DE60022084T2

DE60022084T2 - Kombination von lumilysergol und riluzol für die vorbeugung und/oder behandlung von motoneuronalen erkrankungen

Info

Publication number: DE60022084T2
Application number: DE60022084T
Authority: DE
Inventors: Michel Dib; Jean-Marie Stutzmann
Original assignee: Aventis Pharma SA
Current assignee: Aventis Pharma SA
Priority date: 1999-12-01
Filing date: 2000-11-28
Publication date: 2006-06-01
Anticipated expiration: 2020-11-29
Also published as: WO2001039776A1; DK1237552T3; JP2003515561A; DE60022084D1; MXPA02005482A; FR2801793B1; EP1464332A1; EP1237552A1; ES2245651T3; EP1237552B1; FR2801793A1; ATE302007T1; JP5170926B2; AU1870501A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung der Assoziation von Lumilysergol und Riluzol oder einem ihrer pharmazeutisch akzeptablen Salze bei der Vorbeugung und/oder der Behandlung von motoneuronalen Erkrankungen.
Das Riluzol ist im Handel verfügbar für die Behandlung der amyotrophischen Lateralsklerose. Diese Verbindung ist ebenfalls nützlich als antikonvulsives, anxiolytisches und hypnotisches Mittel ( EP50551 ), bei der Behandlung von Schizophrenie ( EP305276 ), bei der Behandlung von Schlafstörungen und Depression ( EP305277 ), bei der Behandlung von cerebrovaskulären Störungen und als Anästhetikum ( EP282971 ), bei der Behandlung von spinalen, cranialen oder cranio-spinalen Traumata (WO94/13288), als Radiorestaurator (WO94/15600), bei der Behandlung der Parkinson-Krankheit (WO94/15601), bei der Behandlung von Neuro-AIDS (WO94/20103) und bei der Behandlung von mitochondrialen Erkrankungen (WO95/19170).
Eine Assoziation von Riluzol mit einem Vorläufer oder Derivat von Glutathion ist bekannt für ihre Anwendung bei der Behandlung der amyotrophischen Lateralsklerose ( US 5 780 489 ).
Das Lumilysergol oder 1,6-Dimethyl-8β-hydroxymethyl-10α-methoxy-ergolin oder 1-Methyl-10α-methoxy-9,10-dihydrolysergol ist einer der Metaboliten von Nicergolin [F. ARCAMONE et coll., Biochem. Pharmacol., 21 (16) 2205–2013 (1972)]. Diese Verbindung stellt sich wie das Nicergolin dar, aber mit einem geringeren Grad der α1-adrenergischen und 5HT1a-serotoninergischen Eigenschaften. Sie ist ebenfalls nützlich als Zwischenprodukt für die Herstellung von Nicergolin (Patent FR 2616788 ).
Die Assoziation von Riluzol und Nicergolin wurde bereits als nützlich bei der Behandlung von Spastizität beschrieben (WO 00/30642).
Es ist bekannt, daß in vitro die Motoneuronen, kultiviert ohne trophischen Faktor, in 48 bis 72 Stunden absterben [A.G. ESTEVEZ et coll., J. Neurosci., 18 (3), 923–931 (1998) und 18 (10), 3708–3714 (1998)].
Außerdem kann der motoneuronale Tod, induziert durch den Verlust des trophischen Faktors, teilweise verhindert werden, wenn die Motoneuronen auf Monoschichten von Astrocyten oder in Anwesenheit von Milieu kultiviert werden, das ausgehend von Astrocyten hergestellt wurde. Außerdem wird die Produktion von trophischer Aktivität durch die Astrocyten für die Motoneuronen durch Riluzol stimuliert [H. PELUFFO et coll., Neuroscience letters, 228, 207–211 (1997)].
Es wurde jetzt gefunden, daß die Assoziation von Riluzol oder einem seiner pharmazeutisch akzeptablen Salze und Lumilysergol in synergistischer Weise wirkt und die von den Astrocyten abgesonderte trophische Aktivität bedeutend steigert. Diese Assoziation kann somit bei der Vorbeugung und/oder Behandlung von motoneuronalen Erkrankungen verwendet werden.
Die motoneuronalen Erkrankungen schließen insbesondere die amyotrophische Lateralsklerose, die progressive spinale Muskelatrophie, die infantile Muskelatrophie und die primäre Lateralsklerose ein.
Die angewendete allgemeine Vorschrift wurde von H. PELUFFO et coll., Neuroscience letters, 228, 207–211 (1997) beschrieben.
KULTUREN, ANGEREICHERT AN MOTONEURONEN
Die an Motoneuronen angereicherten Kulturen werden unter Verwendung der Zentrifugierungsmethode hergestellt, beschrieben von R.L. SCHNAAR und E. SCHAFFNER, J. Neurosci., 204–217 (1981) und modifiziert von W. CAMU und C.E. HENDERSON, J. Neurosci. Methods, 44, 59–70 (1992). Auf Kulturplatten, die zuvor mit Laminin/Ornithin gemäß der Methode von A.G. ESTEVEZ et coll., J. Neurosci., 18 83) 923–931 (1998) beschichtet wurden, breitet man die Motoneuronen in einer Dichte von 2500 Zellen pro Platte von 35 mm aus. Die Kulturen werden anschließend in dem Milieu L15 (GIBCO BRL) gehalten, das Natriumbicarbonat (22 mM) Conalbumin (0,1 mg/ml), Putrescin (0,1 mM), Insulin (5 μg/ml), Natriumselenit (31 nM), Glucose (20 mM), Progesteron (21 nM), Penicillin (100 IU/ml) und Streptomycin (100 ug/ml) enthält.
Die auf diese Weise erhaltenen Motoneuronen setzen sich zusammen aus großen Neuronen (25–30 μM) und homogenen Neuronen mit langen verästelten Neuriten. Mehr als 70 % der Zellen sind immunoreaktiv für den Rezeptor Neurotrophin p75 und die Marker Islet 1/2 für die spinalen Rezeptoren. Etwa 70 % der Motoneuronen sterben durch Apoptosis 24 Stunden nach dem Auftragen ab, wenn die Kultur bei Abwesenheit des trophischen Faktor durchgeführt wurde.
KULTUR VON ASTROCYTEN AUS RÜCKENMARK
Die Astrocyten werden ausgehend von jungen Ratten Wistar im Alter von einem Tag gemäß der Methode von R.P. SANETO et J. DE VELLIS, in Neurochemistry a practical approach (A.J. TURNER und H.S. St JOHN) IRL Press, Oxford-Washington DC, S. 27–63 (1987), leicht modifiziert [H. PELUFFO et coll., Neuroscience Letters, 228, 207–211 (1997)], erhalten. Das Rückenmark wird steril seziert, von Hirnhaut und dorsalen Ganglien befreit und geschnitten, vor der Inkubation bei 37 °C während 25 Minuten in PBS (Phosphatpuffersalz: NaCl 137 mM, KCl 2,68 mM, Na₂HPO₄ 6,45 mM, KH₂PO₄ 1,47 mM), wozu man noch 0,25 % Trypsin gibt. Die enzymatische Behandlung wird durch Zugabe von 10 ml modifiziertem Milieu Dubelcco-Eagle (DMEM), wozu man noch 10 % Kälberfötusserum (FCS) gibt, angehalten und die mechanische Dissoziation unter Verwendung des äußersten Endes einer Pipette von 1 ml vervollständigt. Dann werden die Zellen durch Zentrifugierung gesammelt und anschließend in einer Dichte von 1,5 – 2 × 10⁶ Zellen pro 25 cm² Kulturmilieu in DMEM ausgebreitet, wozu man 10 % FCS, 100 UI/ml Penicillin und 100 ug/ml Streptomycin gibt. Nach 3 Tagen in vitro werden die Kulturen jeden Tag ernährt. Wenn eine sichtbare Monoschicht von Zellen beendet ist, werden die Kulturen 48 Stunden lang bei 250 Umdr./min gerührt und die Monoschichten mit Cytosin-Arabinosid (10^–5 M) während 48 Stunden behandelt. Die auf diese Weise erhaltenen Monoschichten von Astrocyten werden 48 Stunden lang im Kulturmilieu aufbewahrt und anschließend auf eine Dichte von 2 × 10⁴ Zellen/cm² erweitert.
Die Monoschichten von Astrocyten zeigen eine Reinheit von mehr als 98 %, bestimmt durch Immunoreaktivität für das Protein gliale fibrilare Säure (GFAP).
BEHANDLUNG DER ASTROCYTEN MIT DEN ZU TESTENDEN PRODUKTEN
Die Behandlung der Astrocyten mit den zu testenden Produkten erfolgt in der folgenden Art und Weise:
Das Ergolin wird in absolutem Ethanol und das Riluzol in 0,01 N HCl gelöst, durch Filtration sterilisiert und unmittelbar nach der Herstellung verwendet. Die Monoschichten von Astrocyten werden während 24 Stunden dem Trägerstoff oder den Lösungen der zu testenden Produkte ausgesetzt. Dieses Milieu wird in einer Verdünnung von zehnmal in frischem Milieu L15 (Dubelco) verwendet. Die Monoschichten von Astrocyten werden dreimal mit DMEM gewaschen und mit dem vervollständigten Milieu L15 inkubiert. Das hergestellte Milieu von Astrocyten wird 24 Stunden später aufgenommen, während 3 Minuten bei 2000 g zentrifugiert und unmittelbar verwendet oder bei –70 °C für maximal 2 Wochen ohne Verlust der trophischen Aktivität aufbewahrt.
Für die immunochemische Markierung der Motoneuronen werden die Kulturen in eiskaltem Methanol während 15 Minuten fixiert, danach gewaschen und die nicht spezifischen Bereiche mit 2 % Rinderserum-Albumin (BSA) +0,1 % Triton X 100 in PBS blockiert. Dann werden die Kulturen nacheinander mit Antikörpern, die gegen die Untereinheiten 200kD von Neurofilamenten (1:200 Amersham) gerichtet sind, mit biotyliniertem Ziegenserum (1:125, Gibco) und mit Streptavidin-Peroxydase (1:200, Gibco) während 60 Minuten bei Umgebungstemperatur inkubiert.
AUSZÄHLUNG DER ZELLEN UND STATISTISCHE ANALYSE
Die für die Neurofilamente immunoreaktiven Zellen, die längere Neuriten zeigen als der Durchmesser der Zellen, werden als lebendfähige Motoneuronen bezeichnet. Die Anzahl der Motoneuronen wird durch Auszählung der markierten Zellen in einer Fläche von 0,4–1 cm2 unter dem Mikroskop bei 200facher Vergrößerung bewertet. In allen Fällen werden die Werte im Prozentsatz der Anzahl von Motoneuronen ausgedrückt, die in den mit den trophischen Faktoren (BDNF) aufrechterhaltenen Kulturen anwesend sind. Die Versuche werden mindestens dreimal durchgeführt.
Die statistischen Analysen werden unter Anwendung des Student-Tests (t-Test) durchgeführt.
Die erhaltenen Ergebnisse sind die folgenden:
Wirkung von Riluzol und Lumilysergol allein und von ihren Assoziationen auf die neurotrophische Aktivität der Motoneuronen, produziert durch die spinalen Astrocyten:
Diese Ergebnisse zeigen, daß die Assoziation von Riluzol und Lumilysergol in synergistischer Weise die motoneuronale trophische Aktivität stimuliert, die durch die Monoschichten von spinalen Astrocyten produziert wird.
Das Riluzol kann gemäß dem in dem Patent EP 50551 beschriebenen Verfahren hergestellt werden.
Als pharmazeutisch akzeptable Salze von Riluzol können insbesondere die Additionssalze mit Mineralsäuren wie Hydrochlorid, Sulfat, Nitrat und Phosphat oder mit organischen Säuren wie Acetat, Propionat, Succinat, Oxalat, Benzoat, Fumarat, Maleat, Methansulfonat, Isethionat, Theophyllinacetat, Salicylat, Phenolphthaleinat, Methylen-bis-β-oxynaphthoat oder die Substitutionsderivate dieser Derivate genannt werden.
Das 1,6-Dimethyl-8β-hydroxymethyl-10α-methoxyergolin kann nach der in dem Patent FR 2616788 beschriebenen Methode hergestellt werden.
Die vorliegende Erfindung betrifft ebenfalls die pharmazeutischen Zusammensetzungen, welche die Assoziation von Riluzol oder einem seiner pharmazeutisch akzeptablen Salze und Lumilysergol in reinem Zustand oder in Form einer Assoziation mit einem oder mehreren pharmazeutisch akzeptablen Verdünnungsmitteln und/oder Zusatzstoffen und/oder gegebenenfalls in Assoziation mit einem an. deren pharmazeutisch kompatiblen und physiologisch aktiven Produkt umfassen. Die Produkte, die aus der Assoziation bestehen, können gleichzeitig, getrennt oder in einer über die Zeit verteilten Weise verabreicht werden, so daß eine maximale Wirksamkeit der Assoziation erhalten wird.
Als feste Zusammensetzungen für die orale Verabreichung können Tabletten, Pillen, Pulver (Gelatinekapseln, Briefchen) oder Granulate verwendet werden. In diesen Zusammensetzungen werden die Wirkstoffe unter einem Strom von Argon mit einem oder mehreren inerten Verdünnungsmitteln vermischt, wie Stärke, Cellulose, Saccharose, Lactose oder Kieselerde. Diese Zusammensetzungen können ebenfalls andere Substanzen als die Verdünnungsmittel enthalten, beispielsweise ein oder mehrere Gleitmittel wie Magnesiumstearat oder Talk, einen Farbstoff, eine Umhüllung (Dragees) oder einen Lack.
Als flüssige Zusammensetzungen für die orale Verabreichung kann man pharmazeutisch akzeptable Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Sirups und Elixiere verwenden, die inerte Verdünnungsmittel wie Wasser, Ethanol, Glycerin, Pflanzenöle oder Paraffinöl enthalten. Diese Zusammensetzungen können auch andere Substanzen als diese Verdünnungsmittel enthalten, beispielsweise Netzmittel, Süßstoffe, Verdickungsmittel, Aromastoffe oder Stabilisatoren.
Die sterilen Zusammensetzungen für die parenterale Verabreichung können vorzugsweise als wäßrige Lösungen oder nichtwäßrige Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen vorliegen. Als Lösungsmittel oder Trägerstoff kann man Wasser, Propylenglycol, ein Polyethylenglycol, Pflanzenöle, insbesondere Olivenöl, injizierbare organische Ester, beispielsweise Ethyloleat, oder andere geeignete organische Lösungsmittel verwenden. Diese Zusammensetzungen können ebenfalls Zusatzstoffe enthalten, insbesondere Netzmittel, isotonische Mittel, Emulgatoren, Dispersionsmittel und Stabilisatoren. Die Sterilisation kann auf verschiedene Art und Weise erfolgen, beispielsweise durch aseptische Filtration, durch Einbringen von sterilisierenden Mitteln in die Zusammensetzung, durch Bestrahlung oder durch Erhitzen. Sie können ebenfalls in Form von festen sterilen Zusammensetzungen hergestellt werden, die im Augenblick ihrer Anwendung in sterilem Wasser oder in jedem anderen sterilen injizierbaren Medium aufgelöst werden können.
Die Zusammensetzungen für die rektale Verabreichung sind Suppositorien oder Rektalkapseln, die außer dem Wirkstoff auch Füllstoffe wie Kakaobutter, halbsynthetische Glyceride oder Polyethylenglycole enthalten.
Die vorliegende Erfindung betrifft ebenfalls die Verwendung der Assoziation von Riluzol oder einem seiner pharmazeutisch akzeptablen Salze und Lumilysergol für die Herstellung eines Arzneimittels, das insbesondere nützlich ist bei der Vorbeugung und/oder Behandlung von motoneuronalen Erkrankungen und insbesondere von amyotrophischer Lateralsklerose, progressiver spinaler Muskelatrophie, infantiler Muskelatrophie und primärer Lateralsklerose. Die Erfindung betrifft ebenfalls die Methode zur Vorbeugung und/oder Behandlung von motoneuronalen Erkrankungen und insbesondere von amyotrophischer Lateralsklerose, progressiver spinaler Muskelatrophie, infantiler Muskelatrophie und primärer Lateralsklero se, die darin besteht, dem Patienten eine Assoziation von Riluzol oder einem seiner pharmazeutisch akzeptablen Salze und Lumilysergol zu verabreichen, entweder gleichzeitig, getrennt oder in einer über die Zeit verteilten Art und Weise.
Die Dosierungen richten sich nach der gewünschten Wirkung, der Dauer der Behandlung und dem angewendeten Weg der Verabreichung. Sie betragen im allgemeinen von 50 mg bis 200 mg pro Tag von Riluzol und 30 mg bis 120 mg von Lumilysergol.
Die vorliegende Erfindung betrifft ebenfalls die Assoziationen, in denen man 50 bis 200 Gewichtsteile Riluzol pro 30 bis 120 Gewichtsteile Lumilysergol verwendet.

Claims

Verwendung einer Kombination von Riluzol oder eines seiner pharmazeutisch akzeptablen Salze und Lumilysergol für die Herstellung eines Arzneimittels, das zur Vorbeugung und/oder Behandlung von motoneuronalen Erkrankungen verwendbar ist.
Verwendung nach Anspruch 1 für die Herstellung eines Arzneimittels, enthaltend 50 bis 200 Gewichtsteile Riluzol für 30 bis 120 Gewichtsteile Lumilysergol.
Verwendung nach den Ansprüchen 1 oder 2 für die Herstellung eines Arzneimittels zur zeitlich gleichzeitigen, unabhängigen oder aufeinander folgenden Verwendung.
Verwendung nach den Ansprüchen 1 bis 3 für die Herstellung eines Arzneimittels zur Vorbeugung und/oder Behandlung der amyotrophischen Lateralsklerose, spinalen progressiven Muskelatrophie, infantilen Muskelatrophie, primären Lateralsklerose.
Kombination von Riluzol oder eines seiner pharmazeutisch akzeptablen Salze und Lumilysergol.
Kombination nach Anspruch 5, worin 50 bis 200 Gewichtsteile Riluzol für 30 bis 120 Gewichtsteile Lumilysergol verwendet werden.
Pharmazeutische Zusammensetzung bestehend aus einer Kombination nach Anspruch 5 in reiner Form oder in Anwesenheit jedes Verdünnungs- oder Zusatzmittels, das kompatibel und pharmazeutisch akzeptabel ist.