DE69935331T2

DE69935331T2 - Verfahren und verbindungen zur behandlung der depression

Info

Publication number: DE69935331T2
Application number: DE69935331T
Authority: DE
Inventors: Alan Salt Lake City MUELLER; Scott Salt Lake City MOE; Manuel Sandy BALANDRIN
Original assignee: NPS Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Shire NPS Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1998-07-13
Filing date: 1999-07-12
Publication date: 2007-10-31
Anticipated expiration: 2019-07-13
Also published as: EP1096926A2; US20040039014A1; DE69935331D1; CA2336962A1; WO2000002551A3; ATE355054T1; AU4991999A; AU771252B2; EP1096926B1; ES2283122T3; WO2000002551A2

Description

Die Anmeldung nimmt die Priorität der Provisional-Anmeldung mit der Seriennummer 60/092,546 in Anspruch.
Die Erfindung betrifft die Verwendung von Verbindungen zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung der Depression. Insbesondere sind die Verbindungen an Monoamin-Wiederaufnahmestellen, wie z. B. der Serotonin-Wiederaufnahmestelle, und am NMDA-Rezeptor aktiv.
Die folgende Beschreibung stellt eine Zusammenfassung von Informationen bereit, die für die vorliegende Erfindung relevant sind. Es ist kein Zugeständnis, dass jedwede hierin gegebene Information für die vorliegende beanspruchte Erfindung Stand der Technik darstellt, noch dass eine der Veröffentlichungen, auf die direkt oder indirekt Bezug genommen wird, für die vorliegende Erfindung Stand der Technik darstellt.
Die Depression ist eine häufige Krankheit, die mit einer wesentlichen Morbidiät und Mortalität einhergeht. Eine schwere Depression ist durch Gefühle von Verzweiflung, intensiver Traurigkeit, geistiger Verlangsamung, Konzentrationsverlust, Pessimismus, Rastlosigkeit und Minderwertigkeitsgefühlen gekennzeichnet. Physikalische Veränderungen, die mit der Depression einhergehen können, insbesondere bei der schweren oder "melancholischen" Depression, schließen Schlaflosigkeit oder Schläfrigkeit; Appetitlosigkeit und Gewichtsverlust (oder manchmal Überessen); weniger Energie und Libido; und die Zerrüttung der normalen zirkadianen Rhythmen der Aktivität, Körpertemperatur und verschiedener endokriner Funktionen ein. (Baldessarini, in Goodman & Gilman's THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, 9. Ausg. Kap. 19; McGraw-Hill, 1996.)
Es ist bekannt, dass Verbindungen, die die Wiederaufnahme von Monoaminen, wie z. B. Serotonin blockieren (Serotonin-selektive Wiederaufnahmestellen-Inhibitoren oder SSRIs), eine antidepressive Wirkung besitzen (US-Pat. Nr. 4,314,081 und US-Pat. Nr. 4,626,549, Molley und Schmiegel). Mehrere Beweisketten legen auch nahe, dass NMDA-Rezeptorantagonisten, die in mehreren Tiermodellen eine funktionale antidepressive Wirkung aufweisen (Skolnick, P., Herausgeber, "Antidepressant: New Pharmacological Strategies", National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1998), einen nützlichen Ansatz zur Behandlung der Depression bereitstellen können.
Vor der vorliegenden Erfindung wurde allerdings nicht erkannt, dass Verbindungen, die sowohl an den Monoamin-Wiederaufnahmestellen, einschließlich der Serotonin-Wiederaufnahmestelle, als auch an dem N-Methyl-D-Aspartat-(NMDA)-Rezeptor aktiv sind, und die Verwendung derartiger multiaktiver Verbindungen zur Behandlung der Depression und anderer Störungen von Nutzen sein würden.
Die vorliegende Erfindung betrifft Verbindungen, die sowohl an der Serotonin-Wiederaufnahmestelle als auch dem N-Methyl-D-Aspartat-(NMDA)-Rezeptor aktiv sind ("multiaktive Verbindungen"), und die Verwendung derartiger Verbindungen zur Behandlung der Depression.
Die Fähigkeit der multiaktiven Verbindungen, sowohl an der Serotonin-Wiederaufnahmestelle als auch dem NMDA-Rezeptor wirksam zu sein, erhöht ihre Wirksamkeit anstatt sie zu verringern. Im Allgemeinen ist eine starke Aktivität an der Serotonin-Wiederaufnahmestelle bevorzugt, während eine mittlere Aktivität an dem NMDA-Rezeptor bevorzugt ist. Eine zu starke Aktivität an dem NMDA-Rezeptor ist aufgrund der möglichen PCP-ähnlichen Nebenwirkungen weniger bevorzugt. Die Aktivität an der Serotonin-Wiederaufnahmestelle und dem NMDA-Rezeptor kann unter Einsatz von auf dem Fachgebiet bekannten Verfahren gemessen werden.
Beispiele für Assays, die zur Messung der Aktivitäten der Serotonin-Wiederaufnahmestelle und des NMDA-Rezeptors verwendet werden können, schließen den "Serotonin-Wiederaufnahme-Hemmassay" oder "SSRI-Assay", den "NMDA-Assay" und den [³H]MK-801-Bindungsassay ein, die in Beispiel 1 beschrieben sind. Bevorzugte Verbindungen weisen an der Serotonin-Wiederaufnahmestelle eine durch den Serotonin-Wiederaufnahme-Hemmassay bestimmte IC₅₀ auf, die kleiner oder gleich etwa 100 nM, kleiner oder gleich etwa 10 nM oder kleiner oder gleich etwa 1 nM ist.
Bevorzugte Verbindungen weisen ferner am NMDA-Rezeptor eine durch den NMDA-Assay bestimmte IC₅₀ auf, die zwischen etwa 50 nM und etwa 1 μM liegt. Stärker bevorzugt beträgt die IC₅₀ am NMDA-Rezeptor etwa 100 nM bis etwa 800 nM; und noch stärker bevorzugt etwa 500 nM.
Die Erfindung wird in den folgenden Punkten zusammengefasst:

1. Verwendung einer Verbindung der folgenden chemischen Struktur:
wobei jedes X unabhängig voneinander aus -F, -Cl, -OCF₃ oder -CF₃ ausgewählt ist; Ar¹ und Ar² jeweils unabhängig voneinander aus Phenyl, Naphthyl, Thiofuranyl, Tetrahydronaphthyl, Furanyl, Tetrahydrofuranyl, Pyridyl, Chinolinyl, Isochinolinyl, Tetrahydrochinolinyl, Tetrahydroisochinolinyl, Cyclohexyl, Cycloheptyl und Cyclopentyl ausgewählt sind; jeder Rest R¹ -H ist; jeder Rest R² -H ist; ein Rest R³ -H ist und der andere Rest R³ entweder -H oder -CH₃ ist; jedes m gleich 1 ist; mit der Maßgabe, dass, wenn ein Rest R³ -H ist und der andere Rest R³ -CH₃ ist, beide X_m nicht 4-Cl sind; oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon; zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Depression bei einem Patienten.
2. Verwendung einer Verbindung der chemischen Struktur:
wobei X¹ entweder -Br, -Cl, -F, -I, -CF₃, Alkyl, -OH, -OCF₃, -O-Alkyl oder -O-Acyl ist; X² entweder -Br, -Cl, -F, -I, -CF₃, Alkyl, -OH, -OCF₃, -O-Alkyl oder -O-Acyl ist; und R³ entweder -H oder -CH₃ ist; oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon; zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Depression bei einem Patienten.
3. Verwendung nach Punkt 2, wobei X¹ -F, -Cl, -OCF₃ oder -CF₃ ist; und X² entweder 2-OCH₃, 2-CH₃, 3-F, 3-CF₃ oder 4-CF₃ ist.

Mit "Alkyl" ist ein verzweigter, geradkettiger oder cyclischer Kohlenwasserstoff gemeint, der 1 bis 6 Kohlenstoffatome, vorzugsweise 1 bis 4 Kohlenstoffatome enthält. Beispiele für Alkyl schließen Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, sek.-Butyl, Isobutyl, tert.-Butyl, 2-Methylpentyl, Cyclopropylmethyl und Cyclobutylmethyl ein. Vorzugsweise ist das Alkyl verzweigt oder geradkettig.
Mit "Hydroxyalkyl" ist ein vorstehend definierter Alkylrest gemeint, der mit einer Hydroxylgruppe substituiert ist.
Mit "Alkylphenyl" ist ein vorstehend definierter Alkylrest gemeint, der mit einer Phenylgruppe substituiert ist.
Mit "Acyl" ist ein Rest -C(O)R gemeint, wobei R -H oder Alkyl, wie vorstehend definiert, ist, wie z. B. Formyl, Acetyl, Propionyl oder Butyryl; oder R -O-Alkyl ist, wie z. B. in Alkylcarbonaten, oder R N-Alkyl ist, wie z. B. in Alkylcarbamaten.
Verschiedene Beispiele sind hier beschrieben. Diese Beispiele sollen die beanspruchte Erfindung keinesfalls einschränken.
Weitere Merkmale und Vorteile der Erfindung werden aus der Beschreibung der Erfindung, den Beispielen und den Ansprüchen ersichtlich.
Die vorliegende Erfindung betrifft Verbindungen, die sowohl an der Serotonin-Wiederaufnahmestelle als auch dem NMDA-Rezeptor aktiv sind, und die Verwendung derartiger Verbindungen zur Behandlung der Depression. Wie in den nachstehend gegebenen Beispielen gezeigt ist, können solche Verbindungen ferner eine wesentliche Aktivität an anderen Stellen, wie z. B. an der Dopamin-Wiederaufnahmestelle und der Norepinephrin-Wiederaufnahmestelle, aufweisen.
Verbindungen der Struktur I
Die Verbindungen der Struktur I sind wie folgt:
wobei jedes X unabhängig voneinander entweder -F, -Cl, -OCF₃ oder -CF₃ ist;
Ar¹ und Ar² jeweils unabhängig voneinander aus Phenyl, Naphthyl, Thiofuranyl, Tetrahydronaphthyl, Furanyl, Tetrahydrofuranyl, Pyridyl, Chinolinyl, Isochinolinyl, Tetrahydrochinolinyl, Tetrahydroisochinolinyl, Cyclohexyl, Cycloheptyl und Cyclopentyl ausgewählt sind; vorzugsweise sind Ar¹ und Ar² unabhängig voneinander Naphthyl oder Phenyl; stärker bevorzugt ist mindestens ein Ar¹ und Ar² Phenyl; und stärker bevorzugt sind sowohl Ar¹ als auch Ar² Phenyl;
jeder Rest R¹ -H ist;
jeder Rest R² -H ist;
ein Rest R³ -H ist und der andere Rest R³ entweder -H oder -CH₃ ist; und m gleich 1 ist;
mit der Maßgabe, dass, wenn ein Rest R³ -H ist und der andere Rest R³ -CH₃ ist, beide X_m nicht 4-Cl sind;
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Substitutionen sowohl am oberen als auch am unteren Phenylring der Struktur I sind zur Bereitstellung der Aktivität der Serotonin-Wiederaufnahmestelle und des NMDA-Rezeptors nützlich. Die Auswirkung der unterschiedlichen Substitutionsmuster ist in den in Beispiel 1 angegebenen Daten gezeigt.
Eine Ausführungsform wird wie folgt durch die Verbindungen der Struktur IV bereitgestellt: Struktur IV
wobei X¹ entweder -Br, -Cl, -F, -I, -CF₃, Alkyl, -OH, -OCF₃, -O-Alkyl oder -O-Acyl ist; vorzugsweise X¹ entweder -F, -Cl, -OCF₃ oder -CF₃ ist; und stärker bevorzugt X¹ -F ist;
X² entweder -Br, -Cl, -F, -I, -CF₃, Alkyl, -OH, -OCF₃, -O-Alkyl oder -O-Acyl ist; vorzugsweise X² unabhängig entweder -F, -Cl, -OCH₃, -CH₃, -OCF₃ oder -CF₃ ist; stärker bevorzugt X² entweder 2-OCH₃, 2-CH₃, 3-F, 3-CF₃ oder 4-CF₃ ist; und
der Rest R³ entweder -H oder -CH₃ ist;
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Bestimmte Verbindungen sind nachstehend in der Tabelle I dargestellt. Beispiele für bestimmte antidepressive Verbindungen sind in der Tabelle II gezeigt.
Die Verbindungen 20, 60 und 142 können in der vorliegenden Erfindung verwendet werden.
Tabelle I
Die oberen Zahlen für 5-HT (Serotonin-Assay), NE (Norepinephrin-Assay) und DA (Dopamin-Assay) beziehen sich auf die durchschnittliche Hemmung in % (±Std.Abw.) bei 100 nM (ausgenommen, wo K_i-Werte (μM) angegeben sind).
Die unteren Zahlen für 5-HT, NE und DA beziehen sich auf durchschnittliche Hemmung in % (±Std.Abw.) bei 10,0 μM (ausgenommen, wo K_i [μM] Werte angegeben sind). Tabelle II

Die oberen Zahlen für 5-HT (Serotonin-Assay), NE (Norepinephrin-Assay) und DA (Dopamin-Assay) beziehen sich auf die durchschnittliche Hemmung in % (±Std.Abw.) bei 100 nM.
Die unteren Zahlen für 5-HT, NE und DA beziehen sich auf die durchschnittliche Hemmung in % (±Std.Abw.) bei 10,0 μM.
n.t. steht für nicht getestet.

Verabreichung
Die Verfahren und Verbindungen werden typischerweise in der Therapie für menschliche Patienten eingesetzt. Sie können jedoch auch zur Behandlung der Depression bei anderen Wirbeltieren, wie z. B. andere Primate, für den Sport genutzte Tiere und Haustiere, wie z. B. Pferde, Hunde und Katzen, eingesetzt werden.
Geeignete Darreichungsformen hängen zum Teil von der Verwendung oder dem Verabreichungsweg, zum Beispiel oral, transdermal, transmukosal oder über Injektion (parenteral), ab. Solche Darreichungsformen sollten der Verbindung das Erreichen der Zielzellen ermöglichen. Weitere Faktoren sind im Fachgebiet bekannt und schließen Überlegungen ein, wie z. B. Toxizität und Darreichungsformen, welche die Wirkungsentfaltung der Verbindung oder Zusammensetzung verzögern. Im Allgemeinen können Verfahren und Formulierungen in Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. Ausg., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990, gefunden werden.
Die Verbindungen können als pharmazeutisch verträgliche Salze formuliert werden. Pharmazeutisch verträgliche Salze stellen bei ihren verabreichten Mengen und Konzentrationen nicht toxische Salze dar. Die Herstellung derartiger Salze kann den pharmakologischen Einsatz erleichtern, indem die physikalischen Eigenschaften einer Verbindung verändert werden, ohne dass die Entfaltung ihrer physiologischen Wirkung unterbunden wird. Geeignete Veränderungen der physikalischen Eigenschaften schließen die Erniedrigung des Schmelzpunktes, um die transmukosale Verabreichung zu erleichtern, und die Erhöhung der Löslichkeit ein, um die Verabreichung von höheren Konzentrationen des Arzneimittels zu erleichtern.
Pharmazeutisch verträgliche Salze schließen Säureadditionssalze ein, wie z. B. diejenigen, die Sulfat, Chlorid, Hydrochlorid, Fumarat, Maleat, Phosphat, Sulfamat, Acetat, Citrat, Lactat, Tartrat, Methansulfonat, Ethansulfonat, Benzolsulfonat, p-Toluolsulfonat, Cyclohexylsulfamat und Chinat enthalten. Pharmazeutisch verträgliche Salze können aus Säuren, wie z. B. Chlorwasserstoffsäure, Maleinsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Sulfaminsäure, Essigsäure, Citronensäure, Milchsäure, Weinsäure, Malonsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Benzolsulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Cyclohexylsulfaminsäure, Fumarsäure und Chinasäure erhalten werden.
Pharmazeutisch verträgliche Salze schließen ferner basische Additionssalze, wie z. B. diejenigen ein, die Benzathin, Chloroprocain, Cholin, Diethanolamin, Ethylendiamin, Meglumin, Procain, Aluminium, Calcium, Lithium, Magnesium, Kalium, Natrium, Ammonium, Alkylamin und Zink enthalten, wenn saure funktionelle Gruppen, wie z. B. Carbonsäure oder Phenol vorhanden sind. Siehe zum Beispiel Remington's Pharmaceutical Sciences, 19. Ausg., Mack Publishing Co., Easton, PA, Band 2, S. 1457, 1995. Derartige Salze können unter Verwendung der entsprechenden korrespondierenden Basen hergestellt werden.
Pharmazeutisch verträgliche Salze können über Standardverfahren hergestellt werden. Zum Beispiel wird eine Verbindung in Form der freien Base in einem geeigneten Lösungsmittel, wie z. B. einem wässrigen oder wässrig-alkoholischen Lösungsmittel gelöst, das die entsprechende Säure enthält, und anschließend durch Eindampfen der Lösung isoliert. In einem weiteren Beispiel wird ein Salz hergestellt, indem die freie Base und die Säure in einem organischen Lösungsmittel umgesetzt werden.
Das pharmazeutisch verträgliche Salz der unterschiedlichen Verbindungen kann auch als ein Komplex vorliegen. Beispiele für Komplexe schließen den 8-Chlortheophyllin-Komplex ein (analog zu z. B. Dimenhydrinat: Diphenhydramin 8-Chlortheophyllin (1:1) Komplex; Dramamin) und verschiedene Cyclodextrin-Einschlusskomplexe ein.
Trägerstoffe oder Exzipienten können zur Herstellung von Arzneimitteln verwendet werden. Die Trägerstoffe oder Exzipienten können gewählt werden, um die Verabreichung der Verbindung zu erleichtern. Beispiele für Trägerstoffe schließen Calciumcarbonat, Calciumphosphat, verschiedene Zucker, wie z. B. Lactose, Glucose oder Saccharose, oder Arten von Stärke, Cellulosederivate, Gelatine, Pflanzenöle, Polyethylenglycole und physiologisch verträgliche Lösungsmittel ein. Beispiele für physiologisch verträgliche Lösungsmittel schließen sterile Lösungen von Wasser für Injektionszwecke (WFI), Kochsalzlösung und Dextrose ein.
Die Verbindungen können über unterschiedliche Wege, welche die intravenöse, intraperitoneale, subkutane, intramuskuläre, orale, transmukosale, rektale oder transdermale einschließen, verabreicht werden. Die orale Verabreichung ist bevorzugt. Für die orale Verabreichung können die Verbindungen zum Beispiel in herkömmlichen oralen Darreichungsformen, wie z. B. Kapseln, Tabletten, und Flüssigpräparate, wie z. B. Sirupe, Elixiere und konzentrierte Tropfen, formuliert werden.
Arzneimittel zur oralen Verwendung können zum Beispiel erhalten werden, indem die Wirkstoffe mit festen Exzipienten kombiniert werden, das resultierende Gemisch gegebenenfalls verrieben wird und das Granulatgemisch, falls gewünscht, nach Zugabe geeigneter Hilfsstoffe zu Tabletten oder Drageekernen verarbeitet wird. Geeignete Exzipienten sind insbesondere Füllstoffe, wie z. B. Zucker, einschließlich Lactose, Saccharose, Mannit oder Sorbit; Cellulosepräparate, zum Beispiel Maisstärke, Weizenstärke, Reisstärke, Kartoffelstärke, Gelatine, Tragacanth, Methylcellulose, Hydroxypropylmethylcellulose, Natriumcarboxymethylcellulose (CMC) und/oder Polyvinylpyrrolidon (PVP: Povidon). Falls gewünscht, können auch Sprengmittel zugegeben werden, wie z. B. das vernetzte Polyvinylpyrrolidon, Agar oder Alginsäure oder ein Salz davon, wie z. B. Natriumalginat.
Drageekerne werden mit geeigneten Überzügen bereitgestellt. Hierzu können konzentrierte Zuckerlösungen verwendet werden, die gegebenenfalls zum Beispiel Gummi Arabicum, Talkum, Polyvinylpyrrolidon, Carbopol-Gel, Polyethylenglycol (PEG) und/oder Titandioxid, Lacklösungen und geeignete organische Lösungsmittel oder Lösungsmittelgemische enthalten können. Farbstoffe oder Pigmente können den Tabletten oder Drageeüberzügen zur Identifizierung oder zur Kennzeichnung unterschiedlicher Kombinationen von Wirkstoffdosierungen zugesetzt werden.
Oral einsetzbare Arzneimittel schließen Push-Fit-Kapseln, die aus Gelatine hergestellt werden ("Gelcaps"), als auch weiche, versiegelte Kapseln ein, die aus Gelatine und einem Weichmacher, wie z. B. Glycerin oder Sorbit hergestellt werden. Die Push-Fit-Kapseln können die Wirkstoffe als Gemisch mit Füllstoffen, wie z. B. Lactose, Bindemitteln, wie z. B. Stärken, und/oder Schmiermitteln, wie z. B. Talkum oder Magnesiumstearat, und gegebenenfalls Stabilisatoren enthalten. In weichen Kapseln können die Wirkstoffe in geeigneten Flüssigkeiten, wie fette Öle, Flüssigparaffin oder flüssige Polyethylenglycole (PEGs), gelöst oder suspendiert sein. Zusätzlich können Stabilisatoren zugegeben werden.
Bei einer anderen Ausführungsform kann eine Injektion (parenterale Verabreichung) verwendet werden, z. B. intramuskulär, intravenös, intraperitoneal und/oder subkutan. Für die Injektion werden die Verbindungen der Erfindung in sterilen flüssigen Lösungen, vorzugsweise in physiologisch verträglichen Puffern oder Lösungen, wie z. B. Kochsalzlösung, Hank-Lösung oder Ringer-Lösung, formuliert. Zusätzlich können die Verbindungen in fester Form formuliert und unmittelbar vor der Verwendung erneut gelöst oder suspendiert werden. Lyophilisierte Formen können ebenfalls hergestellt werden.
Die Verabreichung kann ferner über transmukosale oder transdermale Mittel erfolgen. Für die transmukosale oder transdermale Verabreichung werden Penetrationsmittel in der Formulierung verwendet, die für die zu durchdringende Barriere geeignet sind. Derartige Penetrationsmittel sind auf dem Fachgebiet allgemein bekannt und schließen zum Beispiel für die transmukosale Verabreichung Gallensäuresalze und Fusidinsäurederivate ein. Zusätzlich können zur Erleichterung der Permeation Detergentien verwendet werden. Die transmukosale Verabreichung kann zum Beispiel über Nasensprays oder Suppositorien (rektal oder vaginal) erfolgen.
Die Mengen der verschiedenen zu verabreichenden Verbindungen können durch standardmäßige Verfahren bestimmt werden, wobei Faktoren, wie z. B. die IC₅₀ der Verbindung, die biologische Halbwertszeit der Verbindung, das Alter, die Größe und das Gewicht des Patienten und die mit dem Patienten in Verbindung stehende Störung berücksichtigt werden. Die Bedeutung dieser oder weiterer Faktoren ist dem Fachmann bekannt. Im Allgemeinen beträgt eine Dosis etwa 0,01 bis 50 mg/kg, vorzugsweise 0,1 bis 20 mg/kg des in Behandlung befindlichen Patienten. Mehrfache Dosen können eingesetzt werden.
Zusätzliche Beispiele sind nachstehend angegeben, die verschiedene Aspekte und Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung erläutern. Diese Beispiele sollen keinesfalls die offenbarte Erfindung einschränken, die durch die Ansprüche bestimmt wird.
Beispiel 1: Pharmakologische Wirkungen der verschiedenen Verbindungen
Dieses Beispiel erläutert die Aktivität von verschiedenen Verbindungen an verschiedenen Monoamin-Wiederaufnahmestellen und dem NMDA-Rezeptor. Die Tabelle I stellt die Aktivitäten bei unterschiedlichen Monoamin-Wiederaufnahmestellen und dem NMDA-Rezeptor und die Verbindungen dar, von denen eine wesentliche Aktivität an der Serotonin-Wiederaufnahmestelle und dem NMDA-Rezeptor erwartet wird. Die Tabelle II gibt die Aktivitäten von unterschiedlichen Antidepressiva an unterschiedlichen Monoamin-Wiederaufnahmestellen und dem NMDA-Rezeptor an.
MONOAMIN-TRANSPORTER-BINDUNGSASSAYS
Die Monoamin-Transporter-Bindungsassays (Wiederaufnahme-Hemmassays) wurden von NovaScreen unter Verwendung von standardmäßigen Radioliganden-Bindungsassays durchgeführt. Die Transporter-Bindungsassays werden nachstehend kurz beschrieben:
Serotonin-Wiederaufnahme-Hemmassay
Ratten-Vorderhirnmembranen wurden mit 0,7 nM [³H]Citalopram, N-Methyl, (70–87 Ci/mmol) in 50 mM Tris-HCl (pH-Wert 7,4), 120 mM NaCl und 5 mM KCl 60 Minuten bei 25 °C inkubiert. Das unspezifische Binden wurde unter Verwendung von 10 μM Clomipramin bestimmt, und Imipramin wurde als die Referenzverbindung für die positive Kontrolle verwendet. Die Reaktionen wurden durch rasche Vakuumfiltration auf Glasfaserfiltern beendet. Die gebundene Radioaktivität wurde unter Verwendung der Flüssigszintillationsspektrometrie bestimmt, und die experimentellen Werte wurden mit Kontrollwerten verglichen, um das Binden an die Serotonin-Transporterstelle zu bestimmen (basierend auf D'Amato, R.J. et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 242, 364–371, 1987, und Brown, N.L. et al., Eur. J. Pharmacol., 123, 161–165, 1986).
Norepinephrin-Wiederaufnahme-Hemmassay
Ratten-Vorderhirnmembranen wurden mit 1,0 nM [³H]Nisoxetin (60–85 Ci/mmol) in 50 mM Tris-HCl (pH-Wert 7,4), 300 mM NaCl und 5 mM KCl 4 h bei 0–4 °C inkubiert. Das unspezifische Binden wurde unter Verwendung von 1,0 μM Desipramin bestimmt, und Desipramin wurde als die Referenzverbindung für die positive Kontrolle verwendet. Die Reaktionen wurden durch rasche Vakuum-Filtration auf Glasfaserfiltern beendet. Die gebundene Radioaktivität wurde unter Verwendung der Flüssigszintillationsspektrometrie bestimmt, und die experimentellen Werte wurden mit Kontrollwerten verglichen, um das Binden an die Norepinephrin-Transporterstelle zu bestimmen (Raisman, R. et al., Eur. J. Pharmacol., 78, 345–351, 1982, und Langer, S.Z. et al., Eur. J. Pharmacol., 72, 423–424, 1981).
Dopamin-Wiederaufnahme-Hemmassay
Meerschweinchen-Striatum-Membranen wurden mit 2,0 nM [³H]WIN 35428 (60–87 Ci/mmol) in 50 mM Tris-HCl (pH-Wert 7,4), 120 mM NaCl 2 h bei 0–4 °C inkubiert. Das unspezifische Binden wurde unter Verwendung von 1,0 μM GBR-12909 bestimmt, und GBR-12909 wurde als die Referenzverbindung für die positive Kontrolle verwendet. Die Reaktionen wurden durch rasche Vakuumfiltration auf Glasfaserfiltern beendet. Die gebundene Radioaktivität wurde unter Verwendung der Flüssigszintillationsspektrometrie bestimmt, und die experimentellen Werte wurden mit Kontrollwerten verglichen, um das Binden an die Dopamin-Transporterstelle zu bestimmen (basierend auf Madras, et al., Molec. Pharmacol., 36, 518–524, 1989, und Javitch, J.J., et al., Molec. Pharmacol., 26, 35–44, 1984).
NMDA-REZEPTORASSAY
Reagenzien
Sämtliche Kulturmedien, Antibiotika und Enzyme, mit Ausnahme des fetalen Kälberserums (Hyclone Laboratories, Logan, UT), wurden von Sigma Chemical Co., St. Louis, MO bezogen. Fura-2/AM wurde von Molecular Probes, Eugene, OR, erhalten und wurde vor der Verwendung in Dimethylsulfoxid (DMSO) frisch zubereitet. Ionomycin (Calbiochem) wurde als eine Stammlösung in DMSO aufbewahrt. Nifedipin (Sigma) und Nimodipin (RBI) wurden in absolutem Ethanol gelöst. Die Endkonzentration von Ethanol in der Küvette überschritt nie 0,05 % und blieb ohne Auswirkung auf das basale cytosolische Calcium ([Ca²⁺]_i). Sämtliche anderen Agenzien wurden in Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS) gelöst und auf den pH-Wert 7,4 eingestellt.
Herstellung von Rattenkleinhirn-Körnerzellen-(RCGC)-Kulturen [Rat Cerebellar Granule Cell Cultures]
Ein einfaches und schnelles Verfahren zur Messung von [Ca²⁺]_i in großen homogenen Populationen von normalen Neuronen des zentralen Nervensystems ist ausführlich beschrieben worden (Parks et al., Modulation of N-methyl-D-aspartate receptor-mediated increases in cytosolic calcium in cultured rat cerebellar granule cells. Brain Res. 552: 13–22, 1991). Kurz dargestellt, werden Primärkulturen von Kleinhirn-Körnerneuronen aus acht Tage alten Ratten entnommen und auf mit Poly-L-Lysin beschichtete Aclar-Kunststoffquadrate plattiert. Die Kunststoffquadrate wurden in 12-Loch-Kulturplatten gestellt, und in jedes Loch wurden ~7,5 × 10⁵ Zellen gegeben. Die Kulturen wurden vor der Zugabe von Cytosinarabinosid (10 μM, Endkonzentration) in Eagle-Medium, enthaltend 25 mM KCl, 10 % fetales Kälberserum, 2 mM Glutamin, 100 μg/ml Gentamicin, 50 U/ml Penicillin und 50 μg/ml Streptomycin, 24 h bei 37 °C in einer feuchten Atmosphäre mit 5 % CO₂ in Luft aufbewahrt. Das Kulturmedium wurde nicht verändert, bis die Zellen 6–8 Tage nach dem Plattieren zur Fluoreszenzmessung verwendet wurden.
Messung des Calciums im Cytosol
Für die Messung von [Ca²⁺]_i wurden mit Zellen plattierte Aclar-Quadrate in einem HEPES-Puffer, enthaltend 125 mM NaCl, 5 mM KCl, 1,5 mM CaCl₂, 5,6 mM Glucose, 25 mM NaHEPES (pH-Wert 7,4), 0,1 % Rinderserumalbumin und 2 μM Fura-2/Acetoxymethylester (Fura-2/AM), 30–40 min bei 37 °C inkubiert ("Ca²⁺-freier" Puffer enthielt kein zugegebenes CaCl₂ und 30 μM EGTA). Anschließend wurden die Zellen mit demselben Puffer ohne Fura-2/AM gespült und bei Raumtemperatur aufbewahrt, bis sie zur Fluoreszenzmessung verwendet wurden, wobei die Aclar-Quadrate in Quarzküvetten übergeführt wurden, die 2 ml des HEPES-Puffers enthielten. Anschließend wurde die Küvette in einen thermostatisierten Halter, der mit einem Magnetrührer ausgestattet war, in einen speziell angefertigten Spektralfluorimeter (Biomedical Instrumentation Group, University of Pennsylvania, Philadelphia, PA) gestellt. Die Größe des Aclar-Kunststoffquadrats war so, dass es beim Platzieren an einer Diagonalen genau in die Küvette passte und deshalb über dem Rührstab eingehängt war. Die Fluoreszenz wurde unter Verwendung der Anregungs- und Emissionswellenlängen von 340 bzw. 510 nm gemessen. Die Amplitude der hervorgerufenen Fluoreszenzzunahme und die anschließende Hemmung wurden aufgezeichnet, und die Konzentration von [Ca²⁺]_i wurde unter Verwendung der folgenden Formel berechnet: [Ca2+] = Kd (F – Fmin)/(Fmax – F) (Gl. 1)wobei:

F: = Fluoreszenzamplitude, die zu einem bestimmten Zeitpunkt oder einer Konzentration an Verbindung hervorgerufen wurde;
F_min: = minimale Fluoreszenz, die nach der Zugabe einer Lösung von 2,5 M TRIS/0,3 M EGTA bestimmt wurde;
F_max: = maximale Fluoreszenz, die im Anschluss an die Zugabe von 7 mM Ionomycin in DMSO bestimmt wurde; und
K_d: = Dissoziationskonstante für den fluorimetrischen Indikator (für Fura-2 beträgt K_d = 224 nM).

Die Fluoreszenzsignale wurden durch Zugabe von Ionomycin (35–42 μM, Endwert) kalibriert, wodurch F_max und EGTA (30–12 mM, Endwert, pH-Wert 8,2) erhalten wurden, wodurch F_min erhalten wurde.
[³H]MK-801-BINDUNGSASSAY
Synaptische Plasmamembranen (SPMs) aus Rattenkortex wurden wie folgt präpariert. Isolierte Hirnkortizes aus männlichen und weiblichen Ratten wurden von Pel-Freez (Rogers, AZ) en gros bezogen und bei –80 °C gelagert. Die Kortizes aus 25 Ratten wurden aufgetaut und vereinigt. Die Gewebe wurden bei 4 °C mit einem Polytron (ESGE-Biohomogenisator, Nr. 133/1281-0) mit 10 Pulsen bei der höchsten Einstellung in 300 ml 0,32 M Saccharose, enthaltend 5 mM K-EDTA (pH-Wert 7,0), homogenisiert. Die resultierenden Homogenisate wurden 10 min bei 1.000 × g in einem T865 Rotor, UltraPro80 Sorvall Centrifuge, zentrifugiert. Der Überstand wurde entfernt und anschließend 30 min bei 30.000 × g zentrifugiert. Die resultierenden Pellets wurden in 250 ml 5 mM K-EDTA (pH-Wert 7,0) erneut suspendiert, 15 min auf Eis gerührt und anschließend 30 min bei 30.000 × g zentrifugiert. Die Membranen wurden gewaschen, indem sie in 500 ml 5 mM K-EDTA (pH-Wert 7,0) erneut suspendiert, 30 min bei 32 °C unter Rühren inkubiert und 30 min bei 100.000 × g zentrifugiert wurden. Das fertige Pellet wurde in 60 ml 5 mM K-EDTA (pH-Wert 7,0) erneut suspendiert und in Aliquoten bei –80 °C aufbewahrt. Der bei diesem Assay eingesetzte gründliche Waschvorgang wurde entwickelt, um die in dem Membranpräparat vorliegenden Konzentrationen von Glutamat und Glycin zu minimieren (Co-Agonisten an dem NMDA-Rezeptor-Ionophor-Komplex).
Am Tag des Assays wurden SPM-Aliquote aufgetaut und in 75 Volumina 5 mM K-EDTA, pH-Wert 7,0 erneut suspendiert. Die SPMs wurden 30 min mit 100.000 × g bei 4 °C zentrifugiert.
Die Verdrängungsstudien wurden wie folgt durchgeführt (Williams et al., Effects of polyamines on the binding of [³H]MK-801 to the NMDA receptor: pharmacological evidence for the existence of a polyamine recognition site. Mol. Pharmacol. 36: 575–581, 1989). Das SPM-Pellet wurde in Assaypuffer (30 mM EPPS, 1 mM K-EDTA, pH-Wert 7,0) von Polytron erneut suspendiert. Die MK-801-Bindungsassays wurden in einem Inkubationsvolumen von 0,5 ml, enthaltend 80–100 μg an Membranprotein pro Röhrchen, durchgeführt. Doppelte Proben wurden 2–3 h bei 25 °C mit < 5 nM [³H]MK-801, 100 μM Glycin, 100 μM L-Glutarninsäure und variierenden Konzentrationen an Verdrängungsmittel inkubiert. Das unspezifische Binden wurde durch Einbringen von 10 μM Ketamin oder MK-801 bestimmt. Das Binden wurde durch Zugabe des Gewebehomogenats gestartet. Der Assay wurde durch Zugabe von 4 ml eiskaltem Puffer, gefolgt von der Filtration über Glasfaserfilter (Schleicher & Schuell Nr. 30) auf einem Millipore 12-Loch-Filtrationsverteiler abgeschlossen. Die Filter wurden mit weiteren 3 × 4 ml eiskaltem Puffer (pH-Wert 7,0) gewaschen. Die Radioaktivität auf den Filtern wurde unter Verwendung der Scinti-Safe Szintillationsmischung der Marke Fisher gemessen. Die Proben wurden 45–60 min auf einer Schüttelplattform zur Solubilisierung der Radioaktivität geschüttelt. Die ³H-Zählung wurde in einem Beckman 6000IC LS Szintillationszähler mit 4 min pro Probe durchgeführt. Das Protein wurde bestimmt, wie von Lowry et al. (Protein measurement with the folin phenol reagent. J. Biol. Chem. 193: 265–275, 1951) beschrieben ist.
Beispiel 2: Antidepressive Wirkung
Antidepressive Wirkung der Verbindung 19
Die antidepressive Wirkung der Verbindung 19 wurde an Mäusen unter Verwendung des Schwanzaufhängetests gezeigt (Steru et al., The Automated Tail Suspension Test: A Computerized Device which Differentiates Psychotropic Drugs, Prog. Neuro-Psychopharmacol. Biol. Psychiatry 11: 659–671, 1987). In diesem Test wird das Tier 6 Minuten am Schwanz aufgehängt. Das Verhalten des Tieres wird unter Verwendung einer speziellen computerisierten Apparatur automatisch aufgezeichnet, die zwei Parameter misst, und zwar die Dauer der Bewegungslosigkeit und die Stärke der Bewegungen. Pro Dosisgruppe werden zehn Tiere untersucht. Als eine Referenzverbindung wird Desipramin eingesetzt. Dieser Test, der eine Variante des Verzweiflungsverhaltenstests darstellt, basiert auf der Annahme, dass Tiere, die einer unlösbaren aversiven Situation ausgesetzt sind, zwischen Phasen der Aktivität (Versuch zu entkommen) und Bewegungslosigkeit (Warten, "Verzweiflung") schwanken.
Die Verbindung 19 wurde in einer 5 % Akaziengummi-Suspension dispergiert und NMRI-CERJ-Mäusen 30 min vor dem Test mit einer Einzeldosis von 16 mg/kg intraperitoneal (i.p.) verabreicht. Diese Dosis der Verbindung 19 bewirkte eine Abnahme von 84 % der Dauer der Bewegungslosigkeit (p < 0,001) und eine 275 % Zunahme bei der Stärke der Bewegungen (p < 0,001) hervorgerufen. Im Vergleich erzeugte das Desipramin (32 mg/kg) als positive Kontrolle eine Abnahme von 63 % der Dauer der Bewegungslosigkeit (p < 0,001) und eine Zunahme von 71 % bei der Stärke der Bewegungen (p > 0,05).
Antidepressive Wirkung der Verbindung 60
Die antidepressive Wirkung der Verbindung 60 wurde in dem erzwungenen Schwimmtest (FST) an Maus und Ratte (Porsolt et al., Behavioral Despair in Mice: A Primary Screening Test for Antidepressants, Arch. Int. Pharmacodyn. 229: 327–336, 1977; Porsolt et al., Behavioral Despair in Rats: A New Model Sensitive to Antidepressant Treatments, Eur. J. Pharmacol. 47: 379–391, 1978) und an dem Maus-Schwanzaufhängetest (TST) gezeigt.
Für die erzwungenen Maus- und Rattenschwimmtests wurden männliche pathogenfreie NIH-Swiss-Mäuse (Harlan Sprague-Dawley) mit einem Gewicht zwischen 22–25 g und männliche pathogenfreie Sprague-Dawley-Ratten (Harlan Sprague-Dawley) mit einem Gewicht zwischen 320–350 g eingesetzt. Die Tiere wurden aus der Stallanlage in ihren eigenen Käfigen in den Testbereich verbracht, und vor dem Test erlaubt man ihnen, sich mindestens 1 Stunde an die neue Umgebung anzupassen. Den Mäusen wurde entweder Arzneimittel (Imipramin, 10 mg/kg i.p.; oder Verbindung 60, unterschiedliche p.o. oder i.p. Dosen) oder Kochsalzlösung verabreicht. 30 Minuten bis 24 Stunden später wurden die Mäuse einzeln 6 Minuten in Zylinder (Durchmesser: 10 cm; Höhe 25 cm) gesetzt, die 6 cm mit Wasser (22–25 °C) gefüllt waren. Die Zeitdauer der Bewegungslosigkeit während der letzten 4 Minuten des 6-Minuten-Tests wurde gewertet. Eine Maus wurde als bewegungslos dokumentiert, wenn sie bewegungslos umher trieb oder nur diejenigen Bewegungen ausführte, die zum Halten ihres Kopfes über Wasser erforderlich waren. Die Ergebnisse wurden als die Zeitdauer der Bewegungslosigkeit (Sekunden) ausgedrückt.
Der erzwungene Ratten-Schwimmtest wurde über zwei Tage durchgeführt. Am Behandlungstag 1 wurden die Ratten einzeln 15 Minuten in Zylinder (Durchmesser: 18 cm; Höhe 40 cm) gesetzt, die 15 cm tief mit Wasser (22–25 °C) gefüllt waren. Die Zeitdauer der Bewegungslosigkeit während der ersten 5 Minuten wurde bewertet. Nach dem Test wurden die Ratten mit Papiertüchern abgetrocknet und in Haltekäfige gesetzt. Fünf Minuten nach der Entnahme aus den Testzylindern erhielten die Tiere entweder Arzneimittel (Imipramin, 10 mg/kg i.p.; oder Verbindung 60, unterschiedliche p.o. Dosen) oder Kochsalzlösung (p.o.). Zehn Minuten später wurden die Ratten in ihre Behausungskäfige zurückgesetzt. Am Behandlungstag 2 erhielten die Tiere eine zweite Dosis an Arzneimittel oder Kochsalzlösung und wurden 1 Stunde später, wie vorstehend beschrieben, in die Testzylinder gesetzt. Die Zeitdauer der Bewegungslosigkeit während der ersten 5 Minuten-Periode wurde aufgezeichnet. Eine Ratte wurde als bewegungslos dokumentiert, wenn sie bewegungslos umher trieb oder nur diejenigen Bewegungen durchführte, die zum Halten ihres Kopfes über Wasser erforderlich waren. Die Ergebnisse wurden als eine Differenzwertung (Zeitdauer der Bewegungslosigkeit an Tag 1 minus Zeitdauer der Bewegungslosigkeit an Tag 2) ausgedrückt.
Für den Maus-Schwanzaufhängetest der mit der Verbindung 60 wurden männliche pathogenfreie C57BL/6-Mäuse (Harlan Sprague-Dawley) mit einem Gewicht zwischen 22–25 g eingesetzt. Die Tiere wurden aus der Stallanlage in ihren eigenen Käfigen in den Testbereich verbracht und vor dem Test erlaubt man ihnen, sich mindestens 1 Stunde an die neue Umgebung anzupassen. Den Mäusen wurde entweder Arzneimittel (Imipramin, 15 mg/kg i.p.; oder Verbindung 60, unterschiedliche p.o. Dosen) oder Kochsalzlösung verabreicht. Dreißig Minuten bis 24 h später wurden die Mäuse an der Kante eines Bretts 80 cm über dem Boden in dem Testraum mittels Klebeband aufgehängt, das etwa 1 cm von der Schwanzspitze angesetzt wurde. Die Zeitdauer der Bewegungslosigkeit wurde während einer Testperiode von 5 Minuten aufgezeichnet. Die Mäuse wurden nur dann als bewegungslos angesehen, wenn sie passiv und vollkommen bewegungslos da hingen. Die Ergebnisse wurden als die Zeitdauer der Bewegungslosigkeit (sec) ausgedrückt.
Bei dem erzwungenen Maus-Schwimmtest erzeugte eine Einzeldosis der Verbindung 60, 5 mg/kg p. o., eine zeitabhängige Verringerung der Dauer der Bewegungslosigkeit (Tabelle III), wobei der Peakeffekt 60 Minuten nach der Verabreichung erschienen ist. Bei oraler Verabreichung 60 Minuten vor dem Test erzeugte die Verbindung 60 eine dosisabhängige Verringerung der Dauer der Bewegungslosigkeit (Tabelle IV). Die Größenordnung der Antidepressiva-ähnlichen Wirkung, die von der Verbindung 60 erzeugt wurde, war der durch Imipramin, 10 mg/kg i.p. (Tabelle IV), hervorgerufenen ähnlich. Eine gleichartige Antidepressiva-ähnliche Wirkung wurde festgestellt, wenn die Verbindung 60 durch i.p. Injektion (Tabelle V) verabreicht wurde. Tabelle III. Verbindung 60 erzeugte eine zeitabhängige Verringerung der Dauer der Bewegungslosigkeit bei dem Maus-FST

Verbindung 60 wurde als eine Einzeldosis, 5 mg/kg p.o., verabreicht.
* p < 0,05 verglichen mit Kochsalzlösung-Kontrolle.

Verbindung 60 wurde als eine orale Einzeldosis 60 Minuten vor dem Test verabreicht.
Imipramin wurde als eine Einzeldosis, 10 mg/kg i.p., 30 Minuten vor dem Test verabreicht.
* p < 0,05 verglichen mit Kochsalzlösung-Kontrolle.

Verbindung 60 wurde als eine i.p. Einzeldosis 30 Minuten vor dem Test verabreicht-
Imipramin wurde als eine Einzeldosis, 10 mg/kg i.p., 30 Minuten vor dem Test verabreicht.
* p < 0,05 verglichen mit Kochsalzlösung-Kontrolle.

Bei oraler Verabreichung 1 Stunde vor dem Test erzeugte die Verbindung 60 bei dem erzwungenen Ratten-Schwimmtest eine dosisabhängige Antidepressiva-ähnliche Wirkung (Tabelle VI). Die Größenordnung dieser Wirkung war derjenigen ähnlich, die durch 30 Minuten vor dem Test verabreichtes Imipramin, 10 mg/kg i.p., hervorgerufen wurde. Tabelle VI. Verbindung 60 erzeugte eine dosisabhängige Antidepressiva-ähnliche Wirkung in dem Ratten-FST

In dem Maus-TST (Tabelle VII) erzeugte eine orale 5 mg/kg Einzeldosis der Verbindung 60 eine zeitabhängige Verringerung der Dauer der Bewegungslosigkeit, wobei der Peakeffekt 60 Minuten nach der Verabreichung auftrat. Bei oral verabreichter Einzeldosis 1 Stunde vor dem Test erzeugte die Verbindung 60 eine dosisabhängige Verringerung der Dauer der Bewegungslosigkeit in dem Maus-TST in zwei unabhängigen Experimenten (Tabellen VIII und IX). 30 Minuten vor dem Test verabreichtes Imipramin, 15 mg/kg i.p., wurde in einer dieser Studien als eine positive Kontrolle verwendet (Tabelle VIII). Tabelle VII. Verbindung 60 erzeugte eine zeitabhängige Verringerung der Dauer der Bewegungslosigkeit in dem Maus-TST

Verbindung 60 wurde als eine Einzeldosis, 5 mg/kg p.o., verabreicht.
Imipramin wurde als eine positive Kontrolle, 15 mg/kg i.p., 30 Minuten vor dem Test verabreicht.
* p < 0,05 verglichen mit Kochsalzlösung-Kontrolle.

Verbindung 60 wurde als eine orale Einzeldosis 60 Minuten vor dem Test verabreicht.
Imipramin wurde als eine Einzeldosis, 15 mg/kg i.p., 30 Minuten vor dem Test verabreicht.
* p < 0,05 verglichen mit Kochsalzlösung-Kontrolle.

Verbindung 60 wurde als eine orale Einzeldosis 60 Minuten vor dem Test verabreicht.
* p < 0,05 verglichen mit Kochsalzlösung-Kontrolle.

Beispiel 3: Synthese der Verbindungen
Die hier beschriebenen unterschiedlichen Verbindungen können unter Einsatz von auf dem Fachgebiet bekannten Verfahren hergestellt werden. Dieses Beispiel erläutert den Einsatz derartiger Verfahren für die Gewinnung verschiedener Arten von Verbindungen. Weitere hier beschriebene bestimmte Verbindungen können ohne weiteres unter Einsatz bekannter synthetischer Verfahren, einschließlich der Modifizierung des nachstehend beschriebenen Verfahrens erhalten werden.
Die Daten der Kapillargaschromatographie und der niedrigauflösenden Elektronenstoßmassenspektrometrie (EI-MS) wurden unter Verwendung eines Hewlett-Packard (HP) 5890 Serie II Gaschromatographen erhalten, der mit einem HP 5971 Serie massenselektiven Detektor gekoppelt war [Ultra-2 Ultra Performance Kapillarsäule (vernetztes 5 % PhMe-Silicon); Säulenlänge, 25 m; Säulen Innendurchmesser (i.d.), 0,20 mm; Helium-Fließgeschwindigkeit, 60 ml/min; Injektortemp., 250 °C; Temperaturprogramm, 20 °C/min von 125 auf 325 °C 10 min, anschließend 6 min bei 325 °C konstant gehalten]. Die Dünnschichtchromatographie wurde unter Verwendung von Analtech Uniplate 250-μm Kieselgel HF DC-Platten durchgeführt. UV-Licht in Verbindung mit Ninhydrin und Dragendorff-Sprühreagenzien (Sigma Chemical Co.) wurden zur Detektierung von Verbindungen auf den DC-Platten verwendet. Die in Reaktionen eingesetzten Reagenzien wurden von Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, WI, Sigma Chemical Co. (Saint Louis, MO), Fluka Chemical Corp. (Milwaukee, WI), Fisher Scientific (Pittsburgh, PA), TCI America (Portland, OR) oder Lancaster Synthesis (Windham, NH) bezogen.
Reaktionsschema 1: Synthese der Verbindung 60
Die Verbindung 60 wurde aus im Handel erhältlichen Ausgangsmaterialien in der folgenden vierstufigen Reaktionsabfolge synthetisiert. Das erste Zwischenprodukt auf diesem Syntheseweg, Ethyl-N-benzyl-N-methyl-3-aminopropionat, wurde durch eine konjugierte Addition von N-Benzylmethylamin an Ethylacrylat hergestellt. Die Esterfunktionalität des ersten Zwischenprodukts wurde anschließend mit zwei Äquivalenten von Grignard-Reagenz (hergestellt aus 1-Brom-3-fluorbenzol) umgesetzt, wodurch N-Benzyl-N-methyl-3-hydroxy-3-bis(3-fluorphenyl)-propylamin erhalten wurde. Das Grignard-Reaktionsprodukt wurde anschließend in einem Gemisch aus 6 M HCl/Essigsäure dehydratisiert, wodurch N-Benzyl-N-methyl-3,3-bis(3-fluorphenyl)-allylamin erhalten wurde. Die katalytische Hydrierung dieses Materials als sein Hydrochloridsalz in Ethanol über Pearlman-Katalysator [Pd(OH₂)/C] ergab nach Umkristallisation aus Essigsäureethylester farblose Nadeln der Verbindung 60 als Hydrochlorid.
Ethyl-N-benzyl-N-methyl-3-aminopropionat
N-Benzylmethylamin (100 ml, 94,0 g, 0,776 mol) wurde in einen 500-ml-Dreihalskolben gegeben, ausgestattet mit einem Thermometer, einem Rückflusskühler und einem 125-ml-Tropftrichter [gefüllt mit Ethylacrylat (88,3 ml, 81,5 g, 0,815 mol)]. Das Ethylacrylat wurde innerhalb eines Zeitraums von 80 Minuten dem gerührten Reaktionsgemisch zugetropft. Nach 18 h Rühren bei Raumtemperatur wurde das Produkt vakuumdestilliert und die Fraktion, die das Produkt enthielt, bei 78–95 °C (0,12–0,25 mm Hg) gewonnen (138 g, 80 % Ausbeute): Kp. 78–95 °C (0,12–0,25 mm Hg); DC, R_f = 0,23 [Hexan-EtOAc (5:1)], R_f = 0,57 [MeOH-CHCl₃ (100:5)]; GC, t_R = 6,06 min; EI-MS, 221 (M⁺); 206 (M-CH₃), 192 (M-C₂H₅), 176 (M-OC₂H₅), 144 (M-C₆H₅), 134 [CH₂N(CH₃)CH₂Ph], 120 [N(CH₃)CH₂Ph], 91 (C₇H₇), 77 (C₆H₅), 42 (CH₂CH₂N); ¹H-NMR (freie Base, CDCl₃) δ 1,25 ppm (t, J = 7,1, 3H, CH₂CH ₃), 2,20 (s, 3H, NCH ₃), 2,51 (t, J = 7,3, 2H, COCH ₂), 2,74 (t, J = 7,2, 2H, CH ₂N), 3,51 (s, 2H, NCH ₂Ph), 4,13 (q, J = 7,1, 2H, OCH ₂CH₃), 7,18-7,35 (m, 5H, ArH); ¹³C-NMR (freie Base, CDCl₃), δ 15,2 (CH₂ CH₃), 34,0 (COCH₂), 42,9 (NCH₃), 53,8 (NCH₂), 61,4 (OCH₂CH₃), 63,1 (CH₂Ph), 128,0 (CH), 129,2 (CH), 130,0 (CH), 139,9 (q), 173,7 (q).
N-Benzyl-N-methyl-3-hydroxy-3-bis(3-fluorphenyl)-propylamin-Hydrochlorid
Mg [51,5 g, 2,12 mol, Späne, gewaschen mit THF (2 × 300 ml)] und THF (2 L) wurden unter Stickstoff in einen 5-l-Vierhalsrundkolben gegeben. Ein Tropftrichter wurde mit 3-Bromfluorbenzol (unverdünnt, 392,8 g, 2,24 mol) befüllt. Ein Zwanzigstel des Bromids und anschließend ein Iodkristall wurden der Magnesiumsuspension zugegeben. Nach Anspringen der Grignard-Reaktion wurde anschließend das restliche 3-Bromfluorbenzol innerhalb eines Zeitraums von 50 min dem unter Rückfluss erhitzten Gemisch zugegeben. Die Reaktion wurde weitere 45 min unter Rückfluss erhitzt. Der unter Rückfluss erhitzten Lösung des Grignard-Reagenz wurde innerhalb eines Zeitraums von 20 min eine Lösung von Ethyl-N-benzyl-N-methyl-3-aminopropionat (187,5 g, 0,847 mol) in THF (100 ml) zugegeben. Nachdem die Zugabe des Esters abgeschlossen war, wurde die Reaktion 1 h unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurde die Reaktion in einem Eisbad abgekühlt. Gesättigtes NH₄Cl (wässr., 400 ml) und H₂O (400 ml) wurden zugegeben, und das Gemisch wurde in einen Scheidetrichter übergeführt. Die organische Phase wurde abgetrennt und die wässrige Phase einmal mit THF (400 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit ges. NaCl (wässr., 2 × 200 ml) gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄, wasserfrei), über Papier filtriert und unter Vakuum am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch 281,6 g (90 %) des Rohprodukts als ein orangefarbenes viskoses Öl erhalten wurden. Das Material (281,6 g, 0,766 mol) wurde in Acetonitril (1,4 L) gelöst. Dem gerührten Filtrat wurde konzentrierte Chlorwasserstoffsäure (65,0 ml, 0,786 mol, 12 M) zugegeben. Anschließend wurde das auskristallisierende Gemisch 17 h auf –20 °C gekühlt. Das Produkt wurde gewonnen, mit kaltem Acetonitril (800 ml) gewaschen und getrocknet, wodurch ein weißer Feststoff erhalten wurde, 235,6 g (69 % Ausbeute aus dem Ester).
Für analytische Zwecke wurde das Hydrochloridsalz durch Umkristallisation aus Acetonitril weiter gereinigt: Fp. 194–197 °C (unkorr.); DC, R_f = 0,23 [Hexan-EtOAc (5:1)], R_f = 0,85 [MeOH-CHCl₃ (100:5)], R_f = 0,72 [MeOH-CHCl₃ (100:3)]; GC, t_R = 10,93 min; MS, 367 (M⁺), 272 (M-C₆H₄F), 258 (M-CH₂Ph-H₂O), 219 [(C₆H₄F)₂CH], 148 [CH₂CH₂N(CH₃)CH₂Ph], 134 [CH₂N(CH₃)CH₂Ph], 91 (C₇H₇), 42 (CH₂CH₂N); ¹H-NMR (freie Base, CDCl₃) δ 2,18 (s, 3H, NCH ₃), 2,41 (m, 2H, CHCH ₂), 2,58 (m, 2H, CH ₂N), 3,42 (s, 2H, CH ₂Ph), 6,86 (dt, J, = 8,5, J₂ = 1,8, 2H, Ar-H), 7,18-7,30 (m, 10H, Ar-H), 8,33 (bs, 1H, OH); ¹³C-NMR (freie Base, CDCl₃) δ 35,6 (CHCH₂), 41,5 (CH₃, NCH₃), 54,3 (CH₂, CH₂N), 62,6 (CH₂, CH₂Ph), 113,1 (d, J = 23, CH, Ar-C_5,5'), 113,5 (d, J = 23, CH), 121,2 (d, J = 3, CH); 127,5 (CH), 128,5 (CH), 129,2 (CH), 129,5 (CH), 129,6 (CH), 137,0 (q), 150,2 (q), 162,8 (d, J = 243, q, Ar-C_3,3').
N-Benzyl-N-methyl-3-bis(3-fluorphenyl)-allylamin-Hydrochlorid
N-Benzyl-N-methyl-3-hydroxy-3-bis(3-fluorphenyl)-propylamin-Hydrochlorid (225,4 g, 0,559 mol), 6 M HCl (1392 ml) und Eisessig (464 ml) wurden in ein 5-l-Dreihalskolben gegeben, der mit einem mechanischen Hängerührer, einem Rückflusskühler und einem Thermometer ausgestattet war. Die Suspension wurde in einem Wasserbad (80–85 °C) erhitzt und 18 h gerührt. Nach 18 h Erhitzen wurde das Reaktionsgemisch in einem Eis/MeOH-Bad gekühlt. Essigsäureethylester (500 ml) wurde dem gekühlten Reaktionsgemisch zugegeben. Anschließend wurde dem gekühlten Gemisch NaOH (10 M, 1,7 l) innerhalb eines Zeitraums von 25 min mit einer solchen Geschwindigkeit zugegeben, dass die Temperatur unter 40 °C gehalten wurde. Das Gemisch wurde in einen 6-l-Scheidetrichter übergeführt. Die organische Phase wurde abgetrennt und die wässrige Phase mit Essigsäureethylester (2 × 500 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit gesätt. NaCl (wässr., 2 × 100 ml) gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄, 250 g), am Rotationsverdampfer eingeengt und anschließend unter Vakuum getrocknet, wodurch 185,6 g (95 % Ausbeute) der freien Base als flüssiges bräunlichfarbenes Öl erhalten wurden.
Das vorstehende Material wurde mit Hexan (1,5 L) gerührt. Die resultierende Lösung wurde über Papier filtriert. 4 M HCl in Dioxan (146 ml) wurde dem Filtrat innerhalb eines Zeitraums von 5 min unter Rühren zugetropft. Anschließend wurde das halbtransparente Lösungsmittel von dem hellgelbfarbenen halbfesten Niederschlag abdekantiert. Das rohe Hydrochloridsalz wurde in unter Rückfluss erhitztem Essigsäureethylester (600 ml) gelöst und filtriert. Anschließend wurde das Filtrat in einem Eisbad vollständig abgekühlt und Hexan (110 ml) langsam unter kräftigem Rühren zugegeben. Nach 2 h Kühlen in einem Eisbad füllte sich der ganze Kolben mit einem weißen kristallinen Feststoff. Das Material wurde auf einem Filtertrichter gewonnen, mit eiskaltem Hexan/Essigsäureethylester [(1:4), 400 ml] gewaschen und getrocknet, wodurch 128,7 g, 59,7 %, eines weißen Feststoffs erhalten wurden. Beim Stehenlassen fielen aus der Mutterlauge weitere 14,8 g eines weißlichen Feststoffs aus. Gesamtausbeute: 128,7 g + 14,8 g = 143,5 g (67 %). Fp. 141–142 °C (unkorr.); DC, R_f = 0,20 [Hexan-EtOAc (5:1)], R_f = 0,75 [MeOH-CHCl₃ (100:5)], R_f = 0,49 [MeOH-CHCl₃ (100:3)]; GC, t_R = 10,40 min; MS, 349 (M⁺), 330, 301, 281, 258 (M-CH₂Ph), 240, 229 [M-N(CH₃)CH₂Ph], 201, 183, 146, 133, 109, 91 (CH₂C₆H₅), 65, 42 (CH₂NHCH₃); ¹H-NMR (freie Base, CDCl₃) δ 2,20 ppm (s, 3H, NCH ₃), 3,08 (d, J = 6,8, 2H, CH ₂N), 3,47 (d, J < 1, 2H, CH ₂Ph), 6,29 (t, J = 6,8, 1H, CH), 6,85-7,04 (m, 6H, ArH), 7,19-7,35 (m, 7H, ArH).
N-Methyl-3,3-bis(3-fluorphenyl)-propylamin-Hydrochlorid
N-Benzyl-N-methyl-3-bis(3-fluorphenyl)allylamin-Hydrochlorid (120,0 g, 0,311 mol) wurde in abs. EtOH (1250 ml) gelöst. Pd(OH)₂/Aktivkohle (Fluka^®, ~20 % Pd, 10,0 g) wurde zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde unter einem kontinuierlichen Strom von Wasserstoffgas 18 h bei 25 °C gerührt (Atmosphärendruck). Anschließend wurde das Gemisch über Celite^®/Glasfritte filtriert, der Katalysator mit EtOH (2 × 50 ml) gewaschen und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgezogen, wodurch 95,4 g, 103 % des Rohprodukts erhalten wurden. Das Material wurde in rückflusskochendem Essigsäureethylester (300 ml) unter kräftigem Rühren gelöst und filtriert. Der Kolben wurde 2 h bei 25 °C stehen gelassen, wobei während dieser Zeit das Hydrochloridsalz als Nadeln auszukristallisieren begann. Anschließend wurde der Kolben gekühlt, das Produkt gewonnen, mit eiskaltem Essigsäureethylester (20 ml) gewaschen und getrocknet, wodurch 73,7 g (80 %) der Verbindung 60 als ein weißer kristalliner Feststoff erhalten wurden.
Fp. 129–130 °C; UV/Vis, ε = 2,1 × 10³ L·mol^–1·cm^–1 (264 nm, EtOH, 25 °C, linearer Bereich: 0,05–0,20 mg/ml); DC, R_f = 0,00 [Hexan-EtOAc (5:1)], R_f = 0,07 [MeOH-CHCl₃ (100:5)], R_f = 0,19 [MeOH-CHCl₃-NH₄OH (100:5:1)]; GC, t_R = 7,45 min; MS, 261 (M⁺), 229, 215, 201, 183, 164, 150, 138, 122, 101, 83, 75, 57, 42 [CH₂NHCH₃]; ¹H-NMR (HCl-Salz, CDCl₃ + 1 gtt MeOD) δ 2,56 ppm (m, 2H, NCH ₂), 2,60 (s, 3H, NCH ₃), 2,85 (t, J = 8,0, 2H, CHCH ₂), 4,11 (t, J = 8,0, 1H, CH), 6,87-6,98 (m, 4H, ArH), 7,06 (d, J = 7,7, 2H, Ar_2,2'H), 7,25 (dd, J₁ = 6, J₂ = 8, ArH); ¹³C-NMR (HCl-Salz, CDCl₃ + 1 gt MeOD) δ 30,9 (CH₂, CHCH₂), 32,7 (CH₃, NCH₃), 47,6 (CH, CHCH₂), 47,8 (CH₂, CH₂N), 113,9 (J = 21, ArC_2,2' oder ArC_4,4'), 114,5 (d, J = 22, ArC_2,2' oder ArC_4,4'), 123,2 (d, J = 3, Ar-C_6,6'), 130,3 (d, J = 9, Ar-C_5,5'), 144,7 (d, 7 = 7, Ar-C_1,1'), 162,9 (d, J = 245, Ar-C_3,3'); IR: KBr-Pellet, (cm^–1) 3436,9, 2963,4, 2778,5, 2453,7, 1610,6, 1589,3, 1487,0, 1445,3, 1246,0, 764,5; Löslichkeit: 2 g/ml (H₂O), 1 g/ml (EtOH); anal. ber. für C₁₆H₁₇NF₂·HCl (Karl Fischer: 0,26 % H₂O): C, 64,37; H, 6,11; N, 4,69; gefunden: C, 64,14; H, 6,13; N, 4,69.
Reaktionsschema 2: Synthese der Verbindung 119
Die Verbindung 119 wurde ausgehend von der im Handel erhältlichen trans-3-Fluorzimtsäure über eine siebenstufige Reaktionsabfolge synthetisiert. Dieser Syntheseweg entspricht dem Konzept gemäß dem Weg, der in der Literatur (US-Patent 4,313,896 (1982), die damit hier durch Bezugnahme aufgenommen ist), für verwandte Analoga beschrieben wird. Jedoch wurden die drei letzten Stufen durch eine im Wesentlichen unterschiedlichen Reaktionsfolge als die berichtete durchgeführt. Die Zimtsaure wurde in drei Stufen zu dem entsprechenden 3-(3-Fluorphenyl)-propylchlorid reduziert und chloriert. Diese Verbindung wurde mit NBS (N-Bromsuccinimid) bromiert und das resultierende Trihalogenid anschließend mit 3-Fluorphenol umgesetzt. Der resultierende Ether wurde durch eine Gabriel-Synthese in das Endprodukt umgewandelt.
3-Fluorhydrozimtsäure
trans-3-Fluorzimtsäure (25,0 g, 150,4 mmol) wurde in abs. EtOH (250 ml) gelöst und über 10 % Pd/C (2,5 g) in einer Parr-Apparatur bei 60 psig, 50 °C, 1 h hydriert (Wasserstoffaufnahme: ber. 245 psig; gefunden 260 psig). Das Reaktionsgemisch wurde filtriert und eingedampft, wodurch ein kristallines Produkt erhalten wurde (23,0 g, 89 %). GC, t_R = 4,43 min; MS, 168 (M⁺).
3-(3-Fluorphenyl)-1-propanol
Unter einem trockenen Stickstoffstrom wurde eine Lösung von 3-Fluorhydrozimtsäure (22,0 g, 131 mmol) in THF (100 ml) bei 0–10 °C innerhalb eines Zeitraums von 15 min einer Suspension von LiAlH₄ (4,23 g, 111 mmol) in THF (200 ml) zugetropft. Die Reaktion wurde innerhalb eines Zeitraums von 1 h unter Rückfluss erhitzt und anschließend nach Fieser & Fieser's Reagents for Organic Synthesis (Bd. 1, 1967) aufgearbeitet, wodurch ein weißer Feststoff (20,1 g, 99 %) erhalten wurde. GC, t_R = 3,74 min; MS, 154 (M⁺).
3-(3-Fluorphenyl)-1-propylchlorid
Eine Lösung von 3-(3-Fluorphenyl)-1-propanol (15,0 g, 97,4 mmol) und Triphenylphosphin (36,0 g, 137,3 mmol) in CCl₄ (150 ml) wurde 19 h unter Rückfluss erhitzt. Zusätzliches P(C₆H₅)₃ (3 × 3,0 g, 3 × 11,4 mmol) wurde innerhalb eines Zeitraums von 24 h in regelmäßigen Abständen zugegeben. Der resultierende Niederschlag wurde durch Filtration abgetrennt und die Feststoffe mit Hexan gewaschen. Das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft und der Rückstand in Hexan (200 ml) suspendiert und anschließend filtriert. Das Eindampfen des Filtrats lieferte 16,0 g (95,1 %) des Rohprodukts, das über Kieselgel-Flashchromatographie unter Elution mit Hexan gereinigt wurde, wodurch 14,7 g (87 %) einer farblosen Flüssigkeit erhalten wurden. GC, t_R = 3,63 min; MS, 172/174 (M⁺).
3-Brom-3-(3-fluorphenyl)-1-propylchlorid
Eine Lösung von dem vorstehenden Chlorid (12,0 g, 69,5 mmol), N-Bromsuccinimid (17,3 g, 97,2 mmol) und Dibenzoylperoxid (0,06 g) in CCl₄ (75 ml) wurde 1 h unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch in einem Eisbad gekühlt, filtriert, und die Feststoffe wurden mit Hexan gewaschen. Das Filtrat wurde eingedampft, wodurch 17,9 g (100 %) des Produkts erhalten wurden. GC, t_R = 5,21 min; MS, 251/253 (M⁺).
3-(3-Fluorphenoxy)-3-(3-fluorphenyl)-1-propylchlorid
Ein in Aceton (80 ml) suspendiertes Gemisch aus 3-Brom-3-(3-fluorphenyl)-1-propylchlorid (4,0 g, 15,9 mmol), 3-Fluorphenol (1,98 g, 17,7 mmol) und K₂CO₃ (2,65 g, 19,2 mmol) wurde 15 h unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurden die flüchtigen Substanzen unter Vakuum abgezogen und der resultierende Rückstand in einem Gemisch aus Hexan (200 ml) und NaOH (0,1 M, 100 ml) suspendiert. Die Phasen wurden getrennt und die organische Phase mit 0,1 M NaOH (100 ml) und H₂O (100 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der resultierende Rückstand wurde über Kieselgel chromatographiert, Elution mit Hexan, mit Hexan/EtOAc [100:1] und anschließend [40:1], wodurch 1,64 g (37 %) des Produkts als ein farbloses Öl erhalten wurden. GC, t_R = 7,28 min; MS, 282/283 (M⁺); DC, R_f = 0,3, Hexan/EtOAc [40:1].
N-Phthaloyl-3-(3-fluorphenoxy)-3-(3-fluorphenyl)-1-propylamin
Eine Lösung von 3-(3-Fluorphenoxy)-3-(3-fluorphenyl)-1-propylchlorid (1,52 g, 5,38 mmol) und Kaliumphthalat (1,20 g, 6,48 mmol) in DMF (30 ml) wurde innerhalb eines Zeitraums von 2 h in einer Stickstoffatmosphäre auf 90 °C erhitzt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch abgekühlt und in H₂O (100 ml) gegossen. Die resultierende Lösung wurde mit Et₂O (2 × 100 ml) extrahiert. Der organische Extrakt wurde mit gesätt. wässr. NaCl (100 ml) und H₂O (2 × 100 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und unter Vakuum eingedampft, wodurch 2,17 g des Rohprodukts erhalten wurden. Das Material wurde über Kieselgel chromatographiert, Elution mit Hexan/EtOAc [40:1] und anschließend [20:1], wodurch nach Eindampfen 1,81 g (86 %) des Produkts als eine glasartige Substanz erhalten wurden.
3-(3-Fluorphenoxy)-3-(3-fluorphenyl)-1-propyl
Eine Lösung von N-Phthaloyl-3-(3-fluorphenoxy)-3-(3-fluorphenyl)-1-propylamin (1,74 g, 4,42 mmol) und wasserfr. Hydrazin (1,43 g, 44,6 mmol) in abs. EtOH (30 ml) wurde 1 h unter Rückfluss erhitzt. Die Reaktion wurde abgekühlt und unter Vakuum eingedampft. Das resultierende Material wurde in Et₂O (75 ml) suspendiert und mit 0,2 M NaOH (2 × 25 ml) gewaschen. Die organische Phase wurde getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und unter Vakuum eingedampft, wodurch 1,04 g (89,3 %) erhalten wurden, die anschließend durch Umkehrphasenchromatographie gereinigt wurden [Vydac Prep. C18; 264 nm; 50 ml/min; Gradientenelution ACN/0,1 % wässr. HCl, 10 %–50 % innerhalb von 20 Minuten; t_R = 17,4 min], wodurch 0,89 g (67 %) der Verbindung 119 als ein hygroskopisches Hydrochloridsalz erhalten wurden.
Die Verbindung 236 kann auf eine ähnliche Art und Weise anhand des zuvor beschriebenen Syntheseprotokolls mit der folgenden Ersetzung synthetisiert werden: in Reaktionsschema 2 wurde das 4-Trifluorphenol-Material anstatt 3-Fluorphenol eingesetzt.
Reaktionsschema 3: Synthese der Verbindung 185
Die Verbindung 185 wurde hergestellt, indem eine ähnliche Vorgehensweise zur chiralen Synthese von Fluoxetin befolgt wurde (Brown, H.C. et al., J. Org. Chem. 53 (13), 2916–2920 (1988)).
(R)-3-(3-Fluorphenoxy)-3-phenylpropylchlorid
Eine Lösung von (S)-(–)-3-Chlor-1-phenyl-1-propanol (4,00 g, 23,4 mmol), 3-Fluorphenol (2,63 g, 23,4 mmol) und Diethylazodicarboxylat (4,00 g, 23,4 mmol) wurde in THF (200 ml) gelöst. Das Gemisch wurde auf 0 °C gekühlt und Triphenylphosphin (6,77 g, 25,8 mmol, 1,1 Äquiv.) wurde langsam innerhalb von 10 min zugegeben. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch 18 h bei Raumtemperatur gerührt. Danach wurde das THF unter Vakuum abgezogen, wodurch ein Gel erhalten wurde, das mit Pentan (3 × 50 ml) gewaschen wurde. Die Pentan-Waschlösungen wurden filtriert und das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft, wodurch ein klares Öl erhalten wurde. Das Öl wurde in Diethylether (150 ml) gelöst und mit 1 % HCl/gesätt. wässr. NaCl (25 ml), 0,1 M NaOH/gesätt. wässr. NaCl (2 × 25 ml) und zuletzt mit H₂O (2 × 25 ml) gewaschen. Anschließend wurde die organische Phase getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄), filtriert und unter Vakuum bis zur Trockene eingedampft, wodurch ein Öl erhalten wurde. Das Rohprodukt wurde über Kieselgel chromatographiert, wobei die Elution mit 40:1 Hexan-EtOAc erfolgte, wodurch 971 mg (15,7 %) an Produkt als ein farbloses Öl erhalten wurden.
(R)-3-(3-Fluorphenoxy)-3-phenylpropylamin
Eine Lösung von (R)-3-(3-Fluorphenoxy)-3-phenylpropylchlorid (0,971 g, 3,96 mmol), konz. NH₄OH (30 ml) und EtOH (20 ml) wurden 18 h bei 90 °C auf einer Parr^®-Apparatur (50–90 psig) geschüttelt. Anschließend wurde das Gemisch unter Vakuum eingedampft und der Rückstand in Et₂O (100 ml) gelöst und mit H₂O (2 × 25 ml) gewaschen. Die organische Phase wurde getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄), filtriert und unter Vakuum eingedampft, wodurch ein Öl erhalten wurde. Anschließend wurde das Material in EtOAc (50 ml) gelöst und filtriert. Eine Lösung von Maleinsäure (0,272 g, 2,6 mmol, 0,93 Äquiv.), gelöst in heißem EtOAc (5 ml), wurde zugegeben, wodurch die Verbindung 185 als deren weißes festes Maleatsalz (519 mg, 53,5 %) ausgefällt wurde: DC, R_f = 0,25 (1 % MeOH/CHCl₃); GC, t_R 7,37 min; EI-MS, m/z 245 (M⁺).
Reaktionsschema 4: Synthese der Verbindung 156
5-Cyanomethylidino-10,11-dihydrodibenzo[a,d]cyclohepten
Einer Lösung von Diethylcyanomethylphosphonat (9,66 g, 54,5 mmol) in trockenem N,N-Dimethylformamid (DMF, 40 ml) wurde NaH (60 % Dispersion, 2,20 g, 55,0 mmol) innerhalb eines Zeitraums von 2 min zugegeben. Die Reaktion wurde 10 min gerührt und anschließend eine Lösung von Dibenzosuberon (10,3 g, 49,6 mmol) in trockenem DMF (10 ml) innerhalb eines Zeitraums von 2 min zugegeben. Die Reaktion wurde 4 h bei 80 °C unter N₂ gerührt. Wasser (200 ml) wurde zugegeben und das Reaktionsgemisch wurde mit Et₂O (2 × 100 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden am Rotationsverdampfer auf weniger als 50 ml eingeengt. Die resultierenden Kristalle wurden gewonnen und mit kaltem Et₂O (2 × 50 ml) gewaschen, wodurch 7,48 g (65,3 %) an Produkt erhalten wurden.
5-(2-Aminoethyl)-5H-10,11-dihydrodibenzo[a,d]cyclohepten-Hydrochlorid
Das vorstehende konjugierte Nitril wurde in EtOH (100 ml) gelöst. 1 M NaOH (10 ml) und Raney^®-Nickel (wässr. Suspension, 0,50 g) wurden zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 22 h unter 60 psig H₂ bei 50 °C geschüttelt und anschließend über Celite^® filtriert. Das Filtrat wurde am Rotationsverdampfer eingeengt und der Rückstand in Et₂O (100 ml) gelöst und mit gesätt. wässr. NaCl (50 ml) und H₂O (50 ml) gewaschen. Die Et₂O-Phase wurde getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch das Rohprodukt (850 mg) als ein farbloses Öl erhalten wurde. Das Öl wurde in EtOAc (5 ml) gelöst und filtriert. Dem Filtrat wurde 1,0 M HCl in Et₂O (5 ml) zugegeben, und ein weißer kristalliner Feststoff wurde ausgefällt. Das Material wurde aus EtOH (5 ml)/Et₂O (12 ml) umkristallisiert, wodurch 600 mg (50,7 %) der Verbindung 156 als ein weißes Pulver erhalten wurden.
Synthese der Verbindung 65
o-Toluylchlorid (31,0 g, 201 mmol) in Diethylether (50 ml) wurde innerhalb eines Zeitraums von 10 min o-Tolylmagnesiumbromid (2,0 M in Diethylether; 105 ml, 210 mmol) zugegeben, das in einem Methanol/Eis-Bad auf –20 °C gekühlt war. Anschließend wurde das Kältebad entfernt. In dem Reaktionsgemisch bildete sich eine voluminöse Niederschlagsmenge. Nach 10 min Rühren wurde gesätt. wässr. NH₄Cl (200 ml) innerhalb eines Zeitraums von 8 min vorsichtig zugegeben. Die organische Phase wurde abgetrennt. Die wässrige Phase wurde mit Diethylether (50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit H₂O (2 × 50 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch 41,6 g (98,7 %) an Produkt erhalten wurden.
Natriumhydrid (60 % in Mineralöl; 3,2 g, 1,9 g NaH, 80 mmol) wurde einer Lösung von Diethylcyanomethylphosphonat (14,2 g, 80,2 mmol) in DMF (75 ml) innerhalb eines Zeitraums von 2 min zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 30 min bei 80 °C gerührt. Anschließend wurde dem Reaktionsgemisch in einem Zeitraum von 2 min 2,2'-Dimethylbenzophenon (15,2 g, 72,3 mmol) in DMF (15 ml) zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde bei 80 °C gerührt. Nach 27 h wurde dem Reaktionsgemisch H₂O (300 ml) zugegeben. Das Gemisch wurde mit Diethylether (2 × 100 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit H₂O (2 × 100 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch 15,96 g erhalten wurden. Das resultierende Öl wurde über Flash-Kieselgel (250 × 50 mm) flashchromatographiert (Stufengradient: Hexane; 40:1 Hex/EtOAc; 20:1 Hex/EtOAc), wodurch 6,33 g an Produkt erhalten wurden.
Das Material (6,33 g) wurde in EtOH (300 ml) gelöst. Raney-Nickel (Fluka^®; ~50 % Aufschlämmung in H₂O; 3,2 g in 1 M NaOH) wurde dem Filtrat zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 18 h unter 60 psig H₂ bei 60 °C geschüttelt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch über Papier filtriert, und das Filtrat wurde am Rotationsverdampfer eingeengt. Das Material wurde in Diethylether (100 ml) gelöst und mit H₂O (2 × 50 ml) gewaschen. Die organische Phase wurde getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch 5,61 g an Produkt erhalten wurden. Das Öl wurde in EtOAc (60 ml) gelöst. Das HCl-Salz des Amins wurde durch Zugabe von 1,0 M HCl in Diethylether (30 ml) gebildet. Dem Gemisch wurde weiteres Diethylether (30 ml) zugegeben. Der Niederschlag wurde gewonnen und mit Diethylether (2 × 50 ml) gewaschen. Der resultierende weiße Feststoff wurde aus EtOH (60 ml)/Diethylether (120 ml) umkristallisiert, wodurch 3,32 g des kristallinen Hydrochloridsalzes erhalten wurden.
Synthese der Verbindung 111
3-Bromfluorbenzol (15,00 g) und Magnesiumspäne (1,95 g) wurden in wasserfr. THF (150 ml) gelöst. Das Reaktionsgemisch wurde 30 min unter Stickstoff unter Rückfluss erhitzt. rac-Ethyl-N-benzylnipecotat (8,00 g, 32,3 mmol) in wasserfr. THF (10 ml) wurde innerhalb eines Zeitraums von 1 min zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 1,5 h unter Rückfluss erhitzt, und anschließend ließ man es abkühlen. Dem Gemisch wurde gesätt. wässr. NH₄Cl (50 ml) zugegeben, und das Gemisch wurde in einen Scheidetrichter übergeführt, der gesätt. wässr. NaCl (250 ml) und Diethylether (150 ml) enthielt. Die organische Phase wurde abgetrennt, mit H₂O (50 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch 13,0 g an Amin erhalten wurden. Das Material wurde über Flash-Kieselgel flashchromatographiert (Gradient: Hexane, 20:1 Hex/EtOAc, 9:1 Hex/EtOAc, 4:1 Hex/EtOAc). Nur die Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt. Dieser Lösung wurde 1,0 M HCl in Diethylether (40 ml) zugegeben. Anschließend wurde diese Lösung am Rotationsverdampfer eingeengt und im Hochvakuum getrocknet, wodurch 10,93 g (78,6 %) an Produkt erhalten wurden.
Das vorstehend hergestellte Zwischenprodukt (10,73 g, 24,96 mmol) wurde in EtOH (200 ml) gelöst. Pearlman-Katalysator (Fluka^®; –20 % Pd; 2,15 g) wurde zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 2 h unter 50 psig H₂ bei 50 °C geschüttelt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch über Celite filtriert, und das Filtrat wurde am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch 8,15 g (96,1 %) an Produkt erhalten wurden. Das vorstehend hergestellte Zwischenprodukt (7,64 g, 22,5 mmol) wurde in Eisessig (75 ml) gelöst. Konz. wässr. HCl (75 ml) wurde zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 5 h im N₂-Strom unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch 7,03 g (97,2 %) an Produkt erhalten wurden. Dieser Feststoff wurde in unter Rückfluss erhitztem Ethanol (70 ml) gelöst. Diese Lösung wurde filtriert, weiteres Diethylether (210 ml) wurde zugegeben, und die resultierenden Kristalle wurden filtriert, mit Diethylether (2 × 50 ml) gewaschen und im Hochvakuum getrocknet, wodurch 6,27 g (86,7 %) an Produkt erhalten wurden. Das vorstehend hergestellte Alken-Zwischenprodukt (5,66 g, 17,6 mmol) wurde in Ethanol (200 ml) gelöst. Palladium-auf-Aktivkohle (~10 % Pd; 1,13 g) in H₂O (5 ml) wurde zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 16,5 h unter 60 psig H₂ bei 60 °C geschüttelt. Das Reaktionsgemisch wurde über Celite filtriert und das Filtrat wurde am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch 5,54 g an Produkt erhalten wurden. Das Material wurde aus Ethanol (10 ml)/Diethylether (40 ml) auskristallisiert. Die Kristalle wurden abfiltriert, mit Diethylether (2 × 50 ml) gewaschen und im Hochvakuum getrocknet, wodurch 4,82 g (84,6 %) an Produkt erhalten wurden.
Synthese der Verbindung 216 und Verbindung 217
(–)-Menthylchlorformat (1,57 ml, 1,60 g, 7,32 mmol) wurde einer Lösung von rac-3-[bis(3-Fluorphenyl)methyl]-piperidin (2,10 g, 7,31 mmol) und Triethylamin (3,1 ml, 22 mmol), das in CH₂Cl₂ (40 ml) gelöst war, zugegeben. Nach 5 min wurde die Reaktionslösung am Rotationsverdampfer eingeengt. Anschließend wurde Das Material über Flash-Kieselgel flashchromatographiert (9:1 Hex/EtOAc), wodurch 2,90 g (84,5 %) an Produkt erhalten wurden. Das resultierende Öl (2,90 g) wurde über HPLC mit chiraler stationärer Phase getrennt (Chiralcel OD; Säule: 20 × 250 mm; Eluent: 19:1 Hexane/Isopropanol; Flussgeschwindigkeit: 10 ml/min; Beladung: 1 ml von 50 mg/ml; Detektor: 254 nm). Durch Einengung am Rotationsverdampfer wurden 1,28 g (44,1 %) des frühen Diastereomeren und 1,24 g (42,8 %) des späten mit einer Gesamtausbeute von 86,9 % erhalten. Die analytische HPLC zeigte eine Reinheit von >99,5 % für das frühe Diastereomere und eine Reinheit von >99,0 % für das späte Diastereomere.
Das früh eluierende Diastereoisomere (959 mg, 2,04 mmol) wurde in 30 % HBr in Essigsäure (20 ml) gelöst. Die Reaktionslösung wurde 14 h bei 80 °C gerührt. Eis (~20 g) wurde dem Reaktionsgemisch zugegeben, worauf H₂O (20 ml), konz. wässr. NH₄OH (29 %, 10 ml) und gesätt. wässr. NaHCO₃ (10 ml) folgten. Das Gemisch wurde mit CHCl₃ (2 × 30 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit gesätt. wässr. NaHCO₃ (30 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch 921 mg an Rohprodukt erhalten wurden. Das resultierende Öl wurde über Flash-Kieselgel flashchromatographiert (Gradientenelution: CHCl₃, 1:10 MeOH/CHCl₃, 0,03:1:10 NH₃/MeOH/CHCl₃). Die Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch 610 mg (104 %) eines Öls erhalten wurden. Das Material wurde in CHCl₃ (10 ml) gelöst und mit 1 M NaOH (10 ml) gewaschen. Die organische Phase wurde getrocknet (wasserfr. MgSO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch 421 mg (71,7 %) an Produkt erhalten wurden. Das Material wurde in EtOAc (2,0 ml) gelöst. Eine Lösung von 1,0 M HCl in Diethylether (3,0 ml) wurde zugegeben. Diethylether (1,0 ml) wurde zugegeben und die auskristallisierende Lösung wurde bis zur Klarheit erhitzt, und anschließend ließ man es stehen. Die resultierenden Kristalle wurden mit Diethylether (2 × 5 ml) gewaschen und im Hochvakuum getrocknet, wodurch 415 mg (62,8 %) an Produkt als ein kristalliner Feststoff erhalten wurden.
Das später eluierende Diastereoisomere (1,24 g, 2,64 mmol) wurde in 30 % HBr in Essigsäure (20 ml) gelöst. Die Reaktionslösung wurde 16 h bei 80 °C gerührt. Eis (~25 g) wurde dem Reaktionsgemisch zugegeben, worauf H₂O (25 ml), konz. wässr. NH₃ (29 %, 10 ml) und gesätt. wässr. NaHCO₃ (10 ml) folgten. Das Gemisch wurde mit CHCl₃ (2 × 30 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit 1 M NaOH (2 × 30 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch 1,07 g erhalten wurden. Das Material wurde über Flash-Kieselgel flashchromatographiert (Gradientenelution: CHCl₃, 0,03:1:10 NH₃/MeOH/CHCl₃), wodurch 625 mg (82,4 %) des Amins erhalten wurden. Das Material wurde in EtOAc (3,0 ml) gelöst. Eine Lösung von 1,0 M HCl in Diethylether (3,0 ml) wurde zugegeben. Diethylether (3,0 ml) wurde zugegeben und die kristallisierende Lösung wurde bis zur Klarheit erhitzt, und anschließend ließ man es stehen. Der Überstand wurde abdekantiert, und die resultierenden Kristalle wurden mit Diethylether (2 × 10 ml) gewaschen und im Hochvakuum getrocknet, wodurch 565 mg (66,1 %) an Produkt als ein kristalliner Feststoff erhalten wurden. Synthese der Verbindung 223 (Flunamin)

Synthese-Literatur: Collect. Czech. Chem. Commun. 49 (11), 2649–2660 (1984), J. Med. Chem. 35 (22), 4238–4248 (1992).

Eine Lösung von 4,4'-Difluordiphenylmethanol (12,5 g, 56,9 mmol), 2-Bromethanol (7,11 g, 56,9 mmol), konz. H₂SO₄ (2 Tropfen) in Toluol (100 ml) wurde 1,5 h unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurde die Reaktion unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in Diethylether (100 ml) gelöst, mit H₂O (2 × 25 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und unter Vakuum eingedampft, wodurch 18,62 g, 100 % Ausbeute des Rohbromids erhalten wurden.
Eine Lösung des vorstehend hergestellten Bromids (18,62 g, 56,94 mmol) und Kaliumphthalimid (10,55 g, 56,94 mmol) in DMF (100 ml) wurde 10 min in einem Ölbad auf 120 °C erhitzt. Anschließend wurde die Reaktion auf 25 °C gekühlt, Diethylether (400 ml) wurde zugegeben und das Gemisch mit Salzlösung (5 × 100 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄), und anschließend wurde eine Hälfte des Lösungsmittels unter vermindertem Druck verdampft. Das Produkt kristallisierte aus dem verdampfenden Lösungsmittel aus, es wurde auf einem Trichter gewonnen und getrocknet, wodurch 13,0 g, 58 % Ausbeute an farblosen Kristallen erhalten wurden.
Einer Suspension des vorstehend hergestellten Phthalimids (13,0 g, 33,1 mmol) in Methanol (100 ml) wurde wasserfr. Hydrazin (5,2 ml, 5,3 g, 165 mmol) zugegeben. Die Reaktion wurde 30 min unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurden die flüchtigen Substanzen unter Vakuum abgezogen. Der Rückstand wurde in einem Gemisch aus Diethylether (300 ml), 1 M NaOH (50 ml) und H₂O (200 ml) gelöst. Die Phasen wurden getrennt und die organische Phase wurde mit 1 M NaOH (50 ml) und H₂O (50 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und eingedampft, wodurch 6,7 g eines Öls erhalten wurden. Das Öl, gelöst in EtOAc (20 ml), wurde einer Lösung von Maleinsäure (2,98 g, 25,7 mmol) in heißem EtOAc (40 ml) zugegeben. Das Maleatsalz kristallisierte aus, wurde gewonnen, mit Diethylether (20 ml) gewaschen und unter Vakuum getrocknet, wodurch 8,34 g farblose Kristalle erhalten wurden. GC/MS, t_R 6,93 min; EI-MS, m/z 264; DC, 5 % MeOH/CHCl₃, R_f = 0,25.
Synthese der Verbindung 218
Einer Lösung von 3,3'-Difluorbenzophenon (15,0 g, 68,7 mmol) in Ethanol (50 ml) wurde Natriumborhydrid (2,86 g, 75,6 mmol) zugegeben. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch 15 min unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurde die Reaktion gekühlt und das Lösungsmittel unter Vakuum abgezogen. Der Rückstand wurde in Diethylether (100 ml) gelöst, mit H₂O (3 × 50 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und eingedampft, wodurch 11,61 g, 76,8 % Ausbeute an Produkt als ein Öl erhalten wurden: DC, Hex/EtOAc [10:1], R_f = 0,4.
Eine Lösung von 3,3'-Difluorbenzhydrol (11,61 g, 52,8 mmol), 2-Bromethanol (7,26 g, 58,1 mmol) und konz. H₂SO₄ (2 Tropfen) in Toluol (100 ml) wurde unter Verwendung einer Dean-Stark-Falle zur Wasserabscheidung 1,3 h unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurde die Reaktion unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in Diethylether (100 ml) gelöst, mit H₂O (2 × 25 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und unter Vakuum eingedampft, wodurch 17,28 g, 100 % Ausbeute an Rohbromid als ein Öl erhalten wurden.
Eine Lösung des vorstehend hergestellten Rohbromids (17,28 g, 52,8 mmol) und Kaliumphthalimid (10,77 g, 58,13 mmol) in DMF (100 ml) wurde 60 min in einem Ölbad auf 120 °C erhitzt. Anschließend wurde die Reaktion auf 25 °C gekühlt, Diethylether (400 ml) zugegeben, und das Gemisch wurde mit Salzlösung (100 ml), 1 M NaOH (100 ml), anschließend wieder mit Salzlösung (3 × 100 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄), und anschließend wurde der Großteil des Lösungsmittels unter vermindertem Druck abgezogen. Das Produkt kristallisierte aus, wurde auf einem Trichter gewonnen, zweimal mit Hexan/Ether [1:1] gewaschen und getrocknet, wodurch 12,51 g, 60,5 % Ausbeute an farblosen Kristallen erhalten wurden. Die Mutterlauge enthielt 3,72 g (17,9 %) an Produkt, mit einer Gesamtausbeute von 78,2 %.
Einer Suspension des vorstehend hergestellten Phthalimids (12,5 g, 31,8 mmol) in Methanol (100 ml) wurde wasserfr. Hydrazin (5,0 ml, 5,1 g, 159 mmol) zugegeben. Die Reaktion wurde 30 min unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurden die flüchtigen Substanzen unter Vakuum abgezogen. Der Rückstand wurde in einem Gemisch aus Diethylether (300 ml), 1 M NaOH (50 ml) und H₂O (200 ml) gelöst. Die Phasen wurden getrennt und die organische Phase wurde mit 1 M NaOH (50 ml) und H₂O (3 × 50 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und eingedampft, wodurch 7,58 g, 95 % Ausbeute an freier Base als ein farbloses Öl erhalten wurden. Das Material, gelöst in Essigsäureethylester (20 ml), wurde einer Lösung von Maleinsäure 3,5 g, 30,2 mmol in heißem Essigsäureethylester (40 ml) zugegeben. Das Maleatsalz kristallisierte aus, wurde gewonnen, mit Ether (20 ml) gewaschen und unter Vakuum getrocknet, wodurch 9,64 g, 80 % (Gesamtausbeute) farblose Kristalle erhalten wurden. GC/MS, t_R 6,49 min, m/z 264; DC, 5 % MeOH/CHCl₃, R_f = 0,25.
Synthese der Verbindung 219
Einer Lösung von 3-Fluorbenzophenon (6,67 g, 33,3 mmol) in Ethanol (25 ml) wurde Natriumborhydrid (1,40 g, 37,0 mmol) zugegeben. Die Reaktion war exotherm. Nach 5 min Rühren wurde das Reaktionsgemisch am Rotationsverdampfer eingeengt. Das resultierende Material wurde in Diethylether (50 ml) gelöst, mit H₂O (2 × 25 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt. Das resultierende Öl wurde über Flash-Kieselgel flashchromatographiert (Gradientenelution: Hexan, 9:1 Hex/EtOAc, 4:1 Hex/EtOAc), wodurch 5,97 g (88,6 %) an Produkt erhalten wurden.
Eine Lösung von 3-Fluorbenzhydrol (5,97 g, 29,5 mmol), 2-Bromethanol (2,30 ml, 32,4 mmol) und konz. H₂SO₄ (2 Tropfen) in Toluol (100 ml) wurden unter Verwendung einer Dean-Stark-Falle zur H₂O-Abscheidung 1 h unter Rückfluss erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde mit H₂O (25 ml) und gesätt. wässr. NaCl (25 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt (mit Methanol azeotropisiert), wodurch 7,37 g an Rohprodukt erhalten wurden. Das Material wurde über MPLC chromatographiert (9:1 Hex/EtOAc), wodurch 6,01 g (65,8 %) an gereinigtem Produkt erhalten wurden.
Das vorstehend hergestellte Bromid (4,90 g, 15,8 mmol) wurde in Ethanol (100 ml) gelöst. Konzentriertes Ammoniumhydroxid (29 % in H₂O; 100 ml) wurde zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde in einer 500-ml Parr^®-Apparatur 4 h bei 90 °C und 65 psig geschüttelt. Das Reaktionsgemisch wurde mit H₂O (200 ml) verdünnt und mit EtOAc (200 ml) extrahiert. Die organische Phase wurde getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt (mit Benzol azeotropisiert), wodurch 3,42 g (88,0 %) an Rohprodukt erhalten wurden. Das Material wurde in EtOAc (15 ml) gelöst und filtriert. Anschließend wurde das Filter mit weiterem EtOAc (5 ml) gespült. Eine Lösung von Maleinsäure (1,38 g) in EtOAc (20 ml) wurde den vereinigten Amin-Lösungen zugegeben. Anschließend wurde der Säurebehälter mit weiterem EtOAc (10 ml) gespült. Nach Stehenlassen wurden die resultierenden Kristalle filtriert, mit EtOAc (2 × 20 ml) gewaschen und unter Hochvakuum getrocknet, wodurch 3,58 g (62,5 %) an Maleatsalz erhalten wurden. GC/MS, t_R 7,12 min, m/z 239; DC, [1:10] MeOH/CHCl₃, R_f = 0,3.
Synthese der Verbindung 220
Magnesiumspäne (1,22 g, 50,2 mmol) wurden mit wasserfr. THF (2 × 50 ml) gewaschen. Anschließend wurde dem Magnesium wasserfr. THF (100 ml) zusammen mit einem Iodkristall und 10 % einer Lösung von 3-Bromfluorbenzol (9,61 g, 54,9 mmol) in wasserfr. THF (50 ml) zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde unter einem Argonstrom bis zum Rückfluss erhitzt, wobei die Reaktion zu dieser Zeit ansprang. Die verbliebene Lösung von 3-Bromfluorbenzol wurde innerhalb eines Zeitraums von 15 min zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 30 min unter Rückfluss erhitzt. Während immer noch unter Rückfluss erhitzt wurde, wurde o-Tolualdehyd (5,48 g, 45,6 mmol) in wasserfr. THF (25 ml) innerhalb eines Zeitraums von 5 min zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 15 min unter Rückfluss erhitzt und anschließend mit gesätt. wässr. NH₄Cl (50 ml) gestoppt. Die wässrige Phase wurde abgetrennt. Die organische Phase wurde mit gesätt. wässr. NaCl (2 × 50 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄), am Rotationsverdampfer eingeengt (90 °C) und 1 h unter Hochvakuum gesetzt. Hierdurch wurden 9,06 g (91,9 %) an Produkt erhalten.
Eine Lösung des vorstehend hergestellten substituierten Benzhydrols (9,06 g, 41,9 mmol) und 2-Bromethanol (5,76 g, 46,1 mmol) in Toluol (100 ml) mit H₂SO₄ (2 Tropfen) wurde 1 h unter Rückfluss erhitzt, wobei eine Dean-Stark-Falle 15 min zur H₂O-Abscheidung verwendet wurde. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch am Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand wurde in Diethylether (100 ml) gelöst, mit H₂O (2 × 25 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch 9,71 g (71,7 %) an Produkt erhalten wurden.
Eine Lösung des vorstehenden Bromids (9,71 g, 30,1 mmol) und Kaliumphthalimid (5,23 g, 33,1 mmol) in DMF (100 ml) wurde 60 min in einem Ölbad bei 120 °C erhitzt. Anschließend wurde die Reaktion auf 25 °C gekühlt, Diethylether (400 ml) zugegeben und das Gemisch mit H₂O (100 ml), 1 M NaOH (100 ml), anschließend mit H₂O (3 × 100 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄), und anschließend wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgezogen. Das Rohmaterial wurde über Kieselgel chromatographiert (Elution mit Hex/EtOAc [4:1]), wodurch 7,96 g, 68,0 % eines Öls erhalten wurden, das beim Stehenlassen auskristallisierte.
Einer Suspension des vorstehenden Phthalimids (7,96 g, 20,5 mmol) in Methanol (100 ml) wurde wasserfr. Hydrazin (3,2 ml, 3,3 g, 102 mmol) zugegeben. Die Reaktion wurde 90 min unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurden die flüchtigen Substanzen unter Vakuum abgezogen. Der Rückstand wurde in einem Gemisch aus Diethylether (300 ml), 1 M NaOH (50 ml) und H₂O (200 ml) gelöst. Die Phasen wurden getrennt, und die organische Phase wurde mit 1 M NaOH (50 ml) und anschließend H₂O (3 × 50 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und eingedampft, wodurch 4,47 g, 84,1 % Ausbeute eines Öls erhalten wurden.
Das Material, gelöst in EtOAc (10 ml), wurde einer Lösung von Maleinsäure (2,00 g, 17,3 mmol) in heißem EtOAc (20 ml) zugegeben. Das Maleatsalz kristallisierte aus, wurde gewonnen, mit Diethylether (29 ml) gewaschen und unter Vakuum getrocknet, wodurch 5,29 g, 68,8 % (Gesamtausbeute) an farblosen Kristallen erhalten wurden. GC/MS: m/z = 259, t_R = 6,95 min; DC, 5 % MeOH/CHCl₃, R_f = 0,23. Synthese der Verbindung 221

Literatur: Mitsunobu, et al., Synthesis 1981,1–28.

In einem 500-ml Rundkolben wurde Triphenylphosphin (19,93 g, 76,18 mmol) in THF (50 ml) gelöst. Dieser Lösung wurden (R)-(+)-Chlor-1-phenyl-1-propanol (10,00 g, 58,6 mmol) und 3-Fluorphenol (6,57 g, 58,6 mmol) zugegeben und 10 min in einem Eisbad gerührt. Schließlich wurde Diethylazodicarboxylat (13,27 g, 76,18 mmol) innerhalb von 5 min zugetropft. Die Reaktion wurde 18 h bei 25 °C gerührt. Anschließend wurde die Reaktion unter Vakuum eingedampft, wodurch 19,6 g erhalten wurden. Das Triphenylphosphinoxid wurde mit Diethylether (2 × 25 ml), Hexan (2 × 25 ml) und Pentan (2 × 25 ml) gewaschen und abfiltriert, wobei nach jedem Waschvorgang unter Vakuum abgezogen wurde. Die Flüssigkeit wurde über eine Schwerkraftsäule gereinigt, die mit 40:1 Hexan/Essigsäureethylester eluiert wurde (R_f = 0,25), wodurch 8,90 g erhalten wurden. Die Endreinigung erfolgte durch Kurzweg-Destillation; das Produkt wurde bei 140–150 °C unter vermindertem Druck destilliert, wodurch 3,5 g, 26 % eines klaren Öls erhalten wurden.
In einem Parr-Kolben wurde das vorstehend hergestellte Chlorid (1,65 g, 6,25 mmol) in Ethanol (80 ml) gelöst, worauf die Zugabe von Methylamin (40 % wässr., 5,38 ml, 62,5 mmol) folgte, und 18 h bei 90 °C in eine Parr-Schüttelapparatur gestellt. Nach Ablauf der 18 h wurde die Lösung unter Vakuum eingedampft. Anschließend wurde das Rohprodukt mit 0,1 M NaOH (3 × 25 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄), filtriert und auf 1,4 g eingedampft. Das Material wurde ferner durch Säulenchromatographie (10 % Methanol/CH₂Cl₂) auf 0,566 g gereinigt. Anschließend wurde das Maleatsalz hergestellt, indem eine Lösung von Maleinsäure (0,234 g, 2,01 mmol) in Essigsäureethylester (5 ml) der Lösung des Amins in Essigsäureethylester (50 ml) zugegeben wurde. Dieser Lösung wurde Hexan (40 ml) zugegeben. Anschließend wurde der Niederschlag filtriert und getrocknet, wodurch 0,430 g, 26,6 % an Produkt als dessen Maleat erhalten wurden.
Synthese der Verbindung 222
In einem 500-ml Rundkolben wurde Triphenylphosphin (19,93 g, 76,18 mmol) in THF (50 ml) gelöst. Dieser Lösung wurden (S)-(+)-Chlor-1-phenyl-1-propanol (10,00 g, 58,6 mmol) und 3-Fluorphenol (6,57 g, 58,6 mmol) zugegeben. Die Reaktion wurde 10 min in einem Eisbad gerührt. Schließlich wurde Diethylazodicarboxylat (13,27 g, 76,18 mmol) innerhalb von 5 min zugetropft. Die Reaktion wurde 18 h bei 25 °C gerührt. Anschließend wurde die Reaktion unter Vakuum eingedampft, wodurch 17,5 g erhalten wurden. Der Überstand wurde abdekantiert und der Triphenylphosphinoxid-Rückstand wurde mit Diethylether (2 × 25 ml), Hexan (2 × 25 ml) und Pentan (2 × 25 ml) gewaschen. Die vereinigten Waschlösungen wurden eingedampft, und der Rückstand wurde über eine Schwerkraftsäule gereinigt, die mit 40:1 Hexan/Essigsäureethylester (R_f = 0,25) eluiert wurde, wodurch 4,5 g, 29 % an Produkt erhalten wurden.
In einem Parr-Kolben wurde das vorstehend hergestellte Chlorid (1,65 g, 6,25 mmol) in Ethanol (80 ml) gelöst, gefolgt von der Zugabe von Methylamin (40 % wässr., 5,38 ml, 62,5 mmol) und 18 h bei 90 °C in eine automatische Parr-Apparatur gestellt. Nach Ablauf der 18 h wurde die Lösung unter Vakuum eingedampft. Anschließend wurde der Rückstand mit 0,1 M NaOH (3 × 25 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄), filtriert, und eingedampft, wodurch 1,25 g erhalten wurden. Das Maleatsalz wurde hergestellt, indem Maleinsäure (0,522 g, 4,50 mmol) in Essigsäureethylester (5 ml) einer Lösung des Amins in Essigsäureethylester (50 ml) zugegeben wurde. Dieser Lösung wurde Hexan (40 ml) zugegeben, um das Produkt auszufällen, das gewonnen und getrocknet wurde, wodurch insgesamt 0,845 g, 52,2 % erhalten wurden.
Synthese der Verbindung 185
In einem 500-ml Rundkolben wurde Triphenylphosphin (19,93 g, 76,18 mmol) in THF (50 ml) gelöst. Dieser Lösung wurden (S)-(+)-Chlor-1-phenyl-1-propanol (10,00 g, 58,6 mmol) und 3-Fluorphenol (6,57 g, 58,6 mmol) zugegeben. In einem Eisbad wurde 10 min gerührt. Schließlich wurde Diethylazodicarboxylat (13,27 g, 76,18 mmol) innerhalb von 5 min zugetropft. Die Reaktion wurde 18 h bei 25 °C gerührt. Anschließend wurde die Reaktion unter Vakuum eingedampft, wodurch 17,5 g erhalten wurden. Das Triphenylphosphinoxid wurde mit Ether (2 × 25 ml), Hexan (2 × 25 ml) und Pentan (2 × 25 ml) gewaschen und ausfiltriert, wobei nach jedem Waschvorgang unter Vakuum abgezogen wurde. Die Flüssigkeit wurde über eine Schwerkraftsäule gereinigt, die mit 40:1 Hexan/Essigsäureethylester eluiert wurde (R_f = 0,25), wodurch 4,5 g, 29 % an Produkt erhalten wurden.
In einem Parr-Kolben wurde das vorstehend hergestellte Chlorid (1,2 g, 4,54 mmol) in Ethanol (50 ml) gelöst. Ammoniumhydroxid (40 ml) wurde zugegeben und das Reaktionsgemisch wurde 18 h bei 90 °C in eine automatische Parr-Apparatur eingebracht. Nach Ablauf der 18 h wurde die Lösung unter Vakuum eingedampft. Anschließend wurde das Öl in einen Scheidetrichter übergeführt und mit 0,1 M NaOH (2 × 25 ml) und Wasser (2 × 25 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄), filtriert und unter Vakuum eingedampft. Einer Lösung des resultierenden Amins (0,703 g) in Essigsäureethylester (25 ml) wurde eine Lösung von Maleinsäure (0,309 g, 2,66 mmol) in Essigsäureethylester (5 ml) zugegeben. Hexan (10 ml) wurde zugegeben und die Lösung bis zur Bildung eines Feststoffs gerührt. Der resultierende weiße Feststoff wurde filtriert und in einem Vakuumschrank getrocknet, wodurch 0,600 g an Produkt erhalten wurden.
Synthese der Verbindung 235
Die Verbindung 235 wurde ausgehend von im Handel erhältlichen Materialien in einer vierstufigen Reaktionsabfolge synthetisiert. Das Grignard-Reagenz aus 3-Bromfluorbenzol wurde mit Chlorpropionylchlorid in Gegenwart von Kupferbromid und Lithiumbromid umgesetzt, wodurch das Chlorfluorpropiophenon erhalten wurde. Einem in der Literatur von Srebnik, M., Ramachandran, P.V. und Brown, H.C. (J. Org. Chem., 1988, 53, 2916–2920) berichteten Verfahren folgend, wurde die Carbonylgruppe unter Verwendung von (+)-B- Chlordiisopinocampheylboran stereoselektiv reduziert. Anschließend wurde der resultierende enantiomere Alkohol über stereochemische Inversion in dessen Phenolether umgewandelt. Anschließend wurde die Chloridfunktionalität mit Methylamin umgesetzt, wodurch das Endprodukt erhalten wurde.
3'-Chlor-3-fluorpropiophenon
Das Grignard-Reagenz wurde wie folgt hergestellt. Unter Stickstoff wurden einem in einem Trockenschrank getrockneten 2000-ml-Dreihalskolben eine Suspension von Magnesiumspänen [Alpha Aesar, vorgewaschen mit Diethylether (3 × 100 ml), 6,08 g, 250 mmol] in trockenem Diethylether (400 ml) ein Iodkristall zugegeben. Eine Lösung von 3-Bromfluorbenzol (27,9 ml, 250 mmol) in Diethylether (30 ml) wurde zugetropft. Das Reaktionsgemisch wurde auf einer Heizplatte unter Rückfluss erhitzt. Nach dem Anspringen wurde die Heizquelle entfernt, und der Rest des Bromids wurde innerhalb eines Zeitraums von 40 min mit einer solchen Geschwindigkeit zugetropft, dass ein gleichmäßiger Rückfluss aufrechterhalten wurde. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch für weitere 30 min unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurde die Grignard-Reaktion mit einem Wasserbad auf Raumtemperatur gekühlt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch in einem Eisbad gekühlt. Lithiumbromid (43,4 g, 500 mmol), Kupfer-(I)-bromid (35,9 g, 250 mmol) und Diethylether (300 ml) wurden zugegeben. Das Eisbad wurde entfernt und man ließ das dunkle Reaktionsgemisch 30 min bei 25 °C rühren.
Eine Lösung von 3-Chlorpropionylchlorid (23,9 ml, 250 mmol) in Diethylether (300 ml) wurde in einem Eisbad gekühlt. Anschließend wurde die Organocuprat-Lösung innerhalb eines Zeitraums von 25 min mittels einer Kanüle in das gerührte Säurechlorid übergeführt. Der in dem Kolben verbliebene dunkle Rückstand wurde mit Diethylether (2 × 50 ml) gewaschen, und die Waschlösungen wurden der Lösung des Säurechlorids zugegeben. Das Eisbad wurde entfernt, und anschließend ließ man das Reaktionsgemisch bei 25 °C rühren.
Anschließend wurde das Reaktionsgemisch in einem Eisbad gekühlt und gesätt. wässr. NH₄Cl (500 ml) wurde dem Reaktionsgemisch von 0 °C zugegeben, wobei bis zum Farbumschlag von schwarz nach grün gerührt wurde. Anschließend wurde das Gemisch getrennt und die wässrige Phase wurde mit Diethylether (3 × 150 ml) rückextrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit gesätt. wässr. NH₄Cl (100 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄, MgSO₄) und unter Vakuum eingeengt, wodurch 34,1 g, 73,0 % eines Öls erhalten wurden. Das Rohmaterial wurde in unter Rückfluss erhitztem Hexan (175 ml) gelöst, über Papier filtriert und 2 h in einem Eisbad abgekühlt. Das resultierende niedrig schmelzende Pulver wurde getrocknet, wodurch 21,3 g, 45,6 % an gereinigtem Keton erhalten wurden.
3-Chlor-3'-fluorphenylpropan-1-ol
Einer Lösung von (+)-DIP-Chloride^tm [((+)-B-Chlordiisopinocampheylboran), 16,4 g, 51,0 mmol] in THF (35 ml) auf –25 °C (Trockeneis/Acetonitril/Wasser-Bad) wurde das Keton (8,65 g, 46,4 mmol) unter Argon zugegeben. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch auf –25 °C gekühlt und danach ließ man es langsam auf Raumtemperatur aufwärmen, während 7 h gerührt wurde. Anschließend wurde die Lösung in Vakuum eingedampft und 18 h im Hochvakuum (0,1 mm, 50 °C) getrocknet. Anschließend wurde der Rückstand in Diethylether (200 ml) gelöst. Diethanolamin (13,4 ml, 140 mmol) wurde zugegeben, und das Reaktionsgemisch wurde 2 h gerührt. Anschließend wurde das resultierende Gemisch filtriert und der Rückstand mit Pentan (3 × 25 ml) gewaschen. Das vereinigte Filtrat und die Waschlösungen wurden unter Vakuum eingeengt, wodurch 16,7 g eines Öls erhalten wurden, das anschließend 18 h unter Hochvakuum (0,23 mm, 60 °C) gestellt wurde, wodurch 9,51 g erhalten wurden. Das Material wurde über Kieselgel chromatographiert [Elution mit Hex/EtOAc (10:1)], wodurch 5,11 g, 58,4 % eines Öls erhalten wurden.
(S)-1-[3-Chlor-1-(3-fluorphenyl)propoxy]-2-methylbenzol
Einer Lösung von 4-(Dimethylamino)phenyldiphenylphosphin (1,98 g, 6,49 mmol) in THF (40 ml) wurde 3'-Chlor-3-fluorphenylpropanol (1,02 g, 5,41 mmol) gefolgt von ortho-Cresol (0,760 g, 7,03 mmol) zugegeben. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch in ein Eisbad gestellt und 10 min gerührt. Danach wurde Diisopropylazodicarboxylat (DIAD, 1,28 ml, 6,49 mmol) innerhalb eines Zeitraums von 1 min zugetropft. Danach wurde das Eisbad entfernt und das Reaktionsgemisch 4 h bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch in Diethylether (100 ml) gegossen und mit 1 M NaOH (2 × 25 ml), 1 M HCl (2 × 25 ml) und Salzlösung (25 ml) gewaschen. Die organische Phase wurde getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und eingeengt, wodurch 2,82 g eines Öls erhalten wurden, das beim Stehenlassen kristallisierte. Das Material wurde chromatographiert [Hex/EtOAc (20:1)], wodurch 0,87 g (57,6 %) des Produkts als ein Öl erhalten wurden.
(S)-N-Methyl-3-(3-fluorphenyl)-3-[(2-methylphenyl)oxy]propylamin (Verbindung-235)
In einem 500-ml-Parr-Kolben (Parr-Apparatur) wurde einer Lösung des Chlorethers (0,435 g, 1,56 mmol) in Ethanol (10 ml) Methylamin (40 % wässr., 20 ml) zugegeben. Die Reaktion wurde verschlossen, auf 80 °C erhitzt und 24 h geschüttelt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur gekühlt, und die flüchtigen Substanzen wurden unter Vakuum abgezogen. Das resultierende Öl wurde in Diethylether gelöst, und die organische Phase wurde mit gesätt. wässr. NaCl (2 × 10 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch die rohe freie Base als ein Öl erhalten wurde.
Das Material wurde über Umkehrphasen-HPLC gereinigt (20–100 % Acetonitril in 0,1 % wässr. HCl, Gradient) und lyophilisiert. Das Amin-HCl-Salz wurde in CHCl₃ (50 ml) gelöst und mit gesätt. wässr. NaHCO₃ (10 ml) in die freie Base umgewandelt ("free based"). Das resultierende Öl wurde in EtOAc (5 ml) gelöst und eine Lösung von Maleinsäure (91 mg) in EtOAc (5 ml) wurde zugegeben. Die Lösung wurde zu einem Öl eingedampft, das langsam auskristallisierte, wodurch 275 mg des Endprodukts erhalten wurden.
Synthese der Verbindung 232
Die Verbindung 232 wurde ausgehend von im Handel erhältlichen Materialien in einer vierstufigen Reaktionsabfolge synthetisiert. In einer ähnlichen Abfolge wie bei der Herstellung der Verbindung 235 wurde das Grignard-Reagenz aus 3-Bromfluorbenzol mit Chlorpropionylchlorid in Gegenwart von Kupferbromid und Lithiumbromid umgesetzt, wodurch das Chlorfluorpropiophenon erhalten wurde. Einem in der Literatur von Srebnik, M., Ramachandran, P.V. und Brown, H.C. (J. Org. Chem., 1988, 53, 2916–2920) berichteten Verfahren folgend, wurde die Carbonylgruppe unter Verwendung von (+)-B-Chlordiisopinocampheylboran stereoselektiv reduziert. Anschließend wurde der resultierende enantiomere Alkohol über stereochemische Inversion in dessen Phenolether umgewandelt. Anschließend wurde die Chloridfunktionalität mit Methylamin umgesetzt, wodurch das Endprodukt erhalten wurde.
(S)-1-[3-Chlor-1-(3-fluorphenyl)propoxy]-4-trifluormethylbenzol
Einer Lösung von 4-(Dimethylamino)phenyldiphenylphosphin (1,98 g, 6,49 mmol) in THF (40 ml) wurde 3'-Chlor-3-fluorphenylpropanol (1,02 g, 5,41 mmol) gefolgt von para-Trifluormethylphenol (1,14 g, 7,03 mmol) zugegeben. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch in ein Eisbad gestellt und 10 min gerührt. Danach wurde Diisopropylazodicarboxylat (DIAD, 1,28 ml, 6,49 mmol) innerhalb eines Zeitraums von 1 min zugetropft. Danach wurde das Eisbad entfernt und das Reaktionsgemisch 4 h bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch in Diethylether (100 ml) gegossen und mit 1 M NaOH (2 × 25 ml), 1 M HCl (2 × 25 ml) und Salzlösung (25 ml) gewaschen. Die organische Phase wurde getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und eingeengt, wodurch 2,82 g eines Öls erhalten wurden, das beim Stehenlassen auskristallisierte. Das Material wurde chromatographiert [Hex/EtOAc (20:1)], wodurch 1,06 g (58,8 %) des Produkts als ein Öl erhalten wurden.
(S)-N-Methyl-3-(3-fluorphenyl)-3-[(4-trifluormethylphenyl)oxy]propylamin (Verbindung 232)
In einem 500-ml Parr-Kolben (Parr-Apparatur) wurde einer Lösung des Chlorethers (0,503 g, 1,51 mmol) in Ethanol (10 ml) wässriges Methylamin (40 % wässr., 20 ml) zugegeben. Die Reaktion wurde verschlossen, auf 80 °C (40 psig) erhitzt und 18 h geschüttelt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur gekühlt, und die flüchtigen Substanzen wurden unter Vakuum abgezogen. Das resultierende Öl wurde in Diethylether (100 ml) gelöst, die organische Phase mit gesätt. wässr. NaCl (2 × 10 ml) gewaschen, getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt, wodurch die rohe freie Base als ein Öl erhalten wurde. Das Material wurde über Kieselgel (0–10 % MeOH/CHCl₃, Gradientenelution) chromatographiert, wodurch 450 mg des Produkts als ein Öl erhalten wurden.
Das Material wurde ferner durch Umkehrphasen-HPLC (20 %–100 % Acetonitril in 0,1 % wässr. HCl, Gradient) gereinigt und lyophilisiert. Das Amin-HCl-Salz wurde in CHCl₃ (50 ml) gelöst und mit gesätt. wässr. NaHCO₃ (10 ml) in die freie Base umgewandelt ("free based"). Das resultierende Öl (230 mg) wurde in EtOAc (5 ml) gelöst und eine Lösung von Maleinsäure (81 mg) in EtOAc (5 ml) wurde zugegeben. Die Lösung wurde im Hochvakuum zu einem Öl eingedampft, das langsam auskristallisierte, wodurch 150 mg des Endprodukts erhalten wurden.
Synthese der Verbindung 225
Die Verbindung 225 wurde aus von im Handel erhältlichen Edukten in vier Stufen synthetisiert. 4-Trifluormethylbenzhydrol wurde zur Synthese des Benzhydrylacetonitrilethers mit Bromacetonitril unter basischen Phasentransferbedingungen umgesetzt. Anschließend wurde das Nitril zu dem primären Amin reduziert. Das Amin wurde in zwei Stufen N-methyliert, indem dessen entsprechendes Formamid reduziert wurde.
[1-Phenyl-1-(p-trifluormethylphenyl)methoxy]acetonitril
Eine Mischung von 4-Trifluormethylbenzhydrol (24,36 g, 97 mmol), Tetrabutylammoniumhydrogensulfat (0,45 g, 1,3 mmol), CH₂Cl₂ (40 ml) und 50 % wässr. NaOH (10,53 g NaOH, 263 mmol) wurde 1 h bei 20 °C gerührt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch auf 0 °C gekühlt und Bromacetonitril (12,5 ml, 179 mmol) zugetropft. Das Reaktionsgemisch wurde 3 h bei 0 °C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Diethylether (200 ml) verdünnt und mit Wasser gewaschen, bis die Waschlösungen neutral waren (10 × 50 ml). Die organische Phase wurde getrocknet (wasserfr. MgSO₄), filtriert und am Rotationsverdampfer eingeengt (33,73 g, 120 %). Das Material wurde durch Kieselgel chromatographiert (CHCl₃), wodurch 21,0 g (75 %) des Produkts als ein Öl erhalten wurden.
[1-Phenyl-1-(p-trifluormethylphenyl)methoxy]ethylamin
Zu Lithiumaluminiumhydrid (1,10 g, 29,0 mmol) wurde wasserfr. Diethylether (100 ml) zugegeben. Das Gemisch wurde 5 min im Argonstrom gerührt. Das vorstehend hergestellte Nitril (5,00 g, 17,2 mmol) in wasserfr. Diethylether (5 ml) wurde innerhalb eines Zeitraums von 2 min zugegeben (wobei der Nitrilbehälter mit 5 ml Diethylether gespült wurde). Die Reaktion wurde 30 min gerührt [DC (4:1 Hex/EtOAc) zeigte nach 15 min kein Edukt]. Dem Reaktionsgemisch wurden langsam Essigsäureethylester (5 ml), gefolgt von Wasser (1,1 ml), 5 M NaOH (1,1 ml), und anschließend weiterem Wasser (3,3 ml) zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde über Papier filtriert, und das Filtrat wurde getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt (75 °C), wodurch 4,25 g (83,8 %) des Produkts als ein Öl erhalten wurden. Das Öl wurde über Flash-Kieselgel flashchromatographiert (CHCl₃, 1:20 MeOH/CHCl₃, Stufengradient), wodurch 3,52 g (69,4 %) des Produkts als ein Öl erhalten wurden.
[1-Phenyl-1-(p-trifluormethylphenyl)methoxy]ethylaminformamid
Das vorstehend hergestellte primäre Amin (2,13 g, 7,21 mmol) wurde in Ethylformiat (40 ml, 500 mmol) gelöst. Die Reaktionslösung wurde 15 h unter Rückfluss erhitzt und anschließend am Rotationsverdampfer eingeengt. Hierdurch wurden 2,42 g (104 %) des Produkts als ein Öl erhalten. Dass Öl wurde über Flash-Kieselgel flashchromatographiert (Hexane, 1:1 Hex/EtOAc, EtOAc, Stufengradient), wodurch 1,71 g (73,3 %) des Produkts als ein Öl erhalten wurden.
N-Methyl-[1-phenyl-1-(p-trifluormethylphenyl)methoxy]ethylamin
Zu Lithiumaluminiumhydrid (0,30 g, 7,9 mmol) wurde wasserfr. Diethylether (20 ml) zugegeben. Das Gemisch wurde 5 min im Argonstrom gerührt. Das vorstehend hergestellte Formamid (1,68 g, 5,20 mmol) in wasserfr. Diethylether (5 ml) wurde innerhalb eines Zeitraums von 1 min zugegeben (wobei der Formamidbehälter mit 5 ml Diethylether gespült wurde). Die Reaktion wurde 20,5 h gerührt [DC (EtOAc) zeigte nach 4,5 h fast kein Edukt]. Dem Reaktionsgemisch wurden langsam EtOAc (0,3 ml), gefolgt von Wasser (0,3 ml), 5 M NaOH (0,3 ml) und anschließend weiteres Wasser (0,9 ml) zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde über Papier filtriert und das Filtrat getrocknet (wasserfr. Na₂SO₄) und am Rotationsverdampfer eingeengt (75 °C), wodurch 1,43 g (89,0 %) des Produkts als ein Öl erhalten wurden. Das Öl wurde über Flash-Kieselgel flashchromatographiert (EtOAc, 1:20 MeOH/CHCl₃, 1:1 MeOH/CHCl₃, Stufengradient), wodurch 0,91 g (57 %) des Produkts als ein Öl erhalten wurden. Das Material wurde in EtOAc (2 ml) gelöst und filtriert. Dem Filtrat wurde eine Lösung von Maleinsäure (0,31 g, 2,7 mmol) in EtOAc (5 ml) zugegeben. Der Lösung wurde Diethylether (15 ml) zugegeben. Kristalle wurden gebildet, filtriert, mit Diethylether (2 × 10 ml) gewaschen und im Hochvakuum getrocknet, wodurch 888 mg (40,2 %) des Maleatsalzes als ein feinkristalliner Feststoff erhalten wurden.

Claims

Verwendung einer Verbindung der folgenden chemischen Struktur:
wobei jedes X unabhängig voneinander aus -F, -Cl, -OCF₃ oder -CF₃ ausgewählt ist; Ar¹ und Ar² jeweils unabhängig voneinander aus Phenyl, Naphthyl, Thiofuranyl, Tetrahydronaphthyl, Furanyl, Tetrahydrofuranyl, Pyridyl, Chinolinyl, Isochinolinyl, Tetrahydrochinolinyl, Tetrahydroisochinolinyl, Cyclohexyl, Cycloheptyl und Cyclopentyl ausgewählt sind; jeder Rest R¹ -H ist; jeder Rest R² -H ist; ein Rest R³ -H ist und der andere Rest R³ entweder -H oder -CH₃ ist; jedes m gleich 1 ist; mit der Maßgabe, dass, wenn ein Rest R³ -H ist und der andere Rest R³ -CH₃ ist, dann beide X_m nicht 4-Cl sind; oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon; zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Depression bei einem Patienten.
Verwendung einer Verbindung der chemischen Struktur:
wobei X¹ entweder -Br, -Cl, -F, -I, -CF₃, Alkyl, -OH, -OCF₃, -O-Alkyl oder -O-Acyl ist; X² entweder -Br, -Cl, -F, -I, -CF₃, Alkyl, -OH, -OCF₃, -O-Alkyl oder -O-Acyl ist; und R³ entweder -H oder -CH₃ ist; oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon; zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Depression bei einem Patienten.
Verwendung nach Anspruch 2, wobei X¹-F, -Cl, -OCF₃ oder -CF₃ ist; und X² entweder 2-OCH₃, 2-CH₃, 3-F, 3-CF₃ oder 4-CF₃ ist.