DK154573B - Fremgangsmaade til fremstilling af insuliner ud fra tilsvarende praeproinsulinanaloge - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af insuliner ud fra tilsvarende praeproinsulinanaloge Download PDFInfo
- Publication number
- DK154573B DK154573B DK117883A DK117883A DK154573B DK 154573 B DK154573 B DK 154573B DK 117883 A DK117883 A DK 117883A DK 117883 A DK117883 A DK 117883A DK 154573 B DK154573 B DK 154573B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- insulin
- preproinsulin
- amino acid
- process according
- ester
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 18
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- 108010066381 preproinsulin Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims abstract description 15
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 230000001810 trypsinlike Effects 0.000 claims abstract description 5
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 41
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 12
- -1 amino acid ester Chemical class 0.000 claims description 10
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 7
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 claims description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 claims description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 2
- 101500021084 Locusta migratoria 5 kDa peptide Proteins 0.000 claims 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 5
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 19
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 18
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 12
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 11
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 10
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 9
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 8
- AZUYLZMQTIKGSC-UHFFFAOYSA-N 1-[6-[4-(5-chloro-6-methyl-1H-indazol-4-yl)-5-methyl-3-(1-methylindazol-5-yl)pyrazol-1-yl]-2-azaspiro[3.3]heptan-2-yl]prop-2-en-1-one Chemical compound ClC=1C(=C2C=NNC2=CC=1C)C=1C(=NN(C=1C)C1CC2(CN(C2)C(C=C)=O)C1)C=1C=C2C=NN(C2=CC=1)C AZUYLZMQTIKGSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 101001011741 Bos taurus Insulin Proteins 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 7
- IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N bovine insulin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 4
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 4
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 4
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N sec-butyl acetate Chemical compound CCC(C)OC(C)=O DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AWAXZRDKUHOPBO-GUBZILKMSA-N Ala-Gln-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O AWAXZRDKUHOPBO-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100400201 Drosophila melanogaster LysB gene Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 101000993800 Sus scrofa Insulin Proteins 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N diphenhydramine Chemical group C=1C=CC=CC=1C(OCCN(C)C)C1=CC=CC=C1 ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003983 fluorenyl group Chemical group C1(=CC=CC=2C3=CC=CC=C3CC12)* 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000007056 transamidation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- HSQIYOPBCOPMSS-ZETCQYMHSA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HSQIYOPBCOPMSS-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 241000283725 Bos Species 0.000 description 1
- 101000981881 Brevibacillus parabrevis ATP-dependent glycine adenylase Proteins 0.000 description 1
- 101000981889 Brevibacillus parabrevis Linear gramicidin-PCP reductase Proteins 0.000 description 1
- 102000003670 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 description 1
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 150000008551 L-threonines Chemical class 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- FBVSXKMMQOZUNU-NSHDSACASA-N N2,N6-Bis{[(2-methyl-2-propanyl)oxy]carbonyl}lysine Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C FBVSXKMMQOZUNU-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 1
- 238000007257 deesterification reaction Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 229940066758 endopeptidases Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229940124280 l-arginine Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- TVHCXXXXQNWQLP-DMTCNVIQSA-N methyl (2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoate Chemical compound COC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O TVHCXXXXQNWQLP-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- WYMSBXTXOHUIGT-UHFFFAOYSA-N paraoxon Chemical group CCOP(=O)(OCC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WYMSBXTXOHUIGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 230000007723 transport mechanism Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/26—Containing cys-cys disulfide bridge between nonadjacent cysteine residues
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
DK 154573 B
o
Opfindelsen angår en særlig fremgangsmåde til fremstilling af insuliner ud fra tilsvarende præproinsulinana-loge.
Fra den europæiske patentansøgning nr. 56.951 ken-5 des der en fremgangsmåde til fremstilling af humaninsulin eller derivater deraf ud fra svineinsulin eller derivater deraf, ved hvilken man omsætter svineinsulin eller et derivat af svineinsulin ved en pH-værdi under dets isoelek-triske punkt i nærværelse af trypsin eller et trypsinlig-10 nende enzym med et overskud af en threoninester eller et derivat deraf og om ønsket derpå fraspalter estergruppen.
Som derivater af svineinsulin defineres sådanne, der "kan fås ved indbygning af beskyttelsesgrupper ved fritliggende funktioner eller ved fraspaltning eller ombytning af 15 enkelte aminosyrer". Præproinsuliner og deres analoge adskiller sig fra insulinerne bl.a. derved, at de er énkædede proteiner, der er krydstværbundet med disulfidbroer, medens insulinet har et tokædet proteins struktur.
Ved hjælp af forskellige metoder kan man gennem i 20 og for sig kendt enzymkatalyseret transamidering omdanne svineinsulin til humaninsulin, jfr. f.eks, tysk offentliggørelsesskrift nr. 3.104.949. Desuden er disse éttrins-metoder også egnede til dannelse af insulin ud fra proin-sulin og intermediat-insuliner. Med trypsin sker der ved 25 svineinsulin-omdannelsen under bestemte fremgangsmådebe- 329 B30 tingelser en transamidering af Lys -Ala OH til B2 9 -Lys -Thr-O-ester, ud fra hvilken der efter kendte esterspaltningsmetoder fremstilles frit insulin. I tilfælde af proinsulinet eller intermediat-insulinerne sker omamide- 30 ringen af -LysB^-AlaB^-Arg-Arg til LysB^-Thr-O-ester AO Al og derudover til -Lys-Arg -Gly
Det i det menneskelige eller dyriske legeme dannede insulin fremkommer først i form af et lineært præpro-
Bl insulin, idet den til den N-terminale Phe -knyttede præ-35 sekvens er opbygget af ca. 24 aminosyrerester. Som funk-
DK 154573 B
2
O
tion tilskrives der denne molekyldel en signalvirkning såvel ved proteinbiosyntesen som ved transportmekanismen gennem membranen af den syntetiserende celle.
I tiltagende omfang fortrænges den ovennævnte semi-5 syntetiske fremstilling af humaninsulin ud fra naturligt svineinsulin af udvindingen af humaninsulin som kimært genprodukt af modificeret E.-coli-DNA.
Disse genteknologiske metoder tillader ved variation af signalnucleotiddelen fremstillingen af et med det na-10 turlige præproinsulin analogt produkt. Formålet med sådanne aminosyresekvensændringer er biosyntesen af et analogt præpropinsulin, der muliggør den optimale spaltning til insulin. Ved en kendt fremgangsmåde (A.D. Riggs et al. Peptides, 1979, ED. E. Gross og J. Meienhofer, Pierce Chemical 15 Company, Rockford, Illinois, side 985-992) er præsekvensen modificeret således, at den over en methioninrest er knyt-
Bl tet til den N-terminale Phe i proinsulinet, således at Bl -Met-Phe -bindingen kan spaltes ved hjælp af BrCN-metoden (E. Gross, B. Witkop, J. Biol. Chem., 1856 (1962)). Det re-20 suiterende proinsulin omdannes derefter ad enzymatisk vej (A. Kemmler, J. Biol. Chem., 246, 3786 (1971)) til humaninsulin med trypsin og carboxypeptidase B.
Såvel BrCN-spaltningen som den i det andet trin følgende behandling med enzymblandingen kan gennem uspecifik-25 ke reaktioner forårsage betragtelige tab af slutproduktet.
Det er således ønskeligt og den foreliggende opfindelses formål at udvikle en fremgangsmåde til ud fra genteknologisk udvundne præproinsulinanaloge at udvinde insulin i høje udbytter og med færrest mulige reaktionstrin, 30 og opfindelsen tager navnlig sigte på at muliggøre fremstillingen af især humaninsulin ud fra genteknologisk let og i betydelige mængder tilgængelige præproinsulinanaloge, hvilket ikke fremgår af eller kan udledes af det ovennævnte tyske offentliggørelsesskrift nr. 3.104.949.
35 Dette formål opnås ved den her omhandlede fremgangs-
O
DK 154573 B
3 måde til fremstilling af insulin ud fra tilsvarende præ-proinsulinanaloge, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at man ved en pH-værdi under det isoelektriske punkt for insulinerne ved hjælp af trypsin eller en trypsinlig-5 nende endopeptidase omsætter tilsvarende præproinsulinana-loge, der ved proinsulinets N-terminal bærer lysin eller arginin eller acylaminoacyl-rester som carboxylende af en præsekvens, med formlen 10 _C-kæde_ I—S-S—i A-kæde „„ I /o Γ, 1 ° _°H (i) i r s s 16 is YB29 K1-*80-i-1- -i B-kæde hvilken Y betyder Lys eller Arg og betyder hydrogen, 20 en L-aminosyre eller resten af et som signalsekvens tjenende peptid, med en ester af de i B30-stilling i naturlige insuliner forekommende aminosyrer, som, når aminosyrer-ne yderligere indeholder aliphatiske OH-grupper, også kan bære disse på beskyttet form, og derefter fraspalter ester-25 gruppen og de eventuelt tilstedeværende beskyttelsesgrupper.
Herved indtræder der såvel en transamidering ved de N-terminale peptidbindinger af PheB"*· og GlyA^ som ved C-terminalen af LysB^.
30 Som proinsulin-del egner sig ethvert produkt, der kodes med et naturligt eller syntetisk, efter kendte nu-cleotid-fremstillingsmetoder varieret proinsulin. Analoge præproinsuliner med forkortet C-peptid-segment, således som det f.eks. er tilfældet med C-peptidet for okser i 35 forhold til C-peptidet fra svin, kommer ligeledes på tale 4
DK 154573 B
O
til fremgangsmåden. Ligeledes er human-præproinsulinana-loge egnede. Det er væsentligt for strukturen af C-pepti-det, at det over en basisk L-aminosyre Y=L-Arg eller L-Lys er knyttet til glycinet i insulin-A-kæden, dvs. at der fo-5 religger en struktur Y-(AS)n“Y, hvor AS betyder alle kode-lige aminosyrer, og n = 0-35. Aminosyreestere og/eller deres derivater med en fri aminogruppe kan til fremgangsmåden også vælges således, at der om ønsket dannes en insulinanalog af ikke-naturlig sekvens.
10 Der anvendes som nævnt estere eller derivater af estere af endestillede aminosyrer i de i stilling B30 naturligt forekommende insuliner. Særligt foretrukne er C·^--Cg-alkylesterne, f.eks. tert.butylester, og C^-C^-aral-kylesterne, f.eks. benzhydryl-, trityl- eller fluorenyl-15 estere, især Ala-OtBu og Thr(tBu)OtBu. Eksempler på egnede L-threoninestere er L-threonin-tert.butylester, L-threo-nin-tert.butyl-O-tert.butylester og L-threonin-methylester.
Ved derivater af threoninestere med fri aminogruppe i opfindelsens forstand skal der forstås sådanne, som ved threo-20 ninets OH-funktion bærer en beskyttelsesgruppe, især ether--beskyttelsesgruppen. Særligt foretrukne esterbeskyttelsesgrupper er C^-Cg-alkyl, især tert.butyl, og C^-C^g-aralkyl, især benzhydryl, trityl eller fluorenyl.
Den eventuelt beskyttede aminosyreester med en fri 25 aminogruppe kan anvendes i et molært forhold til insulinet på fra 50 til 500, fortrinsvis i et molært forhold på fra 100 til 250. Reaktionen kan gennemføres ved under en pH-værdi på 5,5, fortrinsvis ved en pH-værdi mellem 3,8 og 5,0, ved en temperatur mellem 2 og 37°C, fortrinsvis mel-30 lem 4 og 10°C.
Foruden trypsin (se "The Enzymes", vol. 4, P.D.
Boyer et al., Eds. (Acad. Press, N.Y., 2. udg. 1960), side 119-132, og ibid., vol. 3 (3. udg. 1971), side 250-275), egner sig til den her omhandlede fremgangsmåde også sådan-35 ne endopeptidaser, der fra litteraturen kendes som værende 5
O
DK 154573 B
trypsinlignende, dvs. sådanne, der specifikt spalter peptidbindinger ved carboxylenden af basiske aminosyrer, (se f.eks. "Kontakte Merck", 1/73, side 8-10, 2/73, side 3-8; 7. Physiol. Chem., 348 (1967), 1319; Comp. Biochem. Physiol., 5 28 (1969), 1275; Z. Physiol. Chem., 352 (1971), 583; Arch.
Biochem. Biophys., 129 (1969), 620; ibid., 126 (1968), 971; Biochem. Biophys. Res. Comm., 3^7 (1969), 99). Mængden af det enzym, der skal anvendes, kan ligge mellem 1:1 og 100:1, idet talværdierne refererer til vægtforholdet mellem præpro-10 insulinanalog og enzym. Med fordel arbejdes der ved et vægtforhold på fra 10:1 til 4:1.
Ifølge opfindelsen foretrækkes det især, at der arbejdes ved en pH-værdi mellem 3,8 og 5,5, at enzym-præpro-insulinanalog-forholdet andrager 1:1 til 1:100, at det mo-15 lære forhold mellem aminosyreester eller dens derivat og præproinsulinanaloge andrager fra 50 til 500, og at reaktionstemperaturen ligger mellem 2 og 37°C, eller at der arbejdes ved en pH-værdi mellem 3,8 og 5,0, at enzympræpro-insulinanalog-forholdet andrager 1:4 til 1:10, at det molæ-20 re forhold mellem aminosyreester eller dens derivat og præproinsulinanaloge andrager fra 100 til 250, og at reaktionstemperaturen ligger mellem 4 og 10°C.
Den her omhandlede omsætning fører til B30-estere eller beskyttelsesholdige B30-estere af insulinerne, som 25 om ønsket ved i og for sig kendte metoder ved spaltning af estergruppen og eventuelt fraspaltning af beskyttelsesgruppen kan omdannes til det tilsvarende frie insulin.
Esterne kan inden deres omdannelse til de frie insuliner underkastes de nødvendige rensningsoperationer, 30 f.eks. ved hjælp af kendte søjlechromatografiske metoder.
Det fremkomne insulin kan omdannes til gængse indgivelsesformér og anvendes som lægemiddel til behandling af diabetes mellitus.
De i de følgende eksempler anvendte præproinsulin-35 analoge fås i det væsentlige efter kendte metoder (V.K.
6
O
DK 154573 B
Naithani et al., Insuline, Ed. D. Brandenburg, A. Wollmer, 1980, W. de Gruyter, Berlin-New York, side 99-106) ved direkte acylering af proinsulin med blandede anhydrider af BOC-Lys(BOC)OH, BOC-Arg(AdOC)2“0H, BOC-Ala-Gln-Lys(BOC)OH, 5 BOC-Ala-Gln-Arg(AdOC)2"0H, BOC-Gln(tBu)-Pro-Lys(BOC)-Pro--Ala-Arg(AdOC)2-0H og BOC-Gln(tBu)-Pro-Lys(BOC)-Pro-Ala--Lys(BOC)-OH. Rensningen af forbindelserne sker over ionbyttere og fraspaltningen af beskyttelsesgrupperne med trifluoreddikesyre. De enkelte aminosyreanalyser svarer 10 til de teoretiske værdier.
Den her omhandlede fremgangsmåde illustreres nærmere i de følgende eksempler.
Eksempel 1
BO
15 la) 75 mg Lys -proinsulin fra okse opløses sammen med 250 mg AlaO(tBu) i 0,5 ml vand, og pH-værdien indstilles på 4,8 med iseddike. Til opløsningen sættes der 8 mg trypsin opløst i 0,1 ml vand. Efter 16 timers henstand ved 4°C afbrydes reaktionen ved fældning med 68 ml acetone.
20 Fældningen skilles fra ved centrifugering. Efter vask med ether tørres der i vakuum.
Dette råmateriale chromatograferes over en kiselgel søjle i løbemidlet chloroform:methanol:H20:triethylamin: myresyre i forholdet 600:500:120:15:3. Den først eluerede 25 spids opsamles og koncentreres til et lille rumfang i vakuum. Til opløsningen sættes der 25 ml acetone, og den udfældede okseinsulin-B30-ester skilles fra ved centrifugering.
Udbytte af okseinsulin-B30-tBu: 41 mg.
30 lb) 25 mg af okseinsulin-B3Q-esteren opløses i 0,5 ml trifluoreddikesyre og henstilles i 60 minutter ved s tue temper a tiir. Derpå tilsættes der 5 ml ether, og det udfældede, frie okseinsulin skilles fra ved centrifugering og tørres i vakuum efter vask med ether.
35 Udbytte 23 mg.
Aminosyreanalyse, HPLC-elueringstid og biologisk aktivitet giver med okseinsulin identiske værdier.
DK 154573 B
7
O
Sammenligningseksempel
Til påvisning af det forhold, at der foruden trans-B29 amideringen ved Lys kan ske en proteolyse mellem positionerne B° og B1, udføres følgende forsøg:
BO
5 500 mg Lys -okseinsulin (R. Geiger, Chemiker-Zeit- ung, 100, 111 (1976) og R. Geiger, Molecular Endocrinology,
Ed. Mac Intyre & Selke, 1977, Elsevier /North Holland Biomedical Press, side 27-41) opløses i 3,0 ml vand sammen med 2 g AlaO(tBu). pH-værdien indstilles på 4,5 med eddikesyre.
10 Til insulin-opløsningen sættes der 20 mg trypsin opløst i 0,5 ml vand. Der gås yderligere frem analogt med eksempel la). Udbytterne af råmateriale, der ifølge HPLC-analyse indeholder 67% okseinsulin-B30-Ala0(tBu), andrager 563 mg.
Udbyttet af beriget okseinsulin-B30-Ala0(tBu) andra-15 ger efter søjlechromatografisk rensning 409 mg.
Fraspaltningen af esteren sker analogt med eksempel lb) .
Eksempel 2
BO
20 75 mg Ala-Gln-Lys -proinsulin fra okse (fremstil ling ifølge Naithani et al., jfr. ovenfor) omsættes analogt med eksempel la med trypsin og AlaOtBu, men ved 7°C og pH = 4,5. Efter 16 timers henstand oparbejdes der, og den dannede okseinsulin-B30-ester fraskilles chromatogra-25 fisk.
Udbytte: 4 7 mg.
Aminosyreanalysen af dette materiale svarer til okseinsulinet.
Fraspaltningen af esteren sker analogt med eksem-30 pel lb) .
Eksempel 3
BO
75 mg Ala-Gln-Lys -proinsulin fra svin (fremstillet analogt med eksempel 2) omsættes analogt med eksem-35 pel 2 ved 9°C og pH = 4,4 med AlaOtBu, og der oparbejdes.
8
O
DK 154573 B
Udbyttet af svineinsulinester andrager 39 mg (oparbejd-- ning analogt med eksempel lb)). Reaktionsprodukterne isoleres ved HPLC og analyseres ved aminosyreanalyse.
5 Eksempel 4
BO
75 mg Ala-Gln-Lys -proinsulin fra svin omsættes som i eksempel la) med 500 mg Thr(tBu)OtBu i nærværelse af trypsin. Efter 16 timers reaktionstid kan der isoleres 49 mg humaninsulin-B30-(tBu)-OtBu. Der gås videre 10 frem analogt med eksempel lb). Reaktionsprodukterne isoleres ved HPLC og analyseres ved aminosyreanalyse.
Eksempel 5
BO
75 mg Arg -proinsulin fra okse omsættes med 15 500 mg Thr(tBu)OtBu som i eksempel la) i nærværelse af trypsin. Efter henstand natten over oparbejdes der som i eksempel la). Udbyttet af okseinsulin-B30 Thr(tBu)-OtBu andrager 45 mg, som videreoparbejdes svarende til eksempel lb). Reaktionsprodukterne isoleres ved HPLC og 20 analyseres ved aminosyreanalyse.
Eksempel 6
BO
75 mg Ala-Gln-Arg -proinsulin fra svin bringes til reaktion med 400 mg Thr(tBu)OtBu og 8 mg trypsin 25 som i eksempel la). Efter 20 timer ved 6°C andrager udbyttet af humaninsulin-B30-(tBu)OtBu 39 mg (videre oparbejdning analogt med eksempel lb)). Reaktionsprodukterne isoleres ved HPLC og analyseres ved aminosyreanalyse.
30
Eksempel 7
BO
5 mg Gln-Pro-Lys-Pro-Ala-Gln-Lys -proinsulin fra okse opløses sammen med 15 mg AlaOtBu i 0,1 ml vand. pH-værdien indstilles med et spor af iseddike på 4 til 35 6, der‘tilsættes 1 mg trypsin, og reaktionsblandingen
O
DK 154573 B
9 holdes i 24 timer ved 4°C. Ved hjælp af HPLC måles der 63% okseinsulin-B30-tBu, der viderebehandles som i eksempel lb) .
5 Eksempel 8
BO
5 mg Gln-Pro-Lys-Pro-Ala-Gln-Arg -proinsulin fra svin bringes til reaktion med 25 mg Thr(tBu)OtBu som angivet i eksempel 7. Efter en reaktionstid på 24 timer findes der ved HPLC-analyse 71% humaninsulin-B3Q-(tBu)-10 OtBu. Ved hjælp af præparativ HPLC kan esteren isoleres.
Udbytte: 2,8 mg.
Efter den sædvanlige fraspaltning af de tert.bu-tyl-beskyttelsesgrupper er produktet ved HPLC og ifølge aminosyreanalyse identisk med humaninsulin.
15
Eksempel 9
BO
75 mg Pro-Ala-Ala-Lys -proinsulin fra svin omsættes som i eksempel la) med 500 mg Thr(tBu)OtBu i nærværelse af trypsin. Efter en reaktionstid på 16 timer kan 20 der isoleres 52 mg humaninsulin-B30-(tBu)-OtBu. Der gås videre frem analogt med eksempel lb). Reaktionsprodukterne isoleres ved HPLC og analyseres ved aminosyreanalyse.
25 1 35
Claims (8)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af insuliner ud fra tilsvarende præproinsulinanaloge, kendeteg- 5 net ved, at man ved en pH-værdi under det isoelektriske punkt for insulinerne ved hjælp af trypsin eller en tryp-sinlignende endopeptidase omsætter tilsvarende præproinsulinanaloge / der ved proinsulinets N-terminal bærer ly-sin eller arginin eller acylaminoacyl-rester som carboxyl-10 ende af en præsekvens, med formlen C-kæde__( i—S—S—i A-kæde U*° Γ Ί *-08 ««
15. I s s i S γΒ29 rI-ϊΒΟ-I-!- -I B-kæde 20. hvilken Y betyder Lys eller Arg, og betyder hydrogen, en L-aminosyre eller resten af et som signalsekvens tjenende peptid, med en ester af de i B30-stilling i naturlige insuliner forekommende aminosyrer, som, når ami-nosyrerne yderligere indeholder aliphatiske OH-grupper, 25 også kan bære disse på beskyttet form, og derefter fraspalter estergruppen og de eventuelt tilstedeværende beskyttelsesgrupper .
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendete g-30 net ved, at der som aminosyrederivater anvendes Ala- -OtBu eller Thr(tBu)-OtBu.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at der arbejdes ved en pH-værdi 35 mellem·3,8 og 5,5, fortrinsvis mellem 3,8 og 5,0. O u ' DK 154573B
4. Fremgangsmåde ifølge et eller flere af kravene 1-3, kendetegnet ved, at enzym-præproinsulin-analog-forholdet andrager 1:1 til 1:100, fortrinsvis 1:4 til 1:10 vægtdele. 5
5. Fremgangsmåde ifølge et eller flere af kravene 1-4, kendetegnet ved, at der anvendes et molært forhold mellem aminosyreesteren eller dens beskyttelsesgrupper bærende derivat og præproinsulinanalogen på fra 10 50-500, fortrinsvis 100-250.
6. Fremgangsmåde ifølge et eller flere af kravene 1-5, kendetegnet ved, at reaktionstemperaturen ligger mellem 2 og 37°C, fortrinsvis mellem 4 og 10°C. 15
7. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at der arbejdes ved en pH-værdi mellem 3.8 og 5,5, at enzym-præproinsulinanalog-forholdet andrager 1:1 til 1:100 vægtdele, at det molære forhold mellem 20 aminosyreester eller dennes beskyttede derivat og præpro-insulinanaloge andrager fra 50 til 500, og at reaktionstemperaturen ligger mellem 2 og 37°C.
8. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kende - 25 tegnet ved, at der arbejdes ved en pH-værdi mellem 3.8 og 5,0, at enzym-præproinsulinanalog-forholdet andrager 1:4 til 1:10 vægtdele, at det molære forhold mellem aminosyreester eller dens beskyttede derivat og præproin-sulinanaloge andrager fra 100 til 250, og at reaktions- 30 temperaturen ligger mellem 4 og 10°C. 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3209184 | 1982-03-13 | ||
| DE19823209184 DE3209184A1 (de) | 1982-03-13 | 1982-03-13 | Verfahren zur umwandlung von praeproinsulinanaloga zu insulinen |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK117883D0 DK117883D0 (da) | 1983-03-11 |
| DK117883A DK117883A (da) | 1983-09-14 |
| DK154573B true DK154573B (da) | 1988-11-28 |
| DK154573C DK154573C (da) | 1989-05-22 |
Family
ID=6158163
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK117883A DK154573C (da) | 1982-03-13 | 1983-03-11 | Fremgangsmaade til fremstilling af insuliner ud fra tilsvarende praeproinsulinanaloge |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4639333A (da) |
| EP (1) | EP0089007B1 (da) |
| JP (1) | JPS58190398A (da) |
| KR (1) | KR900003502B1 (da) |
| AT (1) | ATE21118T1 (da) |
| AU (1) | AU553832B2 (da) |
| CA (1) | CA1195273A (da) |
| DE (2) | DE3209184A1 (da) |
| DK (1) | DK154573C (da) |
| ES (1) | ES8401448A1 (da) |
| FI (1) | FI79117C (da) |
| GR (1) | GR78453B (da) |
| IE (1) | IE54605B1 (da) |
| IL (1) | IL68103A (da) |
| ZA (1) | ZA831693B (da) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3326472A1 (de) * | 1983-07-22 | 1985-02-14 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3333640A1 (de) * | 1983-09-17 | 1985-04-25 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur herstellung von insulin-derivaten, deren b-kette c-terminal verlaengert ist, neue basisch modifizierte insulin-derivate diese enthaltende mittel und ihre verwendung |
| US4581165A (en) * | 1984-06-14 | 1986-04-08 | Eli Lilly And Company | Anti-diabetic compounds |
| US4569792A (en) * | 1984-06-14 | 1986-02-11 | Eli Lilly And Company | Anti-diabetic compounds |
| US4569791A (en) * | 1984-06-14 | 1986-02-11 | Eli Lilly And Company | Anti-diabetic compounds |
| DK129385A (da) * | 1985-03-22 | 1986-09-23 | Novo Industri As | Peptider og fremstilling deraf |
| WO1988006599A1 (en) * | 1987-02-25 | 1988-09-07 | Novo Industri A/S | Novel insulin derivatives |
| US5514646A (en) * | 1989-02-09 | 1996-05-07 | Chance; Ronald E. | Insulin analogs modified at position 29 of the B chain |
| FI103805B1 (fi) * | 1990-09-05 | 1999-09-30 | Hoechst Ag | Menetelmä preproinsuliinien hydroloimiseksi |
| KR20110059602A (ko) | 2008-08-07 | 2011-06-02 | 바이오콘 리미티드 | 인슐린 화합물의 제조방법 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3276961A (en) * | 1963-04-08 | 1966-10-04 | Squibb & Sons Inc | Process for preparing human insulin |
| GB1426061A (en) * | 1972-12-28 | 1976-02-25 | Ici Ltd | Polypeptides |
| US3903068A (en) * | 1972-12-26 | 1975-09-02 | Us Health Education & Welfare | Facile synthesis of human insulin by modification of porcine insulin |
| DE3064479D1 (en) * | 1979-04-13 | 1983-09-08 | Shionogi & Co | Process for preparing a b30-threonine insulin |
| JPS55138393A (en) * | 1979-04-13 | 1980-10-29 | Shionogi & Co Ltd | Semisynthesis of insulin |
| DK147437A (en) * | 1980-02-11 | 1900-01-01 | Process for preparing human insulin or threonine B30 esters of human insulin, or a salt or complex thereof | |
| PH16156A (en) * | 1980-03-27 | 1983-07-18 | Lilly Co Eli | Process for producing an insulin precursor |
| DK319780A (da) * | 1980-07-24 | 1982-01-25 | Forenede Bryggerier As | Fremgangsmaade til enzymatisk udskiftning af b-30 aminosyren i insuliner |
| DE3101382A1 (de) * | 1981-01-17 | 1982-09-02 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | "verfahren zur herstellung von humanisulin oder dessen derivaten aus schweineinsulin oder dessen derivaten" |
-
1982
- 1982-03-13 DE DE19823209184 patent/DE3209184A1/de not_active Withdrawn
-
1983
- 1983-03-10 IL IL68103A patent/IL68103A/xx not_active IP Right Cessation
- 1983-03-10 EP EP83102337A patent/EP0089007B1/de not_active Expired
- 1983-03-10 AT AT83102337T patent/ATE21118T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-03-10 FI FI830813A patent/FI79117C/fi not_active IP Right Cessation
- 1983-03-10 DE DE8383102337T patent/DE3364838D1/de not_active Expired
- 1983-03-11 ZA ZA831693A patent/ZA831693B/xx unknown
- 1983-03-11 CA CA000423391A patent/CA1195273A/en not_active Expired
- 1983-03-11 KR KR1019830000978A patent/KR900003502B1/ko not_active Expired
- 1983-03-11 DK DK117883A patent/DK154573C/da not_active IP Right Cessation
- 1983-03-11 GR GR70765A patent/GR78453B/el unknown
- 1983-03-11 IE IE529/83A patent/IE54605B1/en not_active IP Right Cessation
- 1983-03-11 ES ES520493A patent/ES8401448A1/es not_active Expired
- 1983-03-11 AU AU12428/83A patent/AU553832B2/en not_active Ceased
- 1983-03-11 JP JP58039298A patent/JPS58190398A/ja active Granted
-
1984
- 1984-10-12 US US06/659,865 patent/US4639333A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK154573C (da) | 1989-05-22 |
| IL68103A (en) | 1986-01-31 |
| FI79117C (fi) | 1989-11-10 |
| ES520493A0 (es) | 1983-12-16 |
| AU553832B2 (en) | 1986-07-31 |
| US4639333A (en) | 1987-01-27 |
| FI830813A0 (fi) | 1983-03-10 |
| ZA831693B (en) | 1983-11-30 |
| AU1242883A (en) | 1983-09-15 |
| EP0089007A1 (de) | 1983-09-21 |
| ES8401448A1 (es) | 1983-12-16 |
| JPS58190398A (ja) | 1983-11-07 |
| JPH0536034B2 (da) | 1993-05-28 |
| DK117883A (da) | 1983-09-14 |
| IE54605B1 (en) | 1989-12-06 |
| DE3209184A1 (de) | 1983-09-15 |
| FI830813L (fi) | 1983-09-14 |
| KR840004169A (ko) | 1984-10-10 |
| EP0089007B1 (de) | 1986-07-30 |
| DK117883D0 (da) | 1983-03-11 |
| DE3364838D1 (en) | 1986-09-04 |
| IL68103A0 (en) | 1983-06-15 |
| GR78453B (da) | 1984-09-27 |
| FI79117B (fi) | 1989-07-31 |
| IE830529L (en) | 1983-09-13 |
| CA1195273A (en) | 1985-10-15 |
| KR900003502B1 (ko) | 1990-05-21 |
| ATE21118T1 (de) | 1986-08-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4601852A (en) | Process for the preparation of human or the derivatives thereof from pig insulin or the derivatives thereof | |
| KR0150565B1 (ko) | 유전자 조환에 의한 사람 인슐린 전구체의 제조 및 이를 이용한 인슐린의 제조방법 | |
| US7790677B2 (en) | Insulin production methods and pro-insulin constructs | |
| US5015728A (en) | Process for the preparation of insulin derivatives, the B chain of which is lengthened c-terminally | |
| US5491216A (en) | Tri-arginine insulins | |
| FI77876C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av humaninsulin eller en treoninb30-ester av humaninsulin eller ett salt eller komplex daerav. | |
| KR19990023651A (ko) | 정확하게 결합된 시스틴 브릿지를 갖는 인슐린 전구체를 수득하는 방법 | |
| CA2464616C (en) | Process for preparing insulin compounds | |
| DK154573B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af insuliner ud fra tilsvarende praeproinsulinanaloge | |
| FI79853B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av insulinderivat. | |
| KR101439110B1 (ko) | 이염기성 ｂ쇄 말단을 갖는 인슐린 유사체를 제조하는 방법 | |
| WO1984003107A1 (en) | A process for the preparation of human insulin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |