DE81237T1 - Gen-verbindungsverfahren und damit hergestellte produkte. - Google Patents

Gen-verbindungsverfahren und damit hergestellte produkte.

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DE81237T1
DE81237T1 DE198282111329T DE82111329T DE81237T1 DE 81237 T1 DE81237 T1 DE 81237T1 DE 198282111329 T DE198282111329 T DE 198282111329T DE 82111329 T DE82111329 T DE 82111329T DE 81237 T1 DE81237 T1 DE 81237T1
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DE
Germany
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plasmid
vector
recombinant
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chromosomal dna
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DE198282111329T
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Ronald H. Ann Arbor Michigan 48104 Olsen
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Microlife Genetics Inc
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Microlife Genetics Inc
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Claims (18)

-1- Europäische Patentanmeldung 82 111 329.7 MICROLIFE GENETCIS, INC. (EP 856-602) Patentansprüche
1. Verfahren zum Spleißen von Genen, wobei chromosomale DMA teilweise und zufällig mit einem Restriktionsen-
zym in Fragmente geschnitten und in einen geschnittenen Vektor gespleißt wird, wodurch die chromosomalen DNA-Fragmente mit dem Vektor verbunden werden, um ein rekombinantes Plasmid zu bilden, und das Verfahren die
folgenden Schritte enthält: 25
(a) mechanisches Fragmentieren konzentrierter chromosomaler DNA in eine Vielzahl von Fragmenten zufällig variierender Länge und
(b) teilweises Schneiden mit einem Restriktionsenzym
und Verbinden der mechanisch fragmentierten und geschnittenen chromosomalen DNA mit dem geschnittenen Vektor, um eine Plasmid-Bank mit rekombinanten Plasmiden variierender Größe herzustellen.
2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei der Vektor ein Abkömmling des in dem Stamm NRRL-B-12124 enthaltenen PlasmidspR0i600 ist.
3- Verfahren nach Anspruch 1, wobei der Vektor das in dem Stamm NRRL-B-12125 enthaltene Plasmid pROi6O1, in dem Stamm NRRL-B-12126 enthaltene Plasmid pROi6i3 oder in dem Stamm NRRL-B-12127 enthaltene Plasmid pROi6i4 ist.
k. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die chromosomale DNA aus einem Pseudomonas geerntet wird und der Vektor ein Abkömmling des in dem Stamm NRRL-B-12124 enthaltenen Plasmids pROi6OO ist.
5. Verfahren nach Anspruch 4, wobei die chromosomale DNA aus Pseudomonas aeruginosa geerntet wird.
6. Verfahren nach Anspruch 1, wobei das Restriktionsenzym eine Endonuclease, ausgewählt aus BamHI, Hindlll Sail, Pstl und BgIII ist.
7- Verfahren nach Anspruch 1, wobei das mechanische Frag-
rnentieren unter Verwendung eines Vortex-Mixers durchgeführt wird .
8. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die chromosomale DNA
in Segmente geschnitten wird, die eine durchschnittli ehe Länge von
ton aufweisen.
g g ,
nr - C
ehe Länge von zwischen etwa 10 χ 10 und 20 χ 10 DaI
9- Verfahren nach Anspruch 1, wobei das Fragmentieren
durch Anwendung von Scherkräften auf die chromosoma-30
len DNA-Fragmente erfolgt.
10. Verfahren nach Anspruch 1, wobei das Fragmentieren in Anwesenheit von Lysozym, Detergenz und einem Chelatbildner durchgeführt wird.
11. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die rekombinanten Plasmide in einen Empfänger-Mikroorganismus transformiert werden und wobei die Selektion nach einem be-
besonders geeigneten, auf der chromosomalen DNA liegenden Genmarkerdurchgeführt wird.
12. Konservierte Plasmid-Bank mit rekombinanten Plasmiden, die geeignet für die Transformation in Bakterien und zur Selektion nach speziellen, rekombinanten Plasmiden sind, wobei die Plasmid-Bank mechanisch fragmentierte, chromosomale DNA-Fragmente von vielfachen, zufällig auftretenden Längen enthält, die eine durchschnittliehe Länge von zwischen 0,1 χ 10 und 20 χ 10 Dalton aufweisen und mit einem Vektor rekombiniert sind, und die Plasmide zur Transformation in Bakterien geeignet sind und einen mutierten Genmarker tragen, der Selektion erlaubt.
13- Rekombinantes Plasmid nach Anspruch 12, wobei die Plasmid-Bank ein Konzentrat ist, das mindestens etwa 100 verschiedene rekombinante Plasmide in Mischung
enthält.
20
14. Rekombinantes Plasmid nach Anspruch 12, wobei die Plasmid-Bank dadurch konserviert wird, daß sie in Anwesenheit eines Gefrier-Stabilisators gefroren wird.
15- Rekombinantes Plasmid nach Anspruch 14, wobei der Gefrier-Stabilisator eine Mischung aus 2-Amino-2-hydroxymethyl-1,3-propandiol und Dinatrium-Sthylendia- ' min-tetraessigsäure mit einem pH-Wert von etwa 8 ist.ι
16. Bakterieller Stamm, der verschiedene rekombinante Plasmide enthält, die durch das Verfahren nach Anspruch 1 hergestellt wurden.
17. Bakterieller Stamm, der verschiedene rekombinante
Plasmide enthält, die durch das Verfahren nach Anspruch 1 hergestellt wurden, wobei der Vektor ein Abkömmling des Plasmids pR0i600 ist.
18. Bakterieller Stamm, der verschiedene rekombinante Plasmide enthält, die durch das Verfahren nach Anspruch 1 hergestellt wurden, wobei der Vektor ausgewählt wird aus den Plasmiden pROi6O1, enthalten in dem Stamm NRRL-B-12125, pROi6i3, enthalten in dem Stamm NRRL-B-12126 und pROi6i4, enthalten in dem Stamm NRRL-B-12127-
DE198282111329T 1981-12-09 1982-12-07 Gen-verbindungsverfahren und damit hergestellte produkte. Pending DE81237T1 (de)

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EP0081237A2 (de) 1983-06-15
US4508823A (en) 1985-04-02
EP0081237A3 (de) 1984-07-04

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