DE68929190T2 - Enantio- und regioselektive Synthesen von organischen Verbindungen mit Enolestern als irreversibele Transacylierungs-Reagenzien - Google Patents

Enantio- und regioselektive Synthesen von organischen Verbindungen mit Enolestern als irreversibele Transacylierungs-Reagenzien

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Description

    HINTERGRUND DER ERFINDUNG
  • Die vorliegende Erfindung betrifft enantio- und regioselektive Synthesen von Estern von Alkoholen, Zuckern, Organometallverbindungen und Glykosiden und deren Herstellung unter Verwendung von enzymvermittelter Umesterung. Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung proteasekatalysierte irreversible Umesterung unter Verwendung von Enolestern als Transacylierungsreagenzien.
  • Hydrolytische Enzyme, wie Lipasen, Esterasen und Proteasen, sind ausgiebig verwendet worden als Katalysatoren in enantioselektiven Synthesen. Whitesides, G. M., Wong, C-H., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 24 (1985) 617; Jones, J. B. Tetrahedron 42 (1986); Roberts, S. M. Chem. Br. (1987) 127; Akiyama, A., Bednarski, M., Kim, M. J., Simon, E. S., Waldman, J. L, Whitesides, G. M. lbid. (1987) 645. Wegen ihrer relativ hohen Stabilität in organischem Medium können viele hydrolytische Enzyme außerdem verwendet werden in organischen Lösungsmitteln für bestimmte Arten von Umwandlungen, die schwierig in Wasser durchzuführen sind. Die üblichsten Reaktionen sind esterase- und lipasekatalysierte stereoselektive Veresterungen und Umesterungen. Klibanov, AM. CHEMTECH (1986) 354-9; Klibanov, A. M., Cambou, B. J. Am. Chem. Soc, 106 (1984) 2687-92, Chen, C-S., Wu, S-H., Girdaukas, G., Sih, C. J. J. Am. Chem. Soc. 109 (1987) 2812-17; Guo, Z. W., Sih, C. J. Ibid. 110 (1988) 1999-2001; Gil, G., Ferre, E., Meou, A. Petit, J. L., Triantaphylides, C. Tetrahedron Lett. 28 (1987) 1647; Yokozeki, K., Yamanaka, S., Takinami, K, Hirose, Y., Tanaka, A., Sonomoto, K., Fukui, S. Eur. J. Appln. Microbiol. Biotechnicol 14 (1982) 1; Tambo, G. M. R., Schar, H-P, Busquets, X. F., Ghisalba, O. Tetrahedron Lett. 27 (1986) 5705-10; Belan, A., Bolte, J., Fauve, A., Gourey, J. G., Veschambre, H. J. Org. Chem. 52, 256-60. Langrand, G. Baratti, J. Buono, G., Triantaphylides, C. Tetrahedron Lett. 27 (1986) 29-32.
  • J. Org. Chem., Bd. 53, Nr. 13 (Juni 1988) S. 3127-3129 beschreibt die Herstellung eines stereoselektiv acylierten Alkohols durch Vermischen eines Mesoalkohols und eines Enolesters in Gegenwart einer Lipase.
  • Ein Nachteil von enzymkatalysierten hydrolytischen Reaktionen besteht darin, daß sie sehr langsam sind, verglichen mit einfachen Hydrolysen. Langrand, G., Baratti, J., Buono, G., Triantaphylides, C. Tetrahedron Lett. 27 (1986) 29-32. Außerdem müssen durch enzymatische Hydrolysen hergestellte Produkte sehr oft von anderen Nebenprodukten getrennt werden (insbesondere Alkohol, der vom Acylierungsreagens gebildet wird). Aufgrund der reversiblen Natur dieser Reaktionen und aufgrund der gleichen Stereoselektivität der Enzymkatalyse in beide Richtungen verringert sich die optische Reinheit der erzielten Produkte mit Fortschreiten der Umkehrreaktion. Diese Situation wird erläutert in Fig. 1, wo ein racemischer Alkohol zu spalten ist auf dem Weg über eine enzymatische Veresterung (R" = H) oder Umesterung.
  • (D,L)ROH + R'COOR" (D)-R'COOR + (L)-ROH + R"OH
  • (bedeutend) (unbedeutend)
  • (L) -R'COOR + (D)-ROH
  • (bedeutend) (unbedeutend)
  • Fig. 1
  • Wie aus Fig. 1 ersichtlich ist, wird, wenn das D-Isomer ein besseres Substrat ist als das L-Isomer für das Enzym, die Akkumulierung des D-Esters und des unreaktiven L-Alkohols beobachtet werden. In der umgekehrten Reaktion jedoch ist der D-Ester ein besseres Substrat und wird zum D-Alkohol umgewandelt. Der enantiomere Überschuß von beiden, dem D-Ester und dem L-Alkohol, wird sich somit progressiv verringern, wenn sich das Ausmaß der Umkehrreaktion verringert. Dieses Umkehrreaktionsproblem ist klar in der kinetischen Spaltung von Menthol erläutert worden, Chen, C-S., Wu, S-H., Girdaukas, G., Sih, C. J. J. Am. Chem. Soc. 109 (1987) 2812-17; Guo, Z. W., Sih, C. J. Ibid. 110 (1988) 1999-2001, und kann beobachtet werden in der enantioselektiven Veresterung oder Umesterung von Mesoverbindungen.
    • ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
  • Das erfindungsgemäße Verfahren blockiert das Fortschreiten der Umkehrreaktion. Die vorliegende Erfindung ist ein Verfahren für die irreversible regio- und stereoselektive proteasekatalysierte Acylierung von Alkoholen unter Verwendung von Enolestern als Acylierungsmittel. Die vorliegende Erfindung gestattet die selektive Modifizierung von Hydroxylgruppen von chiralen Alkoholen, einschließlich Zuckern, Organometallverbindungen und Glykosiden. Das bei der Umesterung freigesetzte Enol tautomerisiert rasch zum entsprechenden flüchtigen Aldehyd oder Keton, wodurch das Stattfinden einer Umkehrreaktion verhindert wird.
    • DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
  • Nuclearmagnetische Resonanzspektren (NMR) wurden aufgezeichnet auf einem Varian XL-200E- Spektrometer. Alle chemischen Verschiebungen wurden aufgezeichnet in ppm unter Verwendung von Tetramethylsilan als ein interner Standard, außer wenn etwas anderes angegeben wurde. Rotationen wurden bestimmt auf einem Perkin Elmer 240-Polarimeter. Gaschromatographie (GC)-Analysen erfolgten auf einem Hewlett-Packard 5890-Instrument mit einer 20-m DB-5-Megabohrsäule.
  • Vinylacetat (S5/kg, Siedepunkt 72ºC) und Isopropenylacetat (S25/kg, Siedepunkt 94ºC) stammten von Aldrich Chemical Co. Vinylpropionat (S25/25 g, Siedepunkt 93-94ºC) stammte von Pfaltz and Bauer, Inc. Einige Versuchsprotokolle werden in den Tabellen 1, 3 und 4 beschrieben.
  • Das Verfahren zur Herstellung von Isopropenylvalerat (1b von Fig. 2) war ähnlich demjenigen, das für die Herstellung von anderen Isopropylestern berichtet worden ist, mit einigen Modifikationen. Rothman, E. S., Serota, S., Perlstein, T.; Swern, D. J. Org. Chem. 27 (1962) 3123-27. Einem 250 ml-Rundkolben wurden 10 ml Valeriansäure (91,9 mMol) zugesetzt, die frisch destilliert worden war, und 20 ml Valeriansäureanhydrid. Dann wurden 200 ml frisch destilliertes lsopropenylacetat zugesetzt, gefolgt durch 2 Tropfen konzentrierter Schwefelsäure. Das Gemisch wurde dann auf Rückflußtemperatur erhitzt unter einer Argonatmosphäre 10 Stunden lang, wonach die gesamte Valeriansäure aufgebraucht worden war, was durch Kapillar-GC angezeigt wurde. Das Reaktionsgemisch ließ man auf Raumtemperatur abkühlen und 0,5 g Natriumbicarbonat wurden zugesetzt, um den Säurekatalysator abzuschrecken. Das Isopropenylacetat wurde dann entfernt durch Verdampfen unter vermindertem Druck. Die rückständige orangefarbige Flüssigkeit wurde in 300 ml gesättigtem Natriumbicarbonat mit 0ºC gegossen, das mit 100 ml Diethylether überschichtet wurde. Das Gemisch wurde heftig gerührt und die Etherschicht wurde analysiert durch GC auf das Verschwinden des gemischten Valeriansäureanhydrids. Nachdem das gesamte Anhydrid verbraucht worden war (6 Stunden), wurde die Etherschicht abgetrennt und die wäßrige Schicht mit 100 ml Ether gewaschen. Die vereinigten Etherschichten wurden mit 5 · 25 ml Portionen gesättigtem Nariumbicarbonat gewaschen, um die Valeriansäure zu entfernen. Die Etherschicht wurde dann mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen (30 ml) und der Ether dann über Natriumsulfat getrocknet. Der Ether wurde entfernt unter vermindertem Druck, und der lsopropylester wurde durch Vakuumdestillation gereinigt (Siedepunkt = 50-52ºC, 8 mm Hg). 7,85 g der klaren farblosen Flüssigkeit (1b) wurden erhalten (60,1% Ausbeute). ¹H-NMR (CDCl&sub3;) 4,65 (m, 2H), 2,35 (t, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,35 (m, 2H), 0,90 (s, 3H). ¹³C-NMR 171,89, 153,00, 101,87, 34,02, 26,92, 22,16, 19,52, 13,16. Auf ähnliche Weise wurde fsopropenylbutyrat hergestellt aus Buttersäure in 54% Ausbeute. 3,68 g des Isopropenylbutyrats wurden hergestellt aus 4,85 ml Buttersäure und 10 ml Buttersäureanhydrid. ¹&supmin;NMR 4,60 (m, 2H), 2,30 (t, 2H), 1,85 (s, 3H), 1,60 (m,2H), 0,90 (t, 3H).
  • Die Methode von Swern und Jordan wurde angewandt, um Vinylvalerat herzustellen (1e von Fig. 2). Swern, D., Jordan, E. F. Organic Synthesis, Coll. Bd. IV (1963) 977-80, hier als Bezugnahme enthalten. Frisch destillierte Valeriansäure (40 ml, 0,37 Mol) und Vinylacetat (300 ml) wurden in einen Dreihals- 500 ml-Rundkolben getan, der mit einem Rückflußkühler, einem Gaseinlaßrohr und einem Thermometer ausgestattet war. Die Lösung wurde unter Argon gerührt und Quecksilberacetat (1,2 g, 0,37 mMol) wurde zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde unter Argon 30 Minuten lang gerührt, wonach 10 Tropfen 100% Schwefelsäure zugesetzt wurden. Die Lösung wurde auf Rückflußtemperatur 6 Stunden lang erhitzt und dann auf Raumtemperatur abgekühlt. Natriumacetat (1,0 g) wurde zugesetzt, um den Säurekatalysator abzuschrecken. Das überschüssige Vinylacetat wurde entfernt durch Destillation unter Argon. Das Produkt (Vinylvalerat) 1e wurde isoliert durch Destillation (Siedepunkt = 135-145ºC) als eine klare farblose Flüssigkeit (29,4 g, 62% Ausbeute. ¹H-NMR 7,24 (m, 1 H), 4,80 (m, 1 H), 4,48 (m, 1H), 2,32 (t, 2H), 1,60 (m, 2H), 1,30 (m, 2H), 0,85 (t, 3H). ¹³C-NMR 170,69, 141,11, 97,22, 33,54, 26,57, 22,10, 13,57.
  • Jeder chirale Alkohol, der keine übermäßige sterische Hinderung aufweist, kann in dem vorliegenden Verfahren verwendet werden. Strukturen 15 und 16 von Tabelle 1 stellen Verbindungen dar, worin übermäßige sterische Hinderung vorhanden ist.
    • Katalysierte Reaktionen
  • Eine Anzahl von katalysierten irreversiblen Umesterungen unter Verwendung von Enolestern als Acylierungsreagenzien können durchgeführt werden auf eine Weise, wie sie im allgemeinen in Fig. 2 dargestellt wird.
  • 1a CH&sub3;- CH&sub3; Isopropenylacetat
  • 1b CH&sub3;(CH&sub2;)&sub3;- CH&sub3; Isopropenylvalerat
  • 1c CH&sub3;- H Vinylacetat
  • 1d CH&sub3;CH&sub2;- H Vinylpropionat
  • 1e CH&sub3;(CH&sub2;)&sub3;- H Vinylvalerat
  • Fig. 2
  • Die Reaktionen resultieren in optisch aktiven Estern aus verschiedenen Alkoholen einschließlich denjenigen von Glycerin- und Serinderivaten, organometallischen Verbindungen, Nucleosidderivaten, Zuckern und anderen chiralen Alkoholen.
  • Das Alkoholsubstrat und ein Überschuß an einem Enolester werden gelöst in einem organischen Lösungsmittel, wie Pyridin oder ein weniger polares Lösungsmittel. Nachdem eine katalytische Menge des Enzyms zugesetzt wurde, wird die Suspension inkubiert. Die Reaktion kann analytisch beobachtet werden auf ihre Umsetzung. Nachdem das erforderliche Ausmaß der Umsetzung erreicht wurde, wird das gewünschte Produkt isoliert, d. h. das Lösungsmittel durch Verdampfen in einem Vakuum entfernt. Das Esterprodukt und der nicht umgesetzte Alkohol können durch Chromatographie an einer Silicagelsäule abgetrennt werden.
  • Bevorzugte Acylierungsreagenzien (Enolester) sind lsopropenylacetat, Isopropenylvalerat, Vinylacetat, Vinylvalerat oder Vinylpropionat und unter diesen insbesondere Vinylacetat, Vinylpropionat oder Isopropenylacetat.
  • Bevorzugte Substanzen sind 2-N-Benzyloxycarbonyl (Z) Serinol, Glyceridol, Solketal, (±)2-Octanol, Sulcatol oder Ferrocenylethanol.
  • Außerdem kann das Enzym vorteilhafterweise auf einen Träger immobilisiert werden.
  • Eine bevorzugte Protease ist Protease N.
  • Die Reaktionsschemen für enantioselektive Acylierung von 2-O-Benzylglycerin (2) und N-Carbobenzoxyserinol (5) werden in den Fig. 3 bzw. 4 gezeigt.
  • Tabelle 1 zeigt mögliche Ausgangsmaterialien und Produkte, die durch katalytische Umesterung erzielt werden können. Tabelle 1
  • In dem nachstehenden allgemeinen Verfahren wird die Anwendung von proteasekatalysierter Umesterung beschrieben:
  • Um die Konstanten zu bestimmen (kinetische Parameter) werden die Diole, Monoester und Diester durch GC-Analyse bestimmt bei einem gewissen Umwandlungsgrad. Die enantiomeren Zusammensetzungen der Monoester werden durch NMR-Analyse bestimmt.
  • Die Kinetiken dieser irreversiblen Umesterungen können ähnlich behandelt werden wie die Kinetiken von Hydrolysen und die von Sih et al. entwickelte Gleichung zur Verwendung der Bestimmung von ee gegenüber der Umwandlung in Hydrolyse dürfte hier anwendbar sein. Wang, Y. F., Chen, C. S., Girdaukas, G., Sih, C. J. J. Am. Chem. Soc. 106 (1984) 3695; Wang, Y. F., Sih, S. J. Tetrahedron Lett. 25 (1985) 4999. Um die Konstanten zu bestimmen, wurden die Diole, Monoester und Diester bestimmt durch GC-Analyse bei gewissem Umwandlungsgrad. Die enantiomeren Zusammensetzungen der Monoester wurden bestimmt durch NMR-Analyse.
    • Strukturelle Wirkung und Lösungsmittel von Enolestern
  • Die Struktur der Enolester kann unterschiedlich sein in Abhängigkeit von der stereoselektiven Geschwindigkeit. Das gleiche gilt für das verwendete Lösungsmittel. Geeignete Ester sind CH&sub3;CO&sub2;Et, CH&sub3;CO&sub2;CH&sub2;CF&sub3;, CH&sub3;CO&sub2;ET, die vorstehend genannten Strukturen 1a bis 1e.
  • Geeignete Lösungsmittel sind Benzol, Isopropenylacetat, Chloroform, THF (Tetrahydrofuran), DMF, Pyridin usw.
  • Außerdem ermöglichte die Kombination von zwei irreversiblen enzymatischen Verfahren, Esterhydrolyse und Estersynthese, wirksame Synthesen einer Anzahl von optisch aktiven Monoestern und Alkoholen in beiden enantiomeren Formen, selbst mit einem mäßig enantioselektiven Enzym.
  • Die Abspaltgruppen (Aceton und Acetaldehyd) von Enolestern, die in den Verfahren verwendet wurden, sind flüchtig und leicht zu entfernen und machen die Produkttrennung sehr einfach. Wenn die Umesterungsreaktion in neutralen polaren organischen Lösungsmitteln durchgeführt wird, eignet sich das Verfahren für säure-, base- oder wasserempfindliche Substanzen.
    • Regioselektive Acylierungen von Zuckern und deren Derivaten
  • Die Methyl- und höheren Glykoside von Hexosen und Pentosen sind löslich genug in Pyridin oder anderen weniger polaren Medien, so daß die enzymatische Acetylierung dieser Verbindungen mit Lipase-katalyse erfolgen kann. Stärkere Lösungsmittel N,N-Dimethylformamid (DMF) lösen viele sonst unlösliche Zucker, jedoch machen sie auch die Lipasen inaktiv. Riva, S., Chapineau, J., Kieboom, A. P. G., Klibanov, A. M. J. Am. Chem. Soc. 110 (1988) 584-589. Es wurde nun überraschenderweise gefunden, daß Protease N (neutrale Protease von Amano International Enzyme Company) Enolester als Acyl donoren verwenden wird. Dieses Enzym bewahrt außerdem seine katalytische Wirksamkeit in trockenem DMF im Gegensatz zu Lipasereaktionen.
  • Zusammenfassungen von einigen der Daten, die mit Hexosen (Tabelle 2) und Nucleosiden (Tabelle 3) erhalten wurden, werden im nachstehenden gezeigt. Ausgewählte spezifische als auch allgemeine Verfahren zur Acetylierung von Zuckern und deren Derivaten werden ebenfalls beschrieben. Tabelle 2: Enzym-katalysierte Acetylierung von Hexosen und deren Derivaten unter Verwendung von Enolestern
  • * Candida cylindracea, Tuppe VIII, Sigma Chemical Company; Vergleichsbeispiel (Beispiel 1)
    • Beispiel 1 CCL-katalysierte Umesterung von Methyl-β-D-glucopyranosid (18a von Tabelle 2) mit Vinylacetat (1c von Fig. 2) (Vergleich)
  • Methyl-β-D-glucopyranosid (18a von Tabelle 2) (388 mg, 2 mMol) und Vinylacetat (1c von Fig. 2) (4 mMol) wurden gelöst in 12 ml Benzol-Pyridin (2 : 1). Dann wurden 388 mg CCL zugesetzt und die Suspension bei 28ºC gerührt. Nach 24 Stunden wurden weitere 388 mg CCL zugesetzt und dieses nach 48 Stunden wiederholt. Die Suspension wurde bei 28ºC 5 Tage lang gerührt; dann wie üblich aufgearbeitet unter Bildung von Methyl-6-O-β-D-glucopyranosid 18b als ein Feststoff, der aus Ethylacetatn-Hexan umkristallisiert wurde; Schmelzpunkt 129-130ºC; [α]²&sup5;D -27,1 (c 1,4, CH&sub3;OH); ¹H-NMR (CD&sub3;COCD&sub3;); 2,02 (3H, s); 2,98 (1H, s); 3,13 3,25 (1H, m), 3,3 3,55 (3H, m), 3,45 (3H, s), 4,15 4,25 (2H, m); 4,30 4,45 (3H, m); ¹³C-NMR (CD&sub3;COCD&sub3;); 104,56 (C1), 74,29 (C2), 77,36 (C3), 70,85 C5), 64,01 (C6), 20,42 und 170,69; (Acetyl, 56,39 (Methoxy).
  • Protease N, erhalten von Amano International Enzyme Co., wurde in den folgenden Reaktionen verwendet. Andere hochstabile Proteasen wie Proteasen, erhalten aus thermophillen Organismen oder gentechnisch veränderten stabilen Proteasen, könnten ebenfalls in den nachstehenden Reaktionen verwendet werden. Das rohe handelsübliche Präparat wurde gelöst in 0,1 M Phosphatpuffer, pH 7,8 2 g /35 ml), und lyophilisiert. Das erhaltene trockene Pulver wurde pulverisiert mit einem Mörser und einem Pistill vor dessen Verwendung.
    • Regioselektive Acylierung von Zucker Beispiel 2 - Herstellung von2-Acetamido-6-O-acetvl-2-deoxv-D-mannopyranose
  • Protease-N aus Bacillus subtilis (erhalten von Amano) (2 g) wurde gelöst in 0,1 Mol NaH&sub2;PO&sub4; (35 ml), und die dabei erhaltene Lösung wurde 15 Minuten lang gerührt. Der pH-Wert wurde dann eingestellt auf 7, 8 mit 8,0 NaOH, und die Lösung wurde gefriergetrocknet. Dieses gefriergetrocknete Präparat wurde in dem Syntheseverfahren verwendet. N-Acetyl-β-D-mannosaminmonohydrat (Sigma) (478 mg, 2 mMol) wurde suspendiert in wasserfreiem N,N-Dimethylformamid (2 ml). Isopropenylacetat (600 mg, 6 mMol) wurde zugesetzt, gefolgt durch das Enzympräparat (600 mg). Die Suspension wurde bei 45ºC geschüttelt und durch TLC beobachtet (Silicagel; EtOAc : MeOH : H&sub2;O = 100 : 10 : 1). nach 44 Stunden wurde die Suspension filtriert und das Enzym mit Methanol gewaschen (2 · 3 ml). Die Lösungsmittel wurden unter Vakuum bei 40ºC verdampft unter Bildung eines gelben Sirups. Dieser Sirup wurde fraktioniert an einer Silicagelsäule (45 g), eluiert mit EtOAc/MeOH/H&sub2;O = 10011011. Zwei Produkte wurden erhalten: das erste mit einem höheren Rf entsprach einer Triacetatverbindung (30 mg, 10%), das zweite (Haupt)Produkt wurde erhalten als ein amorpher weißer Feststoff, der bei der Analyse sich als 2-Acetamido-6-O-acetyl- 2-deoxy-D-mannopyranose erwies. (384 mg, 73%): ¹H-NMR (D&sub2;O/p-Dioxan = 3,57 ppm) δ 4,93 (s, H1, α) , 4,84 (s, H 1β), 4,29-4,02 (m, 5H), 3,87 (dd, H 3α), 3,70-3,27 (m, 3H), 1,95, 1,91, 1,88 und 1,87 (4 s, 6 H, Acetal); ¹³C-NMR (D&sub2;O/p-Dioxan = 67,46 ppm) δ 176,60, 175,67, 174, 96 und 1,74,92 (alles Carbonyle), 94,05 (c 1 β), 93,97 (C 1 α), 74,78 (c β), 72, 72 (C β), 70,57 (C 5 α), 69,43 (C α), 67,94 (C α), 67,78 (C β), 64,61 (C 6 α), 64,36 (C 6 β), 54,84 (C 2 β), 54,18 (C 2 α); α/β = 76/24; Schmelzpunkt 47- 51ºC; [a]²&sup4;D +15,9º (c 1,13 H&sub2;O). Analyse berechnet für C&sub1;&sub0;H&sub1;&sub6;NO&sub7;: C 45,80; H 6,15; N 5,34. Gefunden: C 45,89; H 6,20; N 4,95.
    • Regioselektive Acylierung von Nucleosiden Beispiel 3 - Allgemeine Verfahren
  • Die nachstehenden allgemeinen Verfahren wurden angewandt zur Durchführung der regioselektiven Acylierung der in Tabelle 3 aufgelisteten Nucleoside:
  • 1 mMol Nucleosid wurde gelöst in 2-4 ml trockenem DMF und erwärmt. Die Lösung wurde auf 45ºC abgekühlt und 1,1 ml (10 Äquiv.) Isopropenylacetat und 260 mg pulverisierte Protease N wurden zugesetzt. Die Suspension wurde bei 45ºC geschüttelt. Nach den entsprechenden Zeiten, wie in Tabelle 3 angezeigt, wurde das Reaktionsgemisch filtriert und das Filtrat zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde gereinigt durch Silicagelchromatographie unter Verwendung von Gemischen aus Ethylacetat : Ethanol : Wasser als das Eluierungsmittel während der angezeigten Zeiten. Die isolierten Produkte wurden in den in Tabelle 3 gezeigten Ausbeuten erhalten.
  • Tabelle 3 zeigt, daß, wo Acetylierung erfolgte, sich vorwiegend die Monoacetylderivate bildeten. Die bevorzugte Bildung der Monoacetylderivate zeigt an, daß das Nucieosid an der primären (5') Hydroxylgruppe acetyliert war. Tabelle 3: Selektive enzymatische Acetylierung von Nucleosiden und Zuckern in wasserfreiem Dimethylformamid
  • PN = Protease N [Amano]
  • S = Subtilisin BPN
  • Die Einfachheit dieser irreversiblen Umesterung macht das Verfahren geeignet für die Herstellung von chiralen Alkoholen oder Estern, die durch andere Maßnahmen vielleicht schwierig herzustellen sind.

Claims (8)

1. Ein Verfahren zur Herstellung eines stereoselektiv acylierten Alkohols, umfassend:
Vermischen eines chiralen Alkoholsubstrats und eines Überschusses an Enolester in einem organischen Lösungsmittel von gleicher Polarität zum Alkoholsubstrat unter Bildung eines Gemischs;
Inkubieren dieses Gemischs mit einer katalytischen Menge einer Protease und Isolieren einer optisch angereicherten stereoselektiv acylierten Form dieses Alkoholsubstrats von diesem Gemisch.
2. Das Verfahren des Anspruchs 1, worin das Acylierungsreagens Isopropenylacetat, Isopropenylvalerat, Vinylacetat, Vinylvalerat oder Vinylpropionat ist.
3. Das Verfahren von Anspruch 1, worin dieses Enzym immobilisiert ist auf einem Träger.
4. Das Verfahren von Anspruch 1, worin dieses Substrat 2-N-Benzyloxycarbonyl (Z) Serinol, Glyceridol, Solketal, (±)2-Octanol, Sulcatol oder Ferrocenylethanol ist.
5. Das Verfahren des Anspruches 1, worin diese Protease auf einem Träger immobilisiert ist.
6. Das Verfahren des Anspruchs 4, worin das Acylierungsmittel Vinylacetat oder Vinylpropionat ist.
7. Das Verfahren des Anspruchs 1, worin das Acylierungsmittel Vinylacetat oder lsopropenylacetat ist.
8. Das Verfahren nach einem der Ansprüche 1-7, worin die Protease Protease N ist.
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