DK175089B1

DK175089B1 - Estersubstituerede diamindithioler eller farmaceutisek egnede salte deraf, især i steril, farmaceutisk acceptabel form, samt deres anvendelse i forbindelse med radionuclidkomplekser

Info

Publication number: DK175089B1
Application number: DK198800816A
Authority: DK
Inventors: Paul Louis Bergstein; Edward Hollister Cheesman; Alan David Watson
Original assignee: Du Pont Pharm Co
Priority date: 1987-02-18
Filing date: 1988-02-17
Publication date: 2004-05-24
Also published as: NL940008I1; JPS63295549A; NL940008I2; CA1271195A; PT86787B; US5279811A; KR910006978B1; AU1174888A; DE19475010I2; IL85445A0; ATE76401T1; HK66292A; EP0279417A2; ES2042609T3; KR880009917A; GR3004986T3; PT86787A; NZ223552A; IL85445A; SG71192G

Description

DK 175089 B1 i

Opfindelsens område.

Den foreliggende opfindelse angår radionuclidkomplek-ser af estersubstituerede diamindithioler som radiofarmaceu-tika, fremgangsmåder til deres fremstilling, prøvesæt til 5 præparering og aflevering af radiofarmaceutika til målorganer til billeddannelse hos primater samt fremgangsmåder til anvendelser af disse som diagnostiske midler.

Opfindelsens baggrund.

10 Radiofarmaceutiske forbindelser har været i anvendelse til diagnostiske formål i mange år, og en fagmand på området nuclear medicin og radiofarmaceutisk research er bekendt med kravene til et diagnostisk anvendeligt radiofarmaceuti-kum. Kort fortalt omfatter disse krav: Effektiv præparering 15 af radiofarmaceutiket, således at præparering på hospitalet eller apoteket er muligt, effektiv transport af radiofar-maceutiket til målorganet, effektiv ekstraktion af radiofar-maceutiket af målorganet, således at der opnås forhold mellem mål og baggrund, som tillader diagnostisk skelnen, tilstræk-20 kelig tilbageholdelse i målorganet, således at påvisning ved anvendelse af konventionelt til rådighed værende strålingsovervågningsapparatur tillades.

Diamindithiolkomplekser af technetium-99m som radiofarmaceutika er tidligere blevet beskrevet. Både EP-patent-25 ansøgning nr. 163.119 og EP-patentansøgning nr. 200.211 beskriver anvendelsen af aminderivatiserede diamindithiolkom-< plekser af technetium-99m som radiofarmaceutika, som er anvendelige til påvisning af regional cerebral blodstrømning.

Selv om det er blevet vist, at disse komplekser udviser 30 tilstrækkelig optagelse i pattedyrhjerner til tilvejebringelse af gode forhold mellem mål og baggrund, er det også blevet vist, at disse forbindelser hurtigt vaskes ud fra hjernevævet, hvilket begrænser deres anvendelighed til com-puteriseret tomografi med enkeltfotonudsendelse med konven-35 tionelt til rådighed værende apparatur.

US-patentskrift nr. 4.284.619 beskriver anvendelsen 2 υκ i m af estere som midler til opnåelse af hjernebilleder. Specifikt beskrevet er esterne af ioderede benzoesyrer. Disse forbindelser har udvist meget dårlig tilbageholdelse i hjernen, idet mængdeforholdet mellem hjerne og blod efter 5 5 minutter under 0,5 i alle tilfælde.

I EP-patentansøgning nr. 135.160 er beskrevet anvendelsen af en mangfoldighed af substituerede diamiddithiolkom-plekser af technetium-99m som midler til opnåelse af nyrebilleder. Disse diamiddithiolligander resulterer i dannelsen 10 af anioniske komplekser med technetium, hvilket resulterer i høj nyreekstraktion, men den anioniske ladning på disse komplekser ser ud til at eliminere potentialet for tilstrækkelig hjemeekstraktion. Lignende anioniske komplekser er beskrevet i US-patentskrifterne nr. 4.444.690, 4.434.151, 15 4.571.430 og 4.575.556.

I EP-patentansøgning nr. 123.504 er beskrevet neutrale technetium-99m-komplekser med alkylenaminoximer og deres anvendelse som radiofarmaceutika til vurderingen af regional, cerebral blodstrømning. Selv om disse forbindelser har vist 20 tilstrækkelig hjerneekstraktion samt langvarig tilbageholdelse i hjernen hos pattedyr, omdannes disse komplekser ved henstand til et hydrofilt kompleks, som ikke mere er effektivt som radiofarmaceutikum til vurdering af regional, cerebral blodstrømning. Denne omdannelse med tiden kræver, at 25 radiofarmaceutiket anvendes i løbet af 30 minutter efter fremstillingen.

Det er tydeligt, at der eksisterer et behov for mere i effektive radiofarmaceutika til vurderingen af regional, cerebral blodstrømning, hvilke radiofarmaceutika kombinerer 30 de nødvendige egenskaber tilstrækkelig hjerneoptagelse, tilstrækkelig tilbageholdelse i hjernen, fordeling i overensstemmelse med blodstrømningen og tilstrækkelig stabilitet efter fremstilling til at være anvendelige i klinisk miljø.

US-patentskrift nr. 2.810.753 beskriver di-sulfhy-35 drylalkylendiaminpolycarboxylsyrer som metal i onche lateringsmidler. Nogle af disse syrer er umiddelbare forstadier til 3 DK 175089 B1 de estersubstituerede diamindithioler ifølge opfindelsen.

Blondeau et al., Can. J. Chem., 45, 49 (1967), beskriver den reduktive dimerisering af thiazolidiner til opnåelse af N,N'-1,2-ethylendiyl-bis-L-cysteinderivater.

5 Et kobberkompleks af N,N'-l,2-ethylendiyl-bis-L-cy- steindimethylester fremstillet ud fra dimethylester-dihy-drochloridet er karakteriseret af Bharadwaj et al., J. Am. Chem. Soc., 108# 1351 (1986).

10 Resume af opfindelsen.

Ifølge den foreliggende opfindelse er der tilvejebragt en estersubstitueret diamindithiol med formlen , Λ-Λι> · < A-i 4’- R« < Ri Rjj R„

A B

20 eller et farmaceutisk egnet salt deraf, hvor hver enkelt af grupperne Ri“Ri2 individuelt er udvalgt fra den gruppe, som består H, alkyl med 1-10 carbonatomer og -A-C00R, hvor A er ligekædet eller forgrenet alkylen med 0-10 carbonatomer, n, o og p uafhængigt er 1 eller 2, og R er (a) alkyl med 1- 25 10 carbonatomer, (b) phenyl eller benzyl eventuelt substi tueret med op til 5 ringsubstituenter, som hver især er udvalgt fra alkyl med 1-4 carbonatomer, fluor, chlor, brom, nitro, alkoxy med 1-4 carbonatomer, carboxyl eller carboxyl-syreester med 1-4 carbonatomer, eller (c) en 5- eller 6- 30 leddet heterocyclisk ring indeholdende 1 eller 2 heteroatomer udvalgt fra N, O eller S, idet dog mindst én af grupperne R1"R12 er -A-COOR, den estersubstituerede diamindithiol i en steril, farmaceutisk acceptabel form.

35 Der er ligeledes tilvejebragt et prøvesæt, som omfat ter en forud bestemt mængde af en steril, farmaceutisk ac- DK 175089 B1 4 ceptabel, estersubstitueret diamindithiol som ovenfor beskrevet og en forud bestemt mængde af et sterilt, ikke pyro-gent reduktionsmiddel til reduktion af et forud valgt radio-nuclid.

5 Der er yderligere tilvejebragt et radiofarmaceutikum, som i det væsentlige består et et lipofilt, ladningsneutralt radionuclidkompleks af en diamindithiolligand med mindst én estergruppe med formlen -A-C00R, hvor A og R er som ovenfor defineret.

10 Endvidere er der tilvejebragt en fremgangsmåde omfat ter, at der parenteralt til et pattedyr indgives et radio-farmaceutikum som ovenfor angivet i et farmaceutisk egnet bærestof, og at der optages et radiobillede af hjernen af pattedyret, efter at midlet har fået tilstrækkelig tid til 15 lokalisering i hjernen.

Foretrukne udferelsesformer.

Til en foreliggende opfindelses formål skal "lipofil" forstås som betydende et radiofarmaceutikum, som let krydser 20 blod-hjerne-barrieren intakt, dvs. et kompleks med en samlet 1-octanol/saltopløsning-adskillelseskoefficient i området fra 0,5 til 500, fortrinsvis 10-300, især 10-100, som bestemt ved blanding af komplekset med 1-octanol og saltopløsning (0,9 vægtprocent i vand) og måling af den mængde af komplek-25 set, som adskilles ind i hvert enkelt lag.

Til den foreliggende opfindelses formål skal en "di-amindithiol" forstås som værende en organisk ligand, som udnytter to aminer og to thioler til koordinering med et radioaktivt metal, hvilken ligand kan være usubstitueret 30 eller substitueret på et vilkårligt af eller alle carbonato-merne. Foretrukne diaminthioler omfatter 1,10-dithia-4,7-diazadecaner, 1,12-dithia-5,8-diazadodecaner, 1,11-dithia--4,7-diazaundecaner og 1,ll-dithia-4,8-diazaundecaner.

Det foretrækkes, at diamindithiolen er ikke-amineret.

35 "Ikke-amineret" skal forstås som betydende, at der ikke er yderligere aminsubstituenter på nogen af carbonatomer i 5 DK 175089 B1 diamindithiolen.

Det radionuclid, som anvendes til dannelse af radiofarmaceut iket, er udvalgt fra de radioaktive isotoper af Tc, Ru, Cu, Co. Pt, Fe, Os, Ir, w, Re, Cr, Mo, Mn, Ni, Rh, 5 Pd, Nb og Ta, fortrinsvis technetium-99m. Når radionuclidet er technetium-99m i form af Tcvo-kernen, ses det let, at en af aminerne i diamindithiolen skal være deprotoniseret i det radiofarmaceutiske kompleks for at resultere i et kompleks, som er ladningsneutralt.

10 Disse foretrukne komplekser kan derefter være repræ senteret ved de almene formler (la) og (Ib) >'vtr (la) db) 20 men for tydelighedens skyld vil kun en af de to mulige strukturer blive vist gennem hele den resterende del af beskrivelsen, idet det må forstås, at de to er ækvivalente. Udover Tcv0-kemen kan der dannes komplekser, som inkorporerer TcN-kernen, og hvori begge aminer i diamindithiolkomplekset 25 forbliver protoniserede. Når radionuclidet er technetium-99m, har de komplekser, som opnås, derfor de almene formler (I) og (II) 30 ο«\*ν in

/"V

' l TC ||1) r2J / Γ* s R12

Rl * (II) 35 DK 175089 B1 6 hvor hver enkelt af grupperne R1-!*12 individuelt er udvalgt fra den gruppe, som består af H, alkyl med 1-6 carbonatomer, og -A-COOR, hvor A er ligekædet eller forgrenet alkylen med 0-6 carbonatomer, n, o og p hver især uafhængigt er 1 eller 5 2, R er alkyl med 1-6 carbonatomer, idet dog mindst én, fortrinsvis højst 4 af grupperne R^—R12 er -A-COOR.

Især foretrukne radiofarmaceutika er fremstillet ud fra diamindithioler, hvor a) n, o og p er 1, eller 10 b) hver enkelt alkylgruppe i R og R1-R12 har 1-3 carbonatomer, eller c) A er ligekædet alkylen med 0-3 carbonatomer, eller d) R3 og R10 er -A-COOR, og R4 og R9 er H, eller e) A er en binding, dvs. 0, og R er ethyl, eller 15 f) A er en binding, og stereokemien i den stilling, hvor denne binding er knyttet til diamindithiolskelettet, er L (eller R-).

Andre technetiumradiofarmaceutika ifølge den foreliggende opfindelse har de almene formler 20 e

Re /* \ 25 af ^ r, Rt» *2 Rl R,t hvor Ri“Ri2 er som ovenfor defineret, bredt og fortrinsvis.

Et stannosalt, såsom stannoglycoheptonat eller stan-nochlorid, er foretrukne reduktionsmidler. Specifikt fore-30 trukne er technetium-99m-komplekser af (1) N,N*-1,2-ethylen-diyl-bis-L-cysteindiethylester, (2) N^’-l^-ethylendiyl--bis-L-cystein-dimethylester og (3) Ν,Ν1-1,2-ethylendiyl--bis-L-cysteindi-n-propylester.

35 Detaljeret beskrivelse af opfindelsen.

Diamindithiolliganderne ifølge opfindelsen kan frem- 7 DK 175089 B1 stilles ved flere metoder til kobling af hensigtsmæssigt substituerede (og i visse tilfælde beskyttede) amin-, thiol-og aminthiolfragmenter. Fremstilling af de nødvendige fragmenter er mulig ved en bred mangfoldighed af teknikformer, 5 som er kendte af en fagmand på området organisk syntese. I de efterfølgende reaktionsbeskrivelser er R1-R12 som ovenfor beskrevet, medmindre andet er angivet.

De diamindithioldannende reaktioner omfatter den reduktive dimerisering af substituerede thiazolidiner eller 10 en tetrahydro-1,3-thiazen med formel (III) til opnåelse af diamindithiolsyrer med formel (IV). Disse kan esterificeres ved omsætning af en forbindelse (IV) med en hensigtsmæssig alkohol og en katalysator til opnåelse af den estersubstituerede diamindithiol med formel (V) (skema I). Denne almene 15 syntese for estersubstituerede diamindithioler er blevet beskrevet af Blondeau et al., Can. J. Chem., 45, 49 (1967).

Skema I

20 * Vs, v« nh »i NH3 r2 -SH HS r2

Rl R1 25 (III) (IV) «s4—V X[4 ( JOH., ("’UNH NV“Vn 30 HC1 r2_USH HS^|-R2 Λ L1

Rl R

(V)

Især kan en thiazolidin eller en tetrahydro-1,3-thia-35 zen med formel (III) omsættes med natrium i flydende ammoniak efterfulgt af esterificering med methanol eller ethanol ved DK 175089 B1 8 anvendelse af gasformigt hydrogenchlorid som katalysator til opnåelse af en forbindelse med formel (V). Thiazolidiner og tetrahydro-l,3-thiazener med formel (III) fremstilles ved omsætning af en aminthiol med et aldehyd eller en keton, 5 M.T. Nagasawa et al., J. Med. Chem., 27, 591 (1984).

Alternativt kan en diamindithiol fremstilles ved reduktiv aminering af glyoxal eller en 1,2-diketon- eller 1,3-diketondel med formel (VI) med en hensigtsmæssig substitueret (og beskyttet) aminothiol med formel (VII) (skema 10 II).

9 DK 175089 B1

Skema II (VI) ( 3 f4) V R / -^2 A\ ° ->

B ^SP

(VII) R7 H® 7 RS R7 »VV 4 4- pt Tsp p<

R1 R R

(viin BH«“ —> s*vy 7 (r^™ "NU-*"5jn0t iRj^nNH N4-R4

«2-ksP psk"2 f,T's,> PSV

/ l· (IX) DK 175089 B1 10

Specielt giver omsætning af glyoxal eller en ketondel med en beskyttet esteraminthiol i nærværelse af et dehydra-tiseringsmiddel, såsom en molekylsigte, efterfulgt af reaktion af diaminmellemproduktet med formel (VIII) med et bor-5 hydridreduktionsmiddel en beskyttet diamindithiol med formel (IX) . Beskyttelsesgruppen P, som kan være en vilkårlig af en mangfoldighed af beskyttelsesformer for svovl, herunder methoxymethyl, methoxyethoxymethyl, p-methoxybenzyl eller benzyl, kan fjernes på hensigtsmæssig måde, som er velkendt 10 for en fagmand på området organisk syntese, såsom med tri-fluoreddikesyre, mercurichlorid eller natrium i flydende ammoniak. Når der er tale om labile Lewis-syregrupper, herunder acetamidomethyl og benzamidomethyl, kan P efterlades intakt. Mærkning af liganden med technetium, hvor der er 15 tale om labile Lewis-syrebeskyttelsesgrupper, vil fraspalte gruppen P, hvilket ger den beskyttede diamindithiol ækvivalent til den ubeskyttede form.

Til fremstillingen af usyrometriske diamindithiol-ligander kan en beskyttet form af en forbindelse med formel 20 (VI), såsom (X), anvendes ved en trinvis koblingssekvens, som er vist i det følgende (skema III).

Skema III

25 s °»R

Β>γ^\0!5 (VII) 4 (X) —>

o R

(X> (XI)

30 R5 0R

\ VOR 5 r7 («ΦΜΗ ®7 VII· “{wi Æ · _> >u 35 A^SP Τ'« ps 'l3 R Rl * (XII) (XIII) 11 DK 175089 B1

En beskyttet aminthiol med formel (VII) amineres reduktivt med en forbindelse med formel (X) til opnåelse af den beskyttede carbonylforbindelse med formel (XII). Afbe-skyttelse efterfulgt af reduktiv aminering med en anden 5 aminthiol (VII1) giver den usymmetriske diamindithiolligand med formel (XIII), som kan afbeskyttes på hensigtsmæssig måde, som ovenfor beskrevet. Reaktionsbetingelserne er i alt væsentligt de samme som for den reduktive aminering ifølge skema II, idet der gås ud fra kommercielt tilgængelige 10 reagenser eller sådanne, som let fremstilles ud fra kommercielt tilgængelige reagenser.

Arylholdige diamindithioler kan fremstilles ved omsætning af en hensigtsmæssig amin med thiolsubstituerede benzaldehyder, som vist i skema IV, til opnåelse af diimi-15 nerne. Disse kan derefter reduceres til diaminen med et reduktionsmiddel, såsom natriumborhydrid. Alternativt kan aldehydet, aminen og et cyanidnucleofil omsættes ved en Strecker-syntese til fremstilling af bis-aminonitrilet. Hydrolyse af denne forbindelse giver bis-aminosyren. Afbe-20 skyttelse af svovlet på hensigtsmæssig måde, som ovenfor beskrevet, efterfølges af esterificering ved ovenfor beskrevne metoder til opnåelse af slutprodukterne.

Skema IV 25 30 SBn J^j6 il. Reduktion 2* Af beskyttelse H2N y' v 3. Esterificering R/ 35 p? 12 UK Ί 75089 Dl

Skema IV (fortsat) /7 1. Hydrolyse _ Λ, / 5 NC \ yw 2. Afbeskyttelse 5v l/ ^*8 \_HN m-< 3. Esterificering w \

Jd** **<$Z Z&- hs-Q.« 10 Specielle diamindithiolestere, som kan anvendes ved udøvelse af den foreliggende opfindelse, har formlerne C^H^O^C^—kh HN-^· · HN—» · ♦ .CO^CH^ ^SH HS^ HS^ 20 CH3CH2CH202C %pNH HN—j . . C02CH2CH2CH3 ^SH KS^ eller er farmaceutisk egnede salte deraf.

Opfindelsen vil forstås yderligere ved hjælp af de 25 efterfølgende eksempler, hvori dele og procentmængder er efter vægt, medmindre andet er angivet.

Eksempel 1

Syntese af N.N1-1.2-ethvlendivl-bis-L-cvsteindiethvlester-30 -dihvdrochlorid.

Del A: Syntese af (R)-thiazolidin-4-carboxylsyrenatriumsalt.

Til 45,0 g (0,338 mol) (R)-thiazolidin-4-carboxylsyre i 600 ml absolut ethanol sættes 13,52 g (0,338 mol) natrium-35 hydroxidperler. Opslæmningen omrøres, indtil perlerne er opløst (30-45 minutter). Ethanolet fjernes under aspirator 13 DK 175089 B1 på en roterende fordamper, yderligere 300 ml ethanol tilsættes og afdampes, og det tilbageværende, hvide faststof anbringes under høj vakuum natten over til fjernelse af restspor af ethanol.

5

Del B: Syntese af N,N’-l,2-ethylendiyl-bis-L-cystein.

En trehalset 1000 ml kolbe, forsynet med en gastilgang, en mekanisk omrører med glasrørepind og tøriskondensator, afkøles til -78*C, og 450 ml ammoniak kondenseres 10 ind i kolben. Kølebadet fjernes, og opløsningen får lov at opvarme i 30 minutter. 14 g (0,6 mol) natrumkugler (3-8 mm) vaskes med pentan, gennemvædes i 2-propanol i 10 minutter og vaskes derefter yderligere to gange med pentan. Hele den mængde thiazolidinnatriumsalt, som er fremstillet i del A 15 ovenfor, sættes til ammoniakken i én portion, og ret hurtig omrøring påbegyndes. Natriumkuglerne tilsættes, 2-3 ad gangen, idet der ventes 45-60 sekunder mellem hver tilsætning, indtil en vedvarende blå farve opretholdes i 10 minutter. Tilsætningen tager ca. 45 minutter, og ikke alt natrium 20 anvendes. Efter 10 minutter med blå farve kvæles reaktionen med fast ammoniumchlorid, kondensatoren fjernes, og ammoniakken afdampes under nitrogen ved hjælp af et varmtvandsbad.

Den hvide, faste remanens opløses i 4 00 ml vand, og koncentreret HCl tilsættes, indtil blandingens pH-værdi er 2.

25 Opslæmningen afkøles til 0'C i 1 time, sugefiltreres derefter gennem en glasfritte af mellemporøsitet. Faststofferne vaskes med 2 x 200 ml vand og tørres over calciumsulfat i en des-sikator under vakuum, indtil der er opnået konstant vægt (18-24 timer), til opnåelse af 31,8 g (70%) af et hvidt pul-30 ver, smp. 230-231*C (dekomposition selv om mørkfarvning begynder ved 214-216*C). Materialet er uopløseligt i alle opløsningsmidler undtagen vandig base.

Del C: Syntese af N,N'-l,2-ethylendiyl-bis-L-cysteindiethyl-35 ester-dihydrochlorid.

20,0 g (74,5 mmol) N,N'-l,2-ethylendiyl-bis-L-cystein DK 175089 B1 14 fra del B opslæmmes i 1200 ml absolut ethanol i en 2000 ml trehalset kolbe forsynet med et gastilgangsrer (et hult, konisk rør, som ender i en udboring med en diameter på 2 mm) fra en HCl-tank, en mekanisk omrører og en kondensator 5 med gasafgang forbundet til et HCl-indfangningssystem. Kraftig omrøring påbegyndes, og HCl-gas bobles ind med en hastighed, som opretholder en hurtig tilbagesvaling af ethano-let. Gastilsætningen fortsættes i 1,5 timer, hvorefter tilbagesvalingen fortsættes i yderligere 2,5 timer. Derpå afkø-10 les opslæmningen til 0*C i 1 time i et isbad, sugefiltreres (Buchner-tragt, Whatman nr. 1), og faststofferne vaskes med 2 x 100 ml koldt ethanol til opnåelse af 26,4 g rå diester (89%) efter tørring.

En del af dette materiale krystalliseres ved opslæm-15 ning af faststofferne i 650 ml ethanol ved 50*C under omrøring og tilsætning af 80 ml vand. Den let uklare opløsning sugefiltreres hurtigt (Whatman nr. 1), forsynes med prop får lov at krystallisere i køleskab natten over. Materialet filtreres, vaskes med 2 x 100 ml koldt ethanol og tørres 20 under vakuum i en dessikkator til opnåelse af 19,56 g (67%), smp. 182*C (dekomposition under smeltning).

Del D: Rensning af N,N'-l,2-ethylendiyl-bis-L-cysteindiethyl-ester-dihydrochlorid. Dette trin gennemføres under GMP-be-25 tingelser ved anvendelse af godkendte opløsningsmidler og reagenser og specielt præpareret glas og apparatur.

58,38 g (0,55 mol) natriumcarbonat opløses i 1200 ml deoxygeneret, sterilt vand med mekanisk omrøring under en nitrogenatmosfære. 175 g (0,44 mol) N,N'-l,2-ethylendiyl-30 bis-L-cysteindiethylester-dihydrochlorid sættes til denne opløsning efterfulgt af 400 ml diethylether. Opløsningen omrøres i 15 minutter, og pH-værdien indstilles på 8,5-9,0, om nødvendigt, ved tilsætning af mere natriumcarbonat. Opløsningen hældes i en skilletragt, og lagene adskilles. Den 35 vandige del ekstraheres med 4 x 200 ml diethylether. De kombinerede etherekstrater tørres over natriumsulfat, fil- 15 DK 175089 B1 treres og koncentreres ved formindsket tryk på en roterende inddamper.

En opløsning af 4300 ml absolut ethanol, 520 ml sterilt vand og 103 g koncentreret saltsyre opvarmes under 5 omrøring til 70*C. Den koncentrerede remanens sættes til denne opløsning, og den kolbe, som har indeholdt remanensen, skylles ud med 2 x 300 ml ethanol, som derefter også sættes til den varme opløsning. Opvarmningen fortsættes, indtil opløsningen er klar, på hvilket tidspunkt den hurtigt suge-10 filtreres gennem et glasfiberfilter (Whatman GF/D). Den kolbe, som har indeholdt opløsningen, skylles med 2 x 300 ml ethanol, som også sendes gennem filtret. Den filtrerede opløsning forsynes med prop og opbevares ved 0*C i 24 timer.

Det resulterende krystallinske materiale sugefiltreres (What-15 man nr. 1) , vaskes to gange med ethanol og to gange med diethylether og tørres under vakuum til opnåelse af en høj-renset, farmaceutisk acceptabel form af N,N'-l,2-ethylendiyl--bis-L-cysteindiethylester-dihydrochlorid. Udbyttet er 140 g (80%), smp. 182-185 * C (dekomposition).

20

Eksempel 2

Syntese af N.N'-l^-ethvlendivl-bis-L-cvsteindimethvlester--dihvdrochorid 15,0 g (0,56 mmol) Ν,Ν'-ethylendiyl-bis-L-cystein 25 fremstillet som i eksempel 1, del B, opslæmmes i 500 ml methanol, og hydrogenchloridgas tilbobles med stor hastighed for at holde methanolet under tilbagesvaling og til opløsning af faststofferne. Efter 1 times gastilsætning tilbagesvales opløsningen i yderligere 2 timer. Afkøling på is i 1 time 30 resulterer i krystallisation. Filtrering og tørring giver 9,4 g (47%) af dimethylester-dihydrochloridet, smp. 188*C. Rensning af dette materiale kan ske som beskrevet i eksempel 1, del D.

35 16 DK 175089 Bl

Eksempel 3

Syntese af N.N'-l.l-ethylendiyl-bis-D-fS-benzamidomethyl)--pen ici11am ind imethvlester-dihvdrochlorid.

5 Del A: Syntese af S-benzaraidomethyl-(S)-penicillaminmethyl-ester.

1,0 g (5,0 mmol) (S)-penicillaminmethylester-hydro-chlorid opløses i 5 ml ren trifluoreddikesyre under nitrogen. 0,76 g (5,0 mmol) benzamidomethanol tilsættes, og op-10 løsningen omrøres i 1 time ved 25*C. Opløsningsmidlet afdam-pes på en roterende inddamper til opnåelse af det ønskede produkt som et krystallinsk trifluoracetatsalt. Dette renses ikke yderligere, men omdannes direkte til den frie base. Faststoffet opløses i 10 ml vand, og mættet natriumbicar-15 bonatopløsning tilsættes, indtil gasudviklingen ophører, og pH-værdien er over 8,5. Den vandige opløsning ekstraheres med 2 x 15 ml ethylacetat, ekstrakterne tørres over natriumsulfat, filtreres og inddampes til opnåelse af 0,62 g (42%) af produktet som en klar olie.

20

Del B: Syntese af N,N'-l,2-ethylendiyl-bis-D-(S-benzamido-methylpenicillamin)-dimethylester-dihydrochlorid.

0,3 g (1,0 mmol) S-benzamidomethyl-(S)-penicillamin-methylester anbringes i en kolbe med 3 ml ethanol under 25 nitrogen. Molekylsigter (10-12, 3 Å) anbringes i kolben, og 73 mg (0,5 mmol) glyoxal (40%'s vandig opløsning) tilsættes. Reaktionen omrøres natten over ved stuetemperatur og derefter 3 timer ved 40*C, på hvilket tidspunkt den resulterende opslæmning filtreres, og 1,29 g (2,05 mmol) natriumcyanobor-30 hydrid sættes til filtratet. Efter omrøring i 4 timer ved stuetemperatur afdampes opløsningsmidlet, og remanensen opløses i 20 ml vand og ekstraheres med 3 x 15 ml ethylacetat. Denne resulterende opløsning tørres over natriumsulfat, filtreres og inddampes. Remanensen renses ved lynchromato-35 grafi (70:30 ethylacetat:hexan), og de rigtige fraktioner (påvist ved TLC) inddampes. Behandling med ethanolisk hydro- DK 175089 B1 17 genchlorid, indtil pH-værdien er under 1, efterfulgt af inddampning giver 80 mg (23%) af produktet som et hvidt faststof, smp. 142-145“C.

Ved anvendelse af de ovenfor beskrevne syntesemetoder 5 er diamindithiolerne ifølge eksemplerne 1-3 og andre diamin-dithiolforbindelser, som kan fremstilles, vist i tabel I.

DK 175089 B1 18

Tabel I

r7 .. ’M' ..

rjV^NH «n.JLr»0 *'^JLsp ps —-γ*

Eks· stereo-Smp. . > - 4 5 nr. kemi »c R__ r L_ S_

1 L,L 182 Η H CO^Hj H H

2 L,L 188 Η H C02CH3 Η H

3 D,D 142- CH CH CO CHj Η H

145

4 D.D 115- CH CH CO C H H H

119

5 L.L 160- Η H C°2C3H7 H H

164

6 L.L HH C02C4H9 Η H

7 D.D 182- Η H C02C2H5 H M

185 8 L.L HH C02c2H5 h CT3 9 blandetl04- Η H C°2C2H5 H C02C2H5 105 10 blandet 145- Η Η Η H C02C2H5 146 11 blandet ch^ ch^ η h c02C2H5

12 L.L HH CH2C02C2H5 H H

13 blandet Η H ^CH2^3C02C2M5 ** H

14 blandet C6Hi3 C6H13 ^2^3 H H

19 DK 175089 B1

Tabel .1 (fortsat)

'nr! V r! k! R9 R10 R11 R12 P

1 Η H HH C02C2H5 Η Η H

2 Η H HH C02CHj Η Η H

3 Η H HH C02CH3 CHj CH3 BZH* 4 Η H HH C02C2H5 CH3 CH3 BZH*

5 Η H HH C02C3H7 Η Η H

t> Η H HH C02C4H9 Η Η H

7 Η H HH co2C2H5 Η Η H

8 H CH3 HH C02C2H5 Η H BZH*

9 H C02C2H5 H H C02C2H5 Η Η H

10 H C02C2H5 H H H Η Η H

11 Η Η Η Η H CH3 CH3 H

12 Η H HH CH2C02C2H5 Η Η H

13 Η H HH (CH2)3C02C2H5 Η Η H

14 Η H HH COjCHj C6^13 ^6^13 H

LSrV I f JUD3 □ I

20

Tabel I (fortsat)

Eks .Stereo- Smp. . , - . « nr. kemi °C 8 8 R R_ R_

15 L.L Η H C02C2«5 Η H

16 L,L Η H CO^Hj H 0*3 1’ blandet CC,2C2H5 " H H "

16 L,L H HH (CH2>6C02CH3 H

19 L.L CH3 CH3 C02C2H5 Η H

20 L.L Η H C02iC3H? Η H

21 L.L Η H C02CH2C(CH3>3 Η H

22 L.L Η H C02CH2CH(CH3)2 Η H

23 L.L Η H C02(CH2)4CH3 Η H

24 L.L Η Η H COjCHj (CH2)9CH3

25 L.L Η Η H (CH2>9C02CH3 H

26 blandet Η Η Η Η H

27 L.L Η Η H C^CH^Hj H

28 L.L Η Η Η CO^p-W^H,.) H

29 L.L Η Η H COjC^Hj H

30 blandet η Η Η Η H

31 L.L Η Η H C02(3,4,5-C6H2F3> H

DK 175089 B1 21 fcIS * x * s * * * * tn s

<M

N I

,HJxx8x5x*a6S

r4 I *** 'VI x x x * * s * x x

4J

<a U) +j ·" ^ © d O pH o m os n - xBxX***** H n iH p, *P %» ni J5 C s" § S- to J” Z, x ~ tH 8 m X o v x~

* 2 g g I

•J-..Ιβββββ ®β! X ϋ” X X * * * * * ^βΐχδχχ***** %| X X X * * * * * .·.' S S 5 5 s s S a 5

Μ M W C

22 uis. i /Dutjy m

j δ S I

le x « x x x e x

N I

Mxlx xxxxxxx

H I

Hel X xxxxxxx n tb

<-* N

in X

η X . *® X « u υ in υ i ~ M X JN m -U O <e O * (H t> O X in ♦ >n m o> m I X * S o x X 0* Φ «η

4-> S U N U W u W

U K (NJ s Zr* W N N

n r> o o O O O

u ii=uuaxu

H

r—i 0)

JQ

(0

°x! X XXXXXXX

®βΙ X XXXXXXX

*4

Nel x XXXXXXX g o

n C S

g *« -S

Sm

*M VS

x i »* o g β *Wxx8xxac8xe

* « ^ K CD ^ O H S

^ 5 NNmNmmn X

M -c DK 175089 B1 23

Ved anvendelse af den syntesemetode, som er vist i skema IV, er andre diamindithioler, som kan fremstilles, vist i tabel II.

Ul\ I /OU09 D I

24 n z o

I X Jp X X X

X

o "af1 1 1 1 i ·;!' « \ λ <i o- dr

: v4 1 1χ w1 I

I λ, I £ 8 “‘ί’” * i,I 5 X x X x I 4J 8 ^ S -o rg

»E ... S

w ja 2

,'In η ^ io 10 K

*g|o η « b « « DK 175089 B1 25 n jT 3f % % & %« X X X X X* 8 8 -¾ ^ %, *> 5 o"

;«> O X O

n e> CM «Λ ej ΧΧΧϋΟϋχ n 2 ,

8 3- N

N O

o o o « xxxxxxx

-P

(0 to m x +J r> o )-i X cm O b ϋ O n - O -S 1 °e x x § 1 " li • o

H

(D

Λ KL

« “1 xxxxxxx

Eh °J xxxxxxx

O -P P 4-> -P -U 4J

<D<D Q) Q) φ φ

H'd Ό Ό O'd'dO

®| S S c c c c £ £| rt ίο · (β <ϋ ns (ϋ MX1 rH Η Η Η i—I Η Λ J3 Λ Λ ΰ J3 2 «ΟΛΟ·- W Ο Μ Ηβ| co ρ» ^ μ· "· «Μ 26 UK 175089 bl ~J * * ac i i * c i ,Vr» n *!? 5 V2 s 8 iB 8

H 1 O

H Az i » i o h y i *? «ΐχιιχοι 1 ,Λά' f rf

iY^ "j 1111 x I

c? n

X

- I

*1 X X JP X X I w X

o ηίί 2 f * · N uo η η η η n DK 175089 B1 27 =J 1 1 1 1 1 £ 1 9 Ξ|χχχχχχχ , w ; f ^

,H5 - i1 I Q, ϊ I f I

II) ^ I I BC * N 2 O

M cv S w O -/* § V X δ " '"‘ί ω *Jxxxxxxx H I I CC —.

O) /v / U)

Λ β' Ύ 3C Z

g ^ 1 1 r o i JJ *« «w W>

./\^\ «I X X X oO O X

,5 T ed w Z « * I * 8 έ ^ * o“ 8 v> °

X 9y X X X X X

CD A O »- « O » η n t « « « « X. · wwww m* 28

De radiofarmaceutiske komplekser ifølge opfindelsen kan let fremstilles ved blanding af et salt af et radioaktivt metal og diamindithiolliganden i nærværelse af et egnet reduktionsmiddel, om nødvendigt, i vandigt medium ved tempe-5 raturer fra stuetemperatur til tilbagesvalingstemperatur eller endog højere, og de fås og kan isoleres i højt udbytte ved både makrokoncentrationer (bærestof tilsat, f.eks. 99Tc) og ved sporkoncentrationer (intet bærestof tilsat, f.eks. 99mrC) pi under 10“6 molær. I visse tilfælde kan diamin-10 dithiolliganden selv virke som reduktionsmiddel, hvilket altså eliminerer behovet for et yderligere reduktionsmiddel. Egnede, yderligere reduktionsmidler, når sådanne er nødvendige eller ønskede, er velkendte for fagfolk på området. Reaktionen er sædvanligvis afsluttet efter fra 1 minut til 15 2 timer, afhængigt af identiteten af de specielt anvendte reagenser. Det radiomærkede kompleks fremstilles på samme måde som ethvert tilsvarende, ikke-radioaktivt diamindithiol-kompleks, ved at det ønskede radionuclid simpelthen anvendes i stedet for det tilsvarende ikke-radioaktive grundstof i 20 udgangsmaterialerne, bortset fra hvor der er tale om technetium, fordi alle technetiumisotoper er radioaktive.

Hvor der er tale om technetium, f.eks. 99Tc eller 99mTc, fremstilles et kompleks ifølge opfindelsen fortrinsvis ved, at pertechnetat (Tc+7) blandes med den ønskede diamin-25 dithiol i vandigt medium, hvorefter der til reaktionsblandingen sættes et hensigtsmæssig reduktionsmiddel, som er i stand til at reducere technetium. Blandt egnede reduktionsmidler er alkalimetaldithioniter, stannosalte, natriumbor-hydrid og andre, således som det er velkendt.

30 Diamindithiol-technetium-komplekserne ifølge opfin delsen kan også fremstilles ud fra i forvejen dannede tech-netiumkomplekser, ved at disse forvejen dannede komplekser behandles med et overskud af ligander under egnede betingelser. F.eks. kan technetium-diamindithiol-komplekset også 35 fremstilles ved omsætning af den ønskede diamindithiolligand med tetrahalogen-oxo-komplekset af Tc+^ eller med et tech- DK 175089 B1 29 netium-glucoheptonat-kompleks eller lignende.

Et overskud af diamindithiolliganden, op til et molært overskud på 50-100 gange eller mere, og et overskud af reduktionsmiddel kan anvendes ved kompleksdannelsesreaktionen 5 for at sikre maksimalt udbytte fra technetium. Efter omsætningen kan det ønskede kompleks skilles fra reaktionsblandingen, om nødvendigt, ved krystallisation eller udfældning eller ved konventionel chromatografi.

Prøvesæt ifølge den foreliggende opfindelse omfatter 10 en steril, ikke-pyrogen diamindithiolligand og, om nødvendigt, en mængde reduktionsmiddel til reduktion af et i forvejen udvalgt radionuclid. Fortrinsvis indeholder sådanne prøvesæt en forudbestemt mængde af en steril diamindithiol-ligand og en forudbestemt mængde af et sterilt reduktions-15 middel, som er i stand til at reducere en forudbestemt mængde af det i forvejen udvalgte radionuclid. Det foretrækkes ligeledes, at diamindithioliganden og reduktionsmidlet er lyofiliseret, når dette er muligt, for at lette lagerstabilitet. Hvis lyofilisering ikke er praktisk, kan prøvesættene 20 opbevares frosne eller i opløsning ved stuetemperatur. Valget af radionuclider vil i almindelighed være afhængigt af slutanvendelsen af det mærkede produkt. På grund af tilgængeligheden af technetium-99m-generatorer er et sådant radionuclid naturligvis især foretrukket.

25 Ved en udførelsesform for opfindelsen omfatter et prøvesæt til anvendelse ved fremstilling af komplekserne ifølge den foreliggende opfindelse ud fra en kilde til 99lnTc, såsom en pertechnetatopløsning i isotonisk saltopløsning, som er til rådighed i de fleste kliniske laboratorier, den 30 ønskede mængde af en udvalgt ligand til reaktion med en udvalgt mængde pertechnetat og et reduktionsmiddel, såsom stannochlorid, i en mængde, som er tilstrækkelig til reduktion af det udvalgte pertechnetat til dannelse af det ønskede kompleks.

35 Et foretrukket prøvesæt til let fremstilling af det ønskede Tc-99m-radiofarmaceutikum ifølge den foreliggende

m W WWW ·ν I

30 opfindelse udgøres af to hætteglas. Det ene hætteglas (A) indeholder den esterderivatiserede diamindithiolligand fremstillet i lyofiliseret form ved sur pH-værdi, hvor ligandstabiliteten er optimal, og et indifferent fyldstof, såsom 5 mannitol, til tilvejebringelse af let lyofilisering. Det andet hætteglas (B) indeholder et reduktionsmiddel, som er egnet til omdannelse af 99mTc til den ønskede oxidationstilstand, og et indifferent fyldstof, såsom mannitol. Det andet hætteglas lyofiliseres ved en pH-værdi på ca. 9. Når hæt-10 teglassenes indhold blandes sammen med steril saltopløsning, opnås der en optimal pH-værdi på fra ca. 3,0 til ca. 5,0.

Dette tilvejebringer optimal reaktion af diamindithiolligan-den med reduceret 99mTc til fremstilling af det ønskede radiofarmaceutikum i højt udbytte og høj renhed. En frem-15 gangsmåde, ved hvilken Tc-99m-radiofarmaceutika kan fremstilles i højt udbytte, er som følger:

Et hætteglas (A) fremstilles som et sterilt, ikke-pyrogent, frysetørret materiale indeholdende dihydro-chloridsaltet af den esterderivatiserede diamindi-20 thiolligand i mængder på fra 100 μq til 2 mg eller derover sammen med et egnet indifferent fyldstof, såsom mannitol, til tilvejebringelse af en hensigtsmæssig prop efter frysetørring.

25 Det andet hætteglas (B) fremstilles som et sterilt, ikke-pyrogent, frysetørret materiale indeholdende et egnet reduktionsmiddel, såsom et stannosalt, f.eks. SnCl2, i mængder på fra 5 μς til 100 μq eller derover. Hætteglas B kan også indeholde en ligand til stabi-30 lisering af Sn(II), såsom ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA), i en mængde på fra 100 μq til 1,0 mg eller derover. Desuden kan der anvendes et volumengivende middel, såsom mannitol, til hjælp ved lyofilisering.

35 99inTc-radiofarmaceutiket, som beskrevet ved den fore liggende opfindelse, fremstilles ved blanding af DK 175089 B1 31 indholdet af hætteglassene (A) og (B) med 99roTc04 fra en radiofarmaceutisk 99Mo/99n,Tc-generator ved anvendelse af sterilteknik, som er velkendt for fagfolk på området fremstilling af sterile, injicerba-5 re materialer. Det tilsatte generatorelueringsmiddel bør tilvejebringe en aktivitet på fra ca. 20 til ca.

50 mCi. Efter 15 minutter ved stuetemperatur er 99®Tc-diamindithiolkomplekset, som her beskrevet, dannet i højt radiokemisk udbytte, f.eks. over 80%.

10

De efterfølgende eksempler illustrerer fremstillingen af technetium-99m-komplekser ifølge opfindelsen.

32 υκ ί /ijuay bi

HsCjO,C. HN^o\ >C°2C2H5 H,a>jCv h/0\|^..'C°2CHs ls:!0 Vv

Eksempel A Eksempel B

H3C02C,. mr0XH -C°2CH3 HsCjOjCv „n^NH i00*0*”* wv

Eksempel C Eksempel D

Eksempel E Eksempel F

h5c2o2c co2c2h5 ^Λ\η®υ“ΑΝ’ ΓΗΝν^Ν'η

VV L.'V

Eksempel G Eksempel H

33 DK 175089 B1

Disse technetium-99m-komplekser fremstilles ved anvendelse af standardmærkningsbetingelser, som er mage til dem, som er rapporteret i litteraturen for andre diamin-dithiolligander. For alle komplekserne, bortset fra komplek-5 set fra eksempel D, rekonstitueres et "Glucoscan"-prøvesæt (en blanding af natriumglucoheptonat og stannochlorid) med 50-150 mCi 99mTcC>4 opnået ved eluering af en 99Mo/99lnTc--radionuclidgenerator. 1-10 mg diamindithiol i 0,2-1,0 ml vand tilsættes, og blandingen får lov at henstå i 1-30 mi-10 nutter. Hvor der er tale om komplekserne fra eksemplerne C, E og I, er opvarmning nødvendig til gennemførelse af fjernelse af benzamidomethylbeskyttelsesgruppeme. For komplekset fra eksempel D anvendes en modifikation af metoden ifølge Baldas et al., Int. J. Appl. Radiat. Isot., 36, 133 (1985).

15 100-200 mCi generatoreluat bringes til tørhed ved rotations- inddampning, og 15 ml 12 M HC1 efterfulgt af 15 mg natrium-azid tilsættes under omrøring. Efter henstand i 5 minutter bringes blandingen til tørhed ved roterende inddampning og genopløses i 1 ml puffer (0,05 M natriumphosphat, pH-værdi 20 7,0). 1-10 mg diamindithiol i 0,2-2 ml saltopløsning sættes til remanensen, og blandingen får lov at henstå ved stuetemperatur i 1-30 minutter, idet der opvarmes om nødvendigt til afslutning af reaktionen.

Når først komplekserne er fremstillet, renses de ved 25 højtryksvæskechromatografi på en ’’Brownlee RP-8 Spheri 5”--kolonne ved anvendelse af en 0,05 M ammoniumacetat (NH40Ac)/methanol-gradient. Gradienten går typisk fra indledningsvis 20-40% methanol op til 100% methanol i løbet af 15 minutter og omfatter en indledende holdeperiode ved star-30 ten af gradienten på 1-10 minutter, og de rensede komplekser isoleres ved roterende afdampning af opløsningsmidlet ved stuetemperatur. De på denne måde opnåede komplekser bedømmes for renhed ved tyndtlagschromatografi på "Whatman C-18"-plader med omvendt fase ved anvendelse af en opløsningsmid-35 delblanding indeholdende 65% methanol, 5% tetrahydrofuran, 10% acetonitril og 20% 0,5 M NH4OAc. I alle tilfælde er

LMV I I 9U03 O I

34 radiokemikalier enheden over 90%. Oplosninger af komplekserne i saltopløsning har vist sig at være stabile i mindst 4 timer.

Komplekserne injiceres intravenøst, sædvanligvis i 5 saltopløsning, i en dosis på 5-100, fortrinsvis 5-50, mil-licurie pr. 70 kg legemsvægt, og optagelsen af billeder sker ved kendte metoder.

Anvendelighed.

10 De ovenfor beskrevne komplekser er blevet bedømt for potentiel klinisk anvendelighed som radiofarmaceutika til vurderingen af regional, cerebral blodstrømning, ved at der er gennemført studier med optagelse af hjernebilleder på rhesusaber. Ud fra disse studier er hjerneekstraktionen 15 (procent af den injicerede dosis) og hjernetilbageholdelsen (T blevet bestemt.

Metoder.

Hanrhesusaber berøves foderet i 24 timer, før der 20 fremkaldes anæstesi med en intramuskulær injektion af en blanding af 10 rog/kg ketamin-hydrochlorid og 1 mg/kg acepro-mazin-maleat. Efterfølgende injektioner af 65 mg/ml natrium-pentobarbitol via et kateter i den udvendige benvene gives til opretholdelse af anæstesi. Umiddelbart før billedop-25 tagelse indgives 18-22 mCi af technetium-99m-komplekset via katetret i benvenen.

Dynamisk optagelse af plane billeder gennemføres ved anvendelse af et Picker Digital Dyna Camera (Picker Int., Northford, CT) grænsende op til en Computer Design and Ap-30 plications (CDA) Microdelta kernemedicinsk computer (CDA, Waltham, MA) . Det dyr, hvoraf der skal tages billeder, er fæstnet på et patientleje med sit hoved i venstre lateral stilling i centrum for kameraets synsfelt. Data samles dynamisk til en 64 x 64 ord modus matrix, en ramme pr. minut i 35 op til 2 timer ved anvendelse af en hurtig optræksmodus på 2X.

35 DK 175089 B1

Tids-aktivitets-kurver indsamles ved anvendelse af en region af interesse (ROI), som indeslutter hjernen som afgrænset af en isokontur, som markerer en tællingstætheds-ændring på mellem 25 og 45% af maksimum. En baggrund-ROI 5 placeres lige uden for hjernens nakkeareal og følger konturen for hjerne-ROI. Antallet af tællinger pr. pixel i hver enkelt ROI pr. injiceret mCi beregnes for hvert enkelt af forsøgets etminutsbilleder. Tællingerne for begge ROI korrigeres for henfald, og baggrundstællingerne trækkes fra hjerne-ROI-10 -tællingerne.

Procenten af injiceret dosis (%I.D.) beregnes ved anvendelse af resultaterne fra tids-aktivitets-kurverne. Maksimumtællingerne pr. pixel pr. mCi omdannes til maksimumsønderdelinger pr. minut. Antallet af sønderdelinger i hjer-15 nen omdannes til mCi i hjernen og sammenlignes med den injicerede dosis, hvilket giver en %I.D. i hjernen.

Tilbageholdelsestiden for komplekset i hjernen beskrives ved hjælp af halveringstiden (t h). Beregninger af halveringstiden gennemføres ved anvendelse af en kommerciel 20 tilgængelig, eksponentiel afrivningspakning og et ikke-line-ært farmakokinetisk modeleringsprogram (Statistical Consultants, Inc. (1986) "PCNONLIN og NONLIN84: Software for the Statistical Analysis of Nonlinear Models" The American Statistician, bind 40, 52) . Indledningsvise bedømmelser af 25 udvaskningshastigheder bestemmes ved anvendelse af den eksponentielle afrivningspakning. Disse bestemmelser anvendes i PCNONLIN-modelingsprogrammet til bestemmelse af udvaskningskinetik og biologisk T h. Det er blevet antaget, at komplekserne følger enkeltområdekinetik. Hvis data ikke under-30 støtter denne antagelse, anvendes flerområdeanalyse.

Resultaterne er vist i tabel II.

35 UIV I i0UB9 Dl 36

Tabel II

Kemiske og biologiske karakteristika, adskillelseskoefficient, hjernekestraktion 5 og tilbageholdelse af 99inTc-komplekser

Abebillede

Eks. Adskillelses- 10 nr. koefficient1 % I.D.2 T h (min)3 A 44 4,8±0,8 (6) >1440 (6) B 7 2,9±2,4 (5) 167+15 (3) C 35 3,0 (1) <30 (1) 15 D 12 2,8+0,2 (2) >1440 (2) E 142 3,2 (1) <30 F 52 3,2 (2) <30 G 310 4,6±0,6 (3) >1440 H 19 <2 (1) <30 20

Alle værdier er middel ± standardafvigelse.

Tallene i parentes er antallet af dyr, som er anvendt ved beregningen.

1 Octanol/vand-adskillelseskoefficient.

25 2 Maksimal % I.D. som bestemt ved plan billedoptagelse.

3 Bedømt halveringstid for fjernelse fra hjernen.

Et andet vigtigt kriterium for et radiofarmaceutikum til vurderingen af regional, cerebral blodstrømning er, at 30 radiofarmaceutiket fordeles som en funktion af blodstrømningen. Fordeling som en funktion af blodstrømningen kan påvises ud fra en analyse af SPECT-billeder.

SPECT-billeder af format analyseres ved anvendelse af et på densitometrisk video baseret kamerasystem (Loats 35 Assoc., Westminster, MD) til opnåelse af information om koncentrationen og fordelingsmønstret af 99lnTc. Radioaktiviteten i forskellige hjerneområder er blevet antaget at være positivt og lineært relateret til ændringer i filmab- DK 175089 B1 37 sorption. Den gennemsnitlige hjernearealabsorption pr. pixel-værdi beregnes. Neuroanatomiske grænseskel for placering af hjemeareal ROl er baseret på atlasser over den menneskelige hjernes positronudsendelsestomografi. Mængdeforholdet mellem 5 absorptionen mellem forskellige områder af gråt stof (corti- . calområder og thalamus) og et referenceområde med hvidt stof bestemmes ca. 50 og 150 minutter efter indgift.

Denne analyse er blevet gennemfort ved anvendelse af komplekset fra eksempel A. Resultaterne er opsummeret i 10 tabel III og viser, at der iagttages et gråt/hvidt-mængde-forhold på 2-3:1 for komplekset fra eksempel A, hvilket er i overensstemmelse med fordeling som en funktion af cerebral blodstrømning.

15 Tabel III

Mængdeforhold for abehjerneområdeaktivitet udledt af SPECT-billeder af format af kompekset fra eksempel A

20

Tid eller indgift af forbindelse (min) Region 53 150 25 Occipital cortex 3,3 2,6

Parietal cortex 3,1 2,5

Frontal cortex 2,9 2,3

Thalamus 2,5 2,1 30 Værdierne er det procentvise absorptionsforhold for regioner af interesse i forhold til corpus callosum-lateral ventrical (dvs. referenceområder med hvidt stof).

35 De radiomærkede diamindithiolkomponenter, især de

Tc-99m-mærkede, er også anvendelige ved mærkning af hvide blodceller in vitro.

Selv om diamindithiolkomplekser, som er specifikt ' beskrevet her, især er gunstige ved optagelse af radiobil- 40 leder af hjerneperfusion hos pattedyr, er aminerede (N-hol-dige) og andre grupper, som er beskrevet i den kendte teknik, og andre uspecificerede materialer og betingelser ikke ude υκ i /Duay bi 38 lukket, så længe de ikke forhindrer, at fordelene ved den foreliggende opfindelse opnås.

Claims

1. Estersubstitueret diamindithiol, kendetegnet ved, at den har formlen r2^T^sh hs^r,, V-/ \=/

2. Estersubstitueret diamindithiol, kendetegnet ved, at den har formlen 30 ,»· l·7.) 35 "^sh eller er et farmaceutisk egnet salt deraf, hvor hver enkelt af grupperne R^—R12 individuelt er udvalgt fra den gruppe, som består af H, alkyl med 1-6 carbonatomer og -A-COOR, hvor A er ligekædet eller forgrenet alkylen med 0-6 car-5 bonatomer, n, o og p uafhængigt er 1 eller 2, og R er alkyl med 1-6 carbonatomer, idet dog mindst én af grupperne R^-R12 er -A-COOR, hvilken estersubstituerede diamindithiol foreligger i steril, farmaceutisk acceptabel form.

3. Diamindithiol ifølge krav 2, kendeteg net ved, at n, o og p er 1, og R3 og R10 er -A-COOR, hvor A er ligekædet alkylen med 0-3 carbonatomer, R er alkyl med 1-3 carbonatomer, R4 og R9 er H, og R1, R2, R5, R6, R7, R8, Ri1 og R12 individuelt er udvalgt far den gruppe, som 15 er består af H og alkyl med 1-3 carbonatomer.

4. Diamindithiol ifølge krav 2, k endetegnet ved, at A er en binding, og stereokemien i den stilling, hvor denne binding er knyttet til diamindithiolskelet-tet, er L.

5. Steril, farmaceutisk acceptabel diamindithiol ifølge krav 2, kendetegnet ved, at den er N,N'-1,2-ethylendiyl-bis-L-cysteindiethylester-dihydrochlo-rid, l^N'-l^-ethylendiyl-bis-L-cysteindimethylester-dihy-drochlorid eller N,N'-l,2-ethylendiyl-bis-L-cysteindi-n- 25 propylester-dihydrochlorid.

6. Prøvesæt, kendetegnet ved, at det omfatter en forudbestemt mængde af en steril, farmaceutisk acceptabel, estersubstitueret diamindithiol ifølge krav 1 og en forudbestemt mængde af et sterilt, ikke-pyrogent reduktions- 30 middel til reduktion af et forudvalgt radionuclid.

7. Prøvesæt, kendetegnet ved, at det omfatter en forudbestemt mængde af en steril, farmaceutisk acceptabel, estersubstitueret diamindithiol ifølge krav 2 og en forudbestemt mængde af et sterilt, ikke-pyrogent re- 35 duktionsmiddel til reduktion af et forudvalgt radionuclid. DK 175089 B1

8. Prøve ifølge krav 7, kendetegnet ved, at reduktionsmidlet er et stannosalt til reduktion af tech-netium-99m.

9. Prøvesæt ifølge krav 8, k endetegnet 5 ved, at diamindithiolen er en diamindithiol ifølge krav 3.

10. Prøvesæt ifølge krav 8, kendetegnet ved, at diamindithiolen er diamindithiolen ifølge krav 4.

10 R’ R« *· «1 Ru A B eller er et farmaceutisk egnet salt deraf, hvor hver enkelt af grupperne R1-R3.2 individuelt er udvalgt fra den gruppe, som består H, alkyl med 1-10 carbonatomer og -A-COOR, hvor 15. er ligekædet eller forgrenet alkylen med 0-10 carbonatomer, n, o og p uafhængigt er 1 eller 2, og R er (a) alkyl med 1-10 carbonatomer, (b) phenyl eller benzyl eventuelt substitueret med op til 5 ringsubstituenter, som hver især er udvalgt fra alkyl med 1-4 carbonatomer, fluor, chlor, brom, 20 nitro, alkoxy med 1-4 carbonatomer, carboxylsyre eller car-boxylsyreester med 1-4 carbonatomer, elller (c) en 5- eller 6-leddet heterocyclisk ring indeholdende l eller 2 hetero-atomer udvalgt fra N, O eller S, idet dog mindst én af grupperne Ri“Ri2 er -A-C00R, 25 hvilken estersubstituerede diamindithiol foreligger i steril, farmaceutisk acceptabel form.

11. Prøvesæt ifølge krav 8, kendetegnet ved, at diamindithiolen er en diamindithiol ifølge krav 5.

12. Radiofarmaceutikum, k endetegnet ved, at det i det væsentlige består af et lipofilt, ladningsneutralt radionuclidkompleks af diamindithiolligand ifølge krav 1 med mindst én estergruppe med formlen -A-COOR, hvor A er ligekædet eller forgrenet alkylen med 0-6 carbonatomer, 15 og R er en alkylgruppe med 1-6 carbonatomer.

13. Radiofarmaceutikum ifølge krav 12, k endetegnet ved, at diamindithiolen har formlen ft / ft i ftv Λ • ft ft* «Tr, . 1 ft* fti A Θ 25 eller er et farmaceutisk egnet salt deraf, hvor hver enkelt af grupperne R^-R^ individuelt er udvalgt fra den gruppe, som består af H, alkyl med 1-10 carbonatomer og -A-COOR, hvor A er ligekædet eller forgrenet alkylen med 0-10 carbonatomer, n, o og p uafhængigt er 1 eller 2, og R er (a) alkyl med 30 1-10 carbonatomer, (b) phenyl eller benzyl eventuelt substi tueret med op til 5 ringsubstituenter, som hver især er udvalgt fra alkyl med 1-4 carbonatomer, fluor, chlor, brom, nitro, alkoxy med 1-4 carbonatomer, carboxyl eller en carboxyl syreester med 1-4 carbonatomer, eller (c) en 5- eller 35 6-leddet heterocyclisk ring indeholdende 1 eller 2 hetero- atomer udvalgt fra N, 0 eller S, idet dog mindst én af grup- ui\ i /t>uoy bi perne Ri“Ri2 er -A-COOR, hvilken estersubstituerede diamindithiol foreligger i steril, farmaceutisk acceptabel form.

14. Radiofarmaceutikum ifølge krav 12, kende-5 tegnet ved, at diamindithiolen har formlen . -‘AH (4i—«..»), 10 r2JL JL r11 Rl hvor hver enkelt af grupperne R^—R12 individuelt er udvalgt fra den gruppe, som består af H, alkyl med 1-6 carbonatomer 15 og -A-COOR, hvor A er ligekædet eller forgrenet alkylen med 0-6 carbonatomer, n, o og p uafhængigt er 1 eller 2, og R er alkyl med 1-6 carbonatomer, idet dog mindst én af grupperne R^—R12 er -A-COOR.

15. Radiofarmaceutikum ifølge krav 14, kende-20 tegnet ved, at radionuclidet er en radioaktiv isotop af Tc, Ru, Cu, Co, Pt, Fe, Os, Ir, W, Re, Cr, Mo, Mn, Ni, Rh, Pd, Nb eller Ta.

16. Radiofarmaceutikum ifølge krav 14, kendetegnet ved, at radionuclidet er technetium-99m.

17. Radiofarmaceutikum ifølge krav 16, kende tegnet ved, at n, o og p er 1, R3 og R10 er -A-COOR, hvor A er ligekædet alkylen med 0-3 carbonatomer, og R er al kyl med 1-3 carbonatomer, R4 og R9 er H, og R1, R2, R5, R6, R7, R8, R11 og R12 individuelt er udvalgt fra den gruppe, 30 som består af H og alkyl med 1-3 carbonatomer.

18. Radiofarmaceutikum ifølge krav 16, kendetegnet ved, at A er en binding, og at stereokemien i den stilling, hvor denne binding er knyttet til diamindi-thiolskelettet, er L.

19. Radiofarmaceutikum ifølge krav 16, k ende tegnet ved, at diamindithiolen er N,N'-l,2-ethylendiyl- DK 175089 B1 -bis-L-cysteindiethylester, N, Ν'-1,2-ethylendiyl-bis-L-cy-steindimethylester-dihydrochlorid eller N,N'-1,2-ethylendiyl--bis-L-cysteindi-n-propylester-dihydrochlorid.

20. Fremgangsmåde til fremstilling af et radiofar-5 maceutikum, kendetegnet ved, at en diamindithiol ifølge krav 1 og et salt af et radioaktivt metal blandes i 4 nærværelse af et egnet reduktionsmiddel, om nødvendigt, i vandige medier ved temperaturer fra stuetemperatur til tilbagesvalingstemperatur eller endnu højere i et tidsrum på 10 fra 1 minut til 2 timer.