DK157451B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 2,4-diamino-6-alkoxybenzyl-5-methylpyridooe2,3-daapyrimidiner eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf - Google Patents

Description

' DK 157451 B

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 2,4-diamino- 6-alkoxybenzyl-5-methylpyrido [2,3-d]pyrimidiner med den almene formel (II), som defineret i krav 1's indledning, eller farmaceutisk acceptable syreadditionssal-5 te deraf. Fremgangsmåden er ejendommelig ved det i krav 1's kendetegnende del anførte.

GB patentskrift nr. 1.084.103 beskriver 2,4-dia-minopyrido(2,3-d)pyrimidiner med den almene formel (I): 10 η nh9 r1 _ H2N n n 15 1 2 hvor R er en alkylgruppe, og R er en usubstitueret ben- zylgruppe eller en benzylgruppe substitueret med én eller flere substituenter valgt blandt halogenatomer, alkyl- og alkoxygrupper.

Forbindelserne med formlen (I) angives at have en 20 høj in vitro- og in vivo-aktivitet over for bakterier eller bakterielle infektioner hos forsøgsdyr.

Det har senere vist sig, at de forbindelser med formlen (I), der er specielt nævnt i GB patentskrift nr. 1.084.103, viser en vis hæmmende aktivitet over for 25 pattedyr-dihydrofolatreduktase (DHFR), og at aktiviteten var tilstrækkelig til at gøre forbindelserne potentielt anvendelige ved behandlingen af tilstande, hvor hæmning af pattedyr-DHFR er ønskelig.

Det har yderligere vist sig, at mange af disse forbindelser er virksomme inhibitorer for histamin-N-methyl-transferase (HMT), et enzym der er involveret i histaminstofskiftet. Herved bevirker de ofte en uønsket akkumulering af histamin i organer og væv. Virkningerne af histamin er velkendte, og enhver mulighed for yderligere an-35 vendelighed for disse forbindelser blev betvdeliat for

DK 157451 B

2 ringet ved deres stærke hæmning af HMT.

Yderligere undersøgelser viste, at en række andre forbindelser med formlen (I) også har DHFR-hæmmende aktivitet, men at disse samtidigt også var virksomme inhibi- _ torer for HMT. Andre, der havde acceptabelt lave niveauer b af HMT-hæmning, · fandtes at have utilstrækkelig aktivitet som inhibitorer for DHFR.

Det har nu overraskende vist sig, at visse 2,4-di-amino-6-(dimethoxybenzyl)-5-methyl-pyrido(2,3-d)pyrimidi-^P ner, der ligger inden for området af formlen (I), men som ikke er specielt omtalt i GB patentskrift nr. 1.084.103, ikke blot er meget virksomme inhibitorer for pattedyr-DHFR, men også har acceptabelt lav hæmmende aktivitet over for HMT. Disse forbindelser er repræsenteret ved ^ formlen (II) nedenfor og er anvendelige ved behandlingen af proliferative sygdomme, såsom psoriasis, basal- og skæl-cellekræft i huden og forskellige former for cancer omfattende leukæmier, lymphomer, sarcomer og faste tumo rer.

2Q Opfindelsen angår følgelig fremstilling af forbind elser med formlen (II): NH2 ch3 /Λν 25 (II) H2N N n

OR OR

hvor Ar er “\0/ eller \0/“ 0R' · hvor ^ OR' R og R" er (C^-Cg)alkyl, eller farmaceutisk acceptable 33 syreadditionssalte deraf. Der tilvejebringes fortrinsvis monobasiske salte.

DK 157451 B

3

Grupperne R og R' er fortrinsvis methyl. Der fremstilles fortrinsvis 2,4-diamino-6-(2,5^dimethoxybenzyl)- ' 5-methylpyrido (2,3-d) pyrinlidin eller syreadditionssalte deraf.

Den antiproliferative aktivitet af forbindelserne med formlen (II) skyldes den fri base, og arten af den i dannelsen af syreadditionssaltene deltagende syre er således af mindre betydning. Egnede syreadditionssalte omfatter for eksempel dem, der er afledt af saltsyre, hydro-geniodidsyre, svovlsyre, phosphorsyre, eddikesyre, p-to-luensulfonsyre, methansulfonsyre, maleinsyre, mælkesyre, 10 citronsyre, vinsyre, ravsyre, oxalsyre, p-chlorbenzensul-fonsyre, isethionsyre, glucuronsyre, pantothensyre og lactobionsyre.

Den omhandlede analogifremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne med formlen (II) er ejendommelig ved følgende fremstillingsmetoder.

a) Reduktiv spaltning af en tilsvarende 7- substutieret forbindelse med formlen (III): nh2 ch3 20 sAvVcH2Ar .yAAA> o hvor Ar er som defineret for formlen (II), og R er en 25 eliminerbar gruppe, der kan fjernes ved hydrogenolyse.

Sådanne grupper omfatter for eksempel en mercapto- eller en halogen- (f.eks. chlor-)gruppe.

3 Når R i en forbindelse med formlen (III) er SH, kan dethiationen for eksempel hensigtsmæssigt gennemføres ved omsætning med et reduktionsmiddel, f.eks. Raney-nik-kel eller Raney-cobalt, eller ved katalytisk hydrogenering med hydrogen i nærværelse af en katalysator, såsom palladium-på-trækul.

3

Forbindelser med formlen (III), hvor R er en mer- captogruppe, kan fremstilles ud fra den tilsvarende 7-chlor-forbindelse (III) (R =C1) ved omsætning med et hy-drosulfid, som beskrevet i GB patentskrift nr. 913.710, 35

DK 157451 B

4 eller ved behandling af den tilsvarende 7-hydroxy-forbin- delse med phosphorpentasulfid.

3 I det tilfælde, hvor R er et halogenatom i forbindelserne med formlen (III), kan forbindelserne med formlen (II) for eksempel hensigtsmæssigt opnås ved 5 katalytisk hydrogenering.

b) Omdannelse, ved inden for pyrimidinkemien i og-for sig kendte fremgangsmåder, af hydroxy- og/eller mercaptogruppen eller -grupperne i en forbindelse med formlen (VI): 10 Y ch3 J\A^CH2Ar <vi) 1 5 hvor Y og Z er ens eller forskellige og er OH, SH eller NH^ med den betingelse, at mindst den ene af Y og Z er OH eller SH, og Ar er som defineret for formlen (II), til aminogrupper.

Forbindelser med formlen (VI) kan opnås ved frem- 20 gangsmåder, der er i og for sig kendt på området for fremstilling af sådanne forbindelser. Endvidere kan de forbindelser, hvor Y er OH eller NH2, og Z er OH eller SH, opnås for eksempel ved omsætning af urinstof, guani-din eller thiourinstof med en egnet forbindelse med form-25 len (VII): ς CH, R CH2Ar

30 R N

5 hvor Ar er som defineret for formlen (II), R er -C02H, -C02Alkyl, -C0NH2 eller CN, og R6 er NH2, Cl eller Br.

35

DK 157451 B

5

En ved fremgangsmåde a) eller b) opnået forbindelse med formlen (II) kan derefter, om ønsket, på i og for sig kendt måde omdannes til et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf, som ovenfor omtalt.

Selvom det er muligt at anvende forbindelserne med ^ formlen (II) eller syreadditionssalte deraf (i det følgende omtalt som de "aktive forbindelser") som det rå kemikalium, foreligger de fortrinsvis i form af en farmaceutisk komposition.

En sådan farmaceutisk komposition omfatter den ak-1 o tive forbindelse sammen med en farmaceutisk acceptabel bærer for denne. Bæreren skal være "acceptabel" i den forstand, at den skal være forenelig med de andre bestanddele i kompositionen og uskadelig for recipienten.

Fremstillingen af den farmaceutiske komposition 1 ^ kan ske ved, at en aktiv forbindelse og en farmaceutisk acceptabel bærer for denne bringes sammen.

Lokal anvendelse er særligt egnet, når de aktive forbindelser skal anvendes ved behandlingen af proliferative hudsygdomme.

20 Angivelsen "lokal" anvendt heri angår anvendelsen af den aktive bestanddel inkorporeret i en egnet farmaceutisk bærer og påført på stedet for sygdommen med henblik på udøvelse af lokal virkning.

Farmaceutiske kompositioner, der er egnede for lo-

p C

kal anvendelse, kan foreligge i vandfri former, såsom salve, lotion, pasta, gelé, sprayprodukt, aerosol og badeolie. Betegnelsen salve omfatter kompositioner (inklusive cremer) med basisprodukter af olietype, absorptionstype, 1 35

DK 157451B

6 vandopløselig type og emulsionstype, for eksempel vaseline, lanolin, polyethylenglycoler og blandinger deraf.

Lokalt anvendelige kompositioner kan indeholde en koncentration af den aktive bestanddel på fra 0,05 til 2 vægtprocent, 5 fortrinsvis fra 0,1 til 1 vægtprocent og navnlig fra 0,2 til 0,5 vægtprocent.

Andre farmaceutiske kompositioner omfatter dem, der er egnede til oral, rectal og parenteral anvendelse, hvoraf de orale foretrækkes. Kompositionerne kan, hvor egnet, 10 hensigtsmæssigt foreligge i separate dosisenheder og kan fremstilles ved en hvilken som helst af de på det farmaceutiske område kendte måder. En hensigtsmæssig enhedsdosiskomposition indeholder den aktive forbindelse i en mængde på fra 50 mg til 1 g, fortrinsvis fra 100 mg til 15 500 mg, navnlig ca. 200 mg, til indtagning én gang eller flere gange daglig.

Alle fremgangsmåder til fremstilling af sådanne kompositioner omfatter det trin at sammenbringe den aktive forbindelse med flydende bærere eller findelte faste bæ-20 rere eller begge dele og derefter, om nødvendigt, forne produktet til den ønskede komposition.

Farmaceutiske kompositioner egnede til oral anvendelse, hvori bæreren er et fast stof, foreligger fortrinsvis som enhedsdosiskompositioner, såsom store piller, 25 kapsler, oblatkapsler eller tabletter hver indeholdende en forud fastlagt mængde af den aktive forbindelse. En tablet kan fremstilles ved kompression eller formning, eventuelt sammen med én eller flere hjælpebestanddele. Komprimerede tabletter kan fremstilles ved i en egnet ma-30 skine at komprimere den aktive forbindelse i fritstrøm-mende fom, såsom et pulver eller granuler, eventuelt blandet med et bindemiddel, smøremiddel, indifferent fortyndingsmiddel, smørende, overfladeaktivt eller disperge-rende middel. Formede tabletter kan fremstilles ved at 35 forne den aktive forbindelse i et indifferent flydende fortyndingsmiddel. Tabletter kan eventuelt være belagt, og hvis de er ubelagte kan de eventuelt være rillede. Kapsler kan fremstilles ved at indfylde den aktive forbindelse enten alene eller

DK 157451 B

7 i blanding med ét eller flere hjælpestoffer i kapselbeholderne og derefter forsegle disse på sædvanlig måde. Oblatkapsler er analoge med kapsler, idet den aktive bestanddel sammen med eventuelle hjælpemidler er forseglet 5 i en rispapirkappe.

Farmaceutiske kompositioner egnede til oral anvendelse, hvori bæreren er en væske, kan foreligge som en opløsning eller en suspension i en vandig væske, eller som en olie-i-vand- eller vand-i-olie-emulsion.

10 Farmaceutiske kompositioner egnede til rectal an vendelse, hvori bæreren er et fast stof, foreligger fortrinsvis som enhedsdosis-suppositorier.

Egnede bærestoffer omfatter kakaosmør og andre på området almindeligt anvendte materialer, og suppositorier-15 ne kan formes hensigtsmæssigt ved at blande den aktive forbindelse med det eller de blødgjorte eller smeltede bærestoffer og derefter afkøle og forme dem i forme.

Farmaceutiske kompositioner egnede til parenteral anvendelse omfatter sterile opløsninger eller suspensio-20 ner af den aktive forbindelse i vandige eller olieagtige hjælpemidler. Sådanne præparater foreligger hensigtsmæssigt i enhedsdosis- eller multidosis-beholdere, der efter indføring af kompositionen holdes forseglet indtil brug.

Det skal forstås, at de ovennævnte farmaceutiske 25 kompositioner foruden de ovennævnte bærerbestanddele, alt efter hvad der egner sig, kan indeholde ét eller flere yderligere bærestoffer, såsom fortyndingsmidler, puffere, smags/duftstoffer, bindemidler, overfladeaktive midler, fortykningsmidler, smøremidler eller præserveringsmidler 30 (omfattende antioxidanter), og stoffer., der indføres med det formål at gøre kompositionen isotonisk med den tilsigtede recipients blod.

Som ovenfor beskrevet, er de omhandlede forbindel-• ser anvendelige ved behandlingen af proliferative sygdom-35 me. "Behandling af proliferativ sygdom hos pattedyr, inklusive mennesker, omfatter anvendelse af en effektiv, ikke-toxisk mængde af den aktive

DK 157451 B

8 forbindelse én eller flere gange dagligt oralt eller påført lokalt.

Den mængde aktiv forbindelse, der kræves til opnåelse af en terapeutisk effekt som antiproliferativt middel^ vil naturligvis variere ikke blot med det specielt 5 anvendte salt, men også med anvendelsesmåden. I almindelighed vil en passende dosis til behandling af et pattedyr (inklusive menneske) ligge inden for området fra 0,1 til 100 mg pr. kg legemsvægt (mg/kg) pr. dag, fortrinsvis inden for området fra 2,0 til 50 mg/kg og navnlig ^ inden for området fra 5 til 20 mg/kg.

Toxiske manifestationer, der kan tillægges de aktive forbindelser, er typisk dem, der er forbundet med folatopbrug, såsom benmarvsdepression, megaloblastiske ændringer og gastrointestinal ulceration. Calciumleuco-1 s vorin (calciumsalt af 5-formyl-5,6,7,8-tetrahydrofolin-syre) kan anvendes til reversering af disse toxiske manifestationer eller til at forebygge deres fremkomst. Anvendelsen af calciumleucovorin kan ske samtidigt med behandling eller på et hvilket som helst trin deraf, når 20 som helst der viser sxg toxiske symptomer.

Den hæmatologiske aktivitet af den aktive forbindelse kan således forebygges eller begrænses ved samtidig anvendelse af leucovorin. Vævsniveauer for den aktive forbindelse kan derfor uden risiko hæves ved at for-25 øge dosen af forbindelsen, samtidigt med at der gives leucovorin.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen beskrives nærmere gennem følgende eksempler 1 og 2. 1 35

DK 157451 B

9

Eksempel 1 2,4-Diamino-5-methyl-6-(2,5-dimethoxybenzyl)pyrido-(2,3- d)pyrimidin.

En blanding af 2,5-dimethoxybenzaldehyd (100 g), 5 ethylacetoacetat (84,5 g), vandfri benzen (200 ml), pi-peridin (6 ml) og eddikesyre (12 ml) blev opvarmet under tilbagesvaling i 3 timer i et apparat udstyret med en Dean-Stark-opfanger til opsamling af det azeotropisk destillerede vand. Reaktionsblandingen blev afkølet, ben-10 zen (300 ml) blev tilsat, og opløsningen blev vasket successivt med vand (100 ml), kold 0,1N saltsyre (200 ml), 5% vandig natriumbicarbonat (200 ml) og fortyndet eddikesyre (100 ml) og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev fordampet under reduceret tryk, og 15 den resterende olie blev destilleret, kp. 169-170°C/0,3 mm Hg, hvorved opnåedes ethyl-α-(2,5-dimethoxybenzyliden) acetoacetat (104 g, 64%), der størknede ved henstand (smp. 68-69°C) og blev omkrystalliseret af ethanol-pen-tan (smp. 72-73°C). En del af produktet (38 g) blev re-20 duceret katalytisk i nærværelse af 5% palladium-på-træ-kul-katalysator (Pd/C) i ethylacetat (150 ml). Efter fjernelse af opløsningsmidlet blev produktet renset ved destillation under reduceret tryk, hvorved opnåedes ethyl-a-(2,5-dimethoxybenzyl)acetoacetat, kp. 146-148°C/0,3 mm 25 Hg.

En blanding af ethyl-a-(2,5-dimethoxybenzyl)acetoacetat (21,2 g), 2,4,6-triaminopyrimidin (10 g) og di-phenylether (100 ml) blev opvarmet ved 190-230°C i 1,5 timer i et apparat udstyret med en Dean-Stark-opfanger, 30 og vand-ethanol (4 ml) blev opsamlet. Methanol (200 ml) og ethanol (50 ml) blev sat til den afkølede reaktionsblanding. Det resulterende faste stof blev opsamlet ved filtrering og behandlet med kogende vand (1 liter), hvorved opnåedes 2,4-diamino-5-methyl-6-(2,5-dimethoxybenzyl)-35 7-oxo-7,8-dihydropyrido(2,3-d)pyrimidin (17 g), smp. 325-326°C.

DK 157451 B

10 2,4-Diamino-5-methyl-6-(2,5-dimethoxybenzyl)-7-oxo- 7,8-dihydropyrido(2,3-d)pyrimidin (8 g) blev chloreret ved behandling med Vilsmeier-reagens fremstillet ved langsomt at sætte thionylchlorid (28,6 g) i tør chloro-5 form (25 ml) til en opløsning af dimethylformamid (17,5 g) i chloroform (100 ml) ved 0-5°C. Den kolde blanding af pyridopyrimidinen og Vilsmeier-reagens blev omrørt og fik gradvis lov at nå stuetemperatur, hvorefter den blev opvarmet under tilbagesvaling i 3 timer. Den blev deref-10 ter behandlet med ethanolisk base (80 ml), idet temperaturen holdtes ved 25-30°C med afkøling. Det dannede brune produkt blev isoleret, behandlet yderligere med vandig ammoniak og derefter omkrystalliseret af ethanol, hvorved opnåedes- 2,4-diamino-5-methyl-6- (2,5-dimethoxyben-15 zyl)-7-chlorpyrido(2,3-d)pyrimidin, smp. 193-196°C (dék.).

Chlorforbindelsen (0,3 g) blev opløst i ethanol (200 ml) indeholdende kaliumhydroxid (0,2 g). Der blev tilsat 5% palladium-på-trækul-katalysator (0,2 g), og hydrogenering blev påbegyndt. Reduktionen var fuldendt 20 efter 48 timer og gav 2,4-diamino-5-methyl-6-(2,5-dimethoxybenzyl )pyrido(2,3-d)pyrimidin, smp. 252-254°C.

Eksempel 2 2,4-Diamino-6-(3,4-dimethoxybenzyl)-5-methylpyrido(2,3— d)pyrimidin.

25 En blanding af 3,4-diméthoxybenzaldehyd (100 g), ethylacetoacetat (78 g) og vandfri benzen (100 ml) blev opvarmet under tilbagesvaling i 3 timer, i løbet af hvilket tidsrum den teoretiske mængde vand blev fjernet ved azeotropisk destillation. Opløsningsmidlet blev derefter 30 fjernet under reduceret tryk, og inddampningsresten blev omkrystalliseret af ethylacetat/pentan, hvorved opnåedes ethyl-α-(3,4-dimethoxybenzyliden)acetoacetat (153 g), smp. 72°C (analytisk prøve fra yderligere orakrystallisation (ethanol-pentan) havde smp. 85-86°C).

35 Ethyl-α-(3,4-dimethoxybenzyliden)acetoacetat (50 g) blev reduceret katalytisk i et Parr-lavtryksapparat i ethylacetat (150 ml) i nærværelse af 5% palladium-på-træ-

DK 157451 B

11 kul-katalysator (Pd/C) (3 g). Katalysatoren blev frafiltreret, opløsningsmidlet blev fjernet under reduceret tryk, og den resterende olie blev destilleret, hvorved opnåedes ethyl-α-(3,4-dimethoxybenzyl)acetoacetat (42 g, 5 kp. 162-164°C/0,4 mm Hg).

En blanding af ethyl-a-(3,4-dimethoxybenzyl)acetoacetat (42 g) og 2,3,6-triaminopyrimidin (21 g) i diphe-nylether (120 ml) blev opvarmet ved 190-230°C i 2 timer, i løbet af hvilket tidsrum ethanolen og dannet vand blev 10 fjernet azeotropisk. Reaktionsblandingen blev afkølet, og methanol (250 ml) og ethanol (50 ml) blev tilsat. Det resulterende faste stof blev frafiltreret og behandlet med kogende vand (1 liter), hvorved opnåedes 2,4-diamino-5-me-thyl-6-(3,4-dimethoxybenzyl)-7-oxo-7,8-dihydro-pyrido(2,3 15 -d)pyrimidin (26 g), smp, 346-348°C.

Til en opløsning af dimethylformamid (17,5 g) i chloroform (75 ml) blev der sat thionylchlorid (14 g) i chloroform (25 ml) ved 0-5°C. Reaktionsblandingen fik lov at opvarme til 55-60°C i ca. 5 minutter og blev derefter 20 afkølet til 0°C. Til reaktionsblandingen blev der over en periode på 20 minutter ved 0°C sat 2,4-diamino-5^methyl- 6-(3,4-dimethoxybenzyl)-7-oxo-7,8-dihydropyrido(2,3-d)py-rimidin (8,2 g). Chloroform (50 ml) blev tilsat, og blandingen blev opvarmet under tilbagesvaling .i 2,5 timer og 25 afkølet, og der blev tilsat ethanolisk base (50 ml). Det resulterende brune produkt blev frafiltreret, behandlet med 2N natriumhydroxid og omkrystalliseret af ethanol, hvorved opnåedes et råprodukt (7,6 g). Yderligere omkrystallisation af ethanol-vand gav 2,4-diamino-5-methyl-6-30 (3,4-dimethoxybenzyl)-7-chlor-pyrido (2,3-d)pyrimidin (2 g), smp. 224-225°C (dek.). Dette blev sat til ethanol (250 ml) indeholdende kaliumhydroxid (0,2 g). 5% Palladium-på-træ-kul-katalysator (0,1 g) blev tilsat, og hydrogenering blev påbegyndt. Reduktion var fuldendt efter 4 timer i et Parr-35 lavtryksapparat ved 35-40 psi og gav 2,4-diamino-6-(3,4-dimethoxybenzyl)-5-methyl-pyrido(2,3-d)pyrimidin (0,1 g), smp. 265-268°C (dek.).

' ’ DK 157451B

12

Eksempel 3 Hæmning af pattedyr-dihydrofolatreduktase DHFR med 2,4-diamino-6-benzylpyrido(2,3-d)pyrimidiner.

Forsøgsforbindelsernes inhibitorvirkning over for 5 DHFR, der var delvis renset fra rottelever, blev bestemt. Resultaterne er anført i nedenstående Tabel I. En IC,-q på 5 x 10-½ eller mindre betragtes som betydelig styrke, og

_ O

en ICj-q på 1 x 10 M eller mindre betragtes som særligt betydelig styrke.

10 Tabel I

“2 R1

Forsøgsforbindelse

- “2 IC50 10 M

K. . K__

Sammenligning: 15 CH3 -CH2Ph 4 CH3 -CH2 —^ X'6 CH3 -CH2-^- CH3 2,7 CH3° Τ"Λ ch3 -ch2—5'° CH3 -CH2-— OCH3 5,3 20 CH3 -CH2-^- C2H5 9 fortsættes

DK 157451 E

13 [iOrsøgsforbindelse _o __:- tc Γ0_°Μ 1 2 ϊ^50

K K

Saimienligning: _ 5 H ~CH2 “O 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 CH30

Ifølge opfind.; CH3 -CH2-NLJ/ 0/15 ' °CH3 10 _?CH3 CH3 -CH2-\0)- °CH3 0/78 15 Resulataterne i tabel I viser, at forbindelserne fremstillet ved den omhandlede fremgangsmåde er mere virksomme inhibitorer for pattedyr - dihydrofolatreduk-tase (DHFR) end de kendte sammenligningsforbindelser.

35

Eksempel 4 2 Hæmning af histamin-N-methyl-transferase (HMT) med 2,4- 3 diamino-6-benzylpyrido(2,3-d)pyrimidin.

4

Effekten af de i Eksempel 3 anvendte forsøgsfor 5 bindelser over for HMT blev bestemt. Resultaterne er an- 6 ført i Tabel II. En hæmning på mindre end 20% blev be 7 tragtet som acceptabel, og manglen på enhver effekt på 8 dette enzym er meget ønskelig, da enhver indgriben i 9 histamin-stofskifte éom ovenfor forklaret skal begrænses 10 til et minimum.

11 t 1

DK 157451 B

14

Tabel II

nh2 R1 »λΛρ r2

Forsøgsforbindelse % hæmning af --—.---- HMT ved

5 E__R___in~5M

Sammenligning: , -CH3 -CH2Ph 51 -CH3 -CHj —59 -CH3 -CH2 O' CH3 undersøgt 0CH3 _CH3 -CH2 -Q) 18 10 “CH3 -CH2 --^3)-0CH3 20 -CH3 -CH2 -(g)- C2H5 55 H -CH2 -48

Ifølge opfind.: och3 "CH3 -CH2 ^3)^ 11 och3 —qch3 -CH3 - CH2 -((3y- 0CH3 19

DK 157451 B

15

Resulateterne i tabel II viser, at forbindelserne fremstillet ved den omhandlede fremgangsmåde er mindre virksomme inhibitorer for histamin-N-methyl-transferase (HMT) end de kendte samménligningsforbindelser. De 5 samlede resultater i tabellerne I og II viser således tydeligt den langt bedre balance mellem inhibitionen af DHFR og inhibitionen af HMT, der udvises af de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser sammenlignet med de kendte forsøgsforbindelser.

10

Eksempel 5

Antitumor-effekt af 2,4-diamino-6-(2,5-dimethoxy-benzyl)- 5-methylpyrido(2,3-d)pyrimidin.

Faste Walker 256-tumorer blev implanteret subcutant på tre grupper af rotter. På den tredie dag efter implantation af tumorerne påbegyndtes lægemiddelbehandling, og den blev fortsat i 5 på hinanden følgende dage. Én gruppe af rotter blev behandlet med 2,4-diamino-6-(2,5-dime-thoxybenzyl)-5-methylpyrido(2,3-d)pyrimidin i en dosis på 25 mg/kg dagligt, en anden gruppe blev behandlet med samme forbindelse i en dosis på 15 mg/kg to gange dagligt, og den tredie gruppe forblev ubehandlet som kontrol. Efter 17 dage viste de behandlede rottegrupper gennemsnitlige tumorvolumener på henholdsvis 29% og 10% af den ubehandlede gruppe.

Ved et andet forsøg blev tumorer implanteret subcutant, og lægemiddelbehandling blev udsat til 10 dage efter implantation. Lægemiddelbehandling bestod i 30 mg/ kg fire gange dagligt på dagene 10-13 og 50 mg/kg på dagene 20, 24 og 28 efter tumorimplantation. Gennemsnitli- 30 ge tumorvolumener blev målt under dette forsøg. Tumorvolumen hos dyr, der ikke fik nogen behandling, steg hurtigt, mens de, der fik lægemiddelbehandling, viste et fald i gennemsnitligt tumorvolumen under observationsperioden. 23 dage efter tumorimplantation var T/C 0,03.

35 t * i

DK 157451 B

16

Eksempel 6

Antileukæmi-virkning af 2,4-diamino-6-(2,5-dimethoxyben-zyl)-5-methylpyrido(2,3-d)pyrimidin.

Leukæmi P388-celler blev inokuleret intraperitone- g alt i CDF, Charles River hunmus, idet hvert dyr fik 10 celler. På den anden dag efter implantation med leukæmiceller påbegyndtes lægemiddelbehandling, og den fortsatte to gange dagligt i tre dage. Fire grupper mus blev behandlet med 2,4-diamino-6-(2,5-dimethoxybenzyl)-5-me-^ thylpyrido(2,3—d)pyrimidin i doser på 22, 33,5, 50 og 75 mg/kg legemsvægt, og en femte gruppe forblev ubehandlet som kontrol. Alle de ubehandlede mus døde af leukæmi mellem den 10. og den 12. dag med en gennemsnitlig overleven på 11 dage. Alle de behandlede mus overlevede i længere 15 perioder end de ubehandlede dyr med en procentvis forøgelse af levetiden på 145%, 159%, 140% og 154% for de lægemiddelbehandlede grupper, der fik doser på henholdsvis 22, 33,5, 50 og 75 mg/kg. Dette er en meget betydelig effekt. Der var ingen tegn på toxicitet forbundet med læge-20 midlet.

I samme forsøg blev to nært beslægtede forbindelser undersøgt for antileukæmi-aktivitet ved dosisniveauer på henholdsvis 22, 33,5, 50 og 75 mg/kg og med samme behandlingsskema. Den tilsvarende pyridopyrimidin med en 4-me-25 thoxybenzyl-substituent var intaktiv ved alle doser, og 2-chlorbenzyl-forbindelsen havde kun marginal eller ubetydelig aktivitet. 2,5-Dimethoxybenzyl-forbindelsen har således betydeligt større antileukæmi-aktivitet end forbindelserne med lignende struktur.

30

Eksempel 7

Vandopløselig., salve: mængde (g) 2,4-Diamino-5-methyl-6-(dialkoxybenzyl) 35 pyrido(2,3-d)pyrimidin 0,5

Polyethylenglycol 300 20,0

Polyethylenglycol 1500 77,5

Ialt 100,0

DK 157451 B

17

Eksempel 8 Hudcreme.

mængde (g) 2.4- Diamino-5-methyl-6-(dialkoxybenzyl) pyrido(2,3-d)pyrimidin 075 5 Glycerylmonostearat 20,0

Methylparaben 0,3

Vaseline, lys flydende 4,0

Propylenglycol 5,0

Span 60 2,0 10 Tween 61 4,0

Vand 64,2

Ialt 100,0

Eksempel 9 15 Toxicitet af 2,4-diamino-5-methyl-6-(2,5-dimethoxybenzyl)-pyrid.o( 2,3-d)pyrimidin.

Den akutte toxicitet af titelforbindelsen . blev bestemt på mus (i.p.). •LD^Q-værdien (mg/kg legemsvægt) · var ~ 500.

^ Eksempel 10

Tabletkomposition.

2.4- Diamino-5-methyl-6-(dialkoxybenzyl)py- 100 mg rido(2,3-d)pyrimidin

Stivelse 50 mg ^ Lactose 50 mg

Stearinsyre 3 mg

Gelatine 15 mg

Ialt 218 mg

Eksempel 11

Inj icerbar komposition.

2.4- Diamino-5-methyl-6-(dialkoxybenzyl)pyrido (2,3-d)pyrimidin til 5 mg/ml

Propylenglycol 40 ml 35 Ethanol 11 ml

Vand 9 ml

Claims (3)

1. I (III) H-jN^N^ir^R3 hvor Ar er som defineret for formlen (II), og R3 er en O C eliminerbar gruppe, der kan faernes ved hydrogenolyse, underkastes reduktiv spaltning, eller b) hydroxy- og/eller mercapto-gruppen eller -grupperne i en forbindelse med formlen (VI): 30. ch3 N*VVH2Ar i li J ivi) z 1 hvor Y og Z er ens eller forskellige' og er OH, SH eller NH2 med den betingelse, at mindst den ene af Y og Z er OH eller SH, og Ar er som defineret for formlen (II), DK 157451 B omdannes til aminogrupper, og at, om ønsket, en ved fremgangsmåde a) eller h) opnået forbindelse med formlen (II) omdannes til et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf.

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af 2,4-diamino-6-alkoxybenzyl-5-methylpyrido[2,3-d]-pyrimidiner med den almene formel (II) nh2 ch3 ,/yV- (II) H2N -^N hvor Ar er 10 °h\ r<R “Q eller HQy-°H· hvor R og R' er (C .j-Cg) alkyl, eller farmaceutisk 15 acceptable syreadditionssalte deraf, kendetegnet ved, at a) en forbindelse med formlen (III): NH2 ch3

20 N

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, k e n d e - 5 tegnet ved, at der fremstilles forbindelser, hvor R og R' er methyl.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at der fremstilles 2,4-diamino-6- (2,5-dimethoxybenzyl)-5-methylpyrido(2,3-d)pyrimidin 10 eller syreadditionssalte deraf. 15 20 25 1 35