DE69424719T2 - Pigmentierung mit Carotinoiden - Google Patents

Pigmentierung mit Carotinoiden

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Description

  • Bekanntlich sind Carotinoide natürliche Pigmente, die im Pflanzen- und Tierreich reichlich vorkommen und die in einigen Fällen auch durch synthetische Mittel hergestellt wurden. Weitere synthetisch erzeugte Carotinoide scheinen in der Natur nicht vorzukommen. Viele bedeutende Carotinoide werden als Pigmente in der Nahrungs- und Futtermittelindustrie, beispielsweise zum Färben von Eidotter, Geflügel, Fisch und Krustentieren, angewendet, insbesondere in den Fällen von β-Apo- 8'-carotinsäureethylester, Citranaxanthin, Canthaxanthin und Astaxanthin. Zu diesem Zweck werden die Carotinoid-Pigmente in einem Verfahren zum Verleihen eines stärkeren und ästhetisch annehmbareren visuellen Farbeindrucks, sei es in den Integumenten von Tieren, wie der Haut, den Schenkeln und den Schnäbeln von Geflügel und in der Haut, den Schuppen und Schalen von Fisch und Krustentieren, falls geeignet, dem subkutanen Fett von Geflügel und dem Fleisch von Fisch und Krustentieren oder in solchen Tierprodukten, wie Eiern (Dotter), den Tierfutterrationen zugesetzt. Die Erhöhung der Pigmentierung hängt unter vielen anderen Faktoren von dem besonderen lichtabsorbierenden konjugierten Doppelbindungssystem des betreffenden Carotinoids, dem Grad der Leichtigkeit, mit der das Carotinoid nach Verzehr der Carotinoid angereicherten Nahrung (Abscheidungsrate) aufgenommen wird und der Konzentrierung des Carotinoids oder eines Metaboliten des Zielgewebes im Tierkörper, oder dem Produkt ab. Aus der Kenntnis über die Struktur des ausgewählten Carotinoids kann jedoch nicht vorausgesagt werden, wie wirksam es auf diesem Anwendungsgebiet als Pigment ist. Ein weiterer darin einbezogener Faktor ist die Stabilität des Carotinoids, beispielsweise gegen atmosphärische Oxidation, Licht, Temperatur und Feuchte in einer Tiernahrung, wenn es unter normalen Bedingungen, denen eine solche Nahrung unterliegt, gelagert wird.
  • Bezüglich Geflügel ist ein annehmbarer Grad und eine annehmbare Qualität der Pigmentierung für die Integumente der für den Verzehr bestimmten Vögel und für Eidotter erwünscht. Die Verwendung von Materialien, um beispielsweise die Eidotterfarbe zu verbessern, wird im allgemeinen gefördert, weil der Verbraucher stark (insbesondere deutlich goldgelb) pigmentierte Eier bevorzugt. Das visuelle Aussehen ist tatsächlich ein wichtiger Faktor bei der Qualitätsbewertung. Brathähnchen und Ziervögel sind beispielsweise in vielen Teilen der Welt ästhetisch annehmbarer, wenn ihre Integumente, insbesondere die Haut, Schenkel und Schnabel, im Fall von Brathähnchen ebenfalls ihr subkutanes Fett, bestimmten Pigmentierungskriterien genügen. Der Bedarf an ergänzender Pigmentierung dominiert heute insbesondere im Hinblick auf die Verminderung des Grasverbrauchs bei den modernen Methoden der Geflügelintensivhaltung, die die Verwendung von faserarmem Kraftfutter einbezieht, wodurch die Erzeugung von gut pigmentiertem Geflügel und Eidotter schwierig wird.
  • Die Pigmentierung von Fisch, Fleisch und Integumenten, insbesondere von verschiedenen Arten von Forelle und Lachs, und von Fleisch und Integumenten von Krustentieren, beispielsweise Krabben, Hummer und Shrimps, wird bekanntlich auch durch Füttern von Fisch und Krustentieren mit Carotinoid angereicherten Futterzubereitungen im Hinblick darauf erreicht, eßbare Produkte für Verbraucher attraktiver zu machen.
  • Es wurde nun gefunden, dass bestimmte Carotinoide, die nachstehend ausgewiesen werden, als Pigmente in den vorstehend ausgewiesenen Anwendungen überraschenderweise wirksamer sind als die Carotinoide, die bekanntlich bis jetzt für solche Zwecke verwendet wurden. Gemäß der Erfindung wird ein Verfahren zur Pigmentierung von Eigelb, Integumenten und/oder subkutanem Fett von Geflügel und von Fleisch und/oder Integumenten von Fisch und Krustazeen durch Aufnahme eines oder mehrerer Carotinoide in das Futter von Geflügel, Fischen oder Krustazeen bereitgestellt, dadurch gekennzeichnet, dass die Carotinoide 2'-Dehydroplectaniaxanthin, 1-Hydroxy-3, 4-didehydro-1,2-dihydro-ψ,ψ-carotin-2-on, Desmethylspheroidenon, Spheroidenon, 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-6' - on, 1'-Hydroxy-3',4'-didehydro-1',2'-dihydro-β,ψ-carotin- 4,2'-dion und 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-4,6'- dion sind.
  • Die vorliegende Erfindung stellt ebenfalls ein Carotinoid-angereichertes Futter für Geflügel, Fische oder Krustazeen und vorgesehen zur Pigmentierung von Eigelb, Fisch, Integumenten und/oder subkutanem Fett des Geflügels und von Fleisch und/oder Integumenten der Fische und Krustazeen bereit, dadurch gekennzeichnet, dass es als Carotinoid(e) eines oder mehrere von 2'-Dehydroplectaniaxanthin, 1-Hydroxy-3,4- didehydro-1,2-dihydro-ψ,ψ-carotin-2-on, Desmethylspheroidenon, Spheroidenon, 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin- 6'-on, 1'-Hydroxy-3',4'-didehydro-1',2'-dihydro-β,ψ-carotin- 4,2'-dion und 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-4,6'- dion in einer wirksamen Menge enthält.
  • Die in dem erfindungsgemäßen Verfahren und dem Carotinoid-angereicherten Futter verwendbaren Carotinoide sind im Fall der ersten, dritten und vierten erwähnten Carotinoide an sich bekannt und kommen tatsächlich natürlich vor. Die zweiten und fünften bis siebten erwähnten Carotinoide sind neue Verbindungen. Die sieben Carotinoide haben die nachstehenden Strukturformeln, wobei die relevante, das Vorkommen und/oder die chemische Synthese der drei bekannten betreffende Literatur nach der entsprechenden Formel in Klammern angegeben ist. 2'-Dehydroplectaniaxanthin
  • [Arpin et al., Phytochem. 6, 995-1005 (1967)] 1-Hydroxy-3,4-didehydro-1,2-dihydro-ψ,ψ-carotin-2-on Desmethylspheroidenon
  • [Britton et al., FEBS Lett. 110, 47 (1980)] Spheroidenon
  • [Manchand et al., Tetr. Lett. 1966, 989; Barber et al., J. Chem. Soc. C 1966, 2166] 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-ano-β-carotin-6'-an 1'-Hydroxy-3',4'-didehydro-1',2'-dihydro-β,ψ-carotin- 4,2'-dion
  • 5'-Hydroxy-5',6'-dihvdro-4'-apo-β-carotin-4,6'-dion
  • Es wird aus den vorangehenden Formeln ersichtlich, dass alle die Carotinoide, mit Ausnahme von Spheroidenon, das Merkmal einer endständigen 2-Hydroxy-2-methylpropionylgruppe [-COC (CH&sub3;)&sub2;OH)] aufweisen. Spheroidenon hat die entsprechende methylierte Gruppe, nämlich 2-Methoxy-2-methyl-propionyl [- COC (CH&sub3;)&sub2;OCH&sub3;], als die endständige Gruppe. Keine der bekannten Literaturstellen (einschließlich Patente) von bekannten Carotinoiden weist in irgend einer Weise darauf hin, dass diese Carotinoide als Pigmente in Anwendungen, wie vorstehend hierin ausgewiesen, beispielsweise zur Verstärkung der Farbe von Eigelb, verwendet werden können.
  • Die vier neuen Carotinoide können aus geeigneten Ausgangsmaterialien durch Verfahren, die analog zu jenen zur Herstellung von Carotinoiden ähnlicher Struktur sind, hergestellt werden. Somit kann das erste von ihnen, 1-Hydroxy-3,4- didehydro-1,2-dihydro-ψ,ψ-carotin-2-on, durch ein Verfahren hergestellt werden, das analog ist zu jenem zur Herstellung von Desmethylspheroidenon, nämlich durch Kondensieren von 4'- Apo-ψ-carotin-4'-al mit 3-Hydroxy-3-methyl-2-butanon. Im Fall von 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-6'-on, 1'- Hydroxy-3',4'-didehydro-1',2'-dihydro-β,ψ-carotin-4,2'-dion und 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-4,6'-dion wird der geeignete Aldehyd, nämlich 8'-Apo-β-carotinal, 4-Oxo-4'- apo-β-carotin-4'-al bzw. 4-Oxo-8'-apo-β-carotin-8'-al. in jedem Fall mit 3-Hydroxy-3-methyl-2-butanon kondensiert.
  • Der Aldehyd selbst kann üblicherweise durch eine Basen-katalysierte Wittig-Reaktion des geeigneten Niederaldehyds mit dem Acetal von (3,7-Dimethyl-8-oxo-2,4,6-octatrienyl)triphenylphosphoniumchlorid und anschließende Säurekatalysierte Spaltung der Acetalgruppe in dem Produkt der Wittig-Reaktion hergestellt werden. Dies wird nachstehend in Beispiel 5 für 4'-Apo-ψ-carotin-4'-al erläutert.
  • Im allgemeinen wird jede der Kondensationsreaktionen des Aldehyds mit 3-Hydroxy-3-methyl-2-butanon geeigneterweise in einem polaren Lösungsmittel, beispielsweise einem Niederalkanol, insbesondere Methanol, Ethanol, n-Propanol, Isopropanol oder einem Butanol, ausgeführt. Der Ketonreaktant, 3- Hydroxy-3-methyl-2-butanon, selbst kann ebenfalls gleichzeitig als das Lösungsmittel in dieser Reaktion dienen. Weiterhin wird die Reaktion im allgemeinen bei Temperaturen im Be reich von etwa 0ºC bis etwa 100ºC, vorzugsweise von Raumtemperatur bis zu der Rückflusstemperatur des Reaktionsgemisches, und vorzugsweise in Gegenwart einer Base, wie Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, einem Alkalimetallalkoholat, beispielsweise Natriumethanolat oder Triethylaminhydroxid, bewirkt. Der Ausschluss von Luft, geeigneterweise durch Ausführen der Reaktion unter einer Inertgasatmosphäre, beispielsweise Argon, wird empfohlen. Wenn das Produkt ein cis/trans- (E/Z)-Gemisch ist, kann das gewünschte (all-E)-Produkt durch Erhitzen des Gemisches in einem Niederalkan, vorzugsweise n- Heptan, gebildet werden. Dies ist ein herkömmliches Verfahren für eine solche Carotinoid-Isomerisierung.
  • Zum Verwirklichen des erfindungsgemäßen Verfahrens wird das Carotinoid über das Geflügel-, Fisch- oder Krustentierfutter, falls geeignet, appliziert, und in diesen Fällen wird das Carotinoid, das für die erhöhte Pigmentierung verantwortlich ist, durch das betreffende Tier in natürlicher Weise aufgenommen. Das betreffende Futter kann auch andere Carotinoide enthalten, die selbst zu der normalen Pigmentierung von Eidotter, Integumenten und/oder subkutanem Fett von Geflügel und dem Fleisch und/oder Integumenten von Fisch und Krustentieren beitragen. Der Gehalt an zugefügtem/n Carotinoid (en) (eines oder mehrere deren Namen und Strukturformeln vorstehend angegeben sind) in dem Futter liegt im allgemeinen im Bereich von 0,1 ppm bis 150 ppm (mg/kg oder 0,00001 bis 0,015 Gew.-%) bezogen auf das Gesamtgewicht der mit Carotinoid angereicherten Nahrung. Im Geflügelfutter, insbesondere für Legehennen und Brathähnchen, liegt der Anteil von zugeführtem/en Carotinoid(en) vorzugsweise im Bereich von 0,25 ppm bis 20 ppm, und im Fall der Nahrung für Fisch oder Krustentiere liegt dieser Anteil vorzugsweise im Bereich von 2,5 bis 150 ppm.
  • Die Bestandteile von Geflügel-, Fisch- oder Krustazeenfutter gemäß der vorliegenden Erfindung können andererseits herkömmlich sein und das Futter kann auch durch herkömmliche Verfahren, unter Einbeziehen von physikalischem Anmischen, Pelletieren, Extrusion, Mikroeinkapselung, Sprühen, usw., hergestellt werden, wobei an einigen Stufen während des Herstellungsverfahrens eines oder mehrere der sieben Carotinoide 2'-Dehydroplectaniaxanthin, usw. eingearbeitet wird/werden. Die herkömmlichen Bestandteile von Geflügelfutter schließen beispielsweise Weizen, Mais, Gerste, Hirse, Hafer, Reis und/oder Sojabohnenmehl, gewöhnlich in gemahlener oder zerbrochener Form, falls geeignet, in Hauptanteilen (bei mindestens etwa 10 Gew.-%) ein. Weitere Bestandteile in geringen Mengen (bis zu etwa 5 Gew.-% oder in bestimmten Fällen weniger als 1 Gew.-%) schließen beispielsweise Fisch, Fleisch und/oder Knochenmehl, Weizenkleie, Stroh, Hefe, hydrolysiertes Fett, Talg, Schweineschmalz, Kalkstein, Salz, Methioninpremix, Mineralpremix, Vitaminpremix und/oder Antiklebemittel ein. Jedes Geflügelfutter kann mit einem oder mehreren der 7 Carotinoide angereichert werden, um ein Geflügelfutter gemäß der vorliegenden Erfindung zu liefern. Typische Fisch- und Krustentiernahrungen der vorliegenden Erfindung schließen neben dem/den zugegebenen Carotinoid(en) Fischmehl als Hauptquelle für Proteine, Weizenschrot und Knochenmehl, Sojabohnenmehl, Weizenmehl, verkochte Stärke, Hefe, Fischöl, Sojabohnenöl, Sojalecithin, Methionin, Vitamin und Mineralien ein. Der Proteinlipid- und Kohlenhydratanteil eines solchen Futters ist ungefähr 40 bis 50%, 15 bis 30% bzw. 10 Gew.-%.
  • Die Carotinoide oder Carotinoidgemische zur Einarbeitung in das Geflügel-, Fisch- oder Krustentierfutter können in Form von Kügelchen in ein sogenanntes Premix eingemischt werden, das seinerseits zu dem Futter gegeben wird. Die Kü gelchen selbst, die einen weiteren Aspekt der vorliegenden Erfindung wiedergeben, enthalten geeigneterweise neben dem/den Carotinoid(en) eine stärkebeschichtete Matrix aus Gelatine und Kohlenhydrat und ein oder mehrere Antioxidationsmittel, beispielsweise Ethoxyquin und/oder Palmitinsäureascorbylester.
  • Die Kügelchen enthalten im allgemeinen 1 bis 20 Gewichtsprozent von einem oder mehreren 2'-Dehydroplectaniaxanthin, 1-Hydroxy-3,4-didehydro-1,2-dihydro-ψ,ψ-carotin-2-on, Desmethylspheroidenon, Spheroidenon, 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-6'-on, 1'-Hydroxy-3',4'-didehydro-1',2'- dihydro-β,ψ-carotin-4,2'-dion und 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro- 4'-apo-β-carotin-4,6'-dion als Wirkstoff, wohingegen die Vormischung im allgemeinen 0,001 bis 15 Gewichtsprozent Wirkstoff enthält.
  • Die vorliegende Erfindung stellt weiterhin die Verwendung von ein oder mehreren dieser sieben Carotinoide zum Pigmentieren von Eidotter, Integumenten und/oder subkutanem Fett von Geflügel und dem Fleisch und/oder Integumenten von Fisch und Krustentieren bereit.
  • Bezogen auf die durch verschiedene Aspekte der vorliegenden Erfindung verfügbaren Daten, die vorzugsweise die Verwendung von 2'-Dehydroplectaniaxanthin beinhalten, folgt der Vorzug von Desmethylspheroidenon oder Spheroidenon. Weiterhin sind diese Aspekte vorzugsweise auf das Pigmentieren von Eigelb für Legehennen anwendbar.
  • Die Erfindung wird durch die nachstehenden Beispiele erläutert:
    • Beispiel 1
  • Vier bislang nicht bekannte Carotinoide wurden zum Pigmentieren von Eigelb verwendet, nämlich 2'-Dehydroplectaniaxanthin, 1-Hydroxy-3,4-didehydro-1,2-dihydro-ψ,ψ-carotin-2-on, Desmethylspheroidenon und Spheroidenon (hierin und den nachfolgenden Beispielen anschließend als Carotinoid A, B, C bzw. D bezeichnet), wurden auf deren Eigelbpigmentierende Wirksamkeit in einem primären Screening mit Legehennen bewertet und mit dem bekannten pigmentierenden Carotinoid Canthaxanthin (die "positive Kontrolle") unter den gleichen Bedingungen verglichen.
  • Jedes der vier Carotinoide wurde als Kügelchen für die nachstehende Zusammensetzung formuliert:
  • Dann wurden die Kügelchen von jedem Carotinoid A - D und von Canthaxanthin in das Grundfutter mit niedrigem Carotinoidanteil zu einem solchen Ausmaß eingearbeitet, dass der Anteil (eingesetzte Menge) des Test-Carotinoids in jedem Fall 10 mg/kg Futter war. Das Grundfutter, ergänzt mit Carotinoid A, Carotinoid B oder Canthaxanthin, enthielt zusätzlich 0,70 - 1,40 ppm Lutein und 0,20 - 0,50 ppm Zeaxanthin, und das Grundfutter, ergänzt mit Carotinoid C, Carotinoid D oder Canthaxanthin, enthielt zusätzlich 0,85-1,20 ppm Lutein und 0,20 - 0,35 ppm Zeaxanthin sowie in jedem Fall einen Normalspiegel an ergänzenden Vitaminen. Die Zusammensetzungen des Grundfutters mit niedrigem Carotinoidanteil werden in den nachstehenden Tabellen 1 und 2 wiedergegeben: Tabelle 1 Zusammensetzung von Grundfutter mit niedrigem Carotinoidanteil, verwendet für Carotinoide A und B
  • * bestehend aus, pro kg Nahrung:
  • Vitamin A 8000 IU, Vitamin D&sub3; 1800 IU, Vitamin E 60 mg, Vitamin K&sub3; 1,3 mg, Vitamin C 200 mg, Vitamin B&sub1; 4 mg, Vitamin B2 11, 8 mg, Vitamin B6 8 mg, Vitamin B&sub1;&sub2; 0,04 mg, Biotin 0,06 mg, Calcium-Pantothenat 48 mg, Nicotinsäure 104 mg, Folsäure 2 mg, Cholin 1950 mg. Tabelle 2 Zusammensetzung von Grundfutter mit niedrigem Carotinoidanteil, verwendet für Carotinoide C und D
  • * bestehend aus, pro kg Nahrung:
  • Die eingearbeiteten Carotinoide A-D und Canthaxanthin wurden mittels HPLC hinsichtlich ihres Anteils in dem Futter untersucht.
  • Die in dem Test verwendeten Legehennen wurden in Einzelkäfigen in einer 3-Etagen-Batterie gehalten. Im Fall der Carotinoide A und B und des zum Vergleich verwendeten Canthaxanthins waren 72 Hennen "Isa Brown" im Alter von 42 Wochen einbezogen, wobei 6 sich wiederholende Gruppen von jeweils 3 Hennen jeder Futterbehandlung mit einem der drei Carotinoide und ohne (Negativkontrolle, das heißt Grundfutter ohne zugegebenes Test-Carotinoid zugeordnet wurden. Die Situation war für die Carotinoide C und D und das jeweilige Canthaxanthin analog, wobei jedoch vier Wiederholungsgruppen, jeweils bestehend aus sechs Lohmann LSL-Hennen im Alter von 61 Wochen, einbezogen wurden, bezogen auf insgesamt 96 Hennen.
  • Vor dem eigentlichen Versuch wurden die Hennen mit dem vorstehend genannten Grundfutter mit niedrigem Carotinoidanteil gefüttert, um die vorliegende Eidotterpigmentierung zu vermindern. Anschließend wurden die Hennen während des Versuchs 3 Wochen mit dem gleichen Grundfutter mit niedrigem Carotinoidanteil, ergänzt mit dem Testcarotinoid oder ohne solches Carotinoid (negative Kontrolle), gefüttert. Die Nahrung in Breiform und Wasser wurde "nach Belieben" bereitgestellt. Die Legeleistung der Hennen wurde einmal wöchentlich aufgezeichnet und die letzten zwei Eier pro Henne wurden gesammelt und für die Laborbewertungen (insgesamt 6 Eier pro Gruppe) vereinigt.
  • Die Pigmentierungswirksamkeit wurde mit Hilfe der Farbbeschreibung, zusammen mit photographischer Dokumentation und Reflexionsfarbmessung (CIE-Yxy-System) sowie durch Messung von Carotinoidabscheidung in dem Eidotter bewertet. Die Reflexionsmessungen wurden unter Verwendung des Gardener XL- Colorimeters bewirkt und die bestimmten Tristimuluswerte wurden in das CIE-System mit Werten der dominanten Wellenlänge und spektralen Sättigung umgewandelt [siehe J. P. Vuilleumier, The "Roche Yolk Colour Fan" - An Instrument for Measuring Yolk Colour, Poultry Science $$, 767-779 (1969)]. Die dominanten Wellenlängen und Spektral-Sättigungswerte der Reflexionsmessungen wurden der Varianzanalyse unterzogen, unter Verwendung des ANOVA-Programms (SAS, 1985). Um die Unterschiede unter den Behandlungsvorrichtungen zu bewerten, wurde Duncan's Multiple-Range-Test angewendet (alpha = 0,05). Die Messungen der Carotinoidabscheidung, die die Anteile von getesteten Carotinoiden in vereinigten Eidottern ergaben, wurden durch die gleichen HPLC-Verfahren wie für die Bestimmung der Carotinoidanteile in den Nahrungen vor dem Füttern ver wendet und beinhalteten die Quantifizierung des ursprünglich in die Nahrung eingearbeiteten Carotinoids.
  • Die Ergebnisse (Mittelwerte) werden in den nachstehenden Tabellen wiedergegeben, nämlich Tabelle 3 und 4: Tabelle 3 Eigelb-Pigmentierungswirksamkeit von Carotinoiden Tabelle 4 Eigelb-Pigmentierungswirksamkeit von Carotinoiden
  • Die Ergebnisse zeigen, dass alle vier Carotinoide und Canthaxanthin deutlich die Pigmentierung von Eigelb beeinflussen. Carotinoid A (2'-Dehydroplectaniaxanthin) ergab eine stark karminrote Pigmentierung von Eigelb, was sich in der Erhöhung der dominanten Wellenlänge von 578,1 auf 626,7 nm niederschlug. Obwohl die Spektralsättigung mittel war, wurde ein bemerkenswert hoher Anteil (24,1 ppm) im Eigelb gefunden. Carotinoid B (1-Hydroxy-3,4-didehydro-1,2-dihydro-ψ,ψ-carotin-2-on) erhöhte die dominante Wellenlänge auf 612,7 nm; obwohl diese Wirkung mit einer begrenzten Abscheidung und Farbsättigung verbunden war, ergab sich eine schwach rosa Pigmentierung von Eigelb. Beide, Carotinoid C (Desmethylspheroidenon) und Carotinoid D (Spheroidenon), zeigten gute Farbkraft, erzeugten rote Pigmentierung von Eigelb und bemerkenswerte Erhöhung der dominanten Wellenlängen (von 575,8 auf 599,5 nm bzw. auf 596,3 nm) und Spektralsättigung (von 0,477 auf 0,777 bzw. auf 0,782). Sie wurden auch leicht in Eigelb abgeschieden (20,75 und 17,23 ppm). Als positive Kontrolle in diesem Fall verwendetes Canthaxanthin zeigte eine rot-orange Pigmentierung von Eigelb. Die dominante Wellenlänge war bemerkenswert niedriger als für Carotinoide C und D (589,9 nm); die spektrale Sättigung war höher (0,853) und die Abscheidung im Eigelb ebenfalls höher (25,25 ppm).
    • Beispiel 2
  • Unter Verwendung eines analogen Verfahrens zu jenem, das in Beispiel 1 beschrieben wurde, wurden Desmethylspheroidenon (nachstehend "Carotinoid C") und Canthaxanthin als positive Kontrolle in zunehmenden Anteilen von 1, 2 und 4 ppm in Kombination mit einem Grundfutter von 4 ppm von β-Apo-8'- carotinsäureethylester ("Apo-Ester") für deren Eigelb- Pigmentierungswirksamkeit in einem primären Screening mit Legehennen bewertet. In jedem Fall wurde das jeweilige Carotinoid, bevor es in das Grundfutter mit niedrigem Carotinoidanteil zu den vorstehend ausgewiesenen Ausmaßen eingearbeitet wurde, als Kügelchen formuliert. Solche Kügelchen enthielten 6,1 Gewichtsprozent Desmethylspheroidenon oder 10,4 Gewichtsprozent Canthaxanthin oder 11,3 Gewichtsprozent Apo-Ester, falls geeignet, wobei diese Gewichtsprozente durch spektrophotometrische Daten bestätigt wurden. Die Zusammensetzung des Grundfutters mit niedrigem Carotinoidanteil, das 0,70 - 1,40 ppm Lutein und 0,20 - 0,50 ppm Zeaxanthin sowie normale Spiegel an ergänzenden Vitaminen enthielt, wird in der nachstehenden Tabelle 5 wiedergegeben: Tabelle 5 Zusammensetzung für Grundfutter mit niedrigem Carotinoidanteil verwendet für Carotinoid-Kömbinationen. Carotinoid C + Apo-Ester und Canthaxanthin + Apo-Ester
  • Die eingearbeiteten Carotinoide wurden auf ihren Anteil in dem Futter durch HPLC untersucht.
  • Die in dem Test verwendeten Legehennen wurden in Einzelkäfigen in einer 3-Etagen-Batterie gehalten. 72 Hennen "Isa Brown" im Alter von 40 Wochen waren einbezogen, wobei 4 sich wiederholende Gruppen von jeweils 3 Hennen jeder Futterbehandlung mit einer bestimmten Carotinoid-Kombination wie vorstehend zugeordnet wurden.
  • Vor dem eigentlichen Versuch wurden die Hennen mit dem vorstehend genannten Grundfutter mit niedrigem Carotinoidanteil gefüttert, um die vorliegende Eidotterpigmentierung zu vermindern. Anschließend wurden die Hennen während des dreiwöchigen Versuchs mit dem gleichen Grundfutter mit niedrigem Carotinoidanteil, ergänzt mit den Testcarotinoid- Kombinationen gefüttert. Die Nahrung in Breiform und Wasser wurde "nach Belieben" bereitgestellt. Die Legeleistung der Hennen wurde einmal wöchentlich aufgezeichnet und die letzten zwei Eier pro Henne wurden gesammelt und für die Laborbewertungen vereinigt.
  • Wie in Beispiel 1 wurde die Pigmentierungswirksamkeit mit Hilfe der Farbbeschreibung, zusammen mit photographischer Dokumentation und Reflexionsfarbmessung sowie durch Messung von Carotinoidabscheidung in dem Eidotter bewertet. Hinsichtlich der Reflexionsfarbmessungen wurde die Farbe von Eidotter durch entweder Verwendung der üblichen CIE Farbtafel (Yxy- System) oder durch das moderne CIELAB-System bewertet. Außerdem wurde die Farbe von vereinigtem Eidotter für jede Wiederholungsgruppe mit dem Roche-Dotter-Farbfächer 1989 (RYCF) bonitiert. Für weitere Details siehe Beispiel 1.
  • Die Ergebnisse (Mittelwerte) werden in den nachstehenden Tabellen, nämlich Tabellen 6 und 7, wiedergegeben. Tabelle 6 Eigelb-Pigmentierungswirksamkeit von Carotinoid-Kombinationen (visuelles Einstufen dominanter Wellenlänge, spektraler Sättigung und Spiegel in Eigelb)
  • * RYCF = Roche Yolk Colour Fan Tabelle 7 Eigelb-Pigmentierungswirksamkeit von Carotinoid-Kombinationen (Gelb-Farbmessungen mit dem CIELAB-System)
  • Die Ergebnisse zeigen, dass Carotinoid C (Desmethylspheroidenon) zu einem ähnlichen Ausmaß wie Canthaxanthin in Eigelb abgeschieden wurde, jedoch eine beträchtlich höhere Farbkraft als Canthaxanthin bezüglich der Eigelb-Pigmentierungswirksamkeit freigesetzt wurde. Die mit der Kombination von Carotinoid C und Apo-Ester erreichte Pigmentierung war ein sehr erwünschtes gelb-orange.
    • Beispiel 3
  • Unter Verwendung eines analogen Verfahrens zu jenem, das in Beispiel 1 beschrieben wurde, wurden 2'-Dehydroplectaniaxanthin (nachstehend "Carotinoid A") und Canthaxanthin, Citranaxanthin und 4'-Apo-β-carotin-4'-säureethylester (Neurosporaxanthinethylester) als drei positive Kontrollen, jeweils nach ansteigenden Anteilen von 0,5, 1 und 2 ppm (Carotinoid A) oder 1, 2 und 4 ppm (jeweils die drei positiven Kontrollen), in Kombination mit einem Grundanteil von 4 ppm β-Apo-8'-carotinsäureethylester ("Apo-Ester") hinsichtlich ihrer Wirksamkeit zur Pigmentierung von Eigelb in einem primären Screen mit Legehennen bewertet. In jedem Fall wurde das einzelne Carotinoid als Kügelchen vor dem Einarbeiten in das Grundfutter mit niedrigem Carotinoidanteil zu den vorstehend ausgewiesenen Anteilen formuliert. Solche Kügelchen enthielten 6,5 Gewichtsprozent 2'-Dehydroplectaniaxanthin oder 10,0 Gewichtsprozent Canthaxanthin oder 11,1 Gewichtsprozent Citranaxanthin oder 6,4 Gewichtsprozent Neurosporaxanthinethylester oder 10,4 Gewichtsprozent Apo-Ester, falls geeignet, wobei diese Gewichtsprozente durch spektrophotometrische Daten bestätigt wurden. Die Zusammensetzung der Grundnahrungen mit niedrigem Carotinoidanteil, die 0,70-1,40 ppm Lutein und 0,20 - 0,50 ppm Zeaxanthin sowie normale Anteile an ergänzenden Vitaminen enthielten, wird in der nachstehenden Tabelle 8 wiedergegeben: Tabelle 8 Zusammensetzung von Grundnahrung mit niedrigem Carotinoidanteil verwendet für die Carotinoid-Kombinationen, Carotinoid A + Apo-Ester Canthaxanthin + Apo-Ester Citranaxanthin + Apo-Ester und Neurosporanxanthinethylester + Apo-Ester
  • * siehe Tabelle 1
  • Die eingearbeiteten Carotinoide wurden auf ihren Anteil in dem Futter durch HPLC untersucht.
  • Die in dem Test verwendeten Legehennen wurden in Einzelkäfigen in einer 3-Etagen-Batterie gehalten. 144 Hennen "Isa Brown" im Alter von 72 Wochen waren einbezogen, wobei 4 sich wiederholende Gruppen von jeweils 3 Hennen jeder Futterbehandlung mit einer bestimmten Carotinoid-Kombination wie vorstehend zugeordnet wurden.
  • Vor dem eigentlichen Versuch wurden die Hennen mit dem vorstehend genannten Grundfutter mit niedrigem Carotinoidanteil gefüttert, um die vorliegende Eidotterpigmentierung zu vermindern. Anschließend wurden die Hennen während des dreiwöchigen Versuchs mit dem gleichen Grundfutter mit niedrigem Carotinoidanteil, ergänzt mit den Testcarotinoid- Kombinationen gefüttert. Die Nahrung in Breiform und Wasser wurde "nach Belieben" bereitgestellt. Die Legeleistung der Hennen wurde einmal wöchentlich aufgezeichnet und die letzten zwei Eier pro Henne wurden gesammelt und für die Laborbewertungen vereinigt.
  • Wie in Beispiel 1 wurde die Pigmentierungswirksamkeit mit Hilfe der Farbbeschreibung, zusammen mit photographischer Dokumentation Reflexionsfarbmessung sowie durch Messung von Carotinoidabscheidung in dem Eidotter bewertet. Hinsichtlich der Reflexionsfarbmessungen wurde die Farbe von Eidotter durch entweder Verwendung der üblichen CIE Farbtafel (Yxy- System) oder durch das moderne CIELAB-System bewertet. Außerdem wurde die Farbe von vereinigtem Eidotter für jede Wiederholungsgruppe mit dem Roche-Dotter-Farbfächer 1989 (RYCF) bonitiert. Für weitere Details siehe Beispiel 1.
  • Die Ergebnisse (Mittelwerte) werden in den nachstehenden Tabellen, nämlich Tabellen 9 und 10, wiedergegeben. Tabelle 9 Eigelb-Pigmentierungswirksamkeit von Carotinoid-Kombinationen (visuelles Einstufen von dominanter Wellenlänge spektraler Sättigung und Spiegel in Eigelb)
  • * RYCF = Roche Yolk Colour Fan Tabelle 10 Eigelb-Pigmentierungswirksamkeit von Carotinoid-Kombinationen (Gelb-Färbungsmessungen mit dem CIELAB-System)
  • Die in Tabellen 9 und 10 wiedergegebenen Ergebnisse zeigen deutlich, dass Carotinoid A (2'-Dehydroplectaniaxanthin) ein viel stärkeres rotes Carotinoid für Eigelbpigmentierung ist als Canthaxanthin, Citranaxanthin oder Neurosporaxanthinethylester. Wenn man die dominante Wellenlänge als Parameter nimmt, war deren Wirksamkeit in den Tests bei 0,5 und 1 ppm beispielsweise ungefähr 4-mal höher als jene von Neurosporaxanthinethylester und fast 7-mal höher als jene von Canthaxanthin.
    • Beipiel 4 Herstellung von 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-6'- on
  • Eine Lösung von 12,5 g (30 mMol) von 8'-Apo-βcarotinal in 200 ml Methanol wird bei Raumtemperatur unter Argonatmosphäre in einen 750 ml 4-Hals-Reaktionskolben, der mit einem 4,5 cm Teflon®-Rührerblatt, einem Thermometer und einem Intensivkühler ausgestattet ist, eingeführt. Zu der Lösung werden anschließend 20 ml (95% rein, 180 mMol) 3- Hydroxy-3-methyl-2-butanon und anschließend unter Rühren und innerhalb 30 Minuten eine Lösung von 2 g (50 mMol) Natriumhydroxid in 40 ml Wasser gegeben, wobei die Zugabe tropfenweise durchgeführt wurde. Zu der erhaltenen Suspension werden weitere 100 ml Methanol gegeben und das Ganze wird anschließend unter Verwendung eines Ölbads auf 40ºC erwärmt. Eine dunkel gefärbte Lösung ergibt sich. Nach ungefähr 48 Stunden wird die Reaktion durch Dünnschichtchromatographie als im wesentlichen vollständig eingeschätzt. Die erhaltene Lösung wird mit 3,15 ml (50 mMol) Eisessig neutralisiert und langsam auf Raumtemperatur abkühlen lassen, wobei dunkel gefärbte Kristalle ausfallen. Um das Ausfällen der Lösung zu fördern, wird sie weiter in einem Eisbad abgekühlt. Nach 2 Stunden wird das Ganze filtriert und der gesammelte Niederschlag mit 100 ml kaltem Methanol gewaschen.
  • Der Niederschlag wird aus einem Gemisch von Methylenchlorid und Hexan kristallisiert, unter Bereitstellen des gewünschten 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-6'-ons, als fast schwarze Kristalle. Diese werden abfiltriert, mit Hexan gewaschen und bei 40ºC unter einem verminderten Druck von 2 kPa (20 mbar) getrocknet. Die Ausbeute an Produkt ist 13,57 g (83% der theoretischen Ausbeute). Fp. 179-180ºC.
    • Beispiel 5 Herstellung von (all-E)-1-Hydroxy-3.4-didehydro-1,2-dihydro- ψ,ψ-carotin-2-on
  • 1,80 g (17 mMol) Orthoameisensäuretrimethylester und 0,4 ml einer 1%igen (Gewicht/Volumen) Lösung von p-Toluolsulfonsäure in Methanol werden zu einer Lösung von 6,34 g (14,2 mMol) von (3,7-Dimethyl-8-oxo-2,4,6-octatrienyl)triphenylphosphoniumchlorid in 30 ml Methanol -gegeben. Das Gemisch wird bei Raumtemperatur unter Argon 1¹/&sub2; Stunden gerührt und anschließend mit 0,2 ml Pyridin gestoppt. Das Dimethylacetal von (3,7-Dimethyl-8-oxo-2,4,6-octatrienyl)triphenylphosphoniumchlorid wird dabei hergestellt. Eine Lösung von 4,31 g (12,3 mMol) von (all-E)-12'-Apo-ψ-carotin-12'-al [hergestellt gemäß dem Verfahren von Hengartner et al., Helv. Chim. Acta 75, 1848 (1992)] in 50 ml Methylenchlorid wird dann zu dem Gemisch gegeben, das auf -20ºC abgekühlt wird. Eine frisch hergestellte Lösung von Natriummethoxid, hergestellt durch Auflösen von 363 mg (15,8 mMol) Natriummetall in 5 ml Methanol, wird innerhalb 30 Minuten bei -20ºC zugegeben und das Gemisch wird 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und anschließend mit 0,8 ml konzentrierter Schwefelsäure in 10 ml Eiswasser angesäuert. Das Gemisch wird 20 Minuten gerührt und dann mit 50 ml Methylenchlorid und 60 ml Eiswasser vermischt. Die organische Phase wird mit wässeriger Natriumbicarbonatlösung und Salzlösung gewaschen, getrocknet und konzentriert. Der Rückstand wird in 80 ml Methylenchlorid aufgenommen. Dann wird das Methylenchlorid an einem Rotationsverdampfer abdestilliert, während 320 ml Methanol gleichzeitig zugegeben werden. Nach Rühren der Lösung bei 0ºC für 1 Stunde werden die erhaltenen dunkelroten Kristalle durch Filtration gesammelt und getrocknet, unter Bereitstellen von 4,85 g (82% der theoretischen Ausbeute) von (all-E)-4'-Apo-ψ-carotin-4'-al. Fp. 166-167ºC.
  • 8,94 g (87 mMol) 3-Hydroxy-3-methyl-2-butanon werden zu einer Lösung von 1,54 g (23 mMol) Kaliumhydroxid (86%) in 14 ml Methanol unter Argon gegeben. Dann wird eine Lösung von 4,22 g (8,7 mMol) des (all-E)-4'-Apo-ψ-carotin-4'-al in 50 ml Methylenchlorid innerhalb 30 Minuten bei 10ºC zugegeben. Das Gemisch wird 64 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann mit 1,6 ml Essigsäure neutralisiert. Das Methylenchlorid wird an einem Rotationsverdampfer abdestilliert, während gleichzeitig 70 ml Methanol zugegeben werden. Die erhaltene Suspension wird filtriert und der Filterkuchen wird mit Methanol gewaschen und getrocknet. Umkristallisation aus Methylenchlorid/Methanol (Lösungsmittelaustausch) liefert 4, 10 g (83% der theoretischen Ausbeute) von (all-E)-1-Hydroxy-3,4- didehydro-1,2-dihydro-ψ,ψ-carotin-2-On als dunkelviolette Kristalle, Fp. 199ºC.
    • Beispiel 6 Herstellung von (all-E)-1'-Hydroxy-3',4'-didehydro-1',2'- dihydro-β,ψ-carotin-4,2'-dion
  • Ein Gemisch von 2,82 g (5,68 mNol) 4-Oxo-4'-apo-βcarotin-4'-al. 1,22 ml/1,159 g (11,37 mMol) 3-Hydroxy-3- methyl-2-butanon und 0,63 ml von 9-molarer wässeriger Kaliumhydroxidlösung (5,68 mMol KOH) in 20 ml Propanol wird mit Hilfe eines Ölbades auf 73-75ºC erhitzt. Nach etwa 2 Stunden bei dieser Temperatur wird durch Dünnschichtchromatographie die Vollständigkeit der Umsetzung festgestellt.
  • Das abgekühlte Gemisch wird mit einem Zwei-Phasen- Lösungsmittelsystem aus Methylenchlorid und Eiswasser, das ein wenig 1 N Schwefelsäure enthält, bis die wässerige Phase neutral ist, extrahiert. Nach Abtrennung der zwei Phasen wird die organische Phase über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und anschließend durch Verdampfen unter vermindertem Druck konzentriert. Das erhaltene dunkelrote Öl wird durch Kieselgel, unter Verwendung eines Gemisches von Diethylether und Hexan 2 : 1 als Elutionsmittel, chromatographiert. Die Vereinigung der Fraktionen, die das Carotinoidprodukt enthalten und Verdampfen unter vermindertem Druck liefert einen dunkelroten Rückstand, der anschließend Isomerisierung durch Erhitzen einer Lösung des Rückstands in Heptan bei 100ºC für etwa 16 Stunden unterzogen wird. Anschließend wird die Lösung auf 0ºC abgekühlt und die erhaltenen dunkelroten Kristalle (1,50 g; 46% der theoretischen Ausbeute) werden abfiltriert. Das Produkt 1'-Hydroxy-3',4'-didehydro-1',2'-dihydro-β,ψ-carotin-4,2'-dion weist einen Schmelzpunkt von 181-182ºC auf und einen (all-E)-Anteil von 92% gemäß HPLC; UV/VIS (Hexan + 1% CH&sub2;Cl&sub2; + 1% C&sub2;H&sub5;OH):501 nm (ε = 154 000).
    • Beispiel 7 Herstellung von (all-E)-5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo β = carotin-4,6'-dion
  • Zu einer Lösung von 2,15 g (5 mMol) von 4-Oxo-8'-apoβ-carotin-8'-al in 20 ml Propanol wird eine Lösung von 1,02 g (10 mMol) von 3-Hydroxy-3-methyl-2-butanon in 0,55 ml von 9- molarem wässerigem Kaliumhydroxid (5 mMol KOH) gegeben und das Gemisch wird in einem Ölbad auf 72-74ºC erhitzt. Das anfänglich heterogene Gemisch wird innerhalb 20 Minuten Erhitzungszeit homogen und innerhalb etwa 45 Minuten beginnt die Kristallisation.
  • Das Gemisch wird anschließend auf etwa 0-5ºC abgekühlt und filtriert und die Kristalle werden ihrerseits mit Methanol, Wasser (zum Neutralisieren des Filtrats), Methanol und Hexan gewaschen und bei 30ºC unter vermindertem Druck getrocknet. Auf diese Weise werden 1,94 g (75% der theoretischen Ausbeute) (all-E)-5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-βcarotin-4,6'-dion, Fp. 189-191ºC, und ungefähr 99% Reinheit gemäß HPLC erhalten.

Claims (13)

1. Verfahren zur Pigmentierung von Eigelb, Integumenten und/oder subkutanem Fett von Geflügel, und von Fleisch und/oder Integumenten von Fischen und Krustazeen durch Aufnahme eines oder mehrerer Carotinoide in das Futter von Geflügel, Fischen oder Krustazeen, dadurch gekennzeichnet, daß die Carotinoide 2'-Dehydroplectaniaxanthin, 1-Hydroxy-3,4-didehydro-1,2- dihydro-ψ,ψ-carotin-2-on, Desmethylspheroidenon, Spheroidenon, 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-6'-on, I-Hydroxy- 3',4'-didehydro-1',2'-dihydro-β,ψ-carotin-4,2'-dion und 5'- Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-4,6'-dion sind.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Carotinoide 2'-Dehydroplectaniaxanthin, Desmethylspheroidenon und Spheroidenon sind.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Gehalt an Carotinoid(en) im Futter irr dem Bereich 0,1 ppm bis 150 ppm liegt, bezogen auf das Gesamtgewicht des Futters.
4. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß es zur Pigmentierung des Eigelbes von Legehennen dient.
5. Carotinoid-angereichertes Futter für Geflügel, Fische oder Krustazeen und vorgesehen zur Pigmentierung von Eigelb, Fleisch, Integumenten und/oder subkutanem Fett des Geflügels und von Fleisch und/oder Integumenten der Fische und Krustazeen, dadurch gekennzeichnet, daß es als Carotinoid(e) eines oder mehrere von 2'-Dehydroplectaniaxanthin, 1-Hydroxy- 3,4-didehydro-1,2-dihydro-ψ,ψ-carotin-2-on, Desmethylspheroidenon, Spheroidenon, 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro 4'-apo-β-carotin-6'-on, 1'-Hydroxy-3',4'-didehydro-1',2'- dihydro-β,ψ-carotin-4,2'-dion und 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'- apo-β-carotin-4,6'-dion in einer wirksamen Menge enthält.
6. Carotinoid-angereichertes Futter nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß die Carotinoide 2'-Dehydroplectaniaxanthin, Desmethylspheroidenon und Spheroidenon sind.
7. Carotinoid-angereichertes Futter nach Anspruch 5 oder 6, dadurch gekennzeichnet, daß der Gehalt an Carotinoid(en), das/die zur Pigmentierung verwendet wird/werden, im Bereich 0,1 ppm bis 150 ppm liegt, bezogen auf das Gesamtgewicht des Futters.
8. Carotinoid-angereichertes Futter nach einem der Ansprüche 5 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß es für Geflügel ist.
9. Kügelchen enthaltend ein oder mehrere Carotinoide zur Aufnahme in eine Vormischung oder in ein Futter für Geflügel, Fische oder Krustazeen, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Carotinoid(e) eines oder mehrere von 2'- Dehydroplectaniaxanthin, 1-Hydroxy-3,4-didehydro-1, 2-dihydroψ,ψr-carotin-2-on, Desmethylspheroidenon, Spheroidenon, 5'- Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-6'-on, 1'-Hydroxy-3',4'- didehydro-1',2'-dihydro-β,ψ-carotin-4,2'-dion und 5'-Hydroxy- 5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-4,6'-dion in einer Menge von 1 bis 20 Gew.-% enthalten.
10. Vormischung enthaltend ein oder mehrere Carotinoide zur Aufnahme in ein Futter für Geflügel, Fische oder Krustazeen, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Carotinoid(e) eines oder mehrere von 2'-Dehydroplectaniaxanthin, 1-Hydroxy-3, 4- didehydro-1,2-dihydro-ψ,ψ-carotin-2-on, Desmethylspheroidenon, Spheroidenon, 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-6'-on, 1'-Hydroxy-3',4'-didehydro-1',2'-dihydro-β,ψ-carotin-4,2'-dion und 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-4,6'-dion in einer Menge von 0,001 bis 15 Gew.-% enthält.
11. Verwendung eines oder mehrerer der Carotinoide 2'- Dehydroplectaniaxanthin, 1-Hydroxy-3,4-didehydro-1, 2-dihydroxg,y-carotin-2-on, Desmethylspheroidenon, Spheroidenon, 5'- Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-6'-on, 1'-Hydroxy-3',4'- didehydro-1',2'-dihydro-β,ψ-carotin-4,2'-dion.und 5'-Hydroxy- 5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-4,6'-dion zur Pigmentierung von Eigelb, Integumenten und/oder subkutanem Fett von Geflügel, von Fleisch und/oder Integumenten von Fischen und Krustazeen.
12. Carotinoide 1-Hydroxy-3,4-didehydro-1,2-dihydro-ψ,ψ - carotin-2-on, 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-6'-on, 1'-Hydroxy-3',4'-didehydro-1',2'-dihydro-β,ψ-carotin-4,2'-dion und 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-β-carotin-4,6'-dion.
13. Verfahren zur Herstellung von 1-Hydroxy-3,4-didehydro-1,2- dihydro-ψ,ψ-carotin-2-on, 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-βcarotin-6'-on, 1'-Hydroxy-3',4'-didehydro-1',2'-dihydro-β,ψ- carotin-4,2'-dion oder 5'-Hydroxy-5',6'-dihydro-4'-apo-βcarotin-4,6'-dion, gekennzeichnet durch Kondensierung von 4'- Apo-iv-carotin-4'-al. 8'-Apo-β-carotinal, 4-Oxo-4'-apo-βcarotin-4'-al bzw. 4-Oxo-8'-apo-β-carotin-8'-al mit 3-Hydroxy- 3-methyl-2-butanon.
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