DK146724B - Fremgangsmaade til fremstilling af langsomme alfa- og beta-glycoproteiner - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af langsomme alfa- og beta-glycoproteiner Download PDFInfo
- Publication number
- DK146724B DK146724B DK080873AA DK80873A DK146724B DK 146724 B DK146724 B DK 146724B DK 080873A A DK080873A A DK 080873AA DK 80873 A DK80873 A DK 80873A DK 146724 B DK146724 B DK 146724B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- glycoproteins
- slow
- preparation
- alfa
- beta
- Prior art date
Links
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 title description 38
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 title description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 26
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 14
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 5
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 4
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical group 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 3
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 3
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229960001927 cetylpyridinium chloride Drugs 0.000 description 2
- YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- NKDDWNXOKDWJAK-UHFFFAOYSA-N dimethoxymethane Chemical compound COCOC NKDDWNXOKDWJAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- -1 nebulizers Substances 0.000 description 2
- 150000002829 nitrogen Chemical class 0.000 description 2
- OIPPWFOQEKKFEE-UHFFFAOYSA-N orcinol Chemical compound CC1=CC(O)=CC(O)=C1 OIPPWFOQEKKFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000793 phophlogistic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010006464 Hemolysin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 239000007982 barbital buffer Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 1
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 229960004279 formaldehyde Drugs 0.000 description 1
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical group 0.000 description 1
- 239000003228 hemolysin Substances 0.000 description 1
- 150000008273 hexosamines Chemical class 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 229960002895 phenylbutazone Drugs 0.000 description 1
- VYMDGNCVAMGZFE-UHFFFAOYSA-N phenylbutazonum Chemical compound O=C1C(CCCC)C(=O)N(C=2C=CC=CC=2)N1C1=CC=CC=C1 VYMDGNCVAMGZFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGHFKWPGWBFQLN-UHFFFAOYSA-M sodium;5,5-diethylpyrimidin-3-ide-2,4,6-trione Chemical compound [Na+].CCC1(CC)C([O-])=NC(=O)NC1=O RGHFKWPGWBFQLN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 1
- 239000006216 vaginal suppository Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K14/26—Klebsiella (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Description
U6724
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til fremstilling af langsomme a- og β-glycoproteiner som nærmere angivet i kravets indledning.
Dansk patentskrift nr. 129.466 beskriver en sådan fremgangsmåde ved ekstraktion af i forvejen lysebehandlede kulturer af mikrobielle stammer.
Denne fremgangsmåde består således i - at man dyrker visse mikrobestammer og udvinder mikroberne, - at man foretager en lyse af disse, - at man underkaster resten indvirkning af et eller flere lipidopløsningsmidler og befrier den opnåede opløsning for proteiner ved fysiske eller kemiske midler, - at man selektivt fra den for proteiner befriede rest fælder de langsomme glycoproteiner ved tilsætning af et opløsningsmiddel eller en blanding af opløsningsmidler.
De ved denne fremgangsmåde opnåede glycoproteiner har meget interessante terapeutiske egenskaber. De bar betydelige betændelseshæmmende egenskaber og hurtige og uspecifikke immuniseringsegenskåber. De har desuden den fordel hverken at være allergiserende eller hypertermiserende samt ikke at fremkalde intolerancefænomener på injektionsstedet.
Strukturen af disse langsomme a~ og β-glycoproteiner påvises ved deres elektroforetiske opførsel i tæthedsgradi-ent i forhold til referenceglycoproteiner, især i forhold til serumglycoproteiner,
Den kemiske karakter af disse stoffer påvises ved kemiske reaktioner, såsom deres indhold af hexoser og pentoser, ved tilnærmet bestemmelse af molekylvægten under anvendelse af selektive chromatografimidler såsom modificerede celluloser, sephadexgel ("Sephadex" er indregistreret varemærke for polymeriseret dextran) eller molekylsigter, ved indholdet af proteinfraktion bedømt ved den biuretogene evne beregnet i forhold til en serumalbuminstandard, ved indholdet af hexosaminer og ved indholdet af sialsyre.
Blandingen af langsomme a- og β-glycoproteiner* som fås ved denne fremgangsmåde, kan defineres som bestående af langsomme, termostabile, syreopløselige og i ammo-niumsulfatopløsninger opløselige a- og β-glycoproteiner.
2 146724
De langsomme ct- og β-glycoproteiner, som fås ved den nævnte fremgangsmåde, har et indhold af kombinerede hexoser mellem 50 og 60$.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af langsomme a- og β-glycoproteiner, som nærmere angivet i krav l's indledning, er ejendommelig ved det i kravets kendetegnende del anførte.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen gør det muligt at opnå langsomme a- og β-glycoproteiner i meget ren og følgelig meget aktiv form. Fremgangsmåden gør det muligt at eliminere størstedelen af de nedbrydningsprodukter fra proteinerne, som endnu har kunnet restere i blandingen, og det er følgelig muligt at opnå slutproduktet i en vidtgående renset form.
Diafiltreringen på en eller flere kalibrerede membraner er hidtil ukendt.
De nedenfor anførte farmakologiske resultater viser, at diafiltreringen i modsætning til en simpel rensning giver et overraskende resultat. I tilfælde af en simpel rensning hvor de inaktive produkter elimineres, ville aktiviteten af de her omhandlede produkter blive multipliceret i samme forhold i de forskellige forsøg i forhold til forbindelserne ifølge den kendte teknik,
Dette er j. virkeligheden ikke tilfældet, for medens aktiviteterne af stofferne ifølge den kendte teknik og ifølge den foreliggende opfindelses fremgangsmåde er praktisk taget identiske i prøverne for simulering af de specifikke forsvarsmekanismer og antibakteriel aktivitet,, så er forbindelserne fremstillet ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse tværtimod dobbelt så aktive i prøven for betændelseshæmmende virkning.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen udmærker sig specielt på følgende punkter: 1) De netformede selektivt permeable membraner er fortrinsvis sådanne, som sælges under betegnelsen "Amicon XM 500" af Amicon Corporation, lexington, Mass., USA.
2) Membranerne for selektiv permeabilitet er for- U6724 3 trinsvis sådanne, som sælges under mærkerne "Amicon" XM 50, PM 30 og UM 2. Membranen XM 300 tilbageholder stoffer, hvis molekylvægt er over 960,000, membranen XM 50 tilbageholder s,toffer, hvis molekylvægt er over 142,000, membranen PM 30 tilbageholder stoffer, hvis molekylvægt er over 64,000, og membranen UM 2 tilbageholder stoffer, hvis molekylvægt er over 12,400, 3) Den hydrofile polymeriserede gel er en gel af "Sepharese" 6B, (indregistreret varemærke).
4) Den hydrofile polymeriserede gel er en gel af "Sephadex" G 200. (indregistreret varemærke).
De langsomme a- og β-glycoproteiner, som fås ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, defineres ved deres molekylvægt, deres indhold af kombinerede hexoser og ved forholdet: kombinerede hexoser proteiner
Den meget rene fraktion, som fås ved denne fremgangsmåde, udgøres af glycoproteiner med en molekylvægt på eller over 10^ dalton, som indeholder mellem 60 og 65$ kombinerede hexoser og som har et forhold hexoser proteinsubstanser i nærheden af 7. Den indeholder normalt ca, 62$ kombinerede hexoser. Alligevel kan dette indhold på grund af vanskelighederne ved standardiseringen af målingen af sukkerarter variere mellem 60 og 65$» uden at det er muligt deraf at uddrage konklusioner vedrørende fraktionens renhed.
De langsomme a- og β-glycoproteiner, som fås ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er anvendelige som betændelseshæmmende stoffer og som stoffer til stimulering af organismens specifikke forsvar. De er særlig egnede til behandling af osteoartikulære lidelser, bronchitis og mikrobielle infektioner.
De kan benyttes som aktiv bestanddel i farmaceutiske præparater til indgift ad parenteral, perlingual, oral eller rektal vej eller via slimhinden eller i topisk applikation. Eksempelvis kan nævnes injicerbare opløsninger el- 4 146724 ler suspensioner, konditioneret i ampuller eller flasker med flere doser, sugetabletter, tabletter med enteralomhyl- ning, aerosoler, forstøvninger, creme, pomade, lotioner, stikpiller eller.vaginalstikpiller.
Den nyttige dosis kan variere i vid udstrækning afhængende af den terapeutiske indikation og indgiftsmåden,
Nedenstående eksempel illustrerer fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
Præparation af udgangsmateriale.
1) fremstilling af bakterieekstrakt.
Den valgte bakteriestamme (Klebsiella pneumoniae) dyrkes i en dyrkningsbeholder i et passende milieu. Efter afsluttet dyrkning underkastes kimene lyse i 8 dage indtil stabilitet af bakteriesuspensionen.
lysatet inddampes derpå og befries for lipider ved hjælp af en blanding af methylal og methanol i forholdet 4 il. Centrifugeringsbundstoffet vaskes med methanol, optages i vand og tilsættes formol. Bakterieekstrakten underkastes en sidste rensning ved fældning af sin vandige opløsning med blandingen af methylal og methanol og vaskning af udfældningen med methanol.
2) Egenskaber af bakterieekstrakten.
Den fremkomne ekstrakt er klar og opløselig i vandigt milieu, og den fælder ikke ud i et 10#'s (vægt/rumfang) trichloreddikesyremilieu, i 0,J N perehlorsyre eller i 3,6 M ammoniumsulfatopløsning ved en pH-værdi på 7,0 og ved 15°C.
En delvis udfældning opnås ved tilsætning af en opløsning af mangansulfat eller cetylpyridiniumchlorid (C.P.C.).
Hovedbestanddelene af bakterieekstrakten er blevet bestemt, og doseringerne har især angivet et indhold af kombinerede neutrale hexoser på 26-32# afhængende af chargerne samt 6,2# α-amineret nitrogen.
Eksempel.
Man opløser 2 g langsomme a- og β-glycoproteiner, opnået ved den ovenfor beskrevne arbejdsmåde ud fra en kul- 5 146724 tur af Klebsiella pneumoniae, i 400 ml vand. Man indfører denne opløsning i en dialysecelle, som er lukket med en membran af "Amicon" XM 300. Man bolder opløsningen under konstant omrøring og under svagt overtryk (0,7 bar). Man foretager dialyse, idet man stadig forskyder dialyseligevægten ved erstatning af det filtrerede rumfang. Man tilsætter til dette formål et lige så stort rumfang destilleret vand. Denne tilførsel sker kontinuerligt, og man betragter diafiltreringsoperationen som afsluttet, når det totale diafiltrerede rumfang er lig med eller større end 10 gange begyndelsesrumfanget. Resten i diafiltreringscellen samles og gelfiltreres på "Sepharose" 6B, og den fraktion, som ikke fikseres på gelen af "Sepharose" 6B, samles og tørres ved lyofilisering.
Man kan ligeledes arbejde i flere trin, idet man først udfører en diafiltrering i en dialysecelle med en membran af "Amicon" PM 30 og derefter i en anden dialysecelle med en membran af "Amicon" X 50 og endelig en tredie diafiltrering i en celle med en membran af "Amicon" XM 300. Der fås efter gelfiltrering på "Sepharose" 6B og lyofilisering af den ufikserede fraktion en fraktion, som er praktisk taget identisk med den, som fås efter en eneste diafiltrering på membran.
De således opnåede langsomme a- og β-glycoproteiner (tilbageholdt på en membran af XM 300 og ikke tilbageholdt men udelukket af en gel af "Sepharose" 6B) har en molekylvægt lig med eller større end 10^ dalton. Disse makromole- · kylære stoffer har en sammensætning i henseende til hexoser, som er bedre end sammensætningen af de mindre rene fraktioner, som fås ved fremgangsmåden ifølge det ovennævnte patentskrift , idet indholdet normalt ligger i nærheden af 62#.
Derimod er indholdet af α-amineret nitrogen lille (1,6#) og mindre end indholdet i de tidligere fremstillede frak·'· tioner.
De således opnåede langsomme a- og β-glycoprotei-ner dissocieres kun delvis af urinstof i 8 M opløsning eller af opløsninger af reduktionsmidler. Derimod kan mole- 6 146724 kylerne med lav molekylvagt, som skilles fra ved diafiltreringerne, reassocieres spontant, nårdissocieringsmidlet elimineres. Doger de således "de novo" opnåede makromo-lekyler forskellige fra de langsomme a- og β-glycoproteiner, som tilbageholdes på membranen af "Amicon" XM 300; hvis man underkaster de langsomme a- og β-glycoproteiner indvirkning af forskellige enzymer (pronase, trypsin, pan-creatin og hyaluronidase) efterfulgt af en fraktionering på membraner, konstaterer man, at Iran en lille del af makro-molekylerne er følsomme over for disse enzymer, og at den farmakologiske aktivitet ikke modificeres kendeligt.
Udbyttet ved rensningen ifølge den ovenfor beskrevne arbejdsmetode er 30-35De således opnåede langsomme ce- og β-glyeoproteiner indeholder ca. 62?6 kombinerede hex-oser og ca. 9fo proteinsubstans, og forholdet kombinerede hexoser proteinsubstanser ligger i nærheden af 7. Alligevel gøres fortolkningen vanskelig ved den omstændighed, at standardiseringen af orcinol-farvninger ikke sker med de faktisk i de langsomme a- og β-glycoproteiner indeholdte sukkerarter, men arbitrært ved hjælp af galactose og mannose.
Strukturundersøgelse♦
Sur hydrolyse under vakuum gør det muligt at konstatere de forskellige konstituenter af molekylerne erfter adskillelse på. celluloseplade. Man kan således konstatere en meget stor forskellighed i aminosyrer, hvilket adskiller de langsomme a- og β-glycoproteiner fra peptidoglyeaner-ne., samt osaminer. Man konstaterer tilstedeværelsen af glucose, galactose og mannose blandt sukkerarterne.
Tilstedeværelse af ribose konstateres ikke.
Efter alkalisk hydrolyse, som medfører itubrydning af O-osidylbindingerne, viser undersøgelse af de dannede fragmenter, at de lange glycankæder er podet på små proteinmasker.
Der foreligger således et molekyle med glycoprotein-karakter, hvad der påvises ved den makromolekylære natur, 7 146724 ved modstandsevnen mod proteolytiske enzymer og ved modstandsevnen mod lipolytiske enzymer (lipase og pancreatin). Det drejer sig desuden ikke om et mueopolysaccharid, . da det ikke fældes af cetylpyridiniumchlorid.
Elektroforese i tæthedsgradient ved en pH-værdi på 8,2 i nærværelse af en stødpude af natriumbarbital viser især en top for (α-β)-mobilitet.
farmakologisk undersøgelse af glycoproteinerne. a) Betændelseshæmmende virkning.
Til undersøgelse af den betændelseshæmmende virkning benytter man prøven med plantært ødem, som udløses ved lokal indsprøjtning af forskellige phlogogene, dvs. vævsforan-drende midler, som hver især fremkalder en lidt forskellig inflammatorisk manifestation.
Målingen af ødemet foretages ved plethysmometri før og efter indsprøjtningen af det phlogogene middel.
De undersøgte forbindelser indgives ad intraperi-toneal vej 1 time før indsprøjtningen af den irriterende forbindelse. Man bestemmer den aktive dosis i mg/kg, som bevirker en 40$‘s regression af ødemet i forhold til kontroldyr.
foreliggende resultater opnået med langsomme g- og β-gly-coproteiner fremstillet efter fremgangsmåden ifølge dansk, patentskrift nr. 129-.466
Phlogogene midler Aktiv dosis 40#
Oarragenin 0,05 mg Ag
Kaolin 0,5 mg Ag
Ovalbumin 1 mgAg
Hemolysin 0,2 mgAg
Sammenlignings result at er mellem de langsomme oc- og g-gly-coproteiner fremstillet efter fremgangsmåden ifølge dansk patentskrift nr, 229.^66 .og betegnet, glvcoproteiner A og de langsomme q- og g- glvooproteiner fremstillet vedfremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse og betegnet gl.vooproteiner B.
Man foretager en sammenligning for et podalt ødem 8 146724 frembragt af carragenin mellem glycoproteinerne A og gly-coproteinerne B og de mest almindeligt benyttede eksperimentelle betændelseshæmmende midler:
Betandelseshæmmende midler Aktiv dosis 40$
Indomethacin 2 mg/kg
Deltacortison 5 mg/kg
Phenylbutazon 50 mgAg
Glycoproteiner A 0,05 mgAg
Glycoproteiner B 0,025 mgAg
Glycoproteinerne A og navnlig glycoproteinerne B viser sig at være de kraftigste eksperimentelle betændelses-hæmmende stoffer. Denne betændelseshæmmende virkning karakteriseres desuden ved en polyvalena i henseende til virkning ved de fleste farmakologiske undersøgelser.
I modsætning til de andre eksperimentelle betændelse s hæmmende stoffer iagttager man hverken hos glyco-proteineme A eller hos glycoproteinerne B nogen ulceri-gen virkning.
b) Stimulering af de ikke-specifikke forsvarsmekanismer.
Denne stimulering undersøges i prøven med "clearance w af kul på mus, idet man går ud fra teknikken ifølge Halpern, som består i, at man i den oculære sinus indsprøjter en suspension af kolloidalt kulstof på dyret og i afhængighed af tiden vurderer kinetikken for den optrædende forsvinden af kullet i blodet, idet man foretager målinger af den optiske tæthed.
Forbindelserne indgives på dyret ad intraperito-neal vej 24 og 48 timer før forsøget, og resultaterne udtrykkes i procent aktivitet i forhold til kontroldyr, som alene har modtaget indsprøjtningen af kolloidalt kulstof: 146724 9
Stoffer Doser $ aktivitet Kontrol 8 min. efter 30 min. efter ___________ _indsprøjtning indsprøjtning
Glyeoprote- iner A 1 fflgAg 50$ 81$
Glycoproteiner B 1 mgAg 52$ 84$
Glycoproteiner A 0,5 mgAg 46$ 77$
Glypopreten- iner B 0,5 mgAg 45$ 82$
Disse resultater viser den intense stimulering, som fremkaldes af disse to stoffer på organismens for-svarsmekani smer.
c) Antibakteriel virkning af de langsomme g- og B- gly-coproteiner fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
De langsomme a- og β- glycoproteiner udløser en intens og varig antibakteriel beskyttelse i meget små doser. Denne virkning er polyvalent og optræder over for både grampositive og gramnegative kim. Virkningen er mere præventiv end kurativ.
Stofferne indgives på mus før indsprøjtningen af kimene.
I en dosis på 1 yAg sikrer glycoproteineme A og glycoproteineme B samme procentvise beskyttelse mod Klebsiella pneumoniae, nemlig 90$. I samme dosis og for de samme stoffer er beskyttelsen 30$ over for staphylo-coccer. I en dosis på 20 yAg ligger den på 77$ mod samme mikroorganisme.
Den antibakterielle virkning over for Klebsiella pneumoniae varierer i afhængighed af tidspunktet for indgiften af de langsomme a- og β- glycoproteiner, nemlig alt efter om de indgives 48 timer før infektionen, i infektionsøjeblikket eller 48 timer efter infektionen. Beskyttelsen er henholdsvis 100$, 95$ og 10$. De langsomme a- og β-glycoproteiner har altså en meget tydelig præventiv antibakteriel virkning.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR7205016 | 1972-02-15 | ||
| FR7205016A FR2171907B2 (da) | 1972-02-15 | 1972-02-15 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK146724B true DK146724B (da) | 1983-12-12 |
| DK146724C DK146724C (da) | 1984-05-28 |
Family
ID=9093508
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK80873A DK146724C (da) | 1972-02-15 | 1973-02-15 | Fremgangsmaade til fremstilling af langsomme alfa- og beta-glycoproteiner |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (2) | JPS4896792A (da) |
| BE (1) | BE795417A (da) |
| CA (1) | CA993389A (da) |
| CH (1) | CH564084A5 (da) |
| DE (1) | DE2307051C3 (da) |
| DK (1) | DK146724C (da) |
| ES (1) | ES411602A2 (da) |
| FR (1) | FR2171907B2 (da) |
| GB (1) | GB1412202A (da) |
| HU (1) | HU168849B (da) |
| NL (1) | NL174267C (da) |
| SE (1) | SE425833B (da) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH633188A5 (fr) * | 1978-05-26 | 1982-11-30 | Om Laboratoires Sa | Medicament contre des maladies infectieuses des voies respiratoires. |
| FR2462477A1 (fr) * | 1979-07-31 | 1981-02-13 | Cassenne Lab Sa | Nouvelles glycoproteines de klebsiella pneumoniae, procede d'obtention, application a titre de medicaments et compositions les renfermant |
| FR2490495A1 (fr) * | 1980-09-19 | 1982-03-26 | Roussel Uclaf | Nouvelles glycoproteines hydrosolubles immunostimulantes extraites de klebsiella pneumoniae, leur procede d'obtention, leur application a titre de medicaments et les compositions les renfermant |
| FR2490496A1 (fr) * | 1980-09-19 | 1982-03-26 | Roussel Uclaf | Nouvelles glycoproteines immunostimulantes extraites de klebsiella pneumoniae, leur procede d'obtention, leur application a titre de medicaments et les compositions les renfermant |
| FR2523154A1 (fr) * | 1982-03-09 | 1983-09-16 | Fabre Sa Pierre | Procede de preparation de proteoglycanes immunostimulants inducteurs d'interferon, proteoglycanes obtenus et medicaments les contenant |
| FR2574429B1 (fr) * | 1984-12-06 | 1987-12-11 | Roussel Uclaf | Acylglycannes extraits de klebsiella, leur procede d'obtention, leur application a titre de medicaments et les compositions les renfermant |
| IT1199301B (it) * | 1986-11-21 | 1988-12-30 | Belfanti Ist Sieroterap Milan | Lisato antigenico batterico,procedimento per la sua preparazione e composizioni farmaceutiche che lo contengono |
| FR2653014B1 (fr) * | 1989-10-17 | 1994-09-16 | Roussel Uclaf | Utilisation de glycoproteines extraites de bacteries gram (-) pour la fabrication de compositions cosmetiques ou dermatologiques et compositions les renfermant. |
| CH699786A2 (fr) * | 2008-10-31 | 2010-05-14 | Marie-Christine Dr Etienne | Médicament déstiné à traiter des infections. |
-
0
- BE BE795417D patent/BE795417A/xx unknown
-
1972
- 1972-02-15 FR FR7205016A patent/FR2171907B2/fr not_active Expired
-
1973
- 1973-02-13 HU HURO704A patent/HU168849B/hu not_active IP Right Cessation
- 1973-02-13 DE DE2307051A patent/DE2307051C3/de not_active Expired
- 1973-02-14 JP JP48017544A patent/JPS4896792A/ja active Pending
- 1973-02-14 CA CA163,703A patent/CA993389A/fr not_active Expired
- 1973-02-14 SE SE7302080A patent/SE425833B/xx unknown
- 1973-02-14 ES ES411602A patent/ES411602A2/es not_active Expired
- 1973-02-15 DK DK80873A patent/DK146724C/da not_active IP Right Cessation
- 1973-02-15 NL NLAANVRAGE7302132,A patent/NL174267C/xx active
- 1973-02-15 GB GB753073A patent/GB1412202A/en not_active Expired
- 1973-02-15 CH CH221773A patent/CH564084A5/xx not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-02-27 JP JP59034485A patent/JPS6028813B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2171907A2 (da) | 1973-09-28 |
| DE2307051C3 (de) | 1980-06-19 |
| CA993389A (fr) | 1976-07-20 |
| NL174267C (nl) | 1984-05-16 |
| JPS4896792A (da) | 1973-12-10 |
| FR2171907B2 (da) | 1975-04-25 |
| BE795417A (fr) | 1973-08-14 |
| GB1412202A (en) | 1975-10-29 |
| ES411602A2 (es) | 1976-03-01 |
| HU168849B (da) | 1976-07-28 |
| JPS59219236A (ja) | 1984-12-10 |
| DK146724C (da) | 1984-05-28 |
| CH564084A5 (da) | 1975-07-15 |
| DE2307051A1 (de) | 1973-08-23 |
| SE425833B (sv) | 1982-11-15 |
| NL7302132A (da) | 1973-08-17 |
| JPS6028813B2 (ja) | 1985-07-06 |
| DE2307051B2 (de) | 1979-10-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Goebel et al. | Studies on the flexner group of dysentery bacilli: I. The specific antigens of Shigella paradysenteriae (Flexner) | |
| Swann et al. | Determination of the hexosamine content of macro-molecules with manual and automated techniques using the p-dimethylaminobenzaldehyde reaction | |
| Woodin | The corneal mucopolysaccharide | |
| Mahieu et al. | Chemical structure of tubular and glomerular basement membranes of human kidney: Isolation, purification, carbohydrate and amino acid composition | |
| JPS6227402A (ja) | グリコサミノグリカンの硫酸化方法、該方法によつて得られる新規グリコサミノグリカン及びその生物学的適用 | |
| JPH0657721B2 (ja) | 医薬および食品添加物として有用な、特に植物から抽出された多糖類 | |
| US10870711B2 (en) | Process for the preparation of polysaccharides | |
| Bray et al. | Chemistry of tissues: 2. Polysaccharides showing blood group A-specificity and the nature of the constituent units of the stable carbohydrate residue of the A substance from pepsin | |
| PT99671B (pt) | Processo para a preparacao de heparosanos-n,o-sulfatados e de composicoes farmaceuticas que os contem | |
| FI74474B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya, ur klebsiella pneumoniae extraherade glykoproteiner. | |
| DK146724B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af langsomme alfa- og beta-glycoproteiner | |
| JPH07215990A (ja) | フコイダンオリゴ糖組成物 | |
| Holdsworth | The isolation and properties of intrinsic factor and vitamin B12 binding substances from pig pylorus | |
| Berenson et al. | Connective tissue macromolecular changes in rats with experimentally induced diabetes and hyperinsulinism | |
| BALAZS et al. | Dyebinding and mucopolysaccharide content in connective tissue | |
| US3200110A (en) | Process for the preparation of laminarin sulfates | |
| IE46195B1 (en) | Microbial fractions | |
| DE2701890A1 (de) | Alpha-amylase-inhibitor aus einem streptomyceten und verfahren zu seiner gewinnung | |
| KR910009162B1 (ko) | 폐염 간균으로부터 추출한 면역-자극아실당 단백질의 제조방법 | |
| JP2002516087A (ja) | 幾つかの重篤な疾患の治療のための医薬組成物を調製するための修飾されたリゾチームｃの使用 | |
| GB2168365A (en) | Acylglycans extracted from klebsiella | |
| Johansen | Physiochemical investigations on two unusual sialic acid-rich mucoids from the intestinal tract of patients with fibrocystic disease of the pancreas | |
| EP0493494A1 (de) | Neue proteine geeignet zur bekämpfung von krankheiten sowie zum schutz von weidevieh gegen zecken | |
| JPH0347200A (ja) | マカラスムギ由来の糖タンパク質、その製造法及びそれを含有する免疫調節剤 | |
| JPH0232026A (ja) | 抗レトロウイルス剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |