DE60316967T2 - Kondensiertes protein, das sowohl thrombolytisch als auch gerinnungshemmend wirkt, und dessen verwendung - Google Patents
Kondensiertes protein, das sowohl thrombolytisch als auch gerinnungshemmend wirkt, und dessen verwendung Download PDFInfo
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Description
- TECHNISCHES GEBIET
- Diese Anmeldung betrifft ein Fusionsprotein, das aus einem thrombolytischen Protein, einem gerinnungshemmenden Protein und einem Verbindungspeptid besteht. Insbesondere besteht das Fusionsprotein aus einem gerinnungshemmenden Protein und einem Proteinmolekül, das eine Plasminogen aktivierende Wirkung besitzt, wobei die beiden Proteine über ein Verbindungspeptid miteinander verbunden sind, das von Gerinnungsfaktoren erkannt und gespalten werden kann. Die Anmeldung betrifft auch die medizinische Verwendung des Fusionsproteins und die Verwendung des Verbindungspeptids, das vom Gerinnungsfaktor erkannt werden kann, beim Verbinden eines thrombolytischen Proteins und eines gerinnungshemmenden Proteins.
- ALLGEMEINER STAND DER TECHNIK
- Herz-Kreislauf-Erkrankungen sind beim Menschen die Haupttodesursache. Gegenwärtig werden im klinischen Bereich als bedeutende thrombolytische Medikamente der Urokinase- und der Gewebe-Plasminogenaktivator eingesetzt, während als bedeutende gerinnungshemmende Medikamente Heparin und Hirudin verwendet werden. Obwohl mit der thrombolytischen Behandlung die Todesrate von Patienten mit Thromben erfolgreich gesenkt wird, kommt es häufig aufgrund von geringen Mengen von geronnenem Blut, das in den Blutkreislauf gelangt, zu erneuten Thromben. Deshalb wird jetzt Heparin oder Hirudin als gerinnungshemmendes Mittel in Verbindung mit thrombolytischen Mitteln für die Thrombolysebehandlung verwendet.
- Aufgrund ihrer geringen Spezifität führen thrombolytische Mittel und gerinnungshemmende Mittel jedoch gewöhnlich zu systematischer Hämolyse und Gerinnungshemmung, was systematische Blutungen verursacht.
- Insbesondere können der Gewebe-Plasminogenaktivator (t-PA), Streptokinase (SK), Urokinase (UK) und der Urokinase-Plasminogenaktivator (u-PA) das Plasminogen aktivieren, wodurch wiederum Gerinnsel am Ort des Thrombus gelöst werden. Das aktivierte Plasminogen verursacht jedoch auch an anderen Stellen als dem Thrombus Blutungen. Staphylokinase (SAK) ist ein neuer Plasminogenaktivator natürlichen Ursprungs, der eine gewisse Spezifität gegenüber dem Thrombus aufweist.
- Hirudin (HV), das ein kleines Protein ist, wird aufgrund seiner hohen Affinität zu und gezielten Hemmung von Thrombin als das neue gerinnungshemmende Mittel angesehen. Hirudin neigt jedoch dazu, im klinischen Bereich systematische Blutungen zu verursachen. Darüber hinaus gibt es bis jetzt noch keinen Hirudin-Antagonisten.
- Um Nebenwirkungen abzuschwächen und die therapeutische Wirkung thrombolytischer Medikamente zu erhöhen, ist es daher wichtig, ihre Selektivität, Zielgerichtetheit und örtliche Konzentration bei Blutgerinnseln zu verstärken und die Konzentration oder Aktivität des Medikaments an Stellen ohne Thromben sowie die Blutungen als Nebenwirkung zu vermindern. Das Fusionsprotein nach dem Stand der Technik kann die Blutungen als Nebenwirkung nicht vermindern. Van Zyl et al., Thrombosis Research 88 (1997), 419 bis 426, offenbart das Fusionsprotein PLATSAK, das vom Faktor Xa gespalten werden kann und SAK und einen Abschnitt von Hirudin umfasst, die beide über einen Linker verbunden sind, der die Sequenz IEGR umfasst. Das Fusionsprotein weist reduzierte Thrombinaktivität auf.
- Die Entwicklung thromboseverhindernder Medikamente konzentriert sich daher auf bifunktionelle Medikamente, die sowohl thrombolytisch als auch gerinnungshemmend wirken. Um die thrombolytische Wirkung mit der gerinnungshemmenden Wirkung zu verbinden, wurde die Fusion von Hirudin und SAK oder SK untersucht. Es zeigte sich, dass, wenn der N-Terminus von Hirudin mit dem C-Terminus von SAK oder SK verbunden wurde, das Hirudin seine Antithrombinaktivität verliert, wohingegen die Plasminogen aktivierende Wirkung des thrombolytischen Proteins erhalten oder teilweise erhalten bleibt; wenn der C-Terminus von Hirudin mit dem N-Terminus von SAK verbunden ist, wird das Fusionsprotein aufgrund des schnellen Abbaus des N-Terminus von SAK im lebenden Organismus abgebaut, bevor es seine Funktion ausüben kann. Daher ist es bei der Thrombolysebehandlung günstig, ein Fusionsprotein zu entwickeln, das sowohl thrombolytisch als auch gerinnungshemmend wirkt.
- ZWECK DER ERFINDUNG
- Zweck dieser Erfindung ist es, ein Fusionsprotein bereitzustellen, das sowohl thrombolytisch als auch gerinnungshemmend wirkt.
- BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
- Diese Erfindung beruht auf der folgenden Erkenntnis: ein Fusionsprotein kann hergestellt werden, indem ein thrombolytisches Protein und ein gerinnungshemmendes Protein über ein Peptid verbunden werden, das eine Sequenz enthält, die von einem Gerinnungsfaktor erkannt werden kann. Das so hergestellte Fusionsprotein bringt verschiedene, folgende Vorteile mit sich: Erstens bleibt mit dem Fusionsprotein die Plasminogen aktivierende Wirkung und damit die thrombolytische Wirkung erhalten; zweitens wird der N-Terminus des gerinnungshemmenden Proteins, beispielsweise Hirudin, mit dem C-Terminus des thrombolytischen Proteins verbunden und daher weist das gesamte Fusionsprotein keine gerinnungshemmende Wirkung an Stellen ohne Thromben und in vitro auf, wodurch die als Nebenwirkung auftretenden Blutungen, die von dem gerinnungshemmenden Protein wie Hirudin hervorgerufen werden, beseitigt oder vermindert werden; drittens ist das Fusionsprotein aufgrund der hohen Affinität von Hirudin zu Thrombin am Ort des Thrombus in der Lage, genau auf Gerinnsel abzuzielen und erhöht damit die Konzentration des Medikaments am Ort des Thrombus und verringert die therapeutische Menge des Medikaments; wenn sich das Fusionsprotein zum Ort des Thrombus bewegt, spaltet viertens der Gerinnungsfaktor, der an der Thrombose beteiligt und kennzeichnend für den Thrombus ist, schnell das Fusionsprotein an der vorgesehenen Erkennungsstelle und setzt das freie thrombolytische Protein und das gerinnungshemmende Protein frei, wodurch sowohl die thrombolytische als auch die thrombolytische Wirkung wirksam werden. Die Erfindung wurde im Hinblick auf die vorstehenden Vorteile aufgebaut.
- Gemäß einem Gesichtspunkt betrifft die Erfindung ein Fusionsprotein, das aus einem thrombolytischen Protein, einem gerinnungshemmenden Protein und einem Verbindungspeptid besteht, wobei das thrombolytische Protein SAK ist, das gerinnungshemmende Protein Hirudin ist und beide durch das Verbindungspeptid GSIEGR verbunden sind.
- Gemäß einem weiteren Gesichtspunkt betrifft die Erfindung eine pharmazeutische Zusammensetzung, die das Fusionsprotein und einen pharmazeutisch akzeptablen Träger oder Hilfsstoff umfasst.
- ERLÄUTERUNG DER ZEICHNUNGEN
- Die folgenden Zeichnungen dienen der Veranschaulichung dieser Erfindung, sollen jedoch die Erfindung nicht einschränken.
-
1 ist eine Darstellung des Fusionsproteins. -
2 zeigt die Elektrophorese des Fusionsproteingens, des Gens von Staphylokinase (SAK) und des Gens von Hirudin (HV2). - Wie er hier verwendet wird, bezeichnet der Begriff „thrombolytisches Protein" die Proteine, die thrombolytisch wirken, beispielsweise Staphylokinase (SAK), Gewebe-Plasminogenaktivator (t-PA), Streptokinase (SK), Urokinase (UK), Urokinase- Plasminogenaktivator (u-PA), Venenum und Mutanten derselben, die andere hämolytische Faktoren aktivieren oder an sich eine thrombolytische Wirkung aufweisen. Staphylokinase (SAK) oder ihre Mutanten werden bevorzugt.
- Wie er hier verwendet wird, bezeichnet der Begriff „gerinnungshemmendes Protein" die Proteine, die gerinnungshemmend wirken, beispielsweise Hirudin, Antithrombin III, Venenum und Mutanten derselben. Hirudin oder seine Mutanten werden bevorzugt.
- Wie er hier verwendet wird, bezeichnet der Begriff „Verbindungspeptid, das von einem Gerinnungsfaktor erkannt wird" das Tetrapeptid IEGR (IleGluGlyArg), ein Peptid, das die Abfolge IEGR enthält, das Tripeptid GPR (GlyProArg) oder ein Peptid, das die Abfolge GPR enthält.
- Wie er hier verwendet wird, bezeichnet der Begriff „Krankheiten oder Erkrankungen, die mit einer Thrombose in Zusammenhang stehen" jede Krankheit oder Erkrankung, die von Thromben verursacht wird, beispielsweise Gerinnsel im Gehirn, arterielle Gerinnsel, Schlaganfall und Arteriosklerose.
- Wie er hier verwendet wird, bezeichnet der Begriff „Patient" Säugetiere, insbesondere den Menschen.
- Gemäß dieser Erfindung ist das Fusionsprotein der Erfindung ein SFH-Fusionsprotein (SAK-GSIEGR-HV2), das aus Staphylokinase und Hirudin besteht, die durch GSIEGR verbunden sind.
- Das Fusionsprotein kann in E. coli, Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae oder tierischen Zellen exprimiert werden. Es wird vorzugsweise in E. coli oder Hefezellen exprimiert.
- Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung veranschaulichen, sollen die Erfindung jedoch nicht einschränken.
- Beispiele
- Beispiel 1 Herstellung des Fusionsproteins SFH (SAK-GSIEGR-HV2) und seine bifunktionelle Wirkung
- Die Erkennungsstelle für EcoR I beziehungsweise BamH I wird an die beiden Enden des SAK-Gens angelagert. Das SAK-Gen ohne Stoppcodon wird in den Vektor pBV220 eingebracht, sodass pBVSAK entsteht. Mithilfe des PCR-Verfahrens werden die BamH I-Restriktionsstelle und die Sequenz, die die FXa-Erkennungssequenz GSIEGR verschlüsselt, über einen Primer (5'-CG GGA TCC ATC GAA GGT CGT ATT ACT TAC ACT GAT TGT ACA GAA TCG-3') vor dem Hirudin-Gen eingebaut. Der daran angepasste Primer hinter dem Hirudin-Gen enthält eine Pst I-Restriktionsstelle. Das Hirudin-Gen mit einer FXa-Erkennungssequenz GSIEGR wird mit den beiden Enzymen BamH I und Pst I verdaut und der vorstehende Vektor pBVSAK wird ebenfalls mit BamH I und Pst I verdaut. Das verdaute Hirudinfragment wird in den verdauten Vektor pBVSAK eingesetzt, damit das Plasmid pBVSFH entsteht (siehe
1 ). Die beiden Genfragmente können auch mithilfe des Verfahrens der Overlap-Extension-PCR verbunden werden. Das Plasmid pBVSFH wird in E. coli überführt und bei 42°C die Expression ausgelöst. Das gewünschte Fusionsprotein (SFH) wird durch Ionenaustausch und Gelfiltration mit einer Reinheit von über 96% gewonnen. Das Fusionsprotein SFH umfasst drei Domänen, eine SAK-Sequenz, die FXa-Erkennungssequenz GSIEGR und Hirudin. Die Aminosäuresequenz des Fusionsproteins SFH lautet folgendermaßen:
- Die thrombolytische Wirkung des gereinigten Fusionsproteins wurde unter Verwendung des chromogenen Substrats S-2251 bestimmt. Zur Überprüfung der thrombolytischen und gerinnungshemmenden Wirkung des Fusionsproteins im lebenden Organismus wurde mit kappa-Carrageen im Schwanz der Maus eine Thrombose (RTT) ausgelöst. Die Ergebnisse zeigen, dass die gerinnungshemmende Wirkung des Fusionsproteins SFH beträchtlich höher als die von SAK ist.
- Insbesondere wird, nach der Auslösung mit kappa-Carrageen über 24 Stunden, aller acht Stunden SAK i.p. in einer Dosis von 1,2 mg/kg Körpergewicht injiziert und die Hemmung der Thrombose des Schwanzes beträgt 36,6%. Wird jedoch äquimolares SFH in einer Dosis von 1,8 mg/kg Körpergewicht verabreicht, beträgt die Hemmung der Thrombose des Schwanzes 100%. Nach Auslösung mit kappa-Carrageen über 36 Stunden erreicht die Hemmung der Thrombose des Schwanzes 18,2% beziehungsweise 90%, wenn SAK und SFH wie oben angegeben verabreicht werden. Die ausführlichen Ergebnisse sind in Tabelle 1 bis 3 dargestellt. Tabelle 1 Thrombolytische Wirkung des Fusionsproteins (SFH) und von Staphylokinase (SAK), ermittelt unter Verwendung von chromogenen Substraten (S-2251) (Reaktionszeit beträgt 5 Min., n = 3, Δ OD405)
Proben SAK SFH Δ OD405 0,357 ± 0,22 0,394 ± 0,01 - Anmerkung: Für die Bestimmung wurden 2 nM Fusionsprotein und 2 nM Staphylokinase verwendet.
- Anmerkung: 5,8 μg des Fusionsproteins SFH und 0,2 U FXa wurden gemeinsam 10 Min. lang bei 37°C inkubiert. Zur Feststellung der gerinnungshemmenden Wirkung wurde ein Gerinnselverfahren eingesetzt.
- Anmerkung: SAK wird aller acht Stunden in einer Dosis von 1,2 mg/kg Körpergewicht verabreicht und äquimolares SFH wird in einer Dosis von 1,8 mg/kg verabreicht. Die eingesetzten Tiere sind Kunming-Mäuse (KM-Mäuse). Die gerinnungshemmende Wirkung wird als Hemmung der Thrombose des Schwanzes bei der Maus ausgedrückt.
- Tabelle 1 zeigt, dass das Fusionsprotein SFH dieselbe thrombolytische Wirkung wie freie Staphylokinase aufweist. Tabelle 2 zeigt, dass das vollständige Fusionsprotein SFH keine gerinnungshemmende Wirkung aufweist, jedoch seine vollständige gerinnungshemmende Wirkung zeigt, sobald es vom Gerinnungsfaktor FXa gespalten wurde. Tabelle 3 zeigt, dass SFH die maßgebliche gerinnungshemmende Wirkung besitzt. Folglich wirkt das Fusionsprotein der Erfindung tatsächlich sowohl thrombolytisch als auch gerinnungshemmend.
- Beispiel 2 Herstellung des Fusionsproteins tPA-PRIEGR-HV2
- Die Erkennungsstelle für Xho I und Avr II wird vor beziehungsweise nach dem tPA-Gen angelagert. Das tPA-Gen ohne Stoppcodon wird in den Vektor pPIC9 eingeführt. Über einen Primer werden mithilfe des PCR-Verfahrens die Avr II-Restriktionsstelle und die Sequenz, die die FXa-Erkennungssequenz verschlüsselt, vor dem Hirudin-Gen eingebaut. Der daran angepasste Primer hinter dem Hirudin-Gen enthält eine Not I-Restriktionsstelle. Das Hirudin-Gen mit einer FXa-Erkennungssequenz wird mit den beiden Enzymen Avr II und Not I verdaut und das entstehende Fragment wird in den zuvor entworfenen Vektor pPIC9 eingebunden, wobei sich das eingeführte Fragment hinter dem tPA-Gen befindet und zusammen mit tPA das Fusionsgen PAFH bildet. Das so hergestellte Plasmid wird als pPAFH bezeichnet. Die Plasmide pPAFH und pPIC9K werden mit BamH I und Sal I verdaut. Das Gen PAFH wird anschließend in pPIC9K eingesetzt, damit das Gen pPAFH-K entsteht. Das Plasmid pPAFH-K wird linearisiert und durch Elektrotransformation in das Hefegenom eingebaut. Um die Expression auszulösen, wird Methanol verwendet. Das gewünschte Fusionsprotein umfasst drei Domänen, eine tPA-Sequenz, eine FXa-Erkennungssequenz und Hirudin.
- Beispiel 3 Herstellung des Fusionsproteins STH (SAK-GSLGPR-HV2) und seine bifunktionelle Wirkung
- Die Erkennungsstelle für EcoR I beziehungsweise BamH I wird an den beiden Enden des SAK-Gens angelagert. Das SAK-Gen ohne Stoppcodon wird in den Vektor pBV220 eingebracht, sodass pBVSAK entsteht. Mithilfe des PCR-Verfahrens werden die BamH I-Restriktionsstelle und die Sequenz, die die FXIIa-Erkennungssequenz GSLGPR verschlüsselt, über einen Primer vor dem Hirudin-Gen eingebaut. Der daran angepasste Primer hinter dem Hirudin-Gen enthält eine Pst I-Restriktionsstelle. Das Hirudin-Gen mit einer FXIIa-Erkennungssequenz GSLGPR wird mit den beiden Enzymen BamH I und Pst I verdaut und der vorstehende Vektor pBVSAK wird ebenfalls mit BamH I und Pst I verdaut. Das verdaute Hirudinfragment wird in den verdauten Vektor pBVSAK eingesetzt, damit das Plasmid pBVSTH entsteht. Die Sequenz wird mittels enzymatischem Verdau bestätigt. Wahlweise können die beiden Genfragmente mithilfe des Verfahrens der Overlap-Extension-PCR verbunden werden. Das Plasmid pBVSTH wird in E. coli überführt und bei 42°C die Expression ausgelöst. Das gewünschte Fusionsprotein (STH) wird durch Ionenaustausch und Gelfiltration mit einer Reinheit von über 96% gewonnen. Das Fusionsprotein STH umfasst drei Domänen, eine SAK-Sequenz, die FXIIa-Erkennungssequenz GSLGPR und Hirudin.
| Proben | Gerinnungshemmende Wirkung |
| Fusionsprotein, nicht von FXa gespalten | 0 |
| Fusionsprotein, mit 0,2 U FXa 10 Min. 2560 ATE lang gespalten |
| Dauer der Induktion mit Kappa-Carrageen (Std.) | Anzahl von Tieren in jeder Gruppe | SAK | SFH |
| 24 | 10 | 36,6% | 100% |
| 36 | 10 | 18,2% | 90% |
Claims (2)
- Fusionsprotein, umfassend ein thrombolytisches Protein, ein gerinnungshemmendes Protein und ein spaltbares Verbindungspeptid, wobei das Fusionsprotein ein Fusionsprotein (SAK-GSIEGR-HV2) aus Staphylokinase und Hirudin ist, die durch das Verbindungspeptid GSIEGR verbunden sind.
- Pharmazeutische Zusammensetzung, die ein Fusionsprotein nach Anspruch 1 und einen pharmazeutisch akzeptablen Träger oder Hilfsstoff umfasst.
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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Family Cites Families (7)
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102009010611A1 (de) * | 2009-02-25 | 2010-08-26 | Siemens Aktiengesellschaft | Vorrichtung und Verfahren zur Steuerung einer mit mehreren Brennern ausgestatteten Turbine für flüssige oder gasförmige Brennstoffe |
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