DK161645B - 2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-oxyiminoeddikesyrederivater til anvendelse som mellemprodukter ved fremstilling af beta-lactamantibiotika - Google Patents

Description

i

DK 161645 B

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte 2-(2-chloracetamido-thiazol-4-yl)-2-oxyiminoeddikesyrederivater til anvendelse som mellemprodukter ved fremstilling af β-lactamantibiotika, især hidtil ukendte 7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]-cephalo-sporinderivater med formlen NBL S.

Λ I I 3 N i-N Λ-CH R (I)

\ QT Y

OR6 ‘

COOH

3 hvori R er hydrogen eller en rest af en nucleofil forbindelse, og R^ betyder hydrogen eller methyl, eller farmaceutisk acceptable salte eller estere deraf.

Forbindelserne ifølge opfindelsen er ejendommelige ved, at de har den almene formel C1CH-C0NH σ Y\ I I (MI)

N_....J1-C-C00H

II

N

\>R6 g hvori R betyder hydrogen eller methyl, eller er et salt, en lav-alkylester eller et reaktionsdygtigt derivat deraf.

Udviklingen af syntetiske cephalospinderivater har været rettet mod omdannelsen af 7-aminocephalosporansyre til forskellige acylderiva-ter i 7-stillingen eller mod derivater i 3-stillingen for at tilvejebringe forbindelser med et bredt antibakterielt spektrum eller et specifikt antibakterielt spektrum. Imidlertid har de kendte cephalosporinderivater ikke tilfredsstillende antibakteriel virkning.

Fra tysk patentskrift nr. 2.462.736 kendes cephalosporinderivater, som er nært beslægtede med cephalosporinderivaterne med formlen I. Blandt disse kendte cephalosporinderivater kan nævnes handels- 2

DK 161645 B

produktet "CEFOTIAM". Det har vist sig, at de omhandlede cephalo-sporinderivater med formlen I har en overraskende god antibak-teriel virkning i forhold til de kendte, nært beslægtede cephalo-sporinderivater, hvilket illustreres nærmere i det følgende.

Cephalosporinderivatet med formlen Γ synes at have en tautomer form, d.v.s. en 2-aminothiazolforbindelse og en 2-iminothiazolinforbindel-se, som vist nedenfor, skønt det beskrives som thiazolforbindelsen i denne beskrivelse.

»2«-/) /S.

N_Il-C-CONH-_Y \ \ och3 u Y ^

COOH

;hn S

v\

N_!1 -C-CONH-_/ Y

H N li PR r3

'och3 /-y-c^R

COOH

Medens ca-rboxylgruppen i 4- stillingen i forbindelsen med· formlen I kan være fri, kan den danne et salt, f.eks. med en ikke-toksisk kation, såsom et alkalimetal, f.eks. natrium eller kalium, en basisk aminosyre, f.eks. arginin, ornithin, lysin eller histidin, eller en polyhydroxyalkylamin, f.eks. N-methylglucamin, diethanolamin, tri-ethanolamin eller trishydroxymethylaminomethan. Forbindelsen I kan danne et surt salt med en uorganisk syre, såsom saltsyre og svovlsyre, eller med en organisk syre, såsom toluensulfonsyre og benzensulfon-syre. 4-Carboxylgruppen kan også være en af de biologisk aktive esterformer, som f.eks. bidrager til forhøjelse af blodniveauet og til forlænget virkning. Sådanne estergrupper omfatter lavalkoxymethyl-grupper, f.eks. methoxymethyl, ethoxymethyl, isopropoxymethyl, a-me-thoxyethyl og a-ethoxyethyl, a-lavalkoxy-a-substituerede methyl-grupper, såsom α-lavalkoxy-(C^_^)-ethyl (f.eks. methoxyethyl, ethoxy-ethyl, propoxyethyl og i-propoxyethyl), lavalkylthiomethylgrupper med

DK 161645 B

3 1 til 3 carbonatomer, f.eks. methylthiomethyl, ethylthiomethyl og isopropylthiomethyl, acyloxymethylgrupper, f.eks. pivaloyloxy-methyl og a-acetoxymethyl, ethoxycarbonyloxy-l-methylmethyl, eller a-acyloxy-a-substituerede methylgrupper (f.eks. a-acetoxy-α-methylmethyl).

Forbindelserne I er således nye forbindelser, som viser udmærket aktivitet over for et bredt spektrum af bakterier inklusive gram-negative, såsom Escherichia coli, Serratia marcescens, Proteus rettgeri, Enterobacter cloacae og Citrobacter freundii, og som er resistente mod β-lactamase. Forbindelsen I kan f.eks. anvendes som desinfektionsmiddel til fjernelse af de førnævnte mikroorganismer fra kirurgiske instrumenter eller som antiinfektiøst middel, f.eks. til behandling af intraperitoneale infektioner, luftvejsinfektioner, urinvejsinfektioner og andre infektionssygdomme, forårsaget af de førnævnte mikroorganismer.

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse kan omdannes til β-lactamantibiotika ved en per se kendt fremgangsmåde.

(1) Således fremstilles cephalosporinderivatet med formlen I ved acylering af 7-aminogruppen i en 7-aminocephalosporinforbindelse med formlen V-I-A (II) N J-CH2r3

° T

COOH

hvori har den tidligere angivne betydning, med en 2-(2-aminothia-zol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoeddikesyre med formlen C1CELC0NH-

I I

N U-C-COOH (III) r ^Or6 efterfulgt af fjernelse af den beskyttende gruppe fra aminogruppen (proces I).

4 DK 161645 B

I denne proces anvendes forbindelsen III enten som en fri forbindelse eller i form af et reaktivt derivat som acyleringsmiddel for acyle-ringen af aminogruppen i 7-stillingen i forbindelse II. Således underkastes den frie syre III,et alkali- eller jordalkalimetalsalt af den frie syre III (f.eks. et natrium-, kalium- eller calciumsalt), et organisk aminsalt af den frie syre III (f.eks. et trimethylaminsalt eller pyridinsalt) eller et reaktivt derivat deraf, såsom et syre-halogenid (f.eks. syrechlorid eller syrebromid), syreanhydrid, bian- | det syreanhydrid, aktivt amid eller en aktiv ester den førnævnte acyleringsreaktion. Som eksempler på denne aktive ester kan nævnes p-nitrophenylesteren, 2,4-dinitrophenylesteren, pentachlorphenyl-esteren, N-hydroxysuccinimidesteren og N-hydroxyphthalimidesteren.

Som eksempler på det blandede syreanhydrid kan nævnes et blandet syreanhydrid med en kulsyremonoester {f.eks. kulsyremonomethylester eller kulsyremonoisobutylester) og et blandet syreanhydrid med en lavalkan-syre, som kan være substitueret med halogen (f.eks. p_ivalinsyre eller trichloreddikesyre). Når carboxylsyren III anvendes som. den frie syre eller i form af et salt, anvendes der et passende kondensationsmiddel. Som eksempler på dette kondensationsmiddel kan nævnes N,Nf-disubstituerede carbodiimider,. f.eks* N^Nt-dicyclohexylearbodiimid, azolider, f.eks. N,N1 -carbonylimidazol og N,NT-thionyldiimidazol, dehydreringsmidler, f.eks. N-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydro-quinolin, phosphoroxychlorid og alkoxyacetylen og 2-halogenpyridini-umsalte (f.eks. 2-chlorpyridiniummethyliodid' og 2-fluorpyridinium-methyliodid). Når et sådant kondensationsmiddel anvendes, antages det, at reaktionen forløber via det reaktive derivat af carboxylsyren III. Reaktionen udføres almindeligvis'i et passende inert opløsningsmiddel.

Som eksempler på et sådant opløsningsmiddel kan nævnes halogenerede . carbonhydrider, f.eks. chloroform og methylendichlorid, ethere, f.eks. tetrahydrofuran og dioxan, dimethylformamid, dimethylacetamid, ace-' tone, vand og blandinger af sådanne opløsningsmidler. Mængden af det nævnte acyleringsmiddel er normalt indenfor området fra ca. 1 til 5, fortrinsvis 1 til 2 molækvivalenter,beregnet på forbindelsen II. Denne reaktion udføres almindeligvis ved en temperatur i området på fra -50°C til +40°C. Reaktionstiden er fra 1 til 10 timer, fortrinsvis 1 til 3 timer. Efter acyleringsreaktionen kan beskyttelsesgruppen for aminogruppen om nødvendigt fjernes. Fjernelsen af beskyttelsesgruppen for aminogruppen kan almindeligvis udføres ved per se kendte fremgangsmåder (f.eks. den fremgangsmåde, som er beskrevet i det

5 DK 161645 B

japanske offentliggørelsesskrift nr. 520^3/1975 og i Pure and

Applied Chemistry, 7, 335 (1963),eller en dertil analog fremgangs- 2 måde. Det skal forstås, at når R i formlen I er monohalogenacetyl (f.eks. monochloracetyl) og R? en carbamoyloxygruppe, hvis amino- gruppe er beskyttet, såsom N-monohalogenacetylcarbamoyloky (f.eks. N- monochloracetylcarbamoyloxy), kan disse to monohalogenacetylgrupper (f.eks. monochloracetylgrupper) fjernes samtidigt. I denne betydning 2 er beskyttelsesgruppen R ' for aminogruppen fortrinsvis en mono-halogenacetylgruppe. Reaktionen til fjernelse af monohalogenacetyl-gruppen fra aminogruppen udføres ved omsætning af en forbindelse med formlen I, hvis aminogruppe eller -grupper er beskyttet med monohalogenacetyl med thiourinstof og et basisk stof. Normalt udføres denne reaktion i et opløsningsmiddel ved en temperatur nær stuetemperatur, og den forløber i mange tilfælde fuldstændigt i løbet af ca.l til 10 timer. Opløsningsmidlet kan være ethvert opløsningsmiddel, som ikke interfererer med denne reaktion. Således kan nævnes ethere, f.eks. ethylether, tetrahydrofuran og dioxan, lavere alkoholer, f. eks. methanol og ethanol, halogenerede carbonhydrider, f.eks. chloroform og methylendichlorid, estere, f.eks. ethylacetat og butylacetat, ketoner, f.eks. acetone og methylethylketon, vand og forskellige blandinger af sådanne opløsningsmidler.

Denne reaktion til fjernelse af N-halogenacetylgruppen fra N-mono-halogenacetylcarbamoyloxymethylgruppen i 3-stilling i forbindelsen I forløber ikke i væsentlig udstrækning, hvis man lader thiourinstof alene indvirke på forbindelsen I. Hvis forbindelsen I imidlertid omsættes med thiourinstof og et basisk stof, forløber den ønskede reaktion til fjernelse af monohalogenacetylgruppen selektivt og glat under dannelse af 3-carbamoyloxymethylforbindelsen I. Som basisk stof til anvendelse i denne reaktion kan nævnes et alkali- eller ' jordalkalimetalsalt af en lavaliphatisk carboxylsyre eller en uorganisk eller organisk base med en pKa-værdi på ikke under 9,5,fortrinsvis indenfor området pKa 9,3 til 12,0. Som eksempler på dette salt af en lavaliphatisk carboxylsyre kan nævnes saltene af lavaliphatiske carboxylsyrer med 1 til 6 carbonatomer, såsom natriumacetat, kaliumacetat, calciumacetat, bariumacetat, natriumformiat, natriumpropionat og kaliumhexanoat. Som eksempler på den uorganiske base kan nævnes alkalimetalsaltene af kulsyre, såsom natriumcarbonat og kalium-carbonat. Den organiske base kan f.eks. være en af de mono-,di-eller tr:

6 DK 161645 B

lavalkylsubstituerede amineT~,hvis lavalkyldel har 1 til 4 carbonato-mer, f.eks. trimethylamin, triethylamin, ethylamin, methylamin, di-ethylamin, dimethylamin, tributylamin, dibutylamin og butylamin, og 5- til 6-leddede cycliske aminer substitueret i N-stillingen med lavalkyl med 1 til 2 carbonatomer, såsom N-methylpyrrolidin, N-ethylpyrrolidin, N-methylpiperazin og N-ethylpiperazin. Medens thio-urinstof anvendes i denne reaktion, kan reaktionen også med held gennemføres med N- eller N,N-substitueret thiourinstof, såsom methyl-thiourinstof, Ν,Ν-diethylthiourinstof eller N,N-hexamethylenthiourin-stof.

(2) 7-£2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamidoj-cepha-losporinderivatet med formlen

P S

R^NH- / \

li S

N_ϋ-C-CONH__/ \ (V) II } ?

'IT \ o J-^-0«2R

OCH- T

* COOH

2 5 hvori R betyder hydrogen eller chloracetyl, ,og R er en gruppe fra en nucleofil forbindelse, fremstilles ved omsætning af en forbindelse med formlen

2 A

r^nh-Zx jl I s N_11-C-CONH--/ \

N ;_N J-ChA

\ o^Y 2

0CH3 COOH

hvori R . har den tidligere angivne betydning, R^" er acyloxy, car-bamoyloxy eller halogen, med en nucleofil forbindelse, om nødvendigt efterfulgt af fjernelse af beskyttelsesgruppen for aminogruppen (proces 2) .

Som acyloxygruppe repræsenteret af i formlen TV kan f.eks. nævnes acyloxy afledt af en lavaliphatisk carboxylsyre med 2 til 4 carbon-

7 DK 161645 B

atomer, der om ønsket kan være substitueret med oxo, carboxy eller ethoxycarbamoyl, f.eks. acetyloxy, propionyloxy, 3-oxobutyryloxy, 3-carboxypropionyloxy, 3-ethoxycarbamoylpropionyloxy og 4-carboxy-butyryloxy, og acyloxy afledt af en aromatisk carboxylsyre, der om ønsket kan være substitueret med hydroxy, carboxy, carboethoxy-carbamoyl eller carboethoxysulfamoyl, f.eks. mandelyloxy, 2-carboxy-benzoyloxy, 2-(carboethoxycarbamoyl)-benzoyloxy og 2-(carboethoxysulf amoyl)-benzoyloxy. Halogenet repræsenteret af R^- kan f.eks. være chlor, brom eller iod. Gruppen fra en nucleofil forbindelse repræsenteret af R'* i formlen V betyder en gruppe fra en nucleofil forbindelse, som svarer til en gruppe fra en nucleofil forbindelse re's præsenteret af undtagen de acyloxygrupper, som repræsenteres af R^ og carbamoyloxy. Til den foreliggende reaktion er det imidlertid almindeligvis en fordel at anvende en forbindelse IV med en acyloxy-gruppe afledt af en lavaliphatisk carboxylsyre, såsom acetyloxy. Den nucleofile forbindelse,som anvendes i denne reaktion,er en forbindelse, der svarer til den gruppe fra en nucleofil forbindelse, som be-tegnes med symbolet R i formlen V. Særligt foretrukne er de hetero-cycliske thiolforbindelser, d.v.s. mercaptoforbindelser, som kan indeholde en substituent. Blandt de nucleofile forbindelser, der svarer til gruppen repræsenteret af R^, kan mercaptoforbindelser anvendes i deres frie form, skønt det er en fordel at anvende dem i form af alkalimetalsalte, f.eks. natrium- eller kaliumsalte. Denne reaktion udføres fortrinsvis i et opløsningsmiddel. F.eks. anvendes vand, deuterium eller et organisk opløsningsmiddel, som er let blandbart med vand,og som ikke reagerer med reaktanterne, f.eks. dimethyl-formamid, dimethylacetamid, dioxan, acetone, alkohol, acetonitril, dimethylsulfoxid og tetrahydrofuran.

Medens reaktionstemperaturen og -tiden varierer med sådanne faktorer ' som det anvendte udgangsmateriale og opløsningsmiddel, vælges de almindeligvis i området fra 0 til 100°C, fortrinsvis 30 til 70°C, og 2 til 4$ timer, fortrinsvis 3 til 15 timer. Reaktionen udføres fortrinsvis i nærheden af neutralpunktet og passende indenfor området fra ca. pH 2 til 8, fortrinsvis pH 5 til 8. Forløbet af denne reaktion kan undertiden gøres jævnt ved tilsætning af et kvaternært ammoniumsalt med overfladeaktivitet, såsom trimethyl-benzylammoniumbromid eller triethylbenzylammoniumbromid eller tri-ethylbenzylammoniumhydroxid. Desuden opnås mere tilfredsstillende

3 DK 161645 B

resultater, hvis reaktionen udføres i en inertgasatmosfære, såsom i nitrogen, for at forhindre luftens oxidation af mercaptoforbindelsen. : (3) Cephalosporinderivatet med formlen I kan også fremstilles ved at underkaste et 7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-hydroxyiminoacet-amido]-cephalosporinderivat med formlen 9 S R^HN- / \ |l I s N—'i;00”—I—( 4 (vi) H J—'\J-CH2R3'

\ 0 T

OH COOH

r> o hvori R·' og R har den tidligere angivne betydning, O-methylering.

O-Methyleringen udføres ved omsætning af forbindelsen VI med et methyleringsmiddel (proces 3)*

Denne Q-methyleringsreaktion udføres normalt i et opløsningsmiddel under isafkøling eller omkring stuetemperatur (0 til 40°C, fortrinsvis 5 til 30°C) og forløber i mange tilfælde fuldstændigt i løbet af ca. 5 minutter til 5 timer, fortrinsvis 5 minutter til 2 timer. Opløsningsmidlet kan være ethvert opløsningsmiddel, som ikke påvirker reaktionen, såsom en ether, f.eks. tetrahydrofuran og di-oxan,en lavere alkohol, f.eks. methanol og ethanol, et halogeneret carbonhydrid, f.eks. chloroform og methylenchlorid, en ester, f.eks. ethylacetat og butylacetat, et amid, f.eks. Ν,Ν-dimethylformamid og Ν,Ν-dimethylacetamid, vand og blandinger af sådanne opløsningsmidler. Methyleringsmidlet kan være et methyleringsmiddel, som er almindeligt anvendt i organisk kemi, såsom et methylhalogenid (f.eks. methyliodid og methylbromid), dimethylsulfat eller diazomethan.

Denne reaktion kan forløbe glat under tilstedeværelse af en egnet base, undtagen for diazomethans vedkommende. Som en sådan base anvendes normalt en uorganisk base, såsom et alkalimetalsalt af kulsyre (f.eks. natriumcarbonat, kaliumcarbonat) eller et alkalimetalhydroxid (f.eks. natriumhydroxid eller kaliumhydroxid). Hvor stabilite ten af forbindelse VI skal tages i betragtning,anvendes dog fortrinsvis natriumcarbonat, kaliumcarbonat eller lignende. Reaktionen kan

0 DK 161645 B

y også gennemføres i en puffer ved ca. pH 7,5 til S,5.

Cephalosporinforbindelserne I, som fremstilles ved de talrige fremstillingsprocesser, der er beskrevet i det foregående, kan hver især renses ved per se kendte fremgangsmåder, såsom søjlekromatografi, ekstraktion, fældning og omkrystallisation. Om nødvendigt kan hver af disse forbindelser behandles ved per se kendte fremgangsmåder for at opnå de ønskede salte, estere m.m.

Forbindelsen ifølge opfindelsen, dvs. 2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-oxoiminoeddikesyrederivatet III, kan f.eks. fremstilles ved de talrige forskellige fremgangsmåder, som er detaljeret beskrevet i det følgende.

(I) Først omsættes et 4-halogen-3-oxo-2-oxyiminosmørsyrederivat med formlen XCHPCOC-COOR7 N (VII) OR6 6 hvori X er halogen, f.eks. chlor eller brom, R° er hydrogen eller 7 methyl,og R' er et lavalkyl med 1 til 3 carbonatomer, f.eks. methyl, ethyl eller propyl,med thiourinstof, hvorved der opnås et 2-(2-amino-thiazol-4-yl)-2-oxyiminoeddikesyrederivat med formlen S.

H„N-/ \ 2 II I 7 N._1-c-coor' (VIII)

II

N

OR6 6 *7 hvori R og R' har den ovenfor angivne betydning. I de to tilfælde, hvor R er hydrogen henholdsvis methyl, opnås forbindelsen VIII normalt som en blanding af syn- og anti-isomere deraf. Denne reaktion udføres normalt ved omsætning af en forbindelse med formlen VII med thiourinstof i et organisk opløsningsmiddel, såsom ethanol, methanol eller tetrahydrofuran,ved omgivelsernes temperatur eller forhøjet temperatur (0-100°C, fortrinsvis 10-50°C). Reaktionstiden er fra 1 til

ίο DK 1616 4 5 B

30 timer, fortrinsvis 1 til 5 timer. Til isolering af den ønskede syn-isomer fra den resulterende blanding af syn- og anti-formerne af forbindelsen VIII kan en af de følgende fremgangsmåder med held følges. Disse fremgangsmåder omfatter således fraktioneret krystallisation, som udnytter forskellen i krystalliserbarhed eller opløselighed af de isomere af forbindelsen VIII som sådan, et salt af forbindelsen VIII af et hydrogenhalogenid (HBr- eller HCl-salt) eller et derivat af forbindelsen VIII med en beskyttelsesgruppe på dens 2-aminogruppe, idet beskyttelsesgruppen (f.eks. monochloracetyl eller dichloracetyl) er indført ved en per se kendt fremgangsmåde, isolering ved kromatografi og en sådan fremgangsmåde, at når forbindelsen VIII eller forbindelsen VIII med en beskyttelsesgruppe på dens 2-aminogruppe hydrolyseres i- esterdelen, ved en per se kendt fremgangsmåde til et carboxylsyrederivat med formlen III,alene syn-isomeren selektivt isoleres ved udnyttelse af forskellen i hydrolysehastighed mellem syn- og anti-isomerene.

I den sidstnævnte fremgangsmåde kan anti-isomeren, på grund af den højere hydrolysehastighed for anti-isomeren end for syn-isomeren, selektivt hydrolyseres og fjernes. Reaktionen ved hydrolyse af esterbindingen i forbindelsen VIII med eller uden en substituent på- dennes 2-aminogruppe udføres normalt under tilstedeværelse af en til flere molækvivalenter af et alkalimetalhydroxid, f.eks. kaliumhydroxid eller natriumhydroxid ved en temperatur på fra 0°C til stuetemperatur og i vand eller en blanding af vand og et med vand blandbart organisk opløsningsmiddel, f.eks. methanol, ethanol, acetone, tetra-hydrofuran, dioxan, Ν’,N-dimethylformamid eller N,N-dimethylacetamid. Hvis R^ i forbindelsen VIII er hydrogen, kan den isolerede syn-isomer omdannes til en syn-isomer af forbindelsen VIII, hvori er methyl, ved at underkaste den førstnævnte forbindelse VIII methyle-' ring. Denne methyleringsreaktion udføres normalt i et opløsningsmiddel under isafkøling eller ved temperaturer nær stuetemperatur og forløber i mange tilfælde fuldstændigt i løbet af nogle få minutter til flere timer. Opløsningsmidlet til dette formål kan være enhver type opløsningsmiddel, blot det ikke influerer på reaktionen.

Således kan f.eks. nævnes tetrahydrofuran, dioxan, methanol, ethanol, chloroform, methylendichlorid, ethylacetat, butylacetat, N,N-di-methylformamid, Ν,Ν-dimethylacetamid og vand såvel som blandinger af sådanne opløsningsmidler. Som methyleringsmiddel kan nævnes methyl-

11 DK 161645 B

halogenider, f.eks. methyliodid og methylbromid, dimethylsulfat og diazomethan, blot for at nævne nogle stykker. I alle tilfælde, undtagen hvis diazomethan anvendes, omsættes forbindelsen VIII, hvori R^ er hydrogen, med dette methyleringsmiddel under tilstedeværelse af en base, såsom et alkalimetalcarbonat (f.eks. natriumcarbonat eller kaliumcarbonat) eller et alkalimetalhydroxid (f.eks. natriumhydroxid eller kaliumhydroxid). Nogle af de fysiske konstanter for de således opnåede syn-isomere af forbindelserne III og VIII er vist nedenfor i sammenligning med de fysiske konstanter for de tilsvarende anti-isomere (se tabel 1).

Tabel 1.

NMR-Spektrum Smeltepunkt

Struktur (ppm) (°C)

A

syn- H2N"f ] 1 d6~DMS0 isomer jj_[ -C-GOOC^R. 6,SOs(5-H) 1$5,5 4 > ll,6s(0H)

X0H

S

anti- H2N-/\ I d6~DMS0 isomer N_!-C-COOCÆ 7,50s(5-H) 145,3 4 ^ ^ 12,5s(0H) HO^

S

syn- H2N- / 'v\ I CDCl^ 163 bil isomer J_J-c-COOC-fL· 6,74s(5-H) 164 H ^ ^ 4,02s(OCH3) xoch3

12 DK 161645 B

Tabel 1 forts.

NMR-Spektrum Smeltepunkt

Struktur (ppm) (°C)

S

anti- H2N-/\ I CDC13 114 til isomer N_!-C-COOC-Ης 7}43s(5-H) 115 |

II ^ 5 4,07s(0CH ) I

/ 3 CH30 s syn- H0N-/\ I CDC1, isomer —C—COOCH ^>74s(5—H) 104^9 I 3 4,02s(0CH3) XOCH3 s anti- H2N- / \ I CDC13 lsomer N_[ -C-C00CH-. 7j4^s(5-H) J 3 4,06s(OCH3) · CH3q/

S

syn- ClCH2C0NH-/\ I CDC13 111 til isomer |_[ -C-COOC-Ης 7,15s(5-H) 112 I 3 4,oos(och3) XOCH0 ' 5 S ' ’ anti- C1CH2C0NH- / N. I CDC13 Si til lsomer 1_11-0-0000,¾ 7,94s(5-H) 82 J, 2 5 4,10s(OCH3)

13 DK 161645 B

Tabel 1 forts.

NMR-Spektrum Smeltepunkt Struktur (ppm) (°C)

S

syn- CICEpCONH-/ \ I d6~DMS0 170 til isomer J_[I 7,57s(5-H) 171 ^C-COOH 3,95s(OCH3) å ^OCt^

S

anti- C1CH2C0NH- / \ I d6-DMS0 lS2 til isomer |_1-C-C00H #,00s(5-H) 1&3 4,OOs(OCH3) 0Η30κ

S

syn- C1CH2CQNH- / X I CDC13

isomer _[ -C-COOCH 7j24s(5-H) 130,S

J 3 4,02s(0CH3) xoch3 β anti- C1CH2C0NH- A I CDC13 isomer I_ll-O-COOCH, 8,02s(5-H) J, 3 4,12s(0CH3) CH30

Bemærkninger: s : singlet.

Methoxyimino-(hydroxyimino)-gruppen i nsyn"-isomeren er cis til carboxylgruppen og ,fanti"-isomeren trans til carboxylgruppen.

(II) Fremgangsmåden til selektiv fremstilling af forbindelse III

14 DK 161645 B

(syn-isomer) beskrives i det følgende. Medens den førnævnte omsætning af forbindelsen VII med thiourinstof giver en blanding af syn-og anti-isomere af forbindelse VIII, er anti-isomeren af forbindelsen VIII ofte fremherskende. Undersøgelser af betingelserne for denne ringslutningsreaktion kastede lys over de betingelser, der fører til en selektiv dannelse af den ønskede syn-isomer.Hvis omsætningen af forbindelsen VII med thiourinstof under dannelse af forbindelsen VIII således udføres under de i det foregående beskrevne betingelser, dannes syn- og anti-isomere normalt i et forhold på mellem 2 :9^ og 50:50.

Det har imidlertid vist sig, at hvis denne ringslutningsreaktion udføres i vand eller en blanding af vand og et med vand blandbart opløsningsmiddel, såsom methanol, ethanol, acetone, tetrahydrofuran, dioxan, Ν,Ν-dimethylformamid, N,N-dimethylacetami£l eller N-methyl-piperidon og under tilstedeværelse af et basisk stof, dannes syn-iso-meren af forbindelsen VIII selektivt (normalt i et forhold på ca.

$5:15 til 100:0). Som basisk stof, der er nyttigt til denne reaktion, kan nævnes alkali- eller jordalkalime tal salte af lavarlip'hatiske carboxylsyrer og uorganiske eller organiske baser med pKa-værdier på ikke under 9,5, fortrinsvis indenfor området - fra 9,S til 12,0. Som eksempler på disse lavaliphatiske carboxylsyresalte kan nævnes saltene af lavaliphatiske carboxylsyrer med 1 til 6 carbonatomer, såsom natriumacetat, kaliumacetat, calciumacetat, bariumacetat, natrium-formiat, natriumpropionat og kaliumhexanoat, medens de ovennævnte uorganiske baser omfatter alkalimetalsalte af kulsyre, såsom natrium-carbonat og kaliumcarbonat. Som de organiske baser kan nævnes trilav-alkylsubstituerede aminer, hvis lavalkyl har 1 til 4 carbonatomer,. såsom trimethylamin, triethylamin og tributylamin, og 5- til 6-ledde-de cydiske aminer substitueret i N-stillingen med lavalkyl med 1 til 2 carbonatomer, såsom N-methylpyrrolidin, N-ethylpyrrolidin, N-methylpiperazin og N-ethylpiperazin. Hvis nævnte Ν,Ν-dimethylformamid, N,N-dimethylacetamid eller N-methylpyrrolidon anvendes som opløsningsmiddel, er det ikke altid nødvendigt at til-sætte det førnævnte basiske stof. Reaktionstemperaturen og -tiden vælges almindeligvis i området fra 0 til 50°C, fortrinsvis 0 til 30°C, °g i området fra 1 til 30 timer, fortrinsvis 1 til 5 timer.

(III) Forbindelsen VIII (syn-isomer) kan også selektivt fremstilles

15 DK 161645 B

ved den følgende fremgangsmåde. Således har man, i videre søgen efter en fremgangsmåde til selektiv fremstilling af syn-isomeren,opdaget, at man ved omsætning af et 2-aminothiazol-4-ylglyoxylsyrederivat med formlen IX med O-methylhydroxylamin kan opnå syn-isomeren af methoxyiminoforbindelsen selektivt.

s\ C1CH CONH-/ \ i 7 (ix) n_U-c-coor'

II

o 7 hvori R har den ovenfor angivne betydning.

Normalt kan denne reaktion udføres glat i et egnet opløsningsmiddel ved en pH-værdi på ca. 4,0 til 9,0. Det nævnte opløsningsmiddel kan være enhver type opløsningsmiddel, med mindre det influerer på reaktionen. Således kan f.eks. nævnes ethere, såsom ethylether, tetra-hydrofuran og dioxan, lavere alkoholer, såsom methanol og ethanol, halogenerede carbonhydrider, såsom chloroform og methylendichlorid, estere, såsom ethylacetat og butylacetat, vand og blandinger af sådanne opløsningsmidler. Medens denne reaktion forløber omkring stuetemperatur, kan den accelereres ved opvarmning. Reaktionstemperaturen og -tiden vælges almindeligvis i området fra 0 til 100°C, fortrinsvis 0 til 50°C, henholdsvis området fra 1 til 10 timer, fortrinsvis 1 til 5 timer.

Udgangsmaterialet IX til denne reaktion kan fremstilles ved den i det følgende beskrevne reaktion. Således giver hydrolysen af en nitron-forbindelse med formlen

ClCH^ONH-j/8^ N_i-C-COOR7 (X) o-n-ch3 + η hvori R har den ovenfor angivne betydning, forbindelsen IX.

Denne hydrolysereaktion forløber glat under tilstedeværelse af en mineralsyre og udføres normalt i et opløsningsmiddel. Som eksempler 16

DK 161645 B

på denne mineralsyre kan nævnes saltsyre, svovlsyre og phosphorsyre. Opløsningsmidlet kan være af enhver ønsket type, som ikke influerer på reaktionen. Således kan nævnes ethere, f.eks. tetrahydrofuran og dioxan, alkoholer, f.eks. methanol og ethanol, ketoner, f.eks. acetone og methylethylketon, vand og blandinger af sådanne opløsningsmidler. Normalt udføres denne reaktion under isafkøling eller ved stuetemperatur. Udgangsmaterialet X kan opnås ved at underkaste en forbindelse med formlen VIII, hvori R^ er hydrogen,og hvis aminogrup-pe i 2-stillingen er beskyttet, methylering.

Betingelserne for denne methyleringsreaktion er i det væsentlige de samme, som de betingelser, hvorunder den førnævnte forbindelse VIII, hvori R^ er hydrogen,methyleres (sml. den førnævnte fremgangsmåde I).

Under de beskrevne methyleringsbetingelser giver methyleringen af syn-isomeren af forbindelsen VIU, hvori R^ er hydrogen,ikke nogen væsentlig mængde af denne nitronforbindelse X, men methyleringen af anti-isomeren af forbindelsen VIII, hvori R^ er hydrogen,, giver ni-tronforbindelsen X som et dominerende produkt.

Forbindelsen med formlen VII kan f.eks. fremstilles ved de fremgangs- : måder, som er beskrevet i Journal of Medicinal Chemistry, l6-, 97$ (1973), Helvetica Chimica Acta, _49, 26 (1966), Journal of the American Chemical Society, 60, 132$ (193$)>og tysk offentliggørelsesskrift nr. 2.556.736,eller ved fremgangsmåder, der ligner disse. Den i den foreliggende opfindelse anvendte forbindelse med formlen II kan f.eks. fremstilles ved en egnet fremgangsmåde valgt blandt de fremgangsmåder, der er beskrevet i USA-patent nr. 3.$75.151 og 3*697.515, tysk offentliggørelsesskrift nr. 2.461.47$, tysk offentliggørelsesskrift nr. 2.607.064 (hollandsk patentansøgning nr. 7.601.902), tysk offentliggørelsesskrift nr. 2.619.243, japansk offentliggørelsesskrift nr. 52.OS3/I975, tysk offentliggørelsesskrift nr. 2.46O.33I og nr.

2.46Ο.332, eller ved en hermed analog fremgangsmåde.

Forbindelsen IV kan f.eks. fremstilles ved den i belgisk patentskrift nr. 719.7IO beskrevne eller en dermed analog fremgangsmåde. Som alternativ kan den fremstilles ved anvendelse af den førnævnte fremgangsmåde 1) på forbindelsen III og forbindelsen II, hvori -CH0R^ er -C^R , som er opnåelig ved en af de ovennævnte fremgangsmåder til fremstilling af forbindelsen II eller dermed analoge fremgangsmåder. ‘Forbindelsen VI kan f.eks. fremstilles ved en fremgangsmåde analog med den i tysk offentliggørelsesskrift nr.2.556.736 beskrevne el-

17 DK 161645 B

ler ved omsætning af forbindelsen II med syn-isomeren af forbindel- £ sen VIII, hvori Ru er hydrogen.

Den foreliggende opfindelse belyses nærmere nedenfor under henvis-; ning til eksemplerne, idet eksemplerne 5-7 og 22-23 illustrerer fremstillingen af mellemprodukterne ifølge opfindelsen, eksemplerne 1-4 og 8-21 illustrerer fremstillingen af udgangsforbindelser, og eksemplerne 24-43 illustrerer anvendelsen af de omhandlede mellemprodukter til fremstilling af β-lactamantibiotika og disses biologiske virkning.I denne beskrivelse er "DMSO" en forkortelse for dimethylsulfoxid. Harpikser benævnt "Amberlite" er produkter fremstillet af Rohm & Haas Co. i USA. Alle temperaturer er ukorrigerede, og procentangivelser er vægt-%, hvis ikke andet er angivet. NMR-Spektrene blev målt med et Varian Model HA 100 (100 MHz) eller T60 (60 MHz) spektrometer med tetramethylsilan som intern eller ekstern reference, og alle δ-værdier er i ppm. Symbolet s står for singlet, d for dublet, t for triplet, q for kvartet, m for multiplet, og J er en koblingskonstant.

Eksempel 1 I en opløsning af 13,3 g natriumcarbonat i 120 ml vand opløses 10 g ethyl-3-oxo-2-hydroxyiminobutyrat, hvorefter der tilsættes 30 ml methanol. Blandingen afkøles med is, og der tilsættes dråbevis under omrøring 15,3 g dimethylsulfat i løbet af 3 minutter. Efter endt tilsætning fjernes isbadet, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 40 minutter. Reaktionsblandingen (pH-værdi 6 eller højere) ekstrahe-res to gange med ethylacetat,og ekstrakterne samles, vaskes med vand og tørres. Opløsningsmidlet afdampes derefter under reduceret tryk, og remanensen underkastes destillation under reduceret tryk. Ved ovennævnte fremgangsmåde opnås 9 g ethyl-3-oxo-2-methoxyiminobutyrat som en bleggul olie, der koger ved 56-61°C/0,3 til 0,4 mm Hg.

<

Elementæranalyse af Cy ΗχιΝΟ :

Beregnet: C 46,54 H 6,40 N 6,06

Fundet: C 46,41 H 6,51 N 7,96 NMR-Spektrum (60 MHz, i CDCl^) : 2,40 ppm (3H, s, CH^CO), 4,10 ppm (3H, s,=N0CH3).

Eksempel 2

18 DK 161645 B

(1) I 120 ml chloroform opløses 27,3 g ethyl-3-oxo-2-methoxyimino-butyrat, og opløsningen opvarmes til 40°C. Derefter tilsættes dråbevis i løbet af 30 minutter en opløsning af 25,3 g brom i 30 ml chloroform. Blandingen omrøres, og reaktionen forløber ved stuetemperatur i en time. Reaktionsblandingen vaskes med en 5$’s vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat og derefter med vand, og det organi- ' ske lag tørres. Opløsningsmidlet afdestilleres derefter under reduceret tryk, hvorved- der opnås 36,2 g ethyl-4-brom-3-oxo-2-methoxy-iminobutyrat som et olieagtigt produkt.

NMR-Spektrum. (60 MHz, i CDCl^) : 4,16 ppm (3H, s, OCH^), 4,36 ppm (2H, s, BrCH2C0).

(2) I 20 ml ethanol opløses 5 g af ovennævnte produkt, hvorefter der tilsættes 1,3 g thiourinstof. Blandingen opvarmes under tilbagesvaling i 3 timer. Efter afkøling opsamles bundfaldet ved filtrering, og det opløses i 20 ml vand, hvortil der sættes natriumhydrogencarbonat.

Den udskilte olie ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetatlaget vaskes og tørres. Derefter afdampes ethylacetatet, hvorved der opnås hvide krystaller. Omkrystallisation fra ethanol giver 2,6 g (57,2$) ethyl-2- (2-aminothiazol-4-yl) -2- (anti)-methoxyiminoacetat som hvide krystaller, smeltepunkt 114-115°C.

Elementæranalyse af CgH-^N^O^S:

Beregnet: G 41,91 H 4,$4 N 13,33

Fundet: C 41,71 H 4,75 N 13,07 ' NMR-Spektrum (60 MHz, i CDG1 ): 4,07 ppm (3H, s, 0CH3), 5,30 ppm (2H, br. s, NH2), 7,43 ppm (IH, s,__thiazol 5H).

(3) Det ved opsamling af det første bundfald opnåede filtrat koncentreres under reduceret tryk, og der sættes natriumhydrogencarbonat til remanensen. Blandingen ekstraheres med ethylacetat, og olien,som opnås fra ethylacetatlaget,renses ved søjlekromatografi på silicagel.

Ved ovennævnte fremgangsmåde opnås 59 mg (1,3%) ethyl-2-(2-aminothia-zol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetat som hvide krystaller, smelte-

19 DK 161645 B

punkt I63-I640C.

Elementæranalyse af :

Beregnet: C 41,91 H 4,34 N 13,33

Fundet: C 41,57 H 4,76 N 13,07 NMR-Spektrum (60 MHz, i CDCl^): 4,02 ppm (3H, s, OCH^), 5,30 ppm (2H, br. s, NH2), 6,74 ppm (IH, s, thiazol 5H).

Eksempel 3

Til 600 ml ethanol sættes 121 g ethyl-4-chlor-3-oxo-2-hydroxyimino-acetat sammen med 47,6 g thiourinstof, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer. Ethanolet afdampes derefter under reduceret tryk, og der tilsættes 350 ml vand. Det vandige lag vaskes med ether, neutraliseres med natriumhydrogencarbonat (til pH-værdi 7,5) og ekstra-heres med ethylacetat-tetrahydrofuran (1:1). Det organiske lag vaskes med vand og tørres. Opløsningsmidlet destilleres derefter af, og der opnås 45 g krystallinsk produkt.

1 g af det ovennævnte produkt renses ved søjlekromatografi på silica-gel (elueringsmiddel: ethylacetat-n-hexan). Den første fraktion giver 65Ο mg af anti-isomeren af ethyl-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-hydroxy-iminoacetat,og 150 mg af syn-isomeren opnås fra den anden fraktion.

Anti-isomer: hvide krystaller, smeltepunkt 145,3°C. Syn-isomer: blege gullig-hvide krystaller, smeltepunkt 135,5°C.

Elementæranalyse af CyH^N^O^S:

Beregnet: C 39,06 H 4,21 N 19.,.52

Fundet: (Anti-) C 33,31 H 4,20 N 19,62 (Syn-) C 39,23 H 4,10 N 19,63 NMR-Spektrum (60 MHz, i d^-DMSO): Anti-isomer: 7,10 ppm (2H, br. s., NH2), 7,50 ppm (IH, s., thiazol 5H), 12,5 ppm (IH, s., OH).

20

DK 161645 B

Syn-isomer: 6,BO ppm (IH, s., thiazol 5H), 7,12 ppm (2H, br. s., NH2), 11,6 ppm (IH, s., OH).

Eksempel 4 I 150 ml vand opløses 10,6 g natriumcarbonat, hvorefter der tilsættes en opløsning af 10,7 g ethyl-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-hydroxy-iminoacetat i en blanding af 150 ml tetrahydrofuran og 50 ml methanol. Under isafkøling tilsættes dråbevis 12,6 g dimethylsulfat i løbet af 5 minutter. Efter endt tilsætning fjernes isbadet, og blandingen omrøres ved stuetemperatur. Under omrøring begynder udskillelse af hvide krystaller. Efter 3 timer afdestilleres hovedparten af det organiske opløsningsmiddel under reduceret tryk,og remanensen afkøles med is. Det resulterende bundfald opsamles ved filtrering, vaskes med vand og tørres. Ved ovennævnte fremgangsmåde opnås 5 g ethyl-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetat som hvide krystaller.

Ved NMR-spektrum og andre egenskaber identificeres dette produkt som ethyl-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetat.

Eksempel 5 I 10 ml Ν,Ν-dimethylacetamid opløses 2,15 g ethyl-2-(2-aminothiazol~ 4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetat (smeltepunkt l63-l64°C), og der tilsættes dråbevis under isafkøling 1,27 g chloracetylchlorid. Blandingen omrøres under isafkøling i 30 minutter og derefter ved stuetemperatur i 30 minutter. Reaktionsblandingen fortyndes med 50 ml vand og ekstraheres to gange, hver gang med 100 ml ethylacetat. Ekstrakterne samles, vaskes med en 5%'s vandig opløsning af natriumhydrogen-carbonat og en mættet vandig opløsning af natriumchlorid i den nævnte rækkefølge, og endelig tørres de. Opløsningsmidlet afdampes derefter, og der opnås 2,04 g ethyl-2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetat som et krystallinsk produkt, smeltepunkt 111-112°C.

Elementæranalyse for C-^qH^N^O^SCI -

Beregnet: C 39,29, H 3,96 N 13,74

Fundet: C 39,15 H 3,91 N 13,69 NMR-Spektrum (60 MHz, i CDCl^): 4,00 ppm (3H, s.,=N0CH3), 4,24 ppm

21 DK 161645 B

(2H, s., C1CH2C0), 7,15 ppm (IH, s-, thiazol 5H).

Eksempel 6

Til en opløsning af 9 g kaliumhydroxid i en blanding af 85 ml vand og 452 ml ethanol sættes 9,62 g ethyl-2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetat, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Ethanolet destilleres af under reduceret tryk, og efter tilsætning af 85 ml vand vaskes remanensen med 100 ml ethylacetat. Det vandige lag indstilles til pH-værdi 2 med 10%Ts saltsyreopløsning og ekstraheres to gange med 200 ml portioner af ethylacetat. Ekstrakterne samles, vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og tørres. Opløsningsmidlet afdestilleres derefter, og der opnås 7,63 g 2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoeddikesyre som krystaller, der smelter ved 170-171°C.

Elementæranalyse for CgHgN^O^SCl:

Beregnet: G 34,60 H 2,90 N 15,13

Fundet: C 34,97 H 3,03 N 14,74 NMR-Spektrum (60 MHz, i d^-DMSO): 3,95 ppm (3H, s.,==N0CH^), 4,40 ppm (2H,-s., C1CH2C0), 7,57 ppm (IH, s., thiazol 5H).

Eksempel 7 2,3^ g af en 7:$-blanding af syn- og anti-isomerene af ethyl-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-methoxyiminoacetat chloracetyleres med chlor-acetylchlorid som i referenceeksempel 5, og 30 ml ether sættes til den resulterende blanding af syn- og anti-formerne af ethyl-2-(2- * chloracetamidothiazol-4-yl)-2-methoxyiminoacetat. De udskilte krystaller opsamles ved filtrering (produkt A)- Ved NMR-spektrum og andre egenskaber identificeres dette produkt med det ethyl-2-(2-chlor-acetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetat, der opnåedes i eksempel 5. Udbytte 600 mg.

Olien, som opnås ved koncentration af filtratet (2,1+2 g, en blanding af syn- og anti-isomere),sættes til en opløsning af $79 mg kaliumhydroxid i en blanding af 5 ml vand og $0 ml ethanol under isafkøling,

22 DK 161645 B

og hele blandingen omrøres ved denne temperatur i 15 minutter. Ethanolet destilleres af under reduceret tryk,og remanensen fortyndes med 50 ml vand og ekstraheres to gange med 100 ml portioner af ethyl-acetat. Ethylacetatlaget vaskes med vand og tørres. Ethylacetatet destilleres derefter af, og der opnås 577 mg ethyl-2-(2-chloracet-amidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetat (produkt B). Ved NMR-spektrum og andre egenskaber identificeres produktet med syn-isomeren ifølge reksempel 5. Produkterne A og B giver et totalt udbytte på IO76 g eller en genudvindingsgrad på 96,8%.

Eksempel 8 I 600 ml 50%’s vandig tetrahydrofuranopløsning opløses 67,8 g ethyl- 4-chlor-3-oxo-2-hydroxyiminoacetat, hvorefter der tilsættes 155 g natriumacetattrihydrat og 53,2 g thiourinstof. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 4 timer. Reaktionsblandingen indstilles til pH-værdi 7,0 med natriumhydrogencarbonat og ekstraheres efter tilsætning af natriumchlorid to gange med 3OO ml tetrahydrofuran. Ekstrakterne samles, vaskes med vand og tørres. Tetrahydrofuranet destilleres derefter af, og der opnås 27,5 g ethyl-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-hydroxy-iminoacetat som krystaller. Baseret på NMR og andre data ses dette produkt at være en 82:l8-blanding af syn- og anti-isomere.

En lignende reaktion udføres uden anvendelse af natriumacetat. Baseret på de samme kriterier ses det resulterende produkt at være en 25:75-blanding af syn- og anti-isomere.

Eksempel 9

Reaktionen i eksempel 8 gentages, bortset fra, at en 50%'s * vandig ethanolopløsning anvendes i stedet for 50%T s vandig tetrahydrof uranopløsning. I dette tilfælde opnås der også, hvis natriumacetat anvendes, en 83:17-blanding af syn- og anti-isomerene af ethyl-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-hydroxyiminoacetat. I modsætning hertil giver ovenstående reaktion, hvis der ikke anvendes natriumacetat, en 50:50-blanding af syn- og anti-isomere. Forholdet mellem syn- og anti-isomerene bestemmes ved NMR-spektre og andre metoder.

Eksempel 10

23 DK 161645 B

Reaktionen i eksempel 9 gentages, bortset fra, at N,N-di- methylacetamid anvendes i stedet for 50%1 s vandigttetrahydrofurannatriumacetat . Denne fremgangsmåde giver en #5:15-blanding af syn-og anti-isomere af ethyl-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-hydroxyiminoacetat.

Eksempel 11 I.10 ml 50%'s vandig ethanolopløsning opløses 200 mg ethyl-2-amino-thiazol-4-yl-glyoxylat, hvorefter der tilsættes 166 mg 0-methyl-hydroxylamin-hydrochlorid og derefter 16B mg natriumhydrogencarbonat. Blandingen omrøres i en lukket beholder ved 70°C i 5 timer. Reaktionsblandingen koncentreres under reduceret tryk, og remanensen fortyndes med 10 ml vand og ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetatla-get vaskes med vand og tørres. Ethylacetatet af destilleres deref ter, og der opnås ethyl-2-(2-aminothiazol-4-yl)~2-methoxyiminoacetat som krystaller. Baseret på NMR og andre data ses dette produkt at være en S3:17-blanding af syn- og anti-isomere.

Eksempel 12 I 70 ml ethanol indeholdende 10% HC1 suspenderes 2,44 g methylnitron af ethyl-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(anti)-hydroxyiminoacetat, som er N-(2-aminothiazol~4-yl-ethoxycarbonyl)-methylenmethylamin-N-oxid, smeltepunkt l£4-l#i>°C. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 16 timer. Reaktionsblandingen koncentreres under reduceret tryk, og efter tilsætning af 10 ml vand indstilles remanensen til pH-værdi 7,5 med en 5%'s vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat og ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetatlaget vaskes med vand og tørres. Ethyl-acetatet afdestilleres derefter, og remanensen omkrystalliseres fra ethanol. Ved ovennævnte fremgangsmåde opnås 1,54 g ethyl-2-aminothia-zol-4-ylglyoxylat som gule krystaller, der smelter ved 143,3°B·

Elementæranalyse for CyHgN^O^S:

Beregnet: C 41,9$ H 4,02 N 13,99

Fundet: C 41,#3 H 4,14 N 13,9¾

Eksempel 13

24 DK 161645 B

I 50 ml 1 N saltsyre opløses 1 g af det samme N-(2-aminothiazol-4-yl-ethoxycarbonyl)-methylenmethylamin-N-oxid, som blev anvendt i referenceeksempel 12,og opløsningen omrøres ved stuetemperatur i 5 timer. Reaktionsblandingen neutraliseres med natriumcarbonat og ekstra-heres med ethylacetat. Derefter gentages fremgangsmåden fra referenceeksempel 12, og der opnås 0,5 g ethyl-2-aminothiazol-4-ylglyoxylat. Baseret på NMR og andre data identificeres dette produkt med produktet, som opnåedes i eksempel 12.

Eksempel 14 I 20 ml- etharrol indeholdende 10% HC1 suspenderes 1,2 g methylnitron af 2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-hydroxyiminoacetat, d.v.s. N-{2-aminothiazol-4-yl-ethoxycarbonyl) -methylenmethylamin-N-oxid, smeltepunkt 111,6°€, og suspensionen omrøres ved stuetemperatur i 16 timer. Derefter gentages fremgangsmåden ifølge referenceeksempel 12, og der opnås 0,7 g ethyl-2-aminothiazol-4-ylglyoxylat som gule krystaller.

Med hensyn til NMR og andre egenskaber er dette produkt identisk med produktet ifølge eksempel 12.

Eksempel 15

Til en blanding af 10 ml tetrahydrofuran ag 5 ml ethylacetat sættes 1 g ethyl-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(anti)-hydroxyiminoacetat, smeltepunkt 145,3°C,efterfulgt af tilsætning af et overskud af diazomethan-etheropløsning. Blandingen henstår ved stuetemperatur i 2 dage. Efter at det resterende diazomethan er dekomponeret med eddikesyre, koncentreres reaktionsblandingen under reduceret tryk, og remanensen om-' krystalliseres fra ethylacetat. Ved den ovennævnte fremgangsmåde opnås 0,£ g methylnitronforbindelse, d.v.s. N-(2-aminothiazol-4-yl-ethoxycarbonyl)-methylenmethylamin-N-oxid,som gule krystaller, der smelter ved 184-185°C.

Elementæranalyse for CgH-jjN^O^S:

Beregnet: C 41,91 H 4,64 N 13,33

Fundet: C 41,56 H 4,75 N 18,35

25 DK 161645 B

+ NMR-Spektrum (60 MHz, i CDCl^): 3,32 ppm (3H, s-, N—CH^) , 5,27 ppm (2H, br. s., NH2), 3,49 ppm (IH, s., thiazol 5H).

Eksempel 16

Til en opløsning af 23 mg natrium i 3 ml methanol sættes 215 mg ethyl-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(anti)-hydroxyiminoacetat, smeltepunkt 145,3°C, og ved stuetemperatur tilsættes 230 mg methyliodid. Blandingen omrøres i 45 minutter, hvorefter den koncentreres under reduceret tryk. Remanensen fortyndes med vand (pH-værdi 7 eller højere) og ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetatlaget vaskes med vand, tørres og koncentreres. Remanensen omkrystalliseres fra tetra-hydrofuran-ethylacetat. Ved den ovennævnte fremgangsmåde opnås 160 mg methylnitronforbindelse som gule krystaller. Dette produkt er fuldstændig identisk med produktet,som opnåedes i eksempel 15.

Eksempel 17

Filtratet efter opsamling af det bundfældede ethyl-2-(2-aminothiazol- 4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetat fra den koncentrerede reaktionsblanding i fremgangsmåden i referenceeksempel 4 ekstraheres med te-trahydrofuran-ethylacetat (1:1),og ekstrakten vaskes med vand, tørres og koncentreres. Til den tilbageblivende brunfarvede olie sættes 20 ml tetrahydrofuran, og blandingen henstår i køleskab i 16 timer.

De resulterende krystaller opsamles ved filtrering og omkrystalliseres fra ethylacetat. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 1,3 S methylnitron af ethyl-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-hydroxyimino-acetat, d.v.s. N-(2-aminothiazol-4-yl-ethoxycarbonyl)-methylen-methylamin-N-oxid,som gule krystaller, der smelter ved 111,6°C.

*

Elementæranalyse for CgH-^N^O^S;

Beregnet: C 41,91 H 4,34 N 13,33

Fundet: G 41,39 H 4,91 N 13,44 NMR-Spektrum (60 MHz, i CDC13) : 4,14 ppm (3H, s., ft-CH^), 5,34 ppm (2H, br. s., NH2), 6,62 ppm (IH, s., thiazol 5H).

Eksempel 18

26 DK 161645 B

I 10 ml tetrahydrofuran opløses 1,5 g ethyl-4-brom-3-oxo-2-methoxy-iminobutyrat, og efter at 7 ml vand er tilsat, tilsættes yderligere 2,4 g natriumacetattrihydrat og 0,9 g thiourinstof. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 17 timer, hvorefter den koncentreres under reduceret tryk. Koncentratet indstilles til pH-værdi ca. 1,5 med fortyndet saltsyre og vaskes med ethylacetat. Det vandige lag neutraliseres med natriumhydrogencarbonat og ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetatlaget vaskes med vand, tørres og koncentreres under reduceret tryk, og der opnås 0,£ g gullige krystaller. Dette produkt er ethyl-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetat. Baseret på NMR og andre data identificeres dette produkt med den syn-isomer, der opnåedes i eksempel 2.

Eksempel 19 I 10 ml dimethylformamid opløses 2 g ethyl-4-brom-3-oxo-2-methoxy-iminobutyrat, hvorefter der tilsættes 1,2 g thiourinstof. Blandingen omsættes ved stuetemperatur i 5 timer. Til reaktionsblandingen sættes 20 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, og blandingens pH-værdi indstilles derefter til ca. 1,5 med fortyndet saltsyre. Derefter følges fremgangsmåden ifølge referenceeksempel 1#, og der opnås 1,1 g bleggule krystaller. Baseret på' NMR og andre data identificeres dette produkt som-en &7:13~blanding af syn- og anti-isomere af ethyl-2-(2-aminothiazol~4-yl)-2-methoxy-iminoacetat. Vaskning af produktet med en lille mængde ether giver syn-isomeren i det væsentlige fri for anti-isomeren.

Eksempel 20

Til 200 ml vand sættes 3$ g natriumnitrit og 53 g methylacetoacetat, og under isafkøling og omrøring tilsættes dråbevis i løbet af ca. en time 200 ml 4 N svovlsyre. Under denne dråbevise tilsætning holdes temperaturen af reaktionsblandingen på 5-&°C. Blandingen omrøres indenfor dette temperaturområde i endnu 2 l/2 time, hvorefter den ekstraheres to gange med 300 ml portioner ethylacetat. Ekstrakterne samles og vaskes to gange med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid. Derefter deles en opløsning af 96,7 g natriumcarbonat i 1 27

DK 161645 B

liter vand i tre lige store portioner, hvormed 3-oxo-2-hydroxyimino-butyrat ekstraheres fra det ovennævnte ethylacetatlag (tre gange).

Til det vandige lag (1 liter) sættes 200 ml methanol, og efter afkøling med is tilsættes dråbevis 150 g dimethylsulfat under omrøring i løbet af 10 minutter. Efter endt tildrypning omrøres blandingen ved stuetemperatur i 1 l/2 time og ekstraheres to gange med 300 ml portioner af ethylacetat. Ekstrakterne samles, vaskes med vand og tørres. Ethylacetatet afdestilleres derefter, og remanensen afkøles med is, hvorefter den størkner. Den faste remanens opsamles ved filtrering og vaskes med en lille mængde vand. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 52,3 g methyl-3-oxo-2-methoxyiminobutyrat som hvide krystaller, der smelter ved 64,4°C.

Elementæranalyse for C^H^NO^: 'Beregnet: C 45,23 H 5,70 N S,S0

Fundet: C 44,93 H 5,6l N 3,.71 NMR-Spektrum (60 MHz, i CDC1-): 2,40 ppm (3H, singlet, -C-CH~), i π 3 o 3,£6 ppm (3H, s., C00CH3), 4,10 ppm (3H, s., ^NOCH^).

Eksempel 21 I 150 ml chloroform opløses 40 g methyl-3-oxo-2-methoxyiminobutyrat, og opløsningen opvarmes til 40°C. Derefter tilsættes dråbevis en opløsning af 50 ml chloroform i løbet af en time. Derefter fortsættes reaktionen under omrøring ved stuetemperatur i en time. Reaktionsblandingen vaskes med en 5^rs vandig opløsning af natriumhydrogen-carbonat og vand i den nævnte rækkefølge, og det organiske lag tørres. Opløsningsmidlet afdestilleres derefter, og der opnås 52,1 g methyl-4-brom-3-oxo-2-methoxyiminobutyrat som en olie.

NMR-Spektrum (60 MHz, i CDCl^): 3,&2 ppm (3H, s., COOCH^), 4,09 ppm (3H, s., =N-0CH3), 4,27 ppm (2H, s., BrCHgCO).

I 350 ml tetrahydrofuran opløses 52 g methyl-4-brom-3-oxo-2-methoxy-iminobutyrat, hvorefter der tilsættes 250 ml vand og yderligere

DK 161645 B

28 &9,1 g natriumacetattrihydrat og 33,2 g thiourinstof. Blandingen om-røres ved stuetemperatur i l£ timer. Til reaktionsblandingen sættes 200 ml af en 5$Ts vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat, hvorefter der ekstraheres med ethylacetat. Det organiske lag vaskes med vand, tørres og koncentreres under reduceret tryk for at fjerne opløsningsmidlet. Til koncentratet sættes 200 ml ether, og det resulterende bundfald opsamles ved filtrering. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 24,^ g methyl-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-( syn]-methoxyiminoacetat som krystaller, der smelter v-ed l64,9°C.

Elementæranalyse for CyH^N^O^S:

Beregnet: C 39,06 H 4,21 N 19,52

Fundet: C 3^,73 H 4,15 N 19,33 NMR-Spektrum (60 MHz, i CDCl^): 3-,^4 ppm (3H, s., COOCH^), 4,02 ppm (3H, s., =N0GH^), 5,74 ppm (2H, br. s., NH2) , 6,74 ppm (IH, s., thia-zol 5H).

Eksempel 22 I 90 ml Ν,Ν-dimethylacetamid opløses 21,5 g methyl-2-(2-aminothia-zol-4-yl)“2-(syn)-methoxyiminoacetat, og under isafkøling tilsættes dråbevis 13,6 g ehloracetylchlorid. Blandingen omrøres under isaf-køling i 30 minutter og derefter ved stuetemperatur i 30 minutter. Efter tilsætning af 500 ml vand ekstraheres reaktionsblandingen to gange med ethylacetat. Ekstrakterne samles, vaskes med en 5$xs vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat og vand i nævnte rækkefølge og tørres. Opløsningsmidlet afdestilleres, og der opnås 25 g methyl-2- (2-chloracetamidothiazol-4-yl) -2- (syn) -methoxyiminoacetat som krystaller, der smelter ved 130,#°C.

Elementæranalyse for C^H^N^O^SCl:

Beregnet: C 37,03 H 3,45 N 14,40

Fundet: G 37,30 H 3,40 —N 14,33 NMR-Spektrum (60 MHz, i CDCl^) : 3,90 ppm (3H, s., COOCH^), 4,02 ppm (3H, s-, =N0CH3), 4,26 ppm (2H, s., ClCf^CO), 7,24 ppm (IH, s., thiazol 5H).

Eksempel 23

DK 161645 B

29

Til en opløsning af 19,2 g kaliumhydroxid i en blanding af 170 ml vand og 900 ml ethanol sættes 20 g methyl-2-(2-chloracetamidothiazol- 4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetat, og opløsningen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Ethanolet afdestilleres under reduceret tryk, og efter tilsætning af 170 ml vand vaskes remanensen med 200 ml ethylacetat. Det vandige lag indstilles til pH-værdi 2 med lO^s saltsyre og ekstraheres to gange med 300 ml portioner ethylacetat.

Ekstrakterne samles, vaskes med en mættet vandig opløsning af natrium-chlorid og tørres. Opløsningsmidlet afdestilleres, og der opnås 16,¾ g 2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoeddike-syre som krystaller. Med hensyn til NMR-spektrum og andre egenskaber findes dette produkt at være identisk med produktet opnået i eksempel 6.

Eksempel 24 (1) 6 g 7-(5-carboxy-5-benzamidovalerylamido)-3-(N-chloracetyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre suspenderes i 60 ml methylendichlorid indeholdende 7,6 ml N,N-dimethylanilin, og der tilsættes under afkøling ved -50°C 2,25 ml phosphortrichlorid. Blandingen omrøres ved -30°G i 1 l/2 time, indtil en klar opløsning er opnå et. Til denne opløsning sættes 4,17 g phosphorpentachlorid, og blandingen omrøres ved -25°C i 2 1/2 time. Derefter afkøles den til -40°C, og 37 ml koldt methanol tilsættes hurtigt. Blandingen omrøres ved -5°C i 25 minutter, hvorefter den fortyndes med 22 ml vand og indstilles til pH-værdi 3,5 med fortyndet vandig ammoniakopløsning. Reaktionsblandingen henstår ved 5°C i en time, og det resulterende bundfald opsamles ved filtrering. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 1,76 g 7-amino-3-(N-chloracetyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre som et farveløst krystallinsk produkt.

Elementæranalyse for 01^Η1261Ν^0^3:

Beregnet: G 37,76 H 3,46 N 12,01

Fundet: C 36,02 H 3,66 N 11,dl 30

DK 161645B

NMR-Spektrum (60 MHz, i CF^COOH) : 3,76 ppm (2H, bred s.^ 2-CH2), 4,35 ppm (2H, s., -NHC0CH2C1), 5,42 ppm (2H, bred s., 6H, 7H), 5,46 ppm (2H, kvartet, -CH20C0NH).

(2) I Ν,Ν-dimethylacetamid opløses 1,-05. g af den 7-amino-3-(N-chlor-acetyl)-carbaraoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre, som blev opnået ovenfor (l), og der tilsættes under isafkøling 996 mg 2-chloracetamido-thiazol-4-yl-a-(anti)-methoxyiminoacetylchlorid-hydrochlorid. Blandingen omrøres under isafkøling i 15 minutter og derefter ved stuetemperatur i 2 timer. Efter tilsætning af 50 ml vand ekstraheres reaktionsblandingen to gange med 100 ml portioner ethylacetat. De organiske lag samles, vaskes med en mættet vandig opløsning af natri- t umchlorid og tørres over magnesiumsulfat. Ethylacetatet afdestilleres derefter. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 2,2 g 7-C(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-a-(anti)-me thoxyimino]-acetamido-3- (N-chloracetyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre som et hvidt pulver.

Note: Fremstilling af 2-chloracetamidothiazol-4-yl-a-(anti)-methoxy-iminoacetylchlorid.

(i) I 100 ml dimethylacetamid opløses 10 g ethyl-a-(anti)-methoxy-imino-α-(2-aminothiazol-4-yl)-acetat,og der tilsættes under afkøling med is dråbevis 5,91 g chloracetyløhlo-rid. B-land-ingen- omrøres ved stuetemperatur i en time, hvorefter den hældes i is-vand. Blandingen ekstraheres med ethylacetat,og det organiske lag vaskes, tørres og destilleres for at fjerne opløsningsmidlet. Ved fremgangsmåden opnås. 12,66 g ethyl-α-(anti)-methoxyimino-a-[2-(chloracetamido)-thiazol-4-yl]-acetat som krystaller, smeltepunkt &1-B2°C.

Elementæranalyse for cioH12N3°4SC1:

Beregnet: G 39,29 H 3,96

Fundet: C 36,74 H 3,56

Det nuclearmagnetiske resonansspektrum (60 MHz, i CDCl^) af dette produkt giver singlets, én ved 4,1G ppm, som kan tilskrives methoxy-protoner, én ved 4,24 ppm, som. kan tilskrives chloracetylprotoner, og én ved 7.,94 ppm, som kan. tilskrives thiazol-5-hydrogen.

31

DK 161645 B

(ii) 12,66 g ethyl-α-(anti)-methoxyimino-a-[2-(2-chloracetamido)-thiazol-4-yl]-acetat sættes til en opløsning af 11,74 g kaliumhydroxid i en blanding af 25 ml vand og 500 ml ethanol. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 20 minutter,og ethanolet afdestilleres under reduceret tryk, og remanensen fortyndes med vand. Blandingen gøres sur med 1 N saltsyre, og det resulterende bundfald opsamles ved filtrering. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 10,54 g a-(anti)-methoxyimino-a-[2-(chloracetamido)-thiazol-4-yll-eddikesyre, smeltepunkt 162-163°C.

Elementæranalyse for CgHgN^O^SCl: t

Beregnet: C 34,60 H 2,90 N 15,13

Fundet: C 34,53 H 3,00 N 14,60

Det nuclearmagnetiske resonansspektrum (60 MHz, i d^-DMS0) af det ovenstående produkt viser singlets, som kan tilskrives methoxyproto-ner ved 400 ppm, chloracetylprotoner ved 4,36 ppm og thiazol-5-hydrogen ved 6,00 ppm.

(iii) I 5 ml methylenchlorid suspenderes 555,4 mg a-(anti)-methoxyimino-a- [2- (chloracetamido) -thiazol-4-yl3-eddike syre, og der tilsættes under isafkøling 416,3 mg phosphorpentachlorid. Blandingen omsættes under omrøring i 30 minutter. Til reaktionsblandingen sættes n-hexan, og det resulterende bundfald opsamles ved filtrering. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 620 mg a-(anti)-methoxyimino-a-[2-(chloracetamido)-thiazol-4-yll-acetylchlorid-hydrochlorid.

Elementæranalyse for CgHyN^O^SC^'HCl:

Beregnet: C 26,69 H 2,42 N 12,63

Fundet.: C 26,35 H 2,6l N 12,00 (3) I 50 ml tetrahydrofuran opløses 2,2 g af den 7-[(2-chloracetamido-thiazol-4-yl)-a-(anti)-methoxyimino]-acetamido-3-(N-chloracetyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre, som blev opnået ovenfor (2), hvorefter der tilsættes 913 mg fint pulveriseret thiourinstof og 1,63 g natriumacetattrihydrat. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 17 timer. Bundfaldet opsamles ved filtrering, vaskes med ethyl-

DK 161645 B

32 ether og opløses i 10 ml vand. Opløsningen indstilles til pH-værdi 7 med natriumhydrogencarbonat og passeres gennem en søjle af Amberlite XA-D-2. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 360 mg natrium-7-C(2-aminothiazol-4-yl) -a- (anti)-methoxyimino]-acetamido-3-carbamoyloxy-methyl-3-cephem-4-carboxylat som et hvidt pulver.

Elementæranalyse for C-^^H^N^0yS2Na-2,5H20:

Beregnet: ' C 34,42 H 3,85 N 16,05

Fundet: C 34,43 H 3,70 N 15,68 NMR-Spektrum (60 MHz, i D2O) : 3,55 ppm (2H, kvartet, 2-CB^), 4,11 ppm (3H, s., =N0CH^), 4,61 ppm (2H, kvartet, -Cf^OCON^), 5,21 ppm (IH, dublet, 6h), 5,82 ppm (IH, dublet, 7H), 7,55 ppm (IH, s., HQN o H ).

γγ N—4

Den antibakterielle aktivitet (MIC (T/ml)) af natrium-7-C(2-aminothia-zol-4-yl)-a-(anti)-methoxyimino ]-acetamido-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylatet ifølge dette eksempel er vist nedenfor.

33

DK 161645 B

Mikroorganisme______ MIGfY/ml)

Escherichia coli 0-111 0,73

Klebsiella pneumoniae DT 1,56

Klebsiella pneumoniae GN 3B35 6,25

Serratia marcescens IFO 12643 12,5

Serratia TN0024 6,25

Proteus vulgaris IFO 3933 0,39

Proteus mirabilis GN 4359 0,73

Proteus morganii IFO 3163 0,73

Proteus rettgeri 3 TNO 336 0,2

Proteus rettgeri GN 4733 0,73

Enterobacter cloacae IFO 12937 25

Citrobacter freundii GN 99 1,56

Citrobacter freundii GN 1706 3,13

Eksempel 25 (1) I 20 ml Ν,Ν-dimethylacetamid opløses 1,05 g 7“amino-3-(N-chlor-acetyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre, og der tilsættes under isafkøling 369 mg 2-chloracetamidothiazol-4-ylacetylchlorid-hydrochlorid. Blandingen omrøres under isafkøling i 15 minutter og derefter ved stuetemperatur i 2 timer. Efter denne omsætning fortyndes blandingen med 50 ml vand og ekstraheres to gange med 100 ml portioner af ethylacetat. De organiske lag samles, vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og tørres over magnesiumsulfat. Ethylacetatet afdestilleres derefter, og der opnås et hvidt pulver af 7-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-acetamido-3-(N-chlorace-' tyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre. Udbytte: 1,6 g.

Note: Fremstilling af 2-chloracetamidothiazol-4-ylacetylchlorid.

I 15 ml dimethylacetamid opløses 4 g ethyl-2-aminothiazol-4-ylacetat, og der tilsættes dråbevis under isafkøling 3,62 g chloracetylchlorid. Blandingen omrøres under isafkøling i 30 minutter og derefter ved stuetemperatur i endnu 30 minutter. Derpå tilsættes 50 ml vand,og blandingen ekstraheres to gange med 100 ml portioner ethylacetat- DK 161645 B j i tetrahydrofuran. Ekstrakten vaskes med 100 ml af en s vandig op- i løsning af natriumhydrogencarbonat og derefter med 100 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, hvorefter den tørres. Opløsningsmidlet afdestilleres derefter. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 2,95 g ethyl-2-chloraeetamidothiazol-4-yiacetat som et olie-agtigt produkt. Hele mængden af denne olie suspenderes i 100 ml methanol,og der tilsættes under isafkøling 12 ml vand indeholdende 761 mg natriumhydroxid. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 30 j minutter, hvorefter en større mængde af methanolet afdestilleres un- [

der reduceret tryk. Til remanensen sættes 10 ml vand. Det vandige I

lag vaskes med 50 ml ethylacetat, og efter tilsætning af 20 ml ethyl- i acetat indstilles det til pH-værdi 2 med 10$* s .saltsyre. Blandingen | omrystes grundigt, og det organiske lag skilles fra, vaskes med en j mættet vandig opløsning af natriumchlorid og tørres. Opløsningsmid- j let afdestilleres derefter. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås ; 1,51 g 2-chloracetamidothiazol-4-yl-eddikesyre som farveløse krystaller, smeltepunkt: 202-203°C. |

Elementæranalyse for C^KyClN^O^S:

Beregnet: C 35,83 H 3,01 N 11,94

Fundet: C 36,01 H 2,96 N 11,6l I 20 ml methylendichlorid suspenderes 93# rag af det ovenstående produkt, og der tilsættes under isafkøling 1 g phosphorpentachlorid. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter. Efter tilsætning af 50 ml petroleumsether opsamles bundfaldet ved filtrering, og det vaskes med 10 ml petroleumsether. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 1,06 g 2-chloracetamidothiazol-4-ylacetylchlorid-hydro-chlorid som farveløse krystaller.

Elementæranalyse for 0^^012^023.* HC.l:

Beregnet: C 29,04 H 2,44 N 9,67

Fundet: C 28,96 H 2,24 N 9,61 IR-Spektrum (KBr): 1780 cm ^ (-C0C1).

(2) I 40 ml tetrahydrofuran opløses 1,6 g af den 7-(2-chloracetamido-

35 DK 161645 B

thiazol-4-yl)-acetamido-3-(N-chloracetyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre,som blev opnået i ovenstående (1). Til denne opløsning sættes S60 mg thiourinstof, hvorefter der tilsættes natrium-acetattrihydrat. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 16 timer. Bundfaldet opsamles ved filtrering, vaskes med ethylether og opløses i 10 ml vand. Opløsningen indstilles til pH-værdi 7 med natrium-hydrogencarbonat og renses ved søjlekromatografi på Amberlite XAD-2. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 152 mg natrium-7-(2~amino-thiazol-4-yl)-acetamido-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylat som et hvidt pulver.

Elementæranalyse for C^H^N^0£S2Na*2H20:

Beregnet: C 35,67 H 3,^5 N 14,$5

Fundet: C 35,97 H 3,88 N 14,64 NMR-Spektrum (00 MHz, i D^O) : 3,52 ppm {2H, kvartet, 2-CH2), 3,61 ppm (2H, s 13 ί---0Η CO- -4,7# ppm (2H,. kvartet,.-CH2OCONH-), 5,14 ppm -2 g (IH, dublet, 6H), 5,6$ ppm (IH, "dublet, 7H), 6,52 ppm (IH, s.,N/ N_^

Eksempel 26 (1) I 6 ml Ν,Ν-dimethylacetamid opløses 290 mg 7-amino-3-(N-chlor-acetyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre, og der tilsættes under isafkøling 276 mg 2-{2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetylchlorid-hydrochlorid. Blandingen omrøres under isafkøling i 15 minutter og ved stuetemperatur i 2 timer. Derefter fortyndes reaktionsblandingen med 30 ml vand og ekstraheres to gange med 50 ml portioner ethylacetat. Ekstrakterne samles, vaskes med 50 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og tørres over vand-frit magnesiumsulfat. Ethylacetatet afdestilleres, og der opnås 402 mg 7-C2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyimino]-acet-amido-3-(N-chloracetyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre som en viskos olie.

NMR-Spektrum (60 MHz, i CDCl^): 3,50 ppm (2H, kvartet, 2-CH2), 3,99 ppm (3H, s., NOCH^), 4,04 ppm, 4,30 ppm (2Hx2, s. x 2, C1CH2C0 x2), 5,10 ppm (IH, dublet, 6h) , 5,73 ppm (IH, dublet, 7H), 7,32 ppm (IH, s., thiazol, 5H).

„ DK 161645 B

3 6 (2) Hele mængden af det ovenstående produkt opløses i 9 ml tetra-hydrofuran, hvorefter der tilsættes 163 mg thiourinstof og 3OO mg natriumacetattrihydrat. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 4 timer. Bundfaldet opsamles ved filtrering, vaskes med ether og opløses i 5 ml vand. Opløsningen indstilles til pH-værdi ca.7 med natrium-hydrogencarbonat og renses ved søjlekromatografi på Amberlite XAD-2. Ved den ovennævnte fremgangsmåde opnås 53 mg natrium-7-[2-(2-amino-thiazol-4-yl) -2- (syn) -methoxyiminoacetamido j-3-carbamoyloxymethyl- 3-cephem-4-carboxylat som et hvidt pulver.

Elementær analyse for C-^^H^^N^OySgNa^H^O:

Beregnet: C 33,^4 H 3,9^ N 15,7#

Fundet: C 33,94 H 3,$2 N 15,42 NMR-Spektrum (60 MHz, i D20): 3,47 ppm (2H, kvartet, 2-€H2), 3,92 ppm (3H, s., =N0CH^), 4,63 ppm (2H, kvartet, -CH2OGONH2), 5,27 ppm (IH, dublet, 6H), 5,72 ppm (IH, dublet, 7H), 6,95 ppm (IH, s., thiazol 5H).

Fremgangsmåde til fremstilling af 2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetylchlorid.

I 5 ml methylenchlorid suspenderes 273 mg af den 2-(2-chloracetamido-thiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoeddikesyre, som blev opnået i referenceeksempel 6, og der tilsættes under isafkøling 203 mg phosphor-pentachlorid. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter, hvorefter den vaskes med petroleumsether. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 276 mg 2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetylchlorid som et pulver.

Elementæranalyse for CgHyN^O^SCl^HCl:

Beregnet: C 23,39 H 2,42 N 12,63

Fundet: C 23,47 H 2,73 N 12,12

37 DK 161645 B

Eksempel 27 (1) I 22 ml tørt tetrahydrofuran opløses 500 mg 2-(2-chloracetamido-thiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoeddikesyre, og der tilsættes under omrøring 1$2 mg triethylamin. Denne blanding afkøles til -10°C, og der tilsætte-s dråbe vi s 245 mg isobutylchlorformiat. Blandingen omrøres ved denne temperatur i 2 timer. Til den resulterende opløsning af blandet syreanhydrid sættes 1&2 mg triethylamin sammen med en opløsning (isafkølet) af 590 mg 7-amino-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre i 1& ml af en 50%1s vandig tetra-hydrofuranopløsning. Blandingen omrøres under isafkøling i en time og ved stuetemperatur i 2 timer. Derefter afdestilleres hovedparten af tetrahydrofuranet under reduceret tryk, og remanensen fortyndes med 100 ml vand og med 40 ml ethylacetat. Under omrøring indstilles det vandige lag derefter til pH-værdi 2 med 1 N HC1. Faserne adskilles,og det vandige lag ekstraheres med 60 ml ethylacetat. Ethyl-acetatlagene samles, vaskes med 50 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og tørres. Ethylacetatet afdestilleres, og der opnås 700 mg 7-{2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyimino-ac et amido']-3- (l-methyl-lH-tetrazol-4-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-car-boxylsyre som- en viskos olie.

(2) Hele mængden af det ovenstående produkt opløses i 15 ml tetrahydrofuran, hvorefter der tilsættes 226 mg thiourinstof og 406 mg natriumacetattrihydrat. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 4 timer. Efter denne omsætning opsamles bundfaldet ved filtrering, det vaskes med ether og opløses i 10 ml vand. Opløsningen indstilles til pH-værdi ca. 7,0 med natriumhydrogencarbonat og renses ved søjlekromatografi på Amberlite XAD-2. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 125 mg natrium-7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacet-amido]-3-(l-methyl-lH-tetrazol-4-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat som et hvidt pulver.

Elementæranalyse for C^H-^N^O^S^Na^^O:

Beregnet: C 33,74 H 3,54 N 22,13

Fundet: C 34,Id H 3,57 N 21,79 NMR-Spektrum (60 MHz, i D20) : 3,59 ppm (2H, kvartet, 2-CH2), 3,93 ppm

38 DK 161645 B

(3H, s., =NOCH^), 3,9$ ppm (3H, s., N-CH^), 4,0$ ppm (2H, kvartet, 3-0¾), 5,12 ppm (IH, dublet, én), 5,72 ppm (IH, dublet, 7H), 6,93 PPm (IH, s., thiazol 5H).

Eksempel 28 (1) I 15 ml Ν,Ν-dimethylacetamid opløses 762 mg 7-aminocephalospo-ransyre, og der tilsættes under isafkøling 931 mg 2-(2-chloracetamido-thiazol-4-yl)-2-methoxyiminoacetylchlorid-hydrochlorid (fremstillet af syn-isomer). Blandingen omrøres under isafkøling i 15 minutter og ved stuetemperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen fortyndes med 10 ml vand og ekstraheres med 100 ml portioner ethylacetat. Ekstrakterne samles, vaskes med 100 ml af en mættet vandig opløsning af natrium-chlorid og tørres. Ethylacetatet afdestilleres, og der opnås 1,4 g 7-£2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]-cephalosporansyre som en olie.

(2) I 30 ml tetrahydrofuran opløses hele mængden af det ovenstående produkt, hvorefter der tilsættes 500 mg thiourinstof og derefter $95 mg natriumacetattrihydrat. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 4 timer. Det resulterende bundfald opsamles ved filtrering, vaskes med ether og opløses i 6 ml vand. Opløsningen indstilles til pH-værdi ca. 7,0 med natriumhydrogencarbonat og renses ved søjlekromatografi på Amberlite XAD-2. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 7$ mg natrium-7-£2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]- cephalosporanat som et hvidt pulver.

Elementæranalyse for C-^H^N^OySgNa^,5H20:

Beregnet: C 36,7$ H 4,05 N 13,40 'Fundet: 036,93 Η 3,&0 N 12,6$ NMR-Spektrum (60 MHz, i D20) : 2,07 ppm (3H, s., 000¾), 3,53 ppm (2H, kvartet, 2-0¾), 3,9$ ppm (3H, s., =1100¾), 4,75 ppm (2H, kvar-tet, 3-0¾), 5,21 ppm (IH, dublet, 6H), 5,$1 ppm (IH, dublet, 7H), .7,01 ppm (IH, s., thiazol 5H).

39 DK 161645 B

Eksempel 29

Til 10 ml vand sættes 1 g af det natrium-7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminQacetamido]-cephalosporanat, som blev opnået i eksempel 3, 270 mg 2-methyl-l,3,4-oxadiazol-5-thiol-kaliumsalt og 7 mg triethylbenzylammoniumbromid. Blandingen omrøres under en nitrogei gasstrøm ved 60°C i 6 timer. Efter afkøling renses reaktionsblandingen ved hjælp af søjlekromatografi på Amberlite XAD-2. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 110 mg natrium-7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]-3-(2-methyl-l,3,4-oxadiazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat som et hvidt pulver.

Elementæranalyse for C^y Hl6N7°6S3Na*2H20:

Beregnet: C 35,β5 H 3,54 N 17,21

Fundet: C 35,73 H 3,72 N 17,01 NMR-Spektrum (60 MHz, i DgO): ^>4-2 ppm (3H, s., oxadiazol 2-CH^), 3,55 ppm (2H, kvartet, 2-0^), 4,02 ppm (3H, s., =N0CH^), 5,13 ppm (IH, dublet, 6H), 5,73 ppm (IH, dublet, 7H), 6,97 ppm (IH, s-, thia-zol 5H).

Eksempel 3,0 (1) Til 10 ml tetrahydrofuran sættes 633 mg 2-(2-chloracetamido-thiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoeddikesyre, 3&0 mg N-hydroxysuccin-imid og 630“ mg dicyclohexylcarbodiimid, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 45 minutter. Bundfaldet filtreres fra, og filtratet afkøles til 5°C. Det sættes derefter til en blandet opløsning af 650 mg 7-aminodesacetoxy-cephalosporansyre og 2 ml bis-(trimethyl-silyl)-acetamid i methylenchlorid, som forinden er afkølet. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 16..timer, og derefter afdestilleres opløsningsmidlet under reduceret tryk. Til den resulterende olie sættes 50 ml vand sammen med 50 ml ethylacetat, og blandingen indstilles til pH-værdi ca. 2,5 med 1 N saltsyre. De to lag adskilles efterfulgt af ekstraktioner med to 50 ml’s portioner ethylacetat. Ethyl-acetatlagene samles, vaskes med vand og tørres. Ethylacetatet afdestilleres derefter, og der opnås 1,1 g 7-[2-(2-chloracetamidothia-zol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]-desacetoxycephalosporansyre som en olie.

40 DK 16 1645 B

(2) Hele mængden af det ovenstående produkt opløses i 25 ml tetra-hydrofuran, hvorefter der tilsættes thiourinstof og derefter 632 mg natriumacetattrihydrat. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 4 timer. Bundfaldet opsamles ved filtrering, vaskes med ether og opløses i 10 ml vand. Opløsningen indstilles til pH-værdi ca. 7,0 med natriumhydrogencarbonat og renses ved søjlekromatografi på Amberlite XAD-2. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 120 mg natrium-7- [2-(2-aminothiazol-A-yl) -2- (syn) -methoxyiminoacetamidol-desacetoxy-cephalosporanat som et hvidt pulver.

Elementæranalyse for C^H^N^O^S^Na·!, 5^0:

Beregnet: C 37,67 H 3,64 N 15,6$

Fundet: C 37,37 H 3,9¾ N 15,3$ NMR-Spektrum (60 MHz, i DgO) δ : 1,94 ppm (3H, s., 3-6H3K 3,46 ppm (2H, kvartet, 2-0^), 4,00 ppm (3H, s., ^NOCH^), 5,17 ppm (IH,dublet, 6H), 5,76 ppm (IH, dublet, 7H), 6,99 ppm -(IH, s., thiazol 5H).

De minimale inhibitoriske koncentrationer ^g/ml) af nogle af forbindelserne ifølge de ovenstående eksempler er som følger:

Mikroorganismer _Forbindelse_ _ fra eks. 1 fra eks. 3 fra eks. 2 fra eks. 5 E. coli NIHJ 0,10 0,20 0,10 0,76 E. coli 0-111 0,024 0,05 0,024 0,39 E. coli T-7 0,39 0,76 0,76 6,25 K. pneumonia DT < 0,012 0,024 0,024 0,20 K. pneumonia GN 3635 0,05 0,05 0,20 0,20 ' Ps. aeruginosa Pd 1 50 25 12,5 >100

Ps. aeruginosa PM 3 3,13 1,56 0,76 25

Ps. aeruginosa P2 25 50 50 >100

Ps. aeruginosa GN 3407 >100 50 50 >100

Serr. marcescens IFO 12643 1,56 3,13 0,76 12,5

Serratia TN 0024 0,20 0,76 0,20 1,56 P. vulgaris IFO 3966 <0,02 0,024 0,024 0,20

41 DK 161645 B

fra eks.l fra eks.3 fra eks.2 fra eks. 5 P. vulgaris GN 4413 1,56 0,7# 0,39 1,56 P. rairabilis GN 4359 =0,02 0,05 0,10 0,10 P. morganii IFO 3165 0,39 0,20 0,05 12,5 P. rettgeri 6(TN0 336) = 0,012 = 0,012 = 0,012 = 0,012 P. rettgeri 5 GN 4733 0,05 0,20 0,20 0,10

Ent. cloacae TN 1262 6,25 6,25 1,56 50

Cit. freundii GN 99 0,20 0,20 0,10 3,13

Cit. freundii GN 1706 0,39 0,39 0,20 6,25

Acinetobacter anitratus 6,25 25 25 12,5 TN 1140

Note: Følgende forkortelser er anvendt til at betegne de anvendte mikroorganismer: E: Escherichia K: Klebsiella Ps: Pseudomonas

Serr: Serratia P: Proteus Ent: Enterobacter

Cit: Citrobacter

Eksempel 31 (1) I 20 ml tørt tetrahydrofuran opløses 500 mg 2-(2-chloracetamido-thiazol-4-yl)-2-( syn)-methoxyiminoeddikesyre, og der tilsættes under omrøring 162 mg triethylamin. Blandingen afkøles til -10°C, hvorefter der dråbevis tilsættes 245 mg isobutylchlorformiat. Blandingen omrøres ved denne temperatur i 2 timer.Til den resulterende blandede syreanhy-dridopløsning sættes en opløsning (isafkølet) af l60 mg triethylamin og 492 mg 7-amino-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre i en 50$fs vandig tetrahydrofuranopløsning. Blandingen omrøres under isaf-' køling i en time og derefter ved stuetemperatur i 2 timer. Hovedparten af tetrahydrofuranet afdestilleres under reduceret tryk, og der sættes 100 ml vand og 40 ml ethylacetat til remanensen. Blandingen indstilles til pH-værdi ca. 2 med 1 N saltsyre. De to lag adskilles, og det vandige lag ekstraheres to gange med 50 ml portioner af ethylacetat. Ethylacetatlagene samles, vaskes med vand, tørres og koncentreres. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 650 mg 7-[2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido1-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre som en olie.

42

DK 161645 B

(2) Hele mængden af det ovenstående produkt opløses i 15 ml tetra-hydrofuran, hvorefter der tilsættes 226 mg thiourinstof og 406 mg natriumacetattrihydrat. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 4 timer. Bundfaldet opsamles ved filtrering, opløses i 10 ml vand, indstilles til. pH-værdi ca. 7 med natriumhydrogencarbonat og renses ved søjlekromatografi på Amberlite XAD-2. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 120 mg natrium-7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)~2-(syn)-methoxy-iminoacetamido ]-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylat som et hvidt pulver. Med hensyn til NMR-spektrum og andre egenskaber findes produktet at være identisk med produktet, som blev opnået i eksempel 26.

Eksempel 32 (1) I 45 ml tørt tetrahydrofuran opløses 1,11 g 2-(2-chloracetamido-thiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoeddikesyre, og der tilsættes under omrøring Sl5 mg tri-n-butylamin. Blandingen afkøles til -10°C, og der tilsættes dråbevis 544 mg isobutylchlorformiat. Blandingen omrø-res ved -10°C i 2 timer, hvorefter der tilsættes en kold opløsning af 741 mg tri-n-butylamin og 1,4 g 7-amino-3-(N-chlora-cetyl)-carbam-oyloxymethyl-3-cephem-4—carboxylsyre i 40 ml af en 50$fs vandig tetrahydrofuranopløsning. Blandingen omrøres under isafkøling i en time og ved stuetemperatur i 2 timer. Hovedparten af tetrahydrofu-ranet afdestilleres under reduceret tryk, og remanensen fortyndes med 25 ml vand og vaskes med 40 ml ethylacetat. Det vandige lag skilles fra og indstilles efter tilsætning af 50 ml ethylacetat til pH-værdi ca. 2,5 med 1 N saltsyre. Blandingen adskilles i to lag. Det vandige lag ekstraheres yderligere to gange med 50 ml portioner ethylacetat. Ekstrakterne samles, vaskes med 1Ό0 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, tørres og koncentreres. Ved. den ovenstående fremgangsmåde opnås 1 g 7-C2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)- 2- (syn) -methoxyiminoacetamido j-3- (N-chloracetyl)-carbamoyloxymethyl- 3- cephem-4-carboxylsyre som en olie.

(2) Hele mængden af det ovennævnte produkt opløses i 22 ml tetrahydrofuran, hvorefter der tilsættes 499 mg thiourinstof og derefter $92 mg natriumacetattrihydrat. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 4 timer. Bundfaldet opsamles ved filtrering, vaskes med ether og opløses i 10 ml vand. Opløsningen indstilles til pH-værdi ca. 7 med natriumhydrogencarbonat og renses ved hjælp af søjlekromatografi på

„ DK 161645 B

43

Amberlite XAD-2. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 153 mg natrium-7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylat som et hvidt pulver. Baseret på NMR og andre data er dette produkt identisk med forbindelsen, som blev opnået i eksempel 26.

Eksempel 3-3· (1) I 20 ml tetrahydrofuran opløses 277 mg 2-(2-chloracetamidothiazol-yl)-2-(syn)-methoxyiminoeddikesyre og 270 mg tert.butyl-7-aminodes-acetoxycephalosporansyre,hvorefter der tilsættes 206 mg dicyclohexyl-carbodiimid. Blandingen omsættes under omrøring ved stuetemperatur i 6 timer. Det bundfældede urinstofderivat filtreres fra,og filtratet hældes i 50 ml vand og ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetatlaget vaskes med 0,5 N saltsyre, vand og en mættet vandig opløsning af natriumehlorid i den nævnte rækkefølge, tørres og koncentreres. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 320 mg tert.butyl-7-[2-(2-chlor-acetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]-desacetoxy-cephalosporanat som en olie.

NMR-Spektrum (60 MHz, i CDCl^): 1,53 Ppm (9H, s., t-C^H^), 2,13 ppm (3H, s., 3-CH^), 3,39 ppm (2H, kvartet, 2-CH2), 4,06 ppm (3H, s., =N0CH^), 4,29 ppm (2H, s-, CIC^CO), 5,06 ppm (IH, dublet, 6H), 5,66 ppm (IH, dublet af dublet, 7H), 7,20 ppm (IH, s., thiazol 5H), 6,14 ppm (IH, dublet, 7-CONH).

(2) Hele mængden af det ovenstående produkt opløses i 12 ml tetrahydrofuran, hvorefter der tilsættes 100 mg thiourinstof og 200 mg natriumacetattrihydrat. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 6 timer. Reaktionsblandingen fortyndes med 30 ml vand og ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetatlaget vaskes med vand, tørres og koncentreres. Den resulterende olie renses ved kromatografi på silicagel. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 126 mg tert.butyl-7-[2-(2-amino-thiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]-desacetoxycephalospora-nat som et pulver.

NMR-Spektrum (60 MHz, i CDCl^): 1,52 ppm (9H, s., t-C^H^), 2,10 ppm (3H, s., 3-CH^), 3,40 ppm (2H, kvartet, 2-CH2), 4,00 ppm (3H, s., =N0CH^), 5,05 ppm (IH, dublet, 6H), 5,96 ppm (IH, dublet af dublet,

« DK 161645 B

7H), 6,66 ppm (IH, s., thiazol 5H), S, 2$ ppm (IH, dublet, 7-CONH)- (3) Hele msengden af det ovenstående produkt opløses i en blanding af 1 ml trifluoreddikesyre og 0,1 ml anisol, og opløsningen omrøres ved stuetemperatur i 1 l/2 time, hvorefter der tilsættes ether. Det resulterende bundfald opsamles ved filtrering og vaskes med ether. Yed den oven-stående fremgangsmåde opnås 70 mg 7- [2- (2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]-desacetoxycephalosporansyre-trifluor-acetat som et pulver.

Ifølge NMR-spektrum (60 MHz, i D2O indeholdende NaHCO^), er dette produkt identisk med produktet, der blev opnået i eksempel 30.

Eksempel 34

Ved acylering af 7-aminogruppen i de tilsvarende cephalosporinforbin-delser på lignende måde som beskrevet i eksempel 2 (proces A) og ved anvendelse af natrium-7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido 3-cephalosporanat og heterocycliske thiolforbindelser på lignende måde som beskrevet i eksempel 4 (proces B) fremstilles følgende forbindelser: (a) Natrium-7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido ]~3-(2-methyl-l,3,4-thiadiazol-$-yl)-thiomethyl-3~cephem-4-car-boxylat (proces B).

NMR-Spektrum (60 MHz, i D20): 2,37 ppm (3H, s., thiazol 2-GH^), 3,52 ppm (2H, kvartet, 2-CH2), 3,95 ppm (3H, s., =N0CH3), 5,1# PPm (IH, s., 6H), 5,73 ppm (IH, s., 6H), 5,73 ppm (IH, s-, 7H), 6,95 ppm (IH, s., thiazol 5H).

(b) Dinatrium-7- [2- (2-aminothiazol-.4-yl) -2- (syn) -methoxyiminoacetamido 3-3- (2-carboxymethyl-l, 3,4-thiadiazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (proces B).

NMR-Spektrum (60 MHz, i D20) : 3,56 ppm (2H, kvartet, 2-CH2), 3,96 ppm (3H, s., =N0CH3), 4,1^ ppm (2H, s., CH2C00Na), 5,20 ppm (IH, dublet, 6H), 5,74 ppm (IH, dublet, 7H), 6,97 ppm (IH, s., thiazol 5H).

45 DK 161645 B

(c) Natrium-7-[2-(2-aminothiazol-4~yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido ]-3- (l,2,3-triazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (proces B) .

NMR-Spektrum (60 MHz,, i D^O) : 3,57 ppm (2H, kvartet, 2-CH2), 3,94 ppm (3H, s., =N0CH3), 5,21 ppm .(IH, dublet, 6H), 5,72 ppm (IH, dublet, 7H), 6,94 ppm (IH, s., thiazol 5H), 7,95 ppm (IH, s., triazol 4H).

(d) Dinatrium-7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacet-amido]-3~(1-carboxymethyl-l,2,3,4-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (proces B).

NMR-Spektrum (60 MHz, i D20): 3,55 ppm (2H, kvartet, 2-CH2), 3,96 ppm (3H, s., =N0CH3), 4,72 ppm (2H, s., -N-OH2COONa), 5,16 ppm (IH, dublet, 6H), 5,72 ppm (IH, dublet, 7H), 6,95 ppm (IH, s., thiazol 5H).

(e) 7-[2-(2-Aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]-3-[1-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-l,2,3,4-tetrazol-5-yl]-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-betain (proces A, B).

CH

NMR-Spektrum (60 MHz, i D90); 3,01 ppm (6H, s.j-N ^ ), 3,50 ppm * NCH3 (2H, kvartet, 2-CH2), 3,96 ppm (3H, s., =N0GH^)} 5,16 ppm (IH, dublet, 6H), 5,74 ppm (IH, dublet, 7H), 6,96 ppm (IH, s., thiazol 5H).

(f) Natrium-7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]- 3-(6-methyl-l-oxopyridazin-3-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (pro-ces B).

NMR-Spektrum (60 MHz, i D20): 2,60 ppm (3H, s., pyridazin 6-CH3), 3,52 ppm (2H, kvartet, 2-CH2), 3,96 ppm (3H, s., =N0CH3), 5,21 ppm (IH, dublet, 6H), 5,76 ppm (IH, dublet, 7H), 6,95 ppm (IH, s., thiazol 5H).

Den minimale inhibitoriske koncentration ^d.g/ml) af nogle af de som ovenfor nævnt opnåede forbindelser er som følger: 46 DK 161645 B j

Mikroorganisme Forbindelse ____(a) _(e) E. coli NIHJ 0,20 0,20 E. coli 0-111 0,10 0,024 E. coli T-7 1,56 1,56 K. pneumoniae DT 0,05 0,10 K. pneumoniae GN 3635 0,39 0,20

Serr. marcescens IFO 12643 0,73 1,56

Serratia TN 0024 0,73 0,73 P. vulgaris IFO 3933 0,10 0,20 ! P. vulgaris GN 4413 1,50 1,56 j P. mirabilis GN 4359 0,20 0,39 ; P. morganii IFO 3163 0,10 0,20 P. rettgeri 3 {TNO 336) = 0,012 0,024 P. rettgeri GN 4733 0,39 0,73 j

Ent. cloacae IFO 12937 3,13 6,25 1

Cit. freundii GN 99 0,20 0,20 I

Cit. freundii GN 1706 0,73 0,73 j

Eksempel 35 I en blanding af 20 ml vand og 10 ml methanol opløses 230 mg natrium-carbonat, hvorefter der tilsættes 477 mg 7-£2-(2-aminothiazol-4-yl)--2-(syn)-hydroxyiminoacetamido]-eephalosporansyre. Til denne blandede opløsning sættes 300 mg dimethylsulfat dråbevis under isafkøling og omrøring. Efter 25 minutter tilsættes der 300 mg kaliumcarbonat og 300 mg dimethylsulfat. Efter endnu 25 minutter koncentreres reaktionsblandingen under reduceret tryk, og den underkastes søjlekromatografi * på Amberlite XAD-2, idet der elueres med vand. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås natrium-7- [2- (2-amino.thiazol-4-yl)-2- (syn) -me-thoxyiminoacetamido]-cephalosporanat. Ifølge NMR-spektrum m.m. er dette produkt identisk med forbindelsen, der blev opnået i eksempel 28.

Eksempel 36 (1) Til en suspension af 5,54 g 2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoeddikesyre i 70 ml methylenchlorid sættes 2,42 g triethylamin for at opnå en opløsning. Under isafkøling og omrøring n DK 161645 Β sættes 4,l6 g phosphorpentachlorid i en enkelt dosis til ovennævnte opløsning. Efter 5 minutter fjernes isbadet, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 20 minutter, hvorefter den koncentreres under reduceret tryk. Til remanensen sættes 150 ml hexan, hvorefter der dekanteres to gange. Efter tilsætning af 90 ml vandfrit tetrahydro-furan filtreres det udfældede triethylamin-hydrochlorid fra, hvorved der opnås· en opløsning af 2- (2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2- (syn)-methoxyiminoacetylchlorid i tetrahydrofuran.

På den anden side sættes der til en suspension af 4,2$ g 7-aminodes-acetoxycephalosporansyre (7-ADCA) i en blanding af 50 ml vand og 50 ml tetrahydrofuran under isafkøling 4,44 g triethylamin for at danne en homogen opløsning. Under isafkøling sættes den tidligere fremstillede syrechloridopløsning dråbevis til ovenstående opløsning i løbet af 15 minutter. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer, hvorefter der tilsættes en mættet vandig opløsning af natrium-chlorid. Blandingen indstilles til pH-værdi ca. 2 med fortyndet saltsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetatlaget vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, tørres over magnesiumsulfat og koncentreres, hvorved der opnås $ g af et gullighvidt pulver. Pulveret vaskes med 50 ml methanol, og de uopløselige bestanddele opsamles ved filtrering. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 4,6 g 7-[2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacet-amido]-desacetoxycephalosporansyre som et hvidt pulver.

NMR-Spektrum (60 MHz, i d^-DMS0): 2,04 ppm (3H, s., 3-$H^) , 3,50 ppm (2H, bred singlet, 2-CH2), 3,92 ppm (3H, s., OCH^), 4,40 ppm (2H, s-, C1CH2C0), 5,1$ ppm (IH, dublet, 6H), 5,7$ ppm (IH, dubletx2, 7H), 7,50 ppm (IH, s., thiazol 5H).

< (2) Det ovenstående produkt omsættes og behandles på samme måde som i eksempel 30, (2), og der opnås natrium-7-t2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]-desacetoxycephalosporanat som et hvidt pulver. Ifølge NMR-spektrum og andre egenskaber er dette produkt identisk med produktet, som blev opnået i eksempel 20.

Eksempel 37 I 25 ml dimethylformamid suspenderes natrium-7-[2-(2-aminothiazol-4-

48 DK 161645 B

yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]-desacetoxycephalosporanat, og der tilsættes under isafkøling 3,75 g iodmethylpivalat og yderligere I

3 ml dimethylformamid. Efter 17 minutter sættes 100 ml ethylacetat · til reaktionsblandingen, og de uopløselige bestanddele filtreres fra. Filtratet vaskes med vand, en 5$fs vandig opløsning af natriumhydro-gencarbonat og en mættet vandig opløsning af natriumchlorid i den nævnte rækkefølge og tørres over magnesiumsulfat. Ethylacetatet af-destilleres derefter, og den resulterende olie (2,4 g) renses ved kromatografi på silicagel. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 1 g pivaloyloxyraethyl-7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyimi- j noacetamido3-desacetoxycephalosporanat som et hvidt pulver.

Elementæranalyse for C20H25N5°7S2:

Beregnet: C 46,95 H 4,92 N 13,09

Fundet: G 46,92 H 4,66 N 13,13 NMR-Spektrum (60 MHz, i CDCl^): 1,24 ppm (9H, s. -C(CH^)^, 2,16 ppm, 3,44 ppm (2H, dublet, 2-01^), 4,10 ppm OH, s., OCH^), 5,16 ppm (IH, dublet, 6H), 5,94 ppm (2H, s., -0CH20), 6,86 ppm (IH, s., thiazol 5H).

Eksempel 33 0,7 g af den 7-£2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxy-iminoacetamido]-desacetoxycephalosporansyre, som blev opnået ved fremgangsmåden i eksempel 11, (1) opløses i en isafkølet opløsning af 149 mg triethylamin i 7 ml dime thylf ormamid. Efter tilsætning af 715 mg iodmethylpivalat omrøres blandingen i 15 minutter. Til denne reaktionsblanding sættes 40 ml ethylacetat,og blandingen vaskes med vand, en 5$Ts vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat og en mættet vandig opløsning af natriumchlorid i den nævnte rækkefølge, hvorefter den tørres over magnesiumsulfat·. Ethylacetatet af de stilleres, og der opnås 0,8 g råt pivaloyloxymethyl-7-[2~(2-chloracetamido-thiazol-4-yl) -2- (syn) -methoxyiminoacet amido ] -de sacetoxycephalo spora-nat som en brun olie.

Dette produkt opløses i 3 ml dimethylacetamid, hvorefter der tilsættes 206 mg thiourinstof. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 16 timer. Hertil sættes 40 ml ethylacetat, og blandingen vaskes to gan-

« DK 161645 B

ge med 30 ml portioner af en mættet vandig opløsning af natriumchlo-rid og tørres over magnesiumsulfat. Ethylacetatet afdestilleres, og den resulterende brunfarvede olie (0,4 g) renses ved kromatografi på silicagel. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 0,2 g pivaloyl-oxymethyl-7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]-desacetoxycephalosporanat som et hvidt pulver.

Ifølge NMR-spektrum og andre egenskaber er dette produkt identisk med produktet, som blev opnået i eksempel 37.

Eksempel 39

Til en suspension af $31 mg 2~(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoeddikesyre i 10 ml methylenehlorid sættes 360 mg tri-ethylamin og 624 mg phosphorpentachlorid. Blandingen omrøres ved stuetemperatur I 20 minutter, hvorefter der tilsættes 100 ml hexan. Den udskilte olie udvindes ved dekantering af hexanet og opløses i 1$ ml tetrahydrofuran, hvorved der opnås en opløsning af 2-(2-chlor-acetamidothiazol-4-yl)-2-( syn)-methoxyiminoacetylchlorid.

På den anden side opløses 9$4 mg 7-amino-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre og 660 mg triethylamin i 15 ml af en 50%'s vandig tetrahydrofuranopløsning, og under isafkøling sættes den tidligere fremstillede syrechloridopløsning dråbevis til denne opløsning. Blandingen omrøres under isafkøling i 2 timer, hvorefter reaktionsblandingen fortyndes med vand, indstilles til pH-værdi ca. 2 med fortyndet saltsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ethyl-acetatlaget vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og tørres over magnesiumsulfat. Ethylacetatet afdestilleres, og remanensen behandles med ether. De resulterende krystaller opsamles ved * filtrering. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 1,3 g 7-[2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl )-2-( syn) -methoxyiminoacetamido ]-3'- (1-me-thyl-ΙΗ-1e trazol-5-yl)-thiomethyl-4-carboxylsyre.

Dette produkt er identisk med mellemproduktet, som blev opnået ved den første del af den i eksempel 27 beskrevne proces. 5,$ g af produktet fremstillet som ovenfor opløses i 20 ml dimethylacetamid, og under isafkøling tilsættes der 1,53 g thiourinstof. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 15 timer. Til denne reaktionsblanding sæt-

50 DK 161645 B

té's 200 ml is-vand, og blandingens pH-værdi indstilles til 3,5 med natriumhydrogencarbonat. Det resulterende bundfald opsamles ved fil- j trering og opløses i en lOfo1 s vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat. Opløsningen passeres derefter gennem en søjle pakket med Amberlite XAD-2. Ved denne rensningsprocedure opnås 1,5& g natrium- 7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]-3- (1-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat som et hvidt pulver.

Ifølge NMR-spektrum og andre egenskaber er dette produkt identisk med det produkt, der blev opnået i eksempel 27.

Eksempel 40 I 10 ml dimethylf ormamid opløses 1 g natrium-7-(2-{2-aminothiazol-4-yl) -2- {syn)-methoxyiminoacetamido]-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)“ thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat, og der tilsættes under isafkøling og omrøring 0,05 g iodmethylpivalat. Blandingen omrøres i 15 minutter. Efter tilsætning af 1+0 ml ethylacetat vaskes reaktionsblandingen j med vand, en 5$Ts vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat og en mættet vandig opløsning af natriumchlorid i dén nævnte rækkefølge og tørres derefter over magnesiumsulfat. Ethylacetatet afdestilleres i under reduceret tryk, og remanensen opløses i en lille mængde ethylacetat og filtreres. Til filtratet sættes ether, hvorefter der afkøles. Det resulterende bundfald opsamles ved filtrering. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 0,4 g pivaloyloxymethyl-7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]-3-(1-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat som et hvidt pulver.

Elementæranalyse for C£2^27^9®7^3:

Beregnet: C 42,27 H 4>34

Fundet: C 42,29 H 4,40 NMR-Spektrum (60 MHz, i CDCl^): 1,22 ppm (9H, s., 3,^0 ppm (2H, bred singlet, 2-CH2), 3 s94 ppm, 4,06 ppm (3Hx2, s.x2, N-CH^ og OCH^), 5,94 ppm (2H, s., -OCH-pO) , 5,12 ppm (IH, dublet, 0H), 6,06 ppm (IH, dubletx2, 7H), 4,44 ppm (2H, dublet, 3-CH2), 6,Bl ppm (IH, s., thiazol 5H).

DK 161645 B

Eksempel 41 I 20 ml methylenchlorid opløses 2,776 g 2-(2-chloracetamidothiazol- 4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoeddikesyre og 1,2 g triethylamin, hvorefter der tilsættes 2,08 g phosphorpentachlorid. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 20 minutter, hvorefter der tilsættes 150 ml hexan.

Det resulterende olieagtige bundfald skilles fra og opløses i 20 ml tetrahydrofuran, hvorved der opnås en opløsning af 2-(2~chloracet~ amidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetylchlorid. På den anden side opløses 3»143 g 7-amino-3-acetylacetoxymethyl-3-cephem-4“Car-boxylsyre og 2,20 g triethylamin i 50 ml af en 50$Ts vandig tetra-hydrofuranopløsning. Hertil sættes dråbevis under isafkøling og omrøring den tidligere fremstillede syrechloridopløsning. Blandingen omrøres under isafkøling i 2 timer, hvorefter der tilsættes vand. Blandingen indstilles til pH-værdi 2,0 med fortyndet saltsyre og ekstra-heres med ethylacetat. Ethylacetatlaget vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og tørres over magnesiumsulfat. Ethyl-acetatet afdestilleres derefter, og der sættes ether til remanensen. Det resulterende krystallinske produkt opsamles ved filtrering. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 4,163 g 7-[2-(2-chloraeetamido-thiazo.l-4-yl) -2- (syn) -methoxyiminoacetamido ]-3-acetylacetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre.

NMR-Spektrum (60 MHz, i d/-DMS0): 2,14 ppm (3H, s., -C-CH.J, 3,60 ppm

o r, J

0 (4H, bred s., -C-CH^-C- og 2-CH?), 3,86 ppm (3H, s., 0CHJ , 4,34 ppm χχ C C } o o (2H, s., CICH^CO), 4,91 ppm (2H, kvartet, 3-CH2), 5,13 ppm (IH, dublet, 6H), 5,80 ppm (IH, dubletx2, 7H), 7,40 ppm (IH, s., thiazol 5H).

t

Eksempel 42.

I 20 ml dimethylacetamid opløses 4,00 g af den 7-t2-(2-chloracet-amidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetamido]-3-acetylacetoxy-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre, som blev opnået i eksempel 41, hvorefter der tilsættes 1,06 g thiourinstof. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 17 timer, hvorefter der tilsættes 100 ml ether. Det olieagtige bundfald skilles fra og opløses i en 5%'s vandig opløsning af

„ DK 161645 B

dZ

natriumhydrogencarbonat. Opløsningen lyofiliseres,og det resulterende pulverformige produkt sættes til 50 ml methanol. De uopløselige be- j standdele filtreres fra, og filtratet sættes til 300 ml ether. Bund- j faldet opsamles ved filtrering. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 3 >150 g natrium-7- [2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyimino-acetamido ]-3-acetylacetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylat · I 10 ml vand opløses 933 mg af det ovenstående produkt, 350 mg l-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-lH-tetrazol-5-thiol og 168 mg natriumhydro-gencarbonat. Blandingen omrøres ved 55°C i en time,og derefter passeres reaktionsblandingen direkte gennem en søjle pakket med Amberlite XAD-2 til rensning. Ved den ovenstående fremgangsmåde opnås 170 mg natrium-7- \2- (2-aminothiazol-4-yl) -2- {syn) -methoxyiminoacetamido 3-3-£1- (2-N, N-dimethylaminoethyl) -IH-tetrazol-5-yl ]-thiomethyl-3- cephem- 4-carboxylat som et hvidt pulver. Ifølge NMR-spektrum og andre egenskaber er dette produkt identisk med det produkt, der blev opnået i eksempel 34.

Den følgende tabel viser den beskyttende virkning (ED mg/kg) af forbindelserne, som er fremstillet ifølge de ovenstående eksempler,på inficerede mus.

Tabel. !

Eksempel nr.

for prøven Administration ED^q (mg/kg) 26 SC 0,015 (CER : 1,25) 27 SC 0,022 (CER : 1,25) 28 SC 0,018 (CER : 1,25) 30 SC 0,111 (CER : 1,25) 40 Oral 0,11 (CEX : 2,51) 42 Oral " 0,27 (CEX : 2,51) * Forsøgsdyr : hanmus (ICR/SLC) 5 mus pr. gruppe pr. enkeltdosis. Infektion: intraperitonealt med Escherichia coli 0-111. Observationsperiode: 7 dage.

( ): kontrol SC = subkutan CER = cephaloridin

53 DK 161645 B

lsj-CH2OOBH-|—A + coo" CEX = cephalexin </ -CHCO--j/S\, NH0 .-N „ -CH0 2 1/ Y 3

COOH

Eksempel .43 (1) Til en suspension af 55,6 g 2-{2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoaddikesyre i 600 ml methylenchlorid sættes 24,3 g triethylamin for at opnå en opløsning. Under isafkøling og omrøring sættes 41,& g phoshorpentachlorid i to doser til den ovennævnte opløsning. Efter 5 minutter fjernes isbadet, og blandingen omrøres ved stuetemperatur· i 20· minutter, hvorefter den koncentreres under reduceret tryk. Til remanensen sættes 1 liter hexan, hvorefter der dekanteres to gange. Efter tilsætning af 600 ml vandfrit tetrahydrofuran frafiltreres det udfældede triethylaminhydrochlorid, hvorved der opnås en opløsning af 2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxy-iminoacetylchlorid i tetrahydrofuran.

På den anden side sættes der til en suspension af 54,7 g 7-amino-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre i en blanding af 400 ml ' vand og 400 ml tetrahydrofuran 6l g triethylamin under isafkøling for at fremstille en homogen opløsning. Under isafkøling sættes den tidligere fremstillede syrechloridopløsning dråbevis til ovennævnte opløsning i løbet af 30 minutter. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer, hvorefter der tilsættes en mættet vandig opløsning af natriumchlorid. Blandingen indstilles til pH-værdi 2 med fortyndet saltsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetatlaget vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, tørres over magnesiumsulfat og koncentreres, hvorefter der opnås 97,3 g 7-[2-(2-chloracet-

54 DK 161645B

! amidothiazol-4-yl)-2-(syn) -methoxyiminoacetamido]-3-carbamoy-loxy-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre. Ifølge NMR-spektrum og andre egenskaber er dette produkt identisk med det produkt, der blev opnået i eksempel 31, (1).

NMR-Spektrum (60 MHz, i d^-DMSO) : 3,56 ppm (2H, bred singlet, 2-CH^), 3,95 ppm (3H, s., OCH^), 4,35 ppm (2H, s., C1CH2C0), 4,76 ppm (2H, kvartet, 3-CH2), 5,19 ppm (IH, dublet, 6H), 5,64 ppm (IH, dubletx2, 7H), 6,56 ppm (2H, s., OCONHg), 7,46 ppm (IH, s., thiazol 5H).

(2) 97,3 g af produktet fremstillet som ovenfor under (1) opløses i 500 ml Ν,Ν-dimethylacetamid,og der sættes under isafkøling 31,2 g thiourinstof til opløsningen. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 15 timer. Til denne reaktionsblanding sættes 2 liter ether,og derefter fraskilles det olieagtige produkt. En suspension af dette olie-agtige produkt i 300 ml vand indstilles til pH-værdi 7,0 med natrium-hydrogencarbonat. Den således opnåede opløsning passeres gennem en søjle pakket med Amberlite XAD-2. Ved denne rensningsprocedure opnås 20,2 g natrium-7-£2- (2-aminothiazol-4-yl)-2-( syn) -methoxyimi-noacet-amido]-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylat som et hvidt pulver. Ifølge NMR-spektrum og andre .egenskaber er dette produkt identisl· med det produkt, der blev opnået i eksempel 26 eller 31.

Strukturerne og egenskaberne (IR-spektrum) af forbindelserne 1 til 33, som er opnået ifølge de ovenstående omhandlede fremgangsmåder, er opført i den følgende tabel. I denne tabel betyder IR-spektrum (cm-\ KBr) karakteristiske absorptionsbånd, som skyldes β-lactamdelen.

Tabel.

R2NH q V\ II s

N_l-C-CONH--/ X

H J^-k J-CHjR3

OCH3 cqqM

Forbin- 9 ^ M IR

delse R E (om_1,KBr)

DK 161645 B

55 1 H -s\J Na 1760 2 H Vi? Na 1765

-sAV

H _ 3 H Vi? Na 1?58 -sAV ch5 CH-, 4- ' H j| fj Na 1760

C IL

_-_:_5____

CH

5 Η ίι [Γ 5 Na 1763 -sAsAch, 6 H V? Na 1765 -sAsAnh2 7 H V r? Na 1760 -s 4C> HHCOOCH, b 7 /

56 DK 161645 B

- Forbin- p TT? delse ΈΓ R^ Μ _Ί nr.__ (cm ,KBr) 8 Η ? ~ ΐί Na 1765 -sAs>ch2co m2 9 H !? " π Na 1768

-sArH

CH2CO]®i2 I

10 H ? “ ? Na 1768 -sAn>nh2 ch3 11 H -OH Na 1?60 12 H ? " j? CH, Na 1765 -δΛςΛθΗοΝ< 3 S CBj 13 H 0 1765 14 H -r y—CQNHp 0 1765 15 · H ΐ ~ f! Na 1768 -S A g jJ- SOØCQONa

TT - TT

16 Η I, jf Na 1765 CH2C00Na

Forb in- 0 rp delse R2 R3 M _i nr. (cm ,KBr)

„ DK 161645 B

17 Η ? “ π Na 1765 -SArii ' CHgSO^Na Οϊζ 18 H -OCOCH^ -CH2OCOC-CH5 1760 CH, 7 CH3 19 H -0C0NHo -CHo0C0C-CH, 1765 C. -d. I 7 ___ CH3__ CHj 20 H J“ {? -CH2OCOC-CH5 1765 _S_^N"N CH, _;__H__3___ CH3 21 H f ” i -CHo0C0C-CH, 1768 -s—Ili w 2 i ,7 b VN^ r„ CH* • 6H, 5 CHpCH9N< 2 __;__CH^___ 22 Η H -CHOCOOCgH^ 1760 CH, 7 23 H -OCOCH^ -CHOCOOCp 1763 CH, 7 CH^ 24 H -OCONH9 ' -CHOCOC-CH, 1763 2 i i 7 CH5 CHj

N - N

25 H _ Jt N -CHOCOOC^ 1765 S T CH, CH, 5 7

Forbin- ? \ m IR

delse R R (cm-1 KBr)

58 DK 161645 B

26 H 11 ? -CHOC000,-,¾. 1768 ; -s-Il N » ^ 2 0^'K'L' CH, 1 H 3 ! N - N CH5 27 H -sA^N -CHOCOC-CH, 1765 0H2CH2N<CH5 °H, iH? ! CH3 ! 28 Η H <JjQ 1760

It o 29 H -OCOCH^ <^0 1763 tt

O

50 h -ocom2 ’ 1763 tt o J1 * AJ ¢0 ' " 0¾__O__ M B -.-O °Φθ 1765

H O

« \ 55 * AJ ' °00 " r H "

' s nx O

gh0ch0nC 5 6¾ 3

Claims (7)

1. 59 DK 161645 B 1. 2-(2-Chloracetamidothiazol-4-yl)-2-oxyiminoeddikesyrederivater til anvendelse son mellemprodukter ved fremstillingen af (5-lactamanti-biotika, kendetegnet ved, at de har den almene formel C1CH-C0NH S Y )j (III) N_Li -C-COOH II NV fi nor6 g hvori R betyder hydrogen eller methyl, eller er et salt, en lavalkyl-ester eller et reaktionsdygtigt derivat deraf.
2. 2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den anvendes til fremstilling af en cephemforbindelse med formlen S NH?-/ \ ! i s N-U-C-CONH--/ \ (I) Il I -¾ Nn c >-N .,-CH0R nor6 2 COOH 3 hvori R betyder hydrogen eller en rest af en nucleofil forbindelse, g og R betyder hydrogen eller methyl, eller et farmaceutisk acceptabelt salt eller en farmaceutisk acceptabel ester deraf.
3. 3. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er 2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoeddikesyre.
4. 4. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er 2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2-(syn)-methoxyiminoacetyl-chlorid.
5. 5. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er 2-(2-chloracetamidothiazol-4-yl)-2- (syn)-methoxyiminoacetyl-chlorid-hydrochlorid.

   60 DK 161645 B
6. 6. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1 med formlen ! CICH^CONH S Yj , : I I \ 6 OR 6 7 hvori R betyder hydrogen eller methyl, og R betyder lavalkyl, i kendetegnet ved, at en forbindelse med formlen H2Yji
7. 7 II N L·6 r n hvori R° og R har de ovenfor angivne betydninger, omsættes med chloracetylchlorid inden eller efter isolering af syn-isomeren. i i j