DE60200256T3

DE60200256T3 - Basische Proteinfraktion aus Milch als Wirkstoff zur Reduktion von Bluthochd ruck

Info

Publication number: DE60200256T3
Application number: DE60200256T
Authority: DE
Inventors: Toba Yasuhiro; Takada Yukihiro; Morita Yoshikazu; Abe Takumi; Kawakami Hiroshi
Original assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Current assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Priority date: 2001-01-16
Filing date: 2002-01-16
Publication date: 2008-04-03
Anticipated expiration: 2022-01-17
Also published as: EP1228708A2; US20030040475A1; ES2215940T5; PT1228708E; DK1228708T3; DE60200256D1; US6929806B2; EP1228708B1; ATE261669T1; EP1228708A3; ES2215940T3; US20040167078A1; DK1228708T4; DE60200256T2; EP1228708B2

Description

Hintergrund der Erfindung
Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft Wirkstoffe, Getränke und Nahrungsmittel zur Verbesserung des Fettstoffwechsels und der Reduktion von Bluthochdruck und ihrer Kombination, die bei Behandlung und Vorbeugung bei Krankheiten wie etwa Fettleber, Hyperlipidämie, Arteriosklerose, Fettleibigkeit und Bluthochdruck wirksam sind.
Beschreibung des Fachgebiets
Fettstoffwechsel betrifft katabolische (abbauende) und anabolische (aufbauende) in vivo-Prozesse von Lipiden, die im wesentlichen Triglyceride, die aus der Nahrung stammen, umfassen. Der Fettstoffwechsel umschließt allgemein Energie freisetzende Reaktion von Lipiden, Biosynthese von Fettsäuren, Biosynthese von Acylglyceriden, Phospholipdstoffwechsel, Cholesterinstoffwechsel und dergleichen ("Biochemistry for Nutrition" von Akira Misski, Asakura Shoten, 1993, S. 123–134).
In den vergangenen Jahren ist die Sterblichkeitsrate durch Herz-Kreislauf-Erkrankungen rapide gestiegen, und es wurde der Zusammenhang zwischen dem Risiko, an einer Herz-Kreislauf-Erkrankung zu erkranken und der Cholesterin-Konzentration im Blut belegt. Seither wurden zahlreiche Versuche unternommen, die Cholesterin-Konzentration im Blut mit Hilfe von Nahrungsmitteln zu senken, die im täglichen Leben verzehrt werden können. Versuche wurden zum Beispiel mit Sojabohnen-Protein (Arteriosclerosis 1988 72:115), Molkeprotein (Agric Biol Chem 1991 55:813; japanische Patentanmeldung, Offenlegungs-Nr. H5-176713 ), Hydrolysaten von Sojabohnen-Protein (J Nutr 1990 120:977) und Eigelb-Phospholipid (Agric Biol Chem 1989 53:2469) gemacht. Darüber hinaus wurde ein Verfahren zur Verwendung von Lactoalbumin, Kollagen, Sojabohnen-Protein oder Weizengluten und Sojabohnen-Lecithin in Kombination (Nutr Rep Int 1983 28:621) und ein Verfahren zur Verwendung von gewebeähnlichem, Sojabohnen-Lecithin enthaltenden Sojabohnen-Protein (Ann Nutr Metab 1985 29:348) und dergleichen eingesetzt.
Hoher Blutdruck betrifft essentiellen Bluthochdruck, dessen Ätiologie unbekannt ist, und sekundären Bluthochdruck, der mit Erkrankung der Niere, Nebenniere oder dem Nervensystem verbunden ist. In den vergangenen Jahren wurden 90% der Fälle als essentieller Bluthochdruck eingestuft. Heute werden Blutdruck senkende Wirkstoffe häufig zur Vorbeugung und zur Behandlung von essentiellem Bluthochdruck eingesetzt. Jeder herkömmliche Blutdruck senkende Wirkstoff hat jedoch den Nachteil, eine bestimmte Nebenwirkung aufzuweisen. Zum Beispiel zeigen einzelne Medikamente charakteristische Nebenwirkungen: Blutdruck senkende Diuretika verursachen Hypokaliämie oder Azidämie, Blutdruck senkende periphere Vasodilatoren verursachen Hypoglobulie, β-Blocker verursachen Bronchioasthma und α-Methyldopa erhöht die Werte der Glutamin-Oxalacet-Transaminase (GOT) oder der Glutamin-Pyruvat-Transaminase (GPT) im Blut und verursacht hämolytische Anämie. Dem zufolge ist für die Verabreichung dieser Blutdruck senkenden Mittel eine besondere Abwägung erforderlich, und die Dosierung und Dauer der Verabreichung sind für diese Mittel natürlich begrenzt.
Unter den vorstehend genannten Umständen wurde die Entwicklung eines Blutdruck senkenden Mittels ohne Nebenwirkungen stark vorangerieben, und Blutdruck senkende Mittel, die eine von Mikroorganismen stammende Substanz als einen wirksamen Bestandteil enthalten, haben Aufmerksamkeit auf sich gezogen. Solche Substanzen enthalten zum Beispiel Polysaccharide mit hohem Molekulargewicht, die aus Milchsäurebakterien stammen, als einen wirksamen Bestandteil ( japanische Patentanmeldung, Offenlegungs-Nr. S59-190929 ), Glycoproteine mit einem Molekulargewicht von mehr als 10.000, isoliert aus Chlorella-Algen ( japanische Patentanmeldung, Offenlegungs-Nr. S60-45603 ), lebensfähige oder tote Zellen von Bakterien der Gattung Streptococcus ( japanische Patentanmeldung, Offenlegungs-Nr. S61-221124 ), getrocknete Bierhefe als einen wirksamen Bestandteil ( japanische Patentanmeldung, Offenlegungs-Nr. S63-255234 ) oder einen Heißwasser-Extrakt von Milchsäurebakterien ( japanische Patentanmeldung, Offenlegungs-Nr. S63-139129 ; japanische Patentanmeldung, Offenlegungs-Nr. H2-247127 ). Viele dieser Substanzen sind jedoch wasserunlöslich und haben keinen guten Geschmack, was sie vom praktischen Gebrauch ausschließt.
Es wurden daher Versuche unternommen, Blutdruck senkende Mittel zu entwickeln, die aus in Nahrungsmitteln enthaltenen Substanzen bestehen, die als ein wirksamer Bestandteil im täglichen Leben oral verabreicht werden können. Zum Beispiel sind ein Enzym-zerlegtes Kasein-Produkt (Fond Develop 1997 32:37–39) und ein Enzym-zerlegtes Fischfleisch-Produkt (Health Nutr Food Res 1998 1:62–71; Food Develop 1996 31:50–52) beschrieben worden.
Die vorstehend beschriebenen Verfahren weisen jedoch Schwierigkeiten auf, etwa in der Art, dass eine relativ große Menge verzehrt werden muss, dass der Geschmack zu wünschen lässt und dass ein Niederschlag während der Lagerung eintritt, wenn Getränke daraus hergestellt werden, was eine stabilen Lagerung beeinträchtigt.
Noch bedeutsamer ist, dass keine Substanz bekannt ist, die den Fettstoffwechsel verbessern und gleichzeitig hohen Blutdruck senken kann. Eine Störung im Fettstoffwechsel kann ein Grund für das Ansteigen des Blutdrucks sein, und in diesem Fall ist fehlerhafter Fettstoffwechsel mit hohem Blutdruck verbunden. Zum Beispiel neigen in einigen Fällen hohe Cholesterinspiegel im Blut dazu, Arteriosklerose hervorzurufen, die zu hohem Blutdruck führt. Wenn daher eine Substanz entwickelt wird, die sowohl den Fettstoffwechsel verbessern als auch hohen Blutdruck senken kann, kann das Problem sowohl des Fettstoffwechsels als auch des hohen Blutdrucks wirksam gelöst werden. EP-1 161 881 offenbart aus Milch stammende Proteinfraktionen, die bei der Behandlung von Osteoporose und pariodontaler Erkrankung nützlich sind.
Zusammenfassung der Erfindung
Die Erfinder der vorliegenden Erfindung fanden heraus, dass eine aus Milch stammende, basische Proteinfraktion oder eine basische Peptidfraktion, die man durch Spaltung der genannten Proteinfraktion mit einer Protease, z.B. Pepsin und Pancreatin erhält, den Fettstoffwechsel verbessern und hohen Blutdruck senken kann, wenn sie oral verabreicht wird. Darüber hinaus fanden die Erfinder heraus, dass diese basische Proteinfraktion und basische Peptidfraktion oder eine Kombination hieraus wirksam als ein wirksamer Bestandteil für Arzneimittel und Getränke oder Nahrungsmittel verwendet werden können, um Fettstoffwechsel und hohen Blutdruck zu verbessern.
In einer Ausführungsform wird ein Mittel zur Verbesserung des Fettstoffwechsels bereit gestellt, das aus einer aus Milch stammenden, basischen Proteinfraktion als einem wirksamen Bestandteil und einem geeigneten Trägerstoff (z.B. für orale Verabreichung) besteht. Vorzugsweise enthält diese aus Milch stammende, basische Proteinfraktion auf Gewichtsbasis 15% oder mehr basische Aminosäuren in ihrer Aminosäuren-Zusammensetzung. Diese aus Milch stammende, basische Proteinfraktion ist erhältlich durch Inkontaktbringen von Milch oder eines aus Milch stammenden Materials mit Kationen-Austauschharzen, um basische Proteine zu adsorbieren und eine an die Harze adsorbierte Fraktion mit einem Eluenten zu eluieren, der eine Salzkonzentration von 0,1 M bis 1,0 M aufweist.
In einer anderen Ausführungsform wird ein Mittel zur Verbesserung des Fettstoffwechsels bereit gestellt, das aus einer basische Peptidfraktion als einem wirksamen Bestandteil besteht, die gewonnen wird, indem die aus Milch stammende, basische Proteinfraktion mit einer Protease gespalten wird. Vorzugsweise wird die aus Milch stammende, basische Proteinfraktion durch mindestens eine der Proteasen gespalten, die aus der aus Pepsin, Trypsin, Chymotrypsin und Pankreatin bestehenden Gruppe ausgewählt wird.
In einer anderen Ausführungsform wird ein Getränk oder ein Nahrungsmittel zur Verbesserung des Fettstoffwechsels bereit gestellt, dem die aus Milch stammende, basische Proteinfraktion oder die basische Peptidfraktion der vorliegenden Erfindung zugesetzt wurde.
In einer anderen Ausführungsform wird ein Mittel zur Senkung von hohem Blutdruck bereitgestellt, das aus einer aus Milch stammenden, basischen Proteinfraktion als einem wirksamen Bestandteil und einem geeigneten Trägerstoff (z.B. zur oralen Verabreichung) besteht. Vorzugsweise enthält diese aus Milch stammende, basische Proteinfraktion auf Gewichtsbasis 15% oder mehr basische Aminosäuren in ihrer Aminosäuren-Zusammensetzung. Diese aus Milch stammende, basische Proteinfraktion ist erhältlich durch Inkontaktbringen von Milch oder eines aus Milch stammenden Materials mit Kationen-Austauschharzen, um basische Proteine zu adsorbieren und eine an die Harze adsorbierte Fraktion mit einem Eluenten zu eluieren, der eine Salzkonzentration von 0,1 M bis 1,0 M aufweist.
In einer anderen Ausführungsform wird ein Mittel zur Senkung von hohem Blutdruck bereit gestellt, das aus einer basischen Peptidfraktion als einem wirksamen Bestandteil besteht, die durch Spaltung der aus Milch stammenden, basischen Proteinfraktion durch eine Protease gewonnen wird. Vorzugsweise wird die aus Milch stammende, basische Proteinfraktion durch mindestens eine der Proteasen gespalten, die aus der aus Pepsin, Trypsin, Chymotrypsin und Pankreatin bestehenden Gruppe ausgewählt wird.
In einer anderen Ausführungsform wird ein Getränk oder ein Nahrungsmittel zur Senkung von hohem Blutdruck bereit gestellt, dem die aus Milch stammende, basische Proteinfraktion oder basische Peptidfraktion der vorliegenden Erfindung zugesetzt wurde.
Ein Mittel zur Verbesserung des Fettstoffwechsels und ein Mittel zur Senkung von hohem Blutdruck kann grundsätzlich den selben Bestandteil umschließen. Durch Untersuchung der Aktivitäten und Wirkungen auf Fettstoffwechsel und Blutdruck im Einzelnen, unter Berücksichtigung der Zusammensetzung des Bestandteils und anderer unterstützender Inhaltstoffe kann das gewünschte Gleichgewicht zwischen ihnen leicht erreicht werden. Mittel der vorliegenden Erfindung zur Verbesserung des Fettstoffwechsels und/oder zur Senkung von hohem Blutdruck können nicht nur einem Patienten, der die Symptome aufweisen, sondern auch einem Kandidaten zur vorbeugenden Behandlung dieser Symptome verabreicht werden.
Zum Zwecke der Zusammenfassung der Erfindung und der Vorteile, die gegenüber dem bisherigen Wissensstand erreicht wurden, sind vorstehend bestimmte Gegenstände und Vorteile der Erfindung beschrieben worden. Natürlich ist offensichtlich, dass nicht notwendigerweise alle solche Gegenstände und Vorteile im Einklang mit jeder einzelnen Ausführungsform der Erfindung erreicht werden können. So werden zum Beispiel Fachleute auf dem Gebiet erkennen, dass die Erfindung in einer Weise ausgeführt oder eingesetzt werden kann, die einen Vorteil oder eine Reihe von Vorteilen, die hierin genannt werden, erreichen oder optimieren kann, ohne notwendigerweise auch andere Gegenstände oder Vorteile, die hierin genannt oder vorgeschlagen worden sein können, zu erreichen. Weitere Aspekte, Möglichkeiten und Vorteile dieser Erfindung werden aus der genauen Beschreibung der bevorzugten Ausführungsformen, die nachfolgen, deutlich werden.
Genaue Beschreibung der bevorzugten Ausführungsformen
Mittel zur Verbesserung des Fettstoffwechsels und zur Senkung von hohem Blutdruck und eine Kombination hieraus sind darin charakterisiert, dass sie eine aus Milch stammende, basische Proteinfraktion oder eine basische Peptidfraktion als einen wirksamen Bestandteil enthalten. Diese aus Milch stammende basische Proteinfraktion kann aus Säugetiermilch wie etwa Kuhmilch, menschlicher Milch, Ziegenmilch und Schafsmilch gewonnen werden. Die basische Peptidfraktion kann durch Spaltung der aus Milch stammenden basischen Milchfraktion der vorliegenden Erfindung mit einer Protease gewonnen werden.
In einer Ausführungsform hat diese aus Milch stammende, basische Proteinfraktion die folgenden Eigenschaften, wie nachstehend in den Testbeispielen 1 bis 3 beschrieben wird. Die vorliegende Erfindung ist nicht auf diese Ausführungsform begrenzt.

1) Sie umfasst verschiedene Proteine mit einem Molekulargewicht, das von etwa 2.000 bis etwa 80.000 reicht, bevorzugt von etwa 3.000 bis etwa 24.000, bestimmt mit Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese (SDS-PAGE). Sie hat einen isoelektrischen Punkt, der von etwa 7,5 bis etwa 11 reicht, bevorzugt von etwa 8 bis etwa 10.
2) Sie besteht aus mehr als 95 Gewichts-% Protein und kleinen Mengen Fett und Asche.
3) Die enthaltenen Proteine sind überwiegend Lactoferrin und Lactoperoxidase.
4) In Bezug auf die Aminosäurezusammensetzung der Proteine besteht sie aus mehr als 15 Gewichts-% aus basischen Aminosäuren wie etwa Lysin, Histidin und Arginin.

Eine solche basische Proteinfraktion ist zum Beispiel erhältlich durch Inkontaktbringen eines Milch-Materials wie etwa Magermilch und Molke mit Kationen-Austauschharzen, um basische Proteine zu adsorbieren, eine basische Proteinfraktion, die an diesen Harzen adsorbiert wurde, mit einem Eluenten eluiert wird, der eine Salzkonzentration von 0,1 M bis 1,0 M aufweist, diese eluierte Fraktion gesammelt wird, diese Fraktion mit einer umkehrosmotischen (RO) Membran oder mit dem elektrodialytischen (ED) Verfahren entsalzt und konzentriert wird, und die erhaltene Fraktion getrocknet wird, falls notwendig.
Darüber hinaus ist aus Milch stammende, basische Proteinfraktion zum Beispiel durch ein Verfahren erhältlich, in dem Milch oder aus Milch stammendes Material mit einem Kationen-Austauscher in Kontakt gebracht wird, um basische Proteine zu adsorbieren, und dann wird eine basische Proteinfraktion, die an diesen Kationen-Austauscher adsorbiert ist, mit einem Eluenten eluiert, der einen pH-Wert größer 5 und eine Ionenstärke von mehr als 0,5 hat ( japanische Patentanmeldung, Offenlegungs-Nr. H5-202098 ), mit einem Verfahren, in dem Alginsäure-Gel verwendet wird ( japanische Patentanmeldung, Offenlegungs-Nr. S61-246198 ), mit einem Verfahren, in dem die Fraktion unter Verwendung von porösen anorganischen Partikeln aus Molke gewonnen wird ( japanische Patentanmeldung, Offenlegungs-Nr. H1-86839 ) und mit einem Verfahren, in dem die Fraktion unter Verwendung einer Sulfatester-Verbindung aus Milch gewonnen wird ( japanische Patentanmeldung, Offenlegungs-Nr. S63-255300 ). In der vorliegenden Erfindung kann eine basische Fraktion verwendet werden, die durch eines solcher Verfahren erhältlich ist.
Darüber hinaus hat eine aus Milch stammende, basische Peptidfraktion die gleiche Aminosäurenzusammensetzung wie die basische Proteinfraktion. Zum Beispiel wird die aus Milch stammende, basische Proteinfraktion, die durch eines der vorstehend genannten Verfahren erhältlich ist, mit Protease wie etwa Pepsin, Trypsin und Chymotrypsin und, falls notwendig, mit Protease wie etwa Pancreatin behandelt, um eine Peptid-Verbindung zu gewinnen, die ein durchschnittliches Molekulargewicht von weniger als 4.000, bevorzugt von etwa 1.000 bis etwa 3.000 aufweist.
Bei der Verabreichung von Arzneimitteln der vorliegenden Erfindung zur Verbesserung des Fettstoffwechsels und zur Senkung von hohem Blutdruck und der Kombination hieraus kann eine aus Milch stammende, basische Proteinfraktion oder basische Peptidfraktion als ein wirksamer Bestandteil ohne weitere Verarbeitungsschritte eingesetzt werden. Die aus Milch stammenden, basischen Protein- und basischen Peptidfraktionen der vorliegenden Erfindung können auch als Puder, Granulate, Tabletten, Kapseln, Getränke oder dergleichen nach herkömmlichen Verfahren formuliert werden. Darüber hinaus können diese basischen Proteinfraktionen und basischen Peptidfraktionen ohne weitere Verarbeitung oder nach der Formulierung der Nahrung, Getränken oder Nahrungsmitteln zugesetzt werden, um den Fettstoffwechsel zu verbessern und hohen Blutdruck zu senken. Eine erhöhte Wirksamkeit zur Verbesserung des Fettstoffwechsels und zur Senkung hohen Blutdrucks und der Kombination hieraus kann erwartet werden, wenn die basische Proteinfraktion oder basischen Peptidfraktion der vorliegenden Erfindung mit anderen Bestandteilen vermischt wird, von denen angenommen wird, dass sie eine Aktivität zur Verbesserung des Fettstoffwechsels besitzen (z.B. 50 bis 50.000 Gewichts-% bezogen auf die basische Proteinfraktion oder die basische Peptidfraktion), wie etwa Sojabohnen-Protein, Molkeprotein, Sojabohnen-Lecithin, Diacylglycerin und Sojabohnen-Isoflavon, ebenso wie auch die anderen Verbindungen, von denen angenommen wird, dass sie eine Bluthochdruck senkende Aktivität besitzen (z.B. 100 bis 50.000 Gewichts-% bezogen auf die basische Proteinfraktion oder die basische Peptidfraktion), wie etwa Calcium, Magnesium, Kalium und diätische Ballaststoffe. Zum Beispiel können 10 g Sojabohnen-Protein und 40 mg Sojabohnen-Isoflavon mit 20 bis 100 mg der aus Milch stammenden basischen Proteinfraktion verwendet werden. In anderen Beispielen können 10 g diätische Ballaststoffe und 100 mg Magnesium mit 20 bis 100 mg der aus Milch stammenden basischen Proteinfraktion verwendet werden. Durch Einstellung der Mengen der vorstehenden unterstützenden Bestandteile können eine Aktivität zur Verbesserung des Fettstoffwechsels und eine Aktivität zur Senkung des Blutdrucks wirksam ausbalanciert werden. Darüber hinaus können Stoffe, die die aus Milch stammende basische Proteinfraktion oder basische Peptidfraktion der vorliegenden Erfindung enthalten, durch Erhitzen unter herkömmlichen Bedingungen, die Fachleuten bekannt sind, sterilisiert werden (zum Beispiel bei 90°C für 10 min, bei 121°C für 2 sec), da die aus Milch stammende basische Proteinfraktion und basische Peptidfraktion der vorliegenden Erfindung relativ hitzebeständig sind.
Im Rahmen dieser Erfindung bezeichnet „wirksamer Bestandteil" das Verursachen eines Ergebnisses wie etwa der Verbesserung des Fettstoffwechsels, Senkung von hohem Blutdruck oder beidem.
Die Dosierung von Mitteln zur Verbesserung des Fettstoffwechsels und Senkung von hohem Blutdruck und die Kombination hieraus gemäß der vorliegenden Erfindung variiert abhängig von Lebensalter, therapeutischer Wirksamkeit und pathologischen Bedingungen. Ergebnisse aus Tierexperimenten mit Ratten zeigten jedoch, dass eine Verabreichung von 20 mg oder mehr einer basischen Proteinfraktion oder basischen Peptidfraktion pro kg Körpergewicht der Ratte notwendig war, um Fettstoffwechsel und hohen Blutdruck zu verbessern. Daher wird nach einem Extrapolationsverfahren (A Sequel to Medical Development 1993 8:7–18) eine wirksame tägliche Dosis für einen erwachsenen Menschen von etwa 20 mg oder mehr, bevorzugt von etwa 20 bis etwa 1000 mg, mehr bevorzugt von etwa 40 bis etwa 100 mg, veranschlagt. Die Fraktionen können entsprechend mit Getränken oder Nahrungsmitteln vermischt oder als ein Arzneimittel verabreicht werden, um diese Dosis sicher zu gewährleisten (zum Beispiel 2 m% bis 2% in einem Getränk oder Nahrungsmittelprodukt, 0,2% bis 20% in einem Arzneimittel).
Die vorliegende Erfindung wird in den nachstehenden Beispielen und Testbeispielen beschrieben, ist aber nicht auf diese begrenzt.
BEISPIEL 1
Eine Säule (5 cm Durchmesser und 30 cm Höhe), gefüllt mit Kationen-Austauschharzen, sulfonierten Chitoperlen (400 g; ein Produkt von Fuji Boseki Co., Ltd.), wurde gründlich mit deioniosiertem Wasser gewaschen. Magermilch (40 l, pH-Wert 6,7) wurde mit einer Flussrate von 25 ml/min durch die Säule geschickt, worauf die Säule mit deionisiertem Wasser gründlich gewaschen wurde, und darauf wurde eine an die Harze adsorbierte Fraktion basischer Proteine mit einer 0,02 M Kohlensäure-Pufferlösung (pH-Wert 7,0), die 0,98 M Natriumchlorid enthielt, eluiert. Das erhaltene Eluat wurde unter Verwendung einer Umkehrosmose (RO)-Membran entsalzen und konzentriert, und dann tiefgefroren, um 21 g einer basischen Proteinfraktion als Puder zu erhalten.
Testbeispiel 1
Die aus Beispiel 1 erhaltene basische Proteinfraktion wurde einer Natriumdodecylsulfat-polyacrylamid-Gel-Elektrophorese (SDS-PAGE) unterworfen, die ergab, dass die Molekulargewichte der Proteine von etwa 3.000 bis etwa 80.000 reichten.
Testbeispiel 2
Die Zusammensetzung der aus Beispiel 1 erhaltenen basischen Proteinfraktion wurde analysiert. Ergebnisse werden in Tabelle 1 dargestellt. Wie in Tabelle 1 gezeigt ist Protein der größere Bestandteil dieser Fraktion. Tabelle 1

Einheit: Gewichts-%

Wasser 1,06

Protein 96,5

Fett 0,56

Asche 0,27

Andere 1,61
Testbeispiel 3
Die Aminosäuren-Zusammensetzung der aus Beispiel 1 erhaltenen basischen Proteinfraktion wurde mit Hilfe eines Aminosäure-Analysators (Modell L 8500, ein Produkt von Hitachi Ltd.) nach Hydrolyse mit 6 N Hydrochlorsäure bei 110°C über 24 Stunden analysiert. Ergebnisse sind in Tabelle 2 dargestellt. Diese basische Proteinfraktion enthält mehr als 15 Gewichts-% basische Aminosäuren (Lysin, Histidin und Arginin) in seiner Aminosäuren-Zusammensetzung. Tabelle 2

Einheit: Gewichts-%

Asparaginsäure 10,1

Serin 5,3

Glutaminsäure 12,3

Prolin 4,7

Alanin 5,7

Leucin 10,2

Lysin 8,4

Histidin 2,5

Arginin 7,2

Andere 33,6
BEISPIEL 2
Eine Säule (100 cm Durchmesser und 10 cm Höhe), gefüllt mit Kationen-Austauschharzen, SP Toyoperlen (30 kg; ein Produkt von Toso), wurde gründlich mit deionisiertem Wasser gewaschen. Käsemolke (30 t, pH-Wert 6,2), die durch Erhitzen auf 121°C für 30 Sekunden sterilisiert worden war, wurde mit einer Flussrate von 10 l/min durch die Säule geschickt, worauf die Säule gründlich mit deionisiertem Wasser gewaschen wurde, und darauf wurde eine an die Harze adsorbierte Fraktion basischer Proteine mit einer 0,1 M Zitronensäure-Pufferlösung (pH-Wert 5,7), die 0,9 M Natriumchlorid enthielt, eluiert. Das erhaltene Eluat wurde durch ein Elektrodialyse-Verfahren entsalzen und konzentriert, und dann tiefgefroren, um 183 g einer basischen Proteinfraktion als Puder zu erhalten.
BEISPIEL 3
Das aus Beispiel 1 erhaltene Puder der basischen Proteinfraktion (50 g) wurde in 10 l destilliertem Wasser gelöst, 50 ml einer 1 Gewichts-%igen Pancreatin-Lösung (ein Produkt von Sigma) wurde zugegeben, und die Reaktion wurde bei 37°C über 2 Stunden durchgeführt. Um die Reaktion zu beenden, wurde das Enzym durch Erhitzen auf 80°C über 10 Minuten inaktiviert, worauf die Reaktionslösung konzentriert und tiefgefroren wurde, um 48,3 g einer basischen Peptidfraktion als Puder zu erhalten.
Testbeispiel 4
Für die aus Beispiel 1 erhaltene basische Proteinfraktion als Puder und die aus Beispiel 3 erhaltene basische Peptidfraktion als Puder wurde eine Aktivität zur Verbesserung des Fettstoffwechsels durch ein Tierexperiment untersucht, bei dem männliche Wistar-Ratten (4 Wochen alt) verwendet wurden. Die Ratten wurden in 5 Experimentgruppen aufgeteilt (n = 8): eine Gruppe, der physiologische Kochsalzlösung verabreicht wurde (Gruppe A), eine Gruppe, der 20 mg der basischen Proteinfraktion als Puder pro kg Körpergewicht der Ratte verabreicht wurden (Gruppe B), eine Gruppe, der 200 mg der basischen Proteinfraktion als Puder pro kg Körpergewicht der Ratte verabreicht wurden (Gruppe C), eine Gruppe, der 20 mg der basischen Peptidfraktion als Puder pro kg Körpergewicht der Ratte verabreicht wurden (Gruppe D), eine Gruppe, der 200 mg der basischen Peptidfraktion als Puder pro kg Körpergewicht der Ratte verabreicht wurden (Gruppe E). Die Verabreichung erfolgte, indem eine Gabe einmal pro Tag über 10 Wochen verabreicht wurde. Während dieser 10-wöchigen Periode wurden die Tiere mit Futter gefüttert, das 1 Gewichts-% Cholesterin und 0,25 Gewichts-% Natriumcholat enthielt.
Nach den 10 Wochen der Verabreichung der basischen Proteinfraktion als Puder oder basischen Peptidfraktion als Puder wurden das Gesamt-Cholesterin, HD (High-Density)-Lipoprotein-Cholesterin, LD (Low-Density)- und VLD (Very-Low-Density)-Lipoprotein-Cholesterine und neutrales Fett im Serum gemessen.

Ergebnisse werden in Tabelle 3 dargestellt. Tabelle 3 (Einheit: mg/dl)

	Gruppe A	Gruppe B	Gruppe C	Gruppe D	Gruppe E
Tchol	145 ± 13^a	112 ± 15^b	90 ± 16^b,c	109 ± 16^b,c	88 ± 18^c
HDL	37 ± 9	35 ± 6	44 ± 10	37 ± 9	45 ± 7
LDL + VLDL	108 ± 8^a	77 ± 13^b	47 ± 10^c	72 ± 14^b	43 ± 12^c
TG	194 ± 19^a	173 ± 18^a	136 ± 22^b	16 ± 27^a,b	136 ± 32^b

TChol: Gesamt-Cholesterin; HDL: high-Density Lipoprotein Cholesterin: LDL: low-Densiy Lipoprotein Cholesterin; VLDL: Very-Low-Density-Lipoprotein-Cholesterin; TG: neutrales Fett. Exponenten in Tabelle 3 geben den signifikanten Unterschied zwischen den verschiedenen Gruppen an (p < 0,05).

Die Ergebnisse zeigten, dass in allen experimentellen Gruppen, d.h. Gruppe B, Gruppe C, Gruppe D und Gruppe E, das Gesamt-Cholesterin im Vergleich zur Kontrollgruppe, d.h. Gruppe A, signifikant geringer war. Genauer waren die Werte für die Low-Density- und Very-Low-Density-Lipoprotein-Cholesterine, die als schlechte Cholesterine angesehen werden, in Gruppe B, Gruppe C, Gruppe D und Gruppe E im Vergleich zu Gruppe A signifikant niedriger, während die Werte für das High-Density-Lipoprotein, das als gutes Cholesterin angesehen wird, keine signifikanten Unterschiede zwischen den Gruppen aufwiesen. Die Werte für neutrales Fett waren im Vergleich zu Gruppe A in Gruppe C und Gruppe E signifikant niedriger.
Diese Ergebnisse zeigten, dass die basische Proteinfraktion und die basische Peptidfraktion eine Aktivität besitzen, die die Cholesterinspiegel im Serum senken, besonders die der Low-Density- und Very-Low-Density-Cholesterine, die als schlechte Cholesterine angesehen werden, und die Werte von neutralem Fett im Serum, wodurch sie den Fettstoffwechsel verbessern.
Darüber hinaus ergab sich, dass die Aktivität zur Verbesserung des Fettstoffwechsels beobachtet wurde, sobald pro kg Körpergewicht der Ratte mindestens 20 mg der basischen Proteinfraktion oder basischen Peptidfraktion verabreicht wurden.
Testbeispiel 5

Für die aus Beispiel 1 erhaltene basische Proteinfraktion als Puder und die aus Beispiel 3 erhaltenen basische Peptidfraktion als Puder wurde eine Aktivität zur Senkung des Blutdrucks in vivo untersucht, wobei SHR-Ratten verwendet wurden, die einen angeborenen genetischen Bluthochdruck-Faktor besaßen. Männliche SHR-Ratten (4 Wochen alt) wurden in 5 Experimentgruppen aufgeteilt (n = 8): eine Gruppe, der physiologische Kochsalzlösung verabreicht wurde (Gruppe A), eine Gruppe, der 20 mg der basischen Proteinfraktion als Puder pro kg Körpergewicht der Ratte verabreicht wurden (Gruppe B), eine Gruppe, der 200 mg der basischen Proteinfraktion als Puder pro kg Körpergewicht der Ratte verabreicht wurden (Gruppe C), eine Gruppe, der 20 mg der basischen Peptidfraktion als Puder pro kg Körpergewicht der Ratte verabreicht wurden (Gruppe D), eine Gruppe, der 200mg der basischen Peptidfraktion als Puder pro kg Körpergewicht der Ratte verabreicht wurden (Gruppe E). Die Verabreichung erfolgte, indem eine Gabe einmal pro Tag über 8 Wochen verabreicht wurde. Nach 4 Wochen und 8 Wochen wurde der systolische Blutdruck gemessen. Die Ergebnisse werden in Tabelle 4 dargestellt. Tabelle 4 (Einheit: mm Hg)

	Gruppe A	Gruppe B	Gruppe C	Gruppe D	Gruppe E
Nach 4 Wochen	238 ± 15^a	226 ± 13^a,b	221 ± 11^b	231 ± 8^a,b	217 ± 13^b
Nach 8 Wochen	242 ± 13^a	221 ± 9^b	212 ± 7^b	222 ± 10^b	214 ± 18^b

Exponenten in Tabelle 4 geben den signifikanten Unterschied zwischen den verschiedenen Gruppen an (p < 0,05).
Die Ergebnisse zeigten, dass die Experimentgruppen C und E nach 4 Wochen einen signifikant niedrigeren systolischen Blutdruck im Vergleich zur Kontrollgruppe, d.h. Gruppe A, aufwiesen. Darüber hinaus war der systolische Blutdruck nach 8 Wochen in Gruppe B, Gruppe C, Gruppe D und Gruppe E signifikant niedriger als im Vergleich zu Gruppe A.
Diese Ergebnisse zeigten, dass die basische Proteinfraktion und die basische Peptidfraktion eine Bluthochdruck senkende Aktivität besitzen.
Darüber hinaus wurde gezeigt, dass die Bluthochdruck senkende Aktivität beobachtet wurden, sobald pro kg Körpergewicht der Ratte mindestens 20 mg der basischen Proteinfraktion oder basischen Peptidfraktion verabreicht wurden.
BEISPIEL 4
Ein Getränk zur Verbesserung des Fettstoffwechsels und Senkung von hohem Blutdruck mit der in Tabelle 5 angeführten Zusammensetzung wurde hergestellt. Der Geschmack der des entstandenen Getränks war gut und verschlechterte sich nicht während der Lagerung von einem Jahr bei Raumtemperatur durch Niederschlag oder dergleichen. Tabelle 5 (Einheit: Gewichts-%)

Gemischte isomerisierte Zucker 15

Fruchtsaft 10

Zitronensäure 0,5

basische Proteinfraktion als Puder (Beispiel 1) 0,1

Aromastoff 0,1

Mineral 0,1

Wasser 74,2
BEISPIEL 5
Ein Teig mit der in Tabelle 6 angeführten Zusammensetzung wurde hergestellt, in Formen gebracht und gebacken, um Kekse zur Verbesserung des Fettstoffwechsels herzustellen. Tabelle 6 (Einheit: Gewichts-%)

Mehl 50

Zucker 20

Speisesalz 0,5

Margarine 12,5

Ei 11,5

Wasser 2,5

Mineralgemisch 0,8

basische Proteinfraktion als Puder (Beispiel 2) 1,2

Sojabohnen-Isoflavon 1
Ein Teig mit der in Tabelle 7 angeführten Zusammensetzung wurde hergestellt, in Formen gebracht und gebacken, um Bluthochdruck senkende Kekse herzustellen. Tabelle 7 (Einheit: Gewichts-%)

Mehl 50

Zucker 20

Speisesalz 0,5

Margarine 12,5

Ei 12,5

Wasser 2,5

Mineralgemisch 0,8

basische Proteinfraktion als Puder (Beispiel 2) 1,2
BEISPIEL 6
Tabletten zur Verbesserung des Fettstoffwechsels mit einer in Tabelle 8 angeführten Zusammensetzung wurden hergestellt. Tabelle 8 (Einheit: Gewichts-%)

hydrierte kristalline Glucose 73,5

Sojabohnen-Protein 10

basische Proteinfraktion als Puder (Beispiel 2) 10

Mineralgemisch 5

Zuckerester 1

Aromastoff 0,5
Bluthochdruck senkende Tabletten mit der in Tabelle 9 angeführten Zusammensetzung wurden hergestellt. Tabelle 9 (Einheit: Gewichts-%)

hydrierte kristalline Glucose 83,5

basische Proteinfraktion als Puder (Beispiel 2) 10

Mineralgemisch 5

Zuckerester 1

Aromastoff 0,5
Da die Arzneimittel, Getränke und Nahrungsmittel zur Verbesserung der Fettstoffwechsels und Senkung von hohem Blutdruck der vorliegenden Erfindung den Fettstoffwechsel verbessern und hohen Blutdruck durch Einnahme senken können, sind sie wirksam zur Behandlung und Vorbeugung bei Krankheiten wie etwa Fettleber, Hyperlipidämie, Arteriosklerose, Fettleibigkeit und Bluthochdruck.

Claims

Verwendung einer von Milch abstammenden basischen Proteinfraktion, die erhältlich ist durch Inkontaktbringen von Milch oder von Milch abstammendem Material mit einem Kationenaustauschharz, so dass basische Proteine adsorbiert werden, und Eluieren einer Fraktion, die an das Harz adsorbiert ist, mit einem Elutionsmittel mit einer Salzkonzentration von 0,1 M bis 1,0 M, als wirksamen Bestandteil und eines geeigneten Trägers für orale Verabreichung für die Herstellung eines Arzneimittels, das Bluthochdruck verringert.
Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die von Milch abstammende basische Proteinfraktion etwa 15 Gew.-% oder mehr basische Aminosäuren in ihrer Aminosäurenzusammensetzung enthält.
Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die von Milch abstammende basische Proteinfraktion Proteine mit einem Molekulargewicht in einem Bereich von 3.000 bis 80.000 umfasst.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die von Milch abstammende basische Proteinfraktion mehr als etwa 95 Gew.-% Protein enthält.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass die von Milch abstammende basische Proteinfraktion weniger als etwa 5 Gew.-% Fett und Asche enthält.
Verwendung einer basischen Peptidfraktion, die erhalten wird durch Verdauen der von Milch abstammenden basischen Proteinfraktion wie in Anspruch 1 definiert mit einer Protease, als wirksamen Bestandteil und eines geeigneten Trägers für orale Verabreichung für die Herstellung eines Arzneimittels, das Bluthochdruck verringert.
Verwendung nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass die Protease mindestens eine Protease ist, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Pepsin, Trypsin, Chymotrypsin und Pancreatin.
Verwendung nach Anspruch 1 oder 6, dadurch gekennzeichnet, dass die Zusammensetzung die von Milch abstammende basische Proteinfraktion in einer Menge umfasst, dass etwa 20 mg oder mehr der von Milch abstammenden basischen Proteinfraktion pro Tag oral verabreicht werden.
Verwendung nach Anspruch 8, wobei die hergestellte Zusammensetzung in Form eines Getränks vorliegt.
Verwendung nach Anspruch 8, wobei die hergestellte Zusammensetzung in Form eines Nahrungsmittels vorliegt.
Verwendung nach Anspruch 8, wobei die hergestellte Zusammensetzung in Form einer Tablette vorliegt.