DK169258B1

DK169258B1 - Derivater af synergistiner, deres fremstilling og farmaceutiske præparater deraf

Info

Publication number: DK169258B1
Application number: DK342584A
Authority: DK
Inventors: Jean-Pierre Corbet; Claude Cotrel; Daniel Farge; Jean-Marc Paris
Original assignee: Rhone Poulenc Sante
Priority date: 1983-07-13
Filing date: 1984-07-12
Publication date: 1994-09-26
Also published as: DK342584D0; FI78105C; ES8504201A1; FI80456C; ES537179A0; DE3462507D1; SU1456019A3; CA1213583A; IL72397A0; SU1421260A3; FR2549063B1; FR2549063A1; ES8601210A1; PT78894A; GR81555B; KR910005848B1; JPS6038386A; FI874654A0; AU567570B2; FI78105B

Description

i DK 169258 B1 o

Pristinamycin og virginiamycin er kendte forbindelser, jf. J. Preud'homme et al., Bull. Soc. Chim. Fr. 2, 585-591 (1968).

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte 5 derivater af synergistiner med den almene formel (W^.N--O- • .ΛχνΟ^ “ O” deres salte, deres fremstilling og farmaceutiske præparater indeholdende dem.

I den almene formel I betyder Y et hydrogenatom eller en dimethylaminogruppe,og 20 a) R-^ og R2 betyder hver især et hydrogenatom, og R betyder 3-pyrrolidinyl-thio eller 3- eller 4-piperidyl-thio (i-det disse grupper eventuelt er substitueret med en alkyl-gruppe), eller R betyder en alkylthiogruppe substitueret med 1 eller 2 hydroxysulfonyl-, alkylamino- eller dialkyl-25 aminogrupper (eventuelt substitueret med en mercapto- eller dialkylaminogruppe) eller med 1 eller 2 cycler valgt blandt piperazino (eventuelt substitueret med en alkyl- eller mercaptoalkylgruppe), morpholino, thiomorpholino, pi-peridino, 1-pyrrolidinyl, 2-, 3- eller 4-piperidyl og 2-30 eller 3-pyrrolidinyl (idet de to sidstnævnte cycler eventuelt er substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet) , eller b) R^ og R2 danner sammen en valensbinding, og R betyder 3-pyrrolidinyl-amino, 3- eller 4-piperidyl-amino, 3-pyrro-35 lidinyl-oxy, 3- eller 4-piperidyl-oxy, 3-pyrrolidinyl-thio, 3- eller 4-piperidyl-thio (idet disse grupper eventuelt er

O

2 DK 169258 B1 substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet i ringen) , eller R betyder alkylamino, alkyloxy eller alkyl-thio substitueret med 1 eller 2 hydroxysulfonyl-, alkylamino-, dialkylamino- (eventuelt substitueret med en di-5 alkylaminogruppe) , trialkylammonium-, 4- eller 5-imidazo-lyl-grupper eller med 1 eller 2 cycler valgt blandt pipera-zino (eventuelt substitueret med en alkyl- eller mercaptoal-kylgruppe), morpholino, thiomorpholino, piperidino, 1--pyrrolidinyl, 2-, 3- eller 4-piperidyl og 2- eller 3-pyr-10 rolidinyl (idet de to sidstnævnte cycler eventuelt er substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet), idet alkylgrupperne og alkyldelene ovenfor og i det følgende er ligekædede eller forgrenede og indeholder 1-5 carbon-atomer, medmindre andet er angivet.

Ί5 Det vil forstås, at forbindelserne med den almene formel I, hvori og R2 danner en valensbinding, kan foreligge i to isomere former, og at disse isomere og deres blandinger er omfattet af den foreliggende opfindelse.

A/ Ifølge opfindelsen kan forbindelserne med den 20 almene formel I, hvori Y har den ovenfor angivne betydning, og de andre symboler har den ovenfor under a) angivne betydning, fremstilles ved indvirkning af en forbindelse med den almene formel II

R' - Η (II) 25

hvori R' er defineret som R ovenfor under a) , på en forbindelse med den almene formel III

30 ν^ν^γ-θ-Υ 0 0A.n^^CH2 (HD H| =h3 O u I Γ <S>H «A. 0

Jv-8 ^

O

3 DK 169258 B1 hvori Y har den ovenfor angivne betydning.

Der arbejdes sædvanligvis i et organisk opløsningsmiddel, såsom en alkohol, f.eks. methanol, eller et chlo-reret opløsningsmiddel, såsom chloroform, eller en blan-5 ding af disse opløsningsmidler ved en temperatur mellem 0°C og reaktionsblandingens tilbagesvalingstemperatur, fortrinsvis ved en temperatur nær 20°C.

Forbindelserne med den almene formel III kan fremstilles ved indvirkning af et alkalimetalborhydrid i nær-10 værelse af en stærk organisk syre på en forbindelse med den almene formel IV

fHa /=v :χ> * iji hvori Y har den ovenfor angivne betydning, og R^ og R2 er alkylgrupper med 1-4 carbonatomer eller sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, danner en 5- eller 6-led-25 det heterocyclus, der eventuelt indeholder et andet he-teroatom valgt blandt oxygen, nitrogen eller svovl.

Der arbejdes sædvanligvis ved hjælp af natrium-borhydrid eller -cyanoborhydrid i et organisk opløsningsmiddel, såsom en ether, f.eks. tetrahydrofuran, eller en 3° alkohol, f.eks. isopropanol, i nærværelse af en stærk organisk syre, såsom trifluoreddikesyre, ved en temperatur mellem 0°C og reaktionsblandingens tilbagesvalingstemperatur, fortrinsvis ved en temperatur nær 20°C.

Forbindelserne med den almene formel IV kan frem-35 stilles ved indvirkning af en forbindelse med formlen V

O

4 DK 169258 B1 R1 Xi N - CH (V) / \ R2 X2

5 hvori og R2 har den ovenfor angivne betydning, og X^ og X2# der er ens eller forskellige, betyder en alkyloxy-gruppe eller en aminogruppe, der er substitueret og defineret som -NR^R2, på en forbindelse med den almene formel VI

0*Ss^N- 0 m> £. & 20 hvori Y har den ovenfor angivne betydning, dvs. pristina-mycin IA (Y = NiCHg^) eller virginiamycin S (Y = H) .

Det foretrækkes at anvende en reaktant med den almene formel V, hvori X^ og/eller X2 er valgt således, at den substituerede aminogruppe er identisk med gruppen 25 -NR^R2/ som er til stede i molekylet.

I praksis er det fordelagtigt at omsætte tert.bu-toxy-bis-(dimethylamino)-methan med en forbindelse med den almene formel VI, idet der arbejdes i et organisk opløsningsmiddel, såsom et chloreret opløsningsmiddel som 1,2-30 -dichlorethan eller et amid, f.eks. dimethylformamid ved en temperatur mellem 0 og 80°C, fortrinsvis ved en temperatur nær 20°C.

Forbindelserne med den almene formel VI kan fremstilles ifølge metoderne, der beskrives af H. Bredereck et 35 al., Chem. Ber. 101, 41 og 3058 (1968) og 106, 3725 (1973).

o 5 DK 169258 B1 B/ Ifølge opfindelsen kan forbindelserne med den almene formel I, hvori Y har den ovenfor angivne betydning, og de andre symboler har den ovenfor under b) angivne betydning, med undtagelse af sådanne forbindelser,

5 hvori R betyder 3-pyrrolidinyl-oxy, 3- eller 4-piperi-dyl-oxy eller alkyloxy (eventuelt substitueret som defineret under b)) , fremstilles ved indvirkning af en forbindelse med den almene formel VII

R"-H (VII) 10 hvori R" er defineret som R ovenfor under b) , men ikke kan betyde 3-pyrrolidinyl-oxy, 3- eller 4-piperidyl-oxy eller alkyloxy (eventuelt substitueret som defineret under b)), på en forbindelse med den almene formel IV, hvori Y har 15 den ovenfor angivne betydning, og R^ og R2, der er ens eller forskellige, betyder et hydrogenatom eller en phenyl- eller pyridylgruppe, der eventuelt er substitueret (med en di-alkylaminogruppe, hvis alkyldel er ligekædet eller forgrenet og indeholder 1-4 carbonatomer) eller en alkylgruppe 20 med 1-10 carbonatomer, der er ligekædet eller forgrenet og eventuelt er substitueret (med hydroxy, mercapto, carboxy, pyridyl, anilino, alkylamino- eller dialkylamino, hvori mindst én af alkyldelene er substitueret med hydroxy, mercapto, carboxy eller anilino), eller en alkenylgruppe med 25 3 eller 4 carbonatomer, eller en alkynylgruppe med 3 el ler 4 carbonatomer, eller og R2 sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, danner en 5- eller 6-leddet heterocy-clus, der eventuelt indeholder et andet heteroatom, såsom oxygen, svovl eller nitrogen (eventuelt substitueret med al-30 kylgruppe) .

Omsætningen gennemføres i organisk medium i nærværelse af en syre (f.eks. eddikesyre eller en blanding af eddikesyre og katalytiske mængder trifluoreddikesyre), eventuelt i nærværelse af et opløsningsmiddel, ved en tem-35 peratur mellem 0 og 50°C, fortrinsvis ved en temperatur nær 20°C.

o 6 DK 169258 B1 I påkommende tilfælde kan opløsningsmidlerne vælges blandt organiske opløsningsmidler som ethere (tetra-hydrofuran), alkoholer (ethanol) eller chlorerede opløsningsmidler (f.eks. methylenchlorid eller chloroform).

5 Forbindelserne med den almene formel IV, hvori og R2 har den ovenfor angivne betydning med undtagelse af de betydninger, der er defineret for formel IV ved fremgangsmåde A/, kan fremstilles ved trans-enaminering ved indvirkning af en amin med formlen IINR-j^, hvori R^ 10 og R2 har den ovenfor angivne betydning, på en enamin med den almene formel IV, hvori R^ og R2 er defineret som o-venfor ved fremgangsmåde A/.

C/ Ifølge opfindelsen kan forbindelserne med den almene formel I, hvori Y har den ovenfor angivne betyd-15 ning, og de andre symboler er defineret som ovenfor under b), fremstilles ved indvirkning af en forbindelse med den almene formel VIII

R"' - Η (VIII)

20 hvori R"' er defineret som R under b), på en forbindelse med den almene formel IX

ch3 °^N—Y 25 0 (IX> - 2r8^” hvori Y har den ovenfor angivne betydning, og Z betyder et halogenatom, en trimethylsilyloxy- eller dialkyloxyphospho-ryloxygruppe eller en gruppe med den almene formel IXa el-35 ler IXb

O

7 DK 169258 B1 -0-S02-R3 (IXa) -O-CO-Rj (IXb) hvori R3 betyder en alkyl-, trifluormethyl- eller trichlor-methylgruppe eller en phenylgruppe, der eventuelt er sub-5 stitueret med et halogenatom eller en alkyl- eller nitrogruppe, og R4 er defineret som R3 eller betyder alkylcar-bonylmethyl, alkylcarbonylethy1, alkyloxycarbonylmethyl, 2-alkyloxycarbonyl-ethyl eller alkyloxy.

Når Z betyder et halogenatom, vælges det blandt 10 chlor og brom.

Der arbejdes i almindelighed i et organisk opløsningsmiddel, såsom en ether som tetrahydrofuran, alkohol som ethanol eller et chloreret opløsningsmiddel (f.eks. methylen-chlorid eller chloroform) ved en temperatur nær 20°C. Omsæt-15 ningen gennemføres i basisk medium, f.eks. i nærværelse af et alkalimetalhydrid eller en alkalimetalalkoholat, f.eks. natriumethylat eller kalium-tert.butylat.

Når R"' er forskellig fra substitueret alkyloxy eller heterocyclyloxy, er det ligeledes muligt enten at 20 arbejde i neutralt medium ved en temperatur mellem 0 og 50°C i et af de ovenfor nævnte opløsningsmidler eller i surt medium under betingelser, der er identiske med de ovenfor beskrevne for fremgangsmåde B/.

Forbindelserne med den almene formel IX kan frem-25 stilles ved sur hydrolyse af en forbindelse med den almene formel IV til dannelse af en forbindelse med den almene formel X

. sAvo* „^PCvOC” " 2r8 ^ * 8 DK 169258 B1

O

efterfulgt af

a) indvirkning af en forbindelse med den almene formel XI

Z'-X (XI)

5 hvori X betyder et halogenatom, og Z' er defineret som Z ovenfor,men ikke kan betyde et halogenatom, eller β) indvirkning af et halogeneringsmiddel, f.eks. en forbindelse med formlen XII

(C,Hc)-PHal« (XII) 10 6 5 3 2 hvori Hal betyder et chlor- eller bromatom, til dannelse af en forbindelse med den almene formel IX, hvori Z betyder et halogenatom.

Hydrolysen af forbindelsen med den almene formel 15 IV til forbindelsen med den almene formel X gennemføres ved hjælp af en vandig opløsning af en uorganisk syre. Der anvendes f.eks. 0,1N saltsyre og arbejdes ved en temperatur nær 20°C.

Omsætningen af forbindelsen med den almene formel 20 XI med forbindelsen med den almene formel X gennemføres i almindelighed i et organisk opløsningsmiddel, såsom methy-lenchlorid, i nærværelse af en syreacceptor, såsom en organisk base som triethylamin eller en uorganisk base som et alkalimetalcarbonat eller -hydrogencarbonat, f.eks. natri- 25 um- eller kaliumhydrogencarbonat. Der arbejdes i almindelighed ved en temperatur mellem -20 og +20°C.

Omsætningen af forbindelsen med den almene formel XII med forbindelsen med den almene formel X gennemføres i almindelighed i et chloreret opløsningsmiddel, såsom me-30 q thylenchlorid, ved en temperatur mellem -20 og +20 C.

Forbindelserne med de almene formler II, VII og VIII kan fremstilles ifølge eller analogt med metoderne, der er beskrevet nedenfor i eksemplerne, og især ifølge: 35 9 DK 169258 B1

O

- G.G. URQUHART et al., Org. Synth., 21, 36 (1941) - A.I. VOGEL, J. Chem. Soc., 1822 (1948) - J.H. CHAMPMAN og L.N. OWEN, J. Chem. Soc., 579 (1950) - H.R. SNYDER et al., J. Am. Chem. Soc., 69, 2672 (1947) 5 - D.D. REYNOLDS et al., J. Org. Chem. 26, 5125 (1961) når der er tale om en forbindelse med den almene formel II, VII eller VIII, hvori R', R" eller R"' betyder en substitueret alkylthiogruppe eller en heterocyclylthiogruppe, eller ifølge 10 - A.J.W. HEADLEE et al., J. Am. Chem. Soc., 55, 1066 (1933) - B.K. og K.N. CAMPBELL, J. Am. Chem. Soc., 6£, 1372 (1938) - R.C. ELDERFIELD et al., J. Am. Chem. Soc., £8, 1579 (1946) når der er tale om en forbindelse med den almene formel VII eller VIII, hvori R" eller R"' betyder en substitueret 15 alkyloxygruppe eller en heterocyclyloxygruppe, eller ifølge: - J. Amer. Chem. Soc., S4, 1499 (1932) og J. Araer. Chem.

Soc., 54, 3441 (1932) når R" (eller R'") betyder en substitueret aminogruppe, eller ifølge 20 - E.F. ELSLAGER et al., J. Med. Chem., 17, 99 (1974) og L.

M. Werbel et al., J. Het. Chem., 1£, 363 (1973) når R" (eller R"') betyder en heterocyclylaminogruppe.

25 30 35 o 10 DK 169258 B1

Det vil ved de ovenfor anførte metoder forstås, at når R', R" eller R"' indeholder en alkylaminogruppe, der kan interferere med omsætningen, beskyttes denne i forvejen ved en hvilken som helst kendt metode, der ikke påvir-5 ker resten af molekylet.

Ligeledes når grupperne R', R" og R" * i forbindelserne med de almene formler II, VII og VIII indeholder en sekundær aminfunktion, kan det eventuelt være nødvendigt at beskytte denne, før de tilsvarende forbindelser omsæt-10 tes med forbindelserne med de almene formler III, IV hhv.

X. Beskyttelsesgruppen fjernes efter omsætningen. Til dette formål anvendes ethvert gængst anvendt blokeringsmiddel til beskyttelse af en sekundær aminfunktion, som ikke påvirker resten af molekylet og let fjernes. Det er særlig 15 fordelagtigt som beskyttelsesgruppe at anvende en trifluor-acetylgruppe. Denne kan derefter fjernes ved hjælp af en vandig opløsning af et alkalimetalhydrogencarbonat, såsom natrium- eller kaliumhydrogencarbonat.

Det vil ligeledes forstås, at forbindelserne med 20 de almene formler IX og X kan foreligge i to isomere former, der uden forskel kan anvendes i den ene eller anden af disse former eller en blanding deraf.

Når forbindelserne med den almene formel I udviser isomere former, er det muligt at separere disse ved 25 enhver kendt metode, der ikke påvirker resten af molekylet, f.eks. højydelses-væskechromatografi.

De hidtil ukendte forbindelser med den almene formel I kan renses ved sædvanlige metoder, f.eks. krystallisation, chromatografi eller successive ekstraktioner i 30 surt eller basisk medium. På grund af den kendte følsomhed af synergistiner i alkalisk medium forstås der ved "basisk medium" et medium, der netop er tilstrækkelig alkalisk til at frigøre modersubstansen fra dens additionssalt med en syre, dvs. et medium, hvis pH-værdi ikke over-35 skrider 7,5-8.

o 11 DK 169258 B1

De hidtil ukendte forbindelser med den almene formel I, hvori R betyder en gruppe indeholdende en aminfunk-tion, kan omdannes til additionssalte med syrer ved indvirkning af en syre i et organisk opløsningsmiddel, såsom 5 en alkohol, en keton, en ester eller et chloreret opløsningsmiddel. Saltet udfælder, eventuelt efter koncentrering af opløsningen, og det fraskilles ved filtrering eller dekantering. Additionssalte med syrer kan ligeledes fremstilles i form af vandige opløsninger ved tilsætning af 10 en vandig opløsning af den tilsvarende syre til forbindelsen med den almene formel I.

De hidtil ukendte forbindelser med den almene formel I, hvori R betyder en gruppe substitueret med en eller to hydroxy sulf ony lgrupper, kan omdannes til metalsalte el-15 ler additionssalte med nitrogenholdige baser analogt med den ovenfor beskrevne fremstilling af additionssalte med syrer, idet syren erstattes med et metalhydroxid eller en nitro-genholdig base.

Det er velkendt, at synergistiner fremstillet ved 20 fermentering er meget efterspurgte af læger til behandling af mange tilstande, som skyldes grampositive bakterier (stafylokokker, streptokokker, pneumokokker, enterokokker) og gramnegative bakerier (af slægten Haemophilus, gonokokker, meningokokker) . Imidlertid har disse forbindelser den 25 ulempe, at de er uopløselige i vandigt medium og derfor kun kan indgives oralt, i almindelighed i form af kapsler, dragéer eller tabletter. På grund af denne uopløselighed er det umuligt at anvende de kendte synergistiner, når patienten ikke er i stand til at sluge dem, hvilket især er til- 30 fældet ved behandling af børn og bevidstløse patienter, hvorimod aktivitetsspektret af disse forbindelser giver dem en særlig værdifuld indikation under et stort antal omstændigheder, f.eks. ved komatøs septikæmi.

De hidtil ukendte forbindelser ifølge opfindelsen 35 har den betydelige fordel, at de kan solubiliseres i vand i form af salte i terapeutisk anvendelige doser under bi-

O

12 DK 169258 B1 beholdelse af synergistinernes generelle aktivitets-spektrum. De er især aktive in vitro over for Staphylococcus aureus Smith i koncentrationer mellem 0,1 og 125^ug/ml.

5 Deres giftighed er generelt ringe. Deres DL^ er generelt over 300 mg/kg ved subcutan indgivelse til mus.

Ved terapeutisk anvendelse kan forbindelserne i-følge opfindelsen anvendes som de er, dvs. i form af base, men ved anvendelsen i vandig opløsning, hvilket er den 10 væsentlige fordel ved forbindelserne ifølge opfindelsen, er det særlig fordelagtigt at anvende dem i form af farmaceutisk acceptable salte, dvs. salte, der er ugiftige i de anvendte doser.

Som farmaceutisk acceptable salte kan der nævnes 15 additionssalte med uorganiske syrer, såsom hydrochlori- der, hydrobromider, sulfater, nitrater, phosphater, eller med organiske syrer, såsom acetater, *propionater, succinater, maleater, fumarater, methansulfonater, p-to-luensulfonater, isethionater eller substitutionsderiva-20 ter af disse forbindelser. Som farmaceutisk acceptable salte kan der endvidere nævnes kvaternære ammoniumsalte, når R betyder en trialkylammoniumgruppe. Disse salte svarer til anionerne af de ovenfor anførte salte. Som farmaceutisk acceptable salte kan der endvidere nævnes salte med 25 alkalimetaller, såsom salte af natrium, kalium eller lithium, med jordalkalimetaller, såsom salte af calcium eller magnesium, ammoniumsalte og additionssalte med nitrogenhol-dige organiske baser, såsom ethanolamin, diethanolamin, trimethylamin, triethylamin, methylamin, propylamin, diiso-30 propylamin, Ν,Ν-dimethylethanolamin, benzylamin, dibenzyl-amin, dicyclohexylbenzylamin, N-benzyl-Ø-phenethylamin, N,N*-dibenzylethylendiamin, benzhydrylamin, arginin, leucin, lysin eller N-methyl-glucamin.

Af særlig interesse er forbindelser med den almene 35 formel I, hvori Y betyder et hydrogenatom eller en dimethyl-aminogruppe - R, og R2 hver især betyder et hydrogenatom, og R betyder o 13 DK 169258 B1 4-piperidy1-thio, der eventuelt er substitueret med en al-kylgruppe, eller alkylthio, der er substitueret med en eller to dialkylaminogrupper (eventuelt substitueret med en mercaptogruppe), alkylpiperazino eller mercaptoalkylpipe-5 razino, eller - og R2 sammen danner en valensbinding, og R betyder 3-eller 4-piperidyl-amino eller 3- eller 4-piperidylthio, der eventuelt er substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet i ringen, eller R betyder alkylamino, alkyloxy 10 eller alkylthio, der eventuelt er substitueret med en eller to hydroxysulfonyl-, alkylamino-, dialkylamino- (eventuelt substitueret med en anden dialkylaminogruppe), trialkyl-ammonium-, 4- eller 5-imidazolyl-, alkylpiperazino-, mor-pholino-, piperidino-, pyrrolidinyl- eller N-alkylpyrroli-15 dinylgrupper.

Mere specielt aktive blandt disse forbindelser er derivaterne af synergistin med den almene formel I, hvori Y betyder et hydrogenatom eller en dimethylamino-gruppe, og 20 - R^ og R2 hver især betyder et hydrogenatom, og R betyder 4-alkylpiperidyl-thio eller alkylthio, der er substitueret med en eller to dialkylamino- eller alkylpiperazinogrupper, eller - R^ og R2 sammen danner en valensbinding, og R betyder 1-25 -alkyl-4-piperidyl-amino, eller R betyder ligekædede alkyl- arainogrupper substitueret med en alkylamino- eller dialkylaminogruppe, hvis alkyldele eventuelt sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet kan danne en heterocyclus valgt blandt 1-pyrrolidinyl, piperidino, 4-alkyl-piperazi-30 no eller med en l-alkyl-2-pyrrolidinylgruppe, eller R betyder en ligekædet alkylthiogruppe, der er substitueret med en 4-alkyl-piperazinogruppe, eller betyder en 5-dial-kylamino-2-pentylgruppe, især forbindelser med den almene formel I, hvori Y bety-35 der et hydrogenatom eller en dimethylaminogruppe, og - R^ og R2 hver især betyder et hydrogenatom, og R betyder en 4-alkylpiperidyl-thiogruppe eller en alkylthiogruppe, 14 DK 169258 B1 o der er substitueret med en eller to dialkylaminogrupper eller med en alkylpiperazinogruppe, eller - R^ og R2 sammen danner en valensbinding, og R betyder en l-alkyl-4-piperidyl-aminogruppe, idet alkyldelene og alkyl-5 grupperne er ligekædede eller forgrenede og indeholder 1-3 carbonatomer, og blandt disse forbindelser følgende forbindelser: 58-(3-dimethylamino-propyl)-thiomethyl-pristinamycin 1^

55-[2-(4-methyl-l-piperazinyl)-ethyl]-thiomethyl-pristin-10 amycin IA

55-[3-(4-methyl-l-piperazinyl) -propyl]-thiomethyl-pristinamycin 1^ 5S-[1,3-bis-(dimethylamino)-2-propyl]-thiomethyl-pristinamycin ιΑ 15 55- (l-methyl-4-piperidyl) -aminoraethylen-pristinamycin lA-Opfindelsen illustreres ved de følgende eksempler. NMR-spektrene af forbindelserne, der er illustreret i disse eksempler, udviser generelle karakteristika, som er fæl-2Q les for alle forbindelserne , og specielle karakteristika, som er særlige for hver af forbiridelserne afhængigt af sub-stituenterne Y, R^ og R2· I eksempel 1 er der angivelser for alle protonerne i molekylet. I de øvrige eksempler nævnes kun de særlige karakteristika, der skyldes variable grupper. Alle protonerne har den nummerering, der er an-25 givet i den almene formel XIII. Denne nummerering er anbefalet af J.O. Anteunis et al., Eur. J. Biochem. 58, 259 (1975).

30 35

O

15 DK 169258 B1 /\ ACH-, .36 f >33 CHi M=4f 5 2α 26 2Ύ U I 5ε JR (XIII) 2NHHN^lrCH/ 0 ° γ 5/\ ^\f:cr^N.

γ 1β o 5NH>|^5a 5^ 0

NH1NH JL O

10 1<H6 1. ‘’"s

Alle spektrene er taget ved 250 MHz i deuterochloro-form. De kemiske forskydninger er udtrykt i ppm i forhold til signalet af tetramethylsilan. Forkortelserne, der anvendes nedenfor, er følgende: 20 s - singlet d = duplet t = triplet mt = multiplet m = massiv 25 dd = duplet-duplet dt = duplet-triplet ddd = duplet-duplet-duplet dddd = duplet-duplet-duplet-duplet I eksempel 2-50 er der i parentes angivet den kemi-30 ske forskydning, signalformen, integrationen (antallet af protoner, eventuelt sammen med mængden af isomer i procent) og protonernes tilhørsforhold.

I de følgende eksempler forstås der ved flashchro-matografi en rensningsteknik, der er karakteriseret ved, at 35 der anvendes en kort chromatografisøjle og arbejdes under moderat tryk (50 kPa), idet der anvendes et siliciumdioxid 16 DK 169258 B1

O

med en kornstørrelse på 40-63^,um, ifølge W.C. Still/ M. Kahn og A. Mitra, J. Org. Chem. 4j3, 2923 (1978).

Eksempel 1« 5 Til en opløsning af 3,6 g 5£-methylen-pristinamy- cin IA i en blanding af 25 ml methanol og 5 ml chloroform sættes 1,95 g 3-dimethylamino-propanthiol, hvorefter den fremkomne opløsning omrøres i 20 timer ved en temperatur nræ 20°C. Derefter hældes reaktionsblandingen i 250 ml de-10 stilleret vand, og den fremkomne emulsion ekstraheres 3 gange med i alt 250 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchroma tograf i, 15 idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5. Fraktionerne 10-38 koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens udrives med 30 ml ethyl-ether. De fremkomne krystaller fraskilles ved filtrering, 20 hvorefter de tørres under formindsket tryk (27 Pa) ved 20°C. Der fås på denne måde 2,4 g 5<5-(3-dimethylamino-pro-pyl)-thiomethyl-pristinamycin 1^ i form af hvide krystaller med smp. 234°C.

NMR-spektrum: 25 30 35 17 DK 169258 B1 δ (ppm) Form Tilskrives

11,65 s (bred) 0H

8,70 d 6 NH

8.40 d 1 NH

7.80 dd l'H6 7,45 m l'H4 + l'H5 7,27 m -1

) 6γ + 66 + 6ε 7,17 m J

7,05 dTAB-system 4δ + 4ε 6,60 dj

6,47 d 2 NH

5,87 ddd 13 5,83 d 6a 5.24 m 5a + 4a 5,03 ddd 5εχ .4,85 dd la 4.80 m 2a 4,53 dd 3a , 3,53 m 3δχ 3,35 ddl 3,15 dd ABx-systein -<52-S-CH2- 3.25 s .4 NCH3 3.25 111 362 2.90 s 4 N(CH3)2 2.90 m 48 ρττ 2,55 t 2,50 dd 5ε2 2.40 t -CH2SCH2- 2,40 - 2,20 m 5δ + 5β1 2.25 s -CH2N(CH3)2 2 m 38χ 1,75 ® -SCH2CH2CH2- 1,8 - 1,45 ® 2βχ + 282 + 3γχ 1,30 d ΐγ 1,25 - 1,05 ® 3γ2 + 382 0,9 t 2γ 0,60 dd 562

O

18 DK 169258 B1

Der fås en vandig opløsning med 10% 55-(3-dimethyl-amino-propyl)-thiomethyl-pristinamycin IA (forbindelse AA) med: forbindelse AA 30 mg 5 0,IN saltsyre, op til 0,3 ml 55-Methylen-pristinamycin i kan fremstilles på · følgende måde:

Til en opløsning af 12 g 55-dimethy 1 aminomethylen--pristinamycin 1^ i 230 ml tetrahydrofuran indeholdende 10 1,2 ml trifluoreddikesyre sættes 0,43 g natriumcyanobor- hydrid. Den fremkomne opløsning omrøres i 4 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorefter den koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi, idet der 15 som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5. Fraktionerne 4-15 koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås på denne måde 5,5 g 55-methylen-pristin-amycin i form af hvide krystaller med smp. 245°C.

20 NMR-spektrum: 0,55 (dd, IH : 5B2) 2,40 (d, IH : 5Βχ) 3,55 (dd, IH : 5ε2) 5,25 (m, 2H : 5« +5e.) 25 1

H

5,30 og 6,10 (2s, 2H : =C_^— ) 7,85 (dd, IH : l'Hg) 5$-Dimethylaminomethylen-pristinamycin I kan frem-30 stilles på følgende måde:

Til en opløsning af 46 g pristinamycin 1^ i 460 ml 1,2-dichlorethan sættes 230 ml tert.butoxy-bis-(dimethyl-amino)-methan. Den fremkomne opløsning omrøres i 18 timer ved en temperatur nær 20°C. Reaktionsblandingen fortyndes 35 med 1 liter methylenchlorid, hvorefter den vaskes 3 gange med i alt 3 liter 0,4%'s vandig ammoniumchloridopløsning.

O

19 DK 169258 B1

Den organiske fase tørres over magnesiuinsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens udrives med 600 ml destilleret vand. Blandingen filtreres, og det faste pro-5 dukt tørres under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 20°C.

Der fås 41 g råt 5<5-dimethylaminomethylen-pristinamycin 1^ i form af et beige pulver. Dette produkt har en tilstrækkelig kvalitet til at kunne anvendes som det er i de efterfølgende trin. Det kan imidlertid renses på følgende 10 måde: 23,5 g råt 5<£-dimethylaminomethylen-pristinamy-cin IA renses ved flashchromatografi, idet der som elue-ringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 98:2. Fraktionerne 16-25 forenes og 15 koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås på denne måde 12 g 5<S-dimethylaminome-thylen-pristinamycin i form af et beige pulver, der smelter nær 195°C.

NMR-spektrum: 20 0,9 (t, 3H : 2Ύ) 1,0 (dd, IH : 5S2) 2.50 (d, IH : 5B ) 3,10 (s, 6H : -N(CH3> ) 3,70 (d, IH : 50 25 * 5.50 (d, IH : 5εχ) 7,40 (s, IH : -CHNiCH^) 7,75 (dd, IH : l’H^

Eksempel 2.

30 Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksem pel 1, men gås ud fra 0,9 g 5<5-methylen-virginiamycin S og 0,52 g 3-dimethylamino-propanthiol. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10, 35 og koncentrering til tørhed af fraktion 13-25 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,3 g 5cf— (3-dimethyl- 20 DK 169258 B1 o amino-propyl)-thiomethyl-virginiamycin S i form af et hvidt pulver, der smelter nær 142°C.

NMR-spektrum: 0,45 (dd, IH : 5&2)

5 1,90 (m, 2H : -SC^CH^H^O

(TH

2,40 (s, 6H : -CH^N^^)

2,60 (m, 4H : -S-OT^CH^-CH^-NO

3,45 (d, IH : 5ε£) 10 4,85 (m, 3H , heraf 5€ ) 5,25 (dd, IH : 5α) 1 7,78 (dd, IH : l'Hg)

Der fås en vandig opløsning med 10% 5<$- (3-dimethyl-amino-propyl)-thiomethyl-virginiamycin S (forbindelse AB) 15 i form af hydrochloridet med: forbindelse AB 0,1 g saltsyre, op til 1 ml

56-Methylen-virginiamycin S kan fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 1 for 5 -methy-20 len-pr is tinamycin 1^, idet der gås ud fra 2 g 5<f-dimethyl-aminomethylen-virginiamycin S og 74 mg natriumcyanoborhy-drid. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 98:2, og koncentrering til tørhed af 25 fraktion 2-5 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C

fås der 1 g 55-methylen-virginiamycin S i form af et beige pulver, der smelter nær 190°C.

0,35 (dd, IH : 582) 2,45 (dd, IH : 58χ) 3,55 (dd, IH : 5e2) 5.25 (dd, IH : 5εχ) 5.25 (m, IH : 5a) 5,30 og'6,15 (2s, 2E : =C^| ) 7,75 (dd, IH : l'Hg)

O

21 DK 169258 B1 5<S-Diraethylaminomethylen-virginiamycin S kan fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 1 for 56-dimethylaminomethylen-pristinamycin IA, idet der gås ud fra 2 g virginiamycin S og 10 ml bis-dimethylamino-5 -tert.butoxy-methan. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 98:2/ og koncentrering til tørhed af fraktion 9-12 under formindsket tryk (2/7 kPa) ved 30°C fås 0,8 g 5<$-dimethylaminomethylen-vir-10 giniamycin S i form af et gult pulver, der smelter nær 175UC. NMR-spektrum: 0,9 (m, 4H : 2γ+ 5β£) 3,05 (s, 6H : =CH-N(CH3)2) 3,65 (d, IH : 5e^) 15 4,85 (d, IH : 5εχ) 5,15 (dd, IH : 5a)

7,10 - 7,40 (m : aromatiske + =CH-N

7,70 (dd, IH : 1'HJ

6 20 Eksempel 3.

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel I, men gås ud fra 6 g 5<S-methylen-pristinamycin 1^ og 4 ml 2-(4-methyl-l-piperazinyl)-ethanthiol. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes 25 en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 97:3, og koncentrering til tørhed af fraktion 8-20 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 2,6 g 5fi-[2-(4--methyl-l-piperazinyl) -ethyl] -thiomethyl-pristinamycin IA i form af hvide krystaller, der smelter ved 216°C.

30 NMR-spektrum: 0,60 (dd, IH : 5B2) 2.27 (s, 3H :^N-CH3)

CH -CH

2,40 - 2,80 (m, 11H : -CH -N^ ”2 ~2XN- + 56..) ^CH CH ' 1 35 -2 -2 5,05 (dd, IH : 5εχ) 5.27 (m, 2H : 5a + 4a) 7,85 (mt, IH x 0,8 : l'Hg 1, isomer) 7,95 (mt, IH x 0,2 : l'Hg 2. isomer)

O

22 DK 169258 B1

Der fås en vandig opløsning med 5% 5£-[2-(4-me-thyl-l-piperazinyl) -ethyl] -thiomethyl-pristinamycin I (forbindelse AC) i form af hydrochloridet med: forbindelse AC 0,1 g 5 0,1N saltsyre 0,96 ml destilleret vand, op til 2 ml 2-(4-Methyl-l-piperazinyl)-ethanthiol kan fremstilles ifølge metoden, der beskrives af D.D. Reynolds et al., J. Org. Chem. 26^, 5125 (1961) .

10

Eksempel 4.

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 2 g 5 <f-methy len-pris tinamycin 1^ og 3 ml 3-(4-methyl-l-piperazinyl)-propanthiol. Efter rens-15 ning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10, og koncentrering til tørhed af fraktion 10-25 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,9 g 5é-[3-(4-methyl-l-piperazinyl)-propyl]-thiomethyl-20 -pristinamycin i form af et hvidt pulver, der smelter nær 156°C.

NMR-spektrum: 0,65 (dd, IH : 5^) 2,30 (s, 3H : ^N-CH3) 25 /¾¾.

2,50 (m, 13H : -CH.N N- +-SCH - + ) nch2ch2^ 2 1 5,27 (m, 2H : 5a + 4a) 7,85 (dd, IH x 0,8 : 11¾ 1. isomer) 7,95 (dd, IH x 0,2 : l'Hg 2. isomer) 30

Der fås en vandig opløsning med 10% 5£-[3-(4-methyl--1-piperazinyl)-propyl]-thiomethyl-pristinamycin 1^ (forbindelse AD) i form af hydrochloridet med: forbindelse AD 0,1 g 35 0,5N saltsyre 0,38 ml destilleret vand, op til 1 ml

O

23 DK 169258 B1 3-(4-Methyl-l-piperazinyl)-propanthiol kan fremstilles som beskrevet nedenfor i eksempel 41.

Eksempel 5.

5 Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksem pel 1, men gås ud fra 4 g 5<S-methylen-pristinamycin IA og 4 ml 1,3-bis-dimethylamino-2-propanthiol. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumen-10 forholdet 95:5, og koncentrering til tørhed af fraktion 20-60 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,59 g 5ί-[1,3-bis-(dimethylamino)-2-propyl]-thiomethyl--pristinamycin i form af et hvidt pulver, der smelter nær 170°C.

15 NMR-spektrum: 0,63 (dd, IH : 5^ 2,40 (s, 6H : -NiCH^) CTT Ν'**" 2,50 (m, 10H : -CH^ <,-2^ + -»(CH^) 20 4,97 (s, IH : 5εχ) 5,30 (m, 2H : 5a + 4a) 7,85 (mt, IH x 0,85 : l’Hg 1. isomer) 7,95 (mt, IH x 0,15 : l'Hg 2. isomer)

Der fås en vandig opløsning med 7,5% 5$-[l,3-bis-25 -(dimethylamino)-2-propyl]-thiomethyl-pristinamycin IA (forbindelse AE) i form af hydrochloridet med: forbindelse AE 0,03 g 0,lN saltsyre 0,3 ml destilleret vand, op til 0,4 ml 30 l,3-Bis-dimethylamino-2-propanthiol kan fremstil les som beskrevet nedenfor i eksempel 39.

Eksempel 6.

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksem-35 pel 1, men 'gås ud fra 3 g 5<£-methylen-pristinamycin IA og 0,97 g l-methyl-4-mercapto-piperidin. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet

O

24 DK 169258 B1 95:5, og koncentrering til tørhed af fraktion 10-16 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,1 g 55-(l-methyl-4-piperidyl)-thiomethyl-pristinamycin 1^ i form af et hvidt pulver, der smelter ved 260°C 5 NMR- spektrum: 0,6 (dd, IH : 53^ CH -- 2 (τη, 4H : -S-/ 2 N-) 10 2,20 (s, 3H :~S—^ \-CH3) 2,35 (m, IH : 5Βχ)

PJJ

2,90 (m, 4H : -S-/ “2^N-> >—CH0/ 15 ”2 5,30 (m, 2H : 5« + 4a) 7,85 (dd, IH : l'Hg)

Der fås en vandig opløsning med 5% 55-(l-methyl-4--piperidyl)-thiomethyl-pristinamycin 1^ (forbindelse AF) 20 form af hydrochloridet med: forbindelse AF 0,03 g 0,1N saltsyre 0,3 ml destilleret vand, op til 0,6 ml l-Methyl-4-mercapto-piperidin kan fremstilles som 25 beskrevet af H. Barrer og R.E. Lyle, J. Org. Chem. 27, 641 (1962).

Eksempel 7.

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 30 1, men gås ud fra 2 g 55-methylen-pristinamycin 1^ og 0,66 g 2-diethylamino-ethanthiol. Efter rensning ved flashchroma-tografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5 og koncentrering til tørhed af fraktion 9-18 under formindsket 35 tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,8 g 55-(2-diethylamino- -ethyl) -thiomethyl-pristinamycin i form af et beige pul- 25 DK 169258 B1

O

ver, der smelter ved 230°C.

NMR-spektrum: 0,65 (dd, IH : 582) 5 2,38 (d, IH : 5^) ςΗ _ 2,3 - 2,8 (m, 8H : -S OLCH, “Z ) cn2- 3,15 (dd, IH : -CHgS-) 3,35 (dd, IH : -CH2S-) 5,01 (dd, IH : 5ε,) 10 ^ 7,81 (dd, IH x 0,9 : l'H^ 1. isomer) 7,90 (dd, IH x 0,1 : l'H^ 2. isomer)

Der fås en vandig opløsning med 5% 55 -(2-diethyl-amino-ethyl)-thiomethyl-pristinamycin I (forbindelse AF^) 15 i form af hydrochloridet med: forbindelse AF^ 30 mg 0/1N saltsyre 0,29 ml destilleret vand, op til 0,6 ml 20 Eksempel 8.

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 4,36 g 5<S-methylen-pristinamycin 1^ og 2,2 g l-diethylamino-2-propanthiol. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes 25 en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 96:4 og koncentrering til tørhed af fraktion 10-25 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1 g 5<S-(l-di- ethylamino-2-propyl)-thiomethyl-pristinamycin I i form o ^ af et beige pulver, der smelter nær 190 C.

30 35 26 DK 169258 B1

O

NMR-spektrum: 0,64 (dd, IH : 5β2) 1 - 1,2 (m, CH3-CH(et -CH2-CH3) 2,37 (d, IH : 5Βχ) CH _ 5 2,3 - 2,7 (m, 6H : -CH9-N^ ”2 ) \ch2- 3,15 (dd, IH : -CH2-S) 3,35 (dd, IH : -CH2-S) 5,02 (dd, IH : 5e.) 10 , 1 7,85 (m, IH x 0,9 : l’H^ 1. isomer) 7,93 (m, IH x 0,1 : l'H^ 2. isomer)

Der fås en vandig opløsning med 4% 5$-(1-diethyl-amino-2-propyl)-thiomethyl-pristinamycin 1^ (forbindelse 15 AF2) *- ^orm hydrochloridet med: forbindelse AF2 30 mg 0,IN saltsyre 0,29 ml destilleret vand, op til 0,75 ml l-Diethylamino-2-ethanthiol kan fremstilles ifølge 20 metoden, der beskrives af R.T. Wragg, J. Chem. Soc. (C), 2087 (1969).

Eksempel 9.

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 25 1, men gås ud fra 3,2 g 5£-methylen-pristinamycin 1^ og 2,8 g N,N-bis-(2-mercapto-ethyl)-N-methylamin. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af methylenchlorid og methanol i volumenforholdet 98:2 og koncentrering til tørhed af fraktion 30 7-20 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1 g 5<Γ-{2- [N- (2-mercapto-ethyl) -N-methylamino] -ethyl}·-thiomethyl-pristinamycin IA i fom af et hvidt pulver, der smelter nær 100°C.

35 27 DK 169258 B1

O

NMR-spektrum: 0,61 (dd, IH : 562) 2,29 (s, 3H : JN-CH-j) 2,38 (d, IH : 5β]_) 5 2,3 - 2,7 (m, 8H : -S CH2CH2 N-CHgCHg SH) 3,15 (dd, IH : -CH2S-) 3,35 (dd, IH : -CH2S-) 5,03 (dd, IH : 5εχ) 7,83 (dd, IH x 0,9 : l'H 1. isomer) 10 ® 7,93 (dd, IH x 0,1 : l'H, 2. isomer) 6

Der fås en vandig opløsning med 1% 5<i-if2-[N-(2-mer-capto-ethyl) -N-methylamino] -ethyl} -thiomethyl-pristinamycin IA (forbindelse AF^) i form af hydrochloridet med 15 forbindelse AFg 20 mg 0,1N saltsyre 0,38 ml destilleret vand, op til 2 ml

Eksempel 10, 20 Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 7,7 g 5Æ-methylen-pristinamycin IA og 9 g l,4-bis-(2-mercapto-ethyl)-piperazin. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af methylenchlorid og methanol i voluraenfor- 25 holdet 95:5 og koncentrering til tørhed af fraktion 12-40 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 4,2 g 5£- {2- [4- (2-mercapto-ethyl) -piperazinyl] -ethy^-thiomethyl--pristinamycin I i form af et gult pulver, der smelter nær 165°C.

30 35

O

28 DK 169258 B1 NMR-spektrum: 0,61 (dd, IH : 562)

2,37 (dd, IH : 5¾) CH CH

2,30 " 2,80 (m, 18H : -S-CH-CI-L-N^ 2 2XN_CH0CH0 SH ) 5 xch2ch2/ 2 2 3,17 (dd, IH : -CH2-S-) 3,33 (dd, IH : -CH2-S-) 5,03 (dd, IH : 5ε1) 7,85 (m, IH x 0,85 : l'H. 1. isomer) 10 ° 7,95 (m, IH x 0,15 : ΓΗό 2. isomer)

Der fås en vandig opløsning med 2% 5£-{2- [4- (2--mercapto-ethyl) -piperazinyl] -ethylj-thiomethyl-pristinamy-cin IA (forbindelse AF^) i form af hydrochloridet med: 15 forbindelse AF^ 20 mg 0,1N saltsyre 0,36 ml destilleret vand, op til 1 ml 1,4-Bis- (2-mercapto-ethyl) -piperazin kan fremstilles ifølge metoden, der beskrives af D.D. Reynolds, M.K.

20 Massad, D.L. Fields og D.L. Johnson, J. Org. Chem. 26, 5111 (1961).

Eksempel 11.

Til en opløsning af 5,5 g 5£-dimethylaminomethylen-25 -pristinamycin 1^ i 60 ml eddikesyre sættes dråbevis 5,3 g 2-dimethylamino-ethylamin således, at temperaturen ikke overskrider 25°C. Den fremkomne opløsning omrøres i 20 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorefter den langsomt hældes i en mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløs-30 ning. Den fremkomne blanding ekstraheres 2 gange med i alt 750 ml methylenchlorid, De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen renses ved flashchromatografi, idet der som eluerings-35 middel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10, og fraktionerne 10-12 koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der 29 DK 169258 B1

O

fås på denne måde 3 g 5δ~ (2-dimethylamino-ethyl) -aminomethylen-pristinamycin Ia i form af et beige pulver, der smelter nær 180°C.

NMR-spektrum: 5 0,90 (mt, 4H : 2γ + 582> 2.25 (mt, 6H : -NiCH^) 2.50 (mt, 3H : - CH + 56^ 3.25 (mt, 2H : -N-CH -) 3.50 (mt, 2H ; 5e2 + 3δχ) 10 4,90 (mt, 1 : 5ε ) ·* WU- mellem 7,15 og 7,4 (m, IH : ) 9,90 (mt, IH (udvekselig D20): -NH-)

Der fås en vandig opløsning m ed 1% 5<f>-(2-dimethyl-15 amino-ethyl) -aminomethylen-pristinamycin IA (forbindelse AG) med: forbindelse AG 0,1 g destilleret vand, op til 10 ml 20 Eksempel 12.

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 11, men gås ud fra 1,84 g 5S-dimethylaminomethylen-pristi-namycin 1^ og 2,8 ml 2-diethylamino-ethylamin. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel 25 anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 96:4 og koncentrering til tørhed af fraktion 9-13 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1 g 55--(2-diethylamino-ethyl)-aminomethylen-pristinamycin 1^ i form af et gult pulver, der smelter nær 150°C.

30 35 DK 169258 B1 30 o NMR-spektrum: 0,9 (mt, 4H : 2γ + 5β2) 1.1 (mt, 6H :-N(CH2-CH3)2) 2,45 (d, IH : 5$,) 5 1 CH - 3.1 - 3,4 (m, 6H : -CH 2 ) 3,50 (mt, 2H : 5ε2 + 36^) 4,90 (m, IH : 5εχ) 9,9 (m, IH (udvekselig): =CH-NH-) 10 ~

Der fås en vandig opløsning med 5% 5<f-(2-diethylami-no-ethyl)-aminomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse AH) i form af hydrochloridet med forbindelse AH 0,1 g 15 0,1N saltsyre 1 ml destilleret vand, op til 2 ml

Eksempel 13.

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksem-20 pel 11, men gås ud fra 2,76 g Si-dimethylaminomethylen--pristinamycin 1^ og 2,22 g N-me thy le thy lendi amin. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som eluerings-middel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5 og koncentrering til tørhed af frak-25 tion 16-20 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,3 g 56- (2-methylamino-ethyl) -aminomethylen-pristina-mycin I i form af et gult pulver, der smelter ved 174°C.

il 30 35 31 DK 169258 B1

O

NMR-spektrum: 0,90 (m, 4H : 5^) 2,50 (m, IH : 50χ) 2,7-3,6 (m, 4H : -NH-CCH^NH-) 5 3,0 (i et massiv, s, 3H :-NHCH3) 7,15 -7,40 (m, IH : =CHNH-) 9,90 (m, IH : =CH-NHCH3)

Der fås en vandig opløsning med 1% 5<S-(2-methylami-10 no-ethyl)-aminomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse AI) i form af hydrochloridet med: forbindelse AI 0,03 g 0,1N saltsyre 0,31 ml destilleret vand, op til 3 ml 15 20 25 30 35

O

32 DK 169258 B1

Eksempel 14

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 11, men gås ud fra 1,84 g 5<£-dimethylaminomethy-5 len-pristinamycin 1^ og 2,5 ml 3-dimethylamino-propyl-amin.

Efter rensning ved f lashchroma tograf i, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10 og koncentrering 10 til tørhed af fraktion 12-15 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,7 g 5£ - (3-dime t hyl amino --propyl)-aminomethylen-pristinamycin Ia i-form af et

Q A

gult pulver, der smelter nær 155°C.

NMR-spektrum: 15 0,80 - 1,05 (mt, 4H : 2γ + 5β2) 1,80 (mt, 2H : -CH2CH2-CH2-) 2,35 (s, 6H x 0,85 : -N(CH2)2 1. isomer) 2.40 (s, 6H x 0,15 : -N(CH2)2 2. isomer) 2.40 - 2,60 (mt, 3H : 5βχ + -CH2-N<) 20 3,30 (mt, 2H : -NH-CH2-) 3,50 (mt, 2H : 3^ + 562) 4.90 (mt, IH : 56^ 9,65 (m, IH x 0,15 : =CH-NH- 2. isomer) 9.90 (m, IH x 0,85 : =CH-NH- 1. isomer) 25

Der fås en vandig opløsning med 6,6% 5£-(3-dime-thylamino-propyl)-aminomethylen-pristinamycin I (forbindelse AJ) i form af hydrochloridet med: forbindelse AJ 0,1 g 30 0,1N saltsyre 0,51 ml destilleret vand, op til 1,5 ml 35 o

Eksempel 15 33 DK 169258 B1

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 11, men gås ud fra 2,76 g 55-dimethylaminomethylen-5 -pristinamycin IA og 3,06 g l-dimethylamino-2-propylamin.

Efter rensning ved f la shchroma tograf i, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 99:1 og koncentrering til tørhed af fraktion 11-22 under formindsket tryk (2,7 kPa) 10 ved 30°C fås der 1,0 g 55- (3-dimethylamino-2-propyl)- -aminomethylen-pristinamycin I i form af et gult pulver,

_ A

der smelter nær 160°C.

NMR- spektrum: 1,05 (d, 3H : -CH-CH ) i 15 2.30 (s, 6H : -CH2-N(CH3)2) 2,45 (d, IH : 5βχ) 2,80 (m, IH : -CHCH3) 3.30 (i et massiv : -NH-CH2-) 20 3,45 (m, 2H : 562 + 3^) 4.90 (m, IH : 56^ 7,15-7,40 (m, IH : =CHNH-) 9.90 (m, IH : CH-NH-) 25 Der fås en vandig opløsning med 1% 55-(3-dimethyl- amino-2-propyl)-aminomethylen-pristinamycin (forbindelse AK) i form af hydrochloridet med: forbindelse AK 20 mg 0,1N saltsyre 0,2 ml 30 destilleret vand, op til 2 ml 35

Eksempel 16 o 34 DK 169258 B1

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 11, men gås ud fra 2,76 g 5<S-dimethy 1 aminornet hy -5 len-pristinamycin 1^ og 1,53 g 2-dimethylamino-propyl-amin.

Efter rensning ved flashchroma tograf i, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5 og koncentrering 10 til tørhed af fraktion 10-14 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,85 g 5S-(2-dimethylamin0--propyl) -aminomethylen-pristinamycin I i form af et orange pulver, der smelter nær 175°C.

NMR-spektrum: 15 0,90 (m, 4H : 2y + 5&2) 1,05 (d, 3H :,>CH-CH3) 2,30 (s, 6H : -CH(CH3)N(CH3)2) 2.45 (d, IH : 5βχ) 2,80 (m, IH : -CHCH3) 20 3,30 (i et massiv, 2H : -NH-CH2-) 3.45 (m, 2H : 562 + 3^) 4.90 (m, IH : 5β1) 7,15-7,40 (m, IH : =CHNH-) 9.90 (m, IH : =CH-NH-) 25 Der fås en vandig opløsning med 10% 5£-(2-dime- thylamino-propyl) -aminomethylen-pristinamycin I (for- Ά.

bindelse AL) i form af hydrochloridet med: forbindelse AL 0,03 g 0,1N saltsyre 0,31 ml 30

Eksempel 17

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 11, men gås ud fra 1,84 g 5<5-dimethylaminoethylen-35 35 DK 169258 B1 o -pristinamycin IA og 3,16 g 2-amino-5-diethylamino-pentan.

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10 og koncentrering 5 til tørhed af fraktion 15-27 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,9 g 5£-(5-diethylamino-2--pentyl)-aminomethylen-pristinamycin I i form af et O ** beige pulver, der smelter nær 160°C.

NMR-Spektrum: 10 1,00 (dd, IH : 5B2) 1,25 (mt, 6H : -N(CH CH ) ) 2,45 (d, IH : 5p ) 2,7-3,0 (m, 6H : ) 15 3,45 (dd, IH : 5£2) 7,30 (under:de aromatiske/ : =CH-NH-) 7,85 (dd, IH : i*h6 10 (m ‘ bred, IH : -NH-CH-) 20

Der fås en vandig opløsning med 1% 5£-(5-di-ethylamino-2-pentyl) -aminomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse AM) i form af hydrochloridet med: forbindelse AM 0,02 g 25 0,1N saltsyre 0,2 ml destilleret vand, op til 2 ml

Eksempel 18 30

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 11, men gås ud fra 1,84 g 5S-dimethylaminomethy-len-pristinamycin I og 2,28 g N- (2-aminoethyl) -pyrro-lidin.

35

O

36 DK 169258 B1

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 98:2 og koncentrering til tørhed af fraktion 15-24 under formindsket tryk (2,7 kPa) 5 ved 30°C fås der 0,95 g 5d-(2-pyrrolidino-ethyl)-amino-methylen-pristinamycin I i form af et gult pulver, der smelter ved 183°C.

NMR-Spektrum: 10 0,90 (mt, 4H : 2γ + 5β ) 2

CH

1,80 (mt, 4H : j) 2,70 (mt, 6H : -CH -Ny) -2 \ CH^ J ' —2 15 3,45 (m, 4H : -NH-CI^- + 5ε£ + 36 ) 4.90 (m, IH : 5εχ) 7,2-7,4 (m : Ar + 1Ή4 + 1Ή5 + =CH-) 9.90 (mt, IH : =CHNHCH2-) 20

Der fås en vandig opløsning med 1% 5i-(2-pyrroli-dino-ethyl)-aminomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse AN) i form af hydrochloridet med: forbindelse AN 0,02 g 25 0,1N saltsyre 0,2 ml destilleret vand, op til 2 ml

Eksempel 19 30

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 11, men gås ud fra 2,7 6 g 5S-dimethylaminomethylen--pristinamycin 1^ og 1,92 g N-(3-aminopropyl) -pyrrolidin.

35 o 37 DK 169258 B1

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5 og koncentrering til tørhed af fraktion 10-15 under formindsket tryk (2,7 kPa) 5 ved 30°C fås der 1,25 g 5<T-(3-pyrrol id ino-propyl)-amino -methylen-pristinamycin IA i form af et gult pulver, der smelter ved 170°C.

NMR-spektrum:

0,95 (n, IH : 58J

10 V*_ch2 1,95 (m, 7H : -N^_+ 3βχ + -C^-C^CH^T C) 2,45 (d bred IH : 561) 2,80 ( i et massiv, 6H ) 15 3,30 (mt, 2H : -NH-CH^) 3,50 (mt, 2H : 3δχ + 5e2> 4.90 (m, IH : 5εχ) 7,15-7,40 (m, IH : =CHNH-) 9.90 (mt, IH : =CH-NH-) 20

Der fås en vandig opløsning med 1% 5<£-(3-pyrro-lidino-propyl)-aminomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse A0) med: forbindelse A0 0,03 g 25 destilleret vand 3 ml

Eksempel 20

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksem-30 pel 11, men gås ud fra 2,76 g 5<£-dimethylaminomethylen--pristinamycin I og 3,85 g N-(2-amino ethyl)-piper id in.

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 99:1 og koncentrering til tør-35 hed af fraktion 13-17 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 38 DK 169258 B1 o 30°C fås der 1,5 g 54"- (2-piperidino-ethyl)-aminomethylen--pristinamycin i form af et gult pulver, der smelter nær 162°C.

NMR- spektrum: 5 0,90 (in, 4H : 2γ +

CH

1,60 (mt, 6H : -N^ ) N—ch2^ 10 Æ-x 2,40 (m, 6H :-H.C-N \ ) “2 sch2—/ 2,7-3,5 (m i et massiv, 2H : -NH-CH2~) 3,45 (mt, 2H : 3«χ + 5ε2> 4.90 (mt, IH : 5ε,) 15 1 7,15-7,40 (m, IH : =CHNH-) 9.90 (mt, IH : =CH-NH-) 20

Der fås en vandig opløsning med 1% 54-(2-piperi-dino-ethyl)-aminomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse AP) i form af hydrochloridet med: forbindelse AP 0,02 g 25 0,1N saltsyre 0,2 ml destilleret vand, op til 2 ml

Eksempel 21 30

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 11, men gås ud fra 1,84 g 54-dimethylaminomethylen--pristinamycin 1^ og 2,6 g N-(2-aminoethyl)-morpholin.

35 o 39 DK 169258 B1

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5 og koncentrering til tørhed af fraktion 21-30 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 5 30°C fås der 0,8 g 5S-(2-morpholino-ethyl)-aminomethylen- -pristinamycin i form af et beige pulver, der smelter nær 172°C.

NMR-spektrum: 10 0,95 (m, IH : 5B2) 2.50 (m, 7H : 5β + -CHJ 0 ) 1 xch2—/ 3,30 (m, 2H : -NH-CH^) 3.50 (m, 2H : 5e_ + 3δ ) 15

CH

3,70 (mt, 4H : θ' vch2_/ 4,90 (tu, IH : 5εχ) 7,2-7,4 (m, IH : =CH-) 20 9,90 (mt, IH : »CH-NH-CH - )

Der fås en vandig opløsning med 1% 5£-(2-morpho-lino-ethyl)-aminomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse 25 AQ) i form af hydrochloridet med: forbindelse AQ 0,02 g 0,1N saltsyre 0,2 ml destilleret vand, op til 2 ml 30

Eksempel 22

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 11, men gås ud fra 2,76 g 5£-dimethylaminomethy-35 len-pristinamycin I og 3,66 g 2-aminoethyl-l-ethyl-pyr-rolidin.

40 DK 169258 B1 o

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 99:1 og koncentrering til tørhed af fraktion 10-14 under formindsket tryk 5 (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,3 g 5£-(l-ethyl-2-pyrro- lidinyl)-methylaminomethylen-pristinamycin i form af et beige pulver, der smelter nær 160°C.

NMR-spektrum: 1,10 (t, 3H : -CH--CH-) 10 * 1,60 (m, 4H : / \ )

II

<52-% 1,95 (m, IH : =CH-NH-) 15 2,8-3,6 (τη, 4H :-CH2N^ + -Cl^NH-) 7,15-7,40 (m, IH : =CHNH-) .

Der fås en vandig opløsning med 1% 5£-(1-ethyl--2-pyrrolidinyl) -methylaminomethylen-pristinamycin I

A

20 (forbindelse AR) i form af hydrochloridet med: forbindelse AR 0,02 g 0,1N saltsyre 0,2 ml destilleret vand, op til 2 ml 25

Eksempel 23

Der gås frem på samme måde som beskrevet i ekT sempel 11, men gås ud fra 2,77 g 5£-dimethylaminomethy-30 len-pr istinamycin IA og 3,4 g 3-amino-1-me thyl-piper id in.

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5 og koncentrering til tørhed af fraktion 7-16 under formindsket tryk (2,7 kPa) 35 4i DK 169258 B1 o ved 30°C fås der 0,8 g 5i-(l-methyl-3-piperidyl)-amino-methylen-pristinamycin i form af et beige pulver, der smelter ved 177°C.

NMR-spektrum: < * 5 0,90 (mt, 4H : 2y + ( y— 1,5-2,10 (mt, 7H : 2^ + 2S2 + 3^ * <CH--CH/ 2 } 2,30 (s, 3H : / ^N~% ) 10 ^' 2,45 (d, IH : 5βχ)

j_N

2,65 (mt, IH : -CK^ )

15 ( I

, .CH -N >-N

2.90 (mt, 4H : 482 + -/ “2 \ eller-<^ CH2 ) --& 3,20 (mt, 7H : -NCH0 i 4 + 3δ„ + 4β. + _/ —j 2 1 \ / —2 Ά~Κ 20 eller \ ) 7,15-7,40 (m, IH : =CHNH-) 7,80 (mt, IH : l'Hg) 9.90 (mt, IH : =CH-NH-) 25 11,60 (s bred, IH : OH)

Der fås en vandig opløsning med 1% 5£-(1-methyl--3-piperidyl)-aminomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse AS) i form af hydrochloridet med: 30 forbindelse AS 0,02 g 0,1N saltsyre 0,2 ml destilleret vand, op til 2 ml 35 o 42 DK 169258 B1 3-Amino-l-methyl-piperidin kan fremstilles ifølge metoden, der beskrives af L.M. Werbel, A. Curry, E.F. Elslager og C. Hess, J. Heterocyclic Chem. 1(), 363 (1973) .

5 Eksempel 24

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 11, men gås ud fra 13,8 g SÆ'-dimethylamino-methylen-pristinamycin og 3,4 g 4-amino-l-methyl-piperi- 10 din.

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 92,5:7,5, og koncentrering til tørhed af fraktion 15-20 under formindsket tryk 15 (2,7 kPa) ved 30°C fås der 4,0 g 5S- (l-methyl-4-piperidyl) - -aminomethylen-pristinamycin i form af et gult pulver, der smelter ved 208°C.

NMR-spektrum: 20 0,40 (m, 4H : 2γ + 2β£) 2,0 (m, 4H : V N- ) xch2^ 25 2,35 (s, 3H : >N-CH3) 2,45 (d, IH : 5Βχ) 2,90 ( V~-2V) 30 3,20 Q. et massiv, IH : -CH^ ^n- ) 3,50 (d, IH : 5εη) 4,85 6. et massiv IH : 5ε^) '6,65 (d, IH : =CHNH-) 35 9,70 (dd, IH x 0,25 : =CH-NH- 1. isomer) 10,03 (dd, IH x 0,85 : =CH-NH- ;2. isomer) 43 DK 169258 B1

O

Der fås en vandig opløsning med 10% 5$-(l-me-thyl-4-piperidyl)-aminomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse AT) i form af hydrochloridet med: forbindelse AT 0,03 g 5 0,1N saltsyre 0,3 ml destilleret vand, op til 0,3 ml 4-Amino-l-methyl-piperidin kan fremstilles ifølge metoden, der beskrives af E.F. Elslager, L.M. Werbel, A. Curry, N. Headen og J. Johnson, J. Med. Chem. 17, 10 99 (1974).

Eksempel 25

Der gås frem på samme måde som beskrevet i ek-15 sempel 11, men gås ud fra 0,8 g 56-dimethylaminomethylen--virginiamycin S og 1,02 g 4-amino-l-methyl-piperidin.

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10 og koncentrering 20 til tørhed af fraktion 3-7 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,3 g 5S-(1-methyl-4-piperi-dyl)-aminomethylen-virginiamycin S i form af et beige pulver, der smelter nær 195°C.

NMR-spektrum: 25 0,9 (m, 4H : 2y + 5B2) 2,30 (s, 3H : ^ yN~C~3 ^

•3Q

2,80 - 3,30 (m, 5H N- ) 3,55 (dd, IH : 5ε2> 4,90 (m, IH : 5εχ) 7,10 - 7,40 (m : aromatiske + =CH-NH-) 35 ” 7,70 (dd, IH : l'H6) 10,1 (m, IH : =0Η-Ϊ,Ή-) 44 DK 169258 B1 o

Der fås en vandig opløsning med 5% 55-(1-methyl--4-piperidyl)-aminomethylen-virginiamycin S (forbindelse AU) i form af hydrochloridet med: forbindelse AU 0,1 g 5 0,1N saltsyre 1,05 ml destilleret vand, op til 2 ml

Eksempel 26 10 Der gås frem på samme måde som beskrevet i ek sempel 11, men gås ud fra 2,76 g 5 5-d ime thy 1 aminome thy len --pristinamycin I og 2,15 g l-(2-aminoethyl)-4-methyl- Ά -piperazin.

Efter rensning ved flashchroma tograf i, idet der 15 som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenf or holdet 95:5 og koncentrering til tørhed af fraktion 10-16 under fomindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,9 g 55-[2-(4-methyl-l-piperazinyl)-ethyl] --aminomethylen-pristinamycin i form af et gult pulver, 20 der smelter ved 150°C.

NMR-spektrum: 1,00 Cm, IH : 5&2) 2.30 (s, 3H :>N-CH3) 25 2,50 (m, 9H : -CH2~ piperazin +. 5^) 2.90 (i et massiv : -CE2-CH2-N^) 3.30 (η, 2H : -NH-CH -) 3,50 (m, 2H : 5ε2 + 3δχ) 4.90 (m, IH : 5εχ) 30 7,15-7,40 (m, IH : =CHNH-) 9.90 (m, IH : *CH-NH-) 35 o 45 DK 169258 B1

Der fås en vandig opløsning med 10% 55-[2-- (4-methyl-l-piperazinyl) -ethyl] -aminomethy len-pr is tin-amycin I (forbindelse AV) i form af hydrochloridet med: 5 forbindelse AV 15 mg 0,1N saltsyre 0,15 ml 1-(2-Aminoethyl)-4-methyl-piperazin kan fremstilles på følgende måde:

Til en opløsning af 10,0 g 2-brom-ethylamin i 10 60 ml absolut ethanol sættes 9,75 g N-methyl-piperazin.

Den fremkomne opløsning omrøres i 16 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorefter ethanolen fjernes under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den olieagtige remanens optages med 50 ml chloroform. Den fremkomne blanding om-15 røres med 20 ml 10N vandig natriumhydroxidopløsning. Den vandige fase ekstraheres 3 gange med i alt 150 ml chloroform. De organiske faser forenes, tørres over natriumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen destilleres under 20 formindsket tryk (2,7 kPa) . Der fås på denne måde 4,5 g 1- (2-aminoethyl) -4-methyl-piperazin i form af en gul olie med et kogepunkt ved 2,7 kPa på 118-119°C.

Eksempel 27 25

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 11, men gås ud fra 4,0 g 55-dimethylaminomethylen--pristinamycin 1^ og 0,55 g histamin.

Efter rensning ved flashchroma tograf i, idet der 30 som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5 og koncentrering til tørhed af fraktion 25-50 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 2,04 g 55-[2-(4-imidazolyl)-ethyl]-ami-nomethylen-pristinamycin IA i form af et gult pulver, der 35 smelter ved 138°C.

NMR-spektrum: 46 DK 169258 B1 o 0,90 (m, 4H : 2γ + 5&z) 2,40 (d bred, ih : 5βχ) 5 2,90 (i et massiv, m, IH : 5ε^) 3.50 (d, 4H : 5ε2 + 3δχ + -NH-CH^-) 4,80 (i et massiv, IH : 5e^) 6.65 (tn, 2H : H,. + ^NH histamin) 7.50 (s, IH, H i 2-stillinq i histamin) 10 mellsr 7,15 og 7,40 (m, IH : =CHNH-) 9.65 (m, IH x 0,15 : =CH-NH- 2. isomer) 9,95 (m, IH x 0,85 : =CH—NH- isomer) 15

Der fås en vandig opløsning med 10% 5£-[2-(4--imidazolyl)-ethyl]-aminomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse AW) i form af hydrochloridet med: forbindelse AW 0,1 g 20 0,1N saltsyre, op til 1 ml

Eksempel 28

Til en opløsning af 1,84 g 5S-dimethylamino-25 methylen-pristinamycin 1^ i 40 ml eddikesyre sættes 2,1 g 2-dimethylamino-ethanthiol. Den fremkomne opløsning omrøres i 20 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorefter den langsomt hældes i en mættet vandig natriumhydrogen-carbonatopløsning- Den fremkomne blanding ekstraheres 3 30 gange med i alt 400 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed tinder formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromato-grafi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding 35 o 47 DK 169258 B1 af chloroform og methanol i volumenforholdet 96:4. Fraktionerne .5 og 6 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fås på denne måde 0,8 g 5δ- (2-dimethylamino-ethyl) -thiomethylen-pri-5 stinamycin i form af et gult pulver, der smelter nær 150°C.

NMR-spektrum: 0,68 (dd, IH : 56 „) 10 2 2,32 (s, 6H x 0,85 : -ayKc^ 1. iSomer) .

2,35 (s, 6H X 0,15 : -CH^CH^ 2. isomer) 2,45 (d, IH : 5βχ) 2,65 (mt, 2H : -SCH -) 3,05 (t, 2H : -CH N^) 3,43 (dd, IH : 5ε£) 5,15 (i et massiv : 5ε^) 7,60 (s bred, IH : =CHS-) 7,83 (mt, IH : l’Hg to isomere) 20

Der fås en vandig opløsning med 1% 5£-(2-dime-thylamino-ethyl)-thiomethylen-pristinamycin IA (forbindelse AX) i form af hydrochloridet med: forbindelse AX 0,1 g 25 0,1N saltsyre 1 ml destilleret vand, op til 10 ml

Eksempel 29 30 Der gås frem på samme måde som beskrevet i ek sempel 28, men gås ud fra 3,68 g 55-dimethylaminomethy-len-pristinamycin IA og 8,5 g 27diethylamino-ethanthiol.

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform 35 og methanol i volumenforholdet 96:4 og koncentrering til 48 DK 169258 B1 o tørhed af fraktion 13-20 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,85 g 56-(2-diethylamino--ethyl)-thiomethylen-pristinamycin IA i form af et beige pulver, der smelter nær 192°C.

5 NMR-spektrum: 0,65 (dd, IH : 5^) 1,05 (t, 6H : -N(CH2CH3)2 2.42 (d, IH : 5&χ) 2,60 (q, 4H : -NiCI^CH^) 3.42 (dd, IH : 5ε£) 5,10 (i et massiv,, IH : 5εχ) 7,58 (s bred, IH : =CH-S-) 7,82 (dd, IH x 0,95 : l'Hg 1. isomer) 15 7,98 (dd, IH X 0,05 : l'Hg 2. isomer)

Der fås en vandig opløsning med 1% 56-(2-diethyl-amino-ethyl)-thiomethylen-pristinamycin (forbindelse AY) i form af hydrochloridet med: 20 forbindelse AY 0,04 g 0,1N saltsyre 0,4 ml destilleret vand, op til 4 ml 25 Eksempel 30

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 28, men gås ud fra 3 g 55-dimethylaminomethylen--pristinamycin 1^ og 0,4 g 3-dimethylamino-propanthiol.

3o Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 92,5:7,5 og koncentrering til tørhed af fraktion 10-17 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,85 g 56-(3-dimethylamino 35

O

49 DK 169258 B1 -propyl)-thiomethylen-pristinamycin I i form af et beige O ** pulver, der smelter nær 170 C.

NMR-spektrum: 5 0,70 (dd, IH : 5^) 1.90 (m, 2H : -S-C^O^C^N^) 2,20 (s, 6H : -NiCH^) 2,40 (d, IH : 5^) 2.90 Cm, 2H : -CH^N^) 10 3,45 (dd, IH : 5e2> 7,65 (s bred, IH : =CH-S-)

Der fås en vandig opløsning med 1% 55-(3-dimethyl-15 amino-propyl)-thiomethylen-pristinamycin (forbindelse AZ) i form af hydrochloridet med: forbindelse AZ 0,03 g 0,1N saltsyre 0,3 ml destilleret vand, op til 3 ml 20

Eksempel 31

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 28, men gås ud fra 1,8 g 55-dimethylaminomethylen-25 -virginiamycin S og 0,48 g 3-dimethylamino-propanthiol.

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 45:5 og koncentrering til tørhed af fraktion 5-14 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30 30°C fås der 0,7 g 55-(3-dimethylamino-propyl)-thiomethy- len-virginiamycin S i form af et beige pulver, der smelter nær 140°C.

35 NMR- spektrum: so DK 169258 B1 o 0,50 (dd, IH : 5B2) 2 (m, 2H : -SCH -CHg-CH^ 5 2,35 (s, 6H : -SiCH^lKCHg)^ 2.60 (t, 2H : -SCH^CH^-Nζ) 3 (t, 2H : -SCH2CH2CH2N^) 3,35 (dd, IH : 5ε2) 4,90 (dd, IH : 5^) 10 5,20 (m, IH : 5a) 7.60 (s bred/ IH : =CH-S-) 7,80 (dd, IH : l'Hg) 15 Der fås en vandig opløsning med 10% 5£-(3-di- methylamino-propyl) -thiomethylen-virginiamycin S (forbindelse AAA) i form af hydrochloridet med: forbindelse AAA 0,1 g 0,2N saltsyre 0,52 ml 20 destilleret vand, op til 1 ml

Eksempel 32

Der gås frem på samme måde som beskrevet i ek-25 sempel 28, men gås ud fra 4 g 5<S~dimethylaminomethylen--pristinamycin 1^ og 0,7 g 3-dimethylamino-2-methyl-pro-panthiol.

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform 30 og methanol i volumenforholdet 94:6 og koncentrering til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,96 g 5S-(3-dimethylamino-2-methyl-propyl)-thio-methylen-pristinamycin I i form af et beige pulver, der Λ Λ smelter ved 234°C.

35 NMR-spektrum: si DK 169258 B1 o 0,65 (dd, IH : 56 ) 1,05 (d, 3H i -CHCH3) 5 2,25 (s, 6H : -N(CH3)2> 2,40 (d, IH : 5βχ) 3,15 og 2,90 (AEX-system, 2H :-CH2N^ ) 3,45 (d bred, 2H : 5e) 7,75 (dd, IH x 0,80 rl'fig 1. iscmer) 7,95 (dd, IH x 0,20 il'Hg 2. isaner)

Der fås en vandig opløsning med 1% 5S-(3-dimethyl-

amino-2-methyl-propyl)-thiomethylen-pristinamycin I

15 ** (forbindelse AAB) i form af hydrochloridet med: forbindelse AAB 0,03 g 0,1N saltsyre 0,3 ml destilleret vand, op til 3 ml 20 3-Dimethylamino-2-methyl-propanthiol kan fremstilles på følgende måde:

Til en opløsning af 5,33 g N,N-dimethyl-3-acetyl-thio-2-methyl-propylamin i 50 ml vandfri methanol sættes 0,026 g natrium. Den fremkomne blanding opvarmes til til- 25 bagesvaling i 7 timer, hvorefter methanolen fjernes under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 50°C. Remanensen destilleres under formindsket tryk (2,7 kPa). Der fås på denne måde 0,9 g 3-dimethylamino-2-methyl-propanthiol i form af en gul olie, der destillerer ved 56°C ved 2,7 kPa.

30 N,N-Dimethyl-3-acetylthio-2-methyl-propylamin kan fremstilles på følgende måde:

Til en opløsning af 29,5 g N,N-dimethyl-l-chlor- -2-methyl-propylamin i 120 ml isopropanol sættes 15,7 ml thioleddikesyre. Den fremkomne blanding opvarmes til til-35 52 DK 169258 B1 o bagesvaling i 48 timer, hvorefter isopropanolen fjernes under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 60°C. Den fremkomne remanens behandles med 100 ml mættet vandig natriumhy-drogencarbonatopløsning, og den vandige fase ekstraheres 5 3 gange med i alt 600 ml ethyl ether. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed. Den fremkomne remanens renses ved flashchroma tograf i, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 10 90:10. Fraktionerne 6-10 forenes og koncentreres til tør hed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås på denne måde 5,57 g N,N-dimethyl-3-acetylthio-2-methyl--propylamin i form af en rød olie.

N,N-Dimethyl-l-chlor-2-methyl-propylamin kan frem-15 stilles ifølge metoden, der beskrives af J.P. Bourquin et al., Helv. Chim. Acta 41, 1072 (1958).

Eksempel 33 20 Der gås frem på samme måde som beskrevet i ek sempel 28, men gås ud fra 4 g 56-dimethylaminomethylen--pristinamycin 1^ og 1,14 g 2-dimethylamino-2-methyl--propanthiol.

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der 25 som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 92:8 og koncentrering til tørhed af fraktion 12-30 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,4 g 5$-(2-dimethylamino--2-methyl-propyl)-thiomethylen-pristinamycin IA i form 30 af et beige pulver, der smelter nær 200°C.

35

O

53 DK 169258 B1 NMR-spektrum: 0,55 (dd, Ih x 0,20 : 5$2 2. isomer) 0,68 (dd, IH x 0,80 : 5^ 1· isomer) 5 1,15 (s, 6H : -CCCH^-) 2,30 (s, 6H x 0,80: -N(CH3)2 1. isomer) 2,42 (s, 6Hx 0,20: -N(CH3)2 2. isomer) 2,40 (d, IH : 58^ 2.80 (i et massiv : -S-CH.,-) 10 3,42 (dd, IH : 5ε£) 7,55 (s bred, ih : =CH-S) 7.80 (dd, IH x 0,80: l'Hg 1. isomer) 7,98 (dd, IH x 0,20: l'Hg 2. isomer) 15

Der fås en vandig opløsning med 1% 5£-(2-dime-thylamino-2-methyl-propyl) -thiomethylen-pristinamycin IA (forbindelse AAC) i form af hydrochloridet med: 20 forbindelse AAC 0,03 mg 0,1N saltsyre 0,3 ml destilleret vand, op til 3 ml 2-Dimethylamino-2-methyl-propanthiol kan frem-25 stilles ifølge metoden, der beskrives af H.R. Snyder, J.M. Stewart og J.B. Ziegler, J. Am. Chem. Soc. 69, 2672 (1947).

Eksempel 34 30

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 28, men gås ud fra 4 g 5<£-dimethylaminomethylen--pristinamycin IA og 1,1 g 2-(l-pyrrolidinyl)-ethanthiol.

35 54 DK 169258 B1 o

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 96:4 og koncentrering til tørhed af fraktion 9-15 under formindsket tryk 5 (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,3 g 55-[2-(1-pyrrolidi- nyl)-ethyl]-thiomethylen-pristinamycin i form af et beige pulver, der smelter nær 180°C.

NMR-spektrum: 0,65 (dd, IH : 58„) 10 2

.-CH

1.85 (π, 4H : -N J 2 ) \—ch2 2.45 (d, IH : 58.) .CHl 2,75 og 2,90 (m, 8H : -CH -N z og -SCH -) 15 ^ γίτ —J ""2 3.45 (dd, IH : 5¾) -2 7,60 (s bred, IH : =CH-S-) 7.85 (dd, IH : l'Hg) 20 Der fås en vandig opløsning med 1% 55-[2-(1-

-pyrrolidinyl) -ethyl] -thiomethylen-pristinamycin I

Ά.

(forbindelse AAD) i form af hydrochloridet med: forbindelse AAD 0,03 g 0,1N saltsyre 0,3 ml 25 destilleret vand, op til 3 ml 2-(1-Pyrrolidinyl)-ethanthiol kan fremstilles ifølge metoden, der beskrives af J.W. Haeffele og R.W.

Broge, Proc. Sci. Toilet Goods Assoc. 32^, 52 (1959), 30 Chem. Abstr. 54, 17234e (1960).

35 o 55 DK 169258 B1

Eksempel 35

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 28, men gås ud fra 4 g 55-dimethylaminomethylen-5 -pristinamycin 1A og 1,74 g 2-(i-methyl-2-pyrrolidinyl)--ethanthiol.

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 92:8 og koncentrering til 10 tørhed af fraktion 12-22 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,33 g 5i-[2-(l-methyl-2-pyrro-lidinyl)-ethyl]-thiomethylen-pristinamycin i form af et beige pulver, der smelter nær 215°C.

NMR-spektrum: 15 0,65 (dd, IH : 56 ) z ch2-ch2 1,4-2,3 (m, 6H : _CH J 1 5 -2 2.40 (d, IH : 56χ) 20 2,48 (s, 3H On-CH3 pyrrolidiij 3.40 (dd, IH : 5ε ) 7,50 (s bred, ih : =CH-) 7,80 (dd, IH X 0,85: l'H6 1. isomer) 8,00 (dd, IH X 0,15: l'H6 2. isomer) 25

Der fås en vandig opløsning med 0,6% 5i-[2-- (l-methyl-2-pyrrolidinyl) -ethyl] -thiomethylen-pristin-amycin 1^ (forbindelse AAE) i form af hydrochloridet med: 30 forbindelse AAE 0,03 g 0,1N saltsyre 0,3 ml destilleret vand, op til 5 ml l-Methyl-2-(2-pyrrolidinyl)-ethanthiol kan frem-35 stilles på samme måde som beskrevet i eksempel 32 for 56 DK 169258 B1

O

fremstillingen af 3-dimethylamino-2-methyl-propanthiol, idet der gås ud fra 15,7 g 2- (2-acetylthio-ethyl) -1--methyl-pyrrolidin og 0,07 g natrium. Der fås på denne måde 12,2 g produkt i form af en rød olie.

5 2-(2-Acetylthio-ethyl)-1-methyl-pyrrolidin kan fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 32 for fremstillingen af N,N-dimethyl-3-acetylthio-2-me-thyl-propylamin, idet der gås ud fra 12,7 g 2-(2-chlor-ethyl)-l-methyl-pyrrolidin og 6,8 ml thioleddikesyre.

10 Der fås på denne måde 15,7 g produkt i form af en rød olie.

Eksempel 36 15 Der gås frem på samme måde som beskrevet i ek sempel 28, men gås ud fra 3,0 g 5d"-dimethylaminomethy-len-pristinamycin 1^ og 0,48 g 4-mercapto-l-methyl--piperidin.

Efter rensning ved flashchromatografi, idet 20 der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10 og koncentrering til tørhed af fraktion 15-19 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,2 g 5£-(l-methyl-4-pipe-ridyl)-thiomethylen-pristinamycin I i form af et gult O ** 25 pulver, der smelter nær 170°C.

30 35 NMR-spektrum: 57 DK 169258 B1 o 0,68 (dd, IH : 5S2) 5 2,0-2,2 (m, 4H : -CH 2 N- ) 2,30 (s, 3H :>N-CH3) 2,45 (d, IH : 56χ) 2.85 (m, 4H : -N 2 ) 10 nch2-/ 3,05 (mt, IH : -S-CH- ) 3,40 (dd, IH : 5ε2) 5,15 (d, IH : 5£l) 7,67 (s bred, ih : =CH-s-) 7.85 (dd, IH x 0,85 : 1'Hg 1. isomer) 8,0 (dd, IH x 0,15 : l’Hg 2. isomer) 20

Der fås en vandig opløsning med 1% 5<£-(l-me-thyl-4-piperidyl)-thiomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse AAF) i form af hydrochloridet med: forbindelse AAF 0,05 g 25 0,1N saltsyre 0,5 ml destilleret vand, op til 5 ml 4-Mercapto-l-methyl-piperidin kan fremstilles ifølge metoden, der beskrives af H. Barrer og R.E. Lyle, 30 j. org. Chem. 27, 641 (1962).

Eksempel 37

Der gås frem på samme måde som beskrevet i ek-35 sempel 28, men gås ud fra 4 g 5i-dimethylaminomethylen- 58 DK 169258 Bl o -pristinamycin 1^ og 0,8 g l-ethyl-3-mercapto-piperidin.

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 92:8 og koncentrering til 5 tørhed af fraktion 6-9 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,1 g 5£-(1-ethyl-3-piperidyl)-thio-methylen-pristinamycin 1^, der smelter nær 175°C. NMR-spektrum: 10 0,70 (s bred, IH : 5^) 1,20 Ct, 3H : -CH2CH3) 2,45 (d bred, IH : 58^ /CH—i 2,90 (m, 6H : -CH_N \ ) 1« >2-/ 7,50 (s bred, IH : =CH-S-) 7,80 (dd, IH x 0,80: 11¾ 1. isomer) 7,95 (dd, IH x 0,20: l'Hg 2. isomer) 20

Der fås en vandig opløsning med 1% 5£-(1-ethyl--3-piperidyl)-thiomethylen-pristinamycin IA (forbindelse AAG) i form af hydrochloridet med: forbindelse AAG 0,03 g 25 0,1N saltsyre 0,3 ml destilleret vand, op til 3 ml l-Ethyl-3-mercapto-piperidin kan fremstilles ifølge metoden, der beskrives af J.H. Biel et al., 30 J. Am. Chem. Soc. 77, 2250 (1955).

Eksempel 38

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 28, men gås ud fra 3,0 g 55-dimethylaminomethy-35 len-pristinamycin 1^ og 0,55 g N-(2-mercaptoethyl)- -N,N',Ν'-trimethylethylendiamin.

59 DK 169258 B1 o

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10 og koncentrering til tørhed af fraktion 17-24 under formindsket 5 tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,0 g 5é‘-[2-(2-dime- thylamino-ethyl) -methylamino-ethyl] -thiomethylen-pristin-amycin IA i form af et gult pulver, der smelter nær 160°C.

NMR-spektrum: 10 0,68 (dd, IH : 5P£) 2,30 (s, 3H : -NCHj i -3 2,40 (d, IH : 5β ) 2,4-3,1 (m, 8H : -SCCH^N-CCH^N^) 15 3,40 (dd, IH : 5ε2> 5,10 (i et massiv, IH : 5e^) 7,58 (s bred, IH : =CH-S-) 7,80 (dd, IH : 1Ή,)

O

20

Der fås en vandig opløsning med 1% 5ί-[2-(2--dimethylamino-ethyl) -methylamino-ethyl] -thiomethylen--pristinamycin 1^ (forbindelse AAH) med: forbindelse AAH 0,03 g 25 destilleret vand, op til 3 ml N- (2-Mercaptoethyl)-N,N",Ν'-trimethylethylen-diamin kan fremstilles på følgende måde: 5,0 g Ethyl-2-mercaptoethylcarbonat sættes til 30 en opløsning af 10,2 g N,N',Ν'-trimethylethylendiamin i 40 ml toluen opvarmet til tilbagesvaling. Efter 5 timers tilbagesvaling fjernes toluenet under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 50°C, og remanensen destilleres ved dette tryk. Der fås N-(2-mercaptoethyl)-N,N',Ν'-tri- 35 60 DK 169258 B1 o methylethylendiamin i form af en gul væske, der destillér er ved 105°C ved 2,7 kPa;

Ethyl-2-mercaptoethyl-carbonat kan fremstilles ifølge metoden, der beskrives af D.D. Reynolds, D.L.

5 Fields og D.L. Johnson, J. Org. Chem. 26, 5125 (1961) .

Eksempel 39

Der gås frem på samme måde som beskrevet i ek-10 sempel 28, men gås ud fra 4 g 5£-dimethylaminomethylen--pristinamycin 1^ og 2 g 1,3-bis- (dimethylamino) -2--propanthiol.

Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloro-15 form og methanol i volumenforholdet 92:8 og koncentrering til tørhed af fraktion 32-56 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,6 g 5S-[1,3-bis-(dimethylamino ) -2-propyl] -thiomethylen-pristinamycin IA i form af et beige pulver, der smelter nær 190°C.

20 NMR- spektrum: 0,55 (dd, IH x 0,80 : 582 2. isomer) 0,67 (dd, IH x 0,20 : 5&2 1. isomer) 2,30 (m, 6H : -NiCH^)

25 2,8-3,2 (m, 4H : -S-CH(CH2N

7,62 (m, IH : =CH-S~) 7,80 (dd, IH x 0,80 : l'Hg 1. isomer) 7,98 (dd, IH x 0,20 : l'Hg 2. isomer) 30 35

O

61 DK 169258 B1

Der fås en vandig opløsning med 1% 5d-[l,3-bis-- (dimethylamino) -2-propyl] -thiomethylen-pristinamycin IA (forbindelse AAI) i form af hydrochloridet med: forbindelse AAI 0,03 g 5 0,IN saltsyre 0,3 ml destilleret vand, op til 3 ml 1,3-Bis- (dimethylamino) -2-propanthiol kan fremstilles ifølge metoden, der beskrives af J.M. Stewart, 10 J. Org. Chem. 29, 1655 (1964).

Eksempel 40

Der gås frem på samme måde som beskrevet i ek-15 sempel 28, men gås ud fra 3,0 g 5<f-dimethylaminomethy-len-pristinamycin 1^ og 0,58 g l-(2-mercaptoethyl)--4-methyl-piperazin.

Efter rensning ved flashchroma tograf i, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloro-20 form og methanol i volumenforholdet 87,5:12,5 og koncentrering til tørhed af fraktion 16-30 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,6 g 5«f-[2-(4--methyl-1-piper azinyl) -ethyl] -thiomethylen-pristinamycin 1^ i form af et beige pulver, der smelter nær 25 170°C.

NMR-spektrum: 0,56 (dd, IH x 0,20: 58^ 1.isomer) 0,68 (dd, IH x 0,80: 58^ 2.isomer) 30 2,40 (s, 3E :)NCH3) 2,5-3 (m, 12H : -SiCH^N^ + alle -CH,,- i piperazin) 3,42 (dd, IH : 5ε£) 5,12 (d bred, 5ε^) 7,60 (s bred,IH : =CHS-) 35 7,80 (dd, IH : l'Hg, blanding af 2 isomere) o 62 DK 169258 B1

Der fås en vandig opløsning med 1% 5S-[2-- (4-methyl-l-piperazinyl) -ethyl] -thiomethylen-pristin-amycin I& (forbindelse AAJ) i form af hydrochloridet med: 5 forbindelse AAJ 0,05 g 0,1N saltsyre 0,5 ml destilleret vand, op til 5 ml 10 1-(2-Mercaptoethyl)-4-methyl-piperazin kan frem stilles ifølge metoden, der beskrives af D.D. Reynolds et al., J. Org. Chem. 26, 5125 (1961).

Eksempel 41 15

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 28, men gås ud fra 4,0 g 5i-dimethylaminomethy-len-pristinamycin IA og 1,5 g 1-(3-mercaptopropyl)-4--methyl-piperazin.

20 Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5 og koncentrering til tørhed af fraktion 24-41 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 2,06 g 5S-(3-(4-methyl-l-25 -piperazinyl)-propyl]-thiomethylen-pristinamycin IA i form af et beige pulver, der smelter nær 190°C.

NMR-spektrum: 0,68 (dd, IH : 5^) 1,90 (mt, 2H : -CH -CH CHÆ?) 30 2 -2 2 x 2,40 (s, 3H : ^NCH ) Ærv 2,3 - 2,8 (m, 8H : -S-CH - + -CH--N A N- ) 2 *· / 3,45 (m, IH : 5ε2) ”2 7,64 (s bred, IH x 0,80: =CH-S- 1. isomer) 35 7,70 (s bred, ih x 0,20: =CH-S- 2. isomer) 7,80 (dd, IH x 0,80: 1Ή, 1. isomer)

O

7,98 (dd, IH x 0,20: l'Hg 2. isomer)

O

63 DK 169258 B1

Der fås en vandig opløsning med 10% 5£-[3-- (4-methyl-l-piperazinyl) -propyl] -thiomethylen-pristin-amycin 1^ (forbindelse AAK) i form af hydrochloridet med: 5 forbindelse AAK 0,05 g 0, IN saltsyre 0,5 ml 1- (3-Mercaptopropyl) -4-methyl-piperazin kan fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 32 10 for fremstillingen af 3-dimethylamino-2-methyl-propan-thiol, idet der gås ud fra 109 g 1-(3-acetylthio-pro-pyl) -4-methyl-piperazin og 0,46 g natrium. Der fås 64,8 g 1-(3-mercaptopropyl)-4-methyl-piperazin i form af en gul olie, der destillerer ved 133°C ved 0,13 kPa.

15 1- (3-Acetylthio-propyl) -4-methyl-piperazin kan fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 32 for fremstillingen af N,N-dimethyl-3-acetylthio-2--methyl-propylamin, idet der gås ud fra 138 g l-(3--chlorpropyl)-4-methyl-piperazin og 68,5 g thioleddike-20 syre. Der fås på denne måde 109 g 1-(3-acetylthio-pro-pyl)-4-methyl-piperazin i form af en gul olie, der destillerer nær 160°C ved 0,13 kPa.

Eksempel 42 25

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 28, men gås ud fra 4,0 g 5$-dimethylamino- methylen-pristinamycin 1^ og 1,3 g 3-mercapto-2-methyl--propylammoniumiodid.

30 Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 80:20 og koncentrering til tørhed af fraktion 12-22 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,05 g 5£-(2-methyl-3-35 64 DK 169258 B1 o -trimethylammonio-propyl) -thiomethylen-pristinamycin I -iodid i form af et okkerfarvet pulver, der smelter

A

nær 150°C.

NMR-spektrum: 5 1,05 - 1,35 (m, 8H : 1γ + 3γ2 + 36 + -CH-CH3) 2,40 (m, 2H : 5^ +-CH-CH ) 2,90 (mt, 3H : 4β2+ -S-CH -) 3,20 (mt, 7H : 4NCH3+ 4βχ + 3δχ+ -001(CH^) 10 3,40 (mt, 9H : -?(CH ) ) «>

Der fås en vandig opløsning med 1% 5£-(2-me-thyl-3-trimethylammonio-propyl) -thiomethylen-pr istinamy-15 cin I^-iodid (forbindelse AAL) i form af hydrochloridet med: forbindelse AAL 0,02 g 0,1N saltsyre 0,2 ml destilleret vand, op til 2 ml 20 3-Mercapto-2-methyl-propylammoniumiodid kan fremstilles på følgende måde: 0,024 g natriummethylat sættes til en opløsning af 3,6 g 3-acetylthio-2-methyl-propylammoniumiodid i 25 18 ml methanol ved en temperatur nær 20°C. Den fremkomne blanding opvarmes til tilbagesvaling i 1 time, hvorefter den henstilles ved omgivelsestemperatur i 16 timer. Me-thanolen fjernes under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 50°C. Remanensen omrøres i 1 time med 35 ml iso propanol, 30 og den hvide suspension filtreres og tørres. Der fås på denne måde 3,1 g 3-mercapto-2-methyl-propylammoniumiodid i form af et beige pulver, der smelter ved 120°C.

3 -Acety 1 thio-2-methy 1 -propy 1 ammoniumiodid kan fremstilles på følgende måde: 35 65 DK 169258 B1 o 1,4 ml methyliodid sættes til en opløsning af 3,5 g N,N-dimethyl-3-acetylthio-2-methyl-propylamin i 35 ml acetonitril. Efter 18 timers omrøring ved en temperatur nær 20°C frafiltreres bundfaldet og tørres. Der 5 fås på denne måde 3,8 g 3-acetylthio-2-methyl-propyl-ammoniumiodid i form af et hvidt pulver, der smelter ved 181°C.

Eksempel 43 10

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 28, men gås ud fra 1,84 g 5S-dimethylaminome-thylen-pristinamycin 1^ og 3,28 g 2-mercapto-ethansul-fonsyre-natriumsalt. Efter rensning ved flashchromato-15 grafi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blan ding af methylenchlorid og methanol i volumenforholdet 90:10 og koncentrering til tørhed af fraktion 6-14 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,8 g 5&-(2-hydroxysulfonyl-ethyl)-thiomethylen-pristinamy-20 cin IA i form af et gult pulver, der smelter ved en temperatur over 280°C.

IR-Spektret indeholder de karakteristiske bånd for pristinamyciner: 1745, 1680, 1650, 1525, 815, 740 og 705 cm ^ plus de karakteristiske bånd for gruppen 25 “S03H ( 1200 cm ^ (bredt) og 1050 cm .

Der fås en vandig opløsning med 5% 5ί-(2-hydroxysulfonyl-ethyl -thiomethylen-pristinamycin iA (forbindelse AAM) med forbindelse AAM 0,1 g 30 destilleret vand, op til 2 ml 35 66 DK 169258 B1

O

Eksempel 44

Til en opløsning af 0,87 g l-(2-mercapto-pro-pyl)-4-methyl-piperazin i 50 ml ethanol tilsat 0,34 g 5 natriumethylat sættes en opløsning af 5,2 g 5&-(4-me-thyl-phenyl) -sulfonyloxymethylen-pristinamycin 1^ i 50 ml methylenchlorid. Reaktionsblandingen omrøres i 16 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorefter den fortyndes med 500 ml methylenchlorid og 100 ml destille-10 ret vand. Efter omrøring ekstraheres den vandige fase 2 gange med i alt 50 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen renses ved flashchro-15 matografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 97,5:2,5. Fraktionerne 33-80 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C.

Der fås på denne måde 1,25 g 5<£-[3-(4-methyl-l-pipe-20 razinyl)-2-propyl]-thiomethylen-pristinamycin Ia i form af et beige pulver, der smelter nær 195°C.

NMR-spektrum: 0,70 (dd, IH : 53 ) 25 2 1,25 (d, 3H : -OT-CH ) 2,30 (s, 3H : ^N-CI^) 2,50 (m, 10H: -CH -N Z Z N-CH, ) xch2ch2^ 30 3,40 (dd, IH : 5^2) 7,85 (dd bred, 1Η : l'Hg) 35 67 DK 169258 B1

O

Der fås en vandig opløsning med 10% 5£-[3-- (4-methyl- 1-piperazinyl) -2-propyl] -thiomethylen--pristinamycin IA (forbindelse AAN) i form af hy-drochloridet med: 5 forbindelse AAN 0,03 g 0,1N saltsyre 0,3 ml 1-(2-Mercapto-propyl)-4-methyl-piperazin fremstilles ved opvarmning til 100°C i 16 timer af en blan-10 ding af 19 ml propylensulfid og 29 ml N-methylpiperazin.

Der fås på denne måde 32 g af en farveløs olie, der de-stillerer ved 105°C under et tryk på 1,3 kPa.

5å-(4-Methyl-phenyl)-sulfonyloxymethylen-pristin-amycin kan fremstilles på følgende måde: 15 Til en opløsning af 2,7 g 5$-hydroxymethylen- -pristinamycin 1^ i 30 ml methylenchlorid sættes ved en temperatur nær -30°C 0,42 ml triethylamin og derefter 0,57 g p-toluensulfonsyrechlorid. Reaktionsblandingen omrøres derefter i 2 timer ved en temperatur nær 20°C, 20 hvorpå den koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af methylenchlorid og methanol i volumenforholdet 96:4. Efter koncentrering til tørhed af 25 fraktion 4-6 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 2,2 g 5£-(4-methyl-phenyl)-sulfonyloxymethylen--pristinamycin i form af et hvidt pulver, der smelter nær 265°C.

30 35 NMR-spektrum: 68 DK 169258 B1

O

0,50 (dd, IH : 5^) 5 2,35 (s, 3H : -S02~<^ ^>“CS3 ) 3.30 (dd, IH : 5ε2) 5,25 (d, IH : 5a) 5.30 (dd, IH : 5εχ) 10 7,35 - 7,90 (:AB-system + m, 8H : 4<5+ 4ε + Η Η 7,85 (dd, IH : l'Hg) Sø 15 1 35 $-Hydroxymethylen-pr i s t inamy c in kan frem- 20 stilles på følgende måde:

Til 420 ml 0,1N saltsyre sættes under omrøring 10,6 g 5£-dimethylaminomethylen-pristinamycin 1^. Den fremkomne opløsning omrøres i 3 timer ved en temperatur nær 20°C. Der tilsættes derefter dråbevis 30 ml mættet 25 vandig natriumhydrogencarbonatopløsning, således at der fås en pH-værdi nær 4. Det udfældede produkt fraskilles ved filtrering og vaskes 3 gange med i alt 30 ml destilleret vand. Efter tørring under formindsket tryk (2,7 kPa) ved en temperatur nær 20°C fås 9,5 g 5£-hy-30 droxymethylen-pristinamycin IA i form af et beige pulver. Dette produkt har tilstrækkelig kvalitet til at kunne anvendes som det er i de efterfølgende trin. Det kan imidlertid renses på følgende måde: 69 DK 169258 B1

O

9,5 g råt 5£-hydroxymethylen-pristinamycin 1^ opløses i 50 ml ethylacetat. Den fremkomne opløsning hældes på 100 g siliciumdioxid i en søjle med en diameter på 2,8 cm. Der elueres først med 400 ml ethyl-5 acetat, og eluatet bortkastes. Der elueres derefter med 1600 ml ethylacetat, og eluatet koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås på denne måde 6,3 g 5£-hydroxymethylen-pristinamy-cin 1^ i form af hvide krystaller med smp. 220°C.

10 NMR-spektrum: 0,69 (dd, IH : 50 ) 2,43 (d, IH : 5^) 3,40 (d, IH : 5ε_) 15 2 4,0- 4,2 (m, 3H : 4α + 5ε^ + 5α) 8,15 (s, IH : =CH-0H) 11,63 (s bred, IH : =CH-0H) 20

Eksempel 45

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 44, men gås ud fra 5,2 g 5£-(4-methylphenyl) - 25 -sulfonyloxymethylen-pristinamycin 1^, 0,6 g 1-dime- thylamino-2-propanthiol og 0,34 g natriumethylat. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som eluerings-middel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5, og koncentrering til tørhed 30 af fraktion 16-38 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1 g 5£-(3-dimethylamino-2-propyl)--thiomethylen-pristinamycin I i form af et gult pulver, der smelter ved 172°C.

35 το DK 169258 B1 o NMR-spektrum: 0,65 (dd, IH : 5β2) 1,10 (d, 3H : -CH-CH3) 5 2,30 (s, 6H :-N(CH3)2) 7,60 (s bred, IH : =CH-S-) 7,85 (dd, IH : I'Hg) 10

Der fås en vandig opløsning med 5% 5£-(3-dime-thylamino-2-propyl) -thiomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse AAO) i form af hydrochloridet med: forbindelse AAO 0,03 g 15 0,1N saltsyre 0,3 ml destilleret vand, op til 0,6 ml l-Dimethylamino-2-propanthiol kan fremstilles ifølge metoden, der beskrives af S.D. Turk et al., J.

20 Org. Chem. 29, 974 (1964).

Eksempel 46

Der gås frem på samme måde som beskrevet i ek-25 sempel 44, men gås ud fra 6,3 g 5&-(4-methylphenyl)-sul- fonyloxymethylen-pristinamycin 1^, 1,05 g 5-diethyl-amino-2-pentanthiol og 0,408 g natriumethylat. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som eluerings-middel anvendes en blanding af chloroform og methanol 30 i volumenforholdet 97,5:2,5, og koncentrering til tørhed af fraktion 47-65 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,32 g 5£-(5-diethylamino-2-pentyl) --thiomethylen-pristinamycin i form af et beige pulver, der smelter nær 185°C.

35 NMR-spektrum: 7i DK 169258 B1 o 0,65 (dd, IH : 5^) 1,20 (t, 6H : -NCCH2CH3)2)

r 1,40 (d, 3H : -CH-CHJ

5 i “3

1,70 (s bred, 4H : -CH(CH2)2-CH2N

2.65 (q, 4H : -NCCH^CH^) 3,50 (dd, IH : 5ε2) 7.65 (s bred/lE : =CH-S~) 1Q 7,85 (dd, IH : 1'%)

Der fås en vandig opløsning med 10% 5&-(5-di-ethylamino-2-pentyl) -thiomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse AAP) i form af hydrochloridet med: 15 forbindelse AAP 0,05 g 0,IN saltsyre 0,5 ml 5-Diethylamino-2-pentanthiol kan fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 32 for fremstillingen af 3-dimethylamino-2-methyl-propanthiol, idet 20 der gås ud fra 4,0 g N,N-diethyl-4-acetylthio-l-pen-tanamin og 0,046 g natrium. Efter rensning ved flash-chromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af ethylacetat og methanol i volumenforholdet 70:30, og koncentrering til tørhed af fraktion 25 16-24 fås der 2,0 g 5-diethylamino-2-pentanthiol i form af en gul olie.

N,N-Diethyl-4-acetylthio-l-pentanamin kan fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 32 for fremstillingen af N,N-dimethyl-3-acetylthio-2-30 -methyl-propylamin, idet der gås ud fra 32 g N,N-di- ethyl-4-chlor-l-pentanamin og 15,2 g thioleddikesyre.

Der fås på denne måde 4,31 g produkt i form af en gul olie.

35 o 72 DK 169258 B1 N,N-Diethyl-4-chlor-l-pentanamin kan fremstilles ifølge metoden, der beskrives af M.S. Kharash og C.F. Fuchs i US patentskrift nr. 2.432.905.

5 Eksempel 47

En opløsning af 7,6 g 5<S- [ (4-methyl-phenyl) --sulfonyloxymethylen]-pristinamycin i 60 ml tetra-hydrofuran afkøles til en temperatur nær -10°C. Der 10 tilsættes langsomt under bibeholdelse af denne tempe ratur en opløsning af 0,65 g 2-dimethylamino-ethanol i 60 ml tetrahydrofuran tilsat 0,35 g af en 50%'s dispersion af natriumhydrid i mineralolie. Efter tilsætningen lader man langsomt temperaturen stige til 15 nær 20°C. Reaktionsblandingen omrøres i 24 timer ved denne temperatur, hvorefter den fortyndes med 500 ml methylenchlorid og vaskes 2 gange med 50 ml af en mættet ammoniumchloridopløsning. Den organiske fase tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres 20 til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 40°C.

Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5. Fraktionerne 12-17 forenes og koncentreres til tørhed under 25 formindsket tryk (2,7 kPa) ved 25°C. Der fås på denne måde 1,5 g 5&-(2-dimethylamino-ethoxymethylen)-pristin-amycin i form af et beige pulver, der smelter nær 160°C.

NMR-spektrum: 30 0,65 (dd, IH : 5B2) 2,3 (s, 6H : -NCCH.^) 2,65 (m, 2H : -CH N^) 3,42 (dd, IH : 5e2> 4.15 (t, 2H : -0CH-) 35 5.15 (d, IH : 5e ) 7,45 (under de aromatiske, IH : )c=CH0-) 7,80 (dd, IH : l'Hg) 73 DK 169258 B1

O

Der fås en vandig opløsning med 1% 5.-(2--dimethylamino-ethoxymethylen) -pristinamycin 1^ (forbindelse AAQ) i form af hydrochloridet med: forbindelse AAQ 0,03 g 5 0,1N saltsyre 0,3 ml destilleret vand, op til 3 ml

Eksempel 48 10 Til en opløsning af 0,5 g 5 -(4-methylphenyl)- -sulfonyloxymethylen-pristinamycin 1^ i 25 ml ethanol sættes 0,12 g 4-amino-l-methyl-piperidin ved en temperatur nær 20°C. Efter 16 timers omrøring ved denne temperatur fortyndes reaktionsblandingen med 100 ml 15 methylenchlorid og vaskes to gange med i alt 100 ml destilleret vand. Den organiske fase tørres over natriumsulfat og koncentreres derefter under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen omrøres med 15 ml ethylether. Efter filtrering fås der 0,42 g 5 -(1-me-20 thyl-4-piperidyl) -aminomethylen-pristinamycin 1^ i form af et hvidt pulver, der har samme karakteristika som produktet beskrevet i eksempel 24.

Eksempel 49 25

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 11 og 23 og gås ud fra en forbindelse med den almene formel IV eller den almene formel IX, fremstilles der følgende derivater af synergistiner med den 30 almene formel I: 35 74 DK 169258 B1 o

Odgangsforbindelse Reaktionsbe- Produkt defineret ] [Y = N(CH_)9] tingelser ovenfor i eksempel (-NR,R0 eller -Z) 'i CH-jCOOH, 20°C, 24 | -NR1R2 = -NH2 20 timer j

ch3cooh,cf3cooh, I

-NR,R2 = -NH C10H21 20°C, 20 timer 30 10 1 L_;_____

_ . ch3cooh, 20°C, 24 I

-NR,R« = -NX 20 timer 1 2 \__L___ CH3C00H, CF3C00H, 24 15 -NRxR2 = -NH-C6H5 20°C, 48. timer

-NR1R2 = -NH(CH2)jSIH(CK3')2OH CHjCOOH, CF^OOH, 3Q

20°C, 20 timer" ' = -nh(ch2)3n[(ch2)2o.h]2 ch3cooh, cf3cooh, 3Q ! 20 20°C, 48 timer -NR,R = -NH(CH?)?SH CH,C00H, 20°C, 20 tW 30 -NR1R2 = -NH(CH2)2NHC6H5 CH3C00H, 24 25 20°C, 10 dage

/\ ch3cooh, cf3cooh, 3Q

Q 20°C, 20 timer -NR,R0 = -NHCH„- 12 2 w 30 ’ Z =-0C0CH3 CH3C00H, 24 20°C, 6 timer z = -opo(oc2h3)2 ch3cooh, 24 20°C, 20 ‘timer 35 75 DK 169258 B1

O

De anvendte forbindelser med den almene formel IV kan fremstilles som beskrevet nedenfor eller analogt med denne metode.

Til en opløsning af 1,84 g 5 i-dimethylaminomethylen-5 -pristinamycin 1^ i 20 ml eddikesyre sættes langsomt 10 ml 4N ethanolisk ammoniakopløsning. Den fremkomne opløsning omrøres i 20 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorefter den langsomt hældes i 200 ml mættet vandig natriumhydrogen-carbonatopløsning. Den fremkomne suspension ekstraheres 10 3 gange med i alt 300 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C.

Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform 15 og methanol i volumenforholdet 92:8. Ved koncentrering til tørhed af fraktion 11-13 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,3 g 5-aminomethylen-pristinamycin IA i form af et beige pulver, der smelter nær 190°C.

NMR-spektrum: 20 0,7-1,10 (mt, 4Η:2γ + 5β2) 7,15-7,53 (mt, 9H (heraf 1 udvekselig):6γ + 6£+ 6f + IH af NH2 + =CH -NH2 + l'H4 + l'H5) 9,12 (s bred, IH (udvekslelig) : IH af N^)

De anvendte forbindelser med den almene formel IX 25 kan fremstilles på følgende måde: 5 £ -Acetoxymethylen-pristinamycin 1^:

Til en opløsning af 1,8 g 5 S -hydroxymethylen-pristi- namycin I, i 20 ml methylenchlorid indeholdende 0,2 g trioo o ethylamin sættes ved en temperatur nær -20 C 0,14 ml acetyl- chlorid, hvorefter temperaturen får lov at stige til ca. 20°c*

Reaktionsblandingen omrøres derefter i 20 timer ved denne temperatur, hvorefter den koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi, idet der anvendes ethylacetat 35 o 76 DK 169258 B1 som elueringsmiddel. Efter koncentrering til tørhed af fraktion 4-7 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,7 g 5&-acetoxymethylen-pristinamycin i form af et gult pulver, der smelter nær 160°C.

5 NMR-spektrum: 0,60 (dd; IH : 5β2) ' 2,25 (s; 3H r -CO-CH^) 2.45 (d; 1H :· 5^) 5.45 (dd; 1H s 5¾) 10 5,25 (dd; 1H : 5a) 5.45 (dj IH : 5^) 7’10 ~ 7,45 8Η : 6γ + 6<T+ 6S + 1 »h^ + 1 »ij + =CH-o_) 7.85 (dd; 1H : 1 *Hg) 15 5£-Diethoxyphosphoryloxymethy len-pris tinamycin 1^:

Der gås frem på samme måde som beskrevet ovenfor, men gås ud fra 1,8 g 5S-hydroxymethylen-pristinamycin 1^ og 0,34 g diethylchlorphosphat. Efter rensning ved flashchroma-20 tograf i, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af ethylacetat og methanol i volumenforholdet 90:10, og koncentrering af fraktion 6-14 til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,8 g 5^-diethoxyphosphoryl-oxymethylen-pristinamycin i form af et gult pulver, der 25 smelter nær 150°c.

NMR-spektrum: 0,55 (dd; 1H : 5β2) 1,30 (td; 6H : -^(O-CH^CH^) 2.40 (d; 1H : 5β^ 30 3,40 (dd; 1H : 5¾) 4.25 (ddd; 4Ξ : -P0(0-<3H2-CHj)2 5.25 (d; 1H : 5a ) 5.40 (d; 1H : 5^) 7,10 - 7,55 (a; 8H : 6y + fif + 6ξ + =CH-0- + i + 1 »E ) 35 , — ^5 ' 4' 7.85 (dd; 1H x 0,85 s 1'Hg 1. isomer)’ 8 (dd; 1H x 0,15 : 1 'Hg 2 . isomer) 77 DK 169258 B1 o 5S-Hydroxymethylen-pristxnamycin 1^ kan fremstilles som beskrevet i eksempel 44.

Eksempel 50 5 Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 48, men omrøres i 20 timer, fremstilles 5£-(3-di-methylamino-propyl)-thiomethylen-pristinamycin i beskrevet ovenfor i eksempel 30 ud fra 5$-chlormethylen-pristinamycin IA* 10 Udgangsforbindelsen kan fremstilles på følgende måde:

Gennem en opløsning af 1,3 ml trJLphenylphosphit i 25 ml methylenchlorid ledes en strøm af gasformigt chlor, indtil der fås en vedvarende gulgrøn farve, idet temperaturen holdes mellem -20 og -15°C. Der tilsættes derefter 6 dråber 15 triphenylphosphit til affarvning af opløsningen og derefter 4,1 g 5<5-hydroxymethylen-pristinamycin 1^, idet temperaturen stadig holdes mellem -20 og -15°C. Den fremkomne opløsning omrøres i 1 time ved -15°C, hvorefter der dråbevis tilsættes en opløsning af 0,4 ml pyridin i 25 ml methylenchlorid. Re-20 aktionsblandingen omrøres i 30 minutter ved en temperatur nær 20°C, hvorefter der tilsættes 0,46 ml koncentreret saltsyre (d = 1, 9) og 50 ml methylenchlorid. Blandingen vaskes 4 gange med i alt 100 ml destilleret vand. Den organiske fase tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til 25 tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes ethylacetat. Efter koncentrering til tørhed af fraktion 7-9 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,2 g 5&-chlormethylen-pristinamycin i i 30 form af et beige pulver, der smelter nær 190°C.

35 78 DK 169258 B1 NMR-spektrum: 0,55 (dd; 1H : 5β2) 2.45 (dj 1H r 5βη) 5.45 (dd; m i. 512) 5 5,50 (d; 1H : 5«) 5.45 (dj IH : 5¾) 7»15 - Oa; 81 : 6γ + 6 f + '6t + 1 + 1 ‘H^ + =CE-Cl) 7,85 (dd; 1H : 1‘Hg) 10

Eksempel 51

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 2, men gås ud fra 22 g 56-methylen-virginiamycin S og 15 0,9 g 2-(4-methyl-l-piperazinyl)-ethanthiol. Efter rens ning ved flashchroma tograf i, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af methylenchlorid og methanol i volumenforholdet 95:5, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 12-20 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C,fås der 0,6 20 g af 56-[2-(4-methyl-l-piperazinyl)-ethyl]-thiomethyl-vir-giniamycin S i form af et bleggult pulver, der smelter nær 135°C.

NMR-Spektrum: 0,37 (dd, IH : 5β2) 2,30 (s, 3H :> N-CH3) ch ch 25 2,30 - 2,70 (mt, 13H : CH--CH- ~2 ~2)n- + 5β,) 3,16 (dd, 2H : -CH2~S-) -2u-2 5,03 (ddd, IH : 5βχ) 5,37 (dd, IH : 4a) 7,79 (mt, IH : l'Hg) 30 Der fås en vandig opløsning med 10%' 5$-[2-(4- -methyl-l-piperazinyl) -ethyl]-thiomethyl-virginiamycin S (forbindelse AAR) i form af hydrochloridet med: forbindelse AAR 10 mg saltsyre, op til 0,1 ml 35 Den foreliggende opfindelse angår ligeledes et farma ceutisk præparat, som er ejendommeligt ved, at det indeholder 79 DK 169258 B1 mindst ét derivat ifølge opfindelsen sammen med et eller flere forenelige og farmaceutisk acceptable fortyndingsmidler eller hjælpestoffer. Præparaterne ifølge opfindelsen kan anvendes parenteralt, oralt, rektalt eller topisk.

5 Sterile præparater til parenteral indgivelse kan for trinsvis være vandige eller ikke-vandige opløsninger, suspensioner eller emulsioner. Som opløsningsmiddel eller bærer kan der anvendes vand, propylenglycol en polyethylen-glycol, vegetabilske olier, især olivenolie, injicerbare or-10 ganiske estere, f.eks. ethyloleat, eller andre egnede organiske opløsningsmidler. Disse præparater kan ligeledes indeholde hjælpestoffer især befugtningsmidler, isotonicitets-midler, emulgatorer, dispergeringsmidler og stabilisatorer-Sterilisationen kan ske på flere måder, f.eks. ved sterilfil-15 trering, inkorporering af steriliserende midler, bestråling eller opvarmning. De kan ligeledes fremstilles i form af faste sterile præparater, der kan opløses i et sterilt inji-carbart medium på anvendelsestidspunktet.

Præparaterne til rektal indgivelse er suppositorier 20 eller rektale kapsler, der ud over det aktive princip indeholder excipienser, såsom kakaosmør, semisyntetiske glyceri-der eller polyethylenglycoler.

Som faste præparater til oral indgivelse kan der anvendes tabletter, piller, pulvere eller granulater. I disse 25 præparater er den aktive forbindelse ifølge opfindelsen (eventuelt kombineret med et andet farmaceutisk acceptabelt produkt) blandet med et eller flere indifferente fortyndingsmidler eller hjælpestoffer, såsom saccharose, lactose eller stivelse. Disse præparater kan desuden indeholde andre stof-30 fer end fortyndingsmidler, f.eks. et smøremiddel, såsom mag-ne s iums tearat.

Som flydende præparater til oral indgivelse kan der anvendes farmacetisk acceptable emulsioner, opløsninger, suspensioner, sirupper og eliksirer indeholdende indifferen-35 te fortyndingsmidler, såsom vand eller paraffinolie. Disse præparater kan ligeledes indeholde andre stoffer end for- DK 169258 B1 80 0 tyndingsmidler, f.eks. befugtningsmidler, sødestoffer eller aromastoffer.

Præparaterne til topisk anvendelse kan f.eks. være cremer, salver, lotioner, øjendråber, mundvand, næsedråber 5 eller aerosoler.

Inden for humanterapien er forbindelserne ifølge opfindelsen særlig nyttige ved behandling af infektioner af mikrobiel oprindelse. Doserne afhænger af den ønskede virkning og behandlingens varighed. For en voksen er de 10 generelt mellem 2000 og 4000 mg pr. dag ved parenteral indgivelse, især ved langsom intravenøs infusion.

I almindelighed vil lægen fastlægge den mest hensigtsmæssige dosering under hensyntagen til patientens alder, vægt og andre relevante faktorer.

15 De følgende eksempler illustrerer præparater iføl ge opfindelsen.

Eksempel A.

Der fremstilles ifølge sædvanlige metoder en injicer-20 bar opløsning til infusion indeholdende 5 g/liter aktivt produkt med følgende sammensætning: 58 - (3-dimethylamino-propyl) -thiomethyl--pristinamycin I 5 g 0,1N saltsyre 50 ml 25 destilleret vand, op til 1000 ml

Eksempel B

Der fremstilles en injicerbar opløsning til infusion indeholdende 5 g/liter aktivt produkt med følgende sammen-30 sætning: 5$-[2- (4-methyl-l-piperazinyl) -ethyl] - thiomethyl--pristinamycin 1^ 5 g 0,1N saltsyre 48 ml destilleret vand, op til 1000 ml 35

Claims

1. Derivater af synergistiner, kendetegnet ved, at de har den almene formel si DK 169258 B1 0<5^n —/ V-Y ,ΧΧΟξΟ:?·· Q 0° 15 hvori Y betyder et hydrogenatom eller en dimethylaminogruppe, og a) R^ og R2 hver især betyder et hydrogenatom, og R betyder 3-pyrrolidinyl-thio eller 3- eller 4-piperidyl-thio (idet dis-20 se grupper eventuelt er substitueret med en alkylgruppe), eller R betyder en alkylthiogruppe substitueret med 1 eller 2 hydroxysulfonyl-, alkylamino- eller dialkylaminogrupper (eventuelt substitueret med en mercapto- eller dialkylamino-gruppe) eller med 1 eller 2 cycler valgt blandt piperazino 25 (eventuelt substitueret med en alkyl- eller mercaptoalkyl-gruppe), morpholino, thiomorpholino, piperidino, 1-pyrroli-dinyl, 2-, 3- eller 4-piperidyl og 2- eller 3-pyrrolidinyl (idet de to sidstnævnte cycler eventuelt er substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet), eller 30 b) R^ og R2 danner sammen en valensbinding, og R betyder 3-pyrrolidinyl-amino, 3- eller 4-piperidyl-amino, 3-pyrro-lidinyl-oxy, 3- eller 4-piperidyl-oxy, 3-pyrrolidinyl-thio, 3- eller 4-piperidyl-thio (idet disse grupper eventuelt er substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet i ringen) , 35 eller R betyder alkylamino, alkyloxy eller alkylthio substitueret med 1 eller 2 hydroxysulfonyl-, alkylamino-, dialkyl-

82 DK 169258 B1 o amino- (eventuelt substitueret med en dialkylaminogruppe) , trialkylammonium-, 4- eller 5-imidazolyl-grupper eller med 1 eller 2 cycler valgt blandt piperazino (eventuelt substitueret med en alkyl- eller mercaptoalkylgruppe), morpholino, 5 thiomorpholino, piperidino, 1-pyrrolidinyl, 2-, 3- eller 4--piperidyl og 2- eller 3-pyrrolidinyl (idet de to sidstnævnte cycler eventuelt er substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet), idet alkylgrupperne og alkyldelene er ligekædede eller forgrenede og indeholder 1-5 carbonato- 10 mer, i deres isomere former, når sådanne eksisterer, og i form af blandinger deraf eller farmaceutiske salte deraf.

2. Fremgangsmåde til fremstilling af forbindelser ifølge krav 1, hvori Y har den i krav 1 angivne betydning, og de andre sym- 15 boler har den i krav 1 under a) angivne betydning, kendetegnet ved, at en forbindelse med den almene formel R' - H 20 hvori R‘ er defineret som R i krav 1 under a), omsættes med en forbindelse med den almene formel

25 O ?H3 /-\ V TNr'-\> i CH,“ n 0 \^CH2 i *3 s a I i Sr8 ^ ° 35 O

83 DK 169258 B1 hvori Y har den i krav 1 angivne betydning, hvorefter produktet isoleres og eventuelt omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt.

3. Fremgangsmåde til fremstilling af forbindelser iføl-5 ge krav 1, hvori Y har den i krav 1 angivne betydning, og de andre symboler har den i krav 1 under b) angivne betydning, med undtagelse af sådanne forbindelser, hvori R betyder 3-pyrroli-dinyl-oxy, 3- eller 4-piperidyl-oxy eller alkyloxy (eventuelt 10 substitueret som defineret under b) i krav 1), kendetegnet ved, at en forbindelse med den' almene formel R"-H 15 hvori R” er defineret som R i krav 1 under b) , men ikke kan betyde 3-pyrrolidinyl-oxy, 3- eller 4-piperidyl-oxy eller alkyloxy (eventuelt substitueret som defineret under b) i krav 1), omsættes med en forbindelse med den almene formel 30 hvori Y har den i krav 1 angivne betydning, og R1 og R2, der er ens eller forskellige, betyder et hydrogenatom eller en phenyl- eller pyridylgruppe, der eventuelt er substitueret (med en dialkylaminogruppe, hvis alkyldel er li-gekædet eller forgrenet og indeholder 1-4 carbonatomer) eller 35 en alkylgruppe med 1-10 carbonatomer, der er ligekædet eller forgrenet og eventuelt er substitueret (med hydroxy, mercapto. o

84 DK 169258 B1 carboxy, pyridyl, anilino, alkylamino eller dialkylamino, hvori mindst én af alkyldelene er substitueret med hydroxy, mercapto, carboxy eller anilino), eller en alkenylgruppe med 3 eller 4 carbonatomer, eller en alkynylgruppe med 5 3 eller 4 carbonatomer, eller og R2 sammen med nitrogenato met, hvortil de er bundet, danner en 5- eller 6-leddet hetero-cyclus, der eventuelt indeholder et andet heteroatom, valgt blandt oxygen, svovl eller nitrogen (eventuelt substitueret med en alkylgruppe), 10 hvorefter isomerene af det fremkomne produkt eventuelt separeres, når sådanne foreligger, og det fremkomne produkt· eventuelt omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt.

4. Fremgangsmåde til fremstilling af forbindelser ifølge krav 1, 15 hvori Y har den i krav 1 angivne betydning, og de andre symboler er defineret som i krav 1 under b), kendetegnet ved, at en forbindelse med den almene formel R"' - H 20 hvori R"1 er defineret som R under b) i krav 1, omsættes med en forbindelse med den almene formel X^ixcc

30. H II J 0" u hvori Y har den i krav 1 angivne betydning, og l betyder et halogenatom, en trimethylsilyloxy- eller dialkylQxyphospho-35 ryloxygruppe eller en gruppe med den almene formel

85 DK 169258 B1 o -0-S02-R3 eller -O-CO-R^ hvori R^ betyder en alkyl-, trifluonnethyl- eller trichlor-5 methylgruppe eller en phenylgruppe, der eventuelt er substitueret med et halogenatom eller en alkyl- eller nitrogruppe, og R^ er defineret som R^ eller betyder alkylcarbonyl-methyl, alkylcarbonylethyl, alkyloxycarbonylmethyl, 2-alkyl-oxycarbonyl-ethyl eller alkyloxy, 10 hvorefter isomerene af det fremkomne produkt eventuelt separeres, når sådanne foreligger, og det fremkomne produkt eventuelt omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt.

5. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det indeholder mindst ét derivat ifølge krav 1 15 sammen med et eller flere forenelige og farmaceutisk acceptable fortyndingsmidler eller hjælpestoffer . 20 25 30 35