DE60312342T2

DE60312342T2 - 1,4,5-substituierte 1,2-dihydro-pyrazol-3-one und 3-alkoxy-1h-pyrazole derivate als tnf-alpha und interleukin senkende wirkstoffe zur behandlung von entzündungen

Info

Publication number: DE60312342T2
Application number: DE60312342T
Authority: DE
Inventors: Celia Thousand Oaks DOMINGUEZ; Dawei Thousand Oaks ZHANG; Kelvin K. C. Thousand Oaks SHAM; Guo-Qiang Thousand Oaks CAO
Original assignee: Amgen Inc
Current assignee: Amgen Inc
Priority date: 2002-09-09
Filing date: 2003-09-08
Publication date: 2007-07-12
Anticipated expiration: 2023-09-09
Also published as: ES2283811T3; DE60312342D1; ATE355839T1; MXPA05002513A; EP1542680B1; WO2004022055B1; AU2003273295B2; US20040058918A1; CA2497007A1; EP1542680A1; WO2004022055A1; AU2003273295A1; US6967254B2; JP2006501263A; PL379544A1

Description

Die vorliegende Erfindung umfasst eine neue Klasse von Verbindungen, die zum Behandeln von Krankheiten wie durch TNF-α, IL-1β, IL-6 und/oder IL-8 vermittelten Krankheiten und anderen Krankheiten wie Schmerzen und Diabetes brauchbar sind. Insbesondere sind die Verbindungen der Erfindung für die Prophylaxe und Behandlung von Krankheiten oder Zuständen bzw. Leiden brauchbar, an denen eine Entzündung beteiligt ist. Diese Erfindung bezieht sich auch auf Zwischenprodukte und Verfahren, die bei der Herstellung solcher Verbindungen brauchbar sind.
Interleukin-1 (IL-1) und Tumornekrosefaktor α (TNF-α) sind proinflammatorische Cytokine, die von einer Reihe von Zellen, einschließlich Monozyten und Makrophagen, als Reaktion auf viele inflammatorische Stimuli (Entzündungsreize) (z.B. Lipopolysaccharid – LPS) oder äußeren zellulären Stress (z.B. osmotischen Schock und Peroxid) sezerniert werden.
Gegenüber den Basisspiegeln erhöhte Spiegel von TNF-α und/oder IL-1 sind mit der Vermittlung oder Verschlimmerung einer Reihe von Krankheitszuständen in Zusammenhang gebracht worden, zu denen rheumatoide Arthritis; Morbus Paget; Osteoporose; multiples Myelom; Uveitis; akute und chronische myeloische/granulozytäre Leukämie; pankreatische β-Zellzerstörung; Osteoarthritis; rheumatoide Spondylitis; Gichtarthritis; entzündliche Darmerkrankung; Schocklunge (ARDS); Psoriasis; Morbus Crohn; allergische Rhinitis; Colitis ulcerosa/gravis; Anaphylaxie; Kontaktdermatitis; Asthma; Muskeldegeneration; Kachexie; Reiter-Syndrom; Typ I- und Typ II-Diabetes; Knochenresorptionskrankheiten; Transplantat-Wirt-Reaktion; Ischämie-Reperfusionsschaden; Atherosklerose; Hirntrauma; multiple Sklerose; zerebrale Malaria; Sepsis; septischer Schock; toxisches Schocksyndrom; Fieber und Myalgien aufgrund einer Infektion gehören. HIV-1, HIV-2, HIV-3, Cytomegalievirus (CMV), Influenza, Adenovirus, die Herpesviren (einschließlich HSV-1, HSV-2) und Herpes Zoster werden ebenfalls durch TNF-α verschlimmert.
Es wurde berichtet, dass TNF-α eine Rolle bei einem Kopftrauma, Schlaganfall und Ischämie spielt. Zum Beispiel erhöhten sich in Tiermodellen eines Kopftraumas (Ratte) die TNF-α-Spiegel in der gequetschten Hemisphäre (Shohami et al., J. Cereb. Blood Flow Metab. 14, 615 (1994)). In einem Rattenmodell einer Ischämie, bei dem die mittlere Hirnarterie verschlossen wurde, erhöhten sich die Spiegel von TNF-α mRNA von TNF-α (Feurstein et al., Neurosci. Lett. 164, 125 (1993)). Es wurde berichtet, dass die Verabreichung von TNF-α in den Ratten-Kortex zu einer signifikanten Neutrophilenakkumulation in Kapillaren und einer Anhaftung in kleinen Blutgefäßen führt. TNF-α fördert die Infiltration von anderen Cytokinen (IL-1β, IL-6) und auch Chemokinen, welche die Neutrophilenfiltration in den Infarktbereich fördern (Feurstein, Stroke 25, 1481 (1994)). TNF-α ist auch damit in Zusammenhang gebracht worden, dass es eine Rolle bei Typ-II-Diabetes spielt (Endocrinol. 130, 43-52, 1994; und Endocrinol. 136, 1474-1481, 1995).
TNF-α scheint eine Rolle beim Fördern von bestimmten viralen Lebenszyklen und mit ihnen verbundenen Krankheitszuständen zu spielen. Zum Beispiel induzierte von Monozyten sezernierter TNF-α erhöhte Spiegel der HIV-Expression in einem chronisch infizierten T-Zell-Klon (Clouse et al., J. Immunol. 142, 431 (1989)). Lahdevirta et al., (Am. J. Med. 85, 289 (1988)) erörterte die Rolle von TNF-α in den HIV-assoziierten Zuständen von Kachexie und Muskelabbau.
TNF-α liegt stromaufwärts in der Cytokinkaskade der Entzündung. Infolgedessen können erhöhte Spiegel von TNF-α zu erhöhten Spiegeln von anderen inflammatorischen und proinflammatorischen Cytokinen wie IL-1, IL-6 und IL-8 führen.
Gegenüber den Basisspiegeln erhöhte Spiegel von IL-1 sind mit der Vermittlung oder Verschlimmerung einer Reihe von Krankheitszuständen in Zusammenhang gebracht worden, zu denen rheumatoide Arthritis; Osteoarthritis; rheumatoide Spondylitis; Gichtarthritis; entzündliche Darmerkrankung; Schocklunge (ARDS); Psoriasis, Morbus Crohn; Colitis ulcerosa/gravis; Anaphylaxie, Muskeldegeneration; Kachexie; Reiter-Syndrom; Typ I- und Typ II-Diabetes; Knochenresorptionskrankheiten; Ischämie-Reperfusionsschaden, Atherosklerose; Hirntrauma, multiple Sklerose, Sepsis, septischer Schock; und toxisches Schocksyndrom gehören. Viren, die für eine TNF-α-Hemmung empfindlich sind, z.B. HIV-1, HIV-2, HIV-3, werden auch durch IL-1 beeinflusst.
TNF-α und IL-1 scheinen eine Rolle bei der pankreatischen β-Zellzerstörung und Diabetes zu spielen. Pankreatische β-Zellen erzeugen Insulin, welches die Blutglucosehomöostase zustande zu bringen hilft. Eine Verschlechterung von pankreatischen β-Zellen geht häufig mit Typ I-Diabetes einher. Funktionelle Abnormalitäten der pankreatischen β-Zellen können bei Patienten mit Typ II-Diabetes auftreten. Typ II-Diabetes ist durch eine funktionelle Resistenz gegenüber Insulin gekennzeichnet. Ferner geht Typ II-Diabetes auch oft mit erhöhten Spiegeln von Plasmaglucagon und erhöhten Raten der hepatischen Glucoseproduktion einher. Glucagon ist ein regulatorisches Hormon, welches die Hemmung der Gluconeogenese in der Leber durch Insulin abschwächt. Glucagonrezeptoren wurden in der Leber, der Niere und in Fettgewebe gefunden. Somit sind Glucagonantagonisten brauchbar zum Abschwächen der Plasmaglucosespiegel (WO 97/16442, in Gänze durch Bezugnahme in diese Anmeldung aufgenommen). Es wird angenommen, dass sich die Insulinansprechbarkeit in der Leber durch Antagonisieren der Glucagonrezeptoren verbessert, wodurch die Gluconeogenese verringert und die Rate der hepatischen Glucoseproduktion abgesenkt wird.
In Modellen der rheumatoiden Arthritis bei Tieren haben mehrfache intraartikuläre Injektionen von IL-1 zu einer akuten und zerstörerischen Form von Arthritis geführt (Chandrasekhar et al., Clinical Immunol Immunopathol. 55, 382 (1990)). In Studien, bei denen kultivierte rheumatoide Synovialzellen verwendet werden, ist IL-1 ein stärkerer Induktor von Stromelysin als TNF-α (Firestein, Am. J. Pathol. 140, 1309 (1992)). An den Orten einer lokalen Injektion wurde eine Auswanderung von Neutrophilen, Lymphozyten und Monozyten beobachtet. Die Auswanderung wird auf die Induktion von Chemokinen (z.B. IL-8) und die Heraufregulierung von Adhäsionsmolekülen zurückgeführt (Dinarello, Eur. Cytokine Netw. 5, 517-531 (1994)).
IL-1 scheint auch eine Rolle bei der Förderung von bestimmten viralen Lebenszyklen zu spielen. Zum Beispiel wurde die Cytokin-induzierte Erhöhung der HIV-Expression in einer chronisch infizierten Makrophagenlinie mit einer damit einhergehenden und selektiven Zunahme der IL-1-Produktion in Verbindung gebracht (Folks et al., J. Immunol. 136, 40 (1986)). Beutler et al. (J. Immunol. 135, 3969 (1985)) erörterte die Rolle von IL-1 bei einer Kachexie. Baracos et al. (New Eng. J. Med. 308, 553 (1983)) erörterte die Rolle von IL-1 bei einer Muskeldegeneration.
Bei rheumatoider Arthritis veranlassen sowohl IL-1 als auch TNF-α Synoviozyten und Chondrozyten, Kollagenase und neutrale Proteasen zu produzieren, was zu einer Zerstörung des Gewebes innerhalb der arthritischen Gelenke führt. In einem Modell von Arthritis (kollagen-induzierter Arthritis (CIA) bei Ratten und Mäusen) führte eine intraartikuläre Verabreichung von TNF-α entweder vor oder nach der Induktion von CIA zu einem beschleunigten Einsetzen der Arthritis und einem schwereren Verlauf der Krankheit (Brahn et al., Lymphokine Cytokine Res. 11, 253 (1992); und Cooper, Clin. Exp. Immunol. 898, 244 (1992)).
IL-8 ist mit der Verschlimmerung und/oder Verursachung vieler Krankheitszustände in Zusammenhang gebracht worden, bei denen eine massive Neutrophileninfiltration in die Orte einer Entzündung oder Verletzung (z.B. Ischämie) durch die chemotaktische Natur von IL-8 vermittelt wird, welche die Folgenden einschließen, aber nicht darauf beschränkt sind: Asthma, entzündliche Darmerkrankung, Psoriasis, Schocklunge, Herz- und Nieren-Reperfusionsschaden, Thrombose und Glomerulonephritis. Zusätzlich zu der chemotaktischen Wirkung auf Neutrophile hat IL-8 auch die Fähigkeit, Neutrophile zu aktivieren. Somit kann die Reduktion der IL-8-Spiegel zu einer verringerten Neutrophileninfiltration führen.
Mehrere Vorgehensweisen wurden eingesetzt, um die Wirkung von TNF-α zu blockieren. Eine Vorgehensweise umfasst die Verwendung von löslichen Rezeptoren für TNF-α (z.B. TNFR-55 oder TNFR-75), welche eine Wirksamkeit in Tiermodellen von durch TNF-α vermittelten Krankheitszuständen gezeigt haben. Eine zweite Vorgehensweise zum Neutralisieren von TNF-α unter Verwendung eines für TNF-α spezifischen monoklonalen Antikörpers, cA2, hat eine Verbesserung bei der Auswertung von geschwollenen Gelenken in einer am Menschen durchgeführten Phase II-Studie der rheumatoiden Arthritis gezeigt (Feldmann et al., Immunological Reviews, Seiten 195-223 (1995)). Diese Vorgehensweisen blockieren die Wirkungen von TNF-α und IL-1 entweder durch Proteinsequestration oder Rezeptorantagonismus.
US 5,100,897 , das in Gänze durch Bezugnahme in diese Anmeldung aufgenommen ist, beschreibt Pyrimidinonverbindungen, die als Angiotensin II-Antagonisten brauchbar sind, worin eines der Stickstoffatome des Pyrimidinonrings mit einem substituierten Phenylmethyl- oder Phenethylrest substituiert ist.
US 5,162,325 , das in Gänze durch Bezugnahme in diese Anmeldung aufgenommen ist, beschreibt Pyrimidinonverbindungen, die als Angiotensin II-Antagonisten brauchbar sind, worin eines der Stickstoffatome des Pyrimidinonrings mit einem substituierten Phenylmethylrest substituiert ist.
EP 481448 , das in Gänze durch Bezugnahme in diese Anmeldung aufgenommen ist, beschreibt Pyrimidinonverbindungen, die als Angiotensin II-Antagonisten brauchbar sind, worin eines der Stickstoffatome des Pyrimidinonrings mit einem substituierten Phenyl-, Phenylmethyl- oder Phenethylrest substituiert ist.
CA 2,020,370 , das in Gänze durch Bezugnahme in diese Anmeldung aufgenommen ist, beschreibt Pyrimidinonverbindungen, die als Angiotensin II-Antagonisten brauchbar sind, worin eines der Stickstoffatome des Pyrimidinonrings mit einem substituierten biphenylaliphatischen Kohlenwasserstoffrest substituiert ist.

Die folgenden Dokumente offenbaren strukturell verwandte Verbindungen:

D1:	WO 98/52937 A (SEARLE & CO (US)) 26. November 1998 (1998-11-26)
D2:	WO 01/16138 A (ABBOTT LAB (US)) 8. März 2001 (2001-03-08)
D3:	WO 00/59506 A (BRISTOL-MYERS SQUIBB CO (US)) 12. Oktober 2000 (2000-10-12)
D4:	EP-A-0 388 690 (STERLING DRUG INC (US)) 26. September 1990 (1990-09-26)
D5:	EP-A-0 299 407 (STERLING DRUG INC) 18. Januar 1989 (1989-01-18)
D6:	US-A-4 268 626 (ASAHI KASEI KOGYO KABUSHIKI KAISNA (JP)) 19. Mai 1981 (1981-05-19)
D7:	DATABASE CA [Online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; DOWNS, JENNIFER R. ET AL: "Preparation of substituted 1,2-dihydro-3H-pyrazol-3-ones from polylithiated 2'-phenylphenylacetohydrazides and aromatic esters" XP002262617, erhalten von STN Database Zugangs-Nr. 135:226928
D8:	DATABASE CA [Online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; TODA, TAKASHI ET AL: "Reactions of diphenylcyclopropenone with hydrazine derivatives: formation of pyrazolone derivatives via 3-aminocinnamohydrazides" XP002262618, erhalten von STN Database Zugangs-Nr. 107:77692

D10:	DATABASE CA [Online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; BOBERG, FRIEDRICH ET AL: "1,2-Dithiacyclopentenes. XVIII. 3-Amino-4-aryl-5-pyrazolinones from 5-amino-4-aryl-1,2-dithiacyclopenten-3-one s" XP002262620, erhalten von STN Database Zugangs-Nr. 73:14756
D11:	DATABASE CA [Online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; DYMEK, WOJCIECH ET AL: "Reactions of thiosemicarbazones with halo ketones" XP002262621, erhalten von STN Database Zugangs-Nr. 68:78208
D12:	DATABASE CA [Online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; DYMEK, WOJCIECH ET AL: "Reactions of thiosemicarbazones with halo ketones. IV" XP002262622, erhalten von STN Database Zugangs-Nr. 66:37827
D13:	DATABASE CA [Online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; AURICH, HANS GUENTER: "Reactions of nitriles with nitroso compounds" XP002262623, erhalten von STN Database Zugangs-Nr. 64:27245
D14:	DATABASE CA [Online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; SANDSTROM, JAN: "The formation of pyrazoles from thiohydrazides and .alpha.-halo carbonyl compounds, II. 5,6-Diphenylthiadiazines and 4,5-diphenylpyrazoles" XP002262624, erhalten von STN Database Zugangs-Nr. 56:60604
D15:	WO 99/51580 A (ABBOTT LAB (US)) 14. Oktober 1999 (1999-10-14)
D16:	WO 98/52941 A (SEARLE & CO (US)) 26. November 1998 (1998-11-26)
D17:	WO 98/56377 A (SMITHKLINE BEECHAM (US)) 17. Dezember 1998 (1998-12-17)

D1 und D15 bis D17 offenbaren Verbindungen mit verwandter Pharmakologie. D2 und D3 offenbaren Verbindungen für verwandte medizinische Verwendungen.
KURZE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung umfasst eine neue Klasse von Verbindungen, die bei der Prophylaxe und Behandlung von Krankheiten, wie durch TNF-α, IL-1β, IL-6 und/oder IL-8 vermittelten Krankheiten, und anderen Erkrankungen, wie Schmerzen und Diabetes, brauchbar sind. Insbesondere sind die Verbindungen der Erfindung für die Prophylaxe und Behandlung von Krankheiten oder Zuständen bzw. Leiden brauchbar, an denen eine Entzündung beteiligt ist. Entsprechend umfasst die Erfindung auch pharmazeutische Zusammensetzungen, welche die Verbindungen für die Prophylaxe und Behandlung von durch TNF-α, IL-1β, IL-6 und/oder IL-8 vermittelten Krankheiten, wie Entzündungskrankheiten, Schmerzen und Diabetes, umfassen, und Zwischenprodukte und Verfahren, die für die Herstellung der Verbindung der Erfindung brauchbar sind.
Die Verbindungen der Erfindung werden durch die folgende allgemeine Struktur wiedergegeben:
Das Vorstehende fasst lediglich bestimmte Aspekte der Erfindung zusammen und ist nicht dazu bestimmt, die Erfindung in irgendeiner Weise zu beschränken, und sollte auch nicht so aufgefasst werden. Alle Patente und anderen Veröffentlichungen, die in dieser Anmeldung zitiert sind, werden hiermit durch Bezugnahme in Gänze aufgenommen.
AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Gemäß der vorliegenden Erfindung werden Verbindungen der Formel:
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon bereitgestellt, wobei
R² C_1-8-Alkyl, Phenyl, Benzyl, R^c, R^f, C_1-4-AlkylR^c, C_1-4-AlkylR^f oder R^g ist;
R³ Phenyl, Naphthyl oder ein gesättigter oder ungesättigter 5- oder 6-gliedriger Ringheterocyclus ist, der 1-4 Heteroatome, ausgewählt aus N, O und S, enthält, wobei nicht mehr als zwei der Heteroatome O oder S sind, und der Heterocyclus substituiert ist durch 0, 1 oder 2 Oxogruppen und gegebenenfalls mit einer Benzogruppe kondensiert ist, von denen beliebige durch 0, 1, 2 oder 3 Substituenten, ausgewählt aus C_1-8-Alkyl, C_1-4-Halogenalkyl, Halogen, Cyano, Nitro, -C(=O)R^b, -C(=O)OR^b, -C(=O)NR^aR^a, -C(=NR^a)NR^aR^a, -OR^a, -OC(=O)R^b, -OC(=O)NR^aR^a, -OC(=O)N(R^a)S(=O)₂R^b, -OC_2-6-AlkylNR^aR^a, -OC_2-6-AlkylOR^a, -SR^a, -S(=O)R^b, -S(=O)₂R^b, -S(=O)₂NR^aR^a, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)R^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)OR^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -NR^aR^a, -N(R^a)C(=O)R^b, -N(R^a)C(=O)OR^b, -N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -N(R^a)C(=NR^a)NR^aR^a, -N(R^a)S(=O)₂R^b, -N(R^a)S(=O)₂NR^aR^a, -NR^aC_2-6-AlkylNR^aR^a und -NR^aC_2-6-AlkylOR^a, substituiert sind;
R⁴ 4-Pyridyl ist, das substituiert ist durch 0, 1 oder 2 Oxogruppen und gegebenenfalls mit einer Benzogruppe kondensiert ist, von denen beliebige durch 0, 1, 2 oder 3 Substituenten, ausgewählt aus C_1-8-Alkyl, C_1-4-Halogenalkyl, Halogen, Cyano, Nitro, -C(=O)R^b, -C(=O)OR^b, -C(=O)NR^aR^a, -C(=NR^a)NR^aR^a, -OR^a, -OC(=O)R^b, -OC(=O)NR^aR^a, -OC(=O)N(R^a)S(=O)₂R^b, -OC_2-6AlkylNR^aR^a, -OC_2-6-AlkylOR^a, -SR^a, -S(=O)R^b, -S(=O)₂R^b, -S(=O)₂NR^aR^a, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)R^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)OR^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -NR^aR^a, -N(R^a)C(=O)R^b, -N(R^a)C(=O)OR^b, -N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -N(R^a)C(=NR^a)NR^aR^a, -N(R^a)S(=O)₂R^b, -N(R^a)S(=O)₂NR^aR^a, -NR^aC_2-6-AlkylNR^aR^a und -NR^aC_2-6AlkylOR^a, substituiert sind;
R^a unabhängig in jedem Fall H oder R^b ist;
R^b unabhängig in jedem Fall C_1-8-Alkyl, Phenyl oder Benzyl ist;
R^c unabhängig in jedem Fall ein gesättigter oder ungesättigter 5-, 6- oder 7-gliedriger monocyclischer oder 6-, 7-, 8-, 9-, 10- oder 11-gliedriger bicyclischer Ring ist, der 1, 2 oder 3 Atome, ausgewählt aus N, O und S, enthält, wobei der Ring kondensiert ist mit 0 oder 1 Benzogruppen und 0 oder 1 gesättigtem oder ungesättigtem 5-, 6- oder 7-gliedrigem heterocyclischem Ring, der 1, 2 oder 3 Atome, ausgewählt aus N, O und S, enthält; wobei die Kohlenstoffatome des Rings durch 0, 1 oder 2 Oxogruppen substituiert sind;
R^d unabhängig in jedem Fall C_1-8-Alkyl, C_1-4-Halogenalkyl, Halogen, Cyano, Nitro, -C(=O)R^b, -C(=O)OR^b, -C(=O)NR^aR^a, -C(=NR^a)NR^aR^a, -OR^a, -OC(=O)R^b, -OC(=O)NR^aR^a, -OC(=O)N(R^a)S(=O)₂R^b, -OC_2-6-AlkylNR^aR^a, -OC_2-6-AlkylOR^a, -SR^a, -S(=O)R^b, -S(=O)₂R^b, -S(=O)₂NR^aR^a, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)R^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)OR^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -NR^aR^a, -N(R^a)C(=O)R^b, -N(R^a)C(=O)OR^b, -N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -N(R^a)C(=NR^a)NR^aR^a, -N(R^a)S(=O)₂R^b, -N(R^a)S(=O)₂NR^aR^a, -NR^aC_2-6-AlkylNR^aR^a oder -NR^aC_2-6-AlkylOR^a, ist;
R^e unabhängig in jedem Fall C_1-6-Alkyl, substituiert durch 1, 2 oder 3 Substituenten, die unabhängig ausgewählt sind aus R^d, ist;
R^f unabhängig in jedem Fall R^c, substituiert durch 1, 2 oder 3 Substituenten, die unabhängig ausgewählt sind aus R^d, ist; und
R^g unabhängig in jedem Fall R^b, substituiert durch 1, 2 oder 3 Substituenten, die unabhängig ausgewählt sind aus R^c, R^f und R^d, ist.
In einer anderen Ausführungsform, in Verbindung mit beliebigen der vorstehenden oder nachstehenden Ausführungsformen, ist R² R^c, R^f, C_1-4-AlkylR^c, C_1-4-AlkylR^f oder R^g.
In einer anderen Ausführungsform, in Verbindungen mit beliebigen der vorstehenden oder nachstehenden Ausführungsformen, ist R² R^c.
In einer anderen Ausführungsform, in Verbindung mit beliebigen der vorstehenden oder nachstehenden Ausführungsformen, ist R² C_1-4-AlkylR^c.
In einer anderen Ausführungsform, in Verbindung mit beliebigen der vorstehenden oder nachstehenden Ausführungsformen, ist R² C_1-4-AlkylR^f.
In einer anderen Ausführungsform, in Verbindung mit beliebigen der vorstehenden oder nachstehenden Ausführungsformen, ist R² R^g.
In einer anderen Ausführungsform, in Verbindung mit beliebigen der vorstehenden oder nachstehenden Ausführungsformen, ist R² C_1-8-Alkyl, Phenyl oder Benzyl.
In einer anderen Ausführungsform, in Verbindung mit beliebigen der vorstehenden oder nachstehenden Ausführungsformen, ist R² C_1-8-Alkyl.
In einer anderen Ausführungsform, in Verbindung mit beliebigen der vorstehenden oder nachstehenden Ausführungsformen, ist R² Phenyl oder Benzyl.
In einer anderen Ausführungsform, in Verbindung mit beliebigen der vorstehenden oder nachstehenden Ausführungsformen, ist R³ Phenyl oder Naphthyl, die beide durch 0, 1, 2 oder 3 Substituenten, ausgewählt aus C_1-8-Alkyl, C_1-4-Halogenalkyl, Halogen, Cyano, Nitro, -C(=O)R^b, -C(=O)OR^b, -C(=O)NR^aR^a, -C(=NR^a)NR^aR^a, -OR^a, -OC(=O)R^b, -OC(=O)NR^aR^a, -OC(=O)N(R^a)S(=O)₂R^b, -OC_2-6-AlkylNR^aR^a, -OC_2-6-AlkylOR^a, -SR^a, -S(=O)R^b, -S(=O)₂R^b, -S(=O)₂NR^aR^a, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)R^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)OR^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -NR^aR^a, -N(R^a)C(=O)R^b, -N(R^a)C(=O)OR^b, -N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -N(R^a)C(=NR^a)NR^aR^a, -N(R^a)S(=O)₂R^b, -N(R^a)S(=O)₂NR^aR^a, -NR^aC_2-6-AlkylNR^aR^a und -NR^aC_2-6-AlkylOR^a, substituiert sind.
In einer anderen Ausführungsform, in Verbindung mit beliebigen der vorstehenden oder nachstehenden Ausführungsformen, ist R³ unsubstituiertes Naphthyl oder Phenyl, substituiert durch 1, 2 oder 3 Substituenten, ausgewählt aus C_1-8-Alkyl, C_1-4-Halogenalkyl, Halogen, Cyano, Nitro, -C(=O)R^b, -C(=O)OR^b, -C(=O)NR^aR^a, -C(=NR^a)NR^aR^a, -OR^a, -OC(=O)R^b, -OC(=O)NR^aR^a, -OC(=O)N(R^a)S(=O)₂R^b, -OC_2-6-AlkylNR^aR^a, -OC_2-6-AlkylOR^a, -SR^a, -S(=O)R^b, -S(=O)₂R^b, -S(=O)₂NR^aR^a, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)R^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)OR^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -NR^aR^a, -N(R^a)C(=O)R^b, -N(R^a)C(=O)OR^b, -N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -N(R^a)C(=NR^a)NR^aR^a, -N(R^a)S(=O)₂R^b, -N(R^a)S(=O)₂NR^aR^a, -NR^aC_2-6-AlkylNR^aR^a und -NR^aC_2-6-AlkylOR^a.
In einer anderen Ausführungsform, in Verbindung mit beliebigen der vorstehenden oder nachstehenden Ausführungsformen, ist R³ unsubstituiertes Naphthyl.
In einer anderen Ausführungsform, in Verbindung mit beliebigen der vorstehenden oder nachstehenden Ausführungsformen, ist R³ Phenyl, substituiert durch 1, 2 oder 3 Substituenten, ausgewählt aus C_1-8-Alkyl, C_1-4-Halogenalkyl, Halogen, Cyano, Nitro, -C(=O)R^b, -C(=O)OR^b, -C(=O)NR^aR^a, -C(=NR^a)NR^aR^a, -OR^a, -OC(=O)R^b, -OC(=O)NR^aR^a, -OC(=O)N(R^a)S(=O)₂R^b, -OC_2-6-AlkylNR^aR^a, -OC_2-6-AlkylOR^a, -SR^a, -S(=O)R^b, -S(=O)₂R^b, -S(=O)₂NR^aR^a, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)R^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)OR^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -NR^aR^a, -N(R^a)C(=O)R^b, -N(R^a)C(=O)OR^b, -N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -N(R^a)C(=NR^a)NR^aR^a, -N(R^a)S(=O)₂R^b, -N(R^a)S(=O)₂NR^aR^a, -NR^aC_2-6-AlkylNR^aR^a und -NR^aC_2-6-AlkylOR^a.
In einer anderen Ausführungsform, in Verbindung mit beliebigen der vorstehenden oder nachstehenden Ausführungsformen, ist R³ Phenyl, das durch 1, 2 oder 3 Substituenten, ausgewählt aus C_1-8-Alkyl, C_1-4-Halogenalkyl und Halogen, substituiert ist.
In einer anderen Ausführungsform, in Verbindung mit beliebigen der vorstehenden oder nachstehenden Ausführungsformen, ist R³ Phenyl, das durch 1 oder 2 Chloratome substituiert ist.
In einer anderen Ausführungsform, in Verbindung mit beliebigen der vorstehenden oder nachstehenden Ausführungsformen, ist R³ ein gesättigter oder ungesättigter 5- oder 6-gliedriger Ringheterocyclus, der 1-4 Heteroatome, ausgewählt aus N, O und S, enthält, wobei nicht mehr als 2 der Heteroatome O oder S sind, und der Heterocyclus substituiert ist durch 0, 1 oder 2 Oxogruppen und gegebenenfalls kondensiert ist mit einer Benzogruppe, von denen beliebige durch 0, 1, 2 oder 3 C_1-8-Alkyl, C_1-4-Halogenalkyl, Halogen, Cyano, Nitro, -C(=O)R^b, -C(=O)OR^b, -C(=O)NR^aR^a, -C(=NR^a)NR^aR^a, -OR^a, -OC(=O)R^b, -OC(=O)NR^aR^a, -OC(=O)N(R^a)S(=O)₂R^b, -OC_2-6-AlkylNR^aR^a, -OC_2-6-AlkylO^Ra, -SR^a, -S(=O)R^b, -S(=O)₂R^b, -S(=O)₂NR^aR^a, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)R^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)OR^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -NR^aR^a, -N(R^a)C(=O)R^b, -N(R^a)C(=O)OR^b, -N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -N(R^a)C(=NR^a)NR^aR^a, -N(R^a)S(=O)₂R^b, -N(R^a)S(=O)₂NR^aR^a, -NR^aC_2-6-AlkylNR^aR^a oder -NR^aC_2-6-AlkylOR^a, substituiert sind.
Ein anderer Aspekt der Erfindung bezieht sich auf eine pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung nach einer der vorstehenden Ausführungsformen und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger.
Die Verbindungen sind brauchbar für die Prophylaxe oder Behandlung einer Entzündung, umfassend das Verabreichen einer wirksamen Menge einer Verbindung nach einer der vorstehenden Ausführungsformen.
Die Verbindungen sind brauchbar für die Prophylaxe oder Behandlung von rheumatoider Arthritis, Morbus Paget, Osteoporose, multiplem Myelom, Uveitis, akuter oder chronische myeloischer/granulozytärer Leukämie, pankreatischer β-Zellzerstörung, Osteoarthritis, rheumatoider Spondylitis, Gichtarthritis, entzündlicher Darmerkrankung, Schocklunge (ARDS), Psoriasis, Morbus Crohn, allergischer Rhinitis, Colitis ulcerosa/gravis, Anaphylaxie, Kontaktdermatitis, Asthma, Muskeldegeneration, Kachexie, Reiter-Syndrom, Typ I-Diabetes, Typ II-Diabetes, Knochenresorptionskrankheiten, Transplantat-Wirt-Reaktion, Alzheimer-Krankheit, Schlaganfall, Myokardinfarkt, Ischämie-Reperfusionsschaden, Atherosklerose, Hirntrauma, multipler Sklerose, zerebraler Malaria, Sepsis, septischem Schock, toxischem Schocksyndrom, Fieber, Myalgien aufgrund von HIV-1, HIV-2, HIV-3, Cytomegalievirus (CMV), Influenza, Adenovirus, den Herpesvi ren oder Herpes zoster-Infektion in einem Säuger, umfassend das Verabreichen einer wirksamen Menge einer Verbindung nach einer der vorstehenden Ausführungsformen.
Die Verbindungen sind brauchbar zum Senken der Plasmakonzentrationen von TNF-α oder IL-1 oder beiden, umfassend das Verabreichen einer wirksamen Menge einer Verbindung nach einer der vorstehenden Ausführungsformen.
Die Verbindungen sind brauchbar zum Senken der Plasmakonzentrationen von IL-6 oder IL-8 oder beiden, umfassend das Verabreichen einer wirksamen Menge einer Verbindung nach einer der vorstehenden Ausführungsformen.
Die Verbindungen sind brauchbar für die Prophylaxe oder Behandlung einer Diabetes-Erkrankung bei einem Säuger, umfassend das Verabreichen einer wirksamen Menge einer Verbindung nach einer der vorstehenden Ausführungsformen, um eine Glucagonantagonistenwirkung hervorzubringen.
Die Verbindungen sind brauchbar für die Prophylaxe oder Behandlung einer Schmerzstörung bei einem Säuger, umfassend das Verabreichen einer wirksamen Menge einer Verbindung nach einer der vorstehenden Ausführungsformen.
Die Verbindungen sind brauchbar zum Herabsetzen der Prostaglandinproduktion in einem Säuger, umfassend das Verabreichen einer wirksamen Menge einer Verbindung nach einer der vorstehenden Ausführungsformen.
Die Verbindungen sind brauchbar zum Herabsetzen der Cyclooxygenase-Enzymaktivität in einem Säuger, umfassend das Verabreichen einer wirksamen Menge einer Verbindung nach einer der vorstehenden Ausführungsformen. In einer anderen Ausführungsform ist das Cyclooxygenase-Enzym COX-2.
Die Verbindungen sind brauchbar zum Herabsetzen der Cyclooxygenase-Enzymaktivität in einem Säuger, umfassend das Verabreichen einer wirksamen Menge der vorstehenden pharmazeutischen Zusammensetzung. In einer anderen Ausführungsform ist das Cyclooxygenase-Enzym COX-2.
Ein anderer Aspekt der Erfindung bezieht sich auf die Herstellung eines Medikaments, umfassend eine Verbindung nach einer der vorstehenden Ausführungsformen.
Ein anderer Aspekt der Erfindung bezieht sich auf die Herstellung eines Medikaments für die Behandlung einer Entzündung, umfassend das Verabreichen einer wirksamen Menge einer Verbindung nach einer der vorstehenden Ausführungsformen.
Ein anderer Aspekt der Erfindung bezieht sich auf die Herstellung eines Medikaments für die Behandlung von rheumatoider Arthritis, Morbus Paget, Osteoporose, multiplem Myelom, Uveitis, akuter oder chronischer myeloischer/granulozytärer Leukämie, pankreatischer β-Zellzerstörung, Osteoarthritis, rheumatoider Spondylitis, Gichtarthritis, entzündli cher Darmerkrankung, Schocklunge (ARDS), Psoriasis, Morbus Crohn, allergischer Rhinitis, Colitis ulcerosa/gravis, Anaphylaxie, Kontaktdermatitis, Asthma, Muskeldegeneration, Kachexie, Reiter-Syndrom, Typ I-Diabetes, Typ II-Diabetes, Knochenresorptionskrankheiten, Transplantat-Wirt-Reaktion, Alzheimer-Krankheit, Schlaganfall, Myokardinfarkt, Ischämie-Reperfusionsschaden, Atherosklerose, Hirntrauma, multipler Sklerose, zerebraler Malaria, Sepsis, septischem Schock, toxischem Schocksyndrom, Fieber, Myalgien aufgrund von HIV-1, HIV-2, HIV-3, Cytomegalievirus (CMV), Influenza, Adenovirus, den Herpesviren oder Herpes zoster-Infektion in einem Säuger, umfassend das Verabreichen einer wirksamen Menge einer Verbindung nach einer der vorstehenden Ausführungsformen.
Ein anderer Aspekt der Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zum Herstellen einer Verbindung, wie sie in dieser Anmeldung beschrieben ist, umfassend die Schritte:
Umsetzen von R³-CO₂H mit R⁴-C(=O)H in Gegenwart von Trialkylamin und Essigsäureanhydrid;
Schützen der resultierenden Säure mit einer Schutzgruppe; und
Umsetzen der geschützten Säure mit Hydrazin unter Bildung von
Die Verbindungen dieser Erfindung können im Allgemeinen mehrere asymmetrische Zentren aufweisen und werden typischerweise in Form von racemischen Gemischen wiedergegeben. Diese Erfindung soll racemische Gemische, teilweise racemische Gemische und getrennte Enantiomere und Diastereomere umfassen.
Die Beschreibung und die Ansprüche enthalten Aufzählungen von Spezies unter Verwendung des Wortlauts "ausgewählt aus ... und ..." und "ist ... oder ..." (manchmal als Markush-Gruppen angegeben). Wenn dieser Wortlaut in dieser Anmeldung verwendet wird, soll er, sofern nichts anderes angegeben ist, die Gruppe als Ganzes oder beliebige einzelne Mitglieder davon oder beliebige Untergruppen davon einschließen. Die Verwendung dieses Wortlauts dient nur zu Abkürzungszwecken und soll in keiner Weise die Entfernung von einzelnen Elementen oder Untergruppen aus der Gattung beschränken.
Sofern nichts anderes angegeben ist, gelten die folgenden Definitionen für Begriffe, die in der Beschreibung und den Ansprüchen vorkommen:
"Aryl" bedeutet einen Phenyl- oder Naphthylrest, wobei das Phenyl mit einer C_3-4-Cycloalkylbrücke kondensiert sein kann.
"Benzogruppe", allein oder in Kombination, bedeutet den zweiwertigen Rest C₄H₄=, der auch durch -CH=CH-CH=CH- wiedergegeben wird, welcher, wenn er vicinal an einen anderen Ring gebunden ist, einen benzolartigen Ring bildet – z.B. Tetrahydronaphthalin, Indol und dergleichen.
"C_α-β-Alkyl" bedeutet eine Alkylgruppe, die α bis β Kohlenstoffatome in einer verzweigten, cyclischen oder linearen Beziehung oder eine beliebige Kombination von diesen dreien umfasst. Die Alkylgruppen, die in diesem Abschnitt beschrieben sind, können auch Doppel- oder Dreifachbindungen enthalten. Zu Beispielen für C_1-8-Alkyl gehören die Folgenden, sie sind aber nicht darauf beschränkt:
"Halogen" und "Halo" bedeuten ein Halogenatom, ausgewählt aus F, Cl, Br und 1.
"C_α-β-Halogenalkyl" bedeutet eine Alkylgruppe, wie vorstehend beschrieben, wobei eine beliebige Zahl – mindestens eines – der Wasserstoffatome, die an die Alkylkette gebunden sind, durch F, Cl, Br oder I ersetzt ist.
"Heterocyclus" bedeutet einen Ring, der wenigstens ein Kohlenstoffatom und wenigstens ein anderes Atom, ausgewählt aus N, O und S, umfasst. Zu Beispielen für Heterocyclen, welche in den Ansprüchen vorkommen können, gehören die Folgenden, sie sind aber nicht darauf beschränkt:
"Pharmazeutisch annehmbares Salz" bedeutet ein durch herkömmliche Mittel hergestelltes Salz, und ist dem Fachmann wohlbekannt. Zu den "pharmakologisch annehmbaren Salzen" gehören basische Salze von anorganischen oder organischen Säuren, einschließlich, aber nicht beschränkt auf Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Äpfelsäure, Essigsäure, Oxalsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Milchsäure, Fumarsäure, Bernsteinsäure, Maleinsäure, Salicylsäure, Benzoesäure, Phenylessigsäure, Mandelsäure und dergleichen. Wenn Verbindungen der Erfindung eine saure Funktion wie eine Carboxygrup pe enthalten, dann sind geeignete pharmazeutisch annehmbare Kationenpaare für die Carboxygruppe dem Fachmann wohlbekannt und zu ihnen gehören Alkali-, Erdalkali-, Ammonium-, quaternäre Ammoniumkationen und dergleichen. Für weitere Beispiele für "pharmakologisch annehmbare Salze" siehe unten und Berge et al., J. Pharm, Sci. 66:1 (1977).
"Abgangsgruppe" bezieht sich allgemein auf Gruppen, die leicht durch ein Nucleophil, wie ein Amin-, ein Thiol- oder ein Alkoholnucleophil ersetzt werden können. Solche Abgangsgruppen sind im Fachgebiet wohlbekannt. Zu Beispielen für solche Abgangsgruppen gehören N-Hydroxysuccinimid, N-Hydroxybenzotriazol, Halogenide, Triflate, Tosylate und dergleichen, sie sind aber nicht darauf beschränkt. Bevorzugte Abgangsgruppen sind in dieser Anmeldung angegeben, wo dies zweckmäßig ist.
"Schutzgruppe" bezieht sich allgemein auf Gruppen, die im Fachgebiet wohlbekannt sind, welche verwendet werden, um zu verhindern, dass ausgewählte reaktive Gruppen, wie Carboxy, Amino, Hydroxy, Mercapto und dergleichen, unerwünschte Reaktionen wie eine nucleophile Reaktion, elektrophile Reaktion, Oxidation, Reduktion und dergleichen eingehen. Bevorzugte Schutzgruppen sind in dieser Anmeldung angegeben, wo dies zweckmäßig ist. Zu Beispielen für Aminoschutzgruppen gehören Aralkyl, substituiertes Aralkyl, Cycloalkenylalkyl und substituiertes Cycloalkenylalkyl, Allyl, substituiertes Allyl, Acyl, Alkoxycarbonyl, Aralkoxycarbonyl, Silyl und dergleichen, sie sind aber nicht darauf beschränkt. Zu Beispielen für Aralkyl gehören Benzyl, ortho-Methylbenzyl, Trityl und Benzhydryl, welche gegebenenfalls mit Halogen, Alkyl, Alkoxy, Hydroxy, Nitro, Acylamino, Acyl und dergleichen und Salzen, wie Phosphonium- und Ammoniumsalzen, substituiert sein können, sie sind aber nicht darauf beschränkt. Zu Beispielen für Arylgruppen gehören Phenyl, Naphthyl, Indanyl, Anthracenyl, 9-(9-Phenylfluorenyl), Phenanthrenyl, Durenyl und dergleichen. Zu Beispielen für Cycloalkenylalkyl- oder substituierte Cycloalkenylalkylreste, vorzugsweise mit 6-10 Kohlenstoffatomen, gehören Cyclohexenylmethyl und dergleichen, sie sind aber nicht darauf beschränkt. Zu geeigneten Acyl-, Alkoxycarbonyl- und Aralkoxycarbonylgruppen gehören Benzyloxycarbonyl, t-Butoxycarbonyl, Isobutoxycarbonyl, Benzoyl, substituiertes Benzoyl, Butyryl, Acetyl, Trifluoracetyl, Trichloracetyl, Phthaloyl und dergleichen. Ein Gemisch aus Schutzgruppen kann verwendet werden, um die gleiche Aminogruppe zu schützen, z.B. kann eine primäre Aminogruppe sowohl durch eine Aralkylgruppe als auch durch eine Aralkoxycarbonylgruppe geschützt werden. Aminoschutzgruppen können auch einen heterocyclischen Ring mit dem Stickstoff bilden, an den sie gebunden sind, z.B. 1,2-Bis(methylen)benzol, Phthalimidyl, Suc cinimidyl, Maleimidyl und dergleichen, und diese heterocyclischen Gruppen können weiterhin angrenzende Aryl- und Cycloalkylringe einschließen. Außerdem können die heterocyclischen Gruppen mono-, di- oder trisubstituiert sein, wie etwa Nitrophthalimidyl. Aminogruppen können auch vor unerwünschten Reaktionen, wie etwa einer Oxidation, durch die Bildung eines Additionssalzes, wie etwa das Hydrochlorid, Toluolsulfonsäure, Trifluoressigsäure und dergleichen, geschützt werden. Viele der Aminoschutzgruppen eignen sich auch zum Schützen von Carboxy-, Hydroxy- und Mercaptogruppen. Zum Beispiel Aralkylgruppen. Alkylgruppen sind ebenfalls geeignete Gruppen zum Schützen von Hydroxy- und Mercaptogruppen, wie etwa tert-Butyl.
Silylschutzgruppen sind Siliciumatome, die gegebenenfalls durch eine oder mehrere Alkyl-, Aryl- und Aralkylgruppen substituiert sind. Zu geeigneten Silylschutzgruppen gehören Trimethylsilyl, Triethylsilyl, Triisopropylsilyl, tert-Butyldimethylsilyl, Dimethylphenylsilyl, 1,2-Bis(dimethylsilyl)benzol, 1,2-Bis(dimethylsilyl)ethan und Diphenylmethylsilyl, sie sind aber nicht darauf beschränkt. Die Silylierung von Aminogruppen ergibt Mono- oder Disilylaminogruppen. Die Silylierung von Aminoalkoholverbindungen kann zu einem N,N,O-Trisilylderivat führen. Die Entfernung der Silylfunktion von einer Silyletherfunktion erfolgt leicht durch Behandlung mit beispielsweise einem Metallhydroxid- oder Ammoniumfluoridreagens, entweder als getrennter Reaktionsschritt oder in situ während einer Reaktion mit der Alkoholgruppe. Geeignete Silylierungsmittel sind z.B. Trimethylsilylchlorid, tert-Butyldimethylsilylchlorid, Phenyldimethylsilylchlorid, Diphenylmethylsilylchlorid oder ihre Kombinationsprodukte mit Imidazol oder DMF. Verfahren zur Silylierung von Aminen und zur Entfernung von Silylschutzgruppen sind dem Fachmann wohlbekannt. Verfahren zur Herstellung dieser Aminderivate aus entsprechenden Aminosäuren, Aminosäureamiden oder Aminosäureestern sind dem Fachmann auf dem Gebiet der organischen Chemie einschließlich der Aminosäure/Aminosäureester- oder Aminoalkoholchemie ebenfalls wohlbekannt.
Schutzgruppen werden unter Bedingungen entfernt, welche den übrigen Teil des Moleküls nicht beeinflussen. Diese Verfahren sind im Fachgebiet wohlbekannt und zu ihnen gehören eine Säurehydrolyse, Hydrogenolyse und dergleichen. Ein bevorzugtes Verfahren umfasst das Entfernen einer Schutzgruppe, wie etwa das Entfernen einer Benzyloxycarbonylgruppe durch Hydrogenolyse unter Verwendung von Palladium auf Kohlenstoff in einem geeigneten Lösungsmittelsystem wie einem Alkohol, Essigsäure und dergleichen oder Gemischen davon. Eine t-Butoxycarbonylschutzgruppe kann unter Verwendung einer anorganischen oder organischen Säure wie HCl oder Trifluoressigsäure in einem geeigneten Lösungsmittelsystem wie Dioxan oder Methylenchlorid entfernt werden. Das resultierende Aminosalz kann leicht neutralisiert werden, wobei das freie Amin erhalten wird. Eine Carboxyschutzgruppe wie Methyl, Ethyl, Benzyl, tert-Butyl, 4-Methoxyphenylmethyl und dergleichen kann unter Hydrolyse und Hydrogenolysebedingungen entfernt werden, die dem Fachmann wohlbekannt sind.
Es sollte beachtet werden, dass Verbindungen der Erfindung Gruppen enthalten können, welche in tautomeren Formen vorkommen können, wie etwa cyclische und acyclische Amidin- und Guanidingruppen, Heteroatom-substituierte Heteroarylgruppen (Y' = O, S, NR) und dergleichen, welche in den folgenden Beispielen veranschaulicht sind:
und obwohl eine Form in dieser Anmeldung benannt, beschrieben, dargestellt und/oder beansprucht ist, sollen alle tautomeren Formen in einem solchen Namen, einer solchen Beschreibung, Darstellung und/oder einem solchen Anspruch inhärent eingeschlossen sein.
Prodrugs (Propharmaka) der Verbindungen dieser Erfindung werden ebenfalls von dieser Erfindung in Betracht gezogen. Ein Prodrug ist eine aktive oder inaktive Verbindung, welche durch eine physiologische Wirkung in vivo, wie Hydrolyse, Metabolismus und dergleichen zu einer Verbindung dieser Erfindung chemisch modifiziert wird, nachdem das Prodrug einem Patienten verabreicht wurde. Die Eignung und Methoden, die beim Herstellen und Verwenden von Prodrugs beteiligt sind, sind dem Fachmann wohlbekannt. Für eine allgemeine Erörterung von Prodrugs, die Ester einschließen, siehe Svensson und Tunek Drug Metabolism Reviews 165 (1988) und Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985). Zu Beispielen für ein maskiertes Carboxylatanion gehören eine Reihe von Estern wie Alkyl (z.B. Methyl, Ethyl), Cycloalkyl (z.B. Cyclohexyl), Aralkyl (z.B. Benzyl, p-Methoxybenzyl) und Alkylcarbonyloxyalkyl (z.B. Pivaloyloxymethyl). Amine wurden als Arylcarbonyloxymethyl-substituierte Derivate maskiert, welche von Esterasen in vivo gespalten werden, wobei das freie Arzneimittel und Formaldehyd freigesetzt wird (Bundgaard J. Med. Chem. 2503 (1989)). Ferner wurden Arzneimittel, die eine saure NH-Gruppe, wie Imidazol, Imid, Indol und dergleichen enthalten, mit N-Acyloxymethylgruppen maskiert (Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985)). Hydroxygruppen wurden als Ester und Ether maskiert. EP 039,051 (Sloan und Little, 4/11/81) offenbart Mannich-Base-Hydroxamsäure-Prodrugs, ihre Herstellung und Verwendung.
"Cytokin" bedeutet ein sezerniertes Protein, welches die Funktionen von anderen Zellen beeinflusst, insbesondere, da es sich auf die Modulierung von Wechselwirkungen zwischen Zellen des Immunsystems oder Zellen, die an der inflammatorischen Reaktion beteiligt sind, bezieht. Zu Beispielen für Cytokine gehören Interleukin 1 (IL-1), vorzugsweise IL-1β, Interleukin 6 (IL-6), Interleukin 8 (IL-8) und TNF, vorzugsweise TNF-α (Tumornekrosefaktor-α), sie sind aber nicht darauf beschränkt.
"Durch TNF, IL-1, IL-6 und/oder IL-8 vermittelte Krankheit oder Krankheitszustand" bedeutet alle Krankheitszustände, bei denen TNF, IL-1, IL-6 und/oder IL-8 eine Rolle spielt, entweder direkt als TNF, IL-1, IL-6 und/oder IL-8 selbst oder indem TNF, IL-1, IL-6 und/oder IL-8 veranlasst, dass ein anderes Cytokin freigesetzt wird. Zum Beispiel würde ein Krankheitszustand, bei dem IL-1 eine wichtige Rolle spielt, aber bei dem die Produktion oder Wirkung von IL-1 eine Folge von TNF ist, als durch TNF vermittelt angesehen.
Erfindungsgemäße Verbindungen können nach einem oder mehreren der folgenden Verfahren synthetisiert werden. Es sollte beachtet werden, dass die allgemeinen Verfahren so gezeigt sind, dass sie sich auf die Herstellung von Verbindungen mit nicht spezifizierter Stereochemie beziehen. Solche Verfahren sind jedoch allgemein anwendbar auf Verbindungen mit einer spezifischen Stereochemie, z.B. bei denen die Stereochemie an einer Gruppe (S) oder (R) ist. Außerdem können die Verbindungen mit einer einzigen Stereochemie (z.B. (R)) häufig verwendet werden, um diejenigen mit entgegengesetzter Stereochemie (d. h. (S)) herzustellen, wobei wohlbekannte Verfahren, z.B. eine Inversion, verwendet werden.
BEISPIELE Beispiel 1
2-(4-Chlor-phenyl)-3-pyridin-4-yl-acrylsäure
Zu einem Gemisch aus 9,78 g (4-Chlor-phenyl)-essigsäure und 6,14 g Pyridin-4-carbaldehyd wurden 20 ml Essigsäureanhydrid und 20 ml Triethylamin zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 24 Stunden auf 120°C erhitzt und auf Raumtemperatur abgekühlt. Wasser und Ethylacetat wurden zugegeben. Der gebildete Feststoff wurde abfiltriert, mit Wasser und Ethylacetat gewaschen und getrocknet, wobei die Titelverbindung als ein hellgelber Feststoff erhalten wurde. MS (ES+): 260 (M+H)⁺.
Beispiel 2
2-(4-Chlor-phenyl)-3-pyridin-4-yl-acrylsäure-methylester
Die Lösung von 3,5 g 2-(4-Chlor-phenyl)-3-pyridin-4-yl-acrylsäure in 25 ml Thionylchlorid wurde 5 Stunden auf 70°C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde auf 0°C gekühlt, dann wurden 50 ml Methanol zugegeben. Nach dem Aufwärmen auf Raumtemperatur im Laufe einer Stunde wurde das gesamte Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt. Die Aufarbeitung unter Verwendung von Ethylacetat und Natriumhydrogencarbonat ergab den hellgelben Feststoff. MS (ES+): 274 (M+H)⁺.
Beispiel 3
4-(4-Chlor-phenyl)-5-pyridin-4-yl-pyrazolidin-3-on
Zu einer Lösung von 2,02 g 2-(4-Chlor-phenyl)-3-pyridin-4-yl-acrylsäure-methylester in 25 ml Ethylalkohol wurden 2,37 g Hydrazin zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 135 Minuten auf 50°C erhitzt. Anschließend wurde das gesamte Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt, wobei die Titelverbindung als hellgelber Feststoff erhalten wurde. MS (ES+): 274 (M+H)⁺. Beispiel 4
4-(4-Chlor-phenyl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on
Zu einer Lösung von 20 mg 4-(4-Chlor-phenyl)-5-pyridin-4-yl-pyrazolidin-3-on in 5 ml Ethylalkohol wurde 1 mg Pd/C zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 48 Stunden auf 50°C erhitzt, auf Raumtemperatur gekühlt, filtriert und zu einem Feststoff konzentriert. Eine Reinigung durch eine DC-Platte gefolgt von einer Kristallisation aus Chloroform und Methanol ergab die Titelverbindung als einen gebrochen weißen Feststoff. MS (ES+): 272 (M+H)⁺.
Beispiel 5
4-(4-Chlor-phenyl)-1-piperidin-4-yl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on
Schritt A: 4-[4-(4-Chlor-phenyl)-3-oxo-5-pyridin-4-yl-pyrazolidin-1-yl]-piperidin-1-carbonsäure-tert-butylester
Zu einer Lösung von 0,86 g 4-(4-Chlor-phenyl)-5-pyridin-4-yl-pyrazolidin-3-on und 0,75 g 4-Oxo-piperidin-1-carbonsäure-tert-butylester in 35 ml Chloroform wurden 0,75 g Natriumtriacetoxyborhydrid bei 0°C zugegeben, das Reaktionsgemisch wurde im Laufe von 2 Stunden auf Raumtemperatur erwärmt, bevor es für weitere 2 Stunden auf 50°C erhitzt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde mit 25 ml Wasser bei 0°C versetzt, um die Reaktion zu beenden, und die organische Schicht wurde gesammelt, filtriert, über MgSO₄ getrocknet und zu 0,42 g eines gelben Feststoffs konzentriert, um diesen direkt für den nächsten Schritt zu verwenden. MS (ES+): 457 (M+H)⁺.
Schritt B: 4-(4-(4-Chlor-phenyl)-3-oxo-5-pyridin-4-yl-2,3-dihydro-pyrazol-1-yl]-piperidin-1-carbonsäure-tert-butylester
Zu einer Lösung von 0,42 g 4-[4-(4-Chlor-phenyl)-3-oxo-5-pyridin-4-yl-pyrazolidin-1-yl]-piperidin-1-carbonsäure-tert-butylester in 25 ml Ethanol wurden 0,02 g Palladium auf Kohlenstoff zugegeben und das Reaktionsgemisch wurde 48 Stunden auf 50°C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur gekühlt, filtriert und konzentriert. Eine Reinigung durch Flash-Chromatografie ergab die Titelverbindung als farbloses Öl. MS (ES+): 455 (M+H)⁺; (ES-): 452 (M-H)^–.
Schritt C: 4-(4-Chlor-phenyl)-1-piperidin-4-yl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on
Zu einer Lösung von 200 mg 4-(4-(4-Chlor-phenyl)-3-oxo-5-pyridin-4-yl-2,3-dihydro-pyrazol-1-yl]-piperidin-1-carbonsäure-tert-butylester in einem Kolben wurde HCl in Ether und Dioxan zugegeben. Nach 2,25 Stunden wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgedampft, wobei die Titelverbindung als gelbes Öl erhalten wurde. MS (ES+): 355 (M+H)⁺; (ES-): 353 (M-H)^–.
Beispiel 6
4-(4-Chlor-phenyl)-1-piperidin-3-yl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on
Die Titelverbindung wurde durch das in Beispiel 5 beschriebene Verfahren aus 3-Oxo-piperidin-1-carbonsäure-tert-butylester analog synthetisiert. Diese Verbindung wurde als gelber Feststoff erhalten. MS (ES+): 355 (M+H)⁺; (ES-): 353 (M-H)^–.
Beispiel 7
4-(4-Chlor-phenyl)-1-piperidin-4-ylmethyl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrarol-3-on
Die Titelverbindung wurde durch das in Beispiel 5 beschriebene Verfahren aus 4-Formyl-piperidin-1-carbonsäure-tert-butylester analog synthetisiert. Diese Verbindung wurde als gelber Feststoff erhalten. MS (ES+): 369 (M+H)⁺; (ES-): 367 (M-H)^–.
Beispiel 8
4-(4-Chlor-phenyl)-1-methyl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on
Die Titelverbindung wurde durch das in Beispiel 5 beschriebene Verfahren aus Formaldehyd analog synthetisiert. Diese Verbindung wurde als gelber Feststoff erhalten. MS (ES+): 286 (M+H)⁺; (ES-): 284 (M-H)^–.
Beispiel 9
4-(3,4-Dichlorphenyl)-1-piperidin-4-yl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on
Die Titelverbindung wurde durch das in Beispiel 5 beschriebene Verfahren analog synthetisiert. Anstelle von 4-Chlorphenylessigsäure wurde 3,4-Dichlorphenylessigsäure verwendet. MS (ES+): 389,0 (M+H)⁺; (ES-): 387,4 (M-H)^–.
Beispiel 10
4-(4-Chlorphenyl)-1-(1-methyl-piperidin-4-yl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on
Eine Lösung von 4-(4-Chlorphenyl)-1-piperidin-4-yl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on (0,12 g, 0,34 mmol) in wasserfreiem Methanol (3 ml) wurde in einem Eiswasserbad auf 0°C gekühlt und mit Formaldehyd (3 ml; 37 Gew.-% in Wasser), gefolgt von Natriumborhydrid (0,039 g, 1 mmol) versetzt. Nach 1 Stunde Rühren wurde das Reaktionsgemisch mit Wasser versetzt, um die Reaktion zu beenden, und mit Methylenchlorid verdünnt. Die organische Schicht wurde mit Salzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und im Vakuum konzentriert. Die Titelverbindung wurde als gelber amorpher Feststoff durch präparative HPLC isoliert. MS (ES+): 369,2 (M+H)⁺; (ES-): 367,1 (M-H)^–. Beispiel 11
4-(4-Chlorphenyl)-1-(1-methyl-piperidin-3-yl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on
Die Titelverbindung wurde durch das in Beispiel 10 beschriebene Verfahren analog synthetisiert. Anstelle von 4-(4-Chlorphenyl)-1-piperidin-4-yl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on wurde 4-(4-Chlorphenyl)-1-piperidin-3-yl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on verwendet. MS (ES+): 369,2 (M+H)⁺; (ES-): 367,1 (M-H)^–.
Beispiel 12
4-(4-Chlorphenyl)-1-(1-isopropyl-piperidin-4-yl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on
Die Titelverbindung wurde durch das in Beispiel 10 beschriebene Verfahren analog synthetisiert. Es wurde Aceton anstelle von Formaldehyd verwendet. MS (ES+): 397,3 (M+H)⁺; (ES-): 395,2 (M-H)^–.
Beispiel 13
4-[4-(4-Chlorphenyl)-3-methoxy-5-pyridin-4-yl-pyrazol-1-yl]-piperidin
Schritt A. 4-[4-(4-Chlorphenyl)-3-methoxy-5-pyridin-4-yl-pyrazol-1-yl]-piperidin-1-carbonsäure-tert-butylester
Eine Lösung von 4-[4-(4-Chlorphenyl)-3-oxo-5-pyridin-4-yl-2,3-dihydro-pyrazol-1-yl]-piperidin-1-carbonsäure-tert-butylester (0,135 g, 0,3 mmol) in trockenem DMF (2 ml) wurde auf 0°C gekühlt und mit Lithiumhydrid (0,0035 g, 0,45 mmol) versetzt. Nach 5 Minuten Rühren wurde Iodmethan (0,037 ml, 0,6 mmol) zugegeben und das Reaktionsgemisch wurde allmählich auf Raumtemperatur aufwärmen gelassen und 20 Stunden ge rührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Ethylacetat verdünnt und mit Wasser gewaschen; die wässrige Schicht wurde mit Ethylacetat rückgewaschen. Die vereinigte organische Schicht wurde mit Salzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und im Vakuum konzentriert. Eine Flash-Chromatografie mit 1 %, 3% und 5% Methanol/Methylenchlorid ergab 18,8 mg (13%) eines monomethylierten Produkts. MS (ES+): 469,2 (M+H)⁺.
Schritt B: 4-[4-(4-Chlorphenyl)-3-methoxy-5-pyridin-4-yl-pyrazol-1-yl]-piperidin
Unter Befolgung des Verfahrens von Schritt C in Beispiel 5 wurde die Titelverbindung als ein gelber amorpher Feststoff isoliert. MS (ES+): 369,2 (M+H)⁺.
Beispiel 14
4-(3,4-Dichlor-phenyl)-5-pyridin-4-yl-pyrazolidin-3-on
Schritt A: 3-(3,4-Dichlor-phenyl)-2-oxo-4-pyridin-4-yl-but-3-ensäure
Zu einem Gemisch aus 10,3 g (3,4-Dichlor-phenyl)-essigsäure und 5,25 ml Pyridin-4-carbaldehyd wurden 6 ml Essigsäureanhydrid und 6 ml Pyridin zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 2 Stunden auf 120°C erhitzt und auf Raumtemperatur abgekühlt. Wasser und Ethylacetat wurden zugegeben. Der gebildete Feststoff wurde abfiltriert, mit Wasser und Ethylacetat gewaschen und getrocknet, wobei 10,2 g der Titelverbindung als hellgelber Feststoff erhalten wurden. MS (ES+): 292 (M+H)⁺.
Schritt B: 3-(3,4-Dichlor-phenyl)-2-oxo-4-pyridin-4-yl-but-3-ensäure-ethylester
Die Lösung von 9,6 g 3-(3,4-Dichlor-phenyl)-2-oxo-4-pyridin-4-yl-but-3-ensäure in 20 ml Thionylchlorid wurde 1 Stunde auf 80°C erhitzt. Das überschüssige Thionylchlorid wurde im Vakuum abgezogen, der Rückstand auf 0°C gekühlt und anschließend mit 50 ml Methanol versetzt. Nachdem er im Laufe einer Stunde auf Raumtemperatur und 1 Stunde auf 60°C erwärmt worden war, wurde das gesamte Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt. Die Aufarbeitung unter Verwendung von Ethylacetat und Natriumhydrogencarbonat ergab 11,43 g der Titelverbindung als weißen Feststoff. MS (ES+): 322 (M+H)⁺.
Schritt C: 4-(3,4-Dichlor-phenyl)-5-pyridin-4-yl-pyrazolidin-3-on
Zu einer Lösung von 11,4 g 3-(3,4-Dichlor-phenyl)-2-oxo-4-pyridin-4-yl-but-3-ensäure-ethylester in 50 ml Ethylalkohol wurden 1,68 ml Hydrazin zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 15 Stunden auf 50°C erhitzt. Anschließend wurde das gesamte Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt, wobei 10,8 g der Titelverbindung als hellgelber Feststoff erhalten wurden. MS (ES+): 308 (M+H)⁺.
Beispiel 15
4-(3,4-Dichlor-phenyl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on
Die Lösung von 0,30 g 4-(3,4-Dichlor-phenyl)-5-pyridin-4-yl-pyrazolidin-3-on, 20 mg Pd/C und 20 ml Methanol wurde bei Raumtemperatur gerührt. Luft wurde 2 Stunden lang durchgeperlt. Der Pd/C-Katalysator wurde abfiltriert und das gesamte Lösungsmittel im Vakuum abgezogen. Die Titelverbindung wurde als weißer Feststoff (0,29 g) erhalten. MS (ES+): 306 (M+H)⁺.
Beispiel 16
4-(3,4-Dichlor-phenyl)-1-isopropyl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on
Schritt A: 4-(3,4-Dichlor-phenyl)-1-isopropyl-5-pyridin-4-yl-pyrazolidin-3-on
Zu einer Lösung von 0,30 g 4-(3,4-Dichlor-phenyl)-5-pyridin-4-yl-pyrazolidin-3-on und 0,1 ml Aceton in 20 ml Chloroform wurde 0,1 g NaBH₃(CN) bei 0°C zugegeben, das Reaktionsgemisch wurde auf 50°C erwärmt und 1 Stunde gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 25 ml gesättigtem NaNCO₃ bei 0°C versetzt, um die Reaktion zu beenden. Das Reaktionsgemisch wurde mit 3 × 50 ml Dichlormethan extrahiert. Die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung gewaschen und über wasserfreiem Na₂SO₄ getrocknet. Nach einer Reinigung durch Flash-Chromatografie wurde die Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten (0,26 g). MS (ES+): 350 (M+H)⁺.
Schritt B: 4-(3,4-Dichlor-phenyl)-1-isopropyl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on
Die Lösung von 90 mg 4-(3,4-Dichlor-phenyl)-1-isopropyl-5-pyridin-4-yl-pyrazolidin-3-on in 10 ml Dichlormethan wurde mit 0,1 g Phenyltriethylammoniumtribromid bei Raumtemperatur behandelt. Das Reaktionsgemisch wurde 15 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 25 ml gesättigtem Na₂SO₃ bei 0°C versetzt, um die Reaktion zu beenden.
Das Reaktionsgemisch wurde mit 3 × 50 ml Dichlormethan extrahiert. Die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung gewaschen und über wasserfreiem Na₂SO₄ getrocknet. Nach einer Reinigung durch Flash-Chromatografie wurde die Titelverbindung als hellgelber Feststoff erhalten (45 mg). MS (ES+): 348 (M+H)⁺.
Beispiel 17
1-(4-Aminocyclohexyl)-4-(4-chlorphenyl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydropyrazol-3-on
Schritt A: {4-[4-(4-Chlorphenyl)-3-oxo-5-pyridin-4-yl-2,3-dihydropyrazol-1-yl]cyclohexyl}carbaminsäure-tert-butylester
Unter Befolgung des Verfahrens von Schritt A in Beispiel 5, mit der Ausnahme, dass 4-Oxo-piperidin-1-carbonsäure-tert-butylester durch (4-Oxo-cyclohexyl)carbaminsäure-tert-butylester ersetzt wurde, wurde die Titelverbindung als ein gebrochen weißer amorpher Feststoff hergestellt. MS (ES+): 469,2 (M+H)⁺; (ES-): 467,3 (M-H)^–.
Schritt B: 1-(4-Aminocyclohexyl)-4-(4-chlorphenyl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydropyrazol-3-on
Unter Befolgung des Verfahrens von Schritt C in Beispiel 5, mit der Ausnahme, dass 4-[4-(4-Chlorphenyl)-3-oxo-5-pyridin-4-yl-2,3-dihydro-pyrazol-1-yl]-piperidin-1-carbonsäure-tert-butylester durch {4-[4-(4-Chlorphenyl)-3-oxo-5-pyridin-4-yl-2,3-dihydropyrazol-1-yl]cyclohexyl}carbaminsäure-tert-butylester ersetzt wurde, wurde die Titelverbindung als ein gelber amorpher Feststoff hergestellt. MS (ES+): 369,3 (M+H)⁺; (ES-): 367,2 (M-H)^–.
Beispiel 18
1-(4-Aminocyclohexyl)-4-naphthalen-2-yl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydropyrazol-3-on
Die Titelverbindung wurde durch das in Beispiel 20 beschriebene Verfahren analog synthetisiert. Anstelle von (4-Chlorphenyl)essigsäure wurde Naphthalen-2-yl-essigsäure verwendet. MS (ES+): 385,2 (M+H)⁺; (ES-): 383,3 (M-H)^–.
Beispiel 19
4-Naphthalen-2-yl-1-(3-phenylpropyl)-5-pyridin-4-1,2-dihydropyrazol-3-on
Die Titelverbindung wurde durch das in Schritt A, Beispiel 20 beschriebene Verfahren analog synthetisiert. Anstelle von 4-Oxo-piperidin-1-carbonsäure-tert-butylester wurde 3-Phenylpropionaldehyd verwendet. MS (ES+): 390,2 (M+H)⁺; (ES-): 388,2 (M-H)^–.
Biologische Tests
Die folgenden Tests wurden verwendet, um die Fähigkeit von Verbindungen der Erfindung, die Produktion von TNF-α und IL-1β zu hemmen, zu charakterisieren. Der zweite Test kann verwendet werden, um die Hemmung von TNF-α und/oder IL-1β in Mäusen nach einer oralen Verabreichung der Testverbindungen zu messen. Der dritte Test, ein in vitro-Test der Hemmung der Glucagonbindung, kann verwendet werden, um die Fähigkeit von Verbindungen der Erfindung, die Glucagonbindung zu hemmen, zu charakterisieren. Der vierte Test, ein in vitro-Test der Cyclooxygenase-Enzym (COX-1 und COX-2)-Hemmungsaktivität, kann verwendet werden, um die Fähigkeit von Verbindungen der Erfindung, COX-1 und/oder COX-2 zu hemmen, zu charakterisieren. Der fünfte Test, ein Raf-Kinase-Hemmungstest, kann verwendet werden, um die Fähigkeit der Verbindungen der Erfindung zum Hemmen der Phosphorylierung von MEK durch aktivierte Raf-Kinase zu charakterisieren.
Test der TNF-Produktion in Lipopolysaccharid-aktivierten Monozyten
Isolierung von Monozyten
Testverbindungen wurden in vitro bewertet im Hinblick auf die Fähigkeit, die Produktion von TNF durch mit bakteriellem Lipopolysaccharid (LPS) aktivierte Monozyten zu hemmen. Frische Rest-Ausgangsleukozyten (ein Nebenprodukt der Thrombozytopherese) wurden von einer örtlichen Blutbank erhalten und mononukleäre Zellen des peripheren Bluts (PBMCs) wurden durch Dichtegradientenzentrifugation an Ficol-Paque Plus (Pharmacia) isoliert. PBMCs wurden in einer Konzentration von 2 × 10⁶/ml in DMEM suspendiert, das so ergänzt war, dass es 2% FCS, 10 mM, 0,3 mg/ml Glutamat, 100 E/ml Penicillin G und 100 mg/ml Streptomycinsulfat enthielt (vollständiges Medium). Die Zellen wurden in Falcon-Kulturplatten mit flachem Boden und 96 Vertiefungen (200 μl/Vertiefung) ausplattiert und über Nacht bei 37°C und 6% CO₂ kultiviert. Nicht adhärente Zellen wurden durch Waschen mit 200 frischem Medium/Vertiefung ent fernt. Vertiefungen, die adhärente Zellen (ungefähr 70% Monozyten) enthielten, wurden mit 100 μl frischem Medium aufgefüllt.
Herstellung von Stammlösungen der Testverbindung
Testverbindungen wurden in DMZ gelöst. Stammlösungen der Verbindung wurden bis zu einer Ausgangskonzentration von 10-50 μM hergestellt. Stammlösungen wurden anfänglich bis zu 20-200 μM in vollständigen Medien verdünnt. Neun zweifache Reihenverdünnungen von jeder Verbindung wurden anschließend in vollständigem Medium hergestellt.
Behandlung von Zellen mit Testverbindungen und Aktivierung der TNF-Produktion mit Lipopolysaccharid
100 μl von jeder Testverbindungsverdünnung wurden zu Mikrotiterplattenvertiefungen zugegeben, die adhärente Monozyten und 100 μl vollständiges Medium enthielten. Die Monozyten wurden 60 Minuten mit den Testverbindungen kultiviert und nach diesem Zeitraum wurden 25 μl vollständiges Medium, enthaltend 30 ng/ml Lipopolysaccharid aus E.coli K532, zu jeder Vertiefung zugegeben. Die Zellen wurden weitere 4 Stunden kultiviert. Die Kulturüberstände wurden anschließend entfernt und das Vorhandensein von TNF in den Überständen wurde unter Verwendung eines ELISA quantitativ bestimmt.
TNF ELISA
Corning High Binding ELISA-Platten mit flachem Boden und 96 Vertiefungen wurden über Nacht (4°C) mit 150 μl/Vertiefung von 3 μg/ml Maus-anti-Mensch TNF-α MAb (R & D Systems #MAB210) beschichtet. Die Vertiefungen wurden dann 1 Stunde bei Raumtemperatur mit 200 μl/Vertiefung von CaCl₂-freiem ELISA-Puffer blockiert, der so ergänzt war, dass er 20 mg/ml BSA enthielt (Standard-ELISA-Puffer: 20 mM, 150 mM NaCl, 2 mM CaCl₂, 0,15 mM Thimerosal, pH 7,4). Die Platten wurden gewaschen und mit 100 μl Testüberständen (1:3 verdünnt) oder Standardlösungen aufgefüllt. Die Standardlösungen bestanden aus elf 1,5-fachen Reihenverdünnungen von einer Stammlösung von 1 ng/ml rekombinantem menschlichem TNF (R & D Systems). Die Platten wurden eine Stunde bei Raumtemperatur an einem Orbitalschüttler (300 U/min) inkubiert, gewaschen und mit 100 μl/Veriefung von 0,5 μg/ml Ziege-anti-Mensch TNF-μ (R & D Systems #AB-210-NA), der in einem 4:1-Verhältnis biotinyliert war, aufgefüllt. Die Platten wurden 40 min inkubiert, gewaschen und mit 100 μl/Vertiefung von mit alkalischer Phosphatase konjugiertem Streptavidin (Jackson ImmunoResearch #016-050-084) in einer Konzentration von 0,02 μg/ml aufgefüllt. Die Platten wurden 30 min inkubiert, gewaschen und mit 200 μl/Vertiefung von 1 mg/ml p-Nitrophenylphosphat aufgefüllt. Nach 30 min wurden die Platten bei 405 nm an einem V_max-Plattenlesegerät abgelesen.
Datenanalyse
Standardkurvendaten wurden an ein Polynom zweiter Ordnung angepasst und unbekannte TNF-α-Konzentrationen aus ihrer OD durch Lösen dieser Gleichung bezüglich der Konzentration bestimmt. TNF-Konzentrationen wurden dann gegen die Konzentration der Testverbindung aufgetragen, wobei ein Polynom zweiter Ordnung verwendet wurde. Diese Gleichung wurde dann verwendet, um die Konzentration der Testverbindungen zu berechnen, die eine 50%ige Verringerung der TNF-Produktion bewirkt.
Es kann auch gezeigt werden, dass Verbindungen der Erfindung die LPS-induzierte Freisetzung von IL-1β, IL-6 und/oder IL-8 aus Monozyten hemmen, indem die Konzentrationen von IL-1β, IL-6 und/oder IL-8 durch Verfahren gemessen werden, die dem Fachmann wohlbekannt sind. Auf ähnliche Weise wie in dem vorstehend beschriebenen Test unter Einbeziehung der LPS-induzierten Freisetzung von TNF-α aus Monozyten, kann auch gezeigt werden, dass Verbindungen dieser Erfindung die LPS-induzierte Freisetzung von IL-1β, IL-6 und/oder IL-8 aus Monozyten hemmen, indem Konzentrationen von IL-1β, IL-6 und/oder IL-8 durch Verfahren gemessen werden, die dem Fachmann wohlbekannt sind. Somit können die Verbindungen der Erfindung erhöhte Spiegel von TNF-α, IL-1, IL-6 und IL-8-Spiegel senken. Das Verringern von erhöhten Spiegeln dieser inflammatorischen Cytokine auf Basisspiegel oder darunter begünstigt die Kontrolle, die Verlangsamung des Verlaufs und die Linderung vieler Krankheitszustände. Alle Verbindungen sind brauchbar in den Verfahren zum Behandeln von Krankheitszuständen, bei denen TNF-α, IL-1β, IL-6 und IL-8 eine Rolle im vollem Umfang der Definition von durch TNF-α vermittelten Krankheiten spielen, die in dieser Anmeldung beschrieben sind.
Test der TNF-Produktion in Lipopolysaccharid-aktivierten THP1-Zellen
THP1-Zellen werden in frischem THP1-Medium (RPMI 1640, 10% hitzeinaktiviertes FBS, 1XPGS, 1XNEAA, plus 30 μM βME) in einer Konzentration von 1E6/ml resuspen diert. 100 μl Zellen pro Vertiefung werden in einer Gewebekultur mit 96 Vertiefungen aus Polystyrol ausplattiert. 1 μg pro ml von bakteriellem LPS wird in THP1-Medium hergestellt und in die Vertiefungen überführt. Testverbindungen werden in 100% DMSO gelöst und in einer Mikrotiterplatte aus Polypropylen mit 96 Vertiefungen (Arzneimittelplatte) 3-fach reihenverdünnt. HI-Kontroll- und LO-Kontrollvertiefungen enthalten nur DMSO. 1 μl Testverbindung von der Arzneimittelplatte, gefolgt von 10 μl LPS, werden auf die Zellplatte überführt. Die behandelten Zellen werden veranlasst (induziert), TNF-α bei 37°C 3 h zu synthetisieren und zu sezernieren. 40 μl konditioniertes Medium werden in eine Polypropylenplatte mit 96 Vertiefungen überführt, die 110 μl ECL-Puffer (50 mM Tris-HCl pH 8,0, 100 mM NaCl, 0,05% Tween 20, 0,05% NaN₃ und 1 % FBS), ergänzt mit 0,44 nM MAB610 monoklonalem Ab (R & D Systems), 0,34 nM ruthenyliertem AF210NA, polyklonalem Ab (R & D Systems) und 44 μg/ml Schaf-anti-Maus M280 Dynabeads (Dynal), enthält. Nach einer 2h-Inkubation bei Raumtemperatur mit Schütteln wird die Reaktion an dem ECL M8-Instrument (IGEN Inc.) abgelesen. Es wird eine niedrige Spannung an die ruthenylierten TNF-α-Immunkomplexe angelegt, was in Gegenwart von TPA (der aktiven Komponente in Origlo) zu einer cyclischen Redoxreaktion führt, die Licht bei 620 nM erzeugt. Die Menge an sezerniertem TNF-α in Gegenwart der Verbindung, verglichen mit derjenigen in Gegenwart von DMSO-Vehikel allein (HI-Kontrolle) wird unter Verwendung der folgenden Formel berechnet: %-Kontrolle (POC) = (cpd – Mittelwert LO)/(Mittelwert HI – Mittelwert LO)·100. Die Daten (bestehend aus POC und Inhibitorkonzentration in μM) werden an eine 4-Parameter-Gleichung angepasst (y = A + ((B – A)/(1 + ((x/C)^D))), wobei A der minimale y (POC)-Wert ist, B das maximale y (POC) ist, C das x (cpd-Konzentration) am Wendepunkt ist, und D der Steigungsfaktor ist), wobei ein nichtlinearer Regressionsalgorithmus nach Levenberg-Marquardt verwendet wird.
Die folgenden Verbindungen weisen Aktivitäten in dem THP1-Zelltest (LPS-induzierte TNF-Freisetzung) mit IC₅₀-Werten von 20 μM oder weniger auf:
4-(4-Chlor-phenyl)-1-piperidin-4-yl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on;
4-(4-Chlor-phenyl)-1-piperidin-3-yl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on;
4-(4-Chlorphenyl)-1-(1-methyl-piperidin-4-yl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on;
4-(4-Chlorphenyl)-1-(1-methyl-piperidin-3-yl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on;
4-(4-Chlorphenyl)-1-(1-isopropyl-piperidin-4-yl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on;
4-(3,4-Dichlor-phenyl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on;
4-(3,4-Dichlor-phenyl)-1-isopropyl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on;
1-(4-Aminocyclohexyl)-4-(4-chlorphenyl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydropyrazol-3-on.
Hemmung der LPS-induzierten TNF-α-Produktion in Mäusen
Männlichen DBA/1LACJ-Mäusen wird Vehikel oder Testverbindungen in einem Vehikel (wobei das Vehikel aus 0,5% Tragant in 0,03 N HCl besteht) 30 Minuten vor einer Lipopolysaccharidinjektion (2 mg/Kg, i.v.) verabreicht. 90 Minuten nach der LPS-Injektion wird Blut entnommen und das Serum wird durch ELISA auf TNF-α-Spiegel analysiert.
Es kann gezeigt werden, dass Verbindungen der Erfindung entzündungshemmende Eigenschaften in Tiermodellen einer Entzündung, einschließlich des Carrageenan-Pfotenödems, kollagen-induzierter Arthritis und Adjuvanzarthritis, wie etwa dem Carrageenan-Pfotenödem-Modell (C.A. Winter et al Proc. Soc. Exp. Biol. Med. (1962) Band 111, Seite 544; K.F. Swingle, in R.A. Scherrer und M.W. Whitehouse, Hrsg. Anti-inflammatory Agents, Chemistry and Pharmacology, Band 13-II, Academic, New York, 1974, Seite 33) und kollagen-induzierter Arthritis (D.E. Trentham et al J. Exp. Med. (1977) Band 146, Seite 857; J.S. Courtenay, Nature (New Biol.) (1980), Band 283, Seite 666) haben.
¹²⁵I-Glucagon-Bindungs-Screen mit CHO/hGLUR-Zellen
Der Test ist in WO 97/16442 beschrieben, welches in Gänze durch Bezugnahme in diese Anmeldung aufgenommen ist.
Reagenzien
Die Reagenzien können wie folgt hergestellt werden:

(a) man stellt frisches 1 M o-Phenanthrolin (Aldrich) (198,2 mg/ml Ethanol) her; (b) man stellt frisches 0,5 M DTT (Sigma) her; (c) Protease-Inhibitor-Mischung (1000X): 5 mg Leupeptin, 10 mg Benzamidin, 40 mg Bacitracin und 5 mg Sojabohnen-Trypsin-Inhibitor pro ml DMSO. Man lagert Aliquots bei –20°C; (d) 250 μM menschliches Glucagon (Peninsula): man solubilisiert 0,5 mg Phiole in 575 μl 0,1 N Essigsäure (1 μl ergibt eine Endkonzentration von 1 μM in dem Test der nichtspezifischen Bindung) und lagert in Aliquots bei –20°C; (e) Testpuffer: 20 mM Tris (pH 7,8), 1 mM DTT und 3 mM o-Phenanthrolin; (f) Testpuffer mit 0,1% BSA (nur zur Verdünnung der Markierung; 0,01 Endkonzentration im Test): 10 μl 10% BSA (hitzeinaktiviert) und 990 μl Testpuffer; (g) ¹²⁵1-Glucagon (NEN, Rezeptorqualität, 2200 Ci/mmol): man verdünnt auf 50000 cpm/25 μl in Testpuffer mit BSA (ungefähr 50 pM Endkonzentration im Test).

Ernten von CHO/hGLUR-Zellen für den Test

1. Man entfernt das Medium von einem konfluenten Kolben und spült anschließend jeweils einmal mit PBS (Ca, Mg-frei) und enzymfreiem Dissoziationsfluid (Specialty Media Inc.).
2. Man gibt 10 ml enzymfreies Dissoziationsfluid zu und hält ungefähr 4 min bei 37°C.
3. Man klopft vorsichtig Zellen frei, verreibt, nimmt ein Aliquot zum Zählen und zentrifugiert den Rest 5 min bei 1000 U/min.
4. Man resuspendiert das Pellet in Testpuffer in einer Konzentration von 75000 Zellen pro 100 μl.

Membranpräparationen von CHO/hGLUR-Zellen können anstelle von ganzen Zellen in dem gleichen Testvolumen verwendet werden. Die Endproteinkonzentration einer Membranpräparation wird auf einer chargenbezogenen Basis bestimmt.
Test
Die Bestimmung der Hemmung der Glucagonbindung kann durch Messen der Verringerung der I¹²⁵-Glucagonbindung in Gegenwart von Verbindungen der Formel I durchgeführt werden. Die Reagenzien werden wie folgt zusammengegeben:
Das Gemisch wird 60 min bei 22°C an einem Schüttler mit 275 U/min inkubiert. Das Gemisch wird über voreingeweichte (0,5% Polyethylimin (PEI)) GF/C-Filter filtriert, wobei ein Innotech Harvester oder Tomtec Harvester verwendet wird, mit vier Waschungen mit eiskaltem 20 mM Tris-Puffer (pH 7,8). Die Radioaktivität in den Filtern wird durch einen Gamma-Szintillationszähler bestimmt.
Somit kann auch gezeigt werden, dass Verbindungen der Erfindung die Bindung von Glucagon an Glucagonrezeptoren hemmen.
Cyclooxygenase-Enzymaktivitätstest
Die menschliche monozytische Leukämiezelllinie THP-1, die durch Einwirken von Phorbolestern differenziert ist, exprimiert nur COX-1; die menschliche Osteosarkomzelllinie 143B exprimiert überwiegend COX-2. THP-1-Zellen werden routinemäßig in vollständigem RPMI-Medium, das mit 10% FBS ergänzt ist, kultiviert und menschliche Osteosarkomzellen (HOSC) werden in minimal-essentiellem Medium, das mit 10% fötalem Rinderserum ergänzt ist, (MEM-10%FBS) kultiviert; alle Zellinkubationen erfolgen bei 37°C in einer angefeuchteten Umgebung, die 5% CO₂ enthält.
COX-1-Test
Bei der Vorbereitung für den COX-1-Test werden THP-1-Zellen bis zur Konfluenz wachsen gelassen, 1:3 in RPMI, enthaltend 2% FBS und 10 mM Phorbol-12-myristat-13-acetat (TPA) aufgespalten und 48 h an einem Schüttler inkubiert, um eine Anhaftung zu verhindern. Die Zellen werden pelletiert und in Hank's gepufferter Salzlösung (HBS) zu einer Konzentration von 2,5 × 10⁶ Zellen/ml resuspendiert und in Kulturplatten mit 96 Vertiefungen zu einer Dichte von 5 × 10⁵ Zellen/ml ausplattiert. Testverbindungen werden in HBS verdünnt und zu der gewünschten Endkonzentration zugegeben und die Zellen werden weitere 4 Stunden inkubiert. Arachidonsäure wird zu einer Endkonzentration von 30 mM zugegeben, die Zellen 20 Minuten bei 37°C inkubiert und die Enzymaktivität wie nachstehend beschrieben bestimmt.
COX-2-Test
Für den COX-2-Test werden subkonfluente HOSC trypsinisiert und zu 3 × 10⁶ Zellen/ml in MEM-FBS, enthaltend 1 ng menschliches IL-1b/ml, resuspendiert, in Gewebekulturplatten mit 96 Vertiefungen zu einer Dichte von 3 × 10⁴ Zellen pro Vertiefung ausplattiert, 1 Stunde an einem Schüttler inkubiert, um die Zellen gleichmäßig zu verteilen, gefolgt von einer weiteren zweistündigen statischen Inkubation, um ein Anhaften zu gestatten. Das Medium wird dann durch MEM, enthaltend 2% FBS (MEM-2%FBS) und 1 ng menschliches IL-1b/ml, ersetzt und die Zellen werden 18-22 Stunden inkubiert. Nach dem Ersetzen des Mediums durch 190 ml MEM werden 10 ml Testverbindung, verdünnt in NBS, zugegeben, um die gewünschte Konzentration zu erzielen, und die Zellen werden 4 Stunden inkubiert. Die Überstände werden entfernt und durch MEM, enthaltend 30 mM Arachidonsäure, ersetzt, die Zellen werden 20 Minuten bei 37°C inkubiert und die Enzymaktivität wird wie nachstehend beschrieben bestimmt.
Bestimmung der COX-Aktivität
Nach der Inkubation mit Arachidonsäure werden die Reaktionen durch die Zugabe von 1 N HCl gestoppt, gefolgt von einer Neutralisierung mit 1 N NaOH und einer Zentrifugation, um Zelldebris zu pelletieren. Die Cyclooxygenase-Enzymaktivität sowohl in den HOSC- als auch in den THP-1-Zellüberständen wird durch Messen der Konzentration von PGE₂ unter Verwendung eines im Handel erhältlichen ELISA (Neogen #404110) bestimmt. Eine Standardkurve (Eichkurve) von PGE₂ wird zum Eichen verwendet und im Handel erhältliche COX-1- und COX-2-Inhibitoren werden als Standardkontrollen eingeschlossen.
Raf-Kinase-Test
Die in vitro-Raf-Kinase-Aktivität wird durch das Ausmaß der Phosphorylierung des Substrats MEK (Map-Kinase/ERK-Kinase) durch aktivierte Raf-Kinase gemessen, wie es in GB 1,238,959 (in Gänze durch Bezugnahme in diese Anmeldung aufgenommen) beschrieben ist. Phosphoryliertes MEK wird auf einem Filter abgefangen und der Einbau von radioaktiv markiertem Phosphat wird durch Szintillationszählung quantitativ bestimmt.
MATERIALIEN:

Aktiviertes Raf wird durch Dreifachtransfektion von Sf9-Zellen mit Baculoviren erzeugt, die mit einem "Glu-Glu"-Epitop-Tag versehenes Raf, val¹²-H-Ras und Lck exprimieren. Das "Glu-Glu"-Epitop, Glu-Tn-Met-Pro-Glu wurde an den Carboxyterminus von Volllängen-c-Raf fusioniert.
Katalytisch inaktives MEK (K97A-Mutation) wird in Sf9-Zellen erzeugt, die mit einem Baculovirus transfiziert sind, das mit einem C-Terminus-"Glu-Glu"-Epitop-Tag versehenes K97A MEK1 exprimiert.
Anti-"Glu-Glu"-Antikörper wurde aus Zellen aufgereinigt, die wie in Grussenmeyer et al., Proceedings of the National Academy of Science, USA, Seiten 7952-7954, 1985 beschrieben kultiviert wurden.
Säulenpuffer: 20 mM Tris pH 8, 100 mM NaCl, 1 mM EDTA, 2,5 mM EGTA, 10 mM MgCl₂, 2 mM DTT, 0,4 mM AEBSF, 0,1% n-Octylglucopyranosid, 1 nM Okadasäure und jeweils 10 μg/ml Benzamidin, Leupeptin, Pepstatin und Aprotinin.
5x-Reaktionspuffer: 125 mM HEPES pH=8, 25 mM MgCl₂, 5 mM EDTA, 5 mM Na₃VO₄, 100 μg/ml BSA.
Enzymverdünnungspuffer: 25 mM HEPES pH 8, 1 mM EDTA, 1 mM Na₃VO₄, 400 μg/ml BSA.
Stopplösung: 100 mM EDTA, 80 mM Natriumpyrophosphat.
Filterplatten: Millipore multiscreen # SE3MO78E3, Immobilon-P (PVDF).

VERFAHREN:
Proteinaufreinigung: Sf9-Zellen wurden mit Baculovirus infiziert und wie in Williams, et al., Proceedings of the National Academy of Science, USA Seiten 2922-2926, 1992 beschrieben infiziert. Alle nachfolgenden Schritte wurden auf Eis oder bei 4°C durchgeführt. Zellen wurden pelletiert und durch Beschallung in Säulenpuffer lysiert. Lysate wurden 20 Minuten bei 17000xg zentrifugiert, gefolgt von einer 0,22 μm Filtration. Mit einem Epitop-Tag versehene Proteine wurden durch Chromatografie über eine GammaBind Plus-Affinitätssäulen gereinigt, an welche der "Glu-Glu"-Antikörper gekoppelt war. Proteine wurden auf die Säule aufgegeben, gefolgt von aufeinander folgenden Waschungen mit zwei Säulenvolumina Säulenpuffer, und mit 50 μg/ml Glu-Tyr-Met-Pro-Met-Glu in Säulenpuffer eluiert.
Raf-Kinase-Test: Testverbindungen wurden unter Verwendung von zehn 3-fach-Reihenverdünnungen beginnend mit 10-100 μM bewertet. 10 μl des Testinhibitors oder der Kontrolle, gelöst in 10% DMSO, wurde zu der Testplatte zugegeben, gefolgt von der Zugabe von 30 μl eines Gemisches, das 10 μl 5x-Reaktionspuffer, 1 mM ³³P-γ-ATP (20 μCi/ml), 0,5 μl MEK (2,5 mg/ml) und 1 μl 50 mM β-Mercaptoethanol enthielt. Die Reaktion wurde durch die Zugabe von 10 μl Enzymverdünnungspuffer, enthaltend 1 mM DTT und eine Menge an aktivierter Raf, welche über den zeitlichen Verlauf der Reaktion eine lineare Kinetik erzeugt, gestartet. Das Reaktionsgemisch wurde vermischt und 90 min bei Raumtemperatur inkubiert und durch die Zugabe von 50 μl Stopplösung gestoppt. 90 μl-Aliquots dieser gestoppten Lösung wurden auf GFP-30-Cellulose-Mikrotiter-Filterplatten (Polyfiltronics) überführt, die Filterplatten in vier Vertiefungsvolumina von 5%iger Phosphorsäure gewaschen, trocknen gelassen und dann mit 25 μl Szintillationscocktail aufgefüllt. Die ³³P-Gamma-Emission der Platten wurde unter Verwendung eines TopCount Scintillation Reader gezählt.
Wenngleich die Verbindungen der Erfindung als das einzige aktive pharmazeutische Mittel verabreicht werden können, können sie auch in Kombination mit einer oder mehreren Verbindungen der Erfindung oder anderen Mitteln verwendet werden. Wenn sie als eine Kombination verabreicht werden, können die therapeutischen Mittel als getrennte Zusammensetzungen formuliert werden, welche gleichzeitig oder zu verschiedenen Zeiten gegeben werden, oder die therapeutischen Mittel können als eine einzige Zusammensetzung gegeben werden.
Das Vorstehende erläutert lediglich die Erfindung und soll nicht die Erfindung auf die offenbarten Verbindungen beschränken. Abwandlungen und Änderungen, welche für den Fachmann offensichtlich sind, sollen innerhalb des Umfangs und der Natur der Erfindung liegen, welche in den beigefügten Ansprüchen definiert sind.
Aus der vorstehenden Beschreibung kann der Fachmann leicht die wesentlichen Merkmale dieser Erfindung feststellen und kann, ohne von ihrem Geist und Umfang abzuweichen, verschiedene Änderungen und Modifizierungen der Erfindung vornehmen, um sie an verschiedene Verwendungen und Bedingungen anzupassen.
Für die Behandlung von durch TNF-α, IL-1β, IL-6 und IL-8 vermittelten Krankheiten, Krebs und/oder Hyperglykämie können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung oral, parenteral, durch Inhalationsspray, rektal oder topisch in Dosierungseinheitsformulierungen verabreicht werden, die herkömmliche pharmazeutisch annehmbare Träger, Adjuvantien und Vehikel enthalten. Der Begriff parenteral, so wie er in dieser Anmeldung verwendet wird, schließt subkutan, intravenös, intramuskulär, intrasternal, Infusionsmethoden oder intraperitoneal ein.
Die Behandlung von Krankheiten und Störungen soll in dieser Anmeldung auch die prophylaktische Verabreichung einer Verbindung der Erfindung, eines pharmazeutischen Salzes davon oder einer pharmazeutischen Zusammensetzung von diesen an ein Sub jekt (d. h. ein Tier, vorzugsweise einen Säuger, am meisten bevorzugt einen Menschen) einschließen, von dem angenommen wird, dass es eine vorbeugende Behandlung wie beispielsweise von Schmerzen, einer Entzündung und dergleichen benötigt.
Die Dosierungsvorschrift zum Behandeln von durch TNF-α, IL-1, IL-6 und IL-8 vermittelten Krankheiten, Krebs und/oder Hyperglykämie mit den Verbindungen dieser Erfindung und/oder Zusammensetzungen dieser Erfindung beruht auf einer Vielzahl von Faktoren, zu denen die Art der Krankheit, das Alter, das Gewicht, das Geschlecht und der medizinische Zustand des Patienten, die Schwere des Zustands, der Verabreichungsweg und die spezielle Verbindung, die eingesetzt wird, gehören. Somit kann die Dosierungsvorschrift stark variieren, kann aber routinemäßig unter Verwendung von Standardverfahren bestimmt werden. Dosierungswerte in der Größenordnung von ungefähr 0,01 mg bis 30 mg pro Kilogramm Körpergewicht, vorzugsweise von ungefähr 0,1 mg bis 10 mg/kg, mehr bevorzugt von ungefähr 0,25 mg bis 1 mg/kg sind für alle Verwendungsverfahren brauchbar, die in dieser Anmeldung offenbart sind.
Die pharmazeutisch aktiven Verbindungen dieser Erfindung können in Übereinstimmung mit herkömmlichen Verfahren der Pharmazie verarbeitet werden, um medizinische Mittel zur Verabreichung an Patienten, einschließlich Menschen und anderer Säuger, herzustellen.
Für eine orale Verabreichung kann die pharmazeutische Zusammensetzung beispielsweise in Form einer Kapsel, einer Tablette, einer Suspension oder einer Flüssigkeit vorliegen. Die pharmazeutische Zusammensetzung wird vorzugsweise in Form einer Dosierungseinheit gebracht, die eine bestimmte Menge des Wirkstoffs enthält. Zum Beispiel kann diese eine Menge des Wirkstoffs von ungefähr 1 bis 2000 mg, vorzugsweise von ungefähr 1 bis 500 mg, mehr bevorzugt von ungefähr 5 bis 150 mg enthalten. Eine geeignete Tagesdosis für einen Menschen oder anderen Säuger kann in Abhängigkeit von dem Zustand des Patienten und anderen Faktoren stark variieren, aber wiederum unter Verwendung von Routineverfahren bestimmt werden.
Der Wirkstoff kann auch durch Injektion als eine Zusammensetzung mit geeigneten Trägern verabreicht werden, zu denen Kochsalzlösung, Dextrose oder Wasser gehören. Die tägliche parenterale Dosierungsvorschrift beträgt ungefähr 0,1 bis ungefähr 30 mg/kg Gesamtkörpergewicht, vorzugsweise ungefähr 0,1 bis ungefähr 10 mg/kg und mehr bevorzugt ungefähr 0,25 mg bis 1 mg/kg.
Injizierbare Zubereitungen, wie etwa sterile injizierbare wässrige oder ölige Suspensionen, können gemäß bekannten Methoden unter Verwendung von geeigneten Dispergier- oder Netzmitteln und Suspendiermitteln formuliert werden. Die sterile injizierbare Zubereitung kann auch eine sterile injizierbare Lösung oder Suspension in einem nichttoxischen parenteral annehmbaren Verdünnungsmittel oder Lösungsmittel sein, z.B. als eine Lösung in 1,3-Butandiol vorliegen. Zu den annehmbaren Vehikeln und Lösungsmitteln, welche eingesetzt werden können, zählen Wasser, Ringer-Lösung und isotonische Natriumchloridlösung. Außerdem werden sterile fette Öle herkömmlicherweise als Lösungsmittel oder suspendierendes Medium eingesetzt. Zu diesem Zweck kann jedes milde fette Öl eingesetzt werden, einschließlich synthetischer Mono- oder Diglyceride. Außerdem finden Fettsäuren wie Ölsäure Verwendung bei der Herstellung von injizierbaren Zubereitungen.
Suppositorien für eine rektale Verabreichung des Arzneimittels können durch Vermischen des Arzneimittels mit einem geeigneten nichtreizenden Exzipiens wie Kakaobutter und Polyethylenglycolen hergestellt werden, welche bei gewöhnlichen Temperaturen fest sind, aber bei der rektalen Temperatur flüssig sind und deshalb im Rektum schmelzen und das Arzneimittel freisetzen.
Eine geeignete topische Dosis des Wirkstoffs aus einer Verbindung der Erfindung ist 0,1 mg bis 150 mg, die ein- bis viermal, vorzugsweise ein- oder zweimal täglich verabreicht werden. Für eine topische Verabreichung kann der Wirkstoff 0,001 % bis 10% Gew./Gew., z.B. 1 bis 2 Gew.-% der Formulierung umfassen, wenngleich er auch 10% Gew./Gew., aber vorzugsweise nicht mehr als 5% Gew./Gew. und mehr bevorzugt 0,1% bis 1 % der Formulierung umfassen kann.
Zu Formulierungen, die sich für eine topische Verabreichung eignen, gehören flüssige oder dickflüssige Zubereitungen, die sich für ein Eindringen durch die Haut eignen (z.B. Linimente, Lotionen, Salben, Cremes oder Pasten) und Tropfen, die sich für die Verabreichung am Auge, Ohr oder in der Nase eignen.
Zur Verabreichung werden die Verbindungen dieser Erfindung gewöhnlich mit einem oder mehreren Adjuvantien kombiniert, die für den angegebenen Verabreichungsweg geeignet sind. Die Verbindungen können mit Lactose, Sucrose, Stärkepulver, Celluloseestern von Alkansäuren, Stearinsäure, Talk, Magnesiumstearat, Magnesiumoxid, Natrium- und Calciumsalzen von Phosphor- und Schwefelsäure, Akaziengummi, Gelatine, Natriumalginat, Polyvinyl-pyrrolidin und/oder Polyvinylalkohol vermischt und für eine her kömmliche Verabreichung tablettiert oder eingekapselt werden. Alternativ können die Verbindungen dieser Erfindung in Kochsalzlösung, Wasser, Polyethylenglycol, Propylenglycol, Ethanol, Maisöl, Erdnussöl, Baumwollsamenöl, Sesamöl, Tragantgummi und/oder verschiedenen Puffern gelöst werden. Andere Adjuvantien und Verabreichungsarten sind im pharmazeutischen Fachgebiet wohlbekannt. Der Träger oder das Verdünnungsmittel kann Zeitverzögerungsmaterial enthalten, wie etwa Glycerylmonostearat oder Glyceryldistearat allein oder mit einem Wachs, oder andere Materialien, die im Fachgebiet wohlbekannt sind.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können in einer festen Form (einschließlich Körnchen, Pulver oder Suppositorien) oder in einer flüssigen Form (z.B. Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen) hergestellt werden. Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können herkömmlichen pharmazeutischen Arbeitsgängen wie einer Sterilisierung unterworfen werden und/oder können herkömmliche Adjuvantien wie Konservierungsmittel, Stabilisatoren, Netzmittel, Emulgatoren, Puffer usw. enthalten.
Zu festen Dosierungsformen für eine orale Verabreichung können Kapseln, Tabletten, Pillen, Pulver und Körnchen gehören. In solchen festen Dosierungsformen kann die aktive Verbindung mit wenigstens einem inerten Verdünnungsmittel wie Sucrose, Lactose oder Stärke vermischt sein. Solche Dosierungsformen können auch, wie es die normale Praxis ist, außer inerten Verdünnungsmitteln zusätzliche Substanzen, z.B. Schmiermittel wie Magnesiumstearat umfassen. Im Fall von Kapseln, Tabletten und Pillen können die Dosierungsformen auch Puffersubstanzen umfassen. Tabletten und Pillen können zusätzlich mit magensaftresistenten Überzügen hergestellt werden.
Zu flüssigen Dosierungsformen für eine orale Verabreichung können pharmazeutisch annehmbare Emulsionen, Lösungen, Suspensionen, Sirupe und Elixiere gehören, die inerte Verdünnungsmittel enthalten, die üblicherweise im Fachgebiet verwendet werden, wie etwa Wasser. Solche Zusammensetzungen können auch Adjuvantien wie Netzmittel, Süßungsmittel, Aromastoffe und Duftstoffe umfassen.

Claims

Verbindung der Formel
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, wobei R² C_1-8-Alkyl, Phenyl, Benzyl, R^c, R^f, C_1-4-AlkylR^c, C_1-4-AlkylR^f oder R^g ist; R³ Phenyl, Naphthyl oder ein gesättigter oder ungesättigter 5- oder 6-gliedriger Ringheterocyclus ist, der 1-4 Heteroatome, ausgewählt aus N, O und S, enthält, wobei nicht mehr als zwei der Heteroatome O oder S sind, und der Heterocyclus substituiert ist durch 0, 1 oder 2 Oxogruppen und gegebenenfalls mit einer Benzogruppe kondensiert ist, von denen beliebige durch O, 1, 2 oder 3 Substituenten, ausgewählt aus C_1-8-Alkyl, C_1-4-Halogenalkyl, Halogen, Cyano, Nitro, -C(=O)R^b, -C(=O)OR^b, -C(=O)NR^aR^a, -C(=NR^a)NR^aR^a, -OR^a, -OC(=O)R^b, -OC(=O)NR^aR^a, -OC(=O)N(R^a)S(=O)₂R^b, -OC_2-6-AlkylNR^aR^a, -OC_2-6-AlkylOR^a, -SR^a, -S(=O)R^b, -S(=O)₂R^b, -S(=O)₂NR^aR^a, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)R^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)OR^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -NR^aR^a, -N(R^a)C(=O)R^b, -N(R^a)C(=O)OR^b, -N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -N(R^a)C(=NR^a)NR^aR^a, -N(R^a)S(=O)₂R^b, -N(R^a)S(=O)₂NR^aR^a, -NR^aC_2-6-AlkylNR^aR^a und -NR^aC_2-6-AlkylOR^a, substituiert sind; R⁴ 4-Pyridinyl, substituiert durch 0, 1, 2 oder 3 Substituenten, ausgewählt aus C_1-8-Alkyl, C_1-4-Halogenalkyl, Halogen, Cyano, Nitro, -C(=O)R_b, -C(=O)OR^b, -C(=O)NR^aR^a, -C(=NR^a)NR^aR^a, -OR^a, -OC(=O)R^b, -OC(=O)NR^aR^a, -OC(=O)N(R^a)S(=O)₂R^b, -OC_2-6-AlkylNR^aR^a, -OC_2-6-AlkylOR^a, -SR^a, -S(=O)R^b, -S(=O)₂R^b, -S(=O)₂NR^aR^a, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)R^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)OR^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -NR^aR^a, -N(R^a)C(=O)R^b, -N(R^a)C(=O)OR^b, -N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -N(R^a)C(=NR^a)NR^aR^a, -N(R^a)S(=O)₂R^b, -N(R^a)S(=O)₂NR^aR^a, -NR^aC_2-6-AlkylNR^aR^a und -NR^aC_2-6-AlkylOR^a, ist; R^a unabhängig in jedem Fall H oder R^b ist; R^b unabhängig in jedem Fall C_1-8-Alkyl, Phenyl oder Benzyl ist; R^c unabhängig in jedem Fall ein gesättigter oder ungesättigter 5-, 6- oder 7-gliedriger monocyclischer oder 6-, 7-, 8-, 9-, 10- oder 11-gliedriger bicyclischer Ring ist, der 1, 2 oder 3 Atome, ausgewählt aus N, O und S, enthält, wobei der Ring kondensiert ist mit 0 oder 1 Benzogruppen und 0 oder 1 gesättigtem oder ungesättigtem 5-, 6- oder 7-gliedrigem heterocyclischem Ring, der 1, 2 oder 3 Atome, ausgewählt aus N, O und S, enthält; wobei die Kohlenstoffatome des Rings durch 0, 1 oder 2 Oxogruppen substituiert sind; R^d unabhängig in jedem Fall C_1-8-Alkyl, C_1-4-Halogenalkyl, Halogen, Cyano, Nitro, -C(=O)R^b, -C(=O)OR^b, -C(=O)NR^aR^a, -C(=NR^a)NR^aR^a, -OR^a, -OC(=O)R^b, -OC(=O)NR^aR^a, -OC(=O)N(R^a)S(=O)₂R^b, -OC_2-8-AlkylNR^aR^a, -OC_2-6-AlkylOR^a, -SR^a, -S(=O)R^b, -S(=O)₂R^b, -S(=O)₂NR^aR^a, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)R^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)OR^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -NR^aR^a, -N(R^a)C(=O)R^b, -N(R^a)C(=O)OR^b, -N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -N(R^a)C(=NR^a)NR^aR^a, -N(R^a)S(=O)₂R^b, -N(R^a)S(=O)₂NR^aR^a, -NR^aC_2-6-AlkylNR^aR^a oder -NR^aC_2-6-AlkylOR^a, ist; R^e unabhängig in jedem Fall C_1-6-Alkyl, substituiert durch 1, 2 oder 3 Substituenten, die unabhängig ausgewählt sind aus R^d, ist; R^f unabhängig in jedem Fall R^c, substituiert durch 1, 2 oder 3 Substituenten, die unabhängig ausgewählt sind aus R^d, ist; und R^g unabhängig in jedem Fall R^b, substituiert durch 1, 2 oder 3 Substituenten, die unabhängig ausgewählt sind aus R^c, R^f und R^d, ist.
Verbindung nach Anspruch 1 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, wobei R² R^c, R^f, C_1-4-AlkylR^c, C_1-4-AlkylR^f oder R^g ist.
Verbindung nach Anspruch 1 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, wobei R² C_1-8-Alkyl, Phenyl oder Benzyl ist.
Verbindung nach Anspruch 1 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, wobei R³ Phenyl oder Naphthyl ist, die beide durch 0, 1, 2 oder 3 Substituenten, ausgewählt aus C_1-8-Alkyl, C_1-4-Halogenalkyl, Halogen, Cyano, Nitro, -C(=O)R^b, -C(=O)OR^b, -C(=O)NR^aR^a, -C(=NR^a)NR^aR^a, -OR^a, -OC(=O)R^b, -OC(=O)NR^aR^a, -OC(=O)N(R^a)S(=O)₂R^b, -OC_2-6-AlkylNR^aR^a, -OC_2-6-AlkylOR^a, -SR^a, -S(=O)R^b, -S(=O)₂R^b, -S(=O)₂NR^aR^a, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)R^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)OR^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -NR^aR^a, -N(R^a)C(=O)R^b, -N(R^a)C(=O)OR^b, -N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -N(R^a)C(=NR^a)NR^aR^a, -N(R^a)S(=O)₂R^b, -N(R^a)S(=O)₂NR^aR^a, -NR^aC_2-8-AlkylNR^aR^a und -NR^aC_2-6-AlkylOR^a, substituiert sind.
Verbindung nach Anspruch 1 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, wobei R³ unsubstituiertes Naphthyl oder Phenyl, substituiert durch 1, 2 oder 3 Substituenten, ausgewählt aus C_1-8-Alkyl, C_1-4-Halogenalkyl, Halogen, Cyano, Nitro, -C(=O)R^b, -C(=O)OR^b, -C(=O)NR^aR^a, -C(=NR^a)NR^aR^a, -OR^a, -OC(=O)R^b, -OC(=O)NR^aR^a, -OC(=O)N(R^a)S(=O)₂R^b, -OC_2-6-AlkylNR^aR^a, -OC_2-8-AlkylOR^a, -SR^a, -S(=O)R^b, -S(=O)₂R^b, -S(=O)₂NR^aR^a, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)R^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)OR^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -NR^aR^a, -N(R^a)C(=O)R^b, -N(R^a)C(=O)OR^b, -N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -N(R^a)C(=NR^a)NR^aR^a, -N(R^a)S(=O)₂R^b, -N(R^a)S(=O)₂NR^aR^a, -NR^aC_2-6-AlkylNR^aR^a und -NR^aC_2-6-AlkylOR^a, ist.
Verbindung nach Anspruch 1 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, wobei R³ ein gesättigter oder ungesättigter 5- oder 6-gliedriger Ringheterocyclus ist, der 1-4 Heteroatome, ausgewählt aus N, O und S, enthält, wobei nicht mehr als 2 der Heteroatome O oder S sind, und der Heterocyclus substituiert ist durch 0, 1 oder 2 Oxogruppen und gegebenenfalls kondensiert ist mit einer Benzogruppe, von denen beliebige durch 0, 1, 2 oder 3 C_1-8-Alkyl, C_1-4-Halogenalkyl, Halogen, Cyano, Nitro, -C(=O)R^b, -C(=O)OR^b, -C(=O)NR^aR^a, -C(=NR^a)NR^aR^a, -OR^a, -OC(=O)R^b, -OC(=O)NR^aR^a, -OC(=O)N(R^a)S(=O)₂R^b, -OC_2-6-AlkylNR^aR^a, -OC_2-6-AlkylOR^a, -SR^a, -S(=O)R^b, -S(=O)₂R^b, -S(=O)₂NR^aR^a, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)R^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)OR^b, -S(=O)₂N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -NR^aR^a, -N(R^a)C(=O)R^b, -N(R^a)C(=O)OR^b, -N(R^a)C(=O)NR^aR^a, -N(R^a)C(=NR^a)NR^aR^a, -N(R^a)S(=O)₂R^b, -N(R^a)S(=O)₂NR^aR^a, -NR^aC_2-6-AlkylNR^aR^a oder -NR^aC_2-6-AlkylOR^a, substituiert sind.
Verbindung nach Anspruch 1 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, wobei R⁴ 4-Pyridinyl ist.
Verbindung nach Anspruch 1 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, wobei die Verbindung 4-(4-Chlor-phenyl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on; 4-(4-Chlor-phenyl)-1-piperidin-4-yl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on; 4-(4-Chlor-phenyl)-1-piperidin-3-yl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on; 4-(4-Chlor-phenyl)-1-piperidin-4-ylmethyl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on; 4-(4-Chlor-phenyl)-1-methyl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on; 4-(3,4-Dichlorphenyl)-1-piperidin-4-yl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on; 4-(4-Chlorphenyl)-1-(1-methyl-piperidin-4-yl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on; 4-(4-Chlorphenyl)-1-(1-methyl-piperidin-3-yl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on; 4-(4-Chlorphenyl)-1-(1-isopropyl-piperidin-4-yl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on; 4-[4-(4-Chlorphenyl)-3-methoxy-5-pyridin-4-yl-pyiazol-1-yl]-piperidin; 4-(3,4-Dichlor-phenyl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on; 4-(3,4-Dichlor-phenyl)-1-isopropyl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydro-pyrazol-3-on; 1-(4-Aminocyclohexyl)-4-(4-chlorphenyl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydropyrazol-3-on; 1-(4-Aminocyclohexyl)-4-naphthalen-2-yl-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydropyrazol-3-on; oder 4-Naphthalen-2-yl-1-(3-phenylpropyl)-5-pyridin-4-yl-1,2-dihydropyrazol-3-on ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung nach Anspruch 1 und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger oder ein pharmazeutisch annehmbares Verdünnungsmittel.
Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 für die Herstellung eines Medikaments für die Behandlung einer Entzündung.
Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 für die Herstellung eines Medikaments für die Behandlung von rheumatoider Arthritis, Morbus Paget, Osteoporose, multiplem Myelom, Uveitis, akuter oder chronischer myeloischer/granulozytärer Leukämie, pankreatischer β-Zellzerstörung, Osteoarthritis, rheumatoider Spondylitis, Gichtarthritis, entzündlicher Darmerkrankung, Schocklunge (ARDS), Psoriasis, Morbus Crohn, allergischer Rhinitis, Colitis ulcerosa/gravis, Anaphylaxie, Kontaktdermatitis, Asthma, Muskeldegeneration, Kachexie, Reiter-Syndrom, Typ-I-Diabetes, Typ-II-Diabetes, Knochenresorptionskrankheiten, Transplantat-Wirt-Reaktion, Alzheimer-Krankheit, Schlaganfall, Myokardinfarkt, Ischämie-Reper fusionsschaden, Atherosklerose, Hirntrauma, multipler Sklerose, zerebraler Malaria, Sepsis, septischem Schock, toxischem Schocksyndrom, Fieber, Myalgien aufgrund von HIV-1, HIV-2, HIV-3, Cytomegalievirus (CMV), Influenza, Adenovirus, den Herpesviren oder Herpes zoster-Infektion in einem Säuger.