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GEBIET UND HINTERGRUND
DER ERFINDUNG
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Die
vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung einer Lipidzubereitung
für die
Herstellung eines Medikamentes zur Aktivierung des Immunsystems,
Die vorliegende Erfindung ist besonders nützlich für die Aktivierung des Immunsystems
in Stresssituationen, in denen die Aktivität des Immunsystems abnimmt.
Ein besonderes Beispiel der stressinduzierten Abnahme der Aktivität des Immunsystems
ist der Fall der Raucherentwöhnung.
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Es
gibt viele klinische Zustände,
worin die Aktivität
des Immunsystems abnimmt, was die Individuen empfänglicher
macht für
opportunistische Infektionen, Es ist auch bekannt, dass Stress,
der aus Verletzungen, aus der Rehabilitation, aus der Abhängigkeit
gegenüber
Drogen, Alkohol oder Rauchen resultiert, zu einer Abnahme der Immunsystemaktivität in Minuten
führen
kann, Zum Beispiel wurden starke Infektionen, die in der Folge schwerer
Verletzungen auftraten, dokumentiert.
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Es
ist eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, die Aktivität des Immunsystems
zu erhöhen,
um es aktiver zu halten, insbesondere in unter Stress stehenden
Individuen.
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ZUSAMMENFASSUNG
DER ERFINDUNG
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Gemäß der vorliegenden
Erfindung wurde überraschend
gefunden, dass ein natürliches
Lipidpräparat, das
mit Phosphatidsäure
(PA) angereichert ist, fähig
ist, das Immunsystem zu aktivieren, Diese Aktivität des PA-angereicherten Lipidpräparates,
von der man fand, dass sie mit der Abnahme der Aktivität des Immunsystems
zusammenhängt,
wurde in Individuen untersucht, die sich einer Raucherentwöhnungsbehandlung
unterzogen, Im folgenden werden verschiedene Ausdrücke verwendet,
und diese Ausdrücke
und ihrer Bedeutung im Zusammenhang mit der Erfindung sind wie folgt;
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PA-angereichertes
Lipidpräparat
(PA-E-LP) – ein
Lipidpräparat,
das mindestens 10 % (Gew.-/Gew.) PA enthält, bevorzugt im Bereich von
ungefähr
20 % bis 75% PA, aus dem Gesamtlipidgehalt der Zusammensetzung.
(Die Konzentrationsangabe von "%", die oben und unten
angegeben ist, bedeutet die Anzahl der Gewichtseinheiten eines Bestandteils
pro 100 Gew.-Einheiten der Gesamtzusammensetzung (Gew./Gew. ))
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Natürliches
PA-E-LP – ein
PA-E-EP abgeleitet von einem natürlichen
Lipidpräparat,
z. B. einem Phospholipidpräparat.
das sich aus Pflanzen, aus tierischen Geweben oder irgend einer
Kombination davon ableitet. Solche natürlichen Phosopholipidpräparate können sich
typischerweise ableiten von Sojabohnen, von Eigelb oder von tierischen
Seren. Das natürliche
PA-E-EP wird hergestellt aus einem natürlichen Phospholipidpräparat, typischerweise
durch ein enzymatisches Verfahren. In einem natürlichen PA-E-EP besteht der
Rest der Lipide hauptsächlich
aus Phospholipiden, obwohl geringe Mengen, z.B. 0,1–10% anderer
lipophiler Substanzen, wie Cholesterin, Fettsäuren, etc., ebenfalls im Präparat enthalten
sein können.
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Unter
Stress stehenden Individuen – Individuen,
die einer Situation oder einem Zustand wie Angst, physische Verletzungen,
Entwöhnung
von der Verwendung von Drogen, der Verwendung von Alkohol, Rauchen,
etc., ausgesetzt sind, was zu Stress Anlass gibt.
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Die
vorliegende Erfindung stellt die Verwendung eines Lipidpräparates
bereit, das sich auf eine natürlichen
Quelle ableitet, angereichert, so daß es mindestens ungefähr 10 %
PA, bevorzugt mindestens ungefähr 10
PA und am meisten bevorzugt ungefähr 50 % PA umfasst, für die Herstellung
eines Medikamentes zur Aktivierung des Immunsystems, Typischerweise übersteigt
die Konzentration des PA aus dem gesamten Lipidbestandteil nicht
75 %.
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Das
Medikament, das gemäß der Erfindung
hergestellt wird, ist besonders nützlich in der Aktivierung des
Immunsystems unter stressbezogenen Bedingungen, die die Verringerung
der Aktivität
des Immunsystems beinhalten. Beispiele solcher Stresszustände sind
eine Anzahl von Verletzungen, das Einstellen der Verwendung von
Drogen, Alkohol, Rauchen, etc.
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Das
Medikament, dass gemäß der vorliegenden
Erfindung hergestellt wird, ist zur Verwendung in einem Verfahren
zur Aktivierung des Immunsystems in einem bedürftigen Individuum, das die
Verabreichung einer wirksamen Menge von PA-E-LP, insbesondere natürlichem
PA-E-LP an das Individuum umfasst.
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Der
Ausdruck „wirksame
Menge" ist als Menge
des Bestandteils zu verstehen, die ausreichend ist, den gewünschten
therapeutischen Effekt hervorzurufen, Zum Beispiel führt die
Verabreichung einer wirksamen Menge der pharmazeutischen Zusammensetzung
der Erfindung an ein Individuum zu einem Anstieg des Aktivierungsniveaus
des Immunsystems. Das Aktivierungsniveau kann z. B, gemessen werden
durch das Blutplasmaniveau von gamma-Interferon (γ-IFN), das
somit als Anzeige dienen kann, um die wirksame Menge zu bestimmen.
Der Ausdruck „Aktivierung
des Immunsystems" oder
ein ähnlicher
Ausdruck bezieht sich auf einen Anstieg des Aktivierungsniveaus
der Immunzellen in der Entgegenwirkung gegenüber pathogenen oder pathologischen
Prozessen, einem Anstieg im Sekretionsniveau oder der Produktion
verschiedener Zytokine dadurch, die die Aktivität der Immunzellen, etc. ansteigen
lassen.
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Das
Medikament, das gemäß der vorliegenden
Erfindung hergestellt wird, nimmt die Form einer pharmazeutischen
Zusammensetzung an, die typischerweise oral verabreicht wird, obwohl
sie auch für
die topische oder parenterale Verabreichung formuliert werden kann.
Für die
orale Verabreichung kann die Zusammensetzung verschiedene Aromastoffe,
essbarer Farbstoffe, etc. enthalten. Weiterhin kann die Zusammensetzung
für die
orale Anwendung auch gekapselt sein, z. B. in einer Magensaftresistenten
Gelatinekapsel. Die Zusammensetzung kann eine Anzahl von pharmazeutisch
verträglichen
Trägern,
Verdünnungsmittel
oder Exzipienten enthalten, die ausgewählt werden können, basierend
auf dem gewünschten
Verabreichungsmodus der Zusammensetzung. Die parenterale Verabreichung
der Zusammensetzung wird typischerweise intravenös injiziert (i.v.). Solche
parenterale Zusammensetzungen können
z. B. Sojabohnen-Multitriglyzeride, Eiphosopholipide, PA hergestellt
gemäß der Erfindung,
Glyzerin und destilliertes Wasser enthalten, Eine topische Zusammensetzung
kann in der Form eines Gels oder einer Salbe vorliegen, und kann
daher verschiedene Additive umfassen, die per se bekannt sind, um
die Zusammensetzung in einer solchen physikalischen Form zu erhalten
(z.B. Gelierungsmittel).
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Das
natürliche
PA-E-LP wird bevorzugt erhalten aus einem natürlichen Phospholipidpräparat durch enzymatische
Behandlung unter Verwendung synthethischer oder natürlicher
Quellen, die das Enzym Phospholipase-D umfassen. Die natürlichen
Phosopholipidpräparate
können
pflanzlichen Ursprungs oder tierischen Ursprungs sein oder eine
Kombination davon. Typische Beispiele natürlicher Phospholipidpräparate die nützlich für die Herstellung
von natürlichem
PA-E-LP der Erfindung sind, sind Ei-Lezithin, Eigelb und Phospholipide
aus tierischen Seren. Beispiele von Phospholipase-D-Quellen sind
Erdnüsse,
typischerweise gemahlene Erdnüsse
oder Phospholipase-D-Fraktionen, die sich davon ableiten, Phospholipase-D
oder Phospholipase-D-Quellen werden in einer Menge zugegeben, für einen
Zeitraum, der ausreichend ist, mindestens ungefähr 10 %, bevorzugt ungefähr 25 %
und noch bevorzugter ungefähr
50 der Phospholipide zu hydrolisieren, um PA-E-LP zu ergeben.
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Die
vorliegende Erfindung wird nun im Hinblick auf die nichteinschränkenden
Beispiele mit gelegentlicher Referenz zu den beigefügten Abbildungen
veranschaulicht.
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KURZE BESCHREIBUNG
DER ABBILDUNGEN
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1 ist eine schematische
Darstellung, die die Herstellung der PA-angereicherten Mischung
der Erfindung zeigt. Wie aus der Abbildung zu sehen ist, beträgt das Verhältnis der
Ausgangsmaterialien (Erdnüsse, Sojalezithin
und Wasser) 1 ; 1 ; 7,5.
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2 ist eine schematische
Darstellung, die die Trennung der Lipidphase der PA-Mischung, hergestellt
durch die Reaktion, die in 1 gezeigt
ist, zeigt.
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3 ist eine schematische
Darstellung, die die Herstellung der PA-Mischung der Erfindung hergestellt
wie in den 1 und 2 beschrieben, in geeigneter
Form für
das Füllen
von Behältern
zeigt.
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4 ist eine schematische
Darstellung, die die Herstellung von Tabletten aus der PA-Mischung zeigt,
wie sie in den 1 und 2 hergestellt wurde.
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5 zeigt ein Bildungsprofil
des PA während
der enzymatischen Hydrolyse der Sojabohnenphospholipide (die Ergebnisse
sind als % der gesamten Zusammensetzung gezeigt).
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Beispiel 1 : Herstellung
der PA-Mischung
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(a) Herstellung des Reaktionsproduktes
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1 zeigt schematisch das
Verfahren zur Herstellung der PA-Mischung
gemäß der Erfindung.
Wie zu sehen ist, sind die Ausgangsmaterialien die folgenden;
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- 1. 150 gr gemahlene, frische Erdnüsse als
Ursprung der Phospholipase D.
- 2. 150 gr granuliertes Sojalezithin als Ursprung der Sojabohnenphospholipide.
- 3. Nasser, mit dem auf 1 000 ml aufaddiert wird.
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Die
oben erwähnten
Ausgangsmaterialien wurden in einem Fleischmischer gemischt, homogenisiert und
anschließend
wurde der pH der Mischung auf pH 5,3–5,4 durch Zugabe von Calciumlactat,
Sorbat, Benzoat, Ascorbinsäure,
Zitronensäure
und einem Antioxidationsmittel (jeweils in den in der Abbildung
angegebenen Mengen) eingestellt. Die Mischung wurde dann unter kontinuierlichem
Mischen für
4 Stunden bei 36–38°C umgesetzt,
wonach der pH erneut eingestellt wurde auf 3,9 durch Zugabe von
Zitronensäure
und Zucker in den in der Abbildung beschriebenen Mengen. Die Mischung
wurde dann bei 4°C über Nacht
gelagert.
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(b) Abtrennung der Lipidfraktion
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Die
durch das obige Verfahren erhaltene Reaktionsmischung wurde dann
weiter durch das schematischen 2 gezeigte
Verfahren abgetrennt. Wie in der Abbildung zu sehen ist, wird das
Reaktionsprodukt drei Haupttrennungen unterworfen (bezeichnet als
Trennungen I, II und III in der Abbildung), worin im allgemeinen
bei jeder Abtrennung die wässrige
Phase der Mischung vom Boden entfernt wird, bis schließlich die abgetrennte
Lipidphase isoliert wird und in einem Kühlschrank (–18°C) gelagert wird.
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(c) Herstellung der Lipidzusammensetzung
für das
Befüllen
von Behältern
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Die
Lipidmischung, die durch die obige Abtrennung erhalten wurde, wurde
verschiedene zusätzlichen Verfahren
unterworfen, wodurch sie für
die Befüllung
von Behältern
zubereitet wurde. Wie in 3 zu
sehen ist, wurde die Lipidmischung, die durch das obige Abtrennverfahren
erhalten wurde, zunächst
aufgetaut und anschließend
durch Erwärmen,
Abkühlen,
Homogenisieren und Mischen, wie in Abbildung III gezeigt, behandelt,
um eine Zusammensetzung zu bilden, die für das Befüllen von Behältern geeignet
war. Die typische Größe der Behälter war
ein halber Liter, und die Behälter
wurden dann bei 4°C
gelagert.
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(d) Herstellung von PA-enthaltene
Tabletten
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Die
PA-Mischung, erhalten durch das obige Verfahren beschrieben in den
Beispielen 2(a)–2(c)
oben und in den 1–3 gezeigt, kann auch in Tabletten
verarbeitet werden, Das Verfahren zur Herstellung von Tabletten,
die die PA-Mischung umfassen, ist in 4 gezeigt.
Wie in 4 zu sehen ist,
wird die Phospholipidpaste, die durch das obige Verfahren erhalten
wurde, zunächst
aufgetaut, anschließend
erwärmt,
und der pH der Mischung auf einen hohen pH von ungefähr 9 eingestellt.
Nach der Zugabe von Zinkacetat zur Mischung, erscheint ein weißes Sediment,
das nach Waschen und Trocknen in Tabletten formuliert wird.
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(e) Profil der PA-Bildung
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Das
Profil der Bildung der PA ist in 5 gezeigt,
Wie zu sehen ist, wurden ungefähr
nach 24 Stunden mehr als 80 % des Sojabohnenphospholipids hydrolysiert,
was zu einem PA-angereicherten Präparat führte.
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Beispiel
2: Wirkung auf eine PA-E-LP-Zusammensetzung mit ansteigendem gamma-Interferonniveaus in
Individuen, die eine Raucherentwöhnungsbehandlung
unterzogen wurden.
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(a) Untersuchungsdesign
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Zigarettenraucher mit 20 bis 40 Zigaretten pro Tag, die sich freiwillig
für die
Studie angemeldet hatten, wurden zufällig in zwei Gruppen eingeteilt:
eine Gruppe, die aus 16 Individuen bestand, erhielt eine tägliche Dosis
von 1 2 gr (oral verabreicht) der PA-E-LP-Zusammensetzung, hergestellt
gemäß Beispiel
1, enthalten 50 % PA; und die zweite Gruppe, die als Kontrolle diente,
erhielt eine Placebobehandlung. Die Individuen beider Gruppen gaben
das Rauchen während
der Studie auf.
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Die
Konzentrationen von γ-IFN
in Plasma, wurden in den Individuen beider Gruppen vor und nach
der Raucherentwöhnung
gemessen. Das γ-IFN
Niveau wurde gemessen unter Verwendung des QUANPIKINETM (R&D Systems Inc.,
USA)-Kit untersucht.
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(b) Ergebnisse
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sDie γ-IfN-Konzentrationen
in den beiden Gruppen vor und nach der Behandlung ist in der folgenden Tabelle
1 gezeigt.
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Wie
aus dem obigen zu sehen ist, stieg die Blutplasma-γ-IFN-Konzentration in
der Gruppe, die PA-E-LP enthielt, während die Konzentration des
Plasma-γ-IFN
in der Placebo Gruppe niedriger war, als die Konzentration vor der
Behandlung.
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Es
ist darauf hinzuweisen, dass das Blutplasma-γ-IFN-Niveau ein Indikator für den Aktivierungszustands
des Immunsystems ist.
