DE69921096T2

DE69921096T2 - Auf bibapcitide gegründete pharmaceutische zusammensetzungen für bildgebung und behandlung von thromben

Info

Publication number: DE69921096T2
Application number: DE69921096T
Authority: DE
Inventors: T. Richard DEAN; John Lister-James
Original assignee: Diatide Inc
Current assignee: CIS Bio International SA
Priority date: 1998-02-06
Filing date: 1999-02-05
Publication date: 2006-02-02
Anticipated expiration: 2019-02-06
Also published as: SK11392000A3; DK1053027T3; EP1053027A1; CN1103606C; NZ505085A; ES2229681T3; IL137076A; PT1053027E; CN1290179A; JP2003532617A; EP1053027B1; PL342253A1; CA2319544A1; US6028056A; NO20003881L; KR100452390B1; WO1999039747A1; CA2319544C; EA005406B1; IL137076A0

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet der diagnostischen Bildgebung von Thrombose. Die Erfindung betrifft insbesondere pharmazeutische Zusammensetzungen zur Bildgebung von Thromben. Die Erfindung betrifft ebenfalls das Gebiet der Behandlung von Thrombose mit Medikamenten, die aus neuen Vorstufen-Reagenzien hergestellt werden.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Thrombose und Thromboembolie, insbesondere tiefe Venenthrombose (DVT) und Lungenembolie (PE) sind allgemeine klinische Zustände, die mit erheblicher Morbidität und Mortalität einhergehen. Man schätzt, dass in den Vereinigten Staaten etwa 5 Millionen Patienten eine oder mehrere DVT-Episoden pro Jahr erfahren, und dass mehr als 500000 Fälle von Lungenembolie auftreten, was zu 100000 Sterbefällen führt. Es wird auch geschätzt, dass mehr als 90% sämtlicher Lungenembolien aufgrund von DVT in den unteren Extremitäten entstehen. Eine Antikoagulanztherapie kann diese Zustände effizient behandeln, wenn sie früh genug angewendet wird. Eine solche Behandlung ist jedoch mit Gefahren verbunden (beispielsweise inneren Blutungen), die eine prophylaktische Anwendung unnötigerweise verhindern. Fortschrittlichere Techniken des thrombolytischen Eingriffs (wie das Verabreichen von rekombinantem Gewebe-Plasminogenaktivator oder Streptokinase) können in akuten Fällen verwendet werden, aber diese Techniken bergen noch größere Gefahren. Darüber hinaus erfordert eine effiziente klinische Anwendung dieser Techniken, dass die Stelle des angreifenden Thrombus identifiziert wird, damit sich die Wirkung der Behandlung überwachen lässt.
Aus diesen Gründen ist eine rasche Maßnahme zur Lokalisierung von Thromben in vivo, am stärksten bevorzugt mittels nicht-invasiver Verfahren, sehr erwünscht. In der Vergangenheit wurden zur Identifizierung von Stellen tiefer Venenthrombose Kontrast-Venographie und Kompressions-B-Modus-Ultraschall verwendet; die verwendete Technik wurde je nach der erwarteten Stelle des Thrombus ausgewählt. Die herkömmliche Technik ist jedoch invasiv, und beide Techniken sind für den Patienten unangenehm. Zudem sind diese Verfahren in vielen Fällen entweder ungeeignet oder ergeben ungenaue Ergebnisse. Gängige Verfahren, die zur Diagnose von PE verwendet werden, umfassen Thorax-Röntgen, Elektrokardiogramm (EKG), arterielle Sauerstoffspannung, Perfusions- und Ventilations-Lungen-Scans sowie Lungen-Angiographie. Außer dem letzteren (invasiven) Verfahren, kann keines dieser Verfahren eine eindeutige Diagnose bereitstellen.
Vor kurzem vervollständigte ein ^99mTc-radioaktiv markiertes Peptid Apcitid, das an den GPIIb/IIIa-Rezeptor auf Blutplättchen, einer Komponente von Thromben, bindet, wodurch ein spezifisch auf Thromben gerichtetes Bildgebungsmittel geschaffen wird, klinische Untersuchungen zur szintigraphischen Bildgebung von akuter DVT. Ein Kit zur Herstellung von ⁹⁹Tc-radioaktiv markiertem Apcitid, ACUTECT^TM, befindet sich derzeit im Verfahren zur Erlangung der Zulassung für den Verkauf als radiopharmazeutisches Produkt. ACUTECT^TM wird mit Bibapcitid formuliert, dessen chemische Struktur nachstehend gezeigt ist.
Bibapcitid und seine radioaktive Markierung sind in den gemeinschaftlich übertragenen US-Patenten Nr. 5,508,020 und 5,645,815; in der gemeinschaftlich übertragenen gleichzeitig anhängenden Anmeldung USSN 08/253,317; und in WO 93/23085; WO 93/25244; WO 94/23758 und WO 95/33496 beschrieben. Die gemeinschaftlich übertragene WO 94/07918 offenbart, dass Bibapcitid ebenfalls in unmarkierter Form als Antithrombosemittel verwendet werden kann.
Bibapcitid ist ein Dimer des monomeren Apcitids, das ebenfalls in den vorstehend genannten US-Patenten, der US-Anmeldung sowie in den internationalen Patentanmeldungen offenbart ist. Das Dimer Bibapcitid wird durch eine Bismaleimid-Bindung der carboxyterminalen Cysteine der beiden Apcitid-Monomere gebildet. Monomeres Apcitid wurde mit ⁹⁹TcO komplexiert, und der Apcitid/⁹⁹Tc-Komplex wurde in Zheng et al., Abstract 336, 213. American Chemical Society Meeting, 13.-17. April, 1997, charakterisiert.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Die Erfinder haben zwei neue Dimere von Apcitid, Bibapcitid-monocarboxylat und Bibapcitid-dicarboxylat, entdeckt, die in wässrigen Lösungen von Bibapcitid bei einem pH-Wert über etwa 5 vorliegen. Diese neuen Apcitid-Dimere können als Vorstufen zur Herstellung von ^99mTc-radioaktiv markiertem Apcitid verwendet werden.
Bei einer Ausführungsform stellt die Erfindung ein Vorstufen-Reagens bereit, das Bibapcitid-monocarboxylat umfasst.
Bei einer weiteren Ausführungsform stellt die Erfindung ein Vorstufen-Reagens bereit, das Bibapcitid-dicarboxylat umfasst.
Bei einer weiteren Ausführungsform stellt die Erfindung eine Zusammensetzung bereit, die Bibapcitid-monocarboxylat umfasst.
Bei einer weiteren Ausführungsform stellt die Erfindung eine Zusammensetzung bereit, die Bibapcitid-dicarboxylat umfasst.
Bei einer weiteren Ausführungsform stellt die Erfindung eine pharmazeutische Zusammensetzung bereit, die Bibapcitid-monocarboxylat und einen pharmazeutisch unbedenklichen Träger umfasst.
Bei einer weiteren Ausführungsform stellt die Erfindung eine pharmazeutische Zusammensetzung bereit, die Bibapcitid-dicarboxylat und einen pharmazeutisch unbedenklichen Träger umfasst.
EINGEHENDE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die hier zitierte Patent- und Wissenschafts-Literatur veranschaulicht das Wissen, das dem Fachmann zugänglich ist.
Die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzungen stellen neue Vorstufen-Reagenzien, Bibapcitid-monocarboxylat und Bibapcitid-dicarboxylat, zur Herstellung von Bildgebungsmitteln und Antithrombosemitteln bereit, die von Bibapcitid hergeleitet sind.
Die chemische Struktur von Bibapcitid-monocarboxylat ist nachstehend gezeigt.
Die chemische Struktur von Bibapcitid-dicarboxylat ist nachstehend aufgeführt.
Das Vorhandensein freier Carboxylatgruppen verleiht den Vorstufen-Reagenzien größere Löslichkeit als Bibapcitid in wässrigen Medien. Ein Vergleich der Löslichkeiten von Bibapcitid und Bibapcitid-dicarboxylat in 0,1M Phosphatpuffer bei mehreren pH-Werten bei Raumtemperatur ist in der nachstehenden Tabelle 1 gezeigt.
Tabelle 1 Löslichkeiten
Bibapcitid ist von Diatide, Inc. Londonderry, NH, USA, erhältlich. Bibapcitid kann beispielsweise mit Hilfe der Festphasenpeptidsynthese hergestellt werden, wie in den US-Patenten Nr. 5,508,020; 5,645,815; in USSN 08/253,317 und in WO 93/23085; WO 93/25244; WO 94/23758; WO 94/07918 und WO 95/33496 offenbart. Bibapcitid wird vorzugsweise bei einem pH-Wert von weniger als etwa 4 hergestellt und als Trifluoracetatsalz isoliert. Bibapcitidtrifluoracetat wird mit Acetonitril oder Ethanol und Wasser oder einer wässrigen Lösung vor der Formulierung löslich gemacht. Zur Verwendung in Säugetieren, wie Menschen, ist die Solubilisierung mit Ethanol und Wasser oder einer wässrigen Lösung bevorzugt.
Bibapcitid-monocarboxylat und Bibapcitid-dicarboxylat werden vorzugsweise aus Bibapcitid hergestellt, indem der pH-Wert des löslich gemachten Bibapcitids mit einem geeigneten Puffer, wie einem auf den gewünschten pH-Wert eingestellten Phosphatpuffer, wie in Beispiel 1 veranschaulicht, oder einem Bicarbonat-Puffer, wie in Beispiel 2 offenbart, erhöht wird. Am stärksten bevorzugt werden Bibapcitid-monocarboxylat und Bibapcitid-dicarboxylat durch Wiederherstellen von lyophilisiertem Bibapcitidtrifluoracetat mit einem Puffer bei physiologischem pH-Wert hergestellt. Jeder Puffer kann zur Einstellung des pH-Wertes von Bibapcitid verwendet werden, so dass Bibapcitid-monocarboxylat und/oder Bibapcitid-dicarboxylat hergestellt werden.
Beispielsweise können Phosphatpuffer, Bicarbonatpuffer, Boratpuffer, Citratpuffer, Sulfatpuffer, und dergleichen zur Herstellung der erfindungsgemäßen Vorstufen-Reagenzien eingesetzt werden. Alternativ können Bibapcitid-monocarboxylat und/oder Bibapcitid-dicarboxylat enzymatisch hergestellt werden, beispielsweise mit einer Hydrolase. Bibapcitid-monocarboxylat und Bibapcitid-dicarboxylat können mit bekannten Verfahren, wie HPLC, isoliert und gereinigt werden, wie in den Beispielen 1 und 2 gezeigt.
Die Stabilitäten von Bibapcitid, Bibapcitid-monocarboxylat und Bibapcitid-dicarboxylat bei einer Reihe von pH-Werten sind in der nachstehenden Tabelle 2 gezeigt. Die Stabilität ist in Tabelle 2 als 95% Stabilitätszeit bei Raumtemperatur ausgedrückt.
Tabelle 2 Stabilitäten
Die erfindungsgemäßen Vorstufen-Reagenzien können in der Form einer pharmazeutischen Zusammensetzung bereitgestellt werden. Die erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung umfasst Bibapcitid-monocarboxylat oder Bibapcitid-dicarboxylat. Die erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung umfasst stärker bevorzugt Bibapcitid-monocarboxylat und Bibapcitid-dicarboxylat. Die erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung umfasst am stärksten bevorzugt Bibapcitid-monocarboxylat, Bibapcitid-dicarboxylat und Bibapcitid. Die Mengen an Bibapcitid-monocarboxylat, Bibapcitid-dicarboxylat und Bibapcitid in der pharmazeutischen Zusammensetzung können gemäß dieser erfindungsgemäßen Ausführungsform variieren. Kommerziell formuliertes Bibapcitid, das als ACUTECT^TM verkauft werden soll, enthält gewöhnlich zwischen etwa 10% und etwa 50% Bibapcitid-monocarboxylat und zwischen etwa 3% und etwa 12% Bibapcitid-dicarboxylat.
Die erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung kann zudem ein pharmazeutisch unbedenkliches Verdünnungsmittel oder einen pharmazeutisch unbedenklichen Träger, wie ein arteigenes Albumin, umfassen. Der Begriff "pharmazeutisch unbedenkliches Verdünnungsmittel oder pharmazeutisch unbedenklicher Träger", wie er hier verwendet wird, kann beliebige und sämtliche Lösungsmittel, Dispersionsmittel, antibakterielle und Antipilzmittel, isotonische Mittel, Enzyminhibitoren, und dergleichen beinhalten. Die Verwendung dieser Medien und Mittel für pharmazeutische Wirkstoffe ist im Fachgebiet bekannt. Beispielsweise werden gemeinhin Natriumchlorid-Injektion und Ringer-Injektion als Verdünnungsmittel verwendet. Das Vorstufenmittel wird als sterile pyrogenfreie parenteral unbedenkliche wässrige Lösung formuliert, die gegebenenfalls in lyophilisierter Form geliefert wird und vom Verbraucher wiederhergestellt wird. Die Herstellung solcher parenteral unbedenklicher Lösungen mit der gebührenden Berücksichtigung von pH-Wert, Isotonie, Stabilität und dergleichen, liegt innerhalb der Fähigkeiten des Fachmanns.
Die neuen erfindungsgemäßen Vorstufen-Reagenzien können zur Herstellung zur Produktion diagnostischer und therapeutischer Mittel verwendet werden, die von Bibapcitid hergeleitet werden. Solche Mittel umfassen Szintigraphie-Bildgebungsmittel zum Erfassen und Diagnostizieren von Thromben, wie vollständiger in den US-Patenten 5,508,020; 5,645,815; in USSN 08/253,317 und in WO 93/23085; WO 93/25244; WO 94/23758 und WO 95/33496 beschrieben. Bibapcitid-monocarboxylat und/oder Bibapcitid-dicarboxylat können ebenfalls zur Herstellung von Antithrombosemitteln verwendet werden, wie in WO 94/07918 offenbart. Die erfindungsgemäßen Vorstufen-Reagenzien können ebenfalls zur Herstellung eines Antithrombosemittels verwendet werden, das ein Targetting-Peptid umfasst, das von kovalent an eine thrombolytische Proteinase gebundenem Bibapcitid hergeleitet ist, wie in den gleichzeitig anhängenden Patentanmeldungen USSN 08/753,781 und USSN 08/982 981, eingehend beschrieben.
Wird ein erfindungsgemäßes Vorstufen-Reagens zur Herstellung eines markierten diagnostischen oder therapeutischen Mittels verwendet, das von Bibapcitid hergeleitet ist, kann jede signalerzeugende Markierung verwendet werden. Diese Markierungen können in ein erfindungsgemäßes Vorstufen-Reagens auf eine Weise eingebracht oder damit komplexiert werden, die sich für die jeweilige Markierung eignet, und zwar durch direkte kovalente oder nicht-kovalente Bindung an das Vorstufen-Reagens oder durch indirekte kovalente oder nichtkovalente Bindung daran. Geeignete Markierungen umfassen radioaktive Markierungen, Fluoreszenzmarkierungen, paramagnetische Markierungen, schwere Elemente oder Seltenerdeionen, die sich zur Computer-Tomographie eignen und dergleichen. Radioaktivmarkierungen sind bevorzugt. Stärker bevorzugt werden γ-Strahlen-aussendende Radionuklide, wie ¹²³I, ⁶⁷Ga, ¹¹¹In und ^99mTc bei den erfindungsgemäßen Verfahren verwendet. Am stärksten bevorzugt wird ^99mTc zur Markierung der erfindungsgemäßen Vorstufen-Reagenzien verwendet. Wird ^99mTc als Markierung verwendet, wird dieses zu der pharmazeutischen Zusammensetzung, die Bibapcitid-monocarboxylat und/oder Bibapcitid-dicarboxylat umfasst, bei einem pH-Wert von mehr als etwa 5 gegeben, und das resultierende Gemisch wird für eine Zeit und bei einer Temperatur erwärmt, die hinreicht, dass die Bildung eines Apcitid-monomers und die Radioaktivmarkierung des Monomers ermöglicht wird. Das Gemisch der pharmazeutischen Zusammensetzung, das das Bibapcitid-monocarboxylat und/oder Bibapcitid-dicarboxylat sowie ^99mTc enthält, wird vorzugsweise für etwa 15 min in einem siedenden Wasserbad erwärmt, so dass ein Szintigraphie-Bildgebungsmittel erhalten wird, das ^99mTc-markiertes Apticid enthält.
Markierte oder unmarkierte Thrombus-Bildgebungsmittel oder Antithrombusmittel, die mit den erfindungsgemäßen Vorstufen-Reagenzien hergestellt werden, werden vorzugsweise intravenös in Kombination mit einem pharmazeutisch unbedenklichen Träger an ein lebendes Säugetier verabreicht. Gemäß den Lehren dieser Erfindung werden Bildgebungs- oder Antithrombosemittel, die aus pharmazeutischen Zusammensetzungen, umfassend Bibapcitid-monocarboxylat und/oder Bibapcitid-dicarboxylat, hergestellt werden, vorzugsweise in einer einzelnen injizierbaren Einheitsdosis in einem beliebigen herkömmlichen Medium zur intravenösen Injektion, wie einem wässrigen Salzmedium oder in einem Blutplasmamedium verabreicht. Die in Einheitsdosierung zu injizierende Lösungsmenge reicht von etwa 0,01 ml bis etwa 10 ml.
Diagnostische und therapeutische Mittel, die aus pharmazeutischen Zusammensetzungen hergestellt werden, welche Bibapcitid-monocarboxylat und/oder Bibapcitid-dicarboxylat umfassen, werden vorzugsweise in einer diagnostisch oder therapeutisch wirksamen Menge an ein Säugetier verabreicht, das potentiell der Gefahr eines mit einem Thrombus in Zusammenhang stehenden Zustands unterliegt oder an einem solchen Krankheitszustand leidet. Der Begriff "diagnostisch wirksame Menge", wie er hier verwendet wird, steht für die Gesamtmenge jedes Wirkstoffs der pharmazeutischen Zusammensetzung des Diagnostikums, das aus Bibapcitid-monocarboxylat und/oder Bibapcitid-dicarboxylat hergestellt wird, oder die Gesamtmenge einer solchen Zusammensetzung, die in einem Verfahren unter Einsatz des Diagnostikums verabreicht wird, welche ausreicht, dass ein messbares Signal erzeugt wird, das sich an einer In-vivo-Thrombusstelle befindet. Der Begriff "therapeutisch wirksame Menge" steht für die Gesamtmenge jedes Wirkstoffs der pharmazeutischen Zusammensetzung des Therapeutikums, das aus einem Bibapcitid-monocarboxylat und/oder Bibapcitid-dicarboxylat hergestellt wird, oder die Gesamtmenge dieser Zusammensetzung, die in einem Verfahren verabreicht wird, das das Therapeutikum einsetzt, welche ausreicht, dass ein bedeutender Vorteil für den Patienten sichtbar ist, d.h. Reduktion der Inzidenz und Stärke von Thromben verglichen mit derjenigen, die man für eine vergleichbare Gruppe von Patienten erwartet, die kein Therapeutikum erhielten, wie es vom beiwohnenden Arzt bestimmt wird. Auf einen allein verabreichten Einzelwirkstoff bezogen betreffen die Begriffe nur diesen Wirkstoff. Auf eine Kombination bezogen betreffen die Begriffe die vereinigten Mengen der Wirkstoffe, die zu einer diagnostischen oder therapeutischen Wirkung führen, unabhängig davon, ob sie in Kombination, seriell oder gleichzeitig verabreicht werden. Bildgebungsmittel oder Therapeutika, die aus Bibapcitid-monocarboxylat und/oder Bibapcitid-dicarboxylat hergestellt werden, können beispielsweise bei einer Dosis von etwa 0,1 bis etwa 10 mg/kg Körpergewicht verabreicht werden, und zwar werden sie entweder vollständig als Bolus oder teilweise als Bolus, gefolgt von Infusion über 1 bis 2 Std. intravenös verabreicht. Werden radioaktiv markierte diagnostische oder therapeutische Mittel aus Bibapcitid-monocarboxylat und/oder Bibapcitid-dicarboxylat hergestellt, hat die zu verabreichende Einheitsdosis eine Radioaktivität von etwa 0,01 mCi bis etwa 100 mCi, vorzugsweise etwa 1 mCi bis etwa 20 mCi. Nach der intravenösen Verabreichung wird die Thrombusstelle in bestimmten Ausführungsformen durch Radioaktiv-Bildgebung in vivo überwacht.
Verfahren zur Herstellung von Bibapcitid-monocarboxylat und Bibapcitid-dicarboxylat sind in den nachfolgenden Beispielen vollständiger veranschaulicht, die zur Veranschaulichung und nicht zur Einschränkung gezeigt sind.
BEISPIEL 1
SYNTHESE VON BIBAPCITID-MONOCARBOXYLAT
Bibapcitidtrifluoracetat (100 mg) wurde in 10 ml Acetonitril (CH₃CN) suspendiert, eine min. mit Ultraschall behandelt, und dann mit 40 ml Wasser (H₂O) verdünnt. Das Peptid löste sich bei der Zugabe von Wasser (H₂O) vollständig. Zu dieser Lösung wurden 40 ml 0,05M Natriumphosphat bei pH-Wert 7 zugegeben, wodurch die Lösung leicht trüb wurde. Die Peptidlösung hatte einen pH-Wert von 7,2. Die Lösung wurde in einem siedenden Wasserbad für drei min inkubiert, was zu einer klaren Lösung führte. Die HPLC-Analyse zeigte die Anwesenheit von Bibapcitid-dicarboxylat, Bibapcitid-monocarboxylat und Bibapcitid in Mengen von ungefähr 26%, 54% bzw. 14%. Die Reaktionslösung wurde direkt auf eine 47 × 300 mm Delta-Pak C18-Säule aufgetragen, die in 10 mM Ammoniumbicarbonat (NH₄HCO₃), eingestellt mit festem CO₂ (mobile Phase C) auf pH-Wert 6 bis 6,5, äquilibriert wurde. Die Säule wurde für fünf min mit mobiler Phase C gespült, gefolgt von einem Gradienten von 100/0 C/D bis 90/10 C/D über fünf min und dann 90/10 C/D bis 80/20 C/D über 30 min. (mobile Phase D = 10 mM NH₄HCO₃ in 75/25 CH₃CN-H₂O bei pH-Wert 6-6,5). Die HPLC-Puffer wurden mit festem CO₂ kontinuierlich bei pH-Wert 6-6,5 gehalten. Die Fraktionen wurden auf der Basis des Abstroms, der bei 220 nm überwacht wurden, gesammelt. Die Fraktionen wurden dann durch analytische HPLC analysiert, und solche, bei denen sich herausstellte, dass sie reines (≥ 98%) Bibapcitid-monocarboxylat enthielten, wurden vereinigt und lyophilisiert, so dass etwa 30 mg Bibapcitid-monocarboxylat (30% Ausbeute) als Ammoniumcarbonatsalz als weißes Pulver erhalten wurde. Die NMR-Analyse des so erhaltenen Bibapcitid-monocarboxylates (20% CD₃CN/80% H₂O, pH-Wert 6, T = 20°C), ist in der nachstehenden Tabelle 3 veranschaulicht.
Tabelle 3 Daten für die chemische ¹H-NMR-Verschiebung (δ, ppm) für Bibapcitid-monocarboxylat
BEISPIEL 2
SYNTAESE VON BIBAPCITID-DICARBOXYLAT
Bibapcitidtrifluoracetat (100 mg) wurde in fünf ml CH₃CN suspendiert, für eine Minute mit Ultraschall behandelt und dann mit 25 ml H₂O verdünnt. Das Peptid löste sich vollständig bei der Zugabe von H₂O auf. Zu dieser Lösung wurde ein ml gesättigtes Natriumbicarbonat (NaHCO₃) und 0, 5 ml 1M Kaliumcarbonat (K₂CO₃) gegeben. Der pH-Wert der Peptidlösung wurde mit pH-Papier auf 8,5 geschätzt. Die Lösung wurde bei der Zugabe von K₂CO₃ trüb, klärte sich aber langsam über zwei Stunden bei Raumtemperatur. Nach drei Stunden stellte sich heraus, dass die Reaktion 84% Bibapcitid-dicarboxylat enthielt, wie es durch analytische HPLC gemessen wurde. Die Reaktionslösung wurde direkt auf eine 47 × 300 mm Delta-Pak C18-Säule aufgetragen, die in 10 mM Ammoniumbicarbonat (NH₄HCO₃) , eingestellt mit festem CO₂ (mobile Phase C) auf pH-Wert 6-6,5, äquilibriert wurde. Die Säule wurde für 5 Min mit 100% mobiler Phase C gespült, gefolgt von einem Gradient mit 100/0 C/D bis 90/10 C/D über fünf Minuten und dann 90/10 bis 70/30 C/D über 30 min. Die HPLC-Puffer wurden mit festem CO₂ kontinuierlich bei pH-Wert 6-6,5 gehalten. Die Fraktionen wurden auf der Basis des Abstroms, der bei 220 nm überwacht wurde, gesammelt. Die Fraktionen wurden dann durch analytische HPLC analysiert, und solche, bei denen sich herausstellte, dass sie reines (≥ 98%) Bibapcitid-dicarboxylat enthielten, wurden vereinigt, und lyophilisiert, so dass etwa 54 mg Bibapcitid-dicarboxylat (Peptidgehalt 86%, isolierte Ausbeute 53%) als Ammoniumcarbonatsalz als weißes Pulver erhalten wurde. Die NMR-Analyse des so erzeugten Bibapcitid-dicarboxylats (20% CD₃CN/80% H₂O, pH-Wert 6, T = 20°C) ist in der nachstehenden Tabelle 4 aufgeführt.
Tabelle 4 Daten für die chemische ¹H-NMR-Verschiebung (δ, ppm) für Bibapcitid-dicarboxylat

Claims

Vorstufen-Reagens, enthaltend Bibapcitid-monocarboxylat.
Vorstufen-Reagens, enthaltend Bibapcitid-dicarboxylat.
Zusammensetzung, enthaltend Bibapcitid-monocarboxylat.
Zusammensetzung nach Anspruch 3, weiterhin enthaltend Bibapcitid-dicarboxylat.
Zusammensetzung nach Anspruch 4, weiterhin enthaltend Bibapcitid.
Zusammensetzung enthaltend Bibapcitid-dicarboxylat.
Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend Bibapcitid-monocarboxylat und einen pharmazeutisch unbedenklichen Träger.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 7, weiterhin enthaltend Bibapcitid-dicarboxylat.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 8, weiterhin enthaltend Bibapcitid.
Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend Bibapcitid-dicarboxylat und einen pharmazeutisch unbedenklichen Träger.
Vorstufen-Reagens nach Anspruch 1 oder 2 oder Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 3 bis 6 oder pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 7 bis 10 zur Verwendung als diagnostisches Mittel zum Nachweis und zur Diagnose von Thromben.
Verwendung des Vorstufen-Reagens nach Anspruch 1 oder 2 oder der Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 3 bis 6 oder der pharmazeutischen Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 7 bis 10 zur Herstellung eines diagnostischen Mittels zum Nachweis und zur Diagnose von Thromben.
Vorstufen-Reagens nach Anspruch 1 oder 2 oder Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 3 bis 6 oder pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 7 bis 10 zur Verwendung als therapeutisches Mittel zur Behandlung von mit Thromben in Zusammenhang stehenden Erkrankungen.
Verwendung des Vorstufen-Reagens nach Anspruch 1 oder 2 oder der Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 3 bis 6 oder der pharmazeutischen Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 7 bis 10 zur Herstellung eines therapeutischen Mittels zur Behandlung von mit Thromben in Zusammenhang stehenden Erkrankungen.
Vorstufen-Reagens, Zusammensetzung oder pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 11 oder 13 oder Verwendung nach Anspruch 12 oder 14, wobei das Mittel mit einem signalerzeugenden Marker, vorzugsweise mit Tc-99m, markiert ist.