DK162166B

DK162166B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af (2s)-isomere af 2-oe4-(2-hydroxycyclopentan-1-ylmethyl)phenylaapropionsyre eller farmaceutisk acceptable salte deraf

Info

Publication number: DK162166B
Application number: DK570381A
Authority: DK
Inventors: Atsusuke Terada; Eiichi Misaka
Original assignee: Sankuo Company Limited
Priority date: 1980-12-23
Filing date: 1981-12-22
Publication date: 1991-09-23
Also published as: JPS57106617A; ES8305298A1; US4400534A; JPH0135806B2; DE3161290D1; DK570381A; EP0055588B1; DK162166C; ES508337A0; EP0055588A1

Description

DK 162166 B

Denne opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af (2S)-isomere af 2-[4-(2-hydroxycyclopentan-l-ylmethyl)phenyl]propionsyre eller farmaceutisk acceptable salte deraf. De ved fremgangsmåden fremstillede forbin-5 delser er analgetiske og antiinflammatoriske midler og kan anvendes i farmaceutiske præparater.

I US patentskrift nr. 4 161 538 omtales antiinflammatoriske midler, som indbefatter forskellige 4-(2-oxocyclo-10 alkylmethyl)phenyleddikesyre-derivater. I US patentskrift nr. 4 254 274 omtales beslægtede 4-(2-oxocycloalkyliden-methyl)phenyleddikesyre-derivater. Endvidere er der i den japanske offentligt tilgængelige patentansøgning nr.

127 041/76 en generel beskrivelse af 2-(substitueret phe-15 nyl)alkansyrederivater til anvendelse som antiinflammato riske og analgetiske midler.

Som et resultat af omfattende undersøgelser af antiinflammatoriske og analgetiske midler, som ikke har steroid 20 karakter, har man uventet fundet, at der er knyttet en høj aktivitet til (2S)-formen af 2-[4-(2-hydroxycyclopen-tan-l-yl-methyl)phenyl]propionsyre.

Den nærmest beslægtede kendte forbindelse er 2-[4-(2-oxo-25 cyclopentan-l-yl-methyl)phenyl]propionsyre, som fremstil les i eksempel 1 i det ovennævnte US patentskrift nr.

4 161 538. Det har vist sig, at de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede stereoisomere af den tilsvarende 2"-hydroxy-forbindelse har en meget kraftigere 30 inhiberende virkning på prostaglandinsynthetase in vivo.

Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstilles (2S)-2-[4-(2-hydroxycyclopentan-l-ylmethyl)phenyl]propionsyre eller farmaceutisk acceptable salte deraf. Denne syre har 35 formlen (I): 2

DK 162166 B

OH

5 C/ ΤΙψΟΟΟΗ T‘CH3

H

Syren (I) har (S)-konfigurationen i 2-stilling; men den 10 har yderligere 2 asymmetriske carbonatomer og eksisterer som isomere forbindelser, der ligeledes indgår i den foreliggende opfindelse.

1 en foretrukken udførelsesform af fremgangsmåden ifølge 15 opfindelsen fremstilles således (l"R,2"S)-isomeren af forbindelsen med formlen (I) eller farmaceutisk acceptable salte deraf. Denne isomere er (2S)-2-{4-[(2S,lR)-2-hy-droxycyclopentan-l-ylmethyl] phenyl }propionsyre med formlen (II): 20

OH^ 2" H

'—' li L J1 2 - COOH

25 H ^Ych3 (I11

H

I denne forbindelse (II) er (1"R)- og (2"S)-substituen-30 terne i trans-forhold, og denne forbindelse betegnes også som en trans-isomer af forbindelsen (I). Der er en anden trans-isomer af forbindelsen (I), nemlig (2S,1"S,2”R)-isomeren med formlen (III): 35

DK 162166 B

3

OIO^H

5 ^hITL/mh HP'Ha

H

10 Blandinger af forbindelserne (II) og (III) betegnes i denne beskrivelse med krav også som trans-formen af forbindelsen (I) og fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. På tilsvarende måde udgør (1"S/2"S)- og (1"R,2"R)-isomerene af forbindelsen (I) cis-formen, som 15 også fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

De omhandlede forbindelser viser kraftig inhibering af prostaglandin-biosyntese-enzymaktiviteten, idet forbindelsen (II) og dens salte er mere aktive end forbindelsen (I) og dens salte.

20

Ved beskrivelsen af fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendes af bekvemmelighedsgrunde forkortelsen "syren" for "2-[4—(2-hydroxycyclopentan-l-ylmethyl)phenyl]propionsy-re" En henvisning til "en (2"S)-isomer af syren" er såle-25 des f.eks. en henvisning til en hvilken som helst isomer af 2-£4-(2-hydroxycyclopentan-l-ylmethyl)phenyl]propion-syre, som har S-chiralitet i 2"-stillingen.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at 30 man adskiller en (2S)-isomer af syren eller af et forstadium til syren fra en blanding af (2S)- og (2R)-isomere og om nødvendigt omdanner det fraskilte forstadium til > den tilsvarende (2S)-isomer af syren, hvorpå den opnåede forbindelse, om ønsket, overføres i et farmaceutisk ac-35 ceptabelt salt deraf.

DK 162166 B

4 Når adskillelsen gennemføres på racemisk udgangsmateriale, bliver produktet forbindelsen med formlen (I) med ikke-adskilt stereokemi i 1"- og 2"-stillingerne. Om ønsket, kan trans-formen af forbindelsen (I) derpå frasepa-5 reres, hvilket giver forbindelsen (II) i blanding med forbindelsen (III).

Som ét alternativ kan adskillelsen gennemføres på delvis adskilt udgangsmateriale, f.eks. en erythro-blanding af 10 (2S,1"R)- og (2R,1"S)-isomere til opnåelse af (2S,1"R)- isomeren. Dette produkt kan derpå adskilles, således at den samlede proces giver forbindelsen (II), (2S,1"R,2"S)-isomeren.

15 I praksis vil en blanding af isomere, som adskilles, sædvanligvis være en 50:50 blanding, således som den forekommer naturligt. Adskillelsen kan gennemføres på konventionel måde, f.eks. ved preferentiel krystallisation, ved høj tryksvæskechromatografi eller ved dannelsen af et dia-20 stereoisomert derivat. Sådanne teknikker kan også anvendes til de eventuelle optiske adskillelser og separationer, som er angivet ovenfor.

Den optiske adskillelse kan gennemføres på syren selv el-25 ler på et forstadium til syren. Dette forstadium kan være en hvilken som helst forbindelse, som ved kemisk omsætning kan omdannes til syren under bibeholdelse af den adskilte optiske aktivitet. F.eks. kan forstadiet være den kendte forbindelse 2-[4-(2-oxocyclopentan-l-ylmethyl)phe-30 nyl]propionsyre. Reduktion af denne forbindelse efter den optiske adskillelse fører til en simpel omdannelse til den ønskede (2S)-isomer af syren. Mere alment kan de fremstillingsprocedurer, som er beskrevet i den ovennævnte patentlitteratur, tillempes til at passe til opfindel-35 sens formål.

5

DK 162166 B

I det følgende beskrives metoder, som belyser udøvelsen af fremgangsmåden ifølge opfindelsen, med henvisning til de følgende reaktionsskemaer benævnt metode A og metode B.

5 10 15 20 25 30 35

DK 162166 B

6

METODE A

/« Π Ph~C-_ milt U v -NH2 0

Ch-COOH CH-CONH-C.

™ k mi ί», ·>[Η3 ίο Ph

O

ADSKILLELSE AF II

DIAS TEREOI SOMERE U HYDROLYSE

15 *- \_/ CONH-C^ -»- (HI) HCH3 'PhCH3 20

0 OH

Jl λ REDUKTION I

25 —IjL·™* v_/ nr c™ (ΒΠ) 'h'CH3 (J)^^'ch3 30

ADSKILLELSE OH H OH H

AF TRANS \ /

““ ^'H kJ^COOH + V_AhΓ Jl C00H

„ VCH3 V'ch3

35 (H) H (ffi) VH

7

DK 162166 B

METODE B

0

\ ril KRYSTALLISATION

VJ L Jl -— erythro (EZ) 5 ^ΙΗ-ΜΟΗ (H) ^ IX)

/H

1)Ph-VNH2 { m CH3 /\H HVDR0LYSE -V_7'hL jl CONH-C^ --— 2) OPTISK AD- V'CH3 kCH3 15 SKILLELSE ( λΐ J ^ J ΓΠ

0 0Hs H

\ rSv π 1) REDUKTION \ Xj il _ λλ 11

\_/ hL [I COOH->\-J hL Jl COOH

2) OPTISK AD- v>.PUb \ CH3 SKILLELSE \ ^3 im \ m h 25 30 35

DK 162166 B

8

Ved metode A fremstilles forbindelsen med formlen (I) ved optisk adskillelse af den kendte keto-forbindelse (IV) under anvendelse af diastereoisomer-dannelsen, hvilket giver (2S)-forstadiet (VIII), som derpå ved reduktion om-5 dannes til den ønskede (2S)-isomer af syren; 2-[4-(2-hy-droxycyclopentan-1-ylmethy1)phenyl]propionsyre.

Ved nærmere betragtning af den belysende reaktionsfølge, som er vist i reaktionsskemaet for metode A, kan forbin-10 delsen (VI) opnås ved kondensation af den racemiske keto-forbindelse med formlen (IV) og amin-forbindelsen (V), som er en optisk aktiv (S)-isomer. Kondensationen kan frembringes direkte under anvendelse af et kondenserings-middel, såsom dicyclocarbodiimid (DCC) eller pyridindi-15 sulfid-triphenylphosphin eller 2-fluor-l-methylpyridini- umparatoluensulfonat i nærvær af et inert organisk opløsningsmiddel (f.eks. et halogeneret carbonhydrid, såsom dichlormethan, en ether, såsom tetrahydrofuran eller di-oxan, eller et aromatisk carbonhydrid, såsom benzen eller 20 toluen). Alternativt kan kondensationen gennemføres indi rekte, f.eks. ved kondensering af et alkylcarbonat af forbindelsen (IV) med forbindelsen (V).

Forbindelsen (VI) adskilles derpå, f.eks. under anvendel-25 se af højtryksvæskechromatografi ("HPLC") til fraseparering af forbindelsen (VII) med (S,S)-konfiguration. Denne bestemte diastereoisomer hydrolyseres derpå med nitrogen-peroxid eller et andet hydrolyseringsmiddel til opnåelse af forbindelsen (VIII), som er (2S)-isomeren af udgangs-30 keto-forbindelsen med formlen (IV).

Man vil kunne forstå, at anvendelsen af aminen med formlen (V) ikke er nødvendig, og at der kan findes andre midler til optisk adskillelse af (2S)-isomeren med form-35 len (VIII) fra det racemiske udgangsmateriale med formlen (VI).

DK 162166 B

9

Den adskilte forbindelse (VIII) kan derpå reduceres med et reduktionsmiddel, som vil reducere keto-gruppen uden at reducere carboxylgruppen. Egnede reagenser er velkendte og inkluderer f.eks. et hydrid, såsom natriumborhydrid 5 eller natriumcyanoborhydrid i nærvær af et inert organisk opløsningsmiddel (f.eks. en ether, såsom tetrahydrofuran eller ethylether, et aromatisk carbonhydrid, såsom benzen eller toluen, eller et lignende opløsningsmiddel). Reduktionen giver den ønskede forbindelse med formlen (I).

10

Som vist i reaktionsskemaet for metode A, kan man derpå opnå trans-formen af syren ved adskillelse af forbindelsen med formlen (I). Således kan blandingen af forbindelserne (II) og (III) opnås ved HPLC af forbindelsen (I).

15

Som vist i metode B, opnås forbindelsen med formlen (II) ved optisk adskillelse af et delvis optisk adskilt udgangsmateriale, en blanding af (2S,1"R)- og (2S,l"S)-iso-mere kendt som erythro-formen. I dette tilfælde anvendes 20 erythro-formen (X) af forstadie-keto-forbindelsen (IV), hvilket giver (2S,1"R)-forstadiet (XI), som hydrolyseres og derpå reduceres til en blanding af (2S,1"R,2"R) og 2S,2R,2"S), som derpå adskilles til opnåelse af den ønskede (2S,1"R,2"S)-isomere af syren, (2S)-2-{4-[(lR,2S)-2-25 hydroxycyclopentan-l-ylmethyl]phenyl}propionsyre.

Ved en nærmere betragtning af den belysende reaktionsfølge, der er vist i reaktionsskemaet for metode B, kan ery-thro-formen af forbindelsen (IV), dvs. forbindelsen (X), 30 opnås ved gentagen omkrystallisation af forbindelsen (IV) fra et egnet organisk opløsningsmiddel (f.eks. en ester, såsom ethylacetat, et aromatisk carbonhydrid, såsom benzen eller toluen, en ether, såsom ethylether eller tetrahydrofuran, en alkohol, såsom methanol eller ethanol, el-35 ler en blanding af et eller flere af disse opløsningsmidler og et eller flere alifatiske carbonhydrider, såsom hexan, ligroin, petroleumsether). Forbindelsen (X) omsæt-

DK 162166 B

10 tes derpå med den optisk aktive forbindelse (V) på tilsvarende måde, som beskrevet i forbindelse med metode A. Adskillelse af amido-forbindelsen ved HPLC eller en anden procedure giver derpå d-erythro-formen, forbindelsen 5 (XI). Forbindelsen (XI) kan derpå hydrolyseres til opnå else af den optisk adskilte keto-forbindelse med formlen (XII). Hydrolysen kan frembringes på samme måde, som beskrevet for metode A.

10 Forbindelsen (XII) kan derpå reduceres som i metode A, hvilket giver en blanding, som kan adskilles i cis- og trans-forbindelsen, f.eks. under anvendelse af HPLC, hvilket giver den ønskede forbindelse (II) med (2S,1"R,2"S)-konfiguration.

15

Som en afspejlning af de foretrukne procedurer, som er indeholdt i metode A og B, angår opfindelsen yderligere en fremgangsmåde til fremstilling af de omhandlede forbindelser, som er ejendommelig ved, at man eventuelt ad-20 skiller forbindelsen (IV) til dannelse af erythro-formen, adskiller den eventuelt adskilte forbindelse (IV) i 2-stillingen til opnåelse af den isomer af forbindelsen (IV) eller af erythro-formen, som har (2S)-stereokemisk-konfiguration, reducerer til opnåelse af den tilsvarende 25 isomer af forbindelsen (I), og eventuelt adskiller til opnåelse af forbindelsen (II) alene eller i blanding med den anden trans-isomer, alt efter tilfældet. Det eventuelle afsluttende trin giver forbindelsen (II) i blanding med den anden isomer, når det første eventuelle adskil-30 lelsestrin er udeladt.

Ligegyldigt ved hvilken udførelsesform af fremgangsmåden ifølge opfindelsen forbindelser er fremstillet, kan de om ønsket, omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt.

35 Eksempler på egnede salte inkluderer alkalimetal- eller jordalkalimetalsalte, såsom natrium- eller calciumsalte, aluminiumsalte, ammoniumsalte, salte med organiske baser,

DK 162166 B

11 såsom triethylamin, dicyclohexylamin, dibenzylamin, morp-holin, piperidin eller N-ethylpiperidin, eller salte med basiske aminosyrer, såsom lysln eller arginln.

5 De følgende eksempler 1 og 2 belyser fremgangsmåden Ifølge opfindelsen.

EKSEMPEL 1 10 (2S)-2-[4-(2-hydroxycyclopentan-1-ylmethy1)phenyl]propi- onsyre (forbindelse (I)) og dens trans-form 1,2 g 2-[4-(2-oxocyclopentan-l-ylmethyl)phenyl]propionsy-re, 1,1 g pyridindisulfid og 1,31 g triphenylphosphin 15 blev opløst i 10 ml methylenchlorid. Den resulterende opløsning blev omrørt under isafkøling i 10 minutter. 0,6 g 1-a-phenylethylamin (dvs. den tænkte S-isomere) blev sat til opløsningen, som derpå blev omrørt ved stuetemperatur i 30 minutter. Methylenchloridet blev afdestilleret, og 20 inddampningsresten blev chromatograferet under anvendelse af højtryksvæskechromatografi, hvilket gav 3,0 g af forbindelsen (VII), (S)-a-phenylethylamidet af udgangssyren, som i øvrigt kan betegnes som 1-a-phenylethylamidet af udgangssyren.

25 28 g natriumacetat blev suspenderet i 160 ml carbontetra-chlorid. Den resulterende suspension blev afkølet til -78 °C, og der tilsattes 25 ml carbontetrachloridopløsning indeholdende 1,5 mol nitrogenperoxid. Blandingen blev 30 derpå omrørt i 10 minutter ved 0 °C, der sattes 3,0 g af den ovenfor fremstillede forbindelse (VII) til blandingen, og det resulterende system blev omrørt i 2 timer ved 0 °C. Derpå tilsattes 103 ml vand, og carbontetrachlorid-laget blev skilt fra, vasket med vand og opvarmet under 35 tilbagesvaling i 40 minutter. Carbontetrachloridet blev derefter afdestilleret, og inddampningsresten blev renset ved søjlechromatografi på silicagel, hvilket gav 800 mg 12

DK 162166 B

krystaller. Krystallerne blev omkrystalliseret fra ether-hexan, hvorved der blev opnået 720 mg krystaller af forbindelsen (VIII), (2S)-2-[4-(2-oxocyclopentan-I-ylme-thyl)phenyljpropionsyre, der smeltede ved 57-59 °C. Den 5 optisk adskilte forbindelse (VIII) blev opløst i 15 ml tetrahydrofuran, og derpå tilsattes 400 ml natriumcyano-borhydrid. Blandingen blev holdt ved pH 3 ved hjælp af 3N-methanol/saltsyre under isafkøling og blev derpå omrørt i 40 minutter. Derpå tilsattes isvand, og blandingen 10 blev ekstraheret med ether. Etherekstrakten blev tørret over natriumsulfat, og opløsningsmidlet afdestilleret, hvilket gav 680 g af forbindelsen (I) med ikke-adskilte 1"- og 2"-stillinger. Efter vor alternative terminologi er denne blanding en blanding af cis- og trans-forbindel-15 serne.

Produktet blev omkrystalliseret fra ethylacetat-hexan, hvilket gav krystaller af forbindelsen (I), der smeltede ved 126-130 °C. Krystallerne viste ikke altid et konstant 20 smeltepunkt, når de smeltede med forskellige blandinger, i hvilke mængdeforholdet mellem cis-forbindelsen og trans-forbindelsen var varieret.

Det krystallinske produkt blev derpå underkastet høj-25 tryksvæskechromatografi til opnåelse af trans-forbindel sen [(2S,1"R,2"S)- og (2S,1"S,2"R)-isomerne, henholdsvis forbindelse (II) og forbindelse (III)]. Den blev derpå omkrystalliseret fra ether-hexan, hvilket gav krystaller, der smeltede ved 87-95 °C.

30

Grundstofanalyse

Beregnet for ci5H20°3: C 72'55' H 8,12 Fundet: C 72,39, H 8,11.

35

DK 162166 B

13 EKSEMPEL 2 (ZS)-2-{4-[(IR,2S)-2-hydroxycycIopentan-l-ylmethylJphenyl }proplonsyre (forbindelse II)) 5 2-[4-(2-oxocyclopentan-l-ylmethyl)phenyl]propionsyre blev omkrystalliseret adskillige gange fra ethylacetat-hexan til opnåelse af en (2S,1"R),(2R,1"S)-blanding, forbindelse (X), som smeltede ved 108,5-111 °C. Ved analogi kalder 10 vi også denne forbindelse (X) erythro-formen af forbindelse (IV).

Man fremstillede derpå 1-a-phenylethylamidderivatet af forbindelsen (X) under anvendelse af den samme procedure 15 som i eksempel 1, og det blev underkastet optisk adskillelse under anvendelse af højtryksvæskechromatografi> hvilket gav 1-amidet af (2S,1"R)-forbindelsen, nemlig forbindelse (XI). Dette produkt blev derpå behandlet med nitrogenperoxid på samme måde som i eksempel 1, og de» 20 resulterende syre blev omkrystalliseret fra ether-hexan* hvilket gav (2S,1"R)-isomeren, forbindelse (XII), άφτ smeltede ved 61-62 °C.

123 mg af forbindelsen (XII) og 75 mg natriumcyanborhy* 25 drid blev opløst i 1,5 ml methanol. Den resulterende op* løsning blev indstillet til pH 3 med 6N saltsyre under isafkøling. Efter at opløsningen var blevet omrørt i 40 minutter, tilsattes isvand, og det resulterende system blev ekstraheret med ether. Etherekstrakten blev vasket 30 med vand, tørret og opløsningsmidlet afdestilleret til opnåelse af krystaller, som blev underkastet højtryksvæs-kechromatografi. Denne adskillelse af de isomere gav den Ønskede (2S,1"R,2"S)-forbindelse med formlen (II). Produktet blev omkrystalliseret fra ethylacetat-hexan, hvil-35 ket gav 40 mg krystaller af forbindelsen (II), der smeltede ved 87-88 °C.

DK 162166 B

14

Grundstofanalyse

Beregnet for ci5H20°3: C 72,55, H 8,12 Fundet: C 72,41, H 8,24.

5 De omhandlede forbindelsers kraftige aktivitet belyses af den følgende rapport angående farmakologisk afprøvning.

Farmakologisk afprøvning 10 De omhandlede forbindelsers inhiberende aktiviteter ved prostaglandin-biosyntese blev afprøvet ved sammenligning med indomethacin for at bedømme aktiviteten som analge-tisk og/eller antiinflammatorisk middel.

15 Mikrosom-prøvninger blev gennemført i overensstemmelse med metoderne angivet af E. Takeguchi, E. Kohno, C. J.

Sih: Biochemistry 10, 2372 (1971), "Preparation of bovine seminal vesicle" og af R. J. Flower, H. S. Cheung, D. W. Cushman: Prostaglandins 4, 325 (1973), "Pharmacological 20 action system".

De forbindelser, som skulle afprøves, blev sat til et system omfattende mikrosom-prostaglandin-biosyntese-enzym (1 mg/ml), som var fraktioneret udfra bovine sæd-vesik-25 ler, glutathion (2 mM), epinephrin (1 mM) og trisaminome-thansaltsyre bufferopløsning pH 7,6 (0,1 M). Blandingen blev henstillet ved 30 °C i 5 minutter, og der tilsattes 14 kommercielt tilgængeligt C-arachidonsyre (10 μΜ, 1850-2220 Bq). Den resulterende opløsning blev holdt ved 30 °C 30 i 10 minutter, og reaktionen blev derpå stoppet ved tilsætning af 0,1 N saltsyre. Efter ekstraktion af reaktionsblandingen blev ekstrakten adskilt ved tyndtlags-chromatografi over silicagel til opnåelse af prostaglandin, som var produceret. Hovedproduktet, prostaglandin 35 E2, blev målt under anvendelse af en væskescintillations-tæller i overensstemmelse med metoden angivet af L. Levine et al.: Journal of Biological Chemistry 246, 6782 15

DK 162166 B

(1971). De inhiberende aktiviteter blev bedømt ved hjælp af radioaktivitetsforholdet mellem prøven og en blindprøve.

5 Resultaterne er anført i den efterfølgende tabel 1.

De afprøvede forbindelsers inhibering af prostaglandin-biosyntesen blev bedømt ved en in vivo metode under anvendelse af dyrkede celler som beskrevet af P. J. Carty 10 et al., Prostaglandins 1ί), 51 (1980). Som dyrkede celler anvendtes 3T6 celler fra musefibroblaster.

I en Petriskål af plast (35 mm indre diameter) blev dyrket ca. 600 000 3T6 celler ved 37 °C i 48 timer under an-15 vendelse af et minimalkravsmedium af varmærket "Darbec-co". Efter dyrkningen blev cellerne skilt fra, vasket og derpå bragt i kontakt med det samme medium, som dog indeholdt prøveforbindelsen. Efter kontakt i 2 timer blev mediet skilt fra og cellerne vasket. Mediet indeholdende 5 20 ug/ml arachidonsyre og prøveforbindelsen blev tilsat. Dyrkningen fik lov at fortsætte i 1 time, og derpå blev koncentrationen af prostaglandin E2 i mediet bedømt ved radioimmunoanalyse.

25 Resultaterne er ligeledes anført i tabel 1.

30 35 16

DK 162166 B

TABEL 1

Inhibering af PG-biosyntese-enzym-aktivitet 5 - ---

Bovint sædblære- Cellekultur

Forbindelse mikrosom IC^q (μΜ) IC^q (μΜ) I 72 II + III 13 II 9 0,25 IM 0,4 0,34 io __11__:_

Forbindelserne (I), (II) og (III) er som defineret ovenfor, medens forbindelsen IM er indomethacin. Blandingen af (II) og (III) var i forholdet 50:50.

15

Som det fremgår af de ovenstående resultater af de farmakologiske afprøvninger, viser forbindelsen med formlen (I) , og især den isomer, som er forbindelsen med formlen (II) , og deres farmakologisk acceptable salte sig at være meget lovende som analgetiske og/eller antiinflammatoris-ke midler. Resultaterne af afprøvningen in vivo er særlig signifikante, idet de indikerer bedre aktivitet for forbindelsen (II) i sammenligning med indomethacin.

I en artikel af Keiichi Matsuda et al. i Biochemical 25

Pharmacology, Vol. 33, No. 15, side 2473-2478 (1984), er forbindelsen fra eksempel 1 i US patentskrift nr.

4 161 538 i form af dens natriumsalt-dihydrat (i artiklen betegnet CS-600) blevet undersøgt og sammenlignet med bl.a. de syntetisk fremstillede stereoisomere af trans-30 formen af den tilsvarende 0H-forbindelse, nemlig (2S, 1"R, 2"S)-isomeren og (2S, 1"S, 2"R)-isomeren, som er henholdsvis forbindelsen (II) og forbindelsen (III) fremstillet ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende op- 35 DK 162166 8 17 findelse, samt (2R, 1"R, 2"S)-isomeren og (2R, 1"S, 2"R)-isomeren, som ikke fremstilles ifølge den foreliggende opfindelse.

5 Forbindelserne blev afprøvet for inhiberende virkning på prostaglandinsynthetase i bovine sædblæremikrosomer som angivet i artiklen, og der blev fundet følgende IC5Q værdier for inhibering af PGE2-produktion: 10 --

Forbindelse IC™ (μΜ) CS-600 (US 4 161 538) 760

Isomere trans-OH forbindelser: 2S, 1"R, 2"S (II) 9 2S, 1"S, 2"R (III) 90 2S, 1"R, 2"S > 1000 15 2R, 1"S, 2"S > 1000

Det ses, at forbindelsen CS-600 (ifølge US 4 161 538) kun viste svag inhibering af prostaglandinsynthetase, mens de 20 to (2S)-isomere trans-OH forbindelser fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, og især forbindelsen (II) har en langt kraftigere inhiberende virkning, og de to (2R)-isomere trans-OH forbindelser ikke har nogen virkning.

25

De i eksempel 1 og 2 fremstillede produkter, henholdsvis forbindelse (I) og forbindelse (II), blev afprøvet for antiinflammatorisk aktivitet i sammenligning med produktet fra eksempel 1 i US patentskrift nr. 4 161 538, 2-[4-30 (2-oxocyclopentan-1-ylmethyl)phenyl]propionsyre, og pro duktet fra eksempel 3 i US patentskrift nr. 4 254 274, 2-[4-(2-oxo-l-cyclopentylidenmethyl)phenyl]propionsyre, ved carrageenin-ødem-metoden under anvendelse af rotter af Wistar-stammen (C.A. Winter et al., J. Pharmacol. Exp.

35

DK 162166 B

18

Therap. 141, 369 (1963)).

Prøveforbindelse_ID^q (mg/kg) 5 Produktet fra eksempel 1 1,8 (forbindelse I)

Produktet fra eksempel 2 1,3 (forbindelse II) 10 -

Produktet fra eksempel li 1,2 US 4 161 538 15 Produktet fra eksempel 3 i 1,5 US 4 254 274

Af disse prøvningsdata ses, at de ved fremgangsmåden 20 ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser har en anti-inflammatorisk akvititet af samme størelse som de forbindelser, der kendes fra US patentskrifterne nr. 4 161 538, og 4 254 274.

25 I betragtning af de omhandlede forbindelsers styrke er de velegnede til anvendelse i form af et farmaceutisk præparat, som indeholder en eller flere af de omhandlede forbindelser sammen med et farmaceutisk medium, som kan omfatte et fortyndingsmiddel, bindemiddel, sprængmiddel, 30 glittemiddel og/eller smagskorrigens.

Præparaterne kan sammensættes til indgivning på forskellige måder. Således kan forbindelserne f.eks. indgives peroralt i form af tabletter, kapsler, granulater, pulve-35 re eller sirupper, eller de kan indgives rektalt i form af suppositorier. En af de andre mulige metoder til indgivelse er topisk påføring, og til dette formål vil det 19

DK 162166 B

farmaceutisk medium omfatte en topisk base.

Doseringen af forbindelsen vil afhænge af patientens tilstand, alder og vægt, blandt andre faktorer, men vil sæd-5 vanligvis være fra ca. 30 til ca. 300 mg pr. dag pr. voksen person taget i en enkelt dosis eller i opdelte doser.

Det efterfølgende eksempel 3 belyser sammensætninger af 10 sådanne præparater.

EKSEMPEL 3

Kapsler til peroral indgivning 15

Bestanddel Vægtdele (2S)-2-4[(IR,2S)-2-hydroxy-cyclopentan-1-ylmethyl)phenyl]- 25 propionsyre, forbindelse (II) 20

Lactose 173,5

Majsstivelse 100

Magnesiumstearat 1,5

Total 300 25

Materialerne blev sammenblandet i de foreskrevne mængdeforhold som pulvere og sendt igennem en sigte med maskevidde 0,84 mm. 300 mg af det sammenblandede pulver blev anvendt til hver gelatinekapsel nr. 3.

30 35

Claims

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af (2S)-isomere 5 af 2-[4-(2-hydroxycyclopentan-l-ylmethyl)phenyl]propion- syre eller farmaceutisk acceptable salte deraf, kendetegnet ved, at man adskiller en (2S)-isomer af denne syre eller af et forstadium til denne syre fra en blanding af (2S)- og (2R)-isomere og om nødvendigt omdan-10 ner det fraskilte forstadium til den tilsvarende (2S)-isomer af syren, hvorpå den opnåede forbindelse, om ønsket, overføres i et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at adskillelsen gennemføres på racemisk udgangsmateriale, og at fremgangsmåden giver en forbindelse med formlen (I) OH \J YVcooh (I) 25 Γ013 25 (I eller et salt deraf. 30

3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at blandingen yderligere adskilles til opnåelse af trans-forbindelsen.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at adskillelsen gennemføres på en erythro-blanding af (2S,1"R)- og (2R,1"S)-isomere, og at fremgangsmåden ηκ' 162166 Β med en yderligere adskillelse giver forbindelsen med formlen (II) s ω 2>« (YihV^ \ Λ L il 2 COOH " 11 1 „ * eller et salt deraf.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af en 15 forbindelse med formlen (I) OH 20 (I) H 25 eller en adskilt form deraf, kendetegnet ved, at man eventuelt adskiller en forbindelse med formlen (IV) 0 30 i' M ^XK~C00H (15 ) CH3 35

22 DK 162166 B til opnåelse af erythro-formen, adskiller den eventuelt adskilte forbindelse (IV) i 2-stillingen til opnåelse af den isomer af forbindelsen (IV) eller af erythro-formen, .¾ som har (2S)-stereokemisk konfiguration, reducerer til 5 opnåelse af den tilsvarende isomer af forbindelsen (I), og eventuelt adskiller til opnåelse af trans-formen.

6. Fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at såvel den eventuelle adskillelse af forbindelsen 10 (IV) som eventuelle trans-adskillelse er inkluderet, hvilket giver forbindelsen med formlen (II)s OH^ 2M 15 \_/v Γ COOH H (11. H 20

7. Fremgangsmåde ifølge krav 5 eller 6, kendetegnet ved, at forbindelsen med formlen (I) eller den adskilte form deraf overføres i et salt deraf. 25 30 35