DE69821995T2

DE69821995T2 - Antimikrobielle zusammensetzung

Info

Publication number: DE69821995T2
Application number: DE1998621995
Authority: DE
Inventors: Eugene Robert Snetterton RYAN; Sandra Snetterton MORRIS
Original assignee: Barrier Biotech Ltd
Current assignee: Barrier Biotech Ltd
Priority date: 1997-11-28
Filing date: 1998-11-30
Publication date: 2005-01-05
Anticipated expiration: 2018-12-01
Also published as: CA2311942A1; EP1049378A2; WO1999027793A2; GB9725291D0; CA2311942C; JP2001524501A; AU746206B2; PT1049378E; WO1999027793A3; DK1049378T3; JP4408563B2; EP1049378B1; ES2216328T3; DE69821995D1; AU1342899A; ATE260039T1; US6352702B1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft eine antimikrobielle Zusammensetzung, und insbesondere eine Zusammensetzung, deren wirksamer Inhaltsstoff natürliche oder essentielle Öle umfasst.
Essentielle Öle sind bis vor kurzem als antivirale oder antibakterielle Mittel verwendet worden. Beispielsweise wurde von Nelkenblütenölen kürzlich berichtet, dass sie antiseptische, antivirale und larvizide Fähigkeiten besitzen. EP 737 479 offenbart z. B. eine Insekten abstoßende Zusammensetzung zur Verwendung an Pferden, welche eine Anzahl essentieller Öle umfasst, während FR 2,706,770 essentielle Öle zur Behandlung von Tuberkulose verwendet. JP 6,116,111 A offenbart eine bakterielle Zusammensetzung, umfassend essentielle Öle zur Behandlung von Graukrätze, während US 5,629,281 ein Gemisch von Kräuterölen zur Behandlung von Kopfschmerzen lehrt.
Die vorstelligen Erfinder haben überraschenderweise herausgefunden, dass eine Zusammensetzung mit einer bestimmten Mischung aus essentiellen Ölen einen bestimmten synergistischen und antimikrobiellen Breitband-Effekt ausübt, wobei deren Zusammensetzung vorher nie beschrieben worden ist.
Deswegen wird gemäß einer ersten Ausführungsform der Erfindung eine antimikrobielle Zusammensetzung zur Verfügung gestellt, die in Volumen von 16 bis 40% Eukalyptusöl, 16 bis 40% Cajeputöl und 32 bis 56% Nelkenblütenöl umfasst. Die Zusammensetzung gemäß dieser Ausführungsform wird bevorzugt mit Wasser verdünnt, wobei die Zusammensetzung in diesem Fall bevorzugt von 10% bis 15% Eukalyptusöl, 10 bis 15% Cajeputöl, 15 bis 25% Nelkenblütenöl, 2,5 bis 7,5% Tensid und 40 bis 60% Wasser umfasst. Diese Zusammensetzung ist besonders vorteilhaft hinsichtlich ihrer antimikrobiellen Eigenschaften. Außerdem hat die Zusammensetzung ein besonders breites Spektrum und ist für Säugetiere, insbesondere Menschen, relativ ungiftig.
Bevorzugt hat die Zusammensetzung gemäß dieser Ausführungsform in Volumen 12,5% Eukalyptusöl, 12,5% Cajeputöl, 20% Nelkenblütenöl, 5% Tensid und 50% Wasser, oder eine Abweichung von + oder –10% hinsichtlich der Menge jeder der entsprechenden Inhaltsstoffe. In einer Ausführungsform kann das Tensid ein anionisches Tensid umfassen, welches ausgewählt sein kann aus einem aus Alkylarylsulfonaten, Alkansulfonaten, Alkohol und Alkoholethersulfonaten, Polyethercarboxylaten, Olefinsulfonaten, α-Sulfomonocarboxylestern und phosphorhaltigen anionischen Tensiden.
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung kann vorteilhafterweise in besonders rauen Umgebungen, wie beispielsweise bei Regenfällen oder ähnlichen, verwendet werden. Alternativ dazu kann sie beispielsweise in Wasser weiter verdünnt werden und von irgendeiner Menge bis zu einem Teil Desinfektionsmittel auf 200 Teile Wasser für die nachfolgende Anwendung in dem Gebiet oder Ort von Interesse. Ein solcher weiterer Verdünnungsschritt ist notwendig, wenn die Zusammensetzung der Anwendung am Menschen dient.
Eine oder mehrere weitere Inhaltsstoffe können gegebenenfalls in der erfindungsgemäßen Zusammensetzung eingeschlossen sein, um ästhetische oder andere günstige Eigenschaften zu bieten. Solche Inhaltsstoffe können z. B. zusätzliche antimikrobielle Mittel, deodorisierende Mittel, Farbstoffe, Duftstoffe, Emulgatoren und ähnliches einschließen. Ein weiterer Inhaltsstoff wie beispielsweise wasserfreies Lanolin kann in einer Menge von 10 bis 20 Vol% der Zusammensetzung hinzugegeben werden, wenn eine auf Creme basierende Anwendung gewünscht wird, wie beispielsweise in einer Fußcreme für Athleten. Wenn solches Lanolin eingeschlossen ist, kann die Menge Wasser auf eine ausreichende Menge eingestellt werden, um 100 Vol% der Zusammensetzung auszumachen.
Weitere essentielle Öle können in der erfindungsgemäßen Zusammensetzung enthalten sein.
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung kann vorteilhafterweise z. B. als Pulver oder ähnliches für eine folgende Hydratierung und Anwendung an der Stelle von Interesse bereitgestellt werden.
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung ist besonders vielseitig und aufgrund ihres relativen Fehlens an Toxizität für Menschen kann sie für viele Anwendungen am Menschen verwendet werden. Die erfindungsgemäße Zusammensetzung kann z. B. als Mundwasser, Erkältungslinderung, bei der Kopflauskontrolle, zur Linderung vaginaler Candidiasis, als Warzen- oder Schwielenbehandlung oder zur Behandlung von Füßen von Athleten verwendet werden. Die Zusammensetzung hat sich ebenfalls als besonders wirksam als Desinfektionsmittel und antimikrobieller Oberflächenreiniger herausgestellt.
Gemäß einem weiteren Aspekt der vorliegenden Erfindung wird ein Verfahren zum Kontrollieren von Mikroorganismen an einem Ort zur Verfügung gestellt, der nicht der Körper eines Menschen oder eines Tieres ist, wobei das Verfahren das Auftragen einer wirksamen Menge der Zusammensetzung gemäß der Erfindung hierauf umfasst. Der Begriff "Mikroorganismen", so wie er hier definiert wird, soll alle Bakterien, Viren, Pilze oder andere Einzel/zellulären/unizellulären oder proteinartigen Mittel bedeuten, die in der Lage sind, Erkrankungen oder Symptome an ein Tier oder Säugetier zu übertragen.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen haben sich auch als besonders vorteilhaft wirkend gegen Erkrankungen von Geflügel herausgestellt, wie beispielsweise gegenüber Newcastles-Erkrankung und auch gegen Pferde-Herpesvirus. Die wirksame Verdünnung der Zusammensetzung gegen Pferde-Herpesvirus gemäß dieser Erfindung kann bis zu ungefähr 1 Teil auf 200 Teile Wasser sein.
Die vorliegende Erfindung wird besser unter Bezugnahme auf die folgenden Beispiele der Erfindung verstanden, die nur als Beispiel angegeben werden.
Beispiel 1
Eine Desinfektionsmittelzusammensetzung, umfassend (in Volumen): ungefähr

Eukalyptusöl 12,5%

Cajeputöl 12,5%

Nelkenblütenöl 20%

Tensid 5%

Wasser 50%

wurde hergestellt und auf ihre antibakterielle Wirksamkeit für allgemeine Anwendungen gemäß BS6734: 1986 wie unten ausgeführt, getestet. Die Zusammensetzung wurde bei einer Verdünnung von 1 Teil Desinfektionsmittel auf 40 Teile Wasser, wie unter der Tiererkrankungsverordnung von 1978 (anerkannte Desinfektionsmittel) wie folgt zugelassen:

(a) die wirksame Konzentration des Desinfektionsmittels ist die, die, wenn sie zu einem Hefe-Organismengemisch gegeben wird, mindestens eine 104 Reduktion der bakteriellen Population ergibt, was die wirksame Konzentration mit dem folgenden Verfahren bestimmte.
(b) Der Test wurde unter Verwendung von Salmonella choleraesuis, (NCTC 10653, NCIB 10383) durchgeführt. Ausgangskulturen des Testorganismus können entweder als gefriergetrocknete Ampullen oder auf einem Nähragarboden gelagert werden, (Oxoid-Blut-Agar-Grundlage), welcher in Übereinstimmung mit "BS 6734: 1986, Bestimmung der antimikrobiellen Wirksamkeit von Desinfektionsmitteln für Veterinär- und landwirtschaftliche Verwendung" hergestellt wurde. Eine Testkultur wurde durch Inokulieren von 10 ml Oxoid-Nährbrühe Nr. 2 und Inkubieren bei 37 ± 1°C über 24 Stunden ± 2 Stunden hergestellt. Die 24-Stunden-Kultur sollte direkt vor der Verwendung aus dem Inkubator entnommen werden.

Eine Hefesuspension (5% Trockengewicht) wurde in Übereinstimmung mit BS 6734: 1986 hergestellt. Die Suspension wurde bei 4 ± 0,5°C aufbewahrt und ihr wurde ermöglicht, für 6 Wochen vor der Verwendung zu altern. 4 ml der S. choleraesuis Testsuspension wurden zu 96 ml der Hefesuspension hinzugegeben. 5 × 2,5 ml Portionen der erhaltenen Hefe/Organismensuspension werden in 15 mm × 150 mm Pyrex-Teströhrchen für jedes zu testende Desinfektionsmittel verteilt und auf 4°C abgekühlt.
Die Desinfektionsmittellösung wurde zu 123% in hartem Wasser vom WHO-Standard (BS 6734: 1986) hergestellt, und auf 4°C abgekühlt. 10 ml der gekühlten Desinfektionsmittellösung werden entnommen und 2,5 ml zu den ersten 2,5 ml der Hefe/Organismensuspension hinzugegeben. Das erhaltene Gemisch wurde dann gemischt, und die Suspension wurde in ein frisches, gekühltes Teströhrchen überführt. Das Röhrchen wurde anschließend für 30 min bei 4°C inkubiert. 10 ml gekühltes Wasser von WHO-Standard-Härte wurden zu der 123%igen Desinfektionsmittellösung hinzugegeben, um eine zweite Lösung mit 111% der empfohlenen Verwendungsverdünnung zu ergeben. 10 ml hiervon wurden dann entnommen und das Testverfahren oben wurde wiederholt, bis 100%, 90% und 81% Verdünnungen des Desinfektionsmittels getestet wurden.
Nach einer Kontaktzeit von 30 min wurden dann 0,1 ml der Desinfektionsmittel/Hefe/Organismensuspension zu 10 ml Nährlösung Nr. 2 hinzugegeben, die 5% Pferdeserum enthält, um jedes restliche Desinfektionsmittel zu inaktivieren. 5 × 1 ml Portionen der inaktivierten Lösung wurden anschliessend in 10 ml der Nährlösung Nr. 2 Erholungslösung überführt und die Röhrchen wurden für 48 Stunden bei 37°C inkubiert.
Nach 48 Stunden wurden die Röhrchen untersucht und das Vorhandensein oder die Abwesenheit von Wachstum wird aufgezeichnet. Die finale empfohlene Verwendungsverdünnung ist die, bei der 3 oder weniger Röhrchen von den 5 inokulierten ein Wachstum zeigten.
Beispiel 2
Tabellen 1 und 2 stellen das Ergebnis des Desinfektionsmitteltests T104 dar, der von der Veterinary Laboratories Agency against diseases of poultry (Newcastles-Erkrankung) bei einer Verdünnungsrate von 1 Teil Desinfektionsmittel auf 50 Teile Wasser durchgeführt wurde. Der Test ist ähnlich dem, der für allgemein verwendete Desinfektionsmittel durchgeführt wird, außer dass der Testorganismus Newcastle disease Virus, Stamm "Herts. 1933" ist.
Die Testmischungen wurden bei 4°C ± 0,5° für 30 min aufbewahrt, und am Ende dieser Zeit wurde eine Verdünnung in 5% inaktiviertem Pferdeserum gemacht. Weitere Verdünnungen wurden für Titrierungen des Virus in befruchteten Eiern gemacht. Das zu testende Desinfektionsmittel muss eine Reduktion von mindestens 10⁴ im Virustiter ergeben.
Der Test bestand aus (a) einem Toxizitätstest und (b) einem Virustest, unter Verwendung von 9 Tage alten bebrüteten Eiern.
(a) Toxizitätstest (um zu bestimmen, ob das zu testende Desinfektionsmittel gegenüber bebrüteten Eiern bei der niedrigsten zu verwendenden Verdünnung im Test, d. h. bei 1 : 400, toxisch ist
Testprotokoll

i) Die Desinfektionsmittel-Zusammensetzung gemäß Beispiel 1 wurde unter Verwendung von Wasser von WHO-Härte hergestellt.
ii) 2,5 ml des Desinfektionsmittels wurden zu einem gleichen Volumen einer 5%igen Trockengewichtsuspension an Hefe hinzugegeben, die wie unter B.S. 808: 1938 vorgeschrieben, hergestellt wurde.
iii) Nach gutem Mischen wurde die Testmischung bei 4°C ± 0,5°C über 30 min, und unter Schütteln in Intervallen stehen gelassen.
iv) Das Testgemisch wurde dann weiter 1 : 200 in 5% inaktiviertem (56°C für 30 min) Pferdeserum verdünnt, das unter Verwendung von sterilem destilliertem Wasser hergestellt wurde.
(v) 0,2 ml dieser Verdünnung wurden dann in die Allantoinhöhle von je 10 bebrüteten Eiern hinzugegeben. Die Kontrolleier wurden gleichermaßen mit der Hefesuspension inokuliert, die mit einem gleichen Volumen harten Wassers verdünnt war.
(vi) Alle Eier wurden über 7 Tage täglich untersucht und das Desinfektionsmittel wird als nicht-toxisch angesehen, wenn die Embryonen am Ende dieser Dauer am Leben geblieben waren.

(b) Virustest
Das Testvirus ist der "Herts 1933" Stamm des Newcastle disease virus, der bei –55°C aufbewahrt wird. Der Infektiösitätstiter des Virus, der verwendet wird, muss 10^9,0 ± 0,4 EID₅₀/0,1 ml Allantoinflüssigkeit sein.
Beide wurden gut gemischt und in ein frisches Behältnis überführt und anschließend bei 4°C ± 0,5°C über 30 min unter Schütteln in Intervallen stehen gelassen. Sie wurden dann 1 : 200 in 5% inaktiviertem Pferdeserum in sterilem destilliertem Wasser verdünnt. Weitere Verdünnungen wurden in logarithmischen Verdünnungsstufen unter Verwendung von 5% inaktiviertem Pferdeserum zur Virustitrierung hergestellt.
Die Titrierung wurde in bebrüteten Eiern, unter Verwendung von 7 Eiern je Verdünnung und dem Inokulieren von 0,2 ml in die Allantoinhöhle jedes Eis und dem Inkubieren bei 37,5°C durchgeführt.
Alle Eier wurden täglich über 7 Tage untersucht.
Alle Eier, die absterben oder nach 7 Tagen am Leben geblieben waren, wurden auf das Vorhandensein viralen Hämagglutonins getestet. Der Titrierungsendpunkt wurde durch das Verfahren von Reed und Muench (1938) Amer. J. Hyg. 27, 493 bestimmt.
Um einen Abfall im Infektiösitätstiter zu bestimmen, wurde der Titer des Testmaterials vom Titer des Kontrollmaterials abgezogen. Wenn dieser 10⁴ oder > 10⁴ ist, wird das Desinfektionsmittel angenommen, wenn er < 10⁴ ist, hat das Desinfektionsmittel versagt.
Die Selektion, durch die VLA, Weybridge, der Verdünnungen, die getestet werden sollen, wenn ein Hersteller nur eine Verdünnung für einen 3fach Verdünnungstest angibt sind wie folgt:

i) wenn die angenommene Verdünnung nicht mehr als 1 Teil Desinfektionsmittel auf 99 Teile Wasser ist, würde eine 10fache Verdünnungsserie jeder Seite der angenommen Verdünnung getestet werden, d. h., wenn eine angenommene Verdünnung 1 Teil je 29 Teile ist, wird der Test bei Endverdünnungen von 1 in 20; 1 in 30 und 1 in 40 durchgeführt).
ii) Wenn die angenommene Verdünnung größer als 1 Teil Desinfektionsmittel auf 99 Teile Wasser ist und nicht mehr als 1 Teil je 250 Teile Wasser, wird eine 20fache Verdünnungsserie getestet werden (d. h. wenn die angenommene Verdünnung 1 Teil auf 149 Teile Wasser ist, würde der Test bei Endverdünnungen von 1 : 130, 1 : 150 und 1 : 170 durchgeführt werden).

Desinfektionsmitteltest T104 Tabelle 1
Tabelle 2
Das Desinfektionsmittel gemäß dem vorliegenden Beispiel bestand den Test zur Zulassung als Desinfektionsmittel für Verwendungen gegen Geflügelerkrankungen bei einer Verdünnungsrate von 1 Teil Desinfektionsmittel auf 50 Teile Wasser.
Beispiel 3
Eine Desinfektionsmittel-Zusammensetzung wurde hergestellt, mit den gleichen Inhaltsstoffen wie in Beispiel 1 und für seine Wirksamkeit gegen Pferde-Herpesvirus getestet.
Das Testverfahren, das verwendet wurde, war das, welches in "Desinfektion von Tierviren" von Evans, Stuart und Roberts (Br Vet J, 1977, 133, 356) bereitgestellt wird, wie vom Animal Health Trust (AHT) durchgeführt.

Claims

Antimikrobielle Zusammensetzung, umfassend in Volumen: 16 bis 40% Eukalyptusöl, 16 bis 40% Cajeputöl und 32 bis 56% Nelkenknospenöl.
Antimikrobielle Zusammensetzung, umfassend in Volumen: 10 bis 15% Eukalyptusöl, 10 bis 15% Cajeputöl, 15 bis 25% Nelkenknospenöl, 2,5 bis 7,5% Tensid und 40 bis 60% Wasser.
Zusammensetzung gemäss Anspruch 2, wobei die Zusammensetzung in Volumen 12,5% Eukalyptusöl, 12,5% Cajeputöl, 20% Nelkenknospenöl, 5% Tensid und 50% Wasser umfasst.
Zusammensetzung gemäss einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei das Tensid ein anionisches Tensid ist.
Zusammensetzung gemäss Anspruch 4, wobei das anionische Tensid ausgewählt ist aus Alkylarylsulfonaten, Alkansulfonaten, Alkoholen und Alkoholethersulfonaten, Polyethercarboxylaten, Olefinsulfonaten, α-Sulfomonocarbonsäureestern und phosphorhaltigen anionischen Tensiden.
Zusammensetzung gemäss Anspruch 5, wobei das Tensid Natrium-2-ethylhexylsulfosuccinat umfasst.
Zusammensetzung gemäss einem der vorhergehenden Ansprüche, welche vor der Anwendung weiter verdünnt wird.
Zusammensetzung gemäss Anspruch 7, wobei bis zu 1 Teil dieser Zusammensetzung mit 200 Teilen Wasser verdünnt ist.
Zusammensetzung gemäss einem der Ansprüche 1 bis 8 zur Verwendung bei der Kontrolle von Newcastle-Erkrankung oder Equine-Herpesvirus.
Verfahren zum Kontrollieren des Vorhandenseins eines Mikroorganismus an einer Stelle, die kein Mensch oder Tierkörper ist, wobei das Verfahren das Auftragen einer wirksamen Menge einer Zusammensetzung gemäss einem der Ansprüche 1 bis 8 darauf umfasst.
Verfahren gemäss Anspruch 8, wobei der Mikroorganismus einen aus Equine-Herpesvirus oder denen, die für die Newcastle-Erkrankung verantwortlich sind, umfasst.
Verwendung einer Zusammensetzung gemäss einem der Ansprüche 1 bis 8 zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Equine-Herpesvirus oder der Newcastle-Erkrankung.