Aoc-Arg-OH.

35 MS(FAB): 1262 (M+H).

I DK 175344 B1 I 30

Eksempel 62 I H-(D)-Arg-Lys-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH.

I MS(FAB): 1276 (M+H) .

I 5 Eksempel 63 I H-(D)-Arg-Lys-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH.

I MS(FAB): 1260 (M+H).

Eksempel 64 I

10 H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-(D.)-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1298 (M+H).

Eksempel 65 I

H-(D)-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH. I

I 15 MS(FAB): 1298 (M+H).

Eksempel 66 I

I H-(D)-Arg-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH.

I MS(FAB): 1282 (M+H).

I 20

I Eksempel 67 I

I H-(D)-Arg-Arg(N02)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1329,7 (M+H).

I 25 Eksempel 68 I

I H-(D)-Arg-Arg(N02)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH.

I MS(FAB): 1343 (M+H).

Eksempel 69 I

I 30 H- (D)-Arg-Arg(N02)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH. I

MS(FAB): 1327 (M+H).

I Eksempel 70 I

I H-(D)-Arg-Arg(N02)-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH

I 35 MS(FAB): 1333 (M+H).

Eksempel 71 H-(D)-Arg-Arg (N02)-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1349 (M+H).

31 DK 175344 B1 5 Eksempel 72 Η-Arg(Tos)-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1302 (M+H).

Eksempel 73 10 H-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1142 (M+H).

Eksempel 74 Η-Lys(-C0-NH-CgH5)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

15 MS(FAB): 1233 (M+H).

Eksempel 75 Η-Arg(Tos)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1296 (M+H).

20

Eksempel 76 Η-Lys(nicotinoyl)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1219 (M+H).

25 Eksempel 77 Η-Arg (Tos) -Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1282 (M+H).

Eksempel 78 30 Ac-Arg(Tos)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1324 (M+H).

Eksempel 79 H-D-Arg-Arg(Tos)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

35 MS(FAB): 1438 (M+H).

I DK 175344 B1

I 32 I

I Eksempel 80 I

I Η-Arg(Tos)-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1302 (M+H). I

I 5 Eksempel 81 I

I H-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1142 (M+H). I

Eksempel B2 I

I 10 Η-Lys(-CO-NH-CgH5)-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1233 (M+H). I

I Eksempel 83 I

I Η-Arg(Tos)-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I 15 MS(FAB): 1296 (M+H). I

Eksempel 84 I

I Η-Lys(nicotinoyl)-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1219 (M+H). I

20 I

I Eksempel 85 I

I Η-Arg(Tos)-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1282 (M+H). I

I 25 Eksempel 86 I

Ac-Arg(Tos)-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1324 (M+H). I

I Eksempel 87 I

I 30 H-D-Arg(Tos)-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1438 (M+H). I

I Eksempel 88 I

I Η-Arg(Tos)-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I 35 MS(FAB): 1286 (M+H). I

Eksempel 89 H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1126 (M+H).

33 DK 175344 B1 5 Eksempel 90 Η-Lys(-CO-NH-C6H5)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1217 (M+H).

Eksempel 91 10 H-Arg(Tos)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1280 (M+H).

Eksempel 92 Η-Lys(Nicotinoyl)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

15 MS(FAB): 1203 (M+H).

Eksempel 93 Η-Arg(Tos)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1266 (M+H).

20

Eksempel 94

Ac-Arg(Tos)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1308 (M+H).

25 Eksempel 95 H-D-Arg-Arg(Tos)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1422 (M+H).

Eksempel 96 30 H-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1148 (M+H).

Eksempel 97 Η-Lys (-CO-NH-C5H5)-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

35 MS(FAB): 1239 (M+H).

I DK 175344 B1 I

I 34 I

I Eksempel 98 I

I H-Lys(nicotinoyl)-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1225 (M+H). I

I 5 Eksempel 99 I

I Η-Arg(Tos)-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1288 (M+H). I

I Eksempel 100 I

I 10 Ac-Arg(Tos)-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1330 (M+H). I

I Eksempel 101 I

I H-D-Arg-Arg(Tos)-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I 15 MS(FAB): 1444 (M+H). I

I Eksempel 102 I

I H-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1148 (M+H). I

I 20 I

I Eksempel 103 I

I Η-Lys (-CO-NH-C5H5)-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1239 (M+H). I

I 25 Eksempel 104 I

I Η-Lys(nocotinoyl)-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1225 (M+H). I

I Eksempel 105 I

I 30 Η-Arg (Tos)-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1288 (M+H). I

I Eksempel 106 I

I Ac-Arg (Tos)-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I 35 MS(FAB): 1330 (M+H). I

DK 175344 B1 "" 1 ........................................................

35

Eksempel 107 H-D-Arg-Arg(Tos)-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1440 (M+H).

5 Eksempel 108 Η-Lys (-CO-NH-C5H5)-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. MS(FAB): 1225 (M+H).

Eksempel 109 10 Η-Lys(nicotinoyl)-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1209 (M+H).

Eksempel 110 Η-Arg(Tos)-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

15 MS(FAB): 1272 (M+H).

Eksempel 111

Ac-Arg(Tos)-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1314 (M+H).

20

Eksempel 112 H-D-Arg-Arg(Tos)-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1428 (M+H).

25 Eksempel 113 H-D-Arg-Lys(nicotinoyl)-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1365 (M+H).

30 Eksempel 114 H-D-Arg-Lys (-CO-NH-CgH5) -Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1379 (M+H). 1 -.----- ^ I DK 175344 B1

I 36 I

I Eksempel 115 I

I H-D-Arg-Arg(Tos)-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

MS(FAB): 1442 (H+H). I

I 5 Eksempel 116 I

H-Lys-Lys-(nicotinoyl)-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1337 (M+H).

Eksempel 117 I

10 H-Lys-Lys (-CO-NH-CgH5)-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1351 (M+H). I

Eksempel 118 I

H-Lys-Arg(Tos)-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I 15 MS(FAB): 1414 (M+H). I

Eksempel 119 I

H-D-Arg-Lys(nicotinoyl)-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg- I

I OH.

I 20 MS(FAB): 1381 (M+H).

Eksempel 120 I

I H-D-Arg-Lys- (CO-NH-C5H5) -Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg- I

OH.

25 MS(FAB): 1395 (M+H).

I Eksempel 121 I

H-D-Arg-Arg(Tos)-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1458 (M+H).

I 30

Eksempel 122 I H-Lys-Lys (-CO-NH-C6H5)-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg- I OH.

MS(FAB): 1367 (M+H).

I 35

Eksempel 123 H-Lys-Lys (nicotinoyl) -Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1353 (M+H).

37 DK 175344 B1 5 Eksempel 124 H-Lys-Arg-(Tos)-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1430 (M+H).

Eksempel 125 10 H-D-Arg-Lys (nicotinoyl)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1359 (M+H).

Eksempel 126 15 H-D-Arg-Lys-(CO-NH-C6H5)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1373 (M+H).

Eksempel 127 20 H-D-Arg-Arg(Tos)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1436 (M+H).

Eksempel 128 H-Lys-Lys(nicotinoyl)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

25 MS(FAB): 1331 (M+H).

Eksempel 129, H-Lys-Lys- (C0-NH-CgH5) -Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1345 (M+H).

30

Eksempel 130 H-Lys-Arg-(Tos)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1408 (M+H).

35

I DK 175344 B1 I

I 38 I

I 'Eksempel 131 I

I H-D-Arg-Lys (nicotinoyl)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg- I

I -OH. I

I MS(FAB): 1375 (M+H). I

I 5 I

I Eksempel 132 I

I H-D-Arg-Lys(-CO-NH-C5H5)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg- I

I -OH. I

I MS(FAB): 1389 (M+H). I

1 10 I

I Eksempel 133 I

I H-D-Arg-Arg(Tos)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1452 (M+H). I

I 15 Eksempel 134 I

I H-Lys-Lys(nicotinoyl)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1347 (M+H), I

I Eksempel 135 I

I 20 H-Lys-Lys (-CO-NH-CgHs)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1361 (M+H). I

I Eksempel 136 I

I H-Lys-Arg(Tos)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I 25 MS(FAB): 1424 (M+H). I

I Eksempel 137 I

I H-D-Arg-Orn(nicotinoyl)-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg- I

I -OH. I

I 30 MS(FAB): 1351 (M+H). I

I Eksempel 138 I

I H-D-Arg-Orn (-CO-NH-C5H5)-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg- I

I OH. I

I 35 MS(FAB): 1428 (M+H). I

Eksempel 139 H-Lys-Orn (nicotinoyl) -Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1323 (M+H).

39 DK 175344 B1 5 Eksempel 140 H-Lys-Orn(-CO-NH-C5H5) -Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. MS(FAB): 1337 (M+H).

Eksempel 141 10 H-D-Arg-Orn(nicotinoyl) -Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1367 (M+H).

Eksempel 142 15 H-D-Arg-Orn(-CO-NH-CgH5) -Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg- OH.

MS(FAB): 1381 (M+H).

Eksempel 143 20 H-Lys-Orn (nicotinoyl) -Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. MS(FAB): 1339 (M+H).

Eksempel 144 H-Lys-Orn (-CO-NH-CgHg) -Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

25 MS(FAB): 1353 (M+H).

Eksempel 145 H-D-Arg-Orn(nicotinoyl)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

30 MS(FAB): 1345 (M+H).

Eksempel 146 H-D-Arg-Orn(-CO-NH-CgH5) -Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

35 MS(FAB): 1359 (M+H).

I DK 175344 B1 I

I 40 I

I Eksempel 147 I

I H-Lys-Orn(nicotinoyl)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1317 (M+H). I

I 5 Eksempel 148 I

I H-Lys-Orn (-CO-HN-C6H5)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1331 (M+H). I

I Eksempel 149 I

10 H-D-Arg-Orn (nicotinoyl)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg- I

1 OH. I

I MS(FAB): 1361 (M+H). I

I Eksempel 150 I

I 15 H-D-Arg-Orn(CO-NH-CgHg)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg- I

1 OH. I

I MS(FAB): 1375 (M+H). I

I Eksempel 151 I

I 20 H-Lys-Orn(nicotinoyl)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1333 (M+H). I

I Eksempel 152 I

I H-Lys-Orn (-CO-NH-CgHg)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I

I 25 MS(FAB): 1347 (M+H). I

I Eksempel 153 I

I H-Lys-Lys-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1218 (M+H). I

I 30 I

I Eksempel 154 I

I H-Lys-Lys-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH. I

I MS(FAB): 1234 (M+H). I

I 35 I

Eksempel 155 H-Lys-Lys-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1234 (M+H).

DK 175344 B1 41 5 Eksempel 156 H-Lys-Lys-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1212 (M+H).

Eksempel 157 10 H-Lys-Lys-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1228 (M+H).

Eksempel 158 H-Lys-Lys-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH.

15 MS(FAB): 1232 (M+H).

Eksempel 159 H-Lys-Lys-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1248 (M+H).

20

Eksempel 160 H-Lys-Lys-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1226 (M+H).

25 Eksempel 161 H-Lys-Lys-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1242 (M+H).

Eksemplerne 162-164 fremstilles analogt med eksempel 30 32 under anvendelse af den i EP offentliggørelsesskrift nr.

322.348 beskrevne harpiks med strukturen 35 I DK 175344 B1 I 42 I Fmoc-NH 0CH3 I 5 ^Hs c-0 H NH l CH2 il

H 1 λ I

(Polystyren)

Eksempel 162 I H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-NH2· I MS(FAB): 1283 (M+H).

I 15

Eksempel 163 I

H-D-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-NH2· I MS(FAB): 1283 (M+H).

20 Eksempel 164 H-D-Arg-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-NH2.

I MS(FAB): 1267 (M+H).

Forbindelserne i eksempel 165-194 fremstilles analogt med eksempel 1.

25 I Eksempel 165 I H-D-Arg-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1267 (M+H).

30 Eksempel 166 I H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

I MS(FAB): 1284 (M+H).

I Eksempel 167 I 35 H-D-Arg-Lys(Z)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

I MS(FAB): 1390,7 (M+H).

43 DK 175344 B1

Eksempel 168 H-D-Arg-Lys-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1256,7 (M+H).

5 Eksempel 169 H-D-Arg-Ser(Rha)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1361 (M+H).

Eksempel 170 10 H-D-Arg-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-D-Tic-AoC“D-Ser(Rha)-OH.

MS(FAB): 1345 (M+H).

Eksempel 171 H-D-Arg-Arg(Tos)-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Aoc-Arg(Mtr)-OH.

15 MS(FAB): 1650,7 (M+H).

Eksempel 172 H-D-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-D-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1290 (M+H).

20

Eksempel 173 H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-D-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1304,7 (M+H).

25 Eksempel 174 H-D-Arg-Arg-APro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1302,7 (M+H).

Eksempel 175 30 H-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1304,7 (M+H).

Eksempel 176 4 -Hydroxyphenylpropionyl-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-35 Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1452,7 (M+H).

I DK 175344 B1 I

I 44 I

I Eksempel 177 I I H-D-Arg-D-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I I MS(FAB): 1304,7 (M+H). I

I 5 Eksempel 178 I I H-D-Arg-Arg-D-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I I MS(FAB): 1304,6 (M+H). ' I

I Eksempel 179 I I 10 H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-D-Arg-OH. I I MS(FAB): 1304,9 (M+H). I

I Eksempel 180 I I H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-D-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I I 15 MS(FAB): 1304,8 (M+H). I

I Eksempel 181 I I H-D-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I I MS(FAB): 1148 (M+H). I

I 20 I

I Eksempel 182 I I H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-OH. I I MS(FAB): 1147 (M+H). I

I 25 Eksempel 183 I I H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-D-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I I MS(FAB): 1304,7 (M+H). I

I Eksempel 184 I I 30 Ac-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH. I I MS(FAB): 1346,9 (M+H). I

I Eksempel 185 I

I H-D-Arg-Arg(Mtr)-Hyp-Pro-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Pro-Phe-OH. I

I 35 MS(FAB): 1454,9 (M+H). I

· -'-·' r«-.—*%- ^I^^IMig.^W?I « I 11 — Il IIIH^HI W—ΙΙ·Ι·Ι·· DK 175344 B1 45

Eksempel 186 H-D-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-Gly-D-Tic-D,L-Oic-Arg-OH.

MS (FAB) : 1274 (M+H) .

5 Eksempel 187 H-D-Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thia-S-Ala-D-Tic-Aoc-Arg-OH.

MS(FAB): 1354,6 (M+H).

Eksempel 188 10 H-D-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB) : 1142,5 (M+H).

Eksempel 189 (4-Benzoyl)phenoxyacetyl-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-15 -Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1542,6 (M+H).

Eksempel 190 H- ( (4-Benzoyl)benzyol)-Lys-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-20 D-Tic-Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1640,9 (M+H).

Eksempel 191 H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Cys-D-Tic-Oic-Arg-OH.

25 MS(FAB): 1320,7 (M+H).

Eksempel 192 H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-(3aR,7aS)Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1304,7 (M+H).

30

Eksempel 193 H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-(3aS,7aR)Oic-Arg-OH.

MS(FAB): 1304,7 (M+H). 1

Eksempel 194 H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-NH2.

MS(FAB): 1147,6 (M+H).

DK 175344 B1 I

46 I

Eksempel 195 I

H-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-D-Tic-Oic-OH. I

Peptidet i eksempel 195 fremstilles analogt med eksem- I

pel 1, idet dog peptidet spaltes fra harpiksen på følgende H

5 måde: I

Peptidharpiksen foropkvældes i 10 minutter med en H

blanding af m-cresol :dichlormethan (1:2) (ca. 2 ml/g hatpiks) I

og blandes under omrøring med trimethylsilylbromid (ca. 0,8 I

ml/g harpiks). Der efterreageres i yderligere 1,5 time og I

10 filtreres derefter ned i iskold methyl-tert.butyl-ether I

gennem et glassugefilter. Det udfældede råpeptid frafiltre- I

res, vaskes med methyl-tert.butyl-ether og suges tørt. Råpep- I

tidet opløses i vand, den vandige opløsning ekstraheres med I

ethylacetat og derefter med ionbytter ("IRA 0,3" acetatform). I

15 Der frasuges fra ionbytteren, som eftervaskes med lidt vand. I

Filtratet frysetørres, og det således opnåede rårpeptid- I

acetat chromatograferes på "Sephadex® LH 20" med 10%'s eddi- I

kesyre. De råpeptidholdige fraktioner slås sammen og fryse- I

tørres. I

20 MS(FAB): 992,6 (M+H). I

25 I 1

Claims

1. Peptid, kendetegnet ved, at det har formel I A-B-C-E-F-K-(D)-Tic-G-M-F'-I (I), 5 hvor A betyder ai) hydrogen, (Cg-C8) -alkyl, (Cg-Cg) -alkanoyl, (Cg-C3)- alkoxycarbonyl eller (Cg-Cg)-alkylsulfonyl, hvor 1, 2 eller 3 hydrogenatomer i en af disse grupper 10 eventuelt er erstattet med 1, 2 eller 3 ens eller forskellige grupper fra rækken carboxy, amino, (Cg-C4)-alkyl, (Cg-C4)- alkylamino, hydroxy, (Cg-C4)-alkoxy, halogen, di-(Cg-C4)-alkylamino, carbamoyl, sulfamoyl, (Cg-C4)-alkoxycarbonyl, (Cg-Ci2)~aryl og (Cg-Cg2)-aryl-(C1-C5)-alkyl, eller 15 hvor et hydrogenatom i en af disse grupper eventuelt er erstattet med en gruppe fra rækken (Cg-Cg)-cycloalkyl, (Cg-C4)-alkylsulfonyl, (Cg-C4)-alkylsulfinyl, (Cg-Cg2)-aryl-(Cg-C4)-alkylsulfonyl, (Cg-Cg2)-aryl-(Cg-C4)-alkylsulfinyl, (Cg-C12) -aryloxy, (C3-C9)-heteroaryl og (C3-C9)-heteroaryloxy, 20 og 1 eller 2 hydrogenatomer er erstattet med 1 eller 2 ens eller forskellige grupper fra rækken carboxy, amino, (Cg-C4)-alkylamino, hydroxy, (Cg-C4)-alkoxy, halogen, di-(C1-C4)-alkylamino, carbamoyl, sulfamoyl, (Cg-C4)-alkoxycarbonyl, 25 (Cg-C12)-aryl og (C6-C12) -aryl-(Cg-C5) -alkyl, ag) (Cg-Cg)-cycloalkyl, eventuelt ved nitrogenatomet med (Ci"Cg)-alkyl eller (Cg-C12)-aryl substitueret carbamoyl, (c6"c12) _aryl» (C7-C13)-aryloyl, (Cg-C12)-arylsulfonyl, (C3-C9)-heteroaryl eller (Cg-C9)-heteroaryloyl, 30 idet de under ag) og a2) definerede grupper aryl, heteroaryl, aryloyl, arylsulfonyl og heteroaryloyl hver især eventuelt er substitueret med 1, 2, 3 eller 4 ens eller forskellige grupper fra rækken carboxy, amino, nitro, (Cg-C4)-alkylamino, hydroxy, (Cg-C4)-alkyl, (Cg-C4)-alkoxy, halogen, cyano, 35 di-(Cg-C4)-alkylamino, carbamoyl, sulfamoyl og (Cg-C4)-alkoxycarbonyl, eller ____ ____________ - J

48 I DK 175344 B1 I aj) en gruppe med formel II I R1 - N - CH - C - (II) I L I, II I R2 R3 O 5 hvor R* er defineret som A under a±) eller a2) , I R2 betyder hydrogen eller methyl, I R3 betyder hydrogen eller (C^-Cg)-alkyl, fortrinsvis I (Ci-C4)-alkyl, som eventuelt er monosubstitueret med amino, I 10 substitueret amino, hydroxy, carboxy, carbamoyl, guanidino, substitueret guanidino, ureido, mercapto, methylmercapto, I phenyl, 4-chlorphenyl, 4-fluorphenyl, 4-nitrophenyl, 4-me- I thoxyphenyl, 4 -hydroxyphenyl, phthalimido, 4-imidazolyl, 3- I indolyl, 2-thienyl, 3-thienyl, 2-pyridyl, 3-pyridyl eller I 15 cyclohexyl, I idet substitueret amino står for en forbindelse -NH-A-, og I substitueret guanidino står for en forbindelse -NH-C(NH)- I NH-A, hvor A er som defineret under a^) eller a2), I B betyder Arg, Lys, Orn, 2,4-diaminobutyroyl eller en I

20 L-homoargininrest, idet amino- eller guanidinogruppen i I sidekæden kan være substitueret med A som beskrevet under I a^ eller a2) , C betyder en forbindelse med formel Illa eller Hib I G'-G'-Gly G'-NH-(CH2)n-CO I 25 (Illa) (Hib), I hvor I G'. uafhængigt af hverandre betyder en gruppe med formel I IV - I

30 R4 R5 O - I i i il I -N - CH - C - (IV) hvor R4 og r5 sammen med de atomer, som bærer dem, danner et I 35 heterocyclisk, mono-, bi- eller tricyclisk ringsystem med I 2-15 carbonatomer, og n er 2-8, I E betyder en phenylalaninrest, som eventuelt er sub- I stitueret med halogen i 2-, 3- eller 4-stilling, tyrosin, I DK 175344 B1 O-methylthyrosin, 2-thienylalanin, 2-pyridylalanin eller naphthylalanin, F uafhængigt af hverandre betyder resten af en neutral, sur eller basisk, aliphatisk eller aromatisk aminosyre, 5 som kan være substitueret i sidekæden, eller betyder en direkte binding, (D)-Tic betyder en gruppe med formel V CCt*· G er som ovenfor defineret for G' eller betyder en direkte binding, F' betyder en rest af de basiske aminosyrer Arg eller

15 Lys i L- eller D-form eller en direkte binding, idet guanidi-no- eller aminogruppen i sidekæden kan være substitueret med A som defineret under a^) eller a2), eller betyder en gruppe -NH-(CH2)n-, hvor n er 2-8, eller betyder en direkte binding, hvis G ikke betyder en direkte binding, 20. betyder -OH, -NH2 eller -NHC2H5, K betyder en gruppe -NH- (CH2) X-C0- , hvor x er 1-4, eller en direkte binding, og M er som defineret for F, samt deres fysiologisk acceptable salte.

2. Peptid med formel I ifølge krav 1, kende tegnet ved, at B betyder Arg, Orn eller Lys, idet guanidinogruppen eller aminogruppen i sidekæden er usubstitueret eller kan være substitueret med (C1-C3)-alkanoyl, (07-023)-aryloyl, 30 (C3-C9)-heteroaryloyl, (C^-Cg)-alkylsulfonyl eller (Cg-C12) * arylsulfonyl, idet aryl-, heteroaryl-, aryloyl-, arylsulfo-nyl-og heteroaryloylgrupperne eventuelt kan være substitueret som beskrevet under a2) med 1, 2, 3 eller 4 ens eller forskellige grupper, 35. betyder phenylalanin, 2-chlorphenylalanin, 3-chlorphe- nylalanin, 4-chlorphenylalanin, 2-fluorphenylalanin, 3-fluor- I DK 175344 B1 I I 50 I I phenylalanin, 4-fluorphenylalanin, tyrosin, 0-methyltyrosin I I eller δ-(2-thienyl)-alanin, I I K betyder en direkte binding, og I M betyder en direkte binding. I I 5

3 . Peptid med formel I ifølge et eller flere af krave- I I ne 1-3,kendetegnet ved, at I I A betyder hydrogen, (D) - eller (L)-H-Arg, (D) - eller I I (L)-Η-Lys eller (D)- eller (L)-H-Orn, I B betyder Arg, Orn eller Lys, idet guanidinogruppen I I 10 eller aminogruppen i sidekæden er usubstitueret eller kan I være substitueret med (C^-Cg)-alkanoyl, (C7-C^3)-aryloyl, I I (C3-C9)-heteroaryloyl, (Ci-Cg)-alkylsulfonyl eller (Cg-C^)' I I arylsulfonyl, idet aryl-, heteroaryl-, aryloyl-, arylsulfo- I I nyl- og heteroaryloylgrupperne eventuelt kan være substitue- I I 15 ret med 1, 2, 3 eller 4 ens eller forskellige grupper fra I I rækken methyl, methoxy og halogen, I I C betyder Pro-Pro-Gly, Hyp-Pro-Gly eller Pro-Hyp-Gly, I I E betyder Phe eller Thia, I I F betyder Ser, hser, Lys, Leu, Val, Nle, Ile eller Thr, I I 20 K betyder en direkte binding, I M betyder en direkte binding, I I G betyder resten af et heterocyclisk ringsystem med I I formel IV valgt blandt de heterocycliske grupper pyrrolidin I I (A), piperidin (B); tetrahydroisoquinolin (C); cis- og trans- I 25 decahydroisoguinolin (D); cis-endo-octahydroindol (E); cis- I I exo-octahydroindol (E), trans-octahydroindol (E), cis- I endo-, cis-exo-, trans-octahydrocyclopentano tb] pyrrol (F) I I eller hydroxypyrplin (V), I I F' betyder Arg, og I I 30 i betyder OH. I

4. Peptid med formel I ifølge krav I, k e n d e- I I tegnet ved, at det er valgt blandt I H- (D) -Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser- (D) -Tic-Oic-Arg-OH, I I H-(D)-Arg-Arg-Pro-Pro-Gly-Thia-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH, I I 35 H- (D) -Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser- (D) -Tic-Oic-Arg-OH, I I H- (D) -Arg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser- (D) -Tic-Oic-Arg-OH og I DK 175344 B1 H-(D)-Arg-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-(D)-Tic-Oic-Arg-OH.

5. Fremgangsmåde til fremstilling af et peptid med formel I ifølge et eller flere af kravene 1-4, kendetegnet ved, at man 5 a) omsætter et fragment med C-terminal, fri carboxylgrup- -pe eller et aktiveret derivat deraf med et tilsvarende fragment med N-terminal, fri aminogruppe, eller b) opbygger peptidet trinvis, i den ifølge a) eller b) fremstillede forbindelse 10 eventuelt fraspalter en eller flere, til beskyttelse af Trandre funktioner midlertidigt indførte beskyttelsesgrupper og eventuelt overfører de således fremstillede forbindelser med formel I i et fysiologisk acceptabelt salt deraf.

6. Anvendelse af et peptid med formel I ifølge et 15 eller flere af kravene 1-4 til fremstilling af et lægemiddel til behandling af patologiske tilstande, som formidles, udløses eller understøttes af bradykinin og med bradykinin beslægtede peptider.

7. Pharmaceutisk middel, kendetegnet ved, 20 at det indeholder et peptid med formel I ifølge et eller flere af kravene 1-4. 25 30 1 -----