FI66866C - Foerfarande foer framstaellning av antiproliferativa 2,4-diamino-6-(dialkoxibensyl)pyrido(2,3-d)pyrimidiner - Google Patents

Description

UljSgtfl fftl m^UULUTUSjULItAlSU ,

Wa lBJ (11) UTLÄCCNINGSSKRIFT 668 6 6 ^ ^ ^1) Kv.Hu/lm.a3 C 07 D 471/04 SUOMI—FINLAND (21) 801912 (22) HakmnMM—Ameknln^dag 13.06.80 ’ (23) MkupUvl—GlkJstwttdaf 13.06.80

(41) Talkit )ulklMksl — Blhrtt offamHg ^ gO

Patentti- ja rekisterihallitus (44) NShtMMpanon ]a kimlJulfcaiMn pvm. — , 1 no 0/,

Patent· och regtiterstyrelsen AiaSkan wth«4 odt mUkiiftan peMlcarad ->1 ·Uö ·04 (32)(33)(31) Pyritty «uoikmra—Begird prior** 1 4. 06.79 1**.06.79, 14.06.79, 14.06.79 Englanti-England(GB) 7920703, 7920704, 7920705, 7920706 (71) The Wellcome Foundation Limited, 183-193 Euston Road, London N.W.1.,

Engl ant i-Eng land(GB) (72) Eugene Michael Grivsky, Fairfax, Virginia,

David Stanley Duch, Cary, North Carolina,

Carl William Sigel, Raleigh, North Carolina,

Charles Adam Nichol, Durham, North Carolina, USA(US) (74) Oy Kolster Ab (54) Menetelmä antiproliferatiivisten 2,4-diamino-6-(dialkoksibentsyyli)-pyrido/2,3-d7pyrimidiinien valmistamiseksi - Förfarande för fram-ställning av antiproliferät iva 2,4-diamino-6-(dialkoxibensyl)pyrido-/2,3_<l7pyrimidiner GB-patentissä n:o 1 084 103 on kuvattu 2,4-diaminopyrido-(2,3-d)pyrimidiinejä, joiden kaava on NH2 r1 >Wr2

1 1 .K

H2N^ f 2 jossa R on alkyyliryhmä ja R on substituoimaton bentsyyliryhmä tai yhdellä tai useammalla halogeeniatomilla, alkyyli- tai alk-oksiryhmällä substituoitu bentsyyliryhmä.

2 66866

Kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä on esitetty olevan suuri in vitro ja in vivo vaikutus bakteereja tai bakteeritulehduksia vastaan koe-eläimillä.

Sittemmin on havaittu, että GB-patentissa 1 084 103 esitetyillä, kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä on jonkin verran esto-vaikutusta imettäväisten dihydrofolaatti-reduktaasia (DHFR) vastaan ja teho oli riittävä niiden saamiseksi käyttökelpoisiksi tautitilojen hoitoon, joissa imettäväisten DHFR-esto on suositeltavaa.

On edelleen havaittu, että useat näistä yhdisteistä ovat tehokkaita N-metyylitransferaasin (HMT) estoaineita, histamiinin metabolismissa esiintyvän entsyymin. Täten ne usein aiheuttavat histamiinin epäedullista kerääntymistä elimiin ja kudoksiin. Histamiinin vaikutukset ovat hyvin tunnettuja ja näiden yhdisteiden käyttöä rajoittaa siten huomattavasti niiden voimakas HMT-esto.

Jatkotutkimukset osoittivat, että useat kaavan (I) mukaiset muut yhdisteet omaavat myös DHFR-estokyvyn, mutta että nämä myös olivat tehokkaita HMT-estoaineita. Muilla yhdisteillä, joiden HMT-estokyky oli hyväksyttävän pieni, havaittiin olevan riittämätön teho DHFR-estoaineina.

Nyt on yllättävästi havaittu, että määrätyt 2,4-diamino- 6-(dimetoksibentsyyli)-5-metyyli-pyrido(2,3-d)pyrimidiinit, jotka kuuluvat kaavan (I) piiriin mutta joita ei ole erikoisesti esitetty GB-patentissa 1 084 103, eivät ole vain erittäin tehokkaita DHFR-estoaineita imettäväisillä, vaan niiden HMT-estokyky on myös hyväksyttävän pieni. Näitä yhdisteitä esittää seuraava kaava (II) ja ovat ne tehokkaita hoidettaessa prolifera-tiivisia tauteja, kuten psoriasis'ta, ihon endoteeli- ja epiteelisolujen karsinoomeja sekä erisyöpälajeja mukaanluettuina leukemiat, lymfoomat, sarkoomat ja kiinteät syöpälajit.

Keksinnön avulla saadaan täten yhdisteitä, joiden kaava on NH0 CH-.

1^1" CH2Ar H 2N N ^

II

jossa Ar on 6 6866 3

OR OR

\ _ / ~€2) tai -(Cy-0Rl ^ OR1 joissa kaavoissa ja R ja R^ tarkoittavat (C^-Cg)-alkyyliä, sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja. Edullisesti valmistetaan yksiemäksisiä suoloja.

Edullisesti R ja R^ tarkoittavat metyyliä. Erikoisen suositeltava on 2,4-diamino-5-metyyli-6-(2,5-dimetoksibentsyyli)-pyrido(2,3-d)-pyrimidiini.

Kaavan II mukaisten yhdisteiden antiproliferatiivinen teho perustuu vapaaseen emäkseen ja siten happoadditiosuolaan osallistuvan hapon luonteen merkitys on vähäisempi. Näihin happo-additiosuoloihin kuuluvat esimerkiksi suolat, jotka on johdettu suolahaposta, jodivetyhaposta, rikkihaposta, fosforihaposta, etik-kahaposta, p-tolueenisulfonihaposta, metaanisulfonihaposta, ma-leiinihaposta, maitohaposta, sitruunahaposta, viinihaposta, meri-pihkahaposta, oksaalihaposta, p-klooribentseenisulfonihaposta, isotionihaposta , glukuroonihaposta, pantoteenihaposta ja lakto-bionihaposta.

Kaavan (II) mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa jonkun alalla tunnetun menetelmän mukaan valmistettaessa analogisen rakenteen omaavia yhdisteitä.

Erikoisesti kaavan (II) mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa lohkaisemalla ryhmä R^ pelkistävästi yhdisteestä, jonka kaava on

NH CH

X 3 (III)

H ^-R

2 4 668 6 6 jossa Ar tarkoittaa samaa kuin kaavassa (II) ja on poistuva ryhmä, joka voidaan poistaa hydraamalla. Näihin ryhmiin kuuluvat esimerkiksi merkapto- tai halogeeni- (esim. kloori) ryhmät.

3

Jos kaavan (III) mukaisessa yhdisteessä R on SH-ryhmä, detiatiointi voidaan suorittaa sopivasti reaktion avulla pelkistävän aineen, esimerkiksi Raney-nikkelin tai Raney-koboltin kanssa tai hydraamalla katalyyttisesti käyttäen vetyä katalyytin kuten hiilellä olevan palladiumin läsnäollessa.

Kaavan (III) mukaisia yhdisteitä, jolloin R^ on merkapto-ryhmä, voidaan valmistaa vastaavasti 7-kloori-yhdisteestä (III) 3 (R = Cl) reaktion avulla hydrosulfidin kanssa, kuten GB-patentis-sa n:o 913 710 on esitetty tai käsittelemällä vastaavaa 7-hydr-oksi-yhdistettä fosforipentasulfidi11a.

Tapauksessa, jolloin R^ on halogeeniatomi kaavan (III) mukaisessa yhdisteessä, kaavan (II) mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa sopivasti esimerkiksi katalyyttisen hydrauksen avulla.

Vaikka on mahdollista annostella kaavan (II) mukaisia yhdisteitä tai niiden happoadditiosuoloja (kutsutaan tämän jälkeen nimellä "aktiiviset yhdisteet") raakana kemikaalina, käytetään niitä edullisesti farmaseuttisina valmisteina.

Farmaseuttiset valmisteet sisältävät aktiivista yhdistettä yhdessä sitä varten sopivan farmaseuttisen kantajan kanssa. Kantajan täytyy olla "hyväksyttävän" siinä mielessä, että se on yhteensopiva valmisteen muiden aineosien kanssa eikä ole haitallinen vastaanottajalle.

Farmaseuttisia koostumuksia valmistetaan yhdistämällä aktiivista yhdistettä ja sen kanssa farmaseuttisesti hyväksyttävää kantajaa.

Paikallinen annostus on erikoisen sopiva, jos aktiivista yhdistettä käytetään proliferatiivisten ihotautien hoitoon.

Termillä "paikallinen" tässä yhteydessä tarkoitetaan sopivaan farmaseuttiseen kantajaan lisätyn aktiivisen aineosan käyttöä annosteltuna tautikohtaan paikallisvaikutuksen saamiseksi.

Paikalliseen annosteluun sopivat farmaseuttiset valmisteet voivat olla vedettömässä muodossa kuten voiteena, liuoksena, tah-

II

66866 nana, hyytelöinä, suihkeina, aerosoleina ja öljyhauteina. Termiin voide kuuluvat valmisteet (mukaanluettuina salvat), jotka ovat luonteeltaan öljymäisiä, absorptiokykyisiä, vesiliukoisia ja emul-siotyyppisiä, esimerkiksi vaseliiniin, lanoliiniin, polyetyleeni-glykoleihin ja näiden seoksiin perustuvat valmisteet.

Paikallisesti annosteltavat valmisteet voivat sisältää aktiivista aineosaa 0,05-2 painoprosenttia, edullisesti Q,l-1 painoprosenttia ja kaikkein edullisimmin 0,2-0,5 painoprosenttia.

Muihin farmaseuttisiin valmisteisiin kuuluvat ne, jotka soveltuvat oraaliseen, rektaaliseen tai parenteraaliseen annostukseen, vaikkakin oraalinen annostustapa on suositeltava. Valmisteita voidaan tarvittaessa annostella erillisinä yksikköannoksina ja voidaan niitä valmistaa farmasiassa hyvin tunnettujen menetelmien mukaisesti. Sopiva yksikköannosvalmiste sisältää aktiivista aineosaa 50-1000 milligramman, edullisesti 100-500 milligramman ja kaikkein edullisimmin noin 200 milligramman suuruisen määrän ja käytetään niitä päivittäin kerran tai useammin.

Kaikkiin menetelmiin näiden valmisteiden valmistamiseksi kuuluu vaihe aktiivisen aineosan yhdistämiseksi nestemäisiin kantajiin tai hienojakoisiin kiinteisiin kantajiin tai molempiin näistä ja muotoilemalla tuote sitten haluttaessa tarvittavaksi valmisteeksi .

Oraaliseen annostukseen sopivat farmaseuttiset valmisteet, joissa kantaja on kiinteä aine, muodostetaan edullisimmin yksikkö-annosvalmisteiksi kuten pillereiksi, kapseleiksi, pulveriksi tai tableteiksi, joista jokainen sisältää etukäteen määrätyn määrän aktiivista yhdistettä. Tabletit voidaan valmistaa puristamalla tai valamalla haluttaessa yhden tai useamman lisäaineen kanssa. Puristetut tabletit voidaan valmistaa puristamalla sopivassa koneessa aktiivista yhdistettä vapaasti virtaavassa muodossa kuten jauheena tai rakeina sekoitettuna mahdollisesti sideaineen, liukastusaineen, inertinlaimentimen, pinta-aktiivisen aineen tai dispergoivan aineen kanssa. Valetut tabletit voidaan valmistaa valamalla inertissä laimentimessa. Tabletit voidaan haluttaessa päällystää ja jos ne ovat päällystämättömiä, voidaan ne urittaa haluttaessa. Kapseleita voidaan valmistaa täyttämällä aktiivista yhdistettä joko yksinään tai sekoitettuna yhden tai useamman lisäaineen kanssa kapselikoteloihin, jotka sitten suljetaan tavan- 66866 omaisella tavalla. Pulveri vastaa kapselia, jolloin aktiivinen aineosa yhdessä muiden lisäaineiden kanssa suljetaan riisipaperi-kuoreen.

Oraaliseen annostukseen sopivia farmaseuttisia valmisteita, joissa kantaja on neste, voidaan valmistaa liuoksena tai suspensiona vesipitoiseen nesteeseen tai nestemäiseen öljy-vedessä tai vesi-öljyssä olevana emulsiona.

Rektaaliseen annostukseen soveltuvat farmaseuttiset valmisteet, joissa kantaja on kiinteä aine, käytetään edullisimmin yksikköannos-suppositoreina.

Sopiviin kantajiin kuuluvat kaakaovoi ja muut alalla tavallisesti käytetyt materiaalit ja suppositorit voidaan sopivasti valmistaa sekoittamalla aktiivista aineosaa pehmennetyn tai sulatetun kantajan (kantajien) kanssa, jota seuraa jäähdytys ja muotoilu muoteissa.

Parenteraaliseen annostukseen soveltuviin farmaseuttisiin valmisteisiin kuuluvat aktiivisen yhdisteen steriilit liuokset tai suspensiot vesi- tai öljypitoisessa kantajassa. Nämä valmisteet ovat sopivasti yksikköannoksia tai moniannossäiliöitä, jotka suljetaan valmisteen lisäämisen jälkeen käyttöhetkeen saakka.

On ymmärrettävä, että edellämainittujen kantaja-aineiden lisäksi edelläesitettyihin farmaseuttisiin valmisteisiin voi sisältyä haluttaessa yhtä tai useampaa lisäkantaja-aineosaa kuten laimentimia, puskureita, makuaineita, sideaineita, pinta-aktiivi-sia aineita, sakeuttajia, voiteluaineita, säilytysaineita (anti-oksidantit mukaanluettuina) ja vastaavia aineita sekä aineita valmisteen saamiseksi isotooniseksi tarkoitetun vastaanottajan veren kanssa.

Kuten edellä on mainittu, esiteltävän keksinnön mukaiset yhdisteet ovat käyttökelpoisia hoidettaessa proliferatiivisia sairauksia. Keksintö antaa siten edelleen menetelmän prolifera-tiivisen sairauden hoitamiseksi imettäväisellä, ihminen mukaanluettuna, mikä menetelmä käsittää aktiivisen yhdisteen tehokkaan, myrkyttömän määrän annostelun kerran tai useammin päivässä oraalisesti tai paikallisesti käytettynä.

Il 7 6 6 8 6 6

Aktiivisen yhdisteen määrä/ joka vaaditaan terapeuttista vaikutusta varten antiproliferatiivisena aineena, vaihtelee luonnollisesti ei vain käytetyn määrätyn suolan mukaan vaan myös annostustavasta riippuvaisena. Yleensä sopiva annos imettäväisen (ihminen mukaanluettuna) käsittelyä varten on alueella 0,1-100 mg/kg ruumiinpainoa kohti (mg/kg) vuorokaudessa, edullisesti määrä on alueella 2,0-50 mg/kg ja vielä edullisemmin alueella 5-20 mg/kg.

Aktiivisiin yhdisteisiin liittyvät myrkylliset vaikutukset ovat tyypillisesti niitä, joihin yhdistyy foolihappotason alenemista, kuten luuytimen heikkenemistä, megaloblastisia muutoksia ja gastrointestinaalisia haavaumia. Kalsiumleukovoriinia (5-formyyli-5,6,7,8-tetrahydrofoolihapon kalsiumsuolaa) voidaan annostella näiden myrkyllisten vaikutusten torjumiseksi tai niiden esiintymisen estämiseksi. Kalsiumleukovoriinin annostus voidaan suorittaa samanaikaisesti käsittelyn kanssa tai milloin myrkylli-syysoireita esiintyy.

Täten aktiivisen yhdisteen hematologinen vaikutus voidaan estää tai sitä voidaan vähentää annostelemalla samanaikaisesti leu-kovoriinia. Täten aktiivisen yhdisteen tasoa kuodoksissa voidaan turvallisesti nostaa suurentamalla yhdisteen annostusmäärää annostamalla samanaikaisesti leukovoriinia.

Seuraavat esimerkit esittelevät keksintöä .

Esimerkki 1 2,4-diamino-5-metyyli-6-(2,5-dimetoksibentsyyli)pyrido- (2,3-d)pyrimidiini

Seosta, joka sisälsi 2,5-dimetoksibentsaldehydiä (100 g), etyyliasetoasetaattia (84,5 g), vedetöntä bentseeniä (200 ml), piperidiiniä (6 ml) ja etikkahappoa (12 ml), keitettiin palauttaen 3 tuntia laitteessa, joka oli varustettu Rean-Stark-loukulla atseo-trooppisesti tislautuneen veden talteenottamiseksi. Reaktioseos jäähdytettiin, lisättiin bentseeniä (30Q ml) ja liuosta pestiin peräkkäin vedellä (100 ml), kylmällä 0,1N suolahapolla (200 ml), 5-prosenttisella natriumbikarbonaattivesiliuoksella (200 ml) ja 8 66866 laimealla etikkahapolla (100 ml) ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin yläpuolella. Liuotin poistettiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja saatu öljy tislattiin, kp. 169-170°C/ 0,3 mmHg),jolloin saatiin etyyli- oC- (2,5-dimetoksibentsylideeni)-asetoasetaattia (104 g; 64 %) , joka kiinteytyi seisoessaan (sp. 68-69°C) ja joka kiteytettiin uudestaan etanoli-pentaanista (sp. 72-73°C). Osa tuotteesta (38 g) pelkistettiin katalyyttisesti käyttäen 5 % hiilellä olevaa katalyyttiä (Pd/C) etyyliasetaatista (150 ml). Liuottimen poistamisen jälkeen puhdistettiin tuote tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin etyyli- (2,5-di-metoksibentsyyli)asetoasetaattia, kp. 146-148°C/0,3 mmHg.

Seosta, joka sisälsi etyyli-o^-(2,5-dimetoksibentsyyli)asetoasetaattia (21,2 g), 2,4,6-triaminopyrimidiiniä (10 g) ja difenyy-lieetteriä (100 ml), kuumennettiin 190-230°C lämpötilassa 1,5 tuntia Dean-Stark-loukulla varustetussa laitteessa ja vesi-etanoli (4 ml) otettiin talteen. Metanolia (200 ml) ja etanolia (50 ml) lisättiin jäähdytettyyn reaktioseokseen. Saatu kiinteä aine otettiin talteen suodattamalla ja sitä käsiteltiin kiehuvalla vedellä (1 1), jolloin saatiin 2,4-diamino-5-metyyli-6-(2,5-dimetoksibentsyyli-7-okso-7,8-dihydropyrido(2,3-d)pyrimidiiniä (17 g), sp. 325-326°C.

2,4-diamino-5-metyyli-6-(2,5-dimetoksibentsyyli)-7-okso- 7,8-dihydropyrido(2,3-d)pyrimidiiniä (8 g) kloorattiin käsittelemällä Vilsmeier-reagentilla valmistettuna lisäämällä hitaasti tio-nyylikloridia (28,6 g) kuivassa kloroformissa (25 ml) dimetyyli-formamidin (17,5 g) liuokseen kloroformissa (100 ml) Q-5°C:ssa. Pyridopyrimidiinin ja Vilsmeier'in reagentin seosta sekoitettiin, sen annettiin asteettain saavuttaa ympäristönlämpötila ja keitettiin sitten palauttaen 3 tuntia. Sitä käsiteltiin sitten etanolipitoisella emäksellä (8Q ml) pitäen lämpötilan 25-30°C:ssa jäähdyttäen. Muodostunut ruskea tuote eristettiin, sitä käsiteltiin edelleen ammoniakin vesiliuoksella ja kiteytettiin sitten uudestaan etanolista, jolloin saatiin 2,4-diamino-5-metyyli-6-(2,5-dimetoksibentsyyli) -7-klooripyrido-(2,3-d)pyrimidiiniä, sp. 193-196°C (hajoaa).

Klooriyhdiste (0,3 g) liuotettiin etanoliin (200 ml), joka sisälsi kaliumhydroksidia (0,2 g). Lisättiin 5 % palladiumia hiilellä sisältävää katalyyttiä (0,2 g) ja aloitettiin hydraus. Pelkistyminen oli täydellinen 48 tunnin kuluttua ja saatiin 2,4-

II

66866 9

diamino-5-metyyli-6-(2 ,5-dimetoksibentsyyli)-pyrido(2,3-d)pyrimidiiniä, sp. 252-254°C

Esimerkki 2 2,4-diamino-6-(3,4-dimetoksibentsyyli)-5-metyylipyrido- (2,3-d)pyrimidiini

Seosta, joka sisälsi 3,4-dimetoksibentsaldehydiä (100 g) etyyliasetoasetaattia (78 g) ja vedetöntä bentseeniä (100 ml), keitettiin palauttaen 3 tuntia, minä aikana teoreettinen määrä vettä poistettiin atseotrooppisesti tislaamalla. Liuotin poistettiin sitten alennetussa paineessa ja jäännös kiteytettiin etyyli-asetaatti/pentaani-seoksesta, jolloin saatiin etyyli-Of-(3,4-di-metoksibentsylideeni)asetoasetaattia (153 g), sp. 72°C. (Analyyttinen näyte kiteytettäessä uudestaan (etanoli/pentaanista) sulamispiste 85-86°C).

Etyyli-c>{-(3,4-dimetoksibentsylideeni) asetoasetaattia (50 g) pelkistettiin katalyyttisesti Parr'in matalapainelaitteessa etyyliasetaatissa (150 ml) käyttäen katalyyttinä 5 % palladiumia hiilellä (Pd/C) (3 g). Katalyytti poistettiin suodattamalla, liuotin poistettiin alennetussa paineessa ja jäännösöljy tislattiin, jolloin saatiin etyyli-*^.-(3,4-dimetoksibentsyyli)asetoasetaattia (42 g; kp. 162-164°C/0,4 mmHg).

Seosta, joka sisälsi etyyli-C^-(3,4-dimetoksibentsyyli)asetoasetaattia (42 g) ja 2,4,6-triaminopyrimidiiniä (21 g) difenyyli-eetterissä (120 ml), kuumennettiin 190-230°C:ssa 2 tuntia, minä aikana muodostunut etanoli ia vesi poistettiin atseotrooppisesti tislaamalla. Reaktioseos jäähdytettiin ja siihen lisättiin metano-lia (250 ml) ja etanolia (50 ml). Saatu kiinteä aine otettiin talteen suodattamalla ja sitä käsiteltiin kiehuvalla vedellä (1 1), jolloin saatiin 2,4-diamino-5-metyyli-6-(3.4-dimetoksibentsyyli)- 7-okso-7,8-dihydropyrido(2,3-d)pyrimidiiniä (26 g), sp. 346-348°C.

Dimetyyliformamidin (17,5 g) liuokseen kloroformissa (75 ml) lisättiin tionyylikloridia (14 g) kloroformissa (25 ml) 0-5°C:ssa. Reaktioseoksen annettiin lämmetä 55-60°C lämpötilaan noin 5 minuutin ajaksi ja jäähdytettiin sitten 0°C:seen. Reaktioseokseen lisättiin 2Q minuutin aikana 0°C:ssa 2,4-diamino-5-metyyli-6-(3,4-dimetoksibentsyyli) -7-okso-7,8-dihydropyrido(2,3-d)pyrimidiiniä (8,2 g).

10 66866

Lisättiin kloroformia (50 ml) ja seosta keitettiin palauttaen 2,5 tuntia ja lisättiin etanolipitoista emästä (50 ml). Saatu ruskea tuote otettiin talteen suodattamalla, sitä käsiteltiin 2N natriumhydroksidillä ja kiteytettiin uudestaan etanolista raa'an tuotteen (7,6 g) saamiseksi. Uudelleenkiteyttämisen jälkeen etanoli/vesi-seoksesta saatiin 2,4-diamino-5-metyyli-6-(3,4-di-metoksibentsyyli)-7-klooripyrido(2,3-d)pyrimidiiniä (2 g) sp. 224-225°C (hajoaa). Tämä lisättiin etanoliin (250 ml), joka sisälsi kaliumhydroksidia (0,2 g). Lisättiin 5 % palladiumia hiilellä sisältävää katalyyttiä (0,1 g) ja aloitettiin hydrogenointi. Pelkistys oli täydellinen 4 tunnin kuluttua Parrlow'in painelaittees-sa paineen ollessa 2,45-2,80 kp/cm ja saatiin 2,4-diamino-6-(3,4-dimetoksibentsyyli)-5-metyylipyrido(2,3-d)-pyrimidiiniä (0,1 g), sp. 265-268°C (hajoaa).

Esimerkki 3

Dihydrofolaattireduktaasin (DHFR) esto imettäväisillä 2,4-diamino-6-bentsyylipyrido(2,3-d)pyrimidiinien avulla Testiyhdisteiden estovaikutus DHFRrää vastaan puhdistettuna osittain rotan maksasta määritettiin. Tulokset on esitetty

Q

seuraavassa taulukossa 1. IC^Q-arvoa 5 x 10 M tai pienempää pidetään verrattain tehokkaana, IC^Q-arvo 1 x 10 on erikoisen tehokas.

Il 66866 11

Taulukko 1 nh2 ft

AjJy*

t^N N

Testiyhdiste

R1 ^ ic5Q 1Ö8M

CH, -CH^Pk 3 4

D

CH3 C^"<Ö 1.* CH3 2.7 och3 CH3 5.0 CH3 cHl^yocHj „ CH3 9 H 25 OCHj CH3 C"»--0 0..5 oCHj CH3 0.78 12 66 8 6 6

Esimerkki 4

Histamiini-N-metyylitransferaasin esto 2,4-diamino-6-bentsyylipyrido(2,3-d)pyrimidiinin vaikutuksesta Määrättiin esimerkissä 3 käytetyn testiyhdisteiden vaikutus HMT:tä vastaan. Tulokset on esitetty taulukossa 2. Pienempi kuin 20 % oleva esto on hyväksyttävä ja vaikutuksen puuttuminen tätä entsyymiä vastaan on mitä edullisinta, koska jokainen vaikutus histamiinin metabolismiin täytyisi minimoida.

Il 13 6 6 8 6 6 NH2 λ'

Taulukko 2

l^N N

Testiyhdiste -- HMT-esto (%) arvolla 10 ch3 -CHxPK 51

Cl CH3 0,-0 59 CH3 ei testattu OCHj CH3 CHa-^Q) 18 CH3 C^OCH, 20 CH3 CM*r^^-Cx»s 55 H ^8 OCH, CH3 C^~<0) 11

M«S

_/0C«3 CH3 CHi.—<O^0a<i 19 14 .

66866

Esimerkki 5 2.4- diamino-6- (2,5-dimetoksibentsyyli) -5-metyylipyrido-(2,3-d)-pyrimidiinin syöpää vastustava vaikutus Kiinteitä Walker 256 syöpäkasvaimia istutettiin ihonalaisesti kolmeen ryhmään rottia. Kolmantena päivänä kasvaimien istuttamisen jälkeen aloitettiin lääkekäsittely ja sitä jatkettiin 5 peräkkäistä vuorokautta. Yhtä rottaryhmää käsiteltiin 2,4-di-amino-6-(2,5-dimetoksibentsyyli)-5-metyylipyrido-(2,3-d)-pyri-midiinillä annoksen ollessa 25 mg/kg päivässä, toista ryhmää käsiteltiin samalla yhdisteellä annoksen ollessa 15 mg/kg päivässä ja kolmas ryhmä jätettiin vertailun vuoksi käsittelemättä. 17 vuorokauden kuluttua käsiteltyjen ryhmien rotilla oli keskimääräinen syöpäkasvaintilavuus vastaavasti 29 % ja 10 % käsittelemättömään ryhmään verrattuna.

Toisessa tutkimuksessa syöpäkasvaimia istutettiin ihonalaisesti ja lääkekäsittelyä viivästettiin 10 vuorokauteen istuttamisesta. Lääkekäsittely muodostui annostuksesta 30 mg/kg päivässä päivinä 10-13 ja 50 mg/kg päivinä 20, 24 ja 28 syöpäkasvaimen siirron jälkeen. Keskimääräiset kasvaimien tilavuudet mitattiin tämän tutkimuksen kuluessa. Kasvainten tilavuudet eläimillä, jotka eivät saaneet hoitoa, kasvoivat nopeasti, kun taas lääkkeellä käsitellyillä eläimillä esiintyi alenemista keskimääräisessä kasvaimen tilavuudessa havaintoaikana. 23 vuorokautta syöpäkasvaimien siirron jälkeen T/C-arvo oli 0,03.

Esimerkki 6 2.4- diamino-6-(2,5-dimetoksibentsyyli)-5-metyylipyrido-(2,3-d)pyrimidiinin vaikutus leukemiaa vastaan Leukemia P388 soluja istutettiin intraperitoneaalisesti CDF:ssä Charles River naarashiiriin, jokaisen eläimen saadessa

Cj 10 solua. Vuorokauden kuluttua leukemia-solujen istuttamisen jälkeen aloitettiin lääkekäsittely ja sitä jatkettiin kahdesti päivässä kolmen vuorokauden aikana; Neljä hiiriryhmää käsiteltiin 2,4-diamino-6-(2,5-dimetoksibentsyyli)-5-metyylipyrido(2,3-d)pyri-midiinillä annosten ollessa 22, 33,5, 50 ja 75 mg/kg ruumiinpainoa kohti ja viides ryhmä jätettiin käsittelemättä vertailua varten. Kaikki käsittelemättömät hiiret kuolivat leukemiaan 10 ja 12 vuorokauden välillä keskimääräisen elinajan ollessa 11 vuoro-

II

66866 kautta. Kaikki käsitellyt hiiret elivät kauemmin, kuin käsittelemättömät eläimet elinaikojen prosentuaalisten pitenemisten ollessa 145 %, 159 %, 140 % ja 154 % vastaavasti 22, 35,5, 50 ja 75 mg/kg olevilla annoksilla käsitellyille eläimille. Tämä on erittäin merkittävä vaikutus. Mitään lääkkeestä johtuvaa myrkky-vaikutusta ei havaittu.

Samoin suoritetussa kokeessa testattiin kaksi läheisesti vastaavaa yhdistettä niiden leukemian estovaikutuksen suhteen samoilla 22, 35,5, 50 ja 75 mg/kg olevilla annoksilla vastaavasti ja käyttäen samaa käsittelyaikataulua. Vastaava pyridopyrimidiini 4-metoksibentsyyli-substituentin kanssa oli tehoton kaikilla annoksilla ja 2-klooribentsyyliyhdisteen vaikutus oli vain heikko tai juuri havaittavissa. Täten 2,5-dimetoksibentsyyliyhdisteen vaikutus leukemian suhteen oli huomattavasti suurempi kuin näiden, vastaavan rakenteen omaavien yhdisteiden.

Claims (2)

16 66866

1. Menetelmä antiproliferatiivisten 2,4-diamino-6-(dialkoksibentsyyli ) pyrido/*2,3-d/pyrimidiinien valmistamiseksi, joiden kaava on nh2 ch3 CH 2 Ar i il T (ii) H2N^N^^N^ jossa Ar on: OR __//0R "(^5) tai ~{v3y~0Rl ^OR1 joissa kaavoissa R ja R^ tarkoittavat (C^-Cg)-alkyyliryhmää sekä niiden happoadditiosuolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että lohkaistaan ryhmä R^ pelkistävästä yhdisteestä, jonka kaava on NK2 ch3 1 Il (III) jossa Ar tarkoittaa samaa kuin edellä (II) ja R^ on poistuva ryhmä, joka voidaan poistaa hydraamalla ja että saatu yhdiste haluttaessa muutetaan happoadditiosuolaksi.

2. Menetelmä patenttivaatimuksen 1 mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että kaavassa II R ja R1 tarkoittavat metyyliryhmää.