DK164867B

DK164867B - Pyrimidooe4,5-gaaquinolin-derivater eller salte deraf og farmaceutiske formuleringer indeholdende disse

Info

Publication number: DK164867B
Application number: DK400984A
Authority: DK
Inventors: Cynthia Lynn Nichols; Edmund Carl Kornfeld; Mark Mortensen Foreman; John Mehnert Schaus; Diane Lynn Huser; Richard Nolan Booher; David Taiwai Wong
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1983-09-26
Filing date: 1984-08-22
Publication date: 1992-08-31
Also published as: DK296190A; DK296390D0; HK98789A; CY1495A; DE3484583D1; DK296190D0; DK296290D0; PT79112A; DK169948B1; GB8421160D0; AU3228084A; EP0139393A2; DK169970B1; IE57848B1; IL72730A0; JPH01151581A; IL72730A; FI78091B; EP0139393A3; GB2146985A

Description

DK 164867 B

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte pyrimi-do[4,5-g]quinolin-derivater eller farmaceutiske acceptable syreadditionssalte deraf, som har vist sig at være effektive D-2-dopamin-agonister. Opfindelsen angår endvide-5 re en farmaceutisk formulering indeholdende en sådan forbindelse.

Den antagelse, at forskellige former for legemsvæv indeholder 2 dopamin-receptorer, er først for nylig blevet 10 generelt accepteret. Disse receptorer er blevet betegnet som D-l og D-2-receptorer. Der kendes adskillige D-2-dopamin-receptor-agonister, herunder lergotril og pergo-lid, som begge er ergoliner, og LY141865 (US patentskrift nr. 4 198 415), som er en ergolin-delstruktur. Disse D-2-15 agonister har vist at være nyttige ved behandling af Parkinson's sygdom såvel som ved behandling af tilstande, hvorved der forekommer et overskud af cirkulerende prolactin, såsom galactorrhea. LY141865 [trans-(+)-5-n-pro-pyl-4,4a,5,6,7,8,8a,9-octahydro-lH(og 2H)-pyrazolo[3,4-20 g]quinolin] har også vist sig at kunne reducere blodtrykket hos pattedyr, uden at der optræder postural hypotension. Denne antihypertensive virkning hævdes kun at være tilstede i en af trans-(+)-racematets stereisomere, nemlig trans-(-)-isomeren, som er navngivet som 4aR,8aR-5-n-25 propyl-4,4a,5,6,7,8,8a,9-octahydro-lH(og 2H)-pyrazolo-[3,4-g]quinolin.

Med den foreliggende opfindelsen tilvejebringes en klasse af hidtil ukendte trans-(+ )-5,5a, 6,7,8,9,9a, 10-octahydro-30 pyrimido[4,5-g]quinoliner med den almene formel

,1 /\/,\ /·\ J

"To t e? 1

« ! I

ι'.'Ο ,1 5c· 7· ir k 35 2

DK 164867 B

hvori

R er Cn-Co-alkyl 2 1 J

R er H, CHg, Cl eller Br; og R1 er NH9, NHR3 eller NR4R5; o * g 5 hvor R er methyl, ethyl, n-propyl eller R -CO, 6 4 5

hvori R er C-^-Cg-alkyl eller phenyl, og hvori R og R

hver for sig er methyl, ethyl eller n-propyl, eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf, idet R

1 2 ikke kan være methyl, når R er NH0, og R er hydrogen, Δ 1 2 10 og idet R ikke kan være n-propyl, når R er NH2, og R er

Cl.

Betegnelsen "C^-C^-alkyl" omfatter methyl, ethyl, n-propyl og isopropyl.

15

Farmaceutisk acceptable syreadditionssalte af forbindelserne med formel I omfatter salte afledt af ikke1toxiske uorganiske syrer, såsom saltsyre, salpetersyre, phosphor-syre, svovlsyre, hydrogenbromidsyre, hydrogeniodidsyre, 20 phosphorsyrling og lignende, såvel som salte afledt af ikke-toxiske organiske syrer, såsom alifatiske mono- og dicarboxylsyrer, phenyl-substituerede alkansyrer, hydro-xyalkansyrer og -alkandisyrer, aromatiske syrer og alifatiske og aromatiske sulfonsyrer. Sådanne farmaceutisk ac-25 ceptable salte omfatter således sulfater, pyrosulfater, bisulfater, sulfiter, bisulfiter, nitrater, phosphater, monohydrogenphosphater, dihydrogenphosphater, metaphos-phater, pyrophosphater, chlorider, bromider, iodider, acetater, propionater, caprylater, acrylater, formiater, 30 isobutyrater, caprater, heptanoater, propiolater, oxala-ter, malonater, succinater, suberater, sebacater, fumara-ter, maleater, mandelater, butyn-l,4-dioater, hexyn-1,6-dioater, benzoater, chlorbenzoater, methylbenzoater, di-nitrobenzoater, hydroxybenzoater, methoxybenzoater, 35 phthalater, terephthalater, benzensulfonater, toluensul-fonater, chlorbenzensulfonater, xylensulfonater, phenyl-acetater, phenylpropionater, phenylbutyrater, citrater, 3

DK 164867 B

lactater, Æ-hydroxybutyrater, glycolater, malater, tar-trater, methansulfonater, propansulfonater, naphthalen-1-sulfonater, naphthalen-2-sulfonater og lignende salte.

5 Forbindelserne med formel I har to asymmetriske carbon-atomer (optiske centre) ved 5a og 9a, og de kan således eksistere som fire stereoisomere, der optræder som to ra-cemiske par, der sædvandlivis betegnes som trans-(+)-ra-cemat og cis-(+)-racematet. Trans-racematet er sammensat 10 af trans-(-)-stereoisomeren (5a, 9aR-stereoisomeren) vist ved (II) nedenfor og trans-(+)-stereoisomeren (5aS,9aS-stereoisomeren) repræsenteret ved (Ila): |_j _ _ M 9 — φ Μ λ U * 15 pi /\/ \ /\/ \T/ \ I i! i ϊ "I i i ί Λ /\ /|\/ ’\ /\ /=\/’ , * H t I. ' Hj

R R R* R

20 II Ha 1 2 hvori R, R og R har deres tidligere angivne betydnin- 25 ger. Disse trans(-)-(5aR,9aR)-stereoisomere, repræsenteret ved formlen II, er aktive dopamin-D-2-agonister og således omfattet af opfindelsen. De ovenfor viste trans-(+)-(5aS,9aS)-stereoisomere med formen Ila er derimod aktive dopamin-D-l-agonister. Eftersom trans-(+)-D-l-ago- 30 nisterne er mindre aktive på dosis-basis end trans-(-)-D-2-agonisterne, er trans-(+)-racematerne (II + Ila) først og fremmest nyttige på grund af deres indhold af den aktive trans-(-)-stereoisomer.

35 En foretrukken gruppe af forbindelser ifølge opfindelsen omfatter de forbindelser med formlerne I og II, hvori R er n-propyl. En anden foretrukken gruppe består af de i 4

DK 164867 B

forbindelser med formen I og II hvori R er NH0 og/eller 2 Δ k er H.

Fra DK patentansøgning nr. 2688/79 kendes forbindelser, 5 som er beslægtede med de omhandlede forbindelser med formlerne I og II. De kendte forbindelser er virksomme som dopamin-agonister, og de kan anvendes til behandling af Parkinson’s sygdom og som prolactin-inhiberende midler. Der er imidlertid en strukturel forskel mellem de 10 kendte forbindelser og forbindelserne ifølge opfindelsen, idet førstnævnte er pyrazoloquinoliner, mens sidstnævnte er 2-aminopyrimidoquinoliner. Endvidere er forbindelserne ifølge opfindelsen væsentligt mere aktive som prolactin-inhibitorer end de kendte forbindelser, selv i lavere 15 koncentrationer (hvilket ses ved sammenligning af en forbindelse fra DK patentansøgning nr. 2688/79 med forbindelser ifølge opfindelsen, som anført i forbindelse med tabellerne 1 og 2 i nærværende ansøgning).

20 Ud over at være virksomme mod Parkinson's sygdom og som prolactin-inhibitorer kan de omhandlede forbindelser også anvendes til behandling af angst, seksuel dysfunktion, depression og hypertension, hvilket ikke er tilfælde med de fra DK patentansøgning nr. 2688/79 kendte forbindel-25 ser.

Forbindelserne med formen I og II anvendes som lægemidler enten i form af den frie base eller i form af et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf.

30

Forbindelserne med formen I og II er dopamin-D-2-agonis-ter, som i det væsentlige ikke udviser nogen agonist-eller antagonist-virkninger (blokerende virkninger).

35 Som D-2-dopamin-agonister er forbindelserne nyttige til behandling af Parkinson's sygdom, til behandling af mangelfuld seksuel funktion, som antidepressiva eller som 5

DK 164867 B

anti-angstmidler, til sænkning af blodtrykket hos hypertensive pattedyr og til at inhinere prolactin-udskillel-sen. Forbindelserne med formel I og II er således nyttige til behandling af hypertension, depression, angst, Par-5 kinson’s sygdom, seksuel dysfunktion samt sygdomstilstande, der er karakteristiske ved en unødig prolactinudskil-lelse, såsom galactorrhea og uhensigtsmæssig mælkedannelse.

10 Opfindelsen angår endvidere farmaceutiske formuleringer til indgivelse af forbindelser med formlen I eller II.

Disse farmaceutiske formuleringer indeholder, som aktiv bestanddel, en forbindelse med formlen I eller II eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf i kombination med 15 et eller flere farmaceutisk acceptable bærestoffer eller fortyndingsmidler.

De omhandlede forbindelser med formlerne I og II kan fremstilles ved en række i sig selv kendte fremgangs-20 måder, der ikke skal omtales nærmere. Ved disse fremgangsmåder opnår man undertiden den ønskede forbindelse i form af et salt. En omdannelse af et således opnået salt til den tilsvarende frie base kan let gennemføres ved at opløse saltet i vand og derefter tilsætte et overskud af 25 en vandig base (NaOH, Na2C03 etc). Den frie base, som er uopløselig i den basiske opløsning, skiller sig herved ud og kan ekstraheres med et med vand ublandbart organisk opløsningsmiddel. Den organiske ekstrakt bliver derefter frasepareret og tørret. Der tilsættes en opløsning, der 30 indeholder en ækvivalent af en anden ikke-toxisk syre, hvorefter det resulterende salt isoleres ved filtrering eller ved afdampning af opløsningsmidlet. Alternativt kan man fjerne opløsningsmidlet fra den tørrede organiske ekstrakt og opnå den frie base som en rest. Derefter kan 35 den frie base opløses i et passende opløsningsmiddel, og den ikke-toxiske syre kan tilsættes som en opløsning. Det foretrukne salt er HCl-saltet, som man f.eks. kan frem- 6

DK 164867 B

stille ved at sætte en ækvivalent ethanolisk hydrogen-chlorid til en ethanolisk opløsning af den frie base, hvorefter man afdamper ethanolen og omkrystalliserer det tilbageværende salt. Hvis man ønsker at fremstille et di-5 salt, såsom dihydrochloridsaltet, kan man lede HCl-gas igennem en opløsning af den frie base indtil mætningspunktet, hvorefter man kan isolere di-saltet som beskrevet ovenfor.

10 · Forbindelserne med formlen I og II har hver især to eller flere basiske centre. Det mest basiske af disse centre er aminogruppen i octahydroquiholin-ringen. Denne gruppe kan let danne salte med farmaceutisk acceptable syrer.' Amino-grupper, der er mindre basiske, er også tilstede, og dis-15 se grupper vil danne salte med stærke, farmaceutisk acceptable, uorganiske syrer, såsom mineralsyrerne, eller med stærke organiske syrer, såsom p-toluensulfonsyre, under dannelse af di-salte. De farmaceutisk acceptable syreadditionssalte omfatter således mono- og di-salte af-20 ledt af uorganiske syrer, såsom de tidligere anførte sy rer.

Opfindelsen illustreres nærmere ved de følgende specifikke eksempler.

25

Udgangsmaterialer og mellemprodukter.

EKSEMPEL A

30 Fremstilling af 4aR,8aR-l-n-propyl-6-oxodecahydroquinolin 10 g (-)-di-p-toluylvinsvre blev opløst i 75 ml varm methanol. Opløsningen blev sat til en opløsning af 5,05 g trans-dl-l-n-propyl-6-oxodecahydroquinolin i 15 ml metha-35 nol. Reaktionsblandingen blev bragt til at koge, hvorefter den fik lov at afkøle til omgivelsestemperatur. Efter at blandingen havde henstået ved omgivelsestemperatur nat- 7

DK 164867 B

tan over. fremkaldtes krystallisation ved tilsætning af på forhånd tilvejebragte,;podekrystaller. Det krystallinske tartratsalt blev isoleret ved filtrering, og filterkagen blev vasket med methanol. Udbyttet var 2,813 g (18,7¾) g af et hvidt krystallinsk fast stof bestående af (-)-di-p- toluyltartratet af 4aR,8aR-l-n-propyl-6-oxodecahydroqui-nolin; [et3p^ = -107,49° (MeOH, c = 1). Ved omkrystalli sation af saltet fra methanol opnåedes 1,943 g af det optisk rene salt; [α]ρ5° r -108,29° (MeOH, c = 1).

10

Det således opnåede (-)-di-p-toluyltartratsalt blev behandlet med fortyndet vandigt natriumhydroxid, og den resulterende basiske opløsning blev ekstraheret med me-thylenchlorid. Methylenchlorid-ekstrakten blev tørret og 15 koncentreret, og opløsningsmidlet blev fjernet derfra i vakuum. Den resulterende rest blev destilleret til opnåelse af en farveløs olie, som bestod af renset 4aR,8aR-l-n-propyl-6-oxodecahydroquinolin; [a]p + = -88,31° (MeOH, c = 1).

20

Andre l-(alkyl, allyl, benzyl eller cyano)-6-oxodecahy-droquinoliner kan resolveres på lignende måde.

EKSEMPEL B 25

Fremstilling af trans-(-)-l-n-propyl-6-oxo-7-ethoxycar-bonyldecahydroquinolin

En suspension af 790 mg natriumhydrid (55K i mineralolie) 3Q blev anbragt i en rundbundet kolbe med volumen 50 ml, og mineralolien blev fjernet ved tre udvaskninger med hexan.

Det faste natriumhydrid, som blev tilbage, blev suspenderet i 8 ml tetrahydrofur an, og der tilsattes 1,43 ml (1,41 g) diethylcarbonat sammen med 1 dråbe vandfri etha-nol. Den resulterende opløsning blev opvarmet til tilbage-svalingstemperatur, og der tilsattes 1,1 g trans-(-)-l-

DK 164867 B

8 n-propyl-6-oxodecahydroquinolin i 5 ml tetrahydrofuran ον,-er en periode på 5 minutter. Den resulterende blanding blev opvarmet til tilbagesvalingstemperatur natten over.

En analyse ved tyndtlagskromatografi på dette stadium 5 viste, at der ikke var noget udgangsmateriale tilbage, og at en ny plet, der bevægede sig langsommere, var tilstede. Reaktionsblandingen blev udhældt i vand, hvilket gav en pH-værdi i den vandige fase på omkring 14. Den basiske fase blev ekstraheret med methylenchlorid. Den van-10 dige fases pH blev indstillet til omkring 9, og påny blev den basiske fase ekstraheret med methylenchlorid. Methy-lenchlorid-ekstrakterne blev kombineret og tørret, og opløsningsmidlet blev fjernet derfra, hvilket gav 1,56 g af en gul olie bestående af trans-(-)-l-n~propyl-6-oxo-15 7-ethoxycarbonyldecahydroquinolin, som var dannet i den ovenfor beskrevne reaktion.

Resten blev kromatograferet over Woelm silicagel (100-200 mesh), idet der som elueringsmiddel anvendtes en blanding 20 (1:1) af ether og hexan indeholdende en smule 14 N vandig ammoniumhydroxid. De fraktioner, der indeholdt det ønskede produkt, blev kombineret, hvorved der til slut opnåedes 880 mg (55% udbytte) af en gul olie. Keto-esteren viste sig ved NMR at eksistere i en enol-form, som kan repræ-25 senteres ved den følgende struktur: • · HO-a f f |! 1 i *r\ /\/ 30 OCsHs e y Γ.63Η7

Forbindelsen havde det følgende NMR-spektrum: NMR (CDClj): 12,20 (s, IH); 4,28 (q, J=7; 2H); 3,20-1,10 35 (m, 16H); 1,36 (t, j = 7 5 3H)} 0,95 (t, J = 7; 3H).

DK 164867 B

Q

S

EKSEMPEL -C

Fremstilling af trans-(-)-1-n-propyl-6-oxo-7-dimethyl-5 aminomethylen-decahydroquinolin 4 g trans-(-)-l-n-propyl-6-oxodecahydroquinolin blev sat til en opløsning af 5,6 g kalium-tert-butoxid i omkring 50 ml vandig dobbeltdestllleret tetraiiydrofuran. Reaktions-10 blandingen blev omrørt i 30 minutter under en nitrogen- atmosfære. Derefter tilsattes dråbevis 3,6 ml ethylformi-at, mens reaktionsblandingen afkøledes i et is-alkohol-bad. Efter fuldstændig tilsætning blev reaktionsblandingen omrørt ved omgi ve 1 sestemperatur under en nitrogenatmos-15 fære natten over. Reaktionsblandingen, som på dette tids punkt var en fast opslæmning, blev neutraliseret med iseddikesyre. Til opslæmningen sattes methanol efterfulgt af 1 ml dimethylamin. Der tilsattes en 3A molekylsi for at fremme dehydratiseringen. Den herved opnåede reaktions-20 blanding blev omrørt under en nitrogenatmosfære i 48 ti mer, hvorefter den blev filtreret. Filtratet blev inddampet til tørhed i vakuum. Der tilsattes vand, og den vandige blanding ekstraheredes tre gange med tilsvarende voluminer methylenchlorid. Methylenchlorid-ekstrakterne 25 blev kombineret, vasket med vand og tørret. Ved afdamp ning af methylchloridet opnåedes 4,15 g (81,455) trans-(-)-l-n-propyl-6-oxo-7-dimethylaminomethylen-decahydro-quinolin.

30 EKSEMPEL D

Fremstilling af trans-(-)-2-amino-6-cyano-5,5a,6,7,8,9 , -9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin 35

DK 164867 B

10

Der fremstilledes en reaktionsblanding ud fra 16 g trans-(-)-l-methyl-6-oxodecahydroquinolin (fremstillet \/ed proceduren beskrevet af Bach og Kornfeld i US patentskrift nr. 4 198 415), 26 g cyanogenbromid og 450 ml methylen-5 chlorid. Reaktionsblandingen blev omrørt natten over ved stuetemperatur og derefter ekstraheret tre gange med 1 N vandig saltsyre. Den syreekstraherede reaktionsblanding blev vasket med en mættet vandig natriumbicarbonatopløs-ning og derefter tørret. Eventuelle flygtige bestanddele 10 blev fjernet ved inddampning i vakuum. Den herved opnå ede rest var 18,8 g af en halvfast olie, som bestod af trans-(-)-l-cyano-6-oxodecahydroquinolin dannet i den ovenfor beskrevne reaktion. Ved kromatografi af olien over Florisil® ved anvendelse af chloroform som eluerings-15 middel opnåedes fraktioner af det rensede materiale, som tilsammen vejede 11,5 g (66% udbytte). Olien krystalliserede ved henstand, hvilket gav hvide krystaller.

Der fremstilledes en reaktionsblanding ud fra 4,18 g 20 trans-(-)-l-cyano-6-oxodecahydroquinolin, 5,0 g tris-di- methylaminomethan og 50 ml toluen. Reaktionsblandingen blev opvarmet under tilbagesvaling i eri nitrogenatmosfære i 5 timer, hvorefter den blev koncentreret i vakuum.

Der opnåedes 5,76 g af et gult fast råprodukt, som bestod 25 af trans-(-)-l-cyano-6-oxo-7-dimethylaminomethylen-deca- hydroquinolin. Dette råprodukt blev blandet med 2,25 g guanidincarbonat i 100 ml vandfri methanol. Den således opnåede reaktionsblanding blev opvarmet under tilbagesvaling i en nitrogenatmosfære natten over, hvorefter 30 den blev koncentreret i vakuum. Den resulterende faste rest blev tritureret med varm methanol og filtreret. Filterkagen blev vasket to gange med methanol og en gang med ether. Der opnåedes et udbytte på 4,11 g (78%) trans-(-)-2-amino-6-cyano-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido-35 [4,5-g]quinolin, der havde de følgende fysiske karakte ristika: 11

DK 164867 B

Massespektrum, molekularion ved 229; infrarødt spektrum, toppe (cm-1) ved 3307,18; 3137,70; 2202,87; 1660,83; 1599,10; 1364,38 og 1486,26.

5 Analyse beregnet: C 62,86; H 6,59; NI 3 0,54;

Fundet: C 63,18; H 6,70; N 30,24.

EKSEMPEL E

10 Fremstilling af trans-(-)-2-amino-5,5a,6,7,8,9,9a,10- octahydropyrimido[4,5-g]quinolin

Der fremstilledes en reaktionsblanding ud fra 1,66 g af 6-cyano-forbindelsen fra eksempel D, 9,7 g zinkstøv, 200 15 ml eddikesyre og 50 ml vand. Denne reaktionsblanding blev opvarmet til tilbagesvalingstemperatur under en nitrogen-atmosfære i omkring 24 timer, hvorefter den blev omrørt ved stuetempereatur i en periode på 48 timer. Eventuelle flygtige bestanddele blev fjernet fra reaktionsblandingen 20 i vakuum, og den resulterende rest blev opløst i vand.

Den vandige blanding blev gjort basisk med 50% vandigt natriumhydroxid (den sluttelige pH-værdi befandt sig i området 10-11). Der dannedes et tungt hvidt bundfald.

Den basiske opløsning blev filtreret, og filtratet blev 25 ekstraheret tre gange med en opløsningsmiddelblanding af chloroform og isopropanol (3:1 v/v). De organiske ekstrakter blev kombineret og tørret. Ved fjernelse af opløsningsmidlet i vakuum opnåedes 0,43 g af et lysegult pulver bestående af trans-(-)-2-amino-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahydro-30 pyrimido[4,5-g]quinolin som fri base. Denne frie base blev omdannet til det tilsvarende hydrochloridsalt, som blev omkrystalliseret fra en blanding af methanol og ethylacetat til opnåelse af et krystallinsk materiale med et smeltepunkt, der var over 230 °C.

35

DK 164867 B

12

Analyse (efter tørring ved 150 °C)

Beregnet: C 47,66; H 6,55; N 20,21; 5 Fundet: C 47,37; H 6,65; N 19,91.

Den således fremstillede trans-(-)-2-amino-5,5a,6,7,8,~ 9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-gIquinolin kan alkyleres med et lavere alkylhalogenid eller allyleres med et al-10 lylhalogenid til opnåelse af forbindelser, der omfattes af den ovenfor viste formel I.

Nogle af de ovenfor beskrevne præparationer blev gennemført med racematet. Det vil være indlysende for fagmanden, 15 at de samme kemiske trin kan gennemføres med den fraseparerede trans-(-)-stereoisomer til opnåelse af optisk aktive mellemprodukter og slutprodukter.

EKSEMPEL f 20

Fremstilling af trans-(i)-2-amino-4-hydroxy-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin

Der fremstilledes en reaktionsblanding bestående af 2,0 g 25 trans-(t)-l-n-propyl-6-oxo-7-ethoxycarbonyldecahydroqui- nolin (fremstillet i eksempel @), 20 ml vandfritethanol og 0,67 g guanidincarbonat. Reaktionsblandingen blev opvarmet til tilbagesvalingstemperatur natten over under en nitrogenatmosfære. Det hvide bundfald, som herved dan-30 nedes, blev opsamlet ved filtrering, og filterkagen blev vasket med ethanol og tørret. Udbyttet var 1,36 g. Filterkagen blev opløst i 52 ml 0,1 N vandig saltsyre. Den sure blanding blev filtreret, og filtratet blev koncentreret i vakuum. Den faste rest blev opløst i kogende me-35 thanol. Methanolopløsningen blev filtreret, og det således fremstillede trans-(-)-2-amino-4-hydroxy-6-n-propyl-5,5a,-

DK 164867 B

13 6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin-hydrochlo-rid krystalliseredes til opnåelse af 0,79 g produkt. Den frie base havde de følgende fysiske karakteristika: Massespektrum, molekularion ved 262. δ

Analyse beregnet: C 64,09; H 8,45; N 21,36;

Fundet: C 64,18; H 8,51; N 21,13.

Hydrochloridsaltet havde de følgende fysiske karakteri-stika: massespektrum, molekularion ved 262.

SLUTPRODUKTER

EKSEMPEL 1 15

Fremstilling af trans-(-)-2-amino-6-methyl-5,5a,6,7,8,-9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin

Der fremstilledes en reaktionsblanding ud fra 1,8 g trans-20 (i)-l-methyl-6-oxodecahydroquinolin og 2,2 g tris-dimethyl- aminomethan i 18 ml toluen. Reaktionsblandingen blev opvarmet under tilbagesvaling i en nitrogenatmosfære i omkring 12 timer. Der tilsattes yderligere 0,8 g tris-di-methylaminomethan, og tilbagesvalingen blev fortsat un-25 der nitrogen i yderligere 5 timer. Derefter blev reak tionsblandingen koncenteret til tørhed i vakuum. Den resulterende rest, som indeholdt trans-(-)-l-methyl-6-oxo- 7-i(dimethylaminomethylen)decahydroqinolin· dannet i den ovenfor beskrevne reaktion, blev opløst i 40 ml ethanol, 30 hvortil der var sat 1,5 g guanidincarbonat. Den resulte rende blanding blev opvarmet natten over til tilbagesvalingstemperatur under en nitrogenatmosfære. Ved afkøling dannedes et krystallinsk bundfald, der blev opsamlet ved filtrering, og filterkagen blev vasket med ethanol. Ud-35 byttet var 0,68 g (38%) af et lysegult pulver. Materia-

DK 164867 B

14 let blev opløst i 1 N vandig saltsyre. Den sure opløsning blev derefter gjort basisk med 10¾ vandig natriumhydroxid.

Herved udskiltes trans-(-)-2-amino-6-methyl-5,5a,6,7,8,9,-9a , 10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin som fri base, der 5 var uopløselig i den basiske fase, og denne frie base blev ekstraheret med chloroform. Chloroformekstrakten blev tørret, og chloroformen blev fjernet i vakuum. Resten, som bestod af trans-(-)-2-amino-6-methy1-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido [4 , 5-g jquinolin , blev suspenderet i 10 ethanol, og ethanolopløsningen blev mættet med gasformigt hydrogenchlorid. Opløsningsmidlet blev fjernet i vakuum, og den resulterende rest, som var dihydrochloridsaltet af trans-(-)-2-amino-6-methyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octa-hydropyrimido[4,5-g]quinolin, blev omkrystalliseret fra 15 varm ethanol. Der opnåedes 66 mg af dihydrochloridsaltet, som havde et smeltepunkt på 262-275 °C (dekomponering) og udviste den følgende analyse (efter tørring ved 150 °C):

Teoretisk: C 49,49; H 6,92; N 19,24; 20 Fundet: C 49,61; H 7,03; N 18,92.

Det var nødvendigt at foretage en tørring ved forhøjet temperatur, eftersom det blev tydeligt efter en tørring ved lavere temperaturer, at dihydrochloridsaltet udkry-25 stalliserer som et solvat, og at opløsningsmidlet derfor må fjernes ved tørring, for at man kan opnå en reproducerbar analyse.

EKSEMPEL 2 30

Fremstilling af trans-(-)-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,-9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin

Den i eksempel 1 beskrevne reaktion blev gentaget med 35 den undtagelse, at man omsatte 1 g trans-(-)-l-n-propyl- 6-oxo-7-dimethyl ami nornethylen-decahydroquinolin med 0,4 g

DK 164867 B

15 guanidincarbonat 1 20 ml vandfri ethanol. (Trans-(-)-l-n-propyl-6-oxo-7-dimethylaminomethylen-decahydroquinolin blev fremstillet ud fra trans-(-)-l-n-propyl-6-oxodeca-hydroquinolin og tris-dimethylaminomethan ifølge den oven-5 stående procedure). Reaktionsblandingen blev opvarmet un der tilbagesvalingstemperatur natten over, hvorefter der kunne iagttages et bundfald. Reaktionsblandingen blev derefter afkølet i et isbad, og man opsamlede et lysegult krystallinsk bundfald bestående af trans-(-)-2-amino-6-10 n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]qui- nolin, der var dannet ved den ovennævnte reaktion. Filterkagen blev vasket med ethanol og derefter tørret. Smeltepunktet var over 260 °C, og udbyttet var 0,6 g (61%)· 15 Analyse beregnet: C 68,26; H 9,00; N 22,74;

Fundet: C 68,45; H 8,87; N 22,26.

Trans-(-)-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahy-dropyrimido[4,5-g]quinolin blev opløst i 1 N vandig salt-20 syre, og den sure opløsning blev ekstraheret med ether.

Derefter blev den sure opløsning gjort basisk med 1GK5 vandig natriumhydroxid. Trans-(-)-2-amino-6-n-propyl-5,-5a,6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin udfældede og blev frasepareret ved filtrering. Den frie base 25 blev opløst i 1 N vandig saltsyre, og vandet blev fjer net i vakuum. Den resulterende rest blev omkrystalliseret fra varm ethanol. Udbyttet var 0,54 g (40?ό). Det således fremstilledetrans-(-)-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,-7,8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5~g]quinolin-dihydrochlo-30 rid havde et smeltepunkt på 225-270 °C, og det udviste følgende analyse:

Analyse beregnet for C ^ ' ^HCl. f^O : C 49,74; H 7,75; N 16,57; Cl 20,97; 35 Fundet: C 49,88; H 8,03; N 16,81; Cl 20,87.

DK 164867 B

16

Efter tørring ved 120 °C viste en analyse, at hydratvandet og et halvt mol hydrogenchlorid var gået tabt, således at der opnåedes trans-(-)-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,-9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin-sesquihydrochlo-5 rid, der udviste den følgende analyse:

Analyse beregnet for HC1: C 55,86; H 7,87; N 18,61; Cl 17,03;

Fundet: C 55,49; H 7,83; N 18,35; Cl 17,03.

10 EKSEMPEL 3

Fremstilling af 5aR,9aR-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,-9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin 15

Idet man fulgte proceduren fra eksempel 1, omsatte man 4aR,8aR-l-n-propyl-6-oxo-7-dimethylaminomethylen-decahy-droquinolin (fremstillet ud fra 4aR,8aR-l-n-propyl-6-oxo-decahydroquinolin og tris-dimethylaminomethan som vist i 20 eksempel A) med guanidincarbonat i en vandig ethanolopløs- ning. Reaktionen blev gennemført og reaktionsblandingen omarbejdet som beskrevet i eksempel 1 til opnåelse af 2,4 g 5aR,9aR-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahydro- pyrimido[4,5-g]quinolin.

25

Produktet blev suspenderet i ethanol, og der blæstes gasformigt hydrogenchlorid igennem suspensionen. Den resulterende opløsning blev inddampet til tørhed i vakuum, og den tiloversblevne gule olie blev opløst i omkring 10 ml øq ethanol. Der tilsattes ether indtil begyndende udfældning, hvorefter blandingen opvarmedes på et dampbad. Efter afkøling dannedes fine pudderagtige krystaller, som blev skilt fra ved filtrering. Filterkagen blev vasket med ethanol, hvilket førte til 0,72 g af dihydrochloridsal-35 tet af 5aR,9aR-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octa-hydropyrimido[4,5-g]quinolin.

DK 164867 B

17

Analyse (efter tørring ved 180 0C} C 52,67; H 7,58; N 17,55;

Fundet: C 52,81; H 7,75; N 17,65.

5

Molekularion ved 246;

Optisk rotation [a]?L ^ = -99,6 °; )u/ 7 c op [^360 =-374’8 10 EKSEMPEL 4

Fremstilling af trans-(-)-2-dimethylamino-6-n-propy1-5,5a , -6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin 15

Der fremstilledes en reaktionsblanding bestående af 4,7 g trans-(-)-l-n-propyl-6-oxo-7-dimethylaminomethylendeca-hydroquinolin og 2,5 g N,N-dimethylguanidinhydrochlorid i 50 ml vandfri ethanol. Reaktionsblandingen blev opvar-2o met natten over i en nitrogenatmosfære, hvorefter den blev afkølet, og de flygtige bestanddele blev fjernet i vakuum. Den resulterende rest blev opløst i ethylacetat, og ethylacetatopløsningen blev bragt i kontakt med et overskud af 10¾ vandigt natriumhydroxid. Den dannede 25 trans-(-)-2-dimethylamino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10- octahydropyrimido[4,5-gIquinolin, som var uopløselig i den basiske fase, forblev i ethylacetat-fasen. Den vandige fase blev frasepareret, og ethylacetat-fasen blev ekstraheret en gang med vand og en gang med en mættet 30 vandig natriumchlor idopløsning. Ethylacetat-fasen blev tørret, og ethylacetatet blev fjernet i vakuum, hvilket efterlod 0,75 g af en orange olie. Den olieagtige rest (r) blev kromatograferet over Flonsi 1 , idet der som elu-ringsmiddel anvendtes hexan indeholdende stigende mængder 35 (1-50 volumen-?é) ethylacetat. De fraktioner, der ved

DK 164867B

18 tyndtlagskromatografi viste sig at Indeholde den ønske-de trans-(-)-2-dimethylamino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,-10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin, blev kombineret, og opløsningsmidlet blev fjernet fra de kombinerede frak-5 tioner i vakuum. Den resulterende rest blev opløst i ethanol, og der ledtes gasformigt hydrogenchlorid igennem opløsningen, således at det tilsvarende dihydrochlo-ridsalt blev dannet. Ethanolen blev fjernet derfra i vakuum, hvorefter dihydrochloridsaltet blev krystalliseret 10 fra et opløsningsmiddel bestående af methanol og ethyl- acetat. Herved opnåedes 0,170 g af et hvidt fast stof, der udviste en molekularion ved 274, og som havde et smeltepunkt på over 250 °C.

15 Analyse beregnet: C 55,33; H 8,13; N 16,13

Fundet: C 55,67; H 8,19; N 16,19.

EKSEMPEL 5 20 Fremstilling af trans-(i)-2-methylamino-6-n-propyl-r5,5a, - 6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin

Idet man fulgte proceduren fra eksempel 4, men anvendte N-methylguanidin i stedet for N,N-dimethylguanidin, frem- 25 stillede man trans-(i)-2-methylamino-6-n-propyl-5,5a,6,7,- 8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin. Forbindelsen (r) blev renset ved kromatografi over FlorisiP^, idet man som elueringsmiddel anvendte methylenchlorid indeholdende stigende mængder (0-10 volumen-?o) methanol. Monohydro-chloridsaltet blev fremstillet ved, at man satte en ækvivalent 0,1 N saltsyre til det faste stof og omkrystalliserede produktet fra methanol. Udbyttet var 599 mg, og smeltepunktet var over 240 °C.

^ Analyse beregnet: C 60,60; H 8,49; N 18,87; Cl 11,94

Fundet: C 60,96; H 8,53; N 19,08; Cl 11,74.

DK 164867 B

19 I eksemplerne 1, 2, 4 og 5 kan de optisk aktive 5aR,9aR-derivater fremstilles ud fra den ønskede 4aR,8aR-C^-C^ alkyl-6-oxo-7-dimethylaminoethyien-decahydroquinolin og en passende guamdin.

5 EKSEMPEL 6

Fremstilling af trahs-(-)-2-amino-4-methyl-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin 10

Man fremstillede en reaktionsblanding ved at sætte 13,7 ml 1,6 M n-butyllithium i hexan til en opløsning indeholdende 3,1 ml diisopropylamin og 22 ml tetrahydrofuran ved omkring 0 °C under en nitrogenatmosfære. Reaktionsblan-15 dingen blev omrørt i omkring 30 minutter. Derefter til- "i" sattes 2,0 g trans-(-)-l-n-propyl-6-oxodecahydroquinolin i en lille mængde tetrahydrofuran, mens reaktionsblandingen blev holdt ved omkring -78 °C. Opløsningen blev omrørt i 2 timer, hvorefter der tilsattes 1,1 ml acetyl-20 chlorid. Den herved fremkomne reaktionsblanding blev om- rørt ved omkring -78 °C i ca. 30 minutter og derefter ved stuetemperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen blev derpå udhældt i vand, og den resulterende vandige blanding blev gjort sur til pH 9-10 med 1 N vandig saltsyre. Den van-25 dige opløsning blev ekstraheret 3 gange med tilsvarende voluminer methylenchlorid. Methylenchlorid-ekstrakterne blev kombineret og tørret. Ved afdampning af opløsningsmidlet opnåedes 2,7 g trans-(-)-1-n-propy1-6-oxo-7-acety1-decahydroquinolin. Det rå reaktionsprodukt blev (uden 30 yderligere rensning) blandet med omkring 0,9 g guanidin- carbonat. Der tilsattes 40 ml ethanol, og reaktionsblandingen blev opvarmet under tilbagesvaling i en nitrogenatmosfære. Derefter blev reaktionsblandingen inddampet til tørhed, og det rå produkt blev kromatograferet over 35 florisil. De fraktioner, der viste sig at indeholde den dannede trans-(-)-2-amino-4-methyl-6-n-propyl-5,5a,6,7,-

DK 164867 B

20 8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin, blev kombineret til opnåelse af 270 mg af den frie base, hvortil der sattes 10 ml 0,1 N saltsyre. Det herved dannede di-hydrochloridsalt blev omkrystalliseret fra methanol.

5 Smeltepunktet var over 240 °C, og massepektret viste en molekularion ved 260 og en mindre absorption ved 268.

Analyse beregnet : C 54,05; H 7,86; N 16,81 Fundet: C 53,93; H 7,98; N 16,61.

10 EKSEMPEL 7

Fremstilling af trans-(i)-2-amino-4-chlor-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin 15

Det i eksempel G opnåede 4-hydroxy-produkt blev opvarmet under tilbagesvaling med 4 ml phosphoroxychlorid. Reaktionsblandingen, som indeholdt den dannede trans-(-)-2-amino-4-chlor-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahydro-20 pyrimido[4,5-g]quinolin, blev udhældt over is, og den resulterende vandige blanding blev gjort basisk. Den basiske blanding blev filtreret, og det opløselige materiale (30 mg) blev opløst i 0,1 N saltsyre. Det herved opnåede hydrochloridsalt blev omkrystalliseret fra ethanol til 25 opnåelse af 13,6 mg trans-(-)-2-amino-4-chlor-6-n-propyl- 5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin-hy-drochlorid med de følgende fysiske karakteristika: massespektrum: molecularion ved 280, mindre absorption ved 30 282.

Analyse beregnet: C 53,00; H 6,99; N 17,66 Fundet: C 53,15; H 6,92; N 17,77.

35 4-brom-derivatet kan fremstilles på lignende måde ved at erstatte POCl-j med PBr^ i den ovenfor beskrevne reaktion.

DK 164867 B

21 EKSEMPEL 8

Fremstilling af tra ns-(-)-2-acety1 ami no - 6-n-pr opy 1-5,5a , -δ 6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin

Man fremstillede en opløsning indeholdende 0,75 g trans-(-)-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahydropyri- imdo [4,5-gJquinolin i 20 ml pyridin, og til denne opløs-10 ning satte man dråbevis 0,34 g eddikesyreanhydrid. Den fremkomne reaktionsblanding blev opvarmet til tilbagesvaling under en nitrogenatmosfære natten over. Herefter viste en analyse ved tyndtlagskromatografi, at der stadig var udgangsmateriale til stede, og derfor tilsatte man 15 yderligere ca. 1,5 ml eddikesyre og opvarmede reaktions blandingen til tilbagesvalingstemperatur under nitrogen på ny. Herefter viste en analyse ved tyndtlagskromatografi, hvorunder man anvendte et opløsningsmiddelsystem bestående af chloroform og methanol (9:1 v/v) indeholdende am- 20 moniak, at reaktionen i alt væsentligt var forløbet til ende, men at der stadig var noget udgangsmateriale tilstede. Reaktionsblandingen blev derfor koncentreret i vakuum, og den resulterende rest blev tritureret i varm ethyl-acetat. Ued afkøling dannedes krystaller, som blev iso-25 leret' ved filtrering, hvilket gav 340 mg trans-(-)-2-ace- tylamino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido-[4,5-g]quinolin. = 0,7; molecularion ved 288. NMR- og IR-spektrene var i overensstemmelse med den foreslåede struktur.

30 EKSEMPEL 9

Fremstilling af trans-(-)-2-benzoylamino-6-n-propyl-5,5a , -6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin 35

DK 164867 B

22

Idet man fulgte proceduren fra eksempel 8, omsatte man trans-(-)-2-amino~6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10~octahydro-pyrimido[4,5-g]quinolin med benzoyIchlorid i en pyridin-opløsning. Resten bestående af 450 mg af en gulorgange 5 olie, som opnåedes efter oparbejdning af reaktionsblan dingen som beskrevet ovenfor, blev kromatograferet over (g)

Florisil , idet der som elueringsmiddel anvendtes chloroform indeholdende stigende mængder (0-10 volumen-?o) methanol. Fraktion nr. 10 indeholdt den ønskede 2-benzoylamino-10 forbindelse (eftervist ved tyndtlagskromatografi). Opløs ningsmidlet blev fjernet fra fraktionen i vakuum, og den resulterende rest blev opløst i ethanol. Der ledtes gasformigt hydrogenchlorid igennem ethanolopløsningen. En tilsætning af ether indtil begyndende udfældning førte 15 til trans-(-)-2-benzoylamino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,- 10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin-dihycrochlorid; mole-kularion ved 350.

Analyse (efter tørring ved 130 °C) 20 C 59,57; H 6,67; N 13,23

Fundet: C 59,35; H 6,85; N 12,99.

Som tidligere anført er forbindelserne med formlen I og II dopamin D-2-agonister uden nogen anden udtalt farmakolo-33 sisk virkning. En af disse dopamin-D-2-agonist-virkninger er inhiberingen af prolactin-udskillelsen, som er blevet eftervist i overensstemmelse med den følgende procedure: 20 Voksne hanrotter af stammen Sprague-Dau/ley, som vejede omkring 200 g, blev anbragt i et luftkonditioneret rum med kontrolleret belysning (lys fra klokken 6 morgen til klokken 8 aften), og dyrene fik foder og vand ad libitum.

Hver rotte modtog en intraperitoneal injektion af 2,0 mg 35 reserpin i vandig suspension 18 timer inden indgivelse af

DK 164867 B

23 testforbindelsen. Formålet med at indgive reserpin var at holde rotternes prolactin-niveauer ensartet høje. Testforbindelsen blev opløst i 103» ethanol og injiceret intra-peritonealt i doser fra 10Q^ug/kg til lyug/'kg. Testfor-5 bindeisen blev indgivet på hvert dosisniveau til en gruppe på 10 rotter, og en kontrolgruppe på 10 ubehandlede dyr modtog en ækvivalent mængde 10% ethanol. En time efter behandlingen blev samtlige rotter aflivet ved halshugning, og serumprøver på 150 mikroliter blev opsamlet og 10 analyseret for prolactin.

Forskellen imellem prolactin-niveauet hos de behandlede rotter og prolactin-niveauet hos kontrolrotterne, divideret med prolactin-niveauet hos kontrolrotterne, giver 15 den procentvise inhibering af prolactin-udskillelsen, som kan tilskrives den givne dosis. De procentivise inhiberin-ger er angivet i de nedenstående tabeller 1 og 2 for forbindelser med henholdsvis formel I og formel II. I tabellerne angiver kolonnerne 1 og 2 substitutionsmønstrene 20 for de grundstrukturer, der er angivet øverst i tabeller ne, kolonne 3 angiver formen (salt eller fri base (F B)), kolonne 4 angiver indgivelsesvejen, og kolonnerne 5, 6, 7 og 8 angiver de procentvise prolactin-inhiberinger ved de angivne dosisniveauer. I nogle tilfælde blev en forbin-25 delse afprøvet mere end 1 gang på et bestemt dosisniveau, og i sådanne tilfælde er de angivne prolactin-inhiberinger gennemsnitsværdier.

30 35 24

DK 164867 B

K

v \ σ m <s· i i i i i

2 i—i 'c* f I 1 II

iH

CJi Λί \ tr I Η I I Η I r- 2, f r— t i m i ^ in tr \ ij cm t os’ co i i σ> 2 Γ" h· n »o i i in o ø _sl__ cn “ S' c ø 'Γ ~ t<l( in H CO CM H Or* æ m 2 co cn r- o co co σι JO -2£ — CD ° JO TO a-a 10 • = / V “3- _ β z—cc a

a J \ / N

^ / \ σιιιιι il

c o * /» O

ϋ S α \=/ s ss-,/ Vi -i i---- ι—2 0 ,r er ø ---: -j ^ Ό 0 ø ro

% Cr-!5 CM Vi PM PM CM P-ι CM

\ t-lø jHOl-iUM.l-IM

Ίτ ---—------------

Η H ·—I i—I

E U U U U

(«4 >7* ir* »—i »Τ» —J

!r μ-ι »-L, i_u >»L< i I

° f£) fQ U

^ N N fe h N cm S3 in es’ ffi M ^Tl Μ Μ Γ \ »Ti

μι H ^1 H W HH

K K Z

2 S cm K

cm CM O O —- Cn- 2 H EpOUUro K cn

pn z Z m cn S3 SK

K K U U

iOU ^ u r-· r- r- r- t" >r+ »T4 ir* *7* »T* »-ri ►τ»

k-M* ►—< MM k-M r*·* M

en cn m cn cn m cn o 0 υ α u u u u

1 I I I I II

£ £ £ £ £ £ £ 25

DK 164867 B

Til sammenligning hermed har forbindelsen trans-d,l-5-propyl-4,4a,5,6,7,8,8a,9-octahydro-]H(og 2H)pyrazolo£3,4-g^quinolln-dihydrochlond en prolactininhiberingsprocent på 61 ved en dosis på 50yug/kg. Det ses derfor tydeligt, at forbindelserne ifølge opfindelsen er væsentlig mere a k -5 tive som pro 1ac11ninhib11o rer end de kendte forbinde1 ser, selv ved lavere koncentrationer.

Forbindelserne med formlen I og II er også aktive ved oral indgivelse. Trans-(-)-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,-^ lO-'octahydropyrimido [4,5-g Jquinolin-dihydrochlorid , som er den første forbindelse i tabel 1, gav således en inhi-bering på 74?0 ved oral indgivelse af 10^ug/kg og en inhi-bering på 91 SS ved en oral indgivelse af 50yug/kg.

Forbindelserne med formlerne I og II, som er dopamin-D-2 agonister, har vist sig at fremkalde en roterende adfærd hos rotter, der er behandlet med 6-hydroxydopamin, ved en testprocedure, som er beregnet til at fastslå, om givne forbindelser egner sig til behandling af Parkinson's 20 sygdom. I dette eksperiment anvendes nigroneostriatal- læderede rotter, frembragt ved proceduren beskrevet af Ungerstedt og Arbuthnott, Brain Res ^4, 485 (1970). En forbindelse, som besidder dopamin-agonist-virkning, får således rotterne til at dreje sig i cirkler i modsat ret-25 ning af den side, hvor læsionen er påført. Efter en latens periode, som varierer fra forbindelse til forbindelse, tælles antallet af drejninger over en periode på 15 minutter.

30 De resultater, der blev opnået ved et sådant forsøg, er anført i den efterfølgende tabel 3. I tabellen angiver kolonnerne 1 og 2 substitionsmønsteret for forbindelsen, som er angivet øverst i tabellen, kolonen 3 angiver den procentdel af forsøgsdyrerne, der udviser drejende ad-35 færd, og kolonne 4 angiver det gennemsnitlige antal drej ninger, som observeres i de første 15 minutter efter jatensperiodens afslutning.

DK 164867 B

26

Cl \ cr 3. LO t" 'ν'

H

CT

\ C 'ν' 'ν' 3. in co m

Cr

V

ri \ n ζη in m m 3. r- co o

H

Z_ 2—£2 \

cm \ / Cn CO CM

—>^e—«1 lix X CO σ> lj / \ o m · o m Ξ \ /-- *“ e=e II·

<\ -MK H

\ k σ i n3 c-CC Ό ΙΟ·1-. Gj 5-1 £|§ M 0 i—1 i—i cc s_ o u

i-L Kr» hH

o I—I 1-4

CN

—- cr x x i—{

Pi (N CN3 ►—t >T-< *J-4 *—1 S s r- r" h—i i—« t»M 1^-1 cS η η

O Ό I I

c c

DK 164867 B

27 O l Η I I I I i I 1

·—! I ^ I I I I I I I

CD

aJ

“ Ol^llllll* ra C^l 1 LO I I 1 I 1 i i ^ cr σ' Ή \

-(•-σ' o I I H I I I I H I

‘r < O I I ΙΟ I I I I i/) I

^ Ji ^ H c σ' σ c — E LO lo n ® c » o - -

£ JO CO OJ I Μ O O O I O

^ ^ k> o no i ^ ^ i

H UOT5 H

O I O I I I I I I I

u Η I ΙΟ 1 J ! I I 1 1 *——o ^ / \ _ ”

/2 * O I ^ I I I i I I I

\e/ 3 -- 0Ί I cn I I I I 1 I > r^i / \ L C1 / \ U & X.

_ e β ω L_ \ £ \ / “ *=· _ \ O I I O I 1 1 Ir-Il / \ c; u cd ^ X / “ *> c \V _: Oj CD _ „

?—z c-n·-' o o o o O O

* t-σσ οοοιοοηοιο

(v; UO OHHICOHCOHIH

i? O O H

n

η ιΗ K

« aaaaauuaa V-! K g a a a M s

1 Z CN SO

ih cm rj O i ^ <\! <N η Z w « a a u o n a a a jo ·η z z ιο u a z s s a » p n o o«

vD Z ^ 'C

au ^ z zzzzzzzz m nnnnnnnnn -¾ a auuuuauuu a i i i t i » i 1 cccccc^c

K

28

DK 164867 B

Forbindelserne formlerne I og II er også aktive med hensyn til at fremkalde drejende adfærd efter oral indgivelse, omend der kræves doser, der er noget højere, for at fremkalde signifikante virkninger.

5 Forbindelserne med formlerne I og II reducerer blodtrykket hos spontant hypertensive rotter, hvilket belyses ved det følgende eksperiment:

Spontant hypertensive voksne hanrotter (SHR) (Taconic Farms, Germantown, New York) der vejede omkring 300 g, 10 blev bedøvet med natriumpentobarbital (60 mg/kg, intra-peritonealt). Der anbragtes en kanyle i rotternes luftrør, og dyrerne indåndede omgivelsesluft. Det pulserende arterielle blodtryk blev målt igennem en kanyle i halspulsåren under anvendelse af en Statham tranducer (P23 15 ID). Det gennemsnitlige arterielle blodtryk blev beregnet som det diastoliske blodtryk plus 1/3 pulstryk. Hjerterytmen blev målt med et cardiotachometer, der blev udløst af den systoliske trykpuls. Opløsninger af testforbindelserne blev indgivet intravenøst igennem et kateter 20 anbragt i en hoftevene. Det arterielle blodtryk og hjer terytmen blev registreret på en oscillograf med flere kanaler (Beckman, Model R511A). Efter indgrebet lod man 15 minutter hengå for.at opnå en ækvilibrering af præparationen .

25 Den efterfølgende tabel 4 angiver resultaterne af disse forsøg for forbindelsen trans-(-)-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin. I tabellen angiver kolonne 1 dosisniveauet, kolonnen 2 angiver ændringen i det gennemsnitlige arterielle blodtryk med 30 standardafvigelse, og kolonne 3 angiver den procentvise ændring i hjerterytmen, ligeledes med standardafvigelse.

DK 164867 B

29 TABEL 4

Procentvise ændringer*

Dosisniveau Gennemsnitligt Hjerte- i ^ug/kg arterielt blodtryk** rytme 5 0,1 - 4,0 - 0,9 - 2,0 - 0,4 1 -14,8 - 1,1 - 5,9 - 0,8 10 -46,5 - 6,8 -29,0 - 2,3 100 -37,1 - 7,0 -31,0 - 4,2 * Ændringen blev målt umiddelbart efter injektionen.

10 Basislinien for blodtrykket var 181 - 1,0 mmHg, og den gennemsnitlige hjerterytme var 366 - 15 slag pr. minut.

** Middelrespons for 4 SHR.

Desuden er trans-(-)-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-oct ahydropyrimi do [4,5-g ] qui nol i n og dens trans-(-)-ste-·· 15 reoisomer kraftigt virkende aktivatorer for cholinerge neuroner i striatum hos rotter, hvilket fører til en stigning i de striatale acetylcholin-koncentrationer.

Evnen hos trans-(-)- eller trans-(-)-2-amino-4-(eventuelt substitueret)-6-alkyloctahydropyrimido-[4,5-g]quinolin 20 eller et salt deraf (forbindelser med henholdsvis formel I og formel II) til at påvirke den seksuelle adfærd hos han-pattedyr kan illustreres ved det følgende eksperiment:

Der benyttedes hanrotter, som behøvede mindst 5 minutter 25 for at opnå ejakulation. Denne adfærdstest blev påbegyndt ved, at en seksuelt modtagelig hunrotte blev lukket ind i hanrottens "arena", og forsøget blev stoppet umiddelbart efter den første bedækning efter ejakulationen.

Man målte de følgende adfærdsindekser:

DK 164867 B

30

Adfærdsindex Definition 1. Bedækningslatens (ML): Tid fra hunrottens indtræ den til den første bedæk-5 ning.

2. Indføringslatens (IL): Tid fra hunrottens indtræ den til den første indføring .

3. Ejakulationslatens (EL): Tidsinterval fra indføring til ejakulation 4. Postejakulations- T^ , _ . , ,

Tidsinterval fra ejakula- interval (PEI): , . ... . ....

tion til næste bedækning.

15 5. Bedækningsfrekvens (MF): Totalt antal bedækninger, der kræves for at opnå ejakulation 20 6. Indføringsfrekvens (IF): Totalt antal bedækninger med indføring, som kræves for at opnå ejakulation.

Hver hanrotte blev indgivet en opløsning, som enten be-25 stod af bærestoffet alene (1 millimolær eddikesyre plus 1 millimolær ascorbinsyre) i vand eller trans-(-)-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]qui-nolin-dihydrochlorid i en mængde på 25 mikrogram/kg i det samme bærestof. Indgivelsen skete ved subcutan injek-30 tion 30 minutter forud for adfærdsprøven. En uge efter, at medikamentet var blevet afprøvet, blev bærestoffet alene underkastet en ny prøve.

DK 164867 B

31

Resultaterne af det ovenfor beskrevne forsøg er anført 1 den nedenstående tabel 5. I tabellen angiver kolonne 1 behandlingen, mens kolonnerne 2-7 angiver de målte adfærds-indekser (x - SE for 9 rotter) for hver behandling anført 5 i kolonne 1:

DK 164867 B

32 •cd- ca <t <T r^· on * ~ ~ ^ -

* CO >-1 ιΛ O lA O

L_ •-i 4*1 4*1 4-1 O O CNJ i—i

jfc *N *N r. «V r> rN

* O ·—H r—J r—{

Li_ r—1 r—I CS1 s: +i +i +i «—l NO *—1 CnI <i i—i * ^r. ~ " - - ·

i—i I—I -3- r~<i (A i—I Li L

Ld lA CM <t<J· <J CM C CD

CL ΓΑ CA ΓΑ "O cn

+ 1 +1 +1 C C

3 -H

.oc C

(U di

O N O On O O COS

- - - -σ

* CO <-“l NO O O IA -MO

__J O ΓΑ N NO "fl-vo JD

lA LiJ Γ— —1 l-A Ό aJ

+ i +i +1 di *—i _J >s co U Lt -t-> CO -u c

C OCMCOOCOIAOCD

(_ ~ ~ ~ - 3

* CM LA NO Λ <f N -H

_J NO lA <i t—I -a-NO C-I

i—I .—I + I *—1 <0 J-1 + 1 +1 di co ;v c l,

Li -L) O CO O O· ΝΟΝΟ Ο Ό ~ ~ » v vv -.-13

* lA C3 ON NO N NO TO

_J COCA —I N ΝΛ Lt Li Σ +i +11-1 so + i => I o

1-1 C

.-—' LJ Li -U 0-0 C —4 co ο ο iJ mv O L.

Ol-I S

— U CD _J >

Li JO -u UJ I

S 3 L_ L- u_ cd <o - i—i

C VI -I_! V-i I

c co ι-i cn •ML- Qj di L- o

—ίο E \ O

C —j CD O -U _l L- c cd di c c s: s: CO O "H \ o

St-1 Ό ιΛ ίο s CO CN1 jy * ca CO 2E — CO + *

DK 164867 B

33

Et nyt forsøg med doser på 0,25 mikrogram blev gennemført med de i tabel 6 anførte resultater (værdierne repræsenterer x - SE for 11 rotter):

DK 164867 B

34 pa <j co ^ ιΛ L_| Os i—i O ·—I i—i + 1 N 1Λ ·—I —! t-H On U.I co n cd cm pa cm

S| CM —| CM

+1 +1 +1 LA LA PA O» LA On *·«{ w n *« *v *n U On PA O <0 CO O' Q_ CM —1 CM On i—i

PA PA CM

+1 +1 +1 \0

_] ON On CO NO CM CM

*\ f« *l *n as *\ CO —jIcmmj coco pa ό

C UI O’ CO ONLA CM '—I

t— on PA LA —I

+ 1 +1 +1

lA On <-! PA <3- CM

_l| ·3Τ Ή CO CD O' <T

t—i I NO i—l PA Ή PA —I

+1 +1 ·+1 <-i <} NO < -vi O' »t h ' '

_l| >—I lA PA O' CM CM

S| CM r-H *—t +1 +1 +1

/—V

u

λ CD

u —> s c-

li_ (D

Di — -—·

C C

—i li_ Qj C—

1—1 O Ξ O

to -u ra -lj c cn v cn CD CD —I c: -C £-< T3 L- (D eb cj æ

CO CD s: CD

DK 164867 B

35

Som det ses af de i tabel 5 angivne data, førte de afprøvede forbindelser til statistisk signifikante forøgelser med hensyn til ejakulationslatens (EL) og bedækningsfre-kvens (MF) sammenlignet med en behandling med bærestof-5 fet enten før eller efter indgivelse af test forbindelsen, og der kunne iaggtages en forøgelse i indføringslatensen (IL) sammenlignet med en behandling med bærestoffet inden indgivelsen af testforbindelsen. Disse data indikerer en drastisk forøgelse af den seksuelle ydeevne, som har 10 specifik relation til medikamentets virkninger. Ifølge de i tabel 6 angivne data vil en enkelt subkutan dosis af forbindelsen på 250 ng/kg frembringe en statistisk signifikant forøgelse af ejakulationslatensen (EL) sammenlignet med en behandling med bærestoffet inden indgivelsen 15 af testforbindelsen. Selv om der ikke var nogen statistisk signifikante forskelle imellem responserne af test-forbindelsen og den efterfølgende indgivelse af bærestof ved sammenligning af middelværdierne, er det væsentligt at bemærke, at 6 ud af 11 rotter viste bedre præstatio-20 ner i hvert adfærdsindeks efter behandling med testfor bindelsen sammenlignet med den efterfølgende behandling med bærestof, og 9 og 8 af de 11 rotter udviste forbedringer med hensyn til henholdsvis bedækningsfrekvens og indføringsfrekvens. Disse data understøtter det synspunkt, 25 at trans-(-)-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octa- hydropyrimido[4,5-g]quinolin-dihydrochlorid udøver en virkning på adfærden i doser så lave som 250 ng/kg. Lignende adfærdseksperimenter blev gennemført under anvendelse af subkutane doser på 2,5 ng/kg, men her blev der ikke ob-30 serveret nogen adfærdsvirkninger.

Virkningerne af trans-(-)-2-ami no-6-n-propy1-5,5a,6,7,8,-9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quinolin-dihydrochlorid på den seksuelle adfærd hos hanrotter blev også bedømt 35 hos rotter, som ikke udviste nogen parringstilbøjelighe der, eller som var ude af stand til at opnås ejakulation

DK 164867 B

36 inden for testperioden (30 minutter). Virkningen af en subkutan indgivelse af 23 mikrogram/kg af test forbindelsen med hensyn til parringsforløbet hos disse dyr er angivet i tabel 7. Testforbindelsen syntes af have en evne 3 til at igangsætte en seksuel adfærd hos dyr, som ikke på forhånd udviste nogen seksuelle tilbøjeligheder, og en evne til at forstærke den seksuelle adfærd hos dyr, som var ude af stand til at opnå ejakulation. Man bedømte pamngsadfærden hos rotter fra disse grupper, som var x 10 stand til at opnå ejakulation efter behandling med test- forbindelsen og en efterfølgende behandling med bærestoffet. Disse dyr viste en signifikant reduktion med hensyn til antallet af bedækninger, som krævedes for ejakulation (bedækningsfrekvens), når der behandledes med testforbin-15 delsen, i forhold til en behandling med bærestoffet alene.

DK 164867 B

37 TABEL 7

Virkning af en enkelt indgivelse af testforbindelsen (25^ug/kg subcutant) på parringsti 1bøje1 igheden hos impotente rotter.

% rotter, der udviste parrinqsadfærd Bærestof (1 uge før) 0,0% (0/8)

Testforbindelse 87,5% (7/8) Bærestof (1 uge efter) 37,5% (3/8) % rotter, der kunne opnå e.jakulation på 30 minutter Bærestof (før) 0,0% ( 0/14)

Testforbindelse 92,9% (13/14) Bærestof (efter) 50,0% ( 7/14)

Aktivitet hos hanrotter der opnåede e.jakulation

ML IL EL PEI IF MF

Testforbin- 34,3 79,6 298,4 308,1 4,9 8>7 delse (N=7) ΐ13}7 +42)3 + 48>5 + 36,9 il,o 11,0 Bærestof 50,3 80,8 537,1 291,3 6,1 27,11 ^N=/) 122,0 151,6 1110,5 1 26,1 11,1 13,9

Signifikant større end testforbindelse (P <0,003)

DK 164867 B

38

Indvirkningerne af trans-(-)- og trans-(-)-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,9a,10-octahydropyrimido[4,5-g]quino-lin-dihydrochlorid på den seksuelle adfærd hos "'hun-pattedyr blev bedømt på østrogen-behandlede hunrotter, hvis 5 ovarier var blevet fjernet. Man målte det såkaldte "lor- dosis-bedæknings-forhold" (den stigning, hvormed hunrotten opfordrer til parring, for hver bedækning fra hanrotten). Man benyttede forskriften angivet af Foreman og Moss, Physiology and Behavior 22, 283 (1979). Den efter-10 følgende tabel 8 viser resultaterne af dette eksperiment.

I tabellen angiver kolonne 1 navnet på den undersøgte forbindelse, kolonne 2 angiver doseringen i mikrogram/kg, og kolonne 3 angiver ændringen i lordosis-bedæknings-forholdet med standardafvigelser.

15 TABEL 8 Ændring i lordosis- : Dosis (subcutan) bedæknings-forhold

Behandling (^uq/kq)_ (x - SE)_ Bærestof 0,158 - 0,042

Trans-(-)- 20 racemat 25 0,580 - 0,063*

Trans-(- )- stereoisomer 25 0,760 - 0,058** * Signifikant større end bærestof P <0,05 ** Signifikant større end trans-(-) P <0,05 25 Man gennemførte et tilsvarende eksperiment på de to stereo- isomere, nemlig trans-(-)-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,9,~ 9a,10-octahydropyrimido[4,5-gJquinolin og trans-(+)-iso-meren. Responsen overfor trans-(+)-isomeren var ikke signi-kant større end responsen overfor bærestoffet alene 30 (0,093 - 0,063 til 0,035 - 0,018), hvorimod trans-(-)-iso- meren gav en særdeles signifikant ændring på 0,753 -0,031.

DK 164867B

39

Den nedenstående tabel 9 viser indvirkningen af en række dosisniveauer af trans-(~)-2-amino-6-n-propyl-5,5a,6,7,8,-9,9a,10~octahydropyrimido[4,5-gIquinolin på lordosis-bedæknings-forholdet hos østrogen-behandlede hunrotter, 5 hvis ovarier var blevet fjernet: TABEL 9

Dosis Ændring i lordosis-bedæk- 10 /uq/kq Indgivelse ningsforhold**_ 0 SC 0,074 - 0,025 2.5 SC 0,284 - 0,064 7.5 SC 0,405 - 0,083 15 25 SC 0,786 - 0,028 0 oral 0,008 - 0,021 2.5 oral 0,467 - 0,033 25 oral 0,558 - 0,063 ^ * * Alle værdier er X - SE for 19 dyr (S.C.) og for 8 dyr (oral) (vand som bærestof).

Adfærdsresponset overfor bærestoffet var signifikant lavere (P <0,01) end responset overfor testforbindelsen 25 for hver dosis og hver indgivelsesvej.

Forbindelserne med formlerne I og II kan indgives til tera- perapeutiske formål i en række forskellige formuleringer som illustreret nedenfor.

30

Man fremstiller hårde gelatinekapsler under anvendelse af de følgende ingredienser: 35

DK 164867 B

40 Mængde (mq/kapsel)

Aktiv forbindelse 0,1-2 mg 5 Stivelse tørret 200 magnesiumstearat 10

De ovennævnte ingredienser blandes og fyldes på hårde gelatinekapsler.

10

Man fremstiller en tablet formulering ved anvendelse af de følgende ingredienser: Mængde (mq/tablet) 15

Aktiv forbindelse 0,1-2 mg

Cellulose, mikrokrystallinsk 400

Siliciumdioxid, røget 10

Stearinsyre 5 20

Bestanddelene blandes og sammenpresset til dannelse af tabletter.

Alternativt kan man fremstille tabletter, der hver vejer 25 0,1-2 mg, som følger:

Aktiv bestanddel 0,1-2 mg 5tivelse 45 mg

Mikrokrystallinsk cellulose 35 mg

Polyvinylpyrrolidon (som 10¾ opløsning i vand) 4 mg

Niatriumcarboxvmethyl-sti velse 4,5 mg

Magnesiumstearat 0,5 mg

Talkum 1 mg 35 al

DK 164867 B

Den aktive bestanddel ledes sammen med stivelse og cellulose igennem en sigte med maskevidde 350^urn, og der blandes grundigt. Opløsningen af polyvinylpyrrolidon blandes med det resulterende pulver, som derefter ledes igennem 5 en sigte med maskevidde lAlO^um. De således frembragte granuler tørres ved 50-60 °C og ledes igennem en sigte med maskevidde lOOO^um. Derefter sættes natriumcarboxy-methyl-stivelse, magnesiumstearat og talkum, som på forhånd er ledt igennem en sigte med maskevidde 250yum, til ΊΌ granulerne, som efter tørring sammenpresses på en tablet maskine til dannelse af tabletter.

Kapsler, der hver indeholder 0,1-2 mg medikament, fremstilles som følger: 15

Aktiv bestanddel 0,1-2 mg

Stivelse 59 mg

Mikrokrystallinsk cellulose 59 mg

Magnesiumstearat 2 mg 20

Den aktive bestanddel blandes med cellulose, stivelse og magnesiumstearat og ledes igennem en sigte med maskevidde 350^um, hvorefter blandingen fyldes på hårde gelatine-kapsler.

25

Suspensioner, der hver indeholder 0,1-2 mg medikament pr.

5 ml dosis, fremstilles som følger: 3q Aktivbestanddel 0,1-2 mg

NatriumcarboxymethyIcellulose 50 mg

Sirup 1,25 ml

Benzoensyreopløsning 0,10 ml

Aroma q.v.

35 Farve q.v.

Renset vand op til 5 ml

DK 164867B

42

Medikamentet ledes igennem en sigte med maskevidde 350^um og blandes med natriumearboxymethylcellulose og sirup til dannelse af en blød pasta. Benzoesyre'opløsningen, aromastoffet og farvestoffet fortyndes med noget af vandet og 5 tilsættes under omrøring. Derefter tilsættes en tilstræk kelig mængde vand til at frembringe det fornødne volumen.

Til oral administration indgives tabletter, kapsler eller suspensioner, der indeholder fra omkring 0,1 til omkring "•O 2 mg af en aktiv D-2-agonist pr. dosis, 3-4 gange pr. dag, hvilket giver en daglig dosering på mellem 0,3 og 8 mg, der svarer til mellem ca. 4,0 og ca. 107 mikrogram/kg for en person, der vejer 75 kg. Den intravenøse dosis ligger i området fra omkring 0,1 til omkring 100 mikrogram/kg.

15 20 25 30 35

Claims

4 3 DK 164867 B Patentkrav :

1. Pyrimido[4,5-g]quinolin-derivater eller farmaceutisk 5 acceptable syreadditionssalte deraf, kendetegnet ved, at de har den almene formel , A/\/\ 10 j, I i i \/\/\/ Ja k hvori 15 R er C^-C^-alkyl, R2 er H, CHg, Cl eller Br, og

20 R1 er NH2, NHR3 eller NR4R5; q c hvori R° er methyl, ethyl, n-propyl eller R -CO, hvor R^ er C^C^-alkyl eller phenyl, 25 4 5 og hvori R og R hver for sig er methyl, ethyl eller n- 1 2 propyl, idet R ikke kan være methyl, når R er NH9 og R ^ 1 er hydrogen, og idet R ikke kan være n-propyl, når R er NH2 og R2 er Cl. 30

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er trans-(-)-stereoisomeren med den almene formel . y\/\=/\ H — 9 · 9 9 35. il ί ! I'1 e 9 9 \ / \ /j\/ 11 * * h J i i* k DK 164867 B 44 1 2 hvori R, R og R har de i krav 1 angivne betydninger, eller et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf.

3. Farmaceutisk formulering, kendetegnet ved, at den som aktiv bestanddel indeholder en forbindelse med formel I eller II eller et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf ifølge krav 1 eller 2, i kombination med et eller flere farmaceutisk acceptable 10 bærestoffer eller fortyndingsmidler.

4. Farmaceutisk formulering ifølge krav 3, kendetegnet ved, at den er beregnet til oral eller intra-peritoneal indgivelse. 15 20 25 30 35