DK174744B1

DK174744B1 - (Cycloalkylamino)methylenbis(phosphonsyrer) og farmaceutiske præparater indeholdende forbindelserne

Info

Publication number: DK174744B1
Application number: DK198900243A
Authority: DK
Inventors: Tetsushi Abe; Yasuo Isomura; Makoto Takeuchi; Shuichi Sakamoto
Original assignee: Yamanouchi Pharma Co Ltd
Priority date: 1988-01-20
Filing date: 1989-01-20
Publication date: 2003-10-13
Also published as: KR970005179B1; HU202243B; CN1022630C; CN1035829A; EP0325482A1; HUT50841A; IE60477B1; KR890011601A; DK24389D0; DE68901097D1; CA1339805C; AU2867089A; US4970335A; US5041428A; ES2032105T3; PH26819A; EP0325482B1; AU615711B2; ATE74361T1; GR3004461T3

Description

DK 174744 B1 I

Den foreliggende opfindelse angår (cycloalkylamino)meth- I

ylenbis(phosphonsyre), lavere alkylestere heraf eller H

farmaceutisk acceptable salte heraf, der er lægemidler H

med en knogleresorptionshæmmende virkning såvel som en H

5 anti-inflammatorisk virkning og en anti-rheumatisk virk- I

ning og angår også præparater indeholdende forbindelser- H

ne som en aktiv bestanddel. H

Visse derivater af (cycloalkylamino)methylenbis (phos- H

phonsyre) er kendte. Japansk offentliggjort patent nr. H

10 37,829/79 omhandler forbindelser med en usubstitueret H

cyclopentylgruppe eller en cyclohexylgruppe, og japansk H

patentskrift nr. 12,319/80 omhandler en forbindelse med H

en cyclohexylgruppe som cycloalkylgruppen. Disse ja- H

panske patentskrifter nævner, at forbindelserne kan an- H

15 vendes som kemikalier inden for landbruget, specielt som H

herbicider, og at de kan anvendes ved en metode til at

forhindre udfældning i vand eller i vandig opløsning, I

men omtaler overhovedet ikke anvendelsen af forbindel- H

serne som lægemidler. H

20 Den foreliggende opfindelse angår således (cycloalkyl- H

amino)methylenbix(phosphonsyre) derivater med en usub- I

stitueret eller substitueret cycloalkylgruppe med 3 til I

10 carbonatomer, der kan anvendes som en knogl-resorp- H

tionsinhibitor og et anti-arthritis-middel. I

25 Opfindelsen tilvejebringer således et farmaceutisk præpa- I

rat indeholdende som en aktiv bestanddel (cycloalkylami- I

no)methylenbis(phosphonsyre)eller en lavere alkylester I

heraf med den almene formel:

/"Λ / Μ<ο^ I

(ch2)„ -4—nhch , 0) I

V)V \po<“. I

2 DK 174744 B1 12 3 4 hvori R, R , R , R og R betegner et hydrogenatom eller en lavere alkylgruppe, og n er et tal fra 3 til 10; eller et farmaceutisk acceptablet salt af syren.

5 Den foreliggende opfindelse tilvejebringer også et knog-le-resorptionshæmmende og anti-arthritis-holdigt lægemiddel, der som den aktive bestanddel indeholder en forbindelse med den almene formel (I), en lavere alkylester heraf eller et farmaceutisk acceptabelt salt heraf.

10 Herudover tilvejebringer opfindelsen også en hidtil ukendt forbindelse med den almene formel (I), hvori R, 12 3 4 R , R , R og R betegner et hydrogenatom eller en lavere alkylgruppe, n er et helt tal fra 3 til 10, men R betegner en lavere alkylgruppe, når n er 5 eller 6.eller 15 et farmaceutisk acceptabelt salt af forbindelsen, når denne er en syre.

Den lavere alkylgruppe i den almene formel (I) er en lige eller forgrenet carbonhydridgruppe med 1 til 5 carbon-atomer. Typiske lavere alkylgrupper er methylgruppen, 20 ethylgruppen, propylgruppen eller isopropylgruppen.

Gruppen med den kemiske formel

R

i den alemen formel (I) er en cyclopropylgruppe, en cyc-lobutylgruppe, en cyclopentylgruppe, en cyclohexylgrup-pe, en cycloheptylgruppe, en cyclooctylgruppe, en cyclo-

DK 174744 B1 I

nonylgruppe eller en cyclododecylgruppe, der hver især H

er substitueret med en lavere alkylgruppe eller er usub- H

stitueret. H

Saltet af forbindelsen med formlen (I) er et salt med en H

5 farmaceutisk acceptabel base. Som foretrukne salte kan H

nævnes salte med uorganiske baser, som for eksempel H

natriumsalte eller kaliumsalte, og salte med organiske H

baser, som for eksempel ammoniumsalte eller triethylamin- H

salte. H

10 De omhandlede forbindelser kan fremstilles efter følgen- H

de reaktionsskema: H

Q O - lavere alkylgruppe qr1 (p3) I

NH2+HC^- O-lavere alkylgriBpe+HPO 2 I

O - lavere alkylgruppe OR (R ) I

(Π) m (IV> I

, I

-> (ch2)„ -4-nhch

\po<®4 I

Ved denne omsætning blandes alle komponenter i form af I

en cycloalkylamin (II) , et lavere alkylortho-formiat I

(III) og en phosphorsyrling eller dens lavere alkylester I

15 (IV) med hinanden i de tilsvarende reaktionsmængder og H

opvarmes. Et reaktionsopløsningsmiddel er ikke speci- I

elt nødvendigt. Omsætningen udføres sædvanligvis ved I

100 til 200°C, fortrinsvis omkring 150°C, i 10 til 60 I

minutter. fl

20 For at isolere og oprense det således fremstillede reak- I

tionsprodukt hældes reaktionsblandingen for eksempel på I

I DK 174744 B1 I 4 I en silicagelsøjle og eluéres med et blandet opløsnings- I middel af methanol-chloroform. Ved ovennævnte omsætning I kan den tilsvarende bisphosphonsyre eller bisphosphonat I fås henholdsvis ud fra phosphorsyrlingen eller dens I 5 ester (IV).

I Bisphosphonaterne kan omdannes til de tilsvarende bis- I phosphonsyrer ved hydrolyse. Hydrolysen udføres sædvan- I ligvis ved opvarmning af bisphosphonaterne under tilbage- I svaling i koncentreret saltsyre. Alternativt kan bis- I 10 phosphonaterne behandles med en stærk syre eller et tri- I methylsilylhalogenid i et vandfrit opløsningsmiddel.

I Til fremgangsmåden er almindeligvis en kommerciel vandfri I hydrogenbromidsyre i eddikesyre direkte anendelig eller I i form af en forsigtigt fortyndet opløsning eller en op- I 15 løsning af trimethylsilyliodid opløst i et opløsnings- I middel, som for eksempel carbontetrachlorid, dimethyl- I formamid, chloroform eller toluen. Med hensyn til tem- I peraturen udføres hydrolysen under afkøling eller opvarm- I ning. Hvis esteren for eksempel hydrolyseres med et I 20 trimethylsilylhalogenid under afkøling ved -10°C eller I herunder, opnås et delvist hydrolyseretprodukt.

I Dersom bisphosphonsyren skal omdannes til dens salt, be- I handles syren med en base, som for eksempel natrium- I hydroxid, kaliumhydroxid, ammoniak eller organiske ami- I 25 ner på almindelig måde.

I Forbindelserne med formel (I) og deres salte har en I knogleresorptionshæmmende virkning og også en evne til I at hæmme hypercalcemi forårsaget af knogleresorption.

I Herudover ses de at have glimrende anti-inflammatorisk I 30 virkning og antipyretisk og analgesisk virkning. 1

Eksperimentelle forsøgsmetoder og resultater er omtalt I nedenfor for at påvise den hæmmende virkning på hyper- I calcemi udøvet af forbindelserne med formel (I) ifølge DK 174744 B1 5 opfindelsen eller deres salte.

(1) Hæmmende virkning på hypercalcemi hos rotter

Rotter med hypercalcemi induceret ved administrering af parathyroidea-hormon blev anvendt, og formindskelsen af 5 serumcalciummængden ved administrering af forbindelsen blev målt.

Forsøgsmetode 30 yg/kg humant 1-34 parathyroidea-hormin (PTH, fremstillet af Peptide Laboratory), der var opløst i en 0,1% 10 BSA {bovint serum-albumin)-holdig fysiologisk saltopløsning (indholdet af PTH er 6 yg/ml) blev intravenøst injiceret i en mængde på 30 yg/kg (5 ml/kg som opløsning) til 5 uger gamle Wistar-rotter, der havde fastet i 20 timer. Kun 0,1% BSA-holdigt fysiologisk saltvand blev 15 injiceret i de normale kontrolgrupperpå samme måde. 45 minutter efter PTH-injektion blev rotterne etherbedøvet og underkastet celiotomi, hvorved blodet blev opsamlet fra bughulen med en vakuum-blodopsamlingsanordning. Det opsamlede blod blev straks herefter centrifugeret ved 20 3.000 omdrejninger pr. minut ved 4°C i 10 minutter for ++ at isolere serum. Den ioniserede calcium (Ca )-koncentration i serum blev straks målt med et Ca++-meter (Sera 250, fabrikeret af Horiba Manufacturing Co.).

De omhandlede forbindelser blev opløst under anvendelse 25 af natriumhydroxid og saltsyre i fysiologisk saltvand (pH 7,4) til subcutan administrering i sådanne mængder, at dosen androg 2 ml/kg. De blev administreret 72 timer inden PTH-injektionen. Fysiologisk saltvand eller destilleret vand blev administreret til den normale kon-30 trolgruppe og kontrolgruppen på samme måde. Som en referenceforbindelse blev laksecalciton (SCT, fremstillet af Armour Co.) anvendt til målingerne. SCT blev administreret subcutant i en dosis på 2 mg/kg 30 minutter inden PTH-injektionen.

I DK 174744 B1 I 6 I Resultaterne for hver gruppe blev udtrykt som gennemsnit I + standardafvigelse, og sammenligning blev foretaget mel- I lem grupperne ved at undersøge ved hjælp af envejsvari- I antanalyse. Signifikant-niveauet blev taget ved 5%.

I 5 Resultater I De opnåede resultater er angivet i tabel 1.

I TABEL 1 I Subcutan administrering I Dosis Serum Ca++ I 10 Undersøgt forbindelse (mg/kg) N (m mol / £) I Normal kontrol - 5 1,42+0,02 I Kontrol - 5 1,48+0,03 I Forbindelse fra eks. 8 0,3 5 l,25+0,02xx I Forbindelse fra eks. 8 1,5 5 l,12+0,02xx I 15 Normal kontrol - 5 l,41+0,02xx I Kontrol - 5 1,46+0,02 I Forbindelse fra eks. 15 0,03 5 l,37+0,02xx I Forbindelse fra eks. 15 0,1 5 l,20+0,02xx I Normal kontrol - 5 l,34+0,02xx I 20 Kontrol - 5 1,43+0,01 I Forbindelse fra eks. 14 0,1 5 l,34+0,02xx I Forbindelse fra eks. 14 0,3 5 l,21+0,01xx I Forbindelse fra eks. 5 0,1 5 l,12+0,01xx I Forbindelse fra eks. 5 0,3 5 0,97+0,02xx

I 25 Normal kontrol - 5 1,36+0,01XX

I Kontrol - 5 1,45+0,02 I Forbindelse fra eks. 9 0,1 5 l,31+0,01xx I Forbindelse fra eks. 9 0,3 5 1,19+0,01xx I Forbindelse fra eks. 10 0,1 5 l,35+0,01xx I 30 Forbindelse fra eks. 10 0,3 5 l,22+0,01xx

DK 174744 B1 I

TABEL 1 (forts.) I

Dosis Serum Ca

Undersøgt forbindelse (mg/kg) N (m mol /i) H

Normal kontrol - 5 1,35+0,02 H

5 Kontrol - 5 1,44+0,01 I

Forbindelse fra eks. 11 1,0 5 l,35+0,02xx H

Normal kontrol - 5 1,38+0,01XX I

Kontrol - 5 1,48+0,02 H

Forbindelse fra eks. 7 0,3 5 1,40+0,02xx H

10 Forbindelse fra eks. 7 1,0 5 l,29+0,01xx H

Forbindelse fra eks. 6 0,3 5 l,33+0,03xx I

Forbindelse fra eks. "6 1,0 5 l,12+0,03xx I

Normal kontrol - 5 l,38+0,01xx I

Kontrol - 5 1,49+0,00 I

15 SCT 0,3 IU 5 1,07+0,02xx I

Bemærkning: Gennemsnitsværdi + standardafvigelse H

XP<0,05 XXP<0,01. I

(2) PTH-induceret hypercalcemi hos rotter

Metoder H

20 PTH (humant PTH 1-34, 30 yg/kg) blev intravenøst inji- I

ceret i rotter (Wistar, han, ca. 3 uger gamle). Blodet I

blev opsamlet 45 minutter efter PTH-injektion. Ionise- I

++ ++ ret calcium (Ca ) i serum blev målt med et Ca -meter.

Forsøgsforbindelserne blev administreret subcutant eller H

25 peroralt 3 dage inden PTH-injektion. Resultaterne er I

udtrykt som gennemsnit + standardafvigelse. Statistisk I

significans af værdierne blev analyseret under anvendel- I

V YV H

se af envejs ANOVA-forsøget ( : p <0,05, : p<0,01).

I DK 174744 B1 I 8 I Resultater I ++ PTH forøgede serum Ca -niveauet sandsynligvis ved sti- I mulering af calciumfrigørelse fra knoglen. Bisphospho- I nater, forbindelsen fra eksempel 5 (i det efterfølgende I 5 YN-21175-1) og APDX hæmmede dosisafhængigt stigningen i I serum Ca++-niveau, dersom de blev administreret subcu- I tant eller peroralt til rotter tre dage inden PTH-in- I jektionen. YM-21175-1 var ca. ti gange kraftigere end I APB, både ved subcutan og peroral administrering.

I 10 TABEL 2 I Dosis Serum Ca++ I (mg/kg) N (m mol / l) I Normal (-PTH) - 5 1,42+0,02 I Kontrol (+PTH) - 5 1,49+0,02 I 15 A P D 0,03 sc 5 1,49+0,02 I 0,1 sc 5 1,46+0,01 I 0,3 sc 5 1,41+0,02x I A P D 30 po 5 1,50+0,02 I 100 po 5 1,42+0,02

I 20 300 po 5 1,22+0,02XX

I YM-21175-1 0,01 sc 5 1,44+0,02 0,03 sc 5 1,36+0,02 "

I 0,1 sc 5 1,15+0,01XX

I Normal (-PTH) - 5 1,35+0,02 I 25 Kontrol (+PTH) - 5 1,45+0,02 I YM-21175-1 10 po 5 1,37+0,02

I 30 po 5 1,23+0,05XX

I 100 po 5 1,05+0,04XX 1 X:APD (Ciba-Geigy); H2NCH2CH2C(P03H2)2

I OH

I 30 (et handelstilgængeligt præparat til behandling I af Paget's knoglesygdom).

DK 174744 B1 I

(3) Inaktivitetsatrofi af knogle induceret ved H

neurectomi på rotter H

Metoder H

Rotter (Wistar, han, 6 uger gamle) blev neurectomiseret H

5 ved hjerne*plexisus, således at deres venstre forlemmer H

blev inaktiveret. To uger senere blev venstre skulder H

fjernet. Det døde væv rundt om knoglen blev afrenset, H

og knoglen ved dehydratiseret og affedtet med alkohol H

og acetone efter hinanden. Knoglens tørvægt blev målt. H

10 Forbindelser blev administreret peroralt en gang om da- H

gen i to uger. Resultaterne er udtrykt som gennemsnit H

+ standardafvigelse. Statistisk signifikans af værdier- H

ne blev analyseret under anvendelse af en-vejs ANOVA-for- H

søget (x: p<0,05, xx: p<0,01). I

15 Resultater H

Tørvægten af den denerverede skulder var signifikant H

nedsat i forhold til den skin-opererede skulders vægt. H

Peroral administrering af bisphosphonater, YM-21175-1 og H

APD, udviste dosisafhængig hæmning af tørvægtstab i den H

20 denerverede skulder. YM-21175-1 er cirka 30 gange kraf- H

tigere end APD. H

I DK 174744 B1 I 10 I TABEL 3 I Virkninger af YM-21175-1 og APD på inaktivitetsatrofi I af knogler induceret ved neurectomi på rotter I Dosis Tørvægt I 5 (mg/kg) N (mg)

I Skin-opereret - 6 154+3XX

I Kontrol - 6 113+2 I APD 10 5 126+3

I 30 5 128+4X

I 10 100 6 135+2XX

I YM-21175-1 0,3 6 126+2

I 16 132+6XX

I 36 135+3XX

I 10 6 150+4XX

I 15 (4) Adjuvans-induceret arthritis hos rotter I Metoder I En suspension af døde bacilli i olie blev indsprøjtet in- I tradermalt i venstre bagpote på rotter (Lewis, han, 5 I uger gamle). Forbindelser blev givet peroralt dagligt i I 20 5 uger, idet man startede på dagen for indsprøjtning af I adjuvans. Tykkelsen af den venstre bagpote blev målt, og I venstre lårben blev fjernet på den sidste dag for dose- I ring. Knoglerne blev dehydratiseret og affedtet, hvor- I efter tørvægten atter blev målt. De blev atter målt, ef- I 25 ter at de var forasket.

I Knoglemineralindhold (BMC) blev beregnet som askevægt/ I tørvægt. Resultaterne blev udtrykt som et gennemsnit I + standardafvigelse (N=6). Statistisk signifikans af I værdierne blev analyseret under anvendelse af en-vejs

DK 174744 B1 I

V v H

ANOVA-forsøget ( : p<0,01).

Resultater H

Adjuvans-induceret arthritis er en af de populære model- I

ler for afprøvning af rheumatoid arthritis hos mennesker. H

5 Arthritiske rotter induceret ved injektion af adjuvanset I

viste ikke alene opsvulmning af foden# men også nedgang H

af BMC, hvilket antages at være forårsaget af stigning H

af knogleresorption og/eller inaktivering af baglemmer- H

ne.

10 Indomethacin 1 mg/kg hæmmede markant opsvulmningen af H

baglemmerne. Den hæmmede også nedgangen af BMC som et H

resultat af hæmning af udvikling af arthritis. YM-21175- H

1 hæmmede opsvulmningen kun ved høje doser, men nedgang H

af BMC i 1 mg/kg. Der er derfor sandsynligvis forskel H

15 mellem den hæmmende virkning af indimethacin og YM- H

21175-1. YM-21175-1 var mere effektiv end APD. I

TABEL 4

Virkninger af YM-21175-1 og APD I

på adjuvans-induceret arthritis hos rotter I

20 Dosis Tykkelse Askevægt/tørvægt I

(mg/kg) N (mm) (%) |

xx H

Normal - 6 6,4+0,0 54,8+0,1 H

Kontrol - 6 13,5+0,1 49,5+0,4 I

XX XX

Indomethacin 1 6 7,6+0,1 52,3+0,2 H

25 A P D 1 6 12,1+0,6 50,4+0,3

V V H

3 6 11,6+0,7 51,2+0,4

10 6 10,8+0,6XX 52,1+0,5XX I

xx 30 6 12,1+0,3 53,3+0,3 I DK 174744 B1 I 12 I TABEL 4 (forts.) I Dosis Tykkelse Askevægt/.tørvægt I (mg/kg) N (mm) (%) I YM-21175-1 0,3 6 12,3+0,6 50,7+0,6

I 5 16 11,7+0,1 52,1+0,8XX

I 36 12,3+0,8 53,1+0,4XX

I 10 6 10,5+0,7XX 55,9+0,3XX

I 30 5 9,5+0,2XX 57,6+0,3XX

I Den hæmmende virkning af YM-21175-1 på inogletab blev I 10 sammenlignet med APD. Som følge af de tre slags forsøg I antages YM-21175-1 at være af værdi ved behandling af I osteoporosis, rheumatoid arthritis og andre sygdomme, I hvor knogleresorptionen er accelereret, og herudover kan I ses, at YM-21175-1 er kraftigere end APD.

I 15 Ud fra forsøgsresultaterne påvistes, at de omhandlede I forbindelser udviste en glimrende evne til at reducere I mængden af serumcalcium. Det er derfor blevet bekræf- I tet, at de omhandlede forbindelser udviser en knogle- I resorptionshæmmende virkning. Som sygdomme, der kan an- I 20 tages at være forårsaget af for stor knogleresorption, I kan nævnes Paget's syge, hypercalcemi, metastatisk oste- I ocarcinoma og osteopsathrosis. Yderligere er sthenisk I knogleresorption efter inflammatorisk arthritis, som fx I kronisk rheumatoid arthritis, et vigtigt problem set ud I 25 fra et klinisk synspunkt. De omhandlede forbindelser I kan anvendes som helbredende lægemidler for disse syg- I domme ved at hæmme knogleresorptionen og forhindre ned- I gang af knoglemængden eller forhindre forøgelse af se- I rumcalciumværdier forårsaget af den stheniske knoglere- 30 sorption eller sænke værdien.

De omhandlede forbindelser og deres salte kan blandes I med et hvilket som helst farmaceutisk acceptabelt bære-

DK 174744 B1 I

stof, vehikel, hjælpestof og lignende til dannelse af

medicinske præparater, som tabletter, kapsler, pulvere, H

granuler eller piller, til peroral administrering, som

fx sirup, som suppositorier, salver og lignende, og til H

5 ikke-oral administrering. Dosismængden af den omhand- H

lede forbindelse er, skønt den varierer afhængigt af

administreringsvejen, patientens symptomer og lignende, H

sædvanligvis fra 1 mg/dag/voksen til 1 g/dag/voksen til

peroral administrering og fra 0,1 til 10 mg/dag/voksen H

10 til ikke-oral administrering. H

PRÆPARATEKSEMPLER I

Eksempler på præparater vil blive angivet nedenfor. I

(i) Tablet

Forbindelse fra eks. 8 5 mg H

15 Laktose 119 mg H

Majsstivelse 67 mg

Hydroxypropylcellulose 4 mg H

Calciumcarboxymethylcellulose 4 mg H

Magnesiumstearat 1 mg

20 Total 200 mg I

5 g af forbindelsen fra eksempel 8, 119 g laktose og 67 I

g majsstivelse blev blandet ensartet, 40 ml af en vandig

10 vægt/vægtprocent hydroxypropylcelluloseopløsning blev I

25 tilsat, og hele blandingen blev vådgranuleret. De frem- H

stillede granuler blev blandet med 4 g calciumcarboxy- I

methylcellulose og 1 g magnesiumstearat, og den fremstil- I

lede blanding blev slået til tabletter, der hver vejede

200 mg. I

I DK 174744 B1 I 14 I (2) Kapsler I Forbindelse fra eks. 8 5 mg I Krystallinsk cellulose 50 mg I Krystallinsk laktose 144 mg I 5 Magnesiumstearat l mg I Total 200 mg I Ovennævnte bestanddele blev blandet hver i en mængde på I 1000 gange af ovennævnte mængde og indkapslet i gelati- I 10 nekapsler, der hver indeholdt 200 mg af blandingen.

I FREMSTILLINGSEKSEMPLER

I Fremstillingsmåden for de omhandlede forbindelser er angivet nedenfor.

I EKSEMPEL 1 a· s OE t NOEt I 15 En blanding af 4,0 g cycloheptylamin, 6,27 g ethyl- I orthoformiat og 19,5 g diethylphosphit blev opvarmet I ved 150°C under omrøring i 1,5 timer. Efter afkøling blev reaktionsopløsningen koncentreret under reduceret I tryk for at fjerne ethylortho-formiat og diethylphos- I 20 phit, der ikke var omsat. Herefter blev remanensen ren- I set ved silicagel-søjlekromatografi (methanol/chloro- I form = 1/49) til opnåelse af 9,0 g tetraethyl(cyclopeh- I tylamino)methylenbix(phosphonat) som en gul olie.

DK 174744 B1 I

Forbindelsen havde følgende fysisk-kemiske egenskaber: H

(i) Massespektrum (FAB masse) : 400 (M+ + 1) H

(ii) Kernemagnetisk resonansspektrum (<$ værdi,i CDCl^): H

1,32 (12H, OCH2CH3 x 4)

5 1,20-2,08 (12H, H methylen i cycloheptylgruppe) H

2,96 (IH, - N I

H

3,36 (IH, -NHCH-) H

4,00-4,40 {8H, -OCH2CH3 x 4) I

På samme måde som beskrevet i eksempel 1 blev følgende H

10 forbindelser fremstillet. H

EKSEMPEL 2

/ OE t I

\po<OEt I

x0Et

Tetraethyl^cyclopropylamino^rnethYlenbis^phosphonat^ H

gul_olie I

(i) Massespektrum (FAB masse): 344 (M+ +1) I

(ii) Kernemagnetisk resonansspektrum (δ værdi, i CDCl-j): I

CH

0,36-0,57 (4H, -<^ \~2 ) I

°η2

1,35 (12H, OCH2CH3 x 4) I

1,94 (IH, -NH-) I

I DK 174744 B1 I 16 I 2,65 (IH, N-j<^| ) I - I 3,40 (IH, -NCH-) I 3,96-4,40 (8H, -OCH2CH3 x 4) I EKSEMPEL 3 I / OE t I /—\ /PO< I l J KPO<"OEt I \_/ NOEt I 5 5i£raethYl^c^clooctYlainino)_inethYlenbis^phos2hinsYre)_ I (i) Massespektrum (FAB masse): 414 (M+ + 1) I (ii) Kernemagnetisk resonansspektrum (6 værdi, i CDCl^): I 1,34 (12H, -OCH2CH3 x 4) I 1,20-2,40 (14h, H methylen i cyclooctylgruppe) I 10 3,04 (IH, "N·^^ ) I 3,36 (IH, -NHCH-) I 4,00-4,48 (8H, -OCH2CH3 x 4) I EKSEMPEL 4 I H3C , OE t i I xOEt

DK 174744 B1 I

Tetraethyl I (S-methYlcyclohexYl^minpImethylenbis^ghos- H

ghonat)^ B

(i) Massespektrum (FAB masse) 400 (M+ +1) I

(ii) Kernemagnetisk resonansspektrum: H

ch3 I

5 0,92 (3H, ) i

1,34 (12H, -OCH2CH3 X 4) I

H HH H I

i

1,20-2,40 (9H,/\H ) B

H HH CH 3 I

2,80 (IH -Ν-τ/-\ ) I

H V"/ I

3,44 (IH, -NCH-) I

10 4,00-4,42 (8H, -OCH CH x 4) I

EKSEMPEL 5 I

Λ XPO<OH i ( >»”<P0<« i

x OH

4,0 g tetraethyl(cycloheptylamino)methylenbis(phosphonat) B

blev opløst i 40 ml koncentreret saltsyre og opvarmet B

2,5 timer med tilbagesvaling. Efter afkøling blev reak- B

15 tionsopløsningen koncentreret under reduceret tryk for B

at fjerne saltsyre. Herefter blev 30 ml renset vand sat B

til remanensen, og blandingen blev atter koncentreret B

under reduceret tryk. Det olieagtige produkt fremstil- B

let på denne måde blev bragt til størkning med methanol B

20 og acetone og filtreret. Remanensen blev vasket med B

I DK 174744 B1 I 18 I acetone, hvorved der blev opnået 2,5 g (cycloheptylami- I no)methylenbis(phosphonsyre) som et hvidt fast stof.

I Forbindelsen havde følgende fysisk-kemiske egenskaber: I (i) Massespektrum (FAB masse): 288 (M+ + 1) I 5 (ii) Elementaranalyse for CgH^NO^^: I Beregnet: C 33,46 - H 6,67 - N 4,88 - P 21,57 I Fundet : C 33,27 - H 6,40 - N 4,87 - P 21,54.

I (iii) Smeltepunkt: 232-233°C (omkrystalliseret med I Me 0H-H20).

I 10 På samme måde som beskrevet i eksempel 5 blev følgende I forbindelser fremstillet: I EKSEMPEL 6

I - χ OH

0—C<s I (Cyclooctylamino)methylenbis(phosphonsyre) I (i) Massespektrum (FAB masse): 302 (M+ + 1) I 15 (ii) Elementaranalyse for C9H2iN06P2: I Beregnet: C 35,89 - H 7,03 - N 4,65 - P 20,56 I Fundet : C 35,87 - H 6,82 - N 4,69 - P 20,49. 1 (iii) Smeltepunkt: 228-229°C (ikke renset).

DK 174744 B1 I

EKSEMPEL 7 I

,_ nhch·7 PO<^oh I

MICHv /OH

P° \ OH I

(Cyclobutylamino^methylenbis(ghogghonsyre^ I

(i) Elementaranalyse for C5H^2ii0gP2: I

Beregnet: C 24,50 - H 5,35 - N 5,71 I

5 Fundet C 24,41 - H 5,23 - N 5,66. I

(ii) Smeltepunkt: 256-258°C (omkrystallisation med H

methanol). H

EKSEMPEL 8 I

H3C . y OH I

/ \ / P0\ OH I

\ / NHCH\po<OH I

li^^ethylcyclohexyl^amino^methylenbis^ghosghonsyre), I

10 (i) Massespektrum (FAB masse): 288 (M+ +1) I

(ii) Elementaranalyse for cgHigN05P2’ Q,2H20)] I

Beregnet: C 33,04 - H 6,72 - N 4,81 - P 21,30 I

Fundet : C 32,88 - H 6,47 - N 4,77 - P 21,32 I

(iii) Smeltepunkt: 220“221°C (ikke renset). I

I DK 174744 B1 I 20 I EKSEMPEL 9

I /3C , OH

I / V_ /PO\OH

\ /NHCH\P0<0H

I - xOH

I X j[ 2~me th^lc )_arn±rio ]_me th^lenbis J^^hLOSghoriSYre)^ I (i) Elementaranalyse for Cq^O^G1^ : I Beregnet: C 33,46 - H 6,67 - N 4,88 I Fundet : C 33,07 - H 6,39 - N 4,86.

I 5 (ii) Smeltepunkt: 238-240°C (omkrystallisation med I methanol-acetone).

I EKSEMPEL 10

I / °H

I „ /P0<OH

I H3C (. KNHCH\p0 / OH

I - \ OH

I _[ ^4~metla^Xc^clohLex^l )_SLminoImetliYlenb±s_(£Hos^horiSYre )_ I (i) Elementaranalyse for CgH^NOgPj* I 10 Beregnet: C33,46 - H 6,67 - N 4,88 I Fundet : C 33,13 - H 6,41 - N 4,75.

(ii) Smeltepunkt: 255-258°C (omkrystallisation med I methanol-vand).

DK 174744 B1 21 EKSEMPEL 11

/ OH

/PO\OH

>-**** \ y OH x po< x OH

1,28 g tetraethyl(cyclopropylamino)methylenbis(phos-phonat) blev opløst i 13 ml 25% hydrogenbromid-eddi-kesyreopløsning, og blandingen blev omrørt 2 timer ved 5 45°C. Reaktionsopløsningen blev koncentreret under re duceret tryk, og 20 ml renset vand blev tilsat remanensen. Herefter blev blandingen atter koncentreret under reduceret tryk. Det opnåede olieagtige produkt blev størknet ved omrøring med methanol og acetone og fil-10 treret. Det faste materiale blev vasket med acetone til opnåelse af 0,42 g (cyclopropylamino)methylenbis-(phosphonsyre) som et hvidt fast stof.

Forbindelsen havde følgende fysisk-kemiske egenskaber: (i) Massespektrum (FAB masse): 232 (M+ + 1) 15 (ii) Elementaranalyse for C^H^-^N0gp2 * 0,2 ^0)

Beregnet: C 20,47 - H 4,89 - N 5,96 - P 26,39

Fundet : C 20,45 - H 4,73 - N 5,83 - P 26,33.

(iii) Smeltepunkt: 214-216°C {ikke renset).

EKSEMPEL 12 / OEt Γ \ / P0< ^ PO / 0E1 X0Et I DK 174744 B1 I 22 I Den blandede opløsning af 3,0 g cyclopentylamin, 6,2 g I ethylortho-formiat og 19,4 g diethylphosphit blev opvar- I met under omrøring i 1,5 timer ved 150°C. Efter afkø- I ling blev reaktionsopløsningen koncentreret under redu- I 5 ceret tryk for at fjerne ikke-omsat ethylortho-formiat I og diethylphosphit. Herefter blev remanensen renset på I en silicagelsøjle (methanol/chloroform = 1/49) til op- I nåelse af 10,7 g tetraethyl(cyclopentylamino)methylenbis- I (phosphonat) som en lysegul olie.

I 10 Forbindelsen havde følgende fysisk-kemiske egenskaber; I (i) Massespektrum (FAB masse) : 372 (M+ + 1) I (ii) Kernemagnetisk resonansspektrum (6 værdi, i CDC13): I 1,34 (12H, OCH2CH3x 4) I 1,42-2,00 (8H, H methylencyclopentylgruppe) I 15 3,30 (IH, -NHCH-) I 3,48 (IH, ) I 4,00-4,36 (8H, -OCH2CH3 x 4) I På samme måde som beskrevet i eksempel 12 blev følgende forbindelser fremstillet: I 20 EKSEMPEL 13 I / OE t I <ΓΎ·ΝΗσί\Ρ0581' I \_J XP0<0Et I XOEt

DK 174744 B1 I

TetraethYlXcYclohexYlamino^rneth^lenbis_(ghosghonat)_ H

(i) Massespektrum (FAB masse): 386 (M + 1)

(ii) Kernemagnetisk resonansspektrum (5 værdi, i CDCl^): H

1,32 (12H, -OCH2CH3 X 4) I

5 1,2-2,0 (1/H, H methylen i en cyclohexylgruppe) H

2,90 (IH, NH I

3,44 (IH, NHCH) I

4,00-4,40 (8H, -OCH2CH3 x 4) I

EKSEMPEL 14 I

x OH

10 8,0 g tetraethyl(cyclopentylamin)methylenbis(phosphonat) I

blev opløst i 80 ml koncentreret saltsyre, og blandingen I

blev opvarmet 2,5 timer med tilbagesvaling. Efter afkø- I

ling blev reaktionsopløsningen koncentreret under redu- I

ceret tryk for at fjerne saltsyre. 70 ml rent vand blev I

15 tilsat remanensen, og blandingen blev atter koncentreret I

under reduceret tryk. Den fremstillede forbindelse blev H

i form af en olie bragt til størkning ved tilsætning af H

acetone og acetonitril og filtreret. Forbindelsen blev

omkrystalliseret med vand-methanol, hvorved der blev op- I

20 nået 3,6 g (cyclopentylamino)methylenbis(phosphonsyre) I

som hvide krystaller. I

I DK 174744 B1 I 24 I De fysisk-kemiske egenskaber af forbindelsen var følgen- I de: I (i) Massespektrum (FAB masse) : 260 (M+ + 1) I (ii) Elementaranalyse for C6Hi5N06P2*0,1 H2O) I 5 Beregnet: C 27,62 - H 5,87 - N 5,37 - P 23,74 I Fundet : C 27,42 - H 5,67 - N 5,48 - P 23,66.

I (iii) Smeltepunkt: 228-229°C

I På samme måde som beskrevet i eksempel 14 blev følgende I forbindelse fremstillet: I 10 EKSEMPEL 15

I /-V /OH

I / V-NHCH^ ^OH

I V-/ ^PO^0»

I XOH

I ^Cyclohexylaminoj^methYlenbis (phosphonsyre) I (i) Massespektrum (FAB masse) : 274 (M+ + 1) I (ii) Elementaranalyse for C.yH.j^NOgP2: I Beregnet: C 30,78 - H 6,27 - N 5,13 - P 22,68 I 15 Fundet : C 30,48 - H 6,11 - N 5,16 - P 22,17.

I (iii) Smeltepunkt; 267-269°C (ikke renset).

Claims

1. Farmaceutisk præparat indeholdende som en aktiv be- I standdel (cycloalkylamino)methylenbis(phosphonsyre) eller I en lavere alkylester heraf med den almene formel: H /"“Λ ^ ro<«= I (CH2) n —j— NHCH υκ V7 \ po<; or34 I 1 2 3 4 I 5 hvori R, R , R , R og R betegner et hydrogenatom eller H en lavere alkylgruppe, og n er et helt tal fra 3 til 10; I eller et farmaceutisk acceptablet salt af syren. I

2. Farmaceutisk præparat ifølge krav 1, k e n d e - I 10 tegnet ved, at forbindelsen er (eye 1 ojiep tyl amino )> ^) - I methylenbis(phosphonsyre). I

3. Knogleresorptionsinhibitor indeholdende som en aktiv I bestanddel (cycloalkylamino)methylenbis(phosphonsyre) med I den almene formel: I ^ I (CH2)„ -j—NHCH , I y po<; or4 I 1 2 3 4 I 15 hvori R, R , R , R og R betegner et hydrogenatom eller en lavere alkylgruppe, og n er et helt tal fra 3 til 10; I I DK 174744 B1 I 26 I en lavere alkylester heraf eller et farmaceutisk accep- I tabelt salt heraf.

4. Knogleresorptionsinhibitor ifølge krav 3, k e n - I detegnet ved, at forbindelsen er (cycloheptyl- I 5 amino)methylenbis(phosphonsyre) .

5. Anti-arthritis-middel indeholdende som en aktiv be- I standdel (cycloalkylamino) methylenbis (phosphonsyre) med I den almene formel: I OR1 /,0<OR> I (CH2) n -j— NHCH 3 I viy ^ po<< 0R I T ^^OR4 I R I * I 12 3 I hvori R, R , R , R og R betegner et hydrogenatom eller I 10 en lavere alkylgruppe, og n er et helt tal fra 3 til 10; I en lavere alkylester heraf eller et farmaceutisk accepta- I belt salt heraf.

6. Anti-arthritis-middel ifølge krav 5, kende- I tegnet ved, at forbindelsen er cycloheptylamino)— I 15 methylenbis(phosphonsyre). I 7. (Cycloalkylamino)methylenbis (phosphonsyre) eller en I lavere alkylester heraf med den alemene formel: ΘΙ OR1 /ro<0R· — NHCH , \ P0< 0R I ^"OR4 I R DK 174744 B1 I 2 3 4 hvori R, R , R , RJ og R4 betegner et hydrogenatom eller H en lavere alkylgruppe, n er et helt tal fra 3 til 10, H men R betegner en lavere alkylgruppe, dersom n er 5 el- H ler 6; eller et farmaceutisk acceptabelt salt H 5 af syren. H 8. (Cycloalkylamino)methylenbis(phosphonsyre), en lavere H alkylester heraf eller et farmaceutisk acceptabelt salt H heraf ifølge krav 7, kendetegnet ved, at H forbindelsen er (cycloheptylamino)methylenbis(phosphon- H 10 syre). H