DE69713089T2 - Verfahren zur herstellung von immunoaktiven mittel und impfstoffe - Google Patents
Verfahren zur herstellung von immunoaktiven mittel und impfstoffeInfo
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Description
- Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von immunogenen Produkten, die als immunisierende Komponenten in Vakzinen brauchbar sind. Weiterhin betrifft die Erfindung solche immunogenen Produkte und Vakzine und Vakzinmischungen. Die immunogenen Produkte der Erfindung bestehen aus als Antigen wirkenden Kohlenhydrateinheiten, die über eine neue gefundene Brücke an immunologisch aktive Träger gekoppelt sind.
- Die meisten virulenten Bakterien weisen Kohlenhydrate wie Lipopolysaccharide und Kapselpolysaccharide auf ihrer Oberfläche auf. Gegen Kapselpolysaccharide gerichtete Antikörper gewährleisten unter anderem eine verstärkte Phagocytose und Abtötung von Bakterienzellen. Gewöhnlich gibt es eine Anzahl Serotypen einer gegebenen Bakterienspezies, zum Beispiel gibt es mehr als 80 bekannte Serotypen von Streptococcus pneumoniae, die durch ihre Kohlenhydratkapselstrukturen verwandt sind.
- Bakterien-Polysaccharide sind klassische Beispiele für Antigene, die nicht von T-Helferzellen abhängig sind, und daher induzieren sie, wenn sie überhaupt immunogen sind, hauptsächlich die IgM-Klasse von Antikörpern. Dies ist so, weil nur B-Zellen auf sie reagieren, und B-Zellen können im Gegensatz zu den T- Zellen, die auch immunologische Auffrischungseffekte übertragen, die Gedächtnisfunktion nicht übertragen.
- Es ist bekannt, dass Polysaccharide bei immunologisch unentwickelten kleinen Kindern, älteren Personen und Personen mit unterdrücktem Immunsystem schlechte Immunogene oder überhaupt nicht immunogen sind.
- Daher sind Polysaccharid-Antigene, die mit T-Zellen-Epitope umfassenden Trägern chemisch konjugiert sind, als Vakzine auch für die oben erwähnten immunlogisch unentwickelten Kinder und Erwachsenen mit unterdrücktem Immunsystem wirksam.
- Die vakzinproduzierende Industrie sucht seit langem nach einem allgemeinen Verfahren zur Herstellung von Vakzinen vom Konjugattyp. Ein allgemeines und einfaches Verfahren zur Herstellung solcher Vakzine wäre nicht nur praktisch, sondern würde auch das Verfahren und die Qualitätskontrolle erleichtern.
- Die vorliegende Erfindung macht ein allgemeines Verfahren zur Herstellung immunogener, als Antigen wirkender Kohlenhydrateinheiten und immunologisch aktive Träger umfassender Produkte verfügbar, wobei die Produkte als immunisierende Komponenten in Vakzinen vom Konjugattyp brauchbar sind.
- Insbesondere macht die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Herstellung eines immunogenen Produkts verfügbar, umfassend als Antigen wirkende Kohlenhydrateinheiten und immunologisch aktive Träger, wobei die Produkte als immunisierende Komponenten in Vakzinen vom Konjugattyp brauchbar sind.
- Insbesondere macht die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Herstellung eines immunogenen Produkts verfügbar, das aus als Antigen wirkenden Kohlenhydrateinheiten (active carbohydrate moieties, ACM) besteht, die jeweils kovalent über identische zweiwertige Brückengruppen an Aminogruppen enthaltende, immunologisch aktive Träger (immunologically active carriers, IAC) gebunden sind, wobei die zweiwertige Brückengruppe die folgende Strukturformel aufweist
- umfassend die Schritte der
- reduktiven Aminierung von als Antigen wirkenden Kohlenhydrateinheiten (ACM) zur Einführung von Aminogruppen an die Einheiten (ACM-NH&sub2;), gefolgt von der Thiolierung der Aminogruppen mit Iminothiolan
- wonach die so erzeugten thiolierten Produkte an immunologisch aktive Träger (IAC), die durch eine Behandlung mit N-Hydroxysuccinimidbromacetat aktivierte Aminogruppen enthalten, chemisch gekoppelt werden, wodurch das gewünschte immunogene Produkt erzeugt wird.
- Weiterhin macht die vorliegende Erfindung ein immunogenes Produkt verfügbar, das aus als Antigen wirkenden Kohlenhydrateinheiten (ACM) besteht, die über identische, zweiwertige Brückengruppen an Aminogruppen enthaltende, immunologisch aktive Träger (IAC) kovalent gekoppelt sind, wobei die zweiwertige Brückengruppe die folgende Strukturformel
- aufweist.
- Das immunogene Produkt der Erfindung ist als immunisierende Komponente in Vakzinen brauchbar.
- In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung stammen die als Antigen aktiven Kohlenhydrateinheiten (ACM) der immunogenen Produkte von bakteriellen O-Polysacchariden und/oder Kapselpolysacchariden. Spezielle Beispiele solcher Saccharide sind diejenigen, die von den Salmonella-Serotypen BO und/ oder DO stammen.
- In einer anderen bevorzugten Ausführungsform stammen die als Antigen wirkenden Kohlenhydrateinheiten (ACM) von verschiedenen Serotypen von Streptococcus-pneumoniae-Kapselpolysacchariden.
- In noch einer anderen bevorzugten Ausführungsform stammen die als Antigen wirkenden Kohlenhydrateinheiten (ACM) von Haemophilus-influenzae- Kapselpolysacchariden.
- Die als Antigen wirkenden Kohlenhydratreste (ACM) können synthetisch hergestellt werden.
- Die immunologisch aktiven Träger (IAC) des immunogenen Produkts der Erfindung stammen vorzugsweise von Polypeptiden.
- In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung handelt es sich beim Polypeptid um Tetanustoxoid, Diphterietoxoid, die Cholera-Untereinheit B oder Protein D von H. influenzae.
- Die Erfindung umfasst auch die Verwendung eines erfindungsgemäßen immunogenen Produkts zur Herstellung von humanen oder tierischen Vakzinen.
- Weiterhin umfasst die Erfindung Vakzine, bei denen die immunisierende Komponente ein erfindungsgemäßes immunogenes Produkt ist, und Vakzinmischungen, die wenigstens zwei verschiedene erfindungsgemäße Vakzine umfassen.
- Die Vakzine können zusätzlich andere, von den Gesundheitsbehörden zur Verwendung in Vakzinen genehmigte Komponenten wie Adjuvantien enthalten.
- Die Erfindung wird weiter durch die folgenden, nicht einschränkenden Beispiele erläutert.
- Ein Salmonella-typhimuriu-Octasaccharid (4,1 umol; 7,5 mg) wurde in 1 ml 0,6 M NH&sub4;Cl gelöst, und dann wurden 20 mg NaCNBH&sub3; unter Rühren bei Raumtemperatur zugegeben. Nach 6 Tagen wurde das aminhaltige Derivat durch Gelpermeationschromatographie an BioGel® P-2 (BioRad®) entsalzt und gefriergetrocknet. Das Salmonella-typhimuriu-Octasaccharidderivat wurde dann in 0,5 ml eines 0,1 M Natriumhydrogencarbonatpuffers (pH-Wert 8,2) gelöst. Ein 10-molarer Überschuss von 2-Iminothiolan (Aldrich, Steinheim, Deutschland) und 5 mg Dithiothreitol wurde zugegeben, und die Reaktionsmischung wurde 10 h bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wurde dann einer Gelpermeationschromatographie an einer Bio-Gel®-P-2- (BioRad®, Schweden) Säule (1,5 · 20 cm, eluiert mit 25 mM Pyridiniumacetatpuffer (pH-Wert 5,2)) unterzogen. Die erhaltenen Fraktionen wurden mittels der Phenol-Schwefel- Methode auf ihren Kohlenhydratgehalt und mit 5,5'-Dithiobis(2-nitrobenzoesäure) (Pierce, Inc., Rockford, Ill., USA) untersucht. Es erwies sich, dass die Kohlenhydrate enthaltenden Fraktionen mit den thiolhaltigen Fraktionen in den erwarteten molaren Anteilen übereinstimmten, und dadurch konnte belegt werden, dass die Reaktion äquimolar verlief. Diese Fraktionen wurden vereinigt und durch Verdampfen im Vakuum konzentriert, gefolgt vom Aufblasen von Stickstoff auf das konzentrierte Octasaccharidderivat.
- N-Hydroxysuccinimidbromacetat (Sigma Inc., St. Louis, MO, USA) (5 mg) wurde in 0,4 ml eines 0,1 M Natriumhydrogencarbonatpuffers (pH-Wert 8,3) gelöst. Zu dieser Lösung wurden unter Rühren 2,5 mg Tetanustoxoid, gelöst in 1,0 ml 0,1 M Natriumhydrogencarbonatpuffer (pH-Wert 8,3) gegeben. Man ließ die Reaktion 8 h lang bei Raumtemperatur (24ºC) laufen. Dann wurde die Reaktionsmischung einer Gelpermeationschromatographie an einer Sephadex®-G-25- (PD-10) (Pharmacia, Uppsala, Schweden) Säule unterzogen, die mit 0,1 M Natriumhydrogencarbonatpuffer (pH-Wert 8,3) eluiert wurde. Das gewünschte Produkt enthaltende Fraktionen wurden gesammelt.
- Das bromalkylierte Tetanustoxoid (1 mg) in 1,0 ml eines 0,1 M Natriumhydrogencarbonatpuffers (pH-Wert 8,3) wurde mit 5 mg des Mercaptobutyrimidyl-Derivats des Octasaccarids, gelöst in 0,1 M Natriumhydrogencarbonatpuffer (pH-Wert 8,3) vermischt und damit gerührt. Man ließ die Reaktion 24 h unter Stickstoff bei Raumtemperatur (24ºC) laufen. Das resultierende Konjugat wurde dann gegen Kochsalzlösung dialysiert. Schließlich wurde das Konjugat gefriergetrocknet, und Messungen des Kohlenhydratgehalts bzw. des Proteingehalts zeigten, dass das resultierende Konjugat im Durchschnitt eine Substitution von 17,5 mol Kohlenhydrat/mol Tetanustoxoid aufwies. Das Konjugat wurde weiterhin durch Polyacrylamid-Gelelektrophorese im Pharmacia Phast®-System (Pharmacia, Uppsala, Schweden) charakterisiert, wodurch sich ergab, dass das Konjugat eine Migration aufwies, die erwartungsgemäß mit einem Substitutionsgrad von etwa 15-20 mol Kohlenhydrat/mol Tetanustoxoid übereinstimmt.
- Das Haemophilus-influenza-Typ-B- (HiB-)Kapselpolysaccharid (15 mg) wurde durch Oxidation in 0,02 M Natriumperiodat (4 ml) 30 min lang bei 4ºC fragmentiert. Die Reaktion wurde durch Zugabe von 20 ul Ethylenglycol gestoppt, und das HiB-Oligosaccharid (HiB-OLS) wurde durch Gelpermeationschromatographie in BioGel® P-2 isoliert. Die Molmasse des erhaltenen HiB-OLS betrug 1,1 kDa, wie sich durch Chromatographie an einer mit Dextranen kalibrierten BioGel®-P- 2-Säule ergab. Das HiB-OLS (12 mg) wurde gefriergetrocknet und in 0,5 ml 0,4 M Ammoniumchlorid gelöst, das 5 mg Natriumcyanoborhydrid enthielt. Die Mischung wurde 6d bei 37ºC gerührt. Aminiertes HiB-OLS wurde an einer BioGel®-P-2-Säule isoliert, mit Pyridiniumacetatpuffer eluiert, gefriergetrocknet und in 0,5 ml 0,1 M Hydrogencarbonatpuffer, pH-Wert 8,3, gelöst. Festes 2- Iminothiolanhydrochlorid (9 mg) wurde zur gerührten HiB-OLS-Lösung gegeben, und die Reaktion wurde 6 h lang bei Raumtemperatur fortgesetzt. Das Mercaptobutyrimidat-Derivat von HiB-OLS wurde durch Chromatographie in BioGel® P-2 isoliert. Das gefriergetrocknete Derivat wurde in 2 ml 0,1 M Hydrogencarbonat - 2 mM EDTA, pH-Wert 8,3, gelöst.
- Gereinigtes Protein D von H. influenzae (Janson et al., Infect. Immunity, 59; 119; 1991) wurde in 1 ml 0,1 M Hydrogencarbonat, pH-Wert 8,3 (5 mg/ml) gelöst. N-Hydroxysuccinimidester von Bromessigsäure (3 mg) wurde in 50 ul Dimethylformamid (DMF) gelöst und zur gerührten Protein-D-Lösung gegeben. Der pH-Wert wurde auf 8,3 gebracht, und das Rühren wurde 2 h lang fortgesetzt. Das bromacetylierte Protein D wurde vom Reagenzienüberschuss durch Dialyse gegen destilliertes Wasser getrennt und durch Ultrafiltration konzentriert.
- Die Lösung des bromacetylierten Proteins D in 0,1 M Hydrogencarbonat- 2 mM EDTA (4,7 mg in 0,5 ml) wurde tropfenweise zur gerührten Lösung von thioliertem HiB-OLS gegeben, der pH-Wert wurde auf 8,3 eingestellt, und die Reaktion wurde 24 h lang unter Stickstoff bei Raumtemperatur durchgeführt. Das Fortschreiten der Kopplungsreaktion wurde mit SDS-PAGE in 4-15% Polyacrylamid- Gradientengelen (Phast® System, Pharmacia) überwacht. Die Reaktion wurde durch Zugabe von 20 ul 2-Mercaptoethanol beendet, und das Konjugat wurde durch extensive Dialyse gegen destilliertes Wasser vom Reagentienüberschuss befreit. Die Kohlenhydrat- und Proteinanalyse des resultierenden HiB(OLS)-TTd- Konjugats offenbarte einen Substitutionsgrad von 6 mol Kohlenhydrat/mol Protein.
- Ein komplett synthetisches Aminoderivat von Ribosylribitolphosphatdecamer (RRP&sub1;&sub0;) wurde in 0,1 M Hydrogencarbonat, pH-Wert 8,3 (5 mg in 1 ml) gelöst.
- Festes 2-Iminothiolanhydrochlorid (2,3 mg) wurde zur gerührten RRP&sub1;&sub0;-Lösung gegeben. Nach 6 h bei Raumtemperatur wurde das thiolierte RRP&sub1;&sub0; an einer BioGel®-P-2-Säule gereinigt, gefriergetrocknet und als nächstes in 0,4 ml 0,1 M Hydrogencarbonat, pH-Wert 8,3, gelöst.
- Albumin-Rinderserum (BSA) wurde in 0,1 M Hydrogencarbonat (1,5 mg in 1 ml) gelöst, der N-Hydroxysuccinimidester von Bromessigsäure in DMF (1,2 mg in 30 ul) wurde zugegeben, der pH-Wert wurde auf 8,3 eingestellt, und die Mischung wurde 2 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Das bromacetylierte BSA wurde an einer PD-10-Säule isoliert, die mit 0,1 M Hydrogencarbonat - 2 mM EDTA, pH-Wert 8,3, eluiert wurde.
- Das bromacetylierte BSA (1,2 mg in 0,2 ml) wurde tropfenweise zur Lösung des thiolierten RRP&sub1;&sub0; gegeben und 18 h lang unter Stickstoff gerührt. Die Reaktion wurde mit 20 ul 2-Mercaptoethanol gestoppt. Das RRP&sub1;&sub0;-BSA-Konjugat wurde durch wiederholtes Waschen in einer Ultrafiltrationszelle (Ausschlussgrenze: 30 kDa) vom ungebundenen Oligosaccharid und anderen Reagenzien abgetrennt, gefolgt von einer extensiven Dialyse gegen destilliertes Wasser. Der Substitutionsgrad des Konjugats betrug 5 mol Kohlenhydrat/mol Protein.
- Pneumokokken-Polysaccharid vom Typ 14 (PnPs14) (erhalten von ATCC Nr. 77217, hergestellt unter GMP) wurde in 2 ml destilliertem Wasser (20 mg/ml) gelöst und durch Ultraschallbehandlung fragmentiert, wobei ein wiederholter Zyklus eines Impulses von 10 min und 3 min Ruhe eingesetzt wurde. Nach 30 Zyklen (insgesamt 5 h) hatte die Molmasse des Polysaccharids auf einen Mittelwert von 50 kDa abgenommen, wie sich durch Chromatographie an Sepharcryl® S-300 ergab. Das abgebaute PnPs14 wurde dialysiert und gefriergetrocknet. Das gewonnene PnPs14 (32 mg) wurde in 1 ml 0,4 M Ammoniumchlorid, das 10 mg Natriumcyanoborhydrid enthielt, gelöst und 4d bei 37ºC gerührt. Aminiertes PnPs14 wurde durch Chromatographie an einer BioGel®-P-2- Säule vom Überschuss der Reagenzien abgetrennt, gefriergetrocknet und in 1 ml 0,1 M Hydrogencarbonatpuffer, pH-Wert 8,3, gelöst. Festes 2-Iminothiolanhydrochlorid (1,7 mg) wurde zur PnPs14-Lösung gegeben, und die Mischung wurde 6 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Als nächstes wurde das Mercaptobutyrimidylderivat von PnPs14 durch Säulenchromatographie an BioGel® P-2 isoliert und gefriergetrocknet.
- Tetanustoxoid (TTd; 2 mg) (erhalten von Statens Seruminsitut, Kopenhagen, Dänemark) wurde in 1 ml 0,1 M Hydrogencarbonat, pH-Wert 8,3, gelöst, und der N-Hydroxysuccinimidester von Bromessigsäure in DMF (1,8 mg in 10 ul) wurde zugegeben. Der pH-Wert der Reaktionsmischung wurde auf 8,3 eingestellt, und die Mischung wurde 1 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Das bromacetylierte TTd wurde durch Chromatographie an einer PD-10-Säule (Pharmacia) isoliert, die mit 0,1 M Hydrogencarbonat - 2 mM EDTA, pH-Wert 8,3, eluiert wurde, und durch Ultrafiltration auf 0,5 ml konzentriert.
- Das derivatisierte PnPs14 (30 mg) wurde in 1,5 ml 0,1 M Hydrogencarbonat - 2 mM EDTA, pH-Wert 8,3, gelöst, und die bromacetylierte TTd-Lösung wurde unter Rühren tropfenweise zugegeben. Der pH-Wert wurde auf 8,3 eingestellt, und das Rühren wurde 24 h lang unter Stickstoff bei Raumtemperatur fortgesetzt. Die Kopplungsreaktion wurde mittels SDS-PAGE mit 4-15% Polyacrylamid-Gradientengelen (Phast System, Pharmacia) überwacht. Die nicht umgesetzten Bromacetylgruppen wurden durch Zugabe von 20 ul 2-Mercaptoethanol blockiert. Ammoniumsulfat wurde auf 0,8 M zugegeben, und der pH-Wert wurde auf 6,5 eingestellt. Die Mischung wurde auf eine Butyl-Sepharose®- (Pharmacia, Uppsala, Schweden) Säule aufgebracht, das ungekoppelte PnPs14 und der Reagenzienüberschuss wurden durch Waschen mit 0,8 M Ammoniumsulfat in 20 mM Phosphatpuffer, pH-Wert 6,5, entfernt, und das PnPs14-TTd-Konjugat wurde mit einem Impuls von 20 mM Phosphatpuffer eluiert. Eine Analyse des Kohlenhydrat- und Proteingehalts des Konjugats deutete auf einen Substitutionsgrad von 4 mol Kohlenhydrat/mol Protein hin.
- Gemäß demselben Protokoll wurde Pneumokokken-Polysaccharid vom Typ 23F (ATCC Nr. 2009269) zur Konjugation an Tetanustoxoid verwendet, was zum Konjugat PnPs23F-TTd führte.
- Gefriergetrocknete PnPs14-TTd- und PnPs23F-TTd-Konjugate wurden in 3,32 ml 0,9%igem Natriumchlorid bei einer Konzentration von 1,51 ug Konjugat/ml gelöst, 1,68 ml 3-%iges Aluminiumhydroxid-Adjuvans (Superfos Biosector, Dänemark) wurden zugegeben, und das Konjugat wurde durch 1-stündiges Rühren bei Raumtemperatur am Adjuvansgel absorbiert. Das resultierende Vakzinpräparat enthielt 4 ug Konjugatpolysaccharid/ml und 1% Aluminiumhydroxidadjuvans. Normale Polysaccharide enthaltende Kontrollvakzinpräparate wurden auf dieselbe Weise hergestellt.
- Acht Wochen alte weibliche, ausgezüchtete NMRI-Mäuse wurden mit 0,25 ml entweder PnPs14-TTd- oder PnPs23F-TTd-Konjugatvakzin (1 ug, bezogen auf den Kohlenhydratgehalt an Vakzin/Dosis), das am Aluminiumhydroxidadjuvans adsorbiert war, subkutan immunisiert (5 Mäuse pro Gruppe). Kontrollmäuse wurde auf dieselbe Weise entweder mit normalem Ps14 oder normalem Ps23F immunisiert. Eine Auffrischungsdosis (1 ug, bezogen auf den Kohlenhydratgehalt) wurde am 28. Tag subkutan verabreicht. Mäuse wurden alle 7 Tage nach der primären und der Auffrischungsimmunisierung aus dem supraorbitalen Plexus ausbluten gelassen. Das Serum wurde bis zur Analyse bei -20ºC gelagert. Die Serumantikörpertiter wurden mittels ELISA (enzymgekoppelte Immunadsorptionsbestimmung) bestimmt.
- Mikrotiterplatten (Nung®, Dänemark) wurden 18 h bei +4ºC mit 0,1 ml des in 0,1 M Hydrogencarbonat, pH-Wert 8,6, gelösten betreffenden Pneumokokken- Polysaccharid inkubiert (10 ug Polysaccharid/ml). Die Platten wurden mit 2% BSA in PBS-0,2% Natriumazid 1 h lang bei 37ºC blockiert und drei Mal mit 0,05% Tween® 20 - 0,9% Natriumchlorid gewaschen. Die Mäusesera wurden seriell in 2% BSA - 0,05 Tween®-PBS verdünnt und bei 37ºC 1 h lang auf die Platten aufgetragen. Die Platten wurden mit Tween®-PBS gewaschen und entweder mit 2000-fach verdünntem Kaninchen-Antimaus-IgG-alkalische- Phosphatase-Konjugat oder Kaninchen-Antimaus-IgM-alkalische-Phosphatase- Konjugat 1 h lang bei 37ºC inkubiert. Nach dem Waschen der p-Nitrophenylphosphatlösung (1 mg/ml) mit Tween®-PBS in 1 M Diethanolaminpuffer wurde 0,5 M Magnesiumchlorid, pH-Wert 9,8, zugegeben, und die Extinktion wurde nach 20 min bei 405 nm mittels eines Titertek Multiscan® reader (EFALAB, Finnland) abgelesen.
- Die primären (3 Wochen) und sekundären (6 Wochen) IgG- und IgM-Reaktionen in NMRI-Mäusen, die mit PnPs14-TTd- und PnPs23F-TTd-Konjugaten immunisiert wurden, sind in Tabelle 1 und Tabelle 2 aufgeführt.
- Dargestellt sind der mittlere Titer ±S.E.M. (Standardfehler des Mittelwerts). IgG-Titer IgM-Titer
- Dargestellt sind der mittlere Titer ±S.E.M. (Standardfehler des Mittelwerts).
- Als Folgerung induzierten sowohl die 23F- als auch die 14-Pneumokokken- Kapselkonjugatvakzine sehr starke und auffrischbare IgG-Reaktionen. Wie erwartet induzierte keiner der normalen Polysaccharide eine signifikante Erhöhung der IgG-Titer. Die IgM-Reaktionen auf die Konjugate waren wie erwartet weniger ausgeprägt, aber beträchtlich höher als diejenigen, die mittels der normalen Polysaccharide erhalten wurden. Dies zeigt, dass die erfindungsgemäße kovalente Konjugation der verschiedenen PnPs an den Proteinträger (TTd) eine geeignete Methode zum Erhalt stark immunogener PnP-Präparate ist, die anders als die normalen Polysaccharide starke von T-Helferzellen abhängige Reaktionen und auch eine immunologische Erinnerung induzieren. Solche erfindungsgemäße immunogenen Präparate werden für effiziente Vakzine für immunologisch unentwickelte Kinder und Erwachsene mit unterdrücktem Immunsystem benötigt.
Claims (14)
1. Verfahren zur Herstellung eines immunogenen Produkts,
bestehend aus als Antigen wirkenden
Kohlenhydrateinheiten (active carbohydrate moieties
(ACM)), die jeweils kovalent über identische
zweiwertige Brückengruppen an immunologisch aktive
Träger (immunologically active carriers (IAC)),
enthaltend Aminogruppen, kovalent gebunden sind,
wobei diese zweiwertige Brückengruppe die folgende
Strukturformel hat:
umfassend die Schritte
reduktive Aminierung von als Antigen wirkenden
Kohlenhydrateinheiten (ACM) zum Anfügen von
Aminogruppen an diese Einheiten (ACM-NH&sub2;), gefolgt
von Thionylieren dieser Aminogruppe mit Iminothiolan
wonach die so hergestellten thionylierten Produkte
kovalent gebunden werden mit immunologisch aktiven
Trägern (IAC), enthaltend durch Behandlung mit
N-Hydroxysuccinimidbromacetat aktivierte
Aminogruppen, um das gewünschte immunogene Produkt
herzustellen.
2. Immunogenes Produkt, bestehend aus als Antigen
wirkenden Kohlenhydrateinheiten (ACM), die jeweils
über identische zweiwertige Brückengruppen kovalent
gebunden sind an immunologisch aktive Träger (IAC),
enthaltend Aminogruppen, wobei die zweiwertige
Brückengruppe die folgende Strukturformel hat:
3. Immunogenes Produkt gemäss Anspruch 2, wobei das
immunogene Produkt als Immunisierungskomponente bei
Vaccinen nützlich ist.
4. Immunogenes Produkt gemäss Anspruch 2 oder 3, wobei
die als Antigen wirkenden Kohlenhydrateinheiten (ACM)
von bakteriellen P-Polysacchariden und/oder
kapsulären Vi-Polysacchariden stammen.
5. Immunogenes Produkt gemäss Anspruch 4, wobei die
Polysaccharide von Salmonella-Serotypen BO und/oder
DO stammen.
6. Immunogenes Produkt gemäss Anspruch 2 oder 3, wobei
die als Antigen wirkenden Kohlenhydrateinheiten (ACM)
von Streptococcus pneumoniae-kapsulären
Polysacchariden stammen.
7. Immunogenes Produkt gemäss Anspruch 2 oder 3, wobei
die als Antigen wirkenden Kohlenhydrateinheiten (ACM)
von Hämophilus influenza-kapsulären Polysacchariden
stammen.
8. Immunogenes Produkt gemäss Anspruch 6, wobei die als
Antigen wirkenden Kohlenhydrateinheiten (ACM)
synthetisch produziert werden.
9. Immunogenes Produkt gemäss einem der Ansprüche 2 bis
8, wobei der immunologisch aktive Träger (IAC) von
einem Polypeptid stammt.
10. Immunogenes Produkt gemäss Anspruch 9, wobei das
Polypeptid Tetanustoxoid ist.
11. Immunogenes Produkt gemäss Anspruch 9, wobei das
Polypeptid Protein D ist.
12. Verwendung eines immunogenen Produkts gemäss einem
der Ansprüche 2 bis 11 zur Herstellung von Human-
oder Tiervaccinen.
13. Vaccin, bei dem die Immunisierungskomponente ein
immunogenes Produkt gemäss einem der Ansprüche 2 bis
11 ist.
14. Vaccinmischung, umfassend mindestens zwei
verschiedene Vaccine gemäss Anspruch 13.
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8327 | Change in the person/name/address of the patent owner |
Owner name: SVENSON, STEPHAN, STOCKHOLM, SE |
|
| 8381 | Inventor (new situation) |
Inventor name: SVENSON, STEFAN, ENSKEDE, SE |