DK149482B - Fodertilskud, der er i stand til at passere maven hos droevtyggere, samt dets anvendelse til fodring af droevtyggere - Google Patents

Description

i 149482

Opfindelsen angår et mavepasserende fodertilskud til drøvtyggere i partikelform, ved hvilket 30-50 vægt% af i det mindste ét biologisk virksomt stof er forsynet med et overtræk, der indeholder en alifatisk monocarboxylsyre med 5 14 til 22 carbonatomer eller ricinolsyre eller en blan ding af flere af de nævnte syrerf samt anvendelsen af dette fodertilskud til fodring af drøvtyggere.

Fra DE-PS 22 12 568 kendes allerede et mavepasserende fodertilskud til drøvtyggere i partikelform, ved 10 hvilket mindst ét biologisk aktivt stof er forsynet mprj et overtræk, der er modstandsdygtigt over for omgivelsesbetingelserne i maven, men som efter passage ind i tarmen opløses under påvirkning fra galde og pankreassaft. Overtrækket består af en alifatisk monocarboxylsyre med 15 14 til 22 carbonatomer eller ricinolsyre eller en blan ding af sådanne syrer, eller er et salt af en sådan syre eller en blanding af sådanne syrer. Ved at opløsningen af overtrækket ved det kendte fodertilskud kræver påvirkning fra galde og pankreassaft, forkortes dog den 20 til fordøjelse og resorption til rådighed værende tid betragteligt.

Fodertilskuddet ifølge opfindelsen er kendetegnet ved, at overtrækket i forhold til totalvægten består af a) 10 til 35 vægt% af i det mindste ét natrium-, kalium- 25 eller calciumsalt af en alifatisk mo nocarboxylsyre med 14 til 22 carbonatomer eller ricinolsyre, b) resten op til 100 vægt%, dog mindst 30 vægt%Jaf mindst én alifatisk monocarboxylsyre 30 med 14 til 22 carbonatomer og/eller ricinolsyre og/eller et hærdet plante- eller dyrefedtstof.

Det har overraskende vist sig, at partiklerne af det omhandlede fodertilskud i modsætning til sådanne, 35 ved hvilke overtrækket enten kun består af fedtsyre el- 2 148482 ler kion af fedtsyresalte, angribes allerede i det sure miljø i løbemaven,og de biologisk aktive stoffer frigøres, uden at der kræves en yderligere påvirkning fra galde og pankreassaft. Men på den anden side modstår og-5 så partiklerne af den omhandlede fodertilskud et angreb fra et miljø med mavesafts pH og den mikrobielle nedbrydning i vommen.Som de efterfølgende eksempler viser, ligger den i mavemiljøet uopløste andel af fodertilskuddet ifølge opfindelsen i almindelighed noget højere end 10 ved de tilsvarende sammenligningsforsøg under anvendelse af de i eksemplerne beskrevne undersøgelsesbetingelser. Partiklerne af det omhandlede fodertilskud kan således passere vommen lige så godt som de fra DE-PS 22 12 568 kendte partikler, men begynder dog at blive opløst alle-15 rede i løbemaven, hvorved den til fordøjelse og resorption til rådighed værende tid forlænges.

Fodertilskuddet ifølge opfindelsen består i forhold til totalvægten af 30 til 50 vægt% af mindst ét biologisk virksomt stof. Sådanne biologisk virksomme stof-20 fer er f.eks. aminosyrer, såsom methionin eller lysin; derivater af aminosyrer, såsom N-acylaminosyrer, f.eks. N-stearoylmethionin eller N-oleoylmethionin, calciumsaltet af N-hydroxymethylmethionin eller lysinmonohydro-chlorid; hydroxyanaloge forbindelser af aminosyrer, så-25 som 2-hydroxy-4-methylmercaptosmørsyre eller disses calciumsalte; proteiner, såsom fjerkræmel (Federmehl), fiskemel, casein eller kartoffelprotein; vitaminer, såsom vitamin A, vitamin A-acetat, vitamin A-palmitat, vitamin , vitamin E, nicotinsyre eller nicotinsyreamid, 30 calciumpanthotenat; (3-carotin; enzymer, såsom sure pro-teaser; carbohydrater, såsom glucose; veterinærfarmaceu-tika, f.eks. antibiotika, såsom chlortetracyclin, oxy-tetracyclin, chloramphenicol, zinkbacitracin; anthelmin-tika, såsom piperazinsalte; antiparasitika, såsom negu-3 5 von [(2,2,2,-trichlor-1-hydroxy-ethy1)-phosphorsyredi-methylester]. Der kan naturligvis også anvendes blandinger af to eller flere biologisk virksomme stoffer.

Det overtræk, der beskytter de biologisk virksom- 149482 3 me stoffer i vommen,indeholder ligeledes i forhold til fodertilskuddets totalvægt 10 til 35 vægt% af mindst ét natrium-, kalium- eller calciumsalt af en alifatisk mono-carboxylsyre med 14 til 22 carbonatomer eller ricinolsyre 5 og til opfyldning op til 100 vægt%, dog i det mindste 30 vægt% i forhold til fodertilskuddets totalvægt af mindst en alifatisk monocarboxylsyre med 14 til 22 carbonatomer og/eller ricinolsyre og/eller et hærdet plante- eller dyrefedtstof, f.eks. hærdet sojabønneolie eller hærdet 10 oksetalg.

De i det beskyttende overtræk som frie fedtsyrer eller i form af natrium-, kalium- eller ealciumsalte foreliggende alifatiske monocarboxylsyrer med 14 til 22 carbonatomer kan være mættede eller umættede, forgrenede 15 eller ligekædede. De ligekædede i naturlige fedtstoffer forekommende fedtsyrer, såsom myristinsyre, palmitinsyre, stearinsyre, arachinsyre eller behensyre eller blandinger af sådanne syrer foretrækkes.

Fodertilskuddet ifølge opfindelsen kan hensigts-20 mæssigt fremstilles således, at først tilberedes en homogen smelte af de komponenter, der udgør det beskyttende overtræk. Derefter dispergeres det biologisk virksomme stof eller en blanding af sådanne stoffer, der skal beskyttes, under omrøring i denne smelte. Derefter føres 25 den flydende dispersion, der ved hjælp af vibrationer med høj frekvens, er sat i svingning gennem dyser. Derved opdeles den fra hver dyse udgående stråle i diskrete smådråber med defineret størrelse, der efter dannelse af en kugleform ved frit fald stivner. På denne måde kan 30 der fremstilles kugleformede partikler med et vilkårligt tværsnit mellem 50 og 2500 μπι.

Et i form af det omhandlede fodertilskud særligt vigtigt biologisk virksomt stof er methionin. Eftersom talrige undersøgelser viser, at blandt alle aminosyrer 35 er methionin i almindelighed den mest livsnødvendige a-minosyre for drøvtyggere. Således fører infusion af methionin i løbemaven hos får til en stigning i uldvæksten [P.J. Reis, P.G. Schinkel, Aust. J. Biol. Sci. 16, 218 4 149432 (1963)]. Hos holsteinske okser fører infuson af methio-nin i løbemaven til en forhøjet N-balance [C.R.Richardson, E.E.Hatfield, J. Anim. Sci. 4£, 740 (1978)]. Undersøgelser på lakterende køer er citeret af W. Kaufmann 5 og W. Lupping i "Z. Tierphysiol., Tierernåhrg. u. Futter-middelkde." 41, 202 (1979). Der er der også angivet resul-• tater af forsøg, der viser, at methionin, der er beskyttet under passagen af maven, hvor methioninen dog frigøres i løbemaven,som tilskud til en sædvanlig kraft-10 foderration hos malkekøer frembringer en stigning i mælkeydelsen,i protein- og fedtindholdet i mælken,i per-sistensen og i frugtbarheden efter begyndelsen af lakteringen.

Opfindelsen angår endvidere anvendelsen af det om-handlede fodertilskud, i en daglig dosis fra 1 til 100 g, til fodring af drøvtyggere.

Fodertilskuddet ifølge opfindelsen anvendes fortrinsvis med methionin som biologisk virksomt stof og i-sær til fodring af malkekøer, til forbedring af mælkeydelsen, 20 protein- og fedtindholdet i mælken, persistensen og/eller frugtbarheden efter begyndelsen af lakteringen.

Andre vigtige biologisk virksomme forbindelser er vitaminerne. Således fører f.eks. vitamin-A-mangel hos okser til dårlig appetit og derfor til ringe vægtforøgel-25 se. Hos drægtige køer kan det forårsage kalvekastning eller dødfødte kalve. β-Carotin har en specifik virkning på oksers frugtbarhed [Dt. Tierårztl. Wschr. J32, 444 (1975)].

En energetisk underernæring af højtydende dyr kan ^ føre til forringet mælkeproteinydelse. Tilføring af car-hohydrater, såsom glucose, i beskyttet form fører herved til en særdeles gunstig energitilføring.

Ved oralt indgivne medikamenter ønskes i almindelighed en frigørelse af det aktive stof først efter pas-35 sage af maven. Det omhandlede fodertilskud er da særligt egnet, såfremt der ønskes en frigørelse i løbemaven.

149482 5

Opfindelsen belyses nærmere ved de efterfølgende eksempler og sammenligningsforsøg. Såfremt andet ikke er angivet, betyder dele vægtdele og procenter vægtprocenter.

Eksempel 1 5 a) (Sammenligningsforsøg).70 dele stearinsyre smel tedes ved 80°C. 30 Dele methionin suspenderedes under omrøring,og smelten blev dryppet ud fra dyser, hvorved aer fremkom ensartede kugleformede partikler med tværsnit på 1 til 2 mm.

10 b) Ud fra en blanding af 60 dele stearinsyre og 10 dele natriumstearat blev der ved opvarmning til 80°C fremstillet en homogen smelte, hvori der ligeledes blev indrørt 30 dele methionin. Fremstillingen af partiklerne skete som ved a).

15 På analog måde fremstilledes partikler af: c) 30 dele methionin, 55 dele stearinsyre og 15 dele natriums te arat, d) 30 dele methionin, 50 dele stearinsyre og 20 dele natri vims tearat , 20 e) 30 dele methionin, 50 dele stearinsyre og 20 dele kaliums tearat, f) 30 dele methionin, 45 dele stearinsyre og 25 dele natriums tear at , g) 30 dele methionin, 35 dele stearinsyre og 35 dele na- 25 triumstearat.

Til vindersøge Ise af den specifikke pH-afhængige fri* gørelse under udnyttelse af pH-forskellen mellem mavesaft og løbemavesaft blev partiklerne inkuberet i et rysteapparatur i hvert tilfælde i 2 timer ved 37°C i 50 ml 30 af et puffersystem, der pH-mæssigt svarede til mavemil-jøet og under stadig bevægelse. Puffersystemet bestod af en opløsning af 74,77 g kaliumdihydrogenphosphat, 103,03 g dinatriumhydrogenphosphattrihydrat og 13,5 g kaliumiodid i 1 liter vand. Puffersysternets pH-værdi var 149482 6 6,5. Samtidig blev partiklerne inkuberet i 2 timer ved 37°C i 50 ml puffersystem, der pH-mæssigt svarede til løbemavemiljøet. Dette system bestod af en opløsning af 6,5 ml 0,2 N saltsyre og 25,0 ml 0,2 N kaliumchloridop-5 løsning i 100 ml vand. Dette puffersystems pH-værdi var 2,0.

Derefter affiltreredes de ikke opløste partikler og opløsningen i hvert tilfælde tilsat 100 ml phosphat-puffer med pH 6,5, hvorved der i hvert tilfælde resul-10 terede en pH-værdi på 6,5. Andelen af det fra partiklerne i opløsning overgåede methionin blev derpå bestemt iodometrisk.

Resultaterne er anført i den følgende tabel 1.

149482 7 dø P (1)

•H <H

m G O •Η Λ β Φ r·· σι σι ro in oo vo 0t> τΐίιΐ ,β g ffl β\ ¢0 rl (Ί ΙΟ ·Φ •ρ φ 0) Λ s s ιΗ α>___ τ3 --- G Ρ Π) Φ U-ι to 'ί 1ί) Η t' (Ν Ιίΐ 4J <4-1 *. s ». ·· ν ·* ^ m3 σι ro ιη νο ιη αο γ~ φ (¼ co eo oo oo oo οο .-) φ 04 >

Ο m D S

r-H ....... 1 1 * pH -·—' " -—«» ^ φ -Ρ tf <0 (ti ^-ν Φ <0 Λ π3 3 3 3 « Ζ !3 (d Ρ _ μ -Pm ΦΦ omoomm +)+) I η η cm cs cm η

XrJi 0_____ Ό ο Φ Ρ Μ CU>i ία

Ρ G

Φ·Η οοηοοηιη Μ ΐ' « ιη λ λ μ tnm G Φ •Η-Ρ G in p (g--σι ω G ’S· G Ή Μ

Φ G P

go o g -ri OOOOOOO 4-1 id r· n m m ro m ro m to co+> O'

Φ G

S -H

G

__________________ Cn

•H

f“l

G

Cn W g w ΐ S ”o m ai ίί o i p lu 0 i—JrHrHrHrHrHrH C/} ,_fe____ * 149482 8

Produktet med en stearatandel på 20% viser en meget vidtgående frigørelse af methionin ved pH-forhol-dene i løbemaven, uden at enzymatisk aktivitet var nødvendig. En mindre eller større stearatandel fører til en 5 mindre effektiv frigørelse af methionin under inkubationstiden på kun 2 timer.

Denne virkning kan også ses med øjnene. Mens partiklerne ifølge a) efter inkubation i den sure puffer ikke viste nogen ydre ændring, var partiklerne ifølge 10 d) og e) revnet adskillige steder. Partiklerne ifølge b), f) og g) viste en ringe opblødning af det ydre lag.

Eksempel 2 På tilsvarende vis blev der fremstillet partikler med en nethioninandel på 40% i forhold til slutproduktet.

15 Natriumstearatandelen blev indstillet på 10, 15 og 20%.

Til sammenligning blev der fremstillet og undersøgt et produkt uden stearattilsætning.

Sammensætningen og resultaterne er anført i tabel 2.

149482 9 <*> μ

<D

-Hm 44 P P •H ft p q) ο > Η Π H σι •H id - - ' *· ο! Ξ m οι σι a\ -P <u σι σι ^ n ΟΛ e «.

PI

H

Q)__ 'd

S M

id <u

M-ι r~ >o οι H

4-1 Ή *« *· *· *· in p ri m co

•Q. ft h CO CO OO

H a) ft> 04 0 id H __ Q) -—- -—- ,q 4-1 id id id id id 2 2 3

Eh S4 w w id (D o in o

+) 44 I Η H CM

a) ω 44 44 P--

Ό <U

0 M

>4 >1 ft to p ιμ -Η ο o in ο id 5η νο m ^ 'a* <d Cn <D P +> H 05 5 —_ U> « -a w p w p -η u a> p o so ή 1 ·Η ο ο ο Ο 01 3 ο! vf <ί ^ vf Φ 05 4J ρ a) ή S & cn _ Ή f—j Ρ σ< » ο W id Λ 0 Ό 1 Μ 3 0 04 ΟΙ ΟΙ ΟΙ 05 la _ Μ 149482 10

En større stearatandel som beskrevet i eksemplerne fører til en forøgelse af smeltens viskositet, således at fremstillingen også af større partikler besværliggøres. Ved en fuldstændig erstatning af.fedtsyren med 5 et salt af fedtsyren kan en smelte ikke fremstilles, ej heller ved anvendelse af temperaturer på 180°C. Dette fører endvidere til en væsentlig større termisk belastning af stoffet, der skal beskyttes.

Eksempel 3 10 Til sammenligning af de ovenfor beskrevne under søgelser med resultater ved anvendelse af fysiologiske opløsninger inkuberes produktet efter forsøg 1 d) med 50 ml løbemavesaft opnået fra frisk slagtede okser ligeledes ved 37°C i 2 timer. Bestemmelsen skete på samme 15 måde. Resultatet er vist i tabel 3.

149482 11 +> d? m <o

ri CO

O) CN

G > •H (0 vo g s oi O 0) •Η Λ Λ «ι +> P5 I_— rH 0)

O) VH fd M-J

g 3 3ft cn

CD

-P > VO

to 3 H

«V S r-» a) ft Λ O -Sv D PI

n H »-* φ +> 3 λ nj a (0 H w fri (0 tu o

+)+) <N

<u m +> fd φ 0 in u >t ft ω

G

m -a o to M in 3 tn a) G +> •Htfl

G

+>__

fB

to G G -H Ο) G

1 o E -Η o 3 Λ to W +J 0) a O) εη o •s to — ^ M 3 Λ

O

fa n 149482

Eksempel 4 12

Til bedømmelse af, om der med det efter forsøg 1 b) opnåede produkt med en natriumstearatandel på 10% også ved længere inkubation i løbemavesaft kan iagttages 5 en forøget frigørelse i forhold til produktet efter forsøg 1 a) (uden stearatandel), blev begge produkterne hver inkuberet i 16 timer ved 37°C i løbemavesaft. Derved fremkaa de de følgende resultater (tabel 4).

dP

•Η P

<D fi S

•ri -ri

β -P O

•ri 40

-5H

e Ή r- ro ι-i (ύ - * Φ t n n in Ό d) Γ" CM fi >

(tf (tf , S

+J φ tn Λ H J ft'—

O

D

iH __ r-T" φ +> (tf Λ- , <tf 2 (tf +» P ~ E-t 0) (tf +> Φ o X +> I Ή β W Ό O —- P Φ ftp

m tn (tf β •H

O' P o o

β (tf t- UD

-ri φ · β +1 04 +> to -a æ tn in —- p β β Ο Φ ·Η <Η S β ιη go tn (tf -Η Ο Ο β οι Λ η η ·Η +> β Φ 04 --β 04 * Φ

tn "(tf Λ S

ρ ίο 0 t Ί1 01 fa _ * 149482 13

Eksempel 5 På tilsvarende vis som i eksempel 1 og 2 fremstilledes et produkt bestående af a) 30% lysinhydrachlorid og 70% stearinsyre samt b) 30% lysinhydrochlorid, 50% 5 stearinsyre og 20% natriumstearat.

Efter inkubation i løbemavepuffer i 2 timer ved 37°C affiltreredes partiklerne, og opløsningerne blev undersøgt søjlechromatografisk på aminosyreanalysatoren LKB 3201 for lysinindholdet.

10 Derved fandtes de følgende forskelle i frigø relseshastigheden (tabel 5).

149482 14 dp

HM

<u T3 g •P -P P +» 0 H CN Λ 0 - Ο P P Q)

Ό ip i-( O

>i4H ' ^

Λ 3 P* <N

β Q. t" (N

•h a) w > >1 (0 Ή S a) Η Λ (!) ·& T3 P] β-" β

-P

in s 1-1 in a» 0

H D

a)--— J3 -P β

Kj -p (0 s B O) P -- -P (0

ϋ (D O

3 -P I nj 'd w 0 p__ a--

<D

Ή p β >t 0) O' β β ·Η Ο Ο •HP r- ρ* β β +ι 0) (Β *Ρ tn cn β Ο) οι 1 ---ο.

εη ω <3 υ Ρ w ® ο ο ο ή • mm ω Οι m β t*i ·Ρ Ρ! β θ' Ή

r—I

θ' λ β -& Ο) W β Λ 6

Ρ S

0 in in β

IP CQ

___ *·

Eksempel 6 149482 15

Svarende til eksempel 1 blev der fremstillet partikler af a) 30% nicotinsyreamid og 70% stearinsyre samt b) 30% nicotinsyreamid, 50% stearinsyre og 20% natrium-5 stearat.

Efter inkubation i løbemavesaft i 2 timer ved 37°C blev partiklerne affiltreret og N-indholdet bestemt ved Kjeldahl-metoden. Ved sammenligning med det inden inkubationen analyserede N-indhold fastlagdes frigørel-10 sens, udstrækning. Resultatet er vist i tabel 6. .

———

•H

d •ri Φ Φ μ s

>l*rl M -P S

•rH CM +> Ο ·* ϋ μ •μ φ fim Η η m - * rH fi σι Ο Οι Ό Φ ΰ > td id , ε -Ρ φ ι»Λ Η ι-3 Ό ft—' Ο

Η D

Φ — .. - Λ ««% id +> Φ

Eh Φ I 3 -Ρ fd — Μ Φ +> fi 4-) id ο τΙ οι Ρ ι cm ο μ.,. -

ft I

s m ·μ id Μ id φ tji® μ ο ο οι C 4-1 >1 r* in Ό.

-μ οι in to Α μ +j——- ο (Β ι φ m οι fi -μ ω C3 Ή fi Ο· Φ 4-1 id Ο Ο fi f o Φ ro η ·μ Ο μ fi id ·μ >ι 0> ca 2 οι ·μ Η "Π—ι- c ΰ> * φ Ό π Φ Id λ 1 μ id Ο « Φ 01 ,Ja__#

Eksempel 7 149482 16 På tilsvarende vis som i eksempel 1 og 2 blev der fremstillet partikler, ved hvilke der i det beskyttende lag blev anvendt hærdet sojaolie.

5 Sammensætningen og resultatet af den som i eksem pel 1 gennemførte undersøgelse er vist i tabel 7.

u dP d)

Ή -H IH

3 C ft -H <s) vo σ> r- β > *· - *· 0(d -s· f'· σι •Hg σ\ m

X <D -p X Φ e· g X

H

<D~ -- Ό β U (C d) ih +> m i" o o *H ia 3 · ^ · 0) a & vo σι X Η φ σ σ vo X ft >

Ed O 3 s a

P -P

tin ~ +»y w « X 3 w — 3 0) Ό -P o o

O 01 I H CM

M

ft- - 0)

Ή ·Η Id -P Η O O

&i'U id o o o fi Η ·η Is id ifl ¢1 •H fB O -a β S U ΙΑ Ρ, Μ «73 0 w ·η m β β ΙΑ ο ο σι Β ·η ο ο ο g g X η η η ·η id -Ρ β οι φ σι a ·η ________ Η _ β σ> ο

a * I

Μ ΐ Λ Ο I

Ρ 'οι ϋι f» Ρ. Κ U9482 17

Eksempel 8 På tilsvarende vis som beskrevet ovenfor blev der fremstillet produkter, ved hvilke methionin og protein i kombination beskyttedes. Som protein blev der anvendt 5 fjerkræmel (Federmehl).

Efter gennemføring af inkubationen i mave- og lø-bemavepuffer som i eksempel 1 blev opløsningerne undersøgt søjlechromatografisk for aminosyreindholdet. Ud over methionin kunne andre aminosyrer kun eftervises i spor-10 mængder.

Sammensætningen og resultatet er vist i tabel 8.

Eksempel 9 a) {Sammenligningsforsøg) 70 dele stearinsyre blev smeltet ved 80°C. 30 dele methionin suspenderedes deri under omrøring, og smelten blev dryppet ud fra dyser, hvorved der fremkom ensartede kugleformede partikler med tværsnit på 1 til 2 mm.

b) Ud fra en blanding af 60 dele stearinsyre og 10 dele calciumstearat blev der ved opvarmning til 80°C fremstil- 20 let en homogen smelte, hvori der ligeledes blev suspenderet 30 dele methionin. Smelten blev dryppet ud fra dyser, hvorved der fremkom ensartede kugleformede partikler med en diameter på 1 til 2 mm.

På samme måde fremstilledes partikler ud fra: 25 c) 30 dele methionin, 50 dele stearinsyre og 20 dele calciumstearat, d) 30 dele methionin, 35 dele stearinsyre og 35 dele calciumstearat.

De fremstillede partikler blev hver gang undersøgt 30 på den i eksempel 1 beskrevne måde. Resultaterne er vist i den efterfølgende tabel 9.

149482 18 η -- o Ή ϋ9 U Ή α) d Η ή ρ, r~ m ιο co IH α) - *. ·. » s3 ί c*p > to tn ro γί Ο ft θ' (Ί (0 m a ^ a β α) - - - -Hg . ο > m oo co μ <d 5S " g S' U ^

s3 I

ω—-- 5 S3 in I——I-

(3 (U B

W n, +) ih r- ^ vo ^ to β - « * Ό. & o σι i i.

H g VS) VD t- φ Q) S' s Ό «Η

2 $ β *H

3¾ (¾ D CO OJ VD CD

— — —. O J ·. «. » -«· . +) <d σ\ <-t in vs η 0 7? to > r- co oo as 2 S S 5l » S „ §-s 4J o o 2 H CO I i—I ΓΊ _j ^ ® <u -- Λ ---,£) JJ ^ „ 2nu 2 « β β β 64 e & B J3 , ϋ u o -P co ® I ~ ~ ^ ,Μ β Ο Ο Ο ^ ® αοιη 3Ή m vf η . *i >5 ^ ·ημ r~> cm m p (3 --- MO) rtl

ft+> S

to z m 73 <u o & 5 S' 8 g ,|j I ft -Η Ο Ο O in 3H ΗΓ'-νοιηη -PA! O O O 3J Π5 RJ H m <N cn "’α» tn M Q) fr, +> «.

β-η · S1 W W

gft § -H___ M

« ^ r1 n g - CO R C £ Φ fi M cu *H (/} CQ *H O S C £ β Ή 2 ο « Q to ϊί·Ηθσοο .j •hooo 0) e-β m m m m g jincnnG g -Ρ &

•P -H S 0) -H

3 & m 2 H

- —-- 3 Γ 0)

0» * fig, I

to ΒΛΟ § g ---— — CO

M 5 H S 32 U 73 0 CO 00 OO 55 g ft tO ? 3 3 31 *