DK172240B1 - Imidazolderivater, fremgangsmåde til fremstilling deraf, reagenser indeholdende disse samt deres anvendelse som redoxindikatorer - Google Patents

Imidazolderivater, fremgangsmåde til fremstilling deraf, reagenser indeholdende disse samt deres anvendelse som redoxindikatorer Download PDF

Info

Publication number
DK172240B1
DK172240B1 DK142985A DK142985A DK172240B1 DK 172240 B1 DK172240 B1 DK 172240B1 DK 142985 A DK142985 A DK 142985A DK 142985 A DK142985 A DK 142985A DK 172240 B1 DK172240 B1 DK 172240B1
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
formula
acid
hydroxyphenyl
reagent
dimethoxy
Prior art date
Application number
DK142985A
Other languages
English (en)
Other versions
DK142985D0 (da
DK142985A (da
Inventor
Ulfert Deneke
Werner Guethlein
Manfred Kuhr
Hartmut Merdes
Hans-Ruediger Murawski
Hans Wielinger
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Publication of DK142985D0 publication Critical patent/DK142985D0/da
Publication of DK142985A publication Critical patent/DK142985A/da
Application granted granted Critical
Publication of DK172240B1 publication Critical patent/DK172240B1/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/64—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms, e.g. histidine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D455/00—Heterocyclic compounds containing quinolizine ring systems, e.g. emetine alkaloids, protoberberine; Alkylenedioxy derivatives of dibenzo [a, g] quinolizines, e.g. berberine
    • C07D455/03—Heterocyclic compounds containing quinolizine ring systems, e.g. emetine alkaloids, protoberberine; Alkylenedioxy derivatives of dibenzo [a, g] quinolizines, e.g. berberine containing quinolizine ring systems directly condensed with at least one six-membered carbocyclic ring, e.g. protoberberine; Alkylenedioxy derivatives of dibenzo [a, g] quinolizines, e.g. berberine
    • C07D455/04—Heterocyclic compounds containing quinolizine ring systems, e.g. emetine alkaloids, protoberberine; Alkylenedioxy derivatives of dibenzo [a, g] quinolizines, e.g. berberine containing quinolizine ring systems directly condensed with at least one six-membered carbocyclic ring, e.g. protoberberine; Alkylenedioxy derivatives of dibenzo [a, g] quinolizines, e.g. berberine containing a quinolizine ring system condensed with only one six-membered carbocyclic ring, e.g. julolidine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/20—Oxygen containing
    • Y10T436/206664—Ozone or peroxide

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Glass Compositions (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Lubricants (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Paints Or Removers (AREA)

Description

DK 172240 B1
Hydrogenperoxids reaktion med oxidationsindikatorer under katalyse af peroxidase eller peroxidasisk virksomme stoffer spiller en særlig rolle i den analytiske kemi, fordi den ud over påvisningen af hydrogenperoxid og peroxidase også 5 muliggør bestemmelse af en række forbindelser, der reagerer med oxygen og en række stoffer, såsom f.eks. oxidaser, under dannelse af hydrogenperoxid. I det følgende opremses nogle af disse forbindelser som eksempler og i parentes nævnes de tilsvarende oxidaser: 10 glucose (glucoseoxidase), galactose (galactoseoxidase), L-aminosyrer (L-aminosyreoxidase) , kolesterol (kolesterol-oxidase), urinsyre (uricase), sarkosin (sarkosinoxidase), glycerol (glyceroloxidase), pyruvat (pyruvatoxidase).
Påvisningsreaktionen for peroxidaser finder især anvendelse 15 til bestemmelse af hæmoglobin, som besidder peroxidaseak-tivitet.
Det er først og fremmest disse reaktioner, der i den medicinske diagnostik og i levnedsmiddelkemien har stor betydning.
Påvisningsreaktionerne gennemføres enten i kuvette eller 20 ved hjælp af tørreagensbærere. Kvantificeringen foregår derved med fotometre ved hjælp af en transmissionsmåling, med remissionsfotometre ved hjælp af remissionsmåling eller ved hjælp af sammenligningsfarver ved visuel sammenligning.
Anvendelsen af tørreagensbærere, dvs. absorberende eller kvæld-25 bare bærere, der er imprægnerede med reagenserne, eller hvori reagenserne er indarbejdet på anden måde, og på hvilke påvisningsreaktionen foregår efter befugtning med substratet, har i den seneste tid fået større og større betydning.
Disse hjælpemidler muliggør ved en enkel håndtering og ved 30 samtidig stor tidsbesparelse en afgørende rationalisering af de pågældende analyser. Kravet om udvikling af tørreagenser, med hvilke der kan arbejdes med ufortyndede prøver, stiller 2 DK 172240 B1 udvikleren overfor det problem ud over udvælgelsen af den indikator eller det indikatorsystem, der skal anvendes, at serum eller plasma (i det følgende betegnet som serum) forstyrrer påvisningsreaktionerne kraftigt. Disse forstyrrel-5 ser gør sig først og fremmest bemærket, når det er nødvendigt at påvise substraterne eller enzymaktiviteterne ved hjælp af koblede reaktionstrin. Her kan som eksempel på substrater nævnes creatinin og urinsyre samt, som eksempel på aktivitetsbestemmelserne af enzymer, bestemmelserne af creatinkinase, glutamat-oxalacetat-transaminase (GOT) og glutamat-pyruvat-transaminase (GPT).
I litteraturen kendes talrige forbindelser, der kan anvendes som indikatorer til påvisning af hydrogenperoxid med peroxidase som katalysator. Sådanne indikatorer er: benzidin og benzidinderivater, forskellige phenoler og polyphenoler, som f.eks. guajakharpiks, leukofarvestoffer som f.eks. leu-komalakitgrøn, dichlorphenolindophenol, aminocarbozoler, tri-arylimidazoler, 2,2'-azino-di-[3-ethylbenzthiazolsulfonsyre-(6)] samt farvestoffer, der opstår som koblingsprodukt af 20 den oxidative kobling af aminoantipyrin eller beslægtede stoffer med phenoler, naphtoler, anilinderivater og andre kob-1ingskomponenter.
Ved påvisning af 1^02 i ufortyndede serumprøver udviser de ovennævnte kendte indikatorer mere eller mindre kraftige for-25 styrrelser ved reaktion med andre serumbestanddele, hvilket foregøgler en højere eller for det meste lavere koncentration af det substrat, der skal påvises. Nogle triarylimidazoler forstyrres, som beskrevet i DE-offentliggørelsesskrift nr.
27 35 690, relativt mindre. De beskrevne imidazoler er kun 30 stabile i det sure pH-område og bliver, som eksperimenter har vist, ved overførsel til et svagt surt til svagt alkalisk pH-område, hvilket er nødvendigt ved næsten alle enzymatiske reaktioner, altså når de foreligger som frie baser, oxideret spontant af luftens oxygen. En forarbejdning til 3 5 funktionsduelige tørreagenser er derfor kun mulig med disse 3 DK 172240 B1 indikatorer, når de indlejres i et beskyttelseskolloid, som f.eks. gelatine. Dette er imidlertid kun gennemførligt i specielle tilfælde.
Formålet med den foreliggende opfindelse er derfor at til-5 vejebringe farvestofdannere til påvisningsreaktionen af hy-drogenperoxid eller peroxidasisk virksomme stoffer, som ikke reagerer med de i serum indeholdte forstyrrende stoffer, som i det svagt sure til det alkaliske område ikke oxideres spontant af luftens oxygen, og som kan anvendes i så-10 vel kuvettetesten som i alle de for tørreagensbærere anvendelige matricer.
Det har nu overraskende vist sig, at de hidtil ukendte forbindelser med den almene formel I samt salte heraf opfylder de stillede krav.
15 Opfindelsen angår derfor imidazolderivater med formlen I
R2 \-n I |i (i) R -N^ ri i
H
hvori R betegner hydrogen, tetrahydrofuranyl, cykloalkyl eller alkyl, der eventuelt er substitueret med hydroxy, alkoxy, en svovlsyre-, phosphonsyre- eller carboxylsyrerest, eller med 20 en phenylgruppe, og R-j^ og Rlf der kan være ens eller forskellige, betegner julolidyl, tetrahydroquinolyl, der eventuelt på nitrogenatomet er substitueret med en benzyl- eller en alkyl-gruppe, idet alkylgruppen kan være substitueret med en 4 DK 172240 B1 svovlsyre-, phosphonsyre- eller med en carboxylsyrerest, eller en gruppe med formlen R3 hvori R4 betegner en hydroxy-, amino-, en mono- eller dialkyleret 5 aminogruppe, hvor alkylgrupperne eventuelt er substitueret med en svovlsyre-, phosphonsyre- eller carboxylsyrerest, og R-j og R5, der kan være ens eller forskellige, betegner hydrogen, alkyl eller alkoxy, der eventuelt er substitueret 10 med en carboxylgruppe, med den forudsætning, at mindst én af substituenterne R·^ og R2 skal være en rest R3 med formlen // \\ ^ , hvori R^ er en hydroxygruppe R4 R5 samt syre- og baseadditionssalte deraf.
Opfindelsen angår også anvendelse af forbindelserne med 15 formlen (I) som redox-indikatorer og reagenser til påvisning af hydrogenperoxid eller peroxidasisk virksomme stoffer, som er ejendommelige ved, at de består af en forbindelse med formlen I som defineret ovenfor og sædvanlige virksomme 5 DK 172240 B1 stoffer og hjælpestoffer.
Indikatorerne med den almene formel I lader sig indarbejde i alle kendte påvisningssystemer.
Alkyl i substituenterne R1; R2, R3, R4 og R5 betyder især 5 grupper med 1-6, fortrinsvis 4 carbonatomer. Methyl-, ethyl-, butyl- og tert.-butyl-grupperne foretrækkes.
Alkoxy i substituenterne R, R3 og Rg betyder især grupper med 1-6, fortrinsvis 4 carbonatomer. Methoxy- og ethoxygruppen foretrækkes.
10 Cykloalkyl i substituenten R betyder især en gruppe med 3-8 carbonatomer, og cyklopropyl-, cyklopentyl-, cyklohexyl- og cykloheptylresten foretrækkes.
Svovlsyre-, phosphonsyre- og carboxylsyreresterne, med hvilke alkylgrupperne overvejende er substitueret, tjener især til 15 forbedring af opløseligheden.
Der kan med indikatorerne fremstilles tests, der måles i ku-vetter. Dette gøres ved^at indikatoren sammen med peroxidase, det eller de for den respektive parameterpåvisning nødvendige enzym(er), andre reagenser, puf fersysteme r, eventuelt 20 befugtningsmidler og andre hjælpstoffer, lyofiliseres, blandes som pulver eller presses til tabletter. Den således opnåede reagensblanding opløses før brug i vand og danner således reagensopløsningen. Efter tilsætning af prøven (substratopløsning, enzymopløsning, serum eller plasma) måles den dannede 25 farve på fotometret, og ved hjælp af de molære ekstinktionskoefficienter og de tilsatte reagens- eller prøvevolurnener beregnes koncentrationen eller enzymaktiviteten. Såvel kinetiske som slutpunktsmålinger er mulige.
Indikatorerne kan ligeledes imprægneres sammen med peroxi-30 dase, det eller de for den aktuelle parameterpåvisning nød- 6 DK 172240 B1 vendige reagenser eller andre enzymer, puffersystemer, eventuelt befugtningsmidler og andre hjælpestoffer på absorberende reagensbærere, som papir, fiberflor (Ty: Vliese) etc.
Dertil kan man fremstille en eller flere imprægneringsopløs-5 ninger i form af vandige eller organiske eller blandede opløsninger, alt efter hvordan reagenserne eller hjælpestofferne opløses. Med disse opløsninger imprægneres eller sprøjtes bæreren. Derpå tørres. De således fremstillede reagensbærere kan anvendes som hurtigdiagnostika til direkte bestemmelse 10 af indholdsstofferne i f.eks. legemsvæsker. Derved bringes legemsvæsken direkte på reagensbæreren eller denne neddyppes i legemsvæsken. Ved sammenligning af den dannede farve med sammenligningsfarver er en semikvantit^tiv bestemmelse mulig.
Ved hjælp af remissionsfotometriske fremgangsmåder kan der ^ foretages en kvantitativ vurdering. Der kan også ved eluering af de, som ovenfor beskrevet, på et papir eller fiberflor imprægnerede reagenser med vand eller puffer fremstilles en reagensopløsning, ved hjælp af hvilken man som ovenfor beskrevet bestemmer substrater eller enzymer i en kuvette på 20 .
fotometer (jvf. DE-offentliggørelsesskrift nr. '..23 01 999).
En yderligere mulighed for anvendelse af indikatorerne ifølge opfindelsen er deres anvendelse i reagensfilm til kvantitativ bestemmelse af enzymer eller substrater ved hjælp af et remissionsfotometer. Derved forarbejdes indikatoren sammen 25 med de andre nødvendige reagenser og hjælpestoffer, f.eks. ifølge fremgangsmåden fra DE-patentskrift nr. 29 10 134 eller DE-offentliggørelsesskrift nr. 15 98 153 til reagensfilm.
Det har yderligere vist sig, at stofferne ifølge opfindelsen med succes kan kombineres med stabilisatorer, som det er 30 beskrevet i DE-patentskrift nr. 27 16 060. Disse stabilisatorer (1-aryl-semicarbazider) fører til, at færdige tests bliver ufølsomme over for lysets påvirkning, og at funktionskurver af remissionsfotometriske målinger derved bliver mere følsomme og giver mere nøjagtige bestemmelser. Således ville 35 mange testsystemer med tiden blive misfarvede ved lysets ind- DK 172240 B1 7 virkning, hvis der ikke var en stabilisator til stede. En kalibrerings- eller funktionskurve for et sådant system uden stabilisator er derfor fladere end for en kalibreringskurve (hvor remission er afsat som funktion af koncentration) for 5 et testsystem, som indeholder en stabilisator (1-arylsemicar-bazid).
Indikatorerne ifølge opfindelsen kan som nævnt indarbejdes i alle sædvanlige reagensbærere, dvs. absorberende bærere som filterpapir, fiberflor osv., eller kvældbare eller absorber-ende reagensfilm (DE-patentskrift nr. 15 98 153, DE-offent-1iggørelsesskrift nr. 29 10 134 og DE-offentliggørelsesskrift nr. 32 47 608). Da de imidlertid fortrinsvis skal finde anvendelse til påvisning af enzymer og substrater i serum, er der i fig. 1-4 i tværsnit vist en række indretninger, der ifølge DE-offentliggørelsesskrift nr. 30 29 579 på den ene side muliggør fraskillelse af det for testen nødvendige serum eller plasma fra helblod og på den anden side på grund af en specielt udformet opbygning af reagens- og hjælpestoflagene muliggør en temperering, forreaktion og en målrettet 2 0 start af hovedreaktionen.
I detaljer er indretningerne sammensat som følger:
Fig. 1 På en inert bærerfolie 12 er fæstnet et af glasfiber bestå-25 ende lag 4, der på den ene side tjener til transport af serum og på den anden side til adskillelse af serum og erythro— cyter. En yderligere af glasfiber bestående adskillelseszone 5, der delvis overlapper dette lag 4, er fæstnet ved hjælp af et fixernet 6. På dette net 6 anbringes helblod, der i 3 0 zone 5 eller zone 4 adskilles i serum og erythrocyter, hvorved disse sidste fastholdes, således at kun serum går over i den venstre del af zone 4. Ved siden af zone 4 er et tyndt plastvæv 3, samt en af et gennemsigtigt plast bestående bærerfolie 1 fastgjort ved hjælp af en klæbeforbindelse 13. Under bærerfolien 1 er igen fastgjort en reagenszone 2, der
J
8 DK 172240 B1 enten består af en kvældebar eller absorberende film, og i hvilken de for reaktionen nødvendige reagenser/mdarbejdet.
En del af reagenserne, især de, der er nødvendige til forreaktionen, kan allerede være indeholdt i zone 4. Ved tryk 5 på bærerfolien 1 startes reaktionen, efter at serummet har fyldt zone 4 fuldstændigt, hvilket serum ved hjælp af trykkontakten trænger gennem nettet 3 ind i reagenszone 2 og gen-nemfugter denne ensartet. Såfremt yderligere oxygen fra luften skulle være nødvendig for reaktionen, kan indretningen 10 efter gennemfugtningen af zone 2 igen skilles fra hinanden. Reaktionen iagttages ved hjælp af farveændringen i zone 2 gennem bærerfolien 1.
Fiq. 2
Opbygningen af de til udvinding af serum tjenende zoner sva-15 rer til fig. 1. For at sikre en separering af de reagenser, der eventuelt ikke er lagringsstabile sammen, regnes med to reagenspapirer 8 og 9, der sammen med den beskyttende dækfolie 7 er forbundet med bærerfolien 12 over klæbestedet 13.
Efter mætning af zone 4 med serum kan man ved tryk på dæk-20 folien 7 igen bevirke en væskekontakt af reagenspapirerne med serummet, hvilket bevirker en sammenblanding af serum og reagenserne i reagenspapirerne 8 og 9. Reaktionen finder sted.
Den kan følges gennem dækfolien 7.
Fiq. 3 2 5
Denne indretning svarer i grundopbygningen igen til fig. 1, idet der imidlertid i stedet for mellemvævet 3 er anbragt et optisk spærrelag 10. Dette spærrelag 10 er imprægneret med bariumsulfat, titandioxid eller lignende stærkt reflekterende stoffer og består sædvanligvis af en plast- eller 30 gelatinefilm. Dette lag 10 bevirker på den ene side, at det til iagttagelse af reaktionen indstrålende lys fuldstændigt sendes tilbage, og på den anden side at eventuelle farveændringer af zone 4 ikke kan blive synlige.
9 DK 172240 B1
Fig. 4
Svarer med hensyn til serumudvindingsdelen igen til fig. 1. Reagenszone 2, der i dette tilfælde består af en reagensfilm, er i dette tilfælde anbragt på den ene side af et multifilt 5 væv 11, der på den ene side tjener til stabilisering af reagensfilmen, og på den anden side fremmer befugtningen ved hjælp af serum og tilgangen for luftens oxygen. Vævet 11 og den løst anbragte dækfolie 7 er igen fæstnet med et klæbested 13 til bærerfolien 12. Ved tryk på dækfolien 7 etable-10 res kontakten mellem det serum, der befinder sig i zone 4, og reagenzonen 2, og reaktionen starter.
Der er naturligvis også den mulighed, at stofferne ifølge opfindelsen indarbejdes i gelatinematricer ifølge DE-offent-1iggørelsesskrift nr. 27. 35 690 sammen med de for den aktu-15 elle påvisningsreaktion nødvendige regenser og hjælpestoffer.
Sammenfattende kan det fastslås, at forbindelserne ifølge opfindelsen med den almene formel I kan anvendes i alle testsystemer, ved hjælpiåf hvilke hydrogenperoxid eller peroxi-20 dasisk virksomme stoffer kan påvises direkte eller efter forudgående reaktioner.
10 DK 172240 B1
Opfindelsen angår endvidere en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne med formlen (I) samt syre- og baseaddi-tionssalte heraf, hvorved man på i og for sig kendt måde enten
5 a) kondenserer en α-diketon med formlen II
0 0
II II
R2-C-C-R (II) hvori
10 R2 og R har samme betydning som i formlen I, med et aldehyd med formlen III
0 = CH-R-l (III) hvori R-L har samme betydning som i formlen I, og med ammoniak i sur 15 opløsning, eller b) omsætter et a-ketoxim med formlen Ila R, - C - C - R (Ha)
2 II II
NOH O
20 hvori R2 og R har samme betydning som i formlen I, med et aldehyd med ovennævnte formel III og ammoniak til en forbindelse med formlen la
R2 Y-N
I jl (la)
R
•4/
O
11 DK 172240 B1 hvori R, R^ og R2 har samme betydning som i formlen I, og reducerer denne forbindelse eller
c) omsætter et acylbromid med formlen IV
R2-C0-CHR Br (IV)
5 hvori R2 og R har samme betydning som i formlen I, med et amidin med formlen V
NH
/f R1'C (V) \ nh2 hvori
Rx har samme betydning som i formlen I, i alkalisk medium og derpå om ønsket omdanner en fremstillet imidazolbase med 10 formlen I til et syre- eller baseadditionssalt deraf eller et fremstillet syre- eller baseadditionssalt til den tilsvarende frie base.
15 20 Ved omsætning af aminoforbindelser med formlen I, hvori R2 eller R2 er gruppen R3 ~0r? R5 med halogen-methan- eller 2-ethan-carboxylsyre, -sulfonsyrer, 12 DK 172240 B1 eller -phosphonsyrer eller salte deraf i DMF (dimethyl-formamid) opnås tilsvarende aminomethan- eller 2-ethan-syreforbindelser .
Reduktion af N-oxider med formlen la foregår iær med 5 zink/eddikesyre eller katalytisk aktiveret hydrogen.
Syntesen af imidazolerne med den almene formel I foregår især efter B. Radzizewski i form af en variant ifølge D. Davidson (se Org. Chem., 2, 319 (1937)). I nogle tilfælde anvendes i stedet for α-diketonen ifølge Lettau Chem. 10, 431 (1970), 10 11, 10 (1971) fordelagtigt det tilsvarende α-ketoxim. De ved kondensationen med aldehyd og NH3 i iseddike dannede imidazol-N-oxider lader sig relativt let og med gode udbytter omdanne til de ønskede imidazoler. Som yderligere syntesevej tjener omsætningen af amidiner med substituerede a-phenyl-15 acylbromider, og desuden ammonolysen af α-acyloxyketoner (opnået ved omsætning af oi-bromketoner med alkalisalte af carboxylsyrer i DMF) med ammoniumacetat i iseddike. Gasformig HCl's indflydelse på en blanding af α-aminonitril og aldehyd eller den tilsvarende benzylidenforbindelse fører til ring-20 slutning til de pågældende imidazoler. Endelig fremdrages den katalytiske hydrogenering af heterocykliske rester i diaryl-heterocyklisk substituerede imidazoler til fremstilling af tilsvarende perhydrogenerede heterocykler og åbenkædede forbindelser. Ved den reduktive methylering af 4-aminoaryl-25 imidazoler med formaldehyd og katalytisk aktiveret hydrogen alkyleres NH-gruppen i imidazolringen overraskende ikke, men der opstår tværtimod den tilsvarende N-dimethylaminoforbin-delse. Ved omdannelse af de hidtil ukendte imidazolbaser til salte, f.eks. hyrochlorider, methansulfonater etc. opnås i 30 vand og alkoholer opløselige og i vidt omfang stabile indikatorer.
I de efterfølgende anførte forbindelser betyder parentesudtrykkene (4) eller (5) i forbindelsesbetegnelserne den pågældende substituentposition i den tautomere form af 35 imidazolerne med formlen (I): 13 DK 172240 B1 tautomer form: Η f*2 R? 7
\·_ N -----N
5
R R j Rx N
H
10 1 forbindelse med opfindelsen foretrækkes følgende forbindelser: 1) 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethylamino- 15 phenyl )-5-(4)-n-butyl-(lH)-imidazolhydrochlorid 2 ) 2—(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethylamino- phenyl)-5-(4)-tert. butyl-(IH)-imidazolhydrochlorid 20 3) 2 — (3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethylamino- phenyl)-5-(4)-(4-methoxybutyl)-(IH)-imidazol-hydrochlorid 4 ) 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxypheny1)-4-(5)-(4-dimethylamino- phenyl)-5-(4)-cyklohexyl-(IH)-imidazolhydrochlorid 5 ) 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethylamino- phenyl)-5-(4)-benzyl-(IH)-imidazolhydrochlorid 6) 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethylamino-phenyl)-(IH)-imidazolyl)-5-(4)-methansulfonsyre 7 ) 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxypheny1)-4-(5)-(4-dimethylamino- phenyl)-(IH)-imidazolyl-5-(4)-methanphosphonsyre 14 DK 172240 B1 8) 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethylamino-phenyl)-(IH)-imidazolyl-5-(4)-eddikesyre 9) 4-(5)-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-5 imidazolyl-2-(phenyl -4-N-methylamino-N-methan- eller -N-ethan-2-sulfonsyre) 10) 4-(5)-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imidazolyl-2-(phenyl-4-N-methylamino-N-methan- eller -N-ethan- 10 2-phosphonsyre) 11) 4-(5)-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imidadolyl-2-(phenyl-4-N-methylaminoeddikesyre) 15 12) 4-(5)-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)- imidazoly 1-2-( £-[1,2,3,4-tetrahydroquinolino-N-methan- eller -ethan-2-sulfonsyre]) 13) 4-(5)-(3,5-dimethoxy~4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(1H)- 20 imidazoly 1-2-( 6-[ 1', 2,3,4-tetrahydroquinolino-N-methan- eller -ethan-2-phosphonsyre]) 14) 4-(5)-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH) - imidazolyl-2-( 6-[1,2,3,4-tetrahydroquinolino-N-eddike5yre]) 25 15) 2 — (3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(1H)-imidazolyl-4-(5)-(pheny1-4-N-methylamino-N-methan- eller -ethan-2-sulfonsyre) 30 16) 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imidazoly1-4-(5)-(phenyl-4-N-methylamino-N-methan- eller -N-ethan-2-phosphonsyre) 17) 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-35 imidazolyl-4-(5)-(phenyl-4-N-methylaminoeddikesyre) 18) 2-(3,5-di-tert.-butyl-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imidazolyl-4-(5)-(phenyl-4-N-methylamino-N-methan- eller DK 172240 B1 15 - -ethan-2-sulfonsyre) 19) 2-(3,5-di-tert.-butyl-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(1H)-imidazolyl-4-(5)-(phenyl-4-N-methylamino-N-methan- eller 5 -ethan-2-phosphonsyre) 20) 2- (3,5-di-tert.-butyl-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)— imidazoly1-4-(5)-(phenyl-4-N-methylaminoeddikesyre) 10 21) 4-(5)-(4-dimethylaminophenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imida- zolyl-2-(5[2-hydroxy-3-methoxyphenoxyeddikesyre])
Opfindelsen belyses nærmere ved hjælp af de efterfølgende eksempler.
15
Ekstinktionsværdierne eller ekstinktionskoefficienterne i de i eksemplerne viste forbindelser fastlagdes ved hjælp af metoden ifølge eksempel 9.
20 25
Eksempel 1 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethylaminophenyl ) -5- ( 4 )-methyl-(IH)-imidazolhydrochlorid.
30
En blanding af 57,4 g (0,3 mol) l-(4-dimethylaminophenyl)-1,2-propandion, 60 g (0,33 mol) 3,5-dimethoxy-4-hydroxybenz-aldehyd (Syringaaldehyd) og 231 g (3 mol) ammoniumacetat opvarmes i 1 liter iseddike i oliebad under omrøring og argonatmosfære i 3 timer under tilbagesvaling. Derpå afkøles til 35 15 C, og reaktionsopløsningen dryppes på 3,5 liter 7 N ammoniak1 ) ved vanskeligt frasugbare produkter optages materialet 16 DK 172240 B1 i chloroform, gennemrystes med vand og tørres over natriumsulfat, hvorpå opløsningsmidlet fjernes i vakuum og derpå frasuger man den dannede krystalmasse kraftigt til fjernelse af så meget vand som muligt og vasker filterkagen med 3 x 150 5 ml vand. Efter tørring af råproduktet over kaliumhydroxid omdanner man basen i methanol under tilsætning af ca. 5N etherisk HC1 til hydrochloridet. Efter omkrystallisation fra et egnet opløsningsmiddel, f.eks. iseddike/vand (10/1) opnås 101,4 g (71% af det teoretiske udbytte) af titelforbindelsen 10 som farveløse krystaller, smeltepunkt 185/219°C (dekomponer ing) .
λ max 680 nm (ε = 25.500) På analog måde opnås ved omsætning af de tilsvarende 1,2-di-15 ketoner og pågældende aldehyder de nedenfor anførte diaryl-imidazolderivater: la) 2-(4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethylaminophenyl)-5- (4 )-methyl-(IH)-imidazolhydrochlorid, smeltepunkt 242°C (de-20 komponering ) λ max 412 nm (ε = 21.860) lb) 2-(3,5-di-tert.-butyl-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethyl aminophenyl )-5-(4)-methyl-(IH)-imidazolhydrochlorid, smeltepunkt 255°C (dekomponering) λ max 650 nm (ε = 41.830) 25 lc) 2-(4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl )-5-(4)-methyl-(IH)-imidazolhydrochlorid, smeltepunkt 326°C (dekomponering) λ max 533 nm (ε = 6.400) 30 id) 2-(3,5-di-tert.-butyl-4-hydroxyphenyl)-4-( 5)-( 3,5-dime-thoxy-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imidazolhydrochlorid, smeltepunkt 296°C (dekomponering) λ max. 673 nm (ε = 29.800) 35 le) 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-hydroxyphenyl )-5-(4)-methyl-(lH)-imidazol-hydrochlorid, smeltepunkt 197-199°C (dekomponering) λ max. 533 nm (ε = 6.400) 17 DK 172240 B1
If) 2,4-(5)-di-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imidazolhydrochlorid, smeltepunkt 158°C (dekomponering) λ max. 590 ηιη(ε = 17.900) 5 lg) 2-(4-dimethylaminophenyl)-4-(5)-(4-hydroxyphenyl)-5- (4)-methyl-(IH)-imidazolhydrochlorid, smeltepunkt 225-230°C (dekomponering) λ max. 510 nm (ε = 10.500) lh) 2-(4-dimethylaminophenyl)-4-(5)-(3,5-dimethoxy-4-hydro- 10 xyphenyl)-5-(4)-methyl-(lH)-imidazolhydrochlorid, smelte punkt 182-200°C (dekomponering) λ max. 670 nm (ε = 10.800) li) 2-(6-N-methyl-l,2,3,4-tetrahydroquinolyl )-4-(5)-(3,5- dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methy1-(IH)-imidazolhydro-
15 O
chlorid, smeltepunkt 190 C (dekomponering) λ max. 700 nm (ε = 19.400)
lj) 2-(9-julolidi ny 1)-4-:(5)-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl) -5 —(4)-methyl-(IH)-imidazolhydrochlorid, smeltepunkt 201°C
20 (dekomponering) λ max. 690 nm (ε = 25.399) lk) 2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-4-(5)-(4-hydroxyphenyl)-
5-(4)-methyl-(lH)-imidazolhydrochlorid, smeltepunkt > 270°C
(dekomponering) λ max. 502 nm (ε = 3.730) 25 ll) 2-(3,5-di-tert.-butyl-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-hydro-xyphenyl)-5-(4)-methyl-(lH)-imidazol, smeltepunkt 200-202°C (dekomponering) λ max. 485 nm (ε = 6.700) 30 lm) 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imidazolyl-4-(5)-(phenyl-4-amino-N-ethansulfonsyre), smeltepunkt > 260°C (dekomponering) λ max. 615 nm (ε = 27.500) ln) 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(1H)— 35 imidazolyl-4-(5)-(phenyl-4-amino-N-ethanphosphonsyre), smeltepunkt > 250°C (dekomponering) λ max. 624 nm ( ε = 25.600) lo) 2—(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)- 18 DK 172240 Bl imidazolyl-4-(5)-(phenyl-4-aminoeddikesyre), smeltepunkt 124°C (dekomponering) λ max. 620 nm (ε = 18.800)
lp) 2- (3,5-di-tert.-buty1-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-amino-5 phenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imidazol, smeltepunkt 228-230°C
λ max. 576 nm (ε = 31.200) lq) 2-(3,5-di-tert.-butyl-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imidazolyl-4-(5)-(phenylaminoeddikesyre), amorph, λ max. 614 10 nm (ε = 39.900) lr) 2-( 3,5-di-tert.-buty1-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-
imidazolyl-4-(5)-phenylamino-dieddikesyre), smeltepunkt 225°C
(dekomponering) λ max. 580 nm (ε = 31.700) 15 ls) 2-(1-benzyl-1,2,3,4-tetrahydroquinol-l-yl)-4-(5)-(3,5-dime thoxy- 4 -hydroxyphenyl )-5-(4)-methyl-(IH)-imidazol, smeltepunkt 190°C (dekomponering) λ max. 705 nm (ε = 31.500) 20 ^
Eksempel 2 2 — (3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-aminophenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imidazolhydrochlorid.
25
Man opløser 11 g (0,05 mol) l-(4-acetylaminophenyl)-l-oxi-mino-2-propanon og 13,6 g (0,05 mol) 4-benzyloxy-3,5-dime-thoxybenzaldehyd under tilsætning af 10 g (0,13 mol) ammoniumacetat i 100 ml iseddike og opvarmer reaktionsblandingen i 2 timer under tilbagesvaling. Derpå tilsætter man under 30 omrøring portionsvis 10 g zinkstøv og koger videre i 2 timer under argon. Efter henstand natten over frasuger man det udkrystalliserede zinkacetat og blander filtratet under omrøring og køling langsomt med 0,5 liter koncentreret ammoniak. Den frigjorte imidazolbase optages i dichlormethan oo tør-35 res over natriumsulfat, og opløsningsmidlet afdampes på rotationsinddamper . Der opnås 22,43 g råbase som brunlige krystaller. Dette produkt opløses i 200 ml 6 N HC1 og opvarmes i 45 minutter under tilbagesvaling. Ved afkøling udkry- 19 DK 172240 B1 stalliserer 15,1 g (74,9% af det teoretiske udbytte) af titelforbindelsen som farveløse krystaller. Smeltepunkt 250°C (de-komponering) 5 Xmax 580 nm (ε = 18.900) 2a) 2-[3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl]-4-(5)-(4-amino-3-methoxy-phenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imidazolhydrochlorid.
10 På samme måde som beskrevet i ovenstående eksempel 2 opnås ud fra 1-(4-acetylamino-3-methoxyphenyl)-l-oximino-2-propanon og 3,5-dimethoxy-4-hydroxy-benzaldehyd:2-[3,5-dimethoxy-4- hydroxyphenyl]-4-(5)-(4-amino-3-methoxyphenyl)-5-(4)-methyl-(1H)- imidazolhydrochlorid som farveløse krystaller, smeltepunkt 15 o 218 C (dekomponering). kmax 402 nm (ε = 15.400)
Eksempel 3 20 2-(4-aminophenyl)-4-(5)-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-(IH)-imidazolhydrochlorid.
α) I en tofasekondensation blandes 4,0 g (0,02 mol) 4-nitro-25 benzamidinhydrochlorid i 30 ml vand og 5,5 g (0,02 mol) ω-brom-acetosyringon i 50 ml chloroform ved 25°C under heftig omrøring med 20 ml (0,04 mol) af en 2-molær< vandig kaliumhydroxidopløsning og opvarmes derpå i ca. 4 timer til kogning. Efter fraskillelse af chloroformfasen neutraliseres den vandige 30 fase og ekstraheres flere gange med chloroform. De samlede organiske faser inddampes og resten renses søjlekromatografisk på kiselgel med eddikesyreester som elueringsmiddel. Der opnås 1,2 g 2-(4-nitrophenyl)-4-(5)-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)- (IH)-imidazol som et farveløst, amorft materiale, der karak-35 1 ' teriseres ved H-NMR spektroskopi, EI-massespektrometri og elementsranalyse (udbytte 18% af det teoretiske udbytte).
0) 1,0 g (0,003 mol) af den ovennævnte nitroforbindelse i 50 ml .ethanol hydrogeneres under tilstedeværelse af 0,1 g 10% palladium på aktivt kul ved 25°C under normaltryk. Efter 20 DK 172240 B1 frafiltrering af katalysatoren blandes materialet med etherisk HC1 og inddampes. Resten findeles med ether og giver 0,7 g af titelforbindelsen (udbytte 61% af det teoretiske udbytte).
5 Smeltepunkt 285 - 290°C
Xmax 560 nm (ε = 24.500)
Eksempel 4 2-(4-dimethylaminophenyl)-4-(5)-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-10 (IH)-imidazolhydrochlorid.
a) En suspension af 6,4 g (0,018 mol) 4-benzyloxy-3,5-dimethoxy- ω-bromacetophenon og 3,3 g (0,018 mol) natrium-4-N,N-dimethyl- aminobenzoat i 150 ml absolut dimethylformamid opvarmes under omrøring i 1,5 time til 130°C. Afdampning af opløsningsmidlet og rivning af resten med dichlormethan og endelig med ether giver 4,2 g 4-benzyloxy-3,5-dimethoxy-u)-(4-N,N-dimethylamin- benzoyloxy)-acetophenon som et farveløst pulver (udbytte 5 3% af det teoretiske udbytte), 20 0 smeltepunkt 114 C.
0) 30 g (0,067 mol) af den i den ovenstående fremgangsmåde opnåede ester opvarmes i 150 ml iseddike med 51,4 q (0,67 mol) ammoniumacetat under omrøring i to timer til 130°C. Efter 25 afkøling hældes blandingen pa en liter isvand og ekstraheres flere gange med eddikesyreester. De forenede eddikesyreester- ekstrakter vaskes med fortyndet, vandig natronlud, tørres og inddampes. Resten renses søjlekromatografisk på kiselgel/ først med toluen/eddikesyreester = 9/1 for at fraskille mindre 30 polære komponenter, og derpå med toluen/eddikesyreester/methanol = 2/2/1. Inddampning af den pågældende fraktion giver 5 g 2-(4-dimethylaminophenyl)-4-(5)-(4-benzyloxy-3,5-dimethoxy-phenyl)-(lH)-imidazol som et farveløst stof (udbytte 18% af det teoretiske udbytte smeltepunkt 196°C.
γ) 4,3 g (0,01 mol) af det opnåede imidazolderivat hydrogeneres 21 DK 172240 B1 i 100 ml ethanol i nærværelse af 0,3 g 10%ig palladium på aktivt kul ved 25°C under normaltryk. Efter fjernelse af katalysatoren blandes opløsningen med 1 ml koncentreret saltsyre, inddampes og giver 3,2 g af titelforbindelsen (udbytte 5 70% af det teoretiske udbytte) \max 626 nm (ε = 4.770)
Eksempel 5- 10 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethylamino-phenyl )-5-(4)-(2-tetrahydrofury1-( IH)-imidazolhydrochlorid a) 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-dimethylamino-15 phenyl-5-(4)-(2-furyl)-(IH)-imidazolhydrochlorid 72,9 g (0,3 mol) 1,2-dioxo-2-(4-dimethylaminophenyl)-l-furyl-(2)-ethan opvarmes under argon med 60,12 g (0,33 mol) 3,5-dimethoxy-4-hydroxybenzaldehyd (GC 98%) og 231 g (3 mol) am- 20 moniumacetat i 1,2 1 iseddike i fire timer under omrøring og tilbagesvaling. Derpå lader man afkøle og hælder blandingen på 3,6 liter isvand. Derefter udryster man med 4 x 500 ml eddikesyreester og omrører de forenede eddikesyreesterfaser i 30 minutter med 50 g zinkstøv. Efter frasugning og inddampning 25 af imidazolopløsningen i vakuum opløses resten i 150 ml methanol, og opløsningen dryppes under beskyttelsesgas i 1 liter vand. De dannede krystaller frasuges og tørres. Der opnås 113,2 g let grønfarvet imidazol, der renses yderligere på en kiselgelsøjle.
30
Adskillelsesvæske: chloroform/methanol 12/1. De tilsvarende fraktioner indeholder 57,5 g råimidazol, som efter omrøring med 300 ml acetone giver 50 g (41,1% af det teoretiske udbytte), 35 22 DK 172240 B1 farveløs imidazol. Ved eluering af søjlen med methanol og oparbejdning af moderluden udvindes yderligere 15,6 g svagt forurenet produkt. (Samlet udbytte 54% af det teoretiske udbytte). Ved tilsætning af 50 ml 5 N etherisk HC1 til en suspension 5 af imidazolbasen i 100 ml ethanol indtræder der først opløsning og derpå krystallisation, som fuldstændiggøres ved anbringelse i et isbad. Der opnås 53,2 g næsten farveløst hydrochlorid af titelforbindelsen. Smeltepunkt 172°C (dekomponering).
10 kmax 680 nm (ε = 12.342) 3) 10,9 g (0,021 mol) af den opnåede forbindelse opløses i 250 ml absolut methanol og hydrogeneres under tilsætning af 1,5 g palladiumsort i seks timer ved 36 til 38°C under normal-15 tryk. Man oparbejder som sædvanligt og renser råproduktet ved søjlekromatografi på kiselgel 60 med chloroform/methanol 5/1. Dette resulterer i 1,24 g (13,6% af det teoretiske udbytte) af beigefarvet, kromatografisk ensartet krystallisat af titelforbindelsen.
20
Smeltepunkt 9 8°C/110°C (dekomponering) (intet klart smeltepunkt.’) tyndtlagskromatografifærdig-plade, kiselgel, elueringsmiddel: chloroform/methanol 5/1, 25 "f “ °'36 \max 680 nm (ε = 16.700)
Eksempel 30 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethylaminophenyl)- 5-(4)-(4-hydroxybutyl)-(IH)-imidazolhydrochlorid.
16 g (0,023 mol) af titelforbindelsen fra eksempel 6 hydrogeneres i 400 ml methanol under tilsætning af 2 g palladiumsort i 35 otte timer ved 36 til 38°C under normaltryk. Det efter oparbejd ning dannede råprodukt renses på kiselgel 60 med chloroform/ methanol 5/1. Der opnås 4 g kromatografisk ensartet materiale, som man opløser i 50 ml methanol, omrører i 30 minutter med 2 g zinkstøv og ved tilsætning af 20 ml 5 N etherisk HC1 23 DK 172240 B1 isolerer som hydrochlorid. Der opnås 3,52 g (21,8% udbytte) af titelforbindelsen som farveløse krystaller, med smeltepunkt 140/212°C (dekomponering).
5 Xmax 640 nm (ε = 25.000).
Eksempel 7 2- (3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethylaminophenyl)- 10 5-(4)-methyl-(IH)-imidazolhydrochlorid.
5 g (0,0126 mol) af titelforbindelsen fra eksempel 2 suspenderes i 140 ml methanol og hydrogeneres efter tilsætning af 0,7 ml koncentreret HC1 og 0,5 g platinoxid, samt 3,3 ml 37% for-
15 O
malinopløsning i fem timer ved 5 til 10 C. Efter afsluttet hydrogenoptagelse frasuges materialet fra katalysatoren, filtratet inddampes i vakuum og hydrogeneringsproduktet i form af 5,95 g farveløse krystaller omkrystalliseres fra 150 ml methanol. Der opnås 4,2 g (70,1% udbytte) farveløse krystaller 20 q af titelforbindelsen. Smeltepunkt 185/218 til 219 C (dekomponering ).
Xmax 680 nm (ε = 25.500) 25 8a) 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethylamino- 3- methoxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imidazolhydrochlorid.
På analog måde opnås som beskrevet i eksempel 7 ud fra synteseproduktet fra eksempel 2a den ovennævnte titelforbindelse 30 q som farveløse krystaller, med smeltepunkt 211 C (dekomponering)
Xmax 417 nm (ε = 28.300) 35 Eksempel 8 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imidazolyl- 4- (5)-(phenyl-4-amino-N-mono- eller -bis-ethan-2-sulfonsyre) 3,3 g (0,01 mol) 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)- 24 DK 172240 B1 (4-aminophenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imidazol (base fra eksempel 2) opløses i 50 ml DMF, tilsættes 2,11 g (0,01 mol) 2-bromethan-sulfonsyre, natriumsalt og opvarmes i 7 timer under argon og under tilbagesvaling. Efter afdampning af opløsningsmidlet g i vakuum renses den olieagtige rest kromatografisk på en kisel-gel-60-søjle (fyldhøjde 110 cm, 0 5 cm). Elueringsmiddel: isopropanol/n-butylether/vand i forholdet 5:3:2. Ved inddampning af de tilsvarende fraktioner opnås råprodukter, der efter kogning med vand giver henholdsvis 1,3 g af mono- og 0,6 g 10 af bis-titelforbindelsen.
Tyndtlagskromatografi-færdigplade kiselgel 60-F-254 monoforbindelsens R^-værdi: 0,44 UV: \max 620 (ε = 29.100) 15 bisforbindelsens R^-værdi: 0,28 UV: \max 610 (ε = 28.400)
Eksempel 9 20
Oversigt over de optiske egenskaber for stofferne med den almene formel I
Til fastlæggelse af de molære ekstinktionskoefficenter gås _2 frem som følger: 2 x 10 mol indikator med den almene formel 25 I opløses i 100 ml 0,1 M saltsyre, såfremt et stof ikke opløses kvantitativt, opløses i en blanding af saltsyre og methanol i forholdet 9:1. Fra denne opløsning fortyndes 0,1 ml med 10 ml 0,1 M phosphatpuffer, pH-værdi 6,0. Fra den således opnåede indikatoropløsning pipetteres 10 μΐ over i en blanding bestående af 10 μΐ fortyndet (100 μΐ 30% fortyndes til 100 ml med vand), 10 μΐ peroxidaseopløsning (600 U peroxidase opløses i 1 ml vand) og 10 ml 0,1 M phosphatpuffer, pH-værdi 6,0. Indikatoren oxideres og opløsningen ændrer farve. Efter 60 sekunders forløb udskrives et spektrum af den farvede opløsning, og ud fra ekstinktionsværdierne beregnes de molære ekstinktionskoefficienter (såfremt det dannede farvestof udfælder, anvendes en blanding af puffer og acetone eller methanol 9:1).
25 DK 172240 B1
Efter den samme fremgangsmåde kan man også ud fra prøver fastlægge I^C^-koncentrationer eller koncentrationer af substrater, ud fra hvilke der ved hjælp af en forudgående enzymatisk reaktion som et reaktionsprodukt dannes ' 5
Eksempler på anvendeligheden af redoxindikatorerne ifølge opfindelsen:
Eksempel 10 10
Testsystem til påvisning af urinsyre i vårdige opløsninger På en med gelatine forudbelagt polyesterfolie hældes med en vådfilmtykkelse på 300 μ en gelatinematriks med den nedenfor 15 anførte sammensætning, der derpå tørres. I 47,5 ml 0,5 M tris-phosphatpuf f er, pH 7,5, indarbejdes 8,4 g gelatine, 0,25 g Tweeii^ 20, 0,5 KU1 uricase, 0,5 KU1 peroxidase og 100 mg indikatorstof fra eksempel 6**. Den således fremstillede reagensfilm videreforarbejdes til et testsystem svarende til fig. 1.
20 På doseringszonen anbringes 35 μΐ urinsyreopløsning. Ved at trykke reagenszonen og vævet mod transportzonen startes reaktionen. Efter 2 minutters forløb foretages måling i et remissionsfotometer (vævet har til funktion at udligne glasfiber-25 vævets uligheder).
De med det beskrevne system opnåede kalibreringskurver gengives i den følgende tabel: 30
Urinsyrekoncentration_% Remission 3 mg/dl 55,1 5 mg/dl 49,3 7 mg/dl 43,8 35 ** 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethylamino-phenyl)-5-(4)-(4-hydroxybutyl)-(IH)-imidazolhydrochlorid KU = Kilounits 26 DK 172240 B1
Urinsyrekoncentration_% Remission 9 mg/dl 39,5 11 mg/dl 34,2 5 14 mg/dl 31,3
Eksempel 11
Testsystem til påvisning af creatinin i serum 10
En absorberende bærer (skabelonpapir fra firma Scholer og 2 2
Hosch, fladevægt 12 g/m , absorptionsevne 50 ml/m ) imprægneres med en opløsning 200 KU peroxidase og 1,2 g kollagenhydrolysat, opløst i 100 ml 0,1 M phosphatpuffer.pH 8,0.og tørres. I et 15 7 andet imprægneringstrin efterimprægneres det forimprægnerede papir med en opløsning bestående af 2 mmol indikatorstof fra eks.
fe i 100 ml methanol og tørres. Man opnår reagenspapiret (8) i fig. 2.
Til fremstilling af reagenspapiret (9) i fig. 2 imprægneres den oven- 20 nævnte absorberende bærer med en opløsning af 5 KU sarkosin-oxidase, 30 KU creatininamidohydrolase og 40 KU creatinin-amidinohydrolase, 0,5 g TritoirX 100 i 100 ml 0,1 M phosphatpuf fer, pH 8,0^ og tørres. Begge papirer indarbejdes svarende til fig. 2 i et testsystem.
Til påvisning af creatinin i serum pipetterer man 30 μΐ serum over på doseringszonen. Ved at trykke enzym- og indikatorpapiret på transportzonen startes reaktionen. Den tilsvarende __ farve måles efter ét minuts forløb remissionsfotometrisk.
30
Vurderingen foregår ved hjælp af en kalibreringskurve.
I den følgende tabel gengives værdierne for en kalibreringskurve for creatinin i serum: 35 27 DK 172240 B1
Creatininkoncentration_% Remission 0,1 mg/dl 68,0 0,5 mg/dl 57,2 5 1,5 mg/dl 45,1 5,0 mg/dl 32,7 10,0 mg/d1 26,4
Eksempel 12 10
Testsystem til påvisning af urinsyre i blod
Ud fra de nedenfor anførte bestanddele fremstilles en belægningsmasse, der påføres med en vådfilmtykkelse på 200 μ på 15 en transparent folie og tørres. 18 g af en plastdispersion af en copolymer af vinylacetat og vinylpropionat, 1,38 g alginat, 69 g af en 0,45 M tris-citratpuffer, pH 7,5, 0,47 g indikator1 (stof fra eksempel 1), 0,025 g l-(3-chlorphenyl)-semicarbazid, d0 0,025 g MgK~EDTA 1 2H00, 0,5 g Tritori^X 100, 0,6 g hexanol, 20 Z 2 200 KU peroxidase og 2 KU uncase.
På det således fremstillede lag påføres et andet lag som optisk hvid baggrund med den nedenfor anførte sammensætning og med en lagtykkelse på 200 μΐ og tørres. 52 ml 0,1 M tris-25 citratpuf fer^pH 7,0, 5,5 g titandioxid, 2,7 g diatomejord, 0,4 g alginat, 1,4 g plastdispersion af en copolymertilsætning af vinylacetat og vinylpropionat, samt 0,2 g Triton X 100.
Den således fremstillede testfilm forarbejdes til testen ifølge 30 fig. 3.
Til påvisning af urinsyre i blod anbringes 30 μΐ blod på do- seringszonen^og reagensklappen trykkes herimod efter ét minuts forløb og efter yderligere to minutters forløb måles den dannede 35 2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethylamino-phenyl)-5-(4)-methyl-(IH)-imidazolhydrochlorid 28 DK 172240 B1 farve med et remissionsfotometer, og ud fra en i forvejen fremstillet kalibreringskurve fastlægges urinsyreværdierne.
1 den følgende tabel gengives værdierne for kalibreringskurven: 5
Urinsyrekoncentration_% Remission 4,6 mg/dl 53,0 7,9 mg/dl 40,3 10 9,8 mg/dl 35,0 13,5 mg/dl 28,3 20,2 mg/dl 19,8
Eksempel 13
Testsystem til påvisning af GOT1 i blod
En absorberende bærer (skabelonpapir fra firmaet Scholler 2 2 og Hosch, fladevægt 12 g/m , absorptionsevne 50 ml/m .) impræg- 20 neres med henholdsvis den nedenfor anførte opløsning 1 eller 2 og tørres.
Opløsning 1: i en liter af en 0,2 M puffer af kalilud og 2-(N- morpholino)-ethansulfonsyre med pH 6,7 opløses: 0,03 mol a-keto-2 5 glutarat, 0,8 mol alaninsulfinsyre, 0,01 mol magnesiumchlorid, 0,0001 mol ascorbinsyre, 0,009 mol stof fra eksempel 1 og 5 g octylpyranosid. Herved opnås reagenspapiret (8)i fig. 2.
3Q Opløsning 2: i én liter af den ovennævnte puffer opløses: 0,003 mol thiaminpyrophosphat, 500 KU pyruvatoxidase, 500 KU peroxidase, 100 KU ascorbatoxidase. Herved opnås reagenspapiret (9) 1 2· 35 Disse reagenspapirer forarbejdes til et testsystem ifølge fig. 2.
G0T = glutamat-oxalacetat-transaminase 29 DK 172240 B1
Til bestemmelse af enzymaktiviteten pipetteres 30 μΐ blod over på doseringszonen, og efter ét minut trykkes dækfolien og reaktionspapiret imod, og farveudviklingen som funktion af tiden følges med et remissionsfotometer. Vurderingen foregår 5 ved hjælp af en topunktsmåling ud fra en referencekurve. Referencekurven konstrueres ved, at man fremstiller fortyndingsrækker med enzymaktiviteter fra 10 - 1000 U/l og fastlægger remissionsværdierne ved hjælp af fikstidsmålinger i remis-sionsfotometeret.
10
Eksempel 14
Fremgangsmåde til påvisning af lave glucosekoncentrationer i blod til diagnose af hypoglykæmi 15
En råfilmmasse fremstilles som følger: 10 g af et 1,7 % op-kvældet alginatmateriale i en 0,5 M phosphatpuffer pH 5,0, 15 g vandig plastdispersion af en copolymer af vinylacetat og vinylpropionat, 5 g af en 15% vandig opløsning af 4-dode-cylbenzensulfonat, 25 KU glucoseoxidase, 200 KU peroxidase, 270 mg stof fra eksempel 1, 10 g diatoméjord/8^4 ml hexanol omrøres til en homogen masse, der påføres med en vådfilmtykkelse på 150 μ til et multifilt væv (2 F/964 fra firmaet Schweizer-Seidengaze Fabrik) og tørres derpå.
25
Denne film forarbejdes til testsystem ifølge fig. 4. Til bestemmelse af glucosen pipetterer man 30 μΐ blod over på doseringszonen, trykker dækfolien og reagensfilmen mod transportzonen og måler den dannede reaktionsfarve med et remissionsfotometer. Glucosekoncentrationerne fastlægges ved hjælp af en kalibreringskurve, der har det nedenfor anførte udseende: mg glucose/dl_% Remission 35 20 28'7 40 17,6 60 12,4 80 9,6 30 DK 172240 B1
Referenceteqn1 iste til fiq. 1-4: 1. reagenszonebærer (transparent) 2. reagenszone 5 3. væv 4. transportzone af glasfibre 5. adskillelseszone af glasfibre 6. fikservæv 7. dækfolie (transparent) 10 8. reagenspapir a) 9. reagenspapir b) 10. optisk hvid baggrund 11. multifilt væv 12. bærefolie 2 g 13 # klabested.
Eksempel 15 sammen!iqninqsforsoq.
Ved sammenligningsforsøget blev de efterfølgende imidazolderi-20 vater ifølge opfindelsen anvendt: I 2-(6-N-methyl-l,2,3,4-tetrahydroquinolyl)-4-(5)-(3f5-dime-thoxy-4-hydroxyphenyl)-5(4)-methyl(lH)-imidazol-hydrochlo-r i d.
25 Smeltepunkt 190°C. Amax = 700 nm (e = 19.400) II 2-(9-julolidyl)-4-(5)-(3,5-dimethoxy-4-hydroxypheny1)-5-(4)-methyl-(lH)-imidazol-hydrochlorid.
Smeltepunkt 201eC. Amax = 690 nm (e = 25.400).
30 III 2-(3,5-d imethoxy-4-hydroxyphenyl)-4-(5)-(4-dimethylamino-pheny1)-5-(4)-(2-tetrahydrofurany1)-(lH)imidazol-hydrochlo-rid. Smeltepunkt 98°C. Amax = 680 nm (e = 16.700).
35 Forbindelserne I - III blev fremstillet som angivet under eksempel 1.
31 DK 172240 B1
Til sammenligning hermed blev følgende forbindelser ligeledes undersøgt: A den kendte forbindelse 2,4-di-(4-dimethyl-amino-3,5-dime-5 thoxyphenyl)-5-(4-hydroxyphenyl)-imidazol B hydrochlor i det af den kendte forbindelse A.
Filterpapir blev imprægneret med vandig eller methanolisk op-10 løsning, som indeholdt 0,01, 0,1 eller 1,0 vægt% af de undersøgte imidazolderivater, tørret og skåret i strimler, hvoraf en del blev anvendt til bestemmelse med hydrogenperoxid og peroxidase lige med det samme, en anden del efter 3 dages lagring ved en temperatur på 35eC og en relativ luftfugtighed på 15 50%, og en tredje del efter 10 dages lagring under de nævnte betingelser. Til gennemføring af forsøget blev papiret, som var imprægneret med i midazolder ivatop 1øsni ngen, befugtet med en opløsning af 0,5 g hydrogenperoxid og 0,1 g peroxidase i 100 ml vand, og efter et tidsrum på 5 min. blev papirfarven 20 fotometrisk bestemt i remission% ved 550 nm i sammenligning med kontrolpapir (dvs. papir, som ikke var befugtet med den vandige opløsning af hydrogenperoxid og peroxidase).
Resultaterne af forsøget er vist i tabellen nedenfor.
25 30 35 DK 172240 B1 32
Tabel I % remission ved et imidazoIder i vat indhol d i I prøven på 0,01 vægt%, 0,1 vægt% og 1 vægt% 5 I efter et tidsrum på 0, 3 og 10 dage._
Imidazolderivat I 0,01 væqt% I 0,1 vaqt% I 1,0 væqt%_ I 0 3 10 I 0 3 10 I 0 3 10 I Dage | Dage | Dage I I 1 10 I I 48 48 50 | 37 37 40 | 34 36 38 II I 47 48 50 I 36 37 40 | 35 36 38 III I 47 47 50 | 35 36 38 | 30 31 33 I I f A I 48 58 62 I 42 54 61 | 38 50 - 15 B I 48 58 63 | 42 54 62 | 38 50 -
Det fremgår af tabellen, at forbindelserne I - III ifølge opfindelsen besidder en bedre lagerstabilitet end sammenligningsforbindelserne A og B, hvilket giver sig udslag i mindre 20 rem issi ons tab.

Claims (6)

1. Imidazolderivater, kendetegnet ved den almene formel I :ri H 5 hvori R betegner hydrogen, tetrahydrofuranyl, cykloalkyl eller alkyl, der eventuelt er substitueret med hydroxy, alkoxy, en svovlsyre-, phosphonsyre- eller carboxylsyrerest eller med en phenylgruppe, og
10 R2 og R 2, der kan være ens eller forskellige, betegner julolidyl, tetrahydroquinolyl, der eventuelt på nitrogenatomet er substitueret med en benzyl- eller en alkylgruppe, idet alkylgruppen eventuelt er substitueret med en svovlsyre-, phosphonsyre- eller carboxylsyrerest, 15 eller en gruppe med formlen Ri R5 hvori R4 betegner en hydroxy-, amino-, en mono- eller dialkyleret aminogruppe, hvor alkylgrupperne eventuelt er substitueret med en svovlsyre-, phosphonsyre- eller carboxylsyrerest, DK 172240 B1 34 R3 og R5, der kan være ens eller forskellige, betegner hydrogen, alkyl eller alkoxy, der eventuelt er substitueret med en carboxylgruppe, med den forudsætning, at mindst én af substituenterne R1 og R2 skal være en gruppe med formlen r3 5 Γ. Λ , hvori R4 er en hydroxygruppe, \=x7 R5 samt syre- og baseadditionssalte deraf.
2. Fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne ifølge krav 1 med formlen I samt syre- og baseadditionssalte deraf I |ϊ «> R R1 H hvori
10 R, Rj_ og R2 er som defineret i krav l, kendetegnet ved, at man a) kondenserer en cc-diketon med formlen II O 0 II II
15 R2 - C - C - R (II) hvori R2 og R har samme betydning som i formlen I, med et aldehyd med formlen III DK 172240 B1 35 0=CH-R]_ (III) hvori R-^ har samme betydning som i formlen I, og med ammoniak i sur opløsning 5 eller b) omsætter et of-ketoxim med formlen Ila R, - C - C - R 2. ii II (Ila) NOH 0 10 hvori R2 og R har samme betydning som i formlen I, med et aldehyd med ovennævnte formel III og ammoniak til en forbindelse med formlen la R_ 2_N JT1 R R 4* o hvori R, R^ og R2 har samme betydning som i formlen I, 15 og reducerer denne forbindelse, eller c) omsætter et acylbromid med formlen IV R2-CO-CHR Br (IV) hvori DK 172240 B1 36 R2 og R har samme betydning som i formlen I, med et amidin med formlen V NH 0 Rt-C (V> \ nh2 hvori R]^ har samme betydning som i formlen I, i alkalisk medium og 5 derpå om ønsket omdanner en fremstillet imidazolbase med formlen I til et syre- eller baseadditionssalt deraf eller omdanner et fremstillet syre- eller baseadditionssalt til den tilsvarende fris base.
3. Anvendelse af imidazolderivater med formlen I ifølge krav 1 som redoxindikatorer.
4. Redoxindikator til påvisning af hydrogenperoxid eller peroxidasisk virksomme stoffer, kendetegnet ved, at den er en forbindelse med formlen I ifølge krav 1.
5. Reagens til påvisning af hydrogenperoxid eller peroxidasisk virksomme stoffer, kendetegnet ved, 15 at det består af en forbindelse med formlen I ifølge krav 1 og sædvanlige virksomme stoffer og hjælpestoffer.
6. Reagens ifølge krav 5, kendetegnet ved, at det finder anvendelse i form af tabletter, lyofilisater, imprægnerede reagensbærere eller reagensfilm. 20
DK142985A 1984-03-31 1985-03-29 Imidazolderivater, fremgangsmåde til fremstilling deraf, reagenser indeholdende disse samt deres anvendelse som redoxindikatorer DK172240B1 (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3411997A DE3411997A1 (de) 1984-03-31 1984-03-31 Neue redox-indikatoren
DE3411997 1984-03-31

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK142985D0 DK142985D0 (da) 1985-03-29
DK142985A DK142985A (da) 1985-10-01
DK172240B1 true DK172240B1 (da) 1998-02-02

Family

ID=6232189

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK142985A DK172240B1 (da) 1984-03-31 1985-03-29 Imidazolderivater, fremgangsmåde til fremstilling deraf, reagenser indeholdende disse samt deres anvendelse som redoxindikatorer

Country Status (14)

Country Link
US (1) US4665023A (da)
EP (1) EP0161436B1 (da)
JP (1) JPH0643424B2 (da)
AT (1) ATE29265T1 (da)
AU (1) AU553338B2 (da)
CA (1) CA1259997A (da)
CS (2) CS276976B6 (da)
DE (2) DE3411997A1 (da)
DK (1) DK172240B1 (da)
ES (2) ES8607252A1 (da)
HU (1) HU199429B (da)
IE (1) IE58212B1 (da)
SU (1) SU1496644A3 (da)
ZA (1) ZA852382B (da)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4672029A (en) * 1984-12-06 1987-06-09 Eastman Kodak Company Color-forming couplers and their use in the analytical determination of hydrogen peroxide or other analytes
DE3515586A1 (de) * 1985-04-30 1986-11-06 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Stabilisiertes sarcosinoxidase-praeparat
US4921791A (en) * 1986-06-26 1990-05-01 Konishiroku Photo Industry Co., Ltd. Method for measuring specific component using peroxidase enzyme reaction
JPH0619346B2 (ja) * 1986-11-17 1994-03-16 コニカ株式会社 過酸化水素定量用分析素子
EP0285095B1 (en) * 1987-04-02 1994-11-30 Fuji Photo Film Co., Ltd. Dry type analysis element
US5024935A (en) * 1987-12-18 1991-06-18 Eastman Kodak Company Dye-providing composition, diagnostic test kit and their use in method for ligand determination using peroxidase labeled-receptor
EP0398941A4 (en) * 1988-01-11 1991-04-10 Boehringer Mannheim Corporation Dry powder diagnostic reagent and applications thereof
JPH0833393B2 (ja) * 1988-03-14 1996-03-29 富士写真フイルム株式会社 乾式分析要素
US5017471A (en) * 1988-08-26 1991-05-21 Epitope, Inc. Reagent for peroxidase detection
US5274095A (en) * 1989-05-31 1993-12-28 Boehringer Mannheim Gmbh Diarylimidazoles
DE3917677A1 (de) * 1989-05-31 1990-12-06 Boehringer Mannheim Gmbh Diarylimidazole
US6395227B1 (en) * 1989-08-28 2002-05-28 Lifescan, Inc. Test strip for measuring analyte concentration over a broad range of sample volume
US5620863A (en) * 1989-08-28 1997-04-15 Lifescan, Inc. Blood glucose strip having reduced side reactions
AU621245B2 (en) * 1989-10-17 1992-03-05 Boehringer Mannheim Gmbh Hydrolase substrates, a process for the preparation thereof and agents containing them
US5646281A (en) * 1990-12-28 1997-07-08 Neurogen Corporation Certain 4-piperidino- and piperazinomethyl-2-phenyl imidazole derivatives; dopamine receptor subtype specific ligands
US5646279A (en) * 1990-12-28 1997-07-08 Neurogen Corporation Substituted 4-piperazinylmethyl 2-phenylimidazoles; dopamine receptor subtype specific ligands
US5633376A (en) * 1990-12-28 1997-05-27 Neurogen Corporation Certain aminomethyl phenylimidazole derivatives; and 4-aryl substituted piperazinyl and piperidinylmethyl phenylimidazole derivatives; a new class of dopamine receptor subtype ligands
US5681956A (en) * 1990-12-28 1997-10-28 Neurogen Corporation 4-aryl substituted piperazinylmethyl phenylimidazole derivatives; a new class of dopamine receptor subtype specific ligands
US5208326A (en) * 1991-11-08 1993-05-04 Miles Inc. 8-hydroxy-2h-dibenz(b,f)azepin-2-one dyes
US5415809A (en) * 1992-07-15 1995-05-16 Aquarium Pharmaceuticals, Inc. Method for determination of dissolved oxygen in water
US5700826A (en) * 1995-06-07 1997-12-23 Ontogen Corporation 1,2,4,5-tetra substituted imidazoles as modulators of multi-drug resistance
BR9810651A (pt) 1997-07-03 2000-10-03 Neurogen Corp Certos derivados de diarilimidazol; uma nova classe de ligantes npy especìficos
US5840721A (en) * 1997-07-09 1998-11-24 Ontogen Corporation Imidazole derivatives as MDR modulators
US6166205A (en) * 1998-09-02 2000-12-26 Neurogen Corporation 2-Aryl-4-(1-[4-heteroaryl]piperazin-1-yl)methylimidazoles: dopamine . D.sub4 receptor subtype ligands
DE19945828B4 (de) 1999-09-24 2011-06-01 Roche Diagnostics Gmbh Analysenelement und Verfahren zur Bestimmung eines Analyten in Flüssigkeit
JP4189140B2 (ja) * 2001-09-07 2008-12-03 富士フイルム株式会社 乾式免疫分析要素
JP5265257B2 (ja) 2008-06-30 2013-08-14 富士フイルム株式会社 犬ｃｒｐ及び人ｃｒｐを認識する抗体
SG172895A1 (en) * 2009-02-04 2011-08-29 Otsuka Pharma Co Ltd Phenylimidazole compounds
JP5292270B2 (ja) 2009-12-21 2013-09-18 富士フイルム株式会社 犬ｃｒｐ測定用乾式分析要素
CN102419366B (zh) * 2011-08-19 2014-03-26 三诺生物传感股份有限公司 一种去除干扰的干化学定量测试试条、谷丙或谷草转氨酶定量测试试条及检测方法
CN102288747B (zh) * 2011-08-19 2013-11-27 长沙三诺生物传感技术股份有限公司 去除干扰的干化学定量测试试条、谷丙或谷草转氨酶定量测试试条及检测方法
JP6618370B2 (ja) * 2015-03-05 2019-12-11 エイブリック株式会社 磁気センサ回路
JP7072778B2 (ja) * 2018-07-04 2022-05-23 国立大学法人京都大学 イミダゾール誘導体の製造方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1648840C2 (de) * 1967-10-14 1970-09-17 Boehringer Mannheim GmbH, 6800 Mann" heim-Waldhof Verfahren und diagnostische Mittel zur Bestimmung von Hydroperoxiden und peroxidatisch wirksamen Substanzen
US4278439A (en) * 1979-12-17 1981-07-14 Miles Laboratories, Inc. Sensitizers for peroxidative activity tests
DE3124590A1 (de) * 1981-06-23 1983-01-27 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Stabilisiertes reagenz zum nachweis von h(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)o(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)
DE3124594A1 (de) * 1981-06-23 1983-01-05 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Mittel und verfahren zum nachweis von wasserstoffperoxid
DE3125667C2 (de) * 1981-06-30 1986-01-23 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren und Mittel zum Nachweis von Wasserstoffperoxid
US4535165A (en) * 1981-11-23 1985-08-13 Riker Laboratories, Inc. Substituted diazoles and thiazoles
US4472406A (en) * 1982-11-12 1984-09-18 Riker Laboratories, Inc. Antimicrobial 6,7-dihydro-8-(imidazol-1-yl)-5-methyl-1-oxo-1H,5H-benzo [ij]quinolizine-2-carboxylic acids and derivatives
JPS59193352A (ja) * 1983-04-18 1984-11-01 Fuji Photo Film Co Ltd 分析試薬および多層化学分析要素
EP0139584B1 (fr) * 1983-10-17 1988-05-18 Synthelabo Dérivés d'imidazoline, leur préparation et leur application en thérapeutique

Also Published As

Publication number Publication date
HU199429B (en) 1990-02-28
JPH0643424B2 (ja) 1994-06-08
AU553338B2 (en) 1986-07-10
ZA852382B (en) 1985-12-24
ES8607252A1 (es) 1986-06-01
ES541736A0 (es) 1986-06-01
CA1259997A (en) 1989-09-26
JPS60224677A (ja) 1985-11-09
HUT37406A (en) 1985-12-28
US4665023A (en) 1987-05-12
CS725686A3 (en) 1992-04-15
CS231885A3 (en) 1992-04-15
DK142985D0 (da) 1985-03-29
ES551531A0 (es) 1987-01-01
ATE29265T1 (de) 1987-09-15
ES8701733A1 (es) 1987-01-01
CS276976B6 (en) 1992-11-18
CS276982B6 (en) 1992-11-18
DK142985A (da) 1985-10-01
DE3560531D1 (en) 1987-10-08
EP0161436A1 (de) 1985-11-21
EP0161436B1 (de) 1987-09-02
SU1496644A3 (ru) 1989-07-23
IE850780L (en) 1985-09-30
IE58212B1 (en) 1993-08-11
AU4037685A (en) 1985-10-03
DE3411997A1 (de) 1985-10-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK172240B1 (da) Imidazolderivater, fremgangsmåde til fremstilling deraf, reagenser indeholdende disse samt deres anvendelse som redoxindikatorer
US6218571B1 (en) 8-(anilino)-1-naphthalenesulfonate analogs
EP0826777B1 (en) Chemical timer for a visual test strip
EP0433854B1 (de) 3-Aminopyrazolo-Heterocyclen, deren Verwendung zur Bestimmung von Wasserstoffperoxid, Wasserstoffperoxidbildenden Systemen, Peroxidase, peroxidatisch wirksamen Substanzen oder von elektronenreichen aromatischen Verbindungen, entsprechende Bestimmungsverfahren und hierfür geeignete Mittel
US4460684A (en) Ascorbate-resistant broad range glucose test composition, test device and method
AU673935B2 (en) Preparation of diagnostic test strips containing tetrazolium salt indicators
EP0735369B1 (en) Chemical timer for a direct-reading reagent test strip
US5326697A (en) Composition and method of assaying for D-β-hydroxybutyrate
EP0122641B1 (en) Analytical reagent, analytical method, and multilayer chemical-analytical element
JPH06340822A (ja) 分析物を比色定量するための方法及び薬剤、及びニトロソアニリン化合物
US4966855A (en) New redox indicators
US4988616A (en) Method for detecting hydrogen peroxide employing triaryl- and trihetarylmethane derivatives as redox indicators
US5510245A (en) Composition and method of assaying for ketone bodies
US4975367A (en) Catalytic test composition intended to produce a range of colors
US5128267A (en) Naphthotriazolium salts
JPH05236996A (ja) 色原性検定における発色阻害剤及びそれを含む診断試薬系
JPH0354938B2 (da)
US5041658A (en) Carboxamido nitrobenzene disulfide compound
US5220035A (en) Dithiol-(2-nitrobenzoate) indicators
IE870866L (en) Rainbow text device (composition for visual determination of¹analyte in fluids).
JPH0747586B2 (ja) ジアリールイミダゾール類
JPH066577B2 (ja) 新規なトリアリールイミダゾール誘導体

Legal Events

Date Code Title Description
PBP Patent lapsed
B1 Patent granted (law 1993)
PBP Patent lapsed