ES2216328T3 - Composicion antimicrobiana. - Google Patents

Abstract

Una composición antimicrobiana, que comprende, en volumen, de 16 a 40% de aceite de eucalipto, 16 a 40% de aceite de cayeputi y 32 a 56% de aceite de germen de trébol o comprende, en volumen, de 10 a 15% de aceite de eucalipto, 10 a 15% de aceite de cayeputi, 15 a 25% de aceite de germen de trébol, 2, 5 a 7, 5% de tensioactivo y 40 a 60% de agua. Una composición que comprende, en volumen, 12, 5% de aceite de 10% eucalipto, 12, 5% de aceite de cayeputi, 20% de aceite de germen de trébol, 5% de tensioactivo y 50% de agua.

Description

Composición antimicrobiana.

La presente invención concierne a una composición antimicrobiana y, en particular, a una composición de este tipo cuyo ingrediente activo comprende aceites naturales o esenciales.

Previamente se han usado aceites esenciales para uso como agentes antivirales o antibacterianos. Por ejemplo, previamente se ha descrito que aceites de germen de trébol tienen capacidades antisépticas, antivirales y larvicidas. Por ejemplo, el documento EP 737 479 describe una composición repelente de insectos para uso en caballos, que comprende cierto número de aceites esenciales, mientras el documento FR 2.706.770 utiliza aceites esenciales para el tratamiento de la tuberculosis. El documento JP 6.116.111 A describe una composición (anti)bacteriana que comprende aceites esenciales para el tratamiento de la sarna de Gray, mientras el documento US 5.629.281 enseña a usar una mezcla de aceites herbales para el tratamiento de los dolores de cabeza.

Los inventores de la presente han encontrado, sorprendentemente, que una composición con una mezcla particular de aceites esenciales exhibe un efecto antimicrobiano particularmente sinérgico y de amplio espectro y cuya composición nunca se había descrito previamente.

Por lo tanto, según un primer aspecto de la invención, se proporciona una composición antimicrobiana que comprende, en volumen, de 16 a 40% de aceite de eucalipto, de 16 a 40% de aceite de cayeputi y 32 a 56% de aceite de germen de trébol. La composición según esta realización se diluye preferiblemente con agua, en cuyo caso la composición comprende preferiblemente de 10 a 15% de aceite de eucalipto, 10-15% de aceite de cayeputi, 15-25% de aceite de germen de trébol, 2,5 a 7,5% de tensioactivo y de 40 a 60% de agua. Esta composición es particularmente ventajosa en términos de sus propiedades antimicrobianas. Además, la composición es particularmente de amplio espectro y es relativamente no-tóxica para los mamíferos, particularmente para los seres humanos.

Preferiblemente, la composición según esta realización comprende, en volumen, 12,5% de aceite de eucalipto, 12,5% de aceite de cayeputi, 20% de aceite de germen de trébol, 5% de tensioactivo y 50% de agua, o una desviación de + o - 10% en la cantidad de cada uno de los respectivos ingredientes. En una realización el tensioactivo puede comprender un tensioactivo aniónico que se puede seleccionar de cualquiera de alquilarilsulfonatos, alcanosulfonatos, alcohol y alcohol- éter sulfonatos, poliéter-carboxilatos, olefinsulfonatos, ésteres \alpha-sulfomonocarboxílicos y tensioactivos aniónicos que contienen fósforo.

La composición según la invención se puede utilizar ventajosamente para entornos particularmente adversos tales como por ejemplo desagües o similares. Alternativamente, se puede diluir adicionalmente, por ejemplo en agua y, a partir de aproximadamente 1 parte del desinfectante a 200 partes de agua, para la aplicación subsiguiente en el área o lugar de interés. La etapa de dilución adicional de este tipo es necesaria cuando la composición es para aplicación humana.

Se pueden incluir opcionalmente uno o más ingredientes distintos de los mencionados en la composición de la invención con el fin de proporcionar a la misma estética u otras propiedades beneficiosas. Los ingredientes de este tipo pueden incluir, por ejemplo, agentes antimicrobianos adicionales, desodorizantes, agentes colorantes, fragancias, emulsionantes y similares. Se puede proporcionar un ingrediente adicional, tal como lanolina anhidra, en una cantidad de 10 a 20% en volumen de la composición, cuando se desea una aplicación a base de crema como en una crema para el pie de atleta. Cuando se incluye una lanolina de este tipo, la cantidad de agua se puede ajustar a una cantidad suficiente para completar el 100% de la composición en volumen.

Se pueden incluir otros aceites esenciales en la composición según la invención.

La composición según la invención se puede proporcionar ventajosamente por ejemplo como polvo o similar, para hidratación subsiguiente y aplicación en el lugar de interés.

La composición según la invención es particularmente versátil y en virtud de su relativa ausencia de toxicidad para humanos, también se puede usar para muchas aplicaciones humanas. Por ejemplo, la composición de la invención se puede usar como colutorio, alivio de las llagas del frío, control de piojos, alivio de aftas vaginales, tratamiento de verrugas o excrecencias o para tratar el pie de atleta. También se ha encontrado que la composición es un desinfectante particularmente eficaz y un limpiador de superficies antimicrobiano.

Según un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un método para controlar micro-organismos en un lugar distinto del cuerpo humano o animal, método que comprende aplicar a dicho lugar una cantidad eficaz de una composición según la invención. El término "micro-organismo", según se define aquí, se interpretará que quiere dar a entender cualquier bacteria, virus, hongo u otro agente proteináceo o sencillo/celular/unicelular capaz de transmitir una enfermedad o síntomas de la misma a un animal o un mamífero.

También se ha mostrado ventajosamente que composiciones según la invención son particularmente eficaces frente a enfermedades de las aves de corral tales como, por ejemplo, la enfermedad de Newcastle y también frente al virus de herpes equino. La dilución eficaz de la composición frente a virus de herpes equino según la invención puede ser hasta aproximadamente 1 parte en 200 partes de agua.

La presente invención se puede entender más claramente con referencia a los siguientes ejemplos de la invención que se dan solamente a título de ejemplo.

Ejemplo 1

Se preparó una composición desinfectante que comprendía (en volumen):

Aceite de eucalipto	12,5%
Aceite de cayeputi	12,5%
Aceite de germen de trébol	20%
Tensioactivo	5%
Agua	50%

y se ensayó con respecto a su eficacia antibacteriana por los métodos generales según la norma BS6734:1986 como se indica más adelante. La composición pasó a una dilución de 1 parte de desinfectante en 40 partes de agua ensayada bajo según el Método 1978 de Disease of Animals (Desinfectantes Aprobados) como sigue:

(a) La concentración eficaz de desinfectante es la que, cuando se añade a la mezcla de organismo y levadura, da una reducción de al menos 10^{4} de población bacteriana que determina la concentración eficaz por el siguiente procedimiento.

(b) El ensayo se llevó a cabo usando Salmonella choleraesuis, (NCTC* 10653, NCIB# 10383). Los cultivos de reserva del organismo de ensayo se pueden almacenar tanto en ampollas liofilizadas como sobre taludes de agar nutriente (Base de Agar de Sangre Oxoid) preparados de acuerdo con "BS 6734:1986, Determinación de Eficacia Antimicrobiana de Desinfectantes para Uso Veterinario y Agrícola". Se preparó un cultivo de ensayo inoculando 10 ml de Caldo de Cultivo Nutriente de Oxoid Nº 2 e incubando a 37ºC \pm 1ºC durante 24 horas \pm 2 horas. El cultivo de 24 horas se debería extraer de la incubadora inmediatamente antes de uso.

Se preparó una suspensión de levadura (5% peso seco) en conformidad con BS 6734:1986. La suspensión se almacenó a 4ºC \pm 0,5ºC y se dejó envejecer durante 6 semanas antes de uso. Se añadieron 4 ml de suspensión de ensayo de S. choleraesuis a 96 ml de la suspensión de levadura. Se distribuyeron porciones de 5 x 2,5 ml de la suspensión resultante levadura/organismo en tubos de ensayo Pyrex de 15 mm x 150 mm para cada desinfectante bajo ensayo y se enfriaron a 4ºC.

Se preparó una solución del desinfectante a 123% en agua dura normalizada de la OMS (BS 6734:1986) y se enfrió a 4ºC. Se extrajeron 10 ml de la solución enfriada de desinfectante y se añadieron 2,5 ml a los primeros 2,5 ml de la suspensión levadura/organismo. Se mezcló luego la mezcla resultante y se transfirió la suspensión a un tubo de ensayo recién enfriado. Se incubó luego el tubo a 4ºC durante 30 minutos. Se añadieron 10 ml de agua dura normalizada de la OMS enfriada a la solución desinfectante al 123% para dar una segunda solución con 111% de la dilución de uso recomendada. Se extrajeron luego 10 ml de esto y se repitió el procedimiento de ensayo anterior hasta que se ensayaron diluciones de 100%, 90% y 81% del desinfectante.

Después de un tiempo de contacto de 30 minutos, se añadieron entonces 0,1 ml de la suspensión de desinfectante/levadura/organismo a 10 ml del Caldo de Cultivo Nutriente nº 2 que contenía 5% de suero de caballo para inactivar cualquier desinfectante residual. Se transfirieron luego porciones de 5x1 ml de la solución inactivada a 10 ml de caldo de cultivo de recuperación de Caldo de Cultivo Nutriente nº 2 y se incubaron los tubos a 37ºC durante 48 horas.

Después de 48 horas, se inspeccionaron los tubos y se registró la presencia o ausencia de crecimiento. La dilución final de uso recomendada es aquella en la que muestran crecimiento 3 tubos o menos del total de 5 inoculados.

*Obtenible de National Collection of Type Cultures, Central Public Health Laboratory, Colindale, Londres NW9 5HT.

#Obtenible de National Collection of Industrial and Marine Bacteria Ltd, Torrey Research Station, Aberdeen AB9 8DG.

Ejemplo 2

Las Tablas 1 y 2 ilustran el resultado del ensayo del desinfectante T104 llevado a cabo por la Agencia de Laboratorios Veterinarios frente a enfermedades de las aves de corral (enfermedad de Newcastle) a una tasa de dilución de 1 parte de desinfectante en 50 partes de agua. El ensayo es similar al que se llevó a cabo para los desinfectantes de los métodos generales anteriores excepto que el organismo de ensayo es el virus de la enfermedad de Newcastle, cepa "Herts. 1933".

Las mezclas de ensayo se mantuvieron a 4ºC \pm 0,5ºC durante 30 minutos y al cabo de este tiempo se hizo una dilución en suero de caballo inactivado del 5%. Se hicieron diluciones adicionales para titulaciones del virus en huevos embrionados. El desinfectante bajo ensayo tiene que dar una reducción de al menos 10^{4} en el título del virus.

El ensayo constaba de (a) un ensayo de toxicidad y (b) un ensayo de virus, usando huevos embrionados de 9 días de edad.

(a) Ensayo de Toxicidad

(Para determinar si el desinfectante bajo ensayo es tóxico para huevos embrionados a la dilución más baja que se ha de usar en el ensayo, esto es a 1 en 400).

Protocolo de Ensayo

i)

Se preparó la composición desinfectante según el Ejemplo 1 usando agua dura de la OMS.

ii)

Se añadieron 2,5 ml del desinfectante a un volumen igual de una suspensión al 5% en peso de levadura preparada según las instrucciones de B.S. 808:1938.

iii)

Después de mezclar a fondo, se mantuvo la mezcla de ensayo a 4ºC durante 30 minutos, agitando a intervalos.

iv)

A continuación, la mezcla se diluyó adicionalmente 1 en 200 en suero de caballo al 5% inactivado (56ºC durante 30 minutos) que se había preparado usando agua destilada estéril.

v)

A continuación, se inocularon 0,2 ml de esta disolución en la cavidad alantoidea de cada uno de los huevos embrionados. A continuación se inocularon los huevos de control de modo similar con suspensión de levadura diluida con un volumen igual de agua dura.

vi)

Todos los huevos se examinaron diariamente durante 7 días y se consideró el desinfectante como no tóxico si los embriones seguían vivos al final de este período.

(b) Ensayo del virus

El virus de ensayo es la cepa "Herts 1933" de virus de la enfermedad de Newcastle que se ha almacenado a -55ºC. El título de infectividad del virus usado tiene que ser 10^{9,0} \pm 0,4 EID_{50}/0,1 mm de fluido alantoideo.

Ensayo	Controles
1,0 ml de virus (fluido alantoideo) añadidos a 24,0	1,0 ml de virus (fluido alantoideo) añadidos a 24,0
ml de suspensión de levadura del 5% en peso seco.	ml de suspensión de levadura.
2,5 ml de mezcla levadura-virus añadidos a 2,5 ml	2,5 ml de mezcla levadura-virus añadidos a 2,5 ml
de desinfectante.	de agua dura de la OMS.

Ambos se mezclaron a fondo, se transfirieron a un nuevo recipiente y se mantuvieron subsiguientemente a 4ºC \pm 0,5ºC durante 30 minutos con agitación a intervalos. Se diluyeron luego 1 en 200 en suero de caballo inactivado del 5 por ciento en agua destilada estéril. Se prepararon diluciones adicionales para la titulación del virus en escalones logarítmicos de dilución, usando suero de caballo inactivado del 5 por ciento.

Se llevó a cabo la titulación en huevos embrionados, usando 7 huevos por dilución, inoculando 0,2 ml en la cavidad alantoidea de cada huevo e incubándolos a 37,5ºC.

Titulado:	sin diluir	Titulado	dilución 10^{-4}
	dilución 10^{-1}		dilución 10^{-5}
	dilución 10^{-2}		dilución 10^{-6}

Todos los huevos se examinaron diariamente durante 7 días.

Todos los huevos que habían muerto o que quedaban vivos después de 7 días se ensayaron con respecto a la presencia de hemaglutonina viral. El punto final de la titulación se determinó por el método de Reed y Muench (1938) Amer. J. Hyg. 27, 493.

Para determinar la caída en el título de infectividad, el título del material de ensayo se restó del título del material de control. Si éste es 10^{4} o >10^{4}, el desinfectante pasa, si es <10^{4}, el desinfectante falla.

La selección, por VLA, Weybridge, de las diluciones que se han de ensayar cuando un fabricante solamente especifica una dilución para un ensayo de triple dilución es la siguiente:

i)

Si la dilución estipulada no es más de 1 parte de desinfectante en 99 partes de agua, se debería ensayar una serie de diluciones de una decena a cada lado de la dilución estipulada, (por ejemplo, si la dilución estipulada es 1 parte en 29 partes de agua, el ensayo se lleva a cabo a las diluciones finales de 1 en 20; 1 en 30 y 1 en 40).

ii)

Si la dilución estipulada es mayor de 1 parte de desinfectante en 99 partes de agua y no más de 1 parte en 250 partes de agua, se debería ensayar una serie de diluciones de una veintena (por ejemplo, si la dilución estipulada es 1 parte en 149 partes de agua, el ensayo se debería llevar a cabo a las diluciones finales de 1 en 130; 1 en 150 y 1 en 170).

Ensayo de desinfectante T104 TABLA 1

Ensayo de toxicidad	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	Resultado
Dilución 1/50	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	No-Tóxico
Control	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-

TABLA 2

1

El desinfectante según el presente ejemplo pasó el ensayo para aprobación como desinfectante para usos frente a enfermedades de las aves de corral a una tasa de dilución de 1 parte de desinfectante en 50 partes de agua.

Ejemplo 3

Se preparó una composición desinfectante con los mismos ingredientes que para Ejemplo 1 y se ensayó con respecto a su eficacia frente al virus del herpes equino.

El método de ensayo usado fue el que se proporcionó en Disinfection of Animal Virus por Evans, Stuart y Roberts (Br vet J 1977, 133, 356), como se lleva a cabo por Animal Health Trust (AHT).

Virus usado en el ensayo:	EHV 1 (AB4 cepa abortogénica/paralítica
Células usadas en el ensayo:	Cultivos de tubo RK13.
	\begin{minipage}[t]{110mm}Medio retenido durante la absorción. Células lavadas con solución salina estabilizada con fosfato antes de alimentarlas.\end{minipage}
Diluciones usadas:	\begin{minipage}[t]{110mm}El desinfectante se diluyó a 1/25, 1/50, 1/100, 1/200 y 1/400 en agua dura antes de la adición del virus diluido en solución de levadura.\end{minipage}

Resultados:	Control de virus = 4,5 */por 0,1 ml
	Desinfectante a 1/25 = < 0,75/por 0,1 ml (desinfectante neto tóxico para las células)
	Desinfectante a 1/50 = < 0,50/por 0,1 ml (desinfectante neto tóxico para las células)
	Desinfectante a 1/100 = < 0,50/por 0,1 ml (desinfectante neto tóxico para las células)
	Desinfectante a 1/200 = < 0,50/por 0,1 ml (pequeña cubierta de células en la base del tubo)
	Desinfectante a 1/400 = 1,75/por 0,1 ml *log a TCID 50
Conclusión:	\begin{minipage}[t]{130mm}Sobre la base de la interpretación de la publicación anteriormente mencionada este desinfectante fue eficaz hasta una dilución de 1/200. Ésta es la dilución real del desinfectante antes de la adición del virus a la levadura.\end{minipage}

Claims (12)

1. Una composición antimicrobiana, que comprende, en volumen, de 16 a 40% de aceite de eucalipto, 16 a 40% de aceite de cayeputi y 32 a 56% de aceite de germen de trébol.

2. Una composición antimicrobiana, que comprende, en volumen, de 10 a 15% de aceite de eucalipto, 10 a 15% de aceite de cayeputi, 15 a 25% de aceite de germen de trébol, 2,5 a 7,5% de tensioactivo y 40 a 60% de agua.

3. Una composición según la reivindicación 2, composición que comprende, en volumen, 12,5% de aceite de eucalipto, 12,5% de aceite de cayeputi, 20% de aceite de germen de trébol, 5% de tensioactivo y 50% de agua.

4. Una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que dicho tensioactivo es un tensioactivo aniónico.

5. Una composición según la reivindicación 4, en la que dicho tensioactivo aniónico se selecciona de cualquiera de alquilarilsulfonatos, alcanosulfonatos, alcohol y alcohol-éter-sulfonatos, poliéter-carboxilatos, olefinsulfonatos, ésteres \alpha-sulfomonocarboxílicos y tensioactivos aniónicos que contienen fósforo.

6. Una composición según la reivindicación 5, en la que dicho tensioactivo comprende 2-etilhexil-sulfosuccinato de sodio.

7. Una composición según cualquier reivindicación precedente que se diluye adicionalmente antes de su aplicación.

8. Una composición según la reivindicación 7, que se diluye hasta 1 parte de la composición en 200 partes de agua.

9. Una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para uso en el control de la enfermedad de Newcastle o del virus de herpes equino.

10. Un método para controlar la presencia de microorganismos en un lugar distinto del cuerpo humano o animal, método que comprende aplicar a dicho lugar una cantidad eficaz de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

11. Un método según la reivindicación 10, en el que dichos micro-organismos comprenden cualquiera de los virus de herpes equino o de los responsables de la enfermedad de Newcastle.

12. El uso de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la fabricación de un medicamento para tratar herpes equino o enfermedad de Newcastle.