DE60002722T2

DE60002722T2 - C-pyrazol a2a rezeptor agonisten

Info

Publication number: DE60002722T2
Application number: DE60002722T
Authority: DE
Inventors: A. Jeff ZABLOCKI; O. Elfatih ELZEIN; P. Venkata Palle
Original assignee: CV Therapeutics Inc
Current assignee: Gilead Palo Alto Inc
Priority date: 1999-06-22
Filing date: 2000-06-21
Publication date: 2004-04-08
Anticipated expiration: 2020-06-22
Also published as: JP4795591B2; TR200200320T2; US7553823B2; US20040198692A1; NO20016351D0; MXPA01013350A; US7109180B2; BR0011854A; CN1152041C; NZ516335A; AU766712B2; ATE240341T1; US20070207978A1; US6855818B2; AR033794A1; WO2000078778A2; CA2375430C; JP2003506460A; KR20020028911A; NO20016351L

Description

Hintergrund der Erfindung
Gebiet der Erfindung
Die Erfindung betrifft C-Pyrazol-Verbindungen, die als A_2A-Rezeptor-Agonisten verwendbar sind. Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind Vasodilatanzien, die für eine Darstellung des Herzens verwendbar sind, um eine Identifizierung von Säugern, insbesondere Menschen, zu unterstützen, die an Erkrankungen wie schlechter Koronarperfusion leiden, die ein Anzeichen für eine Koronararterienerkrankung (CAD) ist. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch als Arzneimittel für Koronararterienerkrankung eingesetzt werden.
Beschreibung des Standes der Technik
Eine pharmakologische Belastung wird häufig mit Adenosin oder Dipyridamol bei Patienten mit einem Verdacht auf CAD induziert, bevor eine Darstellung mittels. T1-Szintigraphie oder Echokardiegraphie erfolgt. Beide Arzneimittel bewirken eine Dilatation der Koronarwiderstandsgefäße durch eine Aktivierung von Zelloberflächen-A₂-Rezeptoren. Obwohl eine pharmakologische Belastung ursprünglich als Mittel zur Erzeugung einer Koronardilatation, bei Patienten entwickelt wurde, die keine Übungen ableisten konnten, zeigten mehrere Untersuchungen, dass der prognostische Wert von ²⁰¹T1 oder eine Echokardiographie-Darstellung bei Patienten, die mit Hilfe von Adenosin oder Dipyridamol einer pharmakologischen Belastung unterzogen wurden, Patienten entsprach, die herkömmlichen Übungs-Belastungstests unterzogen wurden. Jedoch tritt eine hohe Wahrscheinlichkeit für arzneimittelverursachte unerwünschte Nebenwirkungen während einer Darstellung mit Hilfe einer pharmakologischen Belastung mit diesen Arzneimitteln auf, wie Kopfschmerz und Übelkeit, die mit neuen therapeutischen Mitteln verbessert werden könnten.
Adenosinverbindungen, die Pyrazol-substituierte Derivate von Adenosin sind, worin die Bindungsstelle des Pyrazols N-1 ist und die keine oder nur eine sehr geringe vasodilatierende Aktivität aufweisen, wurden beschrieben (R. Marumoto et al., Chem. Pharm. Bull (1975) 23(4) 759–774).
Adenosin A_2B- und A₃-Rezeptoren sind an einer Degranulation von Mastzellen beteiligt und daher werden Asthmatikern nicht die nicht-spezifischen Adenosin-Agonisten für eine Induktion eines pharmakologischen Belastungstests verabreicht. Zudem wird eine Adenosinstimulierung des A₁-Rezeptors im Vorhof und AV-Knoten das S-H-Intervall verringern, das eine AV-Blockierung induzieren kann (N. C. Gupto et al., J. Am. Coli. Cardiol. (1992) 19: 248–257). Eine Stimulierung des Adenosin-A₁-Rezeptors durch Adenosin könnte auch für die Übelkeit verantwortlich sein, da der A₁-Rezeptor im Intestinaltrakt auftritt (J. Nicholls et al., Eur. J. Pharm. (1997) 338(2) 143–150).
Ergebnisse mit Tieren legen nahe, dass spezifische Adenosin-A_2A-Subtyp-Rezeptoren auf Koronarwiderstandsgefäßen die koronardilatatorischen Reaktionen gegenüber Adenosin vermitteln, während eine Stimulierung des Subtyp-Als-Rezeptors periphere Gefäße relaxiert (Hinweis: Das Letztere verringert den systemischen Blutdruck). Als Folge besteht ein Bedarf für pharmazeutische Zusammensetzungen, die A_2A-Rezeptor-Agonisten sind, welche keine pharmakologische Wirkung als Ergebnis einer Stimulierung des A₁-Rezeptors in vivo aufweisen. Ferner besteht der Bedarf für A_2A-Rezeptor-Agonisten, die eine kurze Halbwertszeit aufweisen und gut von Patienten vertragen werden, die pharmakologische Koronarbelastungsuntersuchungen durchlaufen.
Zusammenfassung der Erfindung
In einem Aspekt betrifft die Erfindung 2-Adenosin-C-pyrazol-Verbindungen, die als A_2A-Rezeptor-Agonisten geeignet sind.
In einem weiteren Aspekt betrifft die Erfindung pharmazeutische Zusammensetzungen, die 2-Adenosin-C-pyrazol beinhalten und gut mit wenigen Nebenwirkungen vertragen werden.
Ein weiterer erfindungsgemäßer Aspekt betrifft C-Pyrazol-Verbindungen, die einfach in Verbindung mit radioaktiven Bildgebungsmitteln für eine Erleichterung der Koronardarstellung eingesetzt werden können.
In einer Ausführungsform betrifft die Erfindung C-Pyrazol-Verbindungen der nachstehenden Formel:
In einer weiteren Ausführungsform betrifft die Erfindung Verfahren für eine Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Stimulierung der Koronarvasodilatation bei Säugern und insbesondere beim Menschen für eine Belastung des Herzens, um einen Steal-Zustand für eine Darstellung des Herzens zu induzieren.
In einer weiteren Ausführungsform betrifft die Erfindung eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine oder mehrere erfindungsgemäße Verbindungen und ein oder mehrere pharmazeutische Exzipienzien umfasst.
BESCHREIBUNG DER FIGUREN
1 ist eine Konzentrations-Reaktionskurve für die A₁-Adenosin-Rezeptor (AdoR)-vermittelten negativen dromotropen (AV-Überleitungszeit) und A_2A-AdoR-vermittelten Vasodilatator (erhöhte Koronarleitung)-Wirkungen der erfindungsgemäßen Verbindung 18 in isolierten perfundierten Herzen aus Ratten. Die Symbole und Fehlerbalken geben Mittelwerte ± SEM aus einer einzigen Bestimmung eines jeden der vier Herzen an. Der EC₅₀-Wert (Wirksamkeit) ist die Konzentration der Verbindung 18, die 50% der Maximalreaktion erzeugt.
2 ist eine Konzentrations-Reaktionskurve für die A₁-Adenosin-Rezeptor (AdoR)-vermittelten negativen dromotropen (AV-Überleitungszeit) und A_2A-AdoR-vermittelten Vasodilatator (erhöhte Koronarleitung)-Wirkungen der erfindungsge mäßen Verbindung 18 in isolierten perfundierten Herzen aus Meerschweinchen. Die Symbole und Fehlerbalken geben Mittelwerte ±SEM aus einer einzigen Bestimmung eines jeden der vier Herzen an. Der EC₅₀-Wert (Wirksamkeit) ist die Konzentration der Verbindung 18, die 50% der Maximalreaktion erzeugt.
3 ist eine Kurve der Wirkung von CVT510, ein A₁-Adenosin-Rezeptor-Agonist, und der erfindungsgemäßen Verbindung 18, ein A_2A-Adenosin-Rezeptor-Agonist, auf die atrioventrikuläre (AV) Überleitungszeit in isolierten perfundierten Herzen aus Ratten.
BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGSFORM
Die erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen eine Klasse von 2-Adenosin-C-pyrazol-Verbindungen mit der nachstehenden Formel
worin R¹ -CH₂OH und -C(=O)NR⁵R⁶ ist,
R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, C_2-15-Alkenyl, C_2-15-Alkinyl, Heterocyclyl, Aryl und Heteroaryl, worin die Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl-, Heterocyclyl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, NO₂, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, N(R²⁰)₂, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, SO₂NR²⁰COR²², SO₂NR²⁰CO₂R²², SO₂NR²⁰CON(R²⁰)₂, N(R²⁰)₂, NR²⁰COR²², NR²⁰CO₂R²², NR²⁰CON(R²⁰)₂, COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, CONR²⁰SO₂R²², NR²⁰SO₂R²², SONR²⁰CO₂R²², OCONR²⁰SO₂R²², OC(O)R²⁰, C(O)OCH₂OC(O)R²⁰ und OCON(R²⁰)₂, und worin jeder optionale Heteroaryl-, Aryl- und Heterocyclylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, NO₂, Alkyl, CF₃, Amino, Mono- oder Dialkylamino, Alkyl- oder Aryl- oder Heteroarylamid, NCOR²² NR²⁰SO₂R²², COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, NR²⁰CON(R²⁰)₂, OC(O)R²⁰, OC(O)N(R²⁰)₂, SR²⁰, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, CN oder OR²⁰ substituiert ist,
R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alky1, C_2-15-Alkenyl, C_2-15-Alkinyl, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, Halogenatom, NO₂, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, N(R²⁰)₂, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)2, SO₂NR²⁰COR²², SO₂NR²⁰CO₂R²², SO₂NR²⁰CON(R²⁰)₂, N(R²⁰)₂, NR²⁰COR²², NR²⁰CO₂R²², NR²⁰CON(R²⁰)₂, COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, CONR²⁰SO₂R²², NR²⁰SO₂R²², SO₂NR²⁰CO₂R²², OCONR²⁰SO₂R²², OC(O)R²⁰, C(O)OCH₂OC(O)R²⁰ und OCON(R²⁰)₂, worin die Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl-, Heterocyclyl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, NO₂, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, N(R²⁰)₂, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, SO₂NR²⁰COR²², SO₂NR²⁰CO₂R²², SO₂NR²⁰CON(R²⁰)₂, N(R²⁰)₂, NR²⁰COR²² NR²⁰CO₂R²², NR²⁰CON(R²⁰)₂, COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, CONR²⁰SO₂R²², NR²⁰SO₂R²², SO₂NR²⁰CO₂R²², OCONR²⁰SO₂R²², OC(O)R²⁰, C(O)OCH₂OC(O)R²⁰ und OCON(R²⁰)₂, und worin jeder optionale Heteroaryl-, Aryl- und Heterocyclylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, NO₂, Alkyl-, CF₃, Amino, Mono- oder Dialkylamino, Alkyl- oder Aryl- oder Heteroarylamid, NCOR²², NR²⁰SO₂R²², COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, NR²⁰CON(R²⁰)₂, OC(O)R²⁰, OC(O)N(R²⁰)₂, SR²⁰, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, CN oder OR²⁰ substituiert ist,
R⁵ und R⁶ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus H, C_1-15-Alkyl mit 1 bis 2 Substituenten, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, NO₂, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, N(R²⁰)₂, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, SO₂NR²⁰COR²², SO₂NR²⁰CO₂R²², SO₂NR²⁰CON(R²⁰)₂, N(R²⁰)₂, NR²⁰COR²², NR²⁰CO₂R²², NR²⁰CON(R²⁰)₂, COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, CONR²⁰SO₂R²², NR²⁰SO₂R²², SO₂NR²⁰CO₂R²², OCONR²⁰SO₂R²², OC(O)R²⁰, C(O)OCH₂OC(O)R²⁰ und OCON(R²⁰)₂, und worin jeder optionale Heteroaryl-, Aryl- und Heterocyclylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, NO₂, Alkyl, CF₃, Amino, Mono- oder Dialkylamino, Alkyl- oder Aryl- oder Heteroarylamid, NCOR²², NR²⁰SO₂R²², COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, NR²⁰CON(R²⁰)₂, OC(O)R²⁰, OC(O)N(R²⁰)₂, SR²⁰, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, CN oder OR²⁰ substituiert ist,
R²⁰ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus H, C_1-15-Alkyl, C_2-15-Alkenyl, C_2- ₁₅-Alkinyl, Heterocyclyl, Aryl und Heteroaryl, worin die Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Heterocyclyl-, Aryl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus Halogenatom, Alkyl, Mono- oder Dialkylamino, Alkyl- oder Aryl- oder Heteroarylamid, CN, O-C_1-6-Alkyl, CF₃, Aryl und Heteroaryl, und
R²² ein Mitglied ist, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus C_1-15-Alkyl, C_2-15-Alkenyl, C_2-15-Alkinyl, Heterocyclyl, Aryl und Heteroaryl, worin die Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Heterocyclyl-, Aryl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig aus Halogenatom, Alkyl, Mono- oder Dialkylamino, Alkyl oder Aryl- oder Heteroarylamid, CN, O-C_1-6-Alkyl, CF₃ und Heteroaryl ausgewählt sind, worin R² kein Wasserstoffatom ist, falls R¹ CH₂OH ist, R³ ein Wasserstoffatom ist, R⁴ ein Wasserstoffatom ist und der Pyrazolring über C⁴ gebunden ist.
Wenn die ausgewählte Verbindung eine der nachstehenden Formeln aufweist:
dann ist es bevorzugt, dass R¹ -CH₂OH ist, R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-8-Alkyl, worin die Alkylgruppe gegebenenfalls mit einem Substituenten substituiert ist, der unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Aryl, CF₃ und CN, worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ oder CN substituiert ist, und R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und Methylgruppe, und mehr bevorzugt sind R³ und R⁴ jeweils Wasserstoffatome.
Wenn die erfindungsgemäße Verbindung die nachstehende Formel aufweist:
ist es bevorzugt, dass R¹ -CH₂OH ist, R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einer Phenylgruppe. Mehr bevorzugt ist R² aus einer Benzyl- und Pentylgruppe ausgewählt, R³ ist ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-6-Alkyl und Aryl, worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, Aryl, CF₃ und CN, worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ oder CN substituiert ist und R⁴ ist ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl und insbesondere ist R⁴ ausgewählt aus Wasserstoffatom und Methylgruppe.
In bestimmten bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen ist R² ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, C_2-15-Alkinyl, Heterocyclyl, Aryl und Heteroaryl, worin die Alkyl-, Alkinyl-, Aryl-, Heterocyclyl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, NO₂, Heterocyclyl, Aryl, Heteroazyl, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, N(R²⁰)₂, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R₂₀)₂, COR²⁰, CO₂R²⁰ und CON(R²⁰)₂, worin jeder optionale Heteroaryl-, Aryl- und Heterocyclylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃, CN und OR²⁰ substituiert ist, R³ und R⁴ sind jeweils unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, C_2-15-Alkinyl, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, Halogenatom, NO₂, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, N(R²⁰)₂, S(O)R²² SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, COR²⁰, CO₂R²⁰ und CON(R²⁰)₂, worin die Alkyl-, Alkinyl-, Aryl-, Heterocyclyl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, NO₂, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, N(R²⁰)2, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, COR²⁰, CO₂R²⁰ und CON(R²⁰)₂, worin jeder optionale Heteroaryl-, Aryl- und Heterocyclylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃, CN und OR²⁰ substituiert ist, R⁵ und R⁶ sind jeweils unabhängig ausgewählt aus H und C_1-15- mit 1 bis 2 Substituenten, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Aryl, Heteroaryl, CF₃ und OR²⁰, worin jeder optionale Heteroaryl- und Arylsubstituent ferner gegebenenfalls mit Halogenato, Alkyl und CF₃ substituiert ist, R²⁰ ist ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus H, C_1-6-Alkyl, Aryl und Heteroaryl, und R²² ist ein Mitglied, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus C_1-6-Alkyl, Aryl und Heteroaryl, worin die Alkyl-, Aryl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig aus Halogenatom, Alkyl, CN, O-C_1-6-Alkyl und CF₃ ausgewählt sind.
In weiteren bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen ist R² ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, Aryl mit bis zu 15 C-Atomen und Heteroaryl, worin die Alkyl-, Aryl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, S(O)R²², CO₂R²⁰ und CON(R²⁰)₂, worin jeder optionale Heteroaryl- und Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃, CN und OR²⁰ substituiert ist, R³ und R⁴ sind jeweils unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alky1, Aryl mit bis zu l5 C-Atomen, Heteroaryl, Halogenatom, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, S(O)R²², CO₂R²⁰ und CON(R²⁰)₂, worin die Alkyl-, Aryl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, S(O)R²², CO₂R²⁰ und CON(R²⁰)₂, worin jeder optionale Heteroaryl- und Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃, CN und OR²⁰ substituiert ist, R⁵ und R⁶ sind jeweils unabhängig ausgewählt aus H und C_1-15-Alkyl mit 1 bis 2 CF₃-Substituenten, R²⁰ ist ausgewählt aus H und C_1-6-Alkyl und R²² ist C_1-6-Alkyl.
In weiteren bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen ist R² unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, Aryl mit bis zu 15 C-Atomen und Heteroaryl, worin die Alkyl-, Aryl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, CO₂R²⁰ und CON(R²⁰)₂, worin jeder optionale Heteroaryl- und Aryl-substituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist, R³ und R⁴ sind jeweils unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, Aryl mit bis zu 15 C-Atomen, Heteroaryl, Halogenatom, CF₃, CN, OR²⁰, CO₂R²⁰ und CON(R²⁰)₂, worin die Alkyl-, Aryl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, CO₂R²⁰ und CON(R²⁰)₂, worin jeder optionale Heteroaryl- und Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ oder CN substituiert ist, R⁵ und R⁶ sind jeweils unabhängig ausgewählt aus H und C_1-15-Alkyl und R²⁰ ist ausgewählt aus H und C_1-6-Alkyl.
In weiteren bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen ist R² unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl und Aryl, worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, OR²⁰, Aryl, CF₃ und CN, worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ oder CN substituiert ist, R³ und R⁴ sind jeweils unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, Aryl, Halogenatom, CF₃ und CN, worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, Aryl, CF₃ und CN, worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ oder CN substituiert ist, R⁵ und R⁶ sind jeweils unabhängig ausgewählt aus H und C_1-15-Alkyl und R²⁰ ist ausgewählt aus H und C_1-6-Alkyl.
In einem weiteren erfindungsgemäßen Aspekt können die erfindungsgemäßen Verbindungen eine der nachstehenden Formeln aufweisen:
worin die Bindungsstelle des Pyrazolrings C-4 ist, oder
worin die Bindungsstelle des Pyrazolrings C-3 ist, oder
worin die Bindungsstelle des Pyrazolrings C-5 ist.
In bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen ist R¹ CH₂OH. Wenn R¹ CH₂OH ist, ist R² unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-10-Alkyl und Aryl, worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, OR²⁰, Aryl, CF₃ und CN, worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist. Mehr bevorzugt ist R² ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-8-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem Arylsubstituenten, der gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist. Noch mehr bevorzugt ist R² ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einer Arylgruppe, die gegebenenfalls mit einer Alkylgruppe substituiert ist. Mehr bevorzugt ist R² unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-8-Alkyl und Aryl, worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, OR²⁰, Aryl, CF₃ und CN, worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist. Noch mehr bevorzugt ist R² unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-8-Alkyl und Aryl, worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit einem Substituenten substituiert sind, der aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus Halogenatom, Aryl, CF₃ und CN, worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist. Noch mehr bevorzugt ist R² ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-8-Alkyl, die gegebenenfalls mit einem Substituenten substituiert ist, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Aryl, CF₃ und CN, worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist. Noch mehr bevorzugt ist R² ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-8-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem Substituenten, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Aryl, worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist. Noch mehr bevorzugt ist R² ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit Aryl, gegebenenfalls substituiert mit Alkyl. Noch mehr bevorzugt ist R² ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl und am meisten bevorzugt ist R² ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und Methylgruppe.
Wenn R¹ CH₂OH ist, sind R³ und R⁴ vorzugsweise jeweils unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, Aryl, Halogenatom, CF₃ und CN, worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit einem Substituenten substituiert sind, der unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, CF₃ und CN. Mehr bevorzugt sind R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-3-Alkyl, Aryl, Halogenatom, CF₃ und CN. Noch mehr bevorzugt sind R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit Aryl, gegebenenfalls substituiert mit Alkyl. Noch mehr bevorzugt sind R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, Methylgruppe und Halogenatom. Noch mehr bevorzugt sind R³ und R³ jeweils unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und Methylgruppe, wobei R³ und R⁴ am meisten bevorzugt Wasserstoffatome sind. Noch mehr bevorzugt ist es, dass, wenn R¹ CH₂OH ist, R³ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-6-Alkyl und Aryl, worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, Aryl, CF₃ und CN, worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist, und R⁴ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl.
Wenn R¹ eine CH₂OH-Gruppe ist, ist R²⁰ vorzugsweise ausgewählt aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl.
In weiteren bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen ist R¹ CONHEt. Wenn R¹ CONHEt ist, ist R² vorzugsweise ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-8-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem Substituenten, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Aryl, CF₃ und CN, worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist. Mehr bevorzugt ist R² ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-8-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einer Arylgruppe, die gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist. Noch mehr bevorzugt ist es, dass R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit Aryl, gegebenenfalls substituiert mit Alkyl. Noch mehr bevorzugt ist es, dass R² aus Wasserstoffatom und Methylgruppe ausgewählt ist.
Wenn R¹ CONHEt ist, dann sind R³ und R⁴ vorzugsweise jeweils unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und Methylgruppe. Mehr bevorzugt sind R³ und R⁴ jeweils Wasserstoffatome. Wenn R¹ CONHEt ist, können R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sein aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl, worin die Alkylgruppe gegebenenfalls mit Aryl substituiert ist, gegebenenfalls substituiert mit Alkyl.
Am meisten bevorzugt sind die erfindungsgemäßen Verbindungen ausgewählt aus (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-benzylpyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-[6-Amino-2-(1-pentylpyrazol-4-yl)purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-dio1, (4S,2R,3R,5R)-2-[6-Amino-2-(1-methylpyrazol-4-yl)purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(methylethyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,SR)-2-{6-Amino-2-[1-(3-phenylpropyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(4-t-butylbenzyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-(6-Amino-2-pyrazol-4-ylpurin-9-yl)-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-pent-4-enylpyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R}-2-{6-Amino-2-[1-decylpyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(cyclohexylmethyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-(1-(2-phenylethyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(3-cyclohexylpropyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(2-cyclohexylethyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol und Gemischen davon.
Die nachstehenden Definitionen finden auf die hier verwendeten Begriffe Anwendung.
"Halo" oder "Halogen", allein oder in Kombination, betrifft alle Halogenatome, d. h. Chlor (Cl)-, Fluor (F)-, Brom (Br)- und Iod (I)-Atome.
"Hydroxyl" betrifft die Gruppe -OH.
"Thiol" oder "Mercapto" betrifft die Gruppe -SH.
"Alkyl", allein oder in Kombination, betrifft einen von einem Alkan abgeleiteten Rest mit 1–20, vorzugsweise 1–15 Kohlenstoffatomen (wenn nicht spezifisch angegeben). Die Gruppe ist eine unverzweigte Alkylgruppe, verzweigte Alkylgruppe oder eine Cycloalkylgruppe. Bevorzugt sind unverzweigte oder verzweigte Alkylgruppen mit 1–15, mehr bevorzugt 1–8, noch mehr bevorzugt 1–6, insbesondere 1–4 und am besten 1–2 Kohlenstoffatomen wie Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Isopropyl-, Butyl- und t-Butylgruppen und Ähnliches. Der Begriff "Niederalkyl" wird hier für eine Beschreibung der unverzweigten Alkylgruppen eingesetzt, die unmittelbar vorstehend beschrieben sind. Vorzugsweise sind Cycloalkylgruppen monocyclische, bicyclische oder tricyclische Ringsysteme mit 3–8, insbesondere 3–6 Ringmitgliedern pro Ring wie Cyclopropyl-, Cyclopentyl-, Cyclohexyl- und Adamantylgruppen und Ähnliches. Alkyl umfasst auch eine unverzweigte oder verzweigte Alkylgruppe, die einen Cycloalkylanteil enthält oder von diesem unterbrochen ist. Die unverzweigte oder verzweigte Alkylgruppe ist an einer jeglichen verfügbaren Stelle gebunden, um eine stabile Verbindung herzustellen. Beispiele dafür umfassen in nicht-begrenzender Weise 4-(Isopropyl)-cyclohexylethyl- oder 2-Methyl-cyclopropylpentylgruppen. Eine substituierte Alkylgruppe ist eine vorstehend definierte unverzweigte Alkylgruppe, verzweigte Alkylgruppe oder Cycloalkylgruppe, die unabhängig mit 1–3 Gruppen oder Substituenten ausgewählt aus Halogenatom, Hydroxyl-, Alkoxy-, Alkylthio-, Alkylsulfinyl-, Alkylsulfonyl-, Acyloxy-, Aryloxy-, Heteroaryloxy-, Aminogruppe, gegebenenfalls mit Alkyl, Aryl- oder Heteroarylgruppen mono- oder disubstituiert, Amidino-, Harnstoffgruppe, gegebenenfalls mit Alkyl-, Aryl-, Heteroaryl- oder Heterocyclylgruppen substituiert, Aminosulfonylgruppe, gegebenenfalls mit Alkyl-, Aryl- oder Heteroarylgruppen N-mono- oder N,N-disubstituiert, Alkylsulfonylamino-, Arylsulfonylamino-, Heterarylsulfonylamino-, Alkylcarbonylamino-, Aryl-carbonylamino-, Heterarylcarbonylaminogruppe oder Ähnlichem substituiert sind.
"Alkenyl", allein oder in Kombination, betrifft einen unverzweigten, verzweigten oder cyclischen Kohlenwasserstoffrest mit 2–20, vorzugsweise 2–17, insbesondere 2–10, mehr bevorzugt 2–8, am meisten bevorzugt 2–4 Kohlenstoffatomen und mindestens einer, vorzugsweise 1–3, insbesondere 1–2 und am besten einer Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindung. Im Fall einer Cycloalkylgruppe ist eine Konjugierung von mehr als einer Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindung nicht der Art, dass eine Aromatizität dem Ring verliehen wird. Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindungen können entweder in einem Cycloalkylanteil, wobei Cyclopropylgruppen ausgenommen sind, oder innerhalb eines unverzweigten oder verzweigten Anteils vorlie gen. Beispiele für Alkenylgruppen umfassen Ethenyl-, Propenyl-, Isopropenyl-, Butenyl-, Cyclohexenyl-, Cyclohexenylalkylgruppen und Ähnliches. Eine substitu- ierte Alkenylgruppe entspricht der vorstehend definierten unverzweigten Alkenylgruppe, verzweigten Alkenylgruppe oder Cycloalkenylgruppe, die unabhängig mit 1–3 Gruppen oder Substituenten substituiert sind, die aus Halogenatom, Hydroxyl-, Alkoxy-, Alkylthio-, Alkylsulfinyl-, Alkylsulfonyl-, Acyloxy-, Aryloxy-, Heteroaryloxy-, Aminogruppe, gegebenenfalls mit Alkyl-, Aryl- oder Heteroarylgruppen mono- oder disubstituiert, Amidino-, Harnstoffgruppe, gegebenenfalls mit Alkyl-, Aryl-, Heteroaryl- oder Heterocyclylgruppen substituiert, Aminosulfonylgruppe, gegebenenfalls mit Alkyl-, Aryl- oder Heteroarylgruppen N-mono- oder N,N-disubstituiert, Alkylsulfonylamino-, Arylsulfonylamino-, Heteroarylsulfonylamino-, Alkylcarbonylamino-, Arylcarbonylamino-, Heteroarylcarbonylamino-, Carboxyl-, Alkoxycarbonyl-, Aryloxycarbonyl-, Heteroaryloxycarbonylgruppe oder Ähnlichem ausgewählt sind, die an eine- jegliche verfügbare Stelle für die Herstellung einer stabilen Verbindung gebunden sind.
"Alkinyl", allein oder in Kombination, betrifft einen unverzweigten oder verzweigten Kohlenwasserstoffrest mit 2–20, vorzugsweise 2–17, besser 2–10, noch besser 2–8, insbesondere 2–4 Kohlenstoffatomen und mit mindestens einer, vorzugsweise einer Kohlenstoff-Kohlenstoff-Dreifachbindung. Beispiele für Alkinylgruppen umfassen Ethinyl-, Proinyl-, Butinylgruppen und Ähnliches. Eine substituierte Alkinylgruppe betrifft die vorstehend definierten unverzweigten Alkinyl- oder verzweigten Alkinylgruppen, die unabhängig mit 1–3 Gruppen oder Substituenten substituiert sind, die ausgewählt sind aus Halogenatom, Hydroxyl-, Alkoxy-, Alkylthio-, Alkylsulfinyl-, Alkylsulfonyl-; Acyloxy-, Aryloxy-, Heteroaryloxy-, Aminogruppe, gegebenenfalls mit Alkyl-, Aryl- oder Heteroarylgruppen mono- oder disubstituiert, Amidino-, Harnstoffgruppe, gegebenenfalls mit Alkyl-, Aryl-, Heteroaryl- oder Heterocyclylgruppen substituiert, Aminosulfonylgruppe, gegebenenfalls mit Alkyl-, Aryl- oder Heteroarylgruppen N-mono- oder N,N-disubstituiert, Alkylsulfonylamino-, Arylsulfonylamino-, Heteroarylsulfonylamino-, Alkylcarbonylamino-, Arylcarbonylamino-, Heteroarylcarbonylaminogruppe oder Ähnlichem ausgewählt sind, die an eine jegliche verfügbare Stelle für die Herstellung einer stabilen Verbindung gebunden sind.
"Alkylalkenyl" betrifft die Gruppe -R-CR'=CR'''R'''', worin R eine Niederalkyl- oder substituierte Niederalkylgruppe ist, R', R''' und R'''' unabhängig Wasserstoff-, Halogenatom, Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Acyl-, Aryl-, substituierte Aryl-, Heteroaryl- oder substituierte Heteroarylgruppe wie nachstehend definiert sein können.
"Alkylalkinyl" betrifft die Gruppe -RC≡CR', worin R eine Niederalkyl- oder substituierte Niederalkylgruppe ist, R' Wasserstoffatom, eine Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Acyl-, Aryl-, substituierte Aryl-, Heteroaryl- oder substituierte Heteroarylgruppe wie nachstehend definiert ist.
"Alkoxy" bezeichnet die Gruppe -OR, worin R eine Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Acyl-, Aryl-, substituierte Aryl-, Aralkyl-, substituierte Aralkyl-, Heteroalkyl-, Heteroarylalkyl-, Cycloalkyl-, substituierte Cycloalkyl-, Cycloheteroalkyl- oder substituierte Cycloheteroalkylgruppe wie definiert ist.
"Alkylthio" bezeichnet die Gruppe -SR oder -S(O)_n-1-2-R, worin R eine Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Aryl-, substituierte Aryl-, Aralkyl- oder substituierte Aralkylgruppe wie hier definiert ist.
"Acyl" bezeichnet die Gruppe -C(O)R, worin R ein Wasserstoffatom, eine Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Aryl-, substituierte Arylgruppe und Ähnliches wie hier definiert ist.
"Aryloxy" bezeichnet die Gruppe -OAr, worin Ar eine Aryl-, substituierte Aryl-, Heteroaryl- oder substituierte Heteroarylgruppe wie hier definiert ist.
"Amino" bezeichnet die Gruppe NRR', worin R und R' unabhängig Wasserstoffatom, Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Aryl-, substituierte Aryl-, Heteroaryl- oder substituierte Heteroarylgruppe wie hier definiert oder eine Acylgruppe sein können.
"Amido" bezeichnet. die Gruppe -C(O)NRR', worin R und R' unabhängig Wasserstoffatom, Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Aryl-, substituierte Aryl-, Heteroaryl-, substituierte Heteroarylgruppe wie hier definiert sein können.
"Carboxyl" bezeichnet die Gruppe -C(O)OR, worin R Wasserstoffatom, Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Aryl-, substituierte Aryl-, Heteroaryl- und substituierte Heteroarylgruppe wie hier definiert ist.
"Aryl", allein oder in Kombination, betrifft eine Phenyl- oder Naphthylgruppe, die gegebenenfalls carbocyclisch mit einer Cycloalkylgruppe mit vorzugsweise 5–7, mehr bevorzugt 5–6 Ringmitgliedern fusioniert ist und/oder gegebenenfalls mit 1–3 Gruppen oder Substituenten substituiert ist, die ausgewählt sind aus Halogenatom, Hydroxyl-, Alkoxy-, Alkylthio-, Alkylsulfonyl-, Alkylsulfonyl-, Acloxy-, Aryloxy-, Heteroaryloxy-, Aminogruppe, gegebenenfalls mit Alkyl-, Aryl- oder Heteroarylgruppen mono- oder disubstituiert, Amidino-, Harnstoffgruppe, gegebenenfalls mit Alkyl-, Aryl-, Heteroaryl- oder Heterocyclylgruppen substituiert, Aminosulfonylgruppe, gegebenenfalls mit Alkyl-, Aryl- oder Heteroarylgruppen N-mono- oder N,N-disubstituiert, Alkylsulfonylamino-, Arylsulfonylamino-, Heterarylsulfonylamino-, Alkylcarbonylamino-, Arylcarbonylamino-, Heteroarylcarbonylaminogruppe oder Ähnlichem ausgewählt sind.
"Substituierte Arylgruppe" betrifft eine Arylgruppe, die gegebenenfalls mit einer oder mehreren funktionellen Gruppen wie Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Hydroxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, Heteroaryl-, substituierter Heteroaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und Ähnlichem substituiert ist.
"Heterocyclus" betrifft eine gesättigte, ungesättigte oder aromatische carbocyclische Gruppe mit einem einzelnen Ring (wie eine Morpholino-, Pyridyl- oder Furylgruppe) oder mehreren kondensierten Ringen (wie eine Naphthpyridyl-, Chinoxalyl-, Chinolinyl-, indolizinyl- oder Benzo[b]thienylgruppe) und mit mindestens einem Heteroatom wie N, O oder S innerhalb des Rings, der wahlweise unsubstituiert oder mit z. B. Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Hydroxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, Heteroaryl-, substituierter Heteroaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfoamidogruppe und Ähnlichem substituiert sein kann.
"Heteroaryl", allein oder in Kombination, betrifft eine monocyclische aromatische Ringstruktur mit 5 oder 6 Ringatomen oder eine bicyclische aromatische Gruppe mit 8 bis 10 Atomen, die ein oder mehrere, vorzugsweise 1–4, mehr bevorzugt 1–3, insbesondere 1–2 Heteroatome enthält, die unabhängig aus der Gruppe bestehend aus O, S und N ausgewählt sind, und die gegebenenfalls mit 1–3 Gruppen oder Substituenten substituiert ist, die aus Halogenatom, Hydroxyl-, Alkoxy-, Alkylthio-, Alkylsulfinyl-, Alkylsulfonyl-, Acloxy-, Aryloxy-, Heteroaryloxy-, Aminogruppe, gegebenenfalls mit Alkyl-, Aryl- oder Heteroarylgruppen mono- oder disubstituiert, Amidino-, Harnstoffgruppe, gegebenenfalls mit Alkyl-, Aryl-, Heteroaryl- oder Heterocyclylgruppen substituiert, Aminosulfonylgruppe, gegebenenfalls mit Alkyl-, Aryl- oder Heteroarylgruppen N-mono- oder N,N-disubstituiert, Alkylsulfonylamino-, Arylsulfonylamino-, Heteroarylsulfonylamino-, Alkylcarbonylamino-, Arylcarbonylamino-, Heteroarylcarbonylaminogruppe oder Ähnlichem ausgewählt sind. Heterorayl soll auch oxidiertes S oder N umfassen wie Sulfonyl-, Sulfonyl- und N-Oxidgruppen eines tertiären Ringstickstoffs. Ein Kohlenstoff- oder Stickstoffatom ist die Bindungsstelle der Heteroaryl-Ringstruktur, so dass ein stabiler aromatischer Ring erhalten bleibt. Beispiele für Heteroarylgruppen sind Pyridinyl-, Pyridazinyl-, Pyrazinyl-, Chinazolinyl-, Purinyl-, Indolyl-, Chinolinyl-, Pyrimidinyl-, Pyrrolyl-, Oxazolyl-, Thiazolyl-, Thienyl-, Isoxazolyl-, Oxathiadiazolyl-, Isothiazolyl-, Tetrazolyl-, Imidazolyl-, Triazinyl-, Furanyl-, Benzofuryl-, Indolylgruppen und Ähnliches. Eine substituierte Heteroarylgruppe enthält einen Substituenten, der an ein verfügbares Kohlenstoff- oder Stickstoffatom für die Herstellung einer stabilen Verbindung gebunden ist.
"Heterocyclyl", allein oder in Kombination, betrifft eine nicht-aromatische Cycloalkylgruppe mit 5–10 Atomen, bei der 1–3 Kohlenstoffatome in dem Ring durch Heteroatome, ausgewählt aus O, S oder N, ersetzt sind und die gegebenenfalls Benzokondensierte oder kondensierte Heteroarylgruppen mit 5–6 Ringmitgliedern sind und/oder gegebenenfalls wie in dem Fall von Cycloalkylgruppen substituiert sind. Heterocyclyl soll auch oxidiertes S oder N umfassen wie Sulfonyl-, Sulfonyl- und N-Oxidgruppen eines tertiären Ringstickstoffs. Die Bindungsstelle ist an einem Kohlenstoff- oder Stickstoffatom. Beispiele für Heterocyclylgruppen sind Tetrahydrofuranyl-, Dihydropyridinyl-, Piperidinyl-, Pyrrolidinyl-, Piperazinyl-, Dihydrobenzofuryl-, Dihydroindolylgruppen und Ähnliches. Eine substituierte Heterocyclylgruppe enthält ein Substituenten-Stickstoffatom, das an ein verfügbares Kohlenstoff- oder Stickstoffatom für die Herstellung einer stabilen Verbindung gebunden ist.
"Substituierte Heteroarylgruppe" betrifft einen Heterocyclus, der gegebenenfalls mit einer oder mehreren funktionellen Gruppen wie Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Hydroxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierter Heterocyclus-, Heteroaryl-, substituierter Heteroaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und Ähnlichem mono- oder polysubstituiert ist.
"Aralkyl" betrifft die Gruppe -R-Ar, worin Ar eine Arylgruppe ist und R eine Niederalkyl- oder substituierte Niederalkylgruppe ist. Arylgruppen können wahlweise unsubstituiert oder mit z. B. Halogenatom, Niederalkyl-, Alkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Hydroxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierter Heterocyclus-, Heteroaryl-, substituierter Heteroaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und Ähnlichem substituiert sein.
"Heteroalkyl" betrifft die Gruppe -R-Het, worin Het eine Heterocyclusgruppe ist und R eine Niederalkylgruppe ist. Heteroalkylgruppen können wahlweise unsubstituiert oder mit z. B. Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierter Heterocyclus-, Heteroaryl-, substituierter Heteroaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und Ähnlichem substituiert sein.
"Heteroarylalkyl" betrifft die Gruppe -R-HetAr, worin HetAr eine Heteroarylgruppe ist und R eine Niederalkyl- oder substituierte Niederalkylgruppe ist. Heteroarylalkylgruppen können wahlweise unsubstituiert oder mit z. B. Halogenatom, Niederalkyl-, substituierter Niederalkyl-, Alkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierter Heterocyclus-, Heteroaryl-, substituierter Heteroaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und Ähnlichem substituiert sein.
"Cycloalkyl" betrifft eine bivalente cyclische oder polycyclische Alkylgruppe mit 3–-15 Kohlenstoffatomen.
"Substituierte Cycloalkylgruppe" betrifft eine Cycloalkylgruppe, die einen oder mehrere Substituenten wie Halogenatom, Niederalkyl-, substituierte Niederalkyl-, Alkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierte Heterocyclus-, Heteroaryl-, substituierte Heteroaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und Ähnliches umfasst.
"Cycloheteroalkyl" betrifft eine Cycloalkylgruppe, worin ein oder mehrere der Ringkohlenstoffatome durch ein Heteroatom (wie N, O, S oder P) ersetzt sind.
"Substituierte Cycloheteroalkylgruppe" betrifft eine Cycloheteroalkylgruppe wie hier definiert, die einen oder mehrere Substituenten wie Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Hydroxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierte Heterocyclus-, Heteroaryl-, substituierte Heteroaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und Ähnliches umfasst.
"Alkylcycloalkyl" bezeichnet die Gruppe -R-Cycloalkyl, worin Cycloalkyl eine Cycloalkylgruppe ist und R eine Niederalkyl- oder substituierte Niederalkylgruppe ist. Cycloalkylgruppen können wahlweise unsubstituiert oder mit z. B. Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Alkylthio-, Acetylen-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Hydroxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierter Heterocyclus-, Heteroaryl-, substituierter Heteroaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und Ähnlichem substituiert sein.
"Alkylcycloheteroalkyl" bezeichnet die Gruppe -R-Cycloheteroalkyl, worin R eine Niederalkyl- oder substituierte Niederalkylgruppe ist. Cycloheteroalkylgruppen können wahlweise unsubstituiert oder mit z. B. Halogenatom, Niederalkyl-, Niederalkoxy-, Alkylthio-, Amino-, Amido-, Carboxyl-, Acetylen-, Hydroxyl-, Aryl-, Aryloxy-, Heterocyclus-, substituierter Heterocyclus-, Heteroaryl-, substituierter Heteroaryl-, Nitro-, Cyan-, Thiol-, Sulfamidogruppe und Ähnlichem substituiert sein.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können wie in den Schemata 1–5 beschrieben hergestellt werden. Verbindungen mit der allgemeinen Formel II: Schema 1
wurden durch Palladium-vermitteltes Koppeln der Verbindung 1 mit Halogen-Pyrazolen der Formel VIII (Schema 4) in Gegenwart oder ohne Kupfersalze (K. Kato et al. J. Org. Chem. 1997, 62, 6833–6841; Palladium Reagents and Catalysts-Innovations in Organic Synthesis, Tsuji, John Wiley and Sons, 1995), gefolgt von einer Entschützung mit entweder TBAF oder NH₄F (Markiewicz et al., Tetrahedron Lett. (1988), 29, 1561) hergestellt. Die Herstellung der Verbindung 1 wurde beschrieben (K. Kato et al., J. Org. Chem. 1997, 62, 6833–6841) und ist in Schema 7 gezeigt.
Verbindungen mit der allgemeinen Formel VI können wie in Schema 2 gezeigt hergestellt werden. Verbindung III, die durch Umsetzen von II mit 2,2-Dimethoxypropan in Gegenwart einer
Schema 2
Säure erhalten werden kann, kann zu der Carbonsäure IV, basierend auf zu Verbindung IV strukturell ähnlichen Verbindungen, mit Hilfe von Kaliumpermanganat oder Pyridiniumchlorochromat usw. (Jones et al., J. Am. Chem. Soc. (1949), 71, 3994; Hudlicky, Oxidations in organic chemistry, American Chemical Society, Washington D. C., 1990) oxidiert werden. Eine Umsetzung des primären oder sekundären Amins der Formel NHR⁵R⁶ mit der Verbindung IV unter Verwendung von DCC (Fujino et al., Chem. Pharm. Bull. (1974), 22, 1857), PyBOP (J. Martinez et al., J. Med. Chem. (1988), 28, 1967) oder PyBrop (J. Caste et al., Tetrahedron (1991), 32, 1967) als Kopplungsbedingungen kann die Verbindung V ergeben. Ein Entschützen der Verbindung V kann durch Erhitzen mit 80% wässriger Essigsäure (T. W. Green und P. G. M. Wuts (1991), Protective Groups in Organic Synthesis, A, Wiley-Interscience Publication} oder mit wasserfreiem HCl (4N) erfolgen, um die Verbindung der allgemeinen Formel VI zu erhalten.
Schema 3
Alternativ können Verbindungen mit der allgemeinen Formel II auch durch eine Kopplung des Suzuki-Typs wie in Schema 3 gezeigt hergestellt werden. 2-Iodadenosin 6 kann in vier Schritten aus Guanosin 2, gemäß von in der Literatur beschriebenen Verfahren (M. J. Robins et al., Can. J. Chem. (1981), 59, 2601–2607; J. F. Cerster et al., Org. Synthesis, 242–243; V. Nair et al., J. Org. Chem. (1988), 53, 3051–3057) hergestellt werden. Eine Palladium-vermittelte Suzuki-Kopplung von 6 mit geeigneterweise substituierten Pyrazol-Boronsäuren XVII in Gegenwart einer Base kann die Endverbindungen mit der Allgemeinen Formel II bereitstellen (A. Suzuki, Acc. Chem. Res. (1982), 15, 178). Falls notwendig, können 2'-, 3'-, 5'-Hydroxylgruppen an 6 als TBDMS-Ether vor einer Suzuki-Kopplung geschützt werden.
Verbindungen mit der allgemeinen Formel VIII können entweder käuflich erworben oder gemäß der in Schema 4 gezeigten Schritte hergestellt werden. Eine Kondensation von 1,3-Diketo-Verbindungen der allgemeinen Formel IX mit Hydrazin in einem geeigneten Lösungsmittel kann Pyrazole mit der allgemeinen Formel X ergeben (R. H. Wiley et al., Org: Synthesis, Coll., Bd. IV (1963), 351). Diese Pyrazole können mit verschiedenen Alkylhalogeniden N-alkyliert werden, um Verbindungen mit der Formel XI zu ergeben, die bei einer Iodierung 4-Iod-Derivate mit der allgemeinen Formel VIII ergeben (R. Huttel et al., Justus Liebigs Ann. Chem. (1955), 593, 200).
Schema 4
5-Iodpyrazole mit der allgemeinen Formel XV können gemäß der in Schema 5 gezeigten Schritte hergestellt werden.
Schema 5
Eine Kondensation von 1,3-Diketo-Verbindungen der Formel XII mit Hydrazin in einem geeigneten Lösungsmittel kann Pyrazole mit der allgemeinen Formel XIII ergeben. Diese Pyrazole können mit verschiedenen Alkylhalogeniden N-alkyliert werden, um Verbindungen der Formel XIV zu ergeben. Ein Abziehen des 5-H mit einer starken Base, gefolgt von einem Abstoppen mit Iod, kann 5-Iod-Derivate mit der allgemeinen Formel XV bereitstellen (F. Effenberger et al., J. Org. Chem. (1984), 49, 4687).
4- oder 5-Iodpyrazole können in entsprechende Boronsäuren, wie in Schema 6 gezeigt, überführt werden. Eine Transmetallisierung mit n-BuLi, gefolgt von einer Behandlung mit Trimethylborat, kann Verbindungen mit der allgemeinen Formel XVI ergeben, die bei einer Hydrolyse Boronsäuren mit der allgemeinen Formel XVII bereitstellen können (F. C. Fischer et al., RECUEIL (1965), 84, 439).
Schema 6
2-Stannyladenosin 1 wurde in drei Schritten aus dem käuflich erhältlichen 6-Chlorpurinribosid nach in der Literatur beschriebenen Verfahren hergestellt (K. Kato et al., J. Org. Chem. (1997), 62, 6833–6841). Das Tri-TBDMS-Derivat wurde durch Behandeln von 8 mit TBDMSCI und Imidazol in DMF erhalten. Eine Lithiierung mit LTMP, gefolgt von einem Abstoppen durch Tri-n-butylzinnchlorid ergab ausschließlich das 2-Stannyl-Derivat 10. Eine Ammonolyse in 2-Propanol ergab das 2-Stannyladenosin 1. Eine Stille-Kopplung von 1 mit 1-Benzyl-4-iodpyrazol in Gegenwart von Pd(PPh₃)₄ und CuI ergab 11 (K. Kato et al., J. Org. Chem. (1997), 62, 6833–6841). Ein Entschützen von Silylgruppen an den 2'-, 3'- und 5'-Hydroxylgruppen mit 0,5 M Ammoniumfluorid in Methanol ergab 12 bei einer guten Ausbeute (Schema 7). Die Verbindungen 18–23 wurden in ähnlicher Weise hergestellt. Die für die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendeten Verfahren sind nicht auf die vorstehend beschriebenen Verfahren begrenzt. Weitere Verfahren können in den nachstehenden Quellen gefunden werden: J. March, Advanced Organic Chemistry; Reaktion Mechanisms and Studies (1992), A, Wiley Interscience Publications; und J. Tsuji, Palladium reagents and catalysts-Innovations in organic synthesis, John Wiley and Sons, 1995.
Schema 7
Erfindungsgemäße Verbindungen sind in Verbindung mit radioaktiven Bildgebungsmitteln für eine Darstellung der Koronaraktivität geeignet. Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind A_2A-Agonisten, die vermutlich eine spezifische Aktivierung von Adenosin-A_2A-Rezeptoren in Koronargefäßen im Gegensatz zu Adenosin-A₁-Rezeptoren im Vorhof und AV-Knoten und/oder A_2B-Rezeptoren in peripheren Gefäßen bereitstellen, wodurch unerwünschte Nebenwirkungen vermieden werden. Bei einer Verabreichung in einer therapeutischen Menge verursachen die erfindungsgemäßen Verbindungen eine Vasodilatation von Koronarblutgefäßen, um einen Koronar-Steal-Zustand zu induzieren, worin gesunde Koronargefäße Blut aus kranken Gefäßen entnehmen, was zu einem mangelhaften Blutfluss zu Herzgeweben führt. Eine Koronardarstellung identifiziert sodann Koronarregionen mit einem gesunden und nicht-gesunden Blutfluss. Niedrigere Dosen der A_2A-Agonisten können eine günstige Koronar-Vasodilatation (weniger ernsthaft) bei der Behandlung von chronischer CAD bereitstellen.
Als A_2A-Agonisten sind die erfindungsgemäßen Verbindungen auch bei einer unterstützenden Therapie von Angioplastie, um eine Dilatation zu induzieren, bei einer Hemmung der Blutplättchen-Aggregation und als allgemeines Antiphlogistikum geeignet. A_2A-Agonisten wie die erfindungsgemäßen Verbindungen können die vorstehend beschriebenen therapeutischen Vorteile dadurch bereitstellen, dass sie eine Aktivierung von Neutrophilen verhindern (Purinergic Approaches in Experimental Therapeutics, K. A. Jacobson und M. F. Jarvis, 1997, Wiley, New York). Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind auch bei einem Zustand wirksam, der als No-Reflow bezeichnet wird und bei dem Blutplättchen und Neutrophile aggregieren und ein Blutgefäß blockieren. Als A_2A-Agonisten sind die erfindungsgemäßen Verbindungen bei No-Reflow dadurch wirksam, dass sie eine Aktivierung von Neutrophilen und Blutplättchen verhindern (z. B. vermutet man, dass sie eine Freisetzung von Superoxid aus Neutrophilen verhindern). Als A_2A-Agonisten sind die erfindungsgemäßen. Verbindungen auch als kardioprotektive Mittel aufgrund ihrer antiphlogistischen Wirkung auf Neutrophile einsetzbar. Somit werden sie in Situationen, bei denen das Herz einen ischämischen Zustand durchlaufen wird, wie bei einer Transplantation, geeignet sein.
Die Erfindung betrifft auch Pro-Pharmaka der vorstehend beschriebenen A_2A-Agonisten. Ein Pro-Pharmakon ist ein Arzneimittel, das chemisch modifiziert wurde und an seiner Wirkstelle biologisch inaktiv sein kann, das jedoch durch einen oder mehrere enzymatische oder in vivo-Vorgänge in die bioaktive Form abgebaut oder modifiziert wird. Die erfindungsgemäßen Pro-Pharmaka sollten zu der Stammverbindung ein unterschiedliches pharmakokinetisches Profil aufweisen, was eine verbesserte Resorption durch das Schleimhautepithel, eine bessere Salzformulierung und/oder Löslichkeit und eine verbesserte systemische Stabilität ermöglicht. Die vorstehend beschriebenen Verbindungen können vorzugsweise an einer oder mehreren Hydroxylgruppen modifiziert sein. Die Modifikationen können (1) Ester- oder Carbamatderivate, die beispielsweise durch Esterasen oder Lipasen gespalten werden können, (2) Peptide, die durch spezifische oder nicht-spezifische Proteasen erkannt werden können, oder (3) Derivate, die sich an einer Wirkstelle durch Membranselektion anhäufen, oder eine Pro-Pharmakon-Form oder eine modifizierte Pro-Pharmakon-Form oder eine jegliche Kombination aus (1) bis (3) sein.
Die Zusammensetzungen können oral, intravenös, durch die Epidermis oder auf irgendeine andere Art und Weise, die für eine Verabreichung therapeutischer Mittel bekannt ist, verabreicht werden. Das Behandlungsverfahren umfasst die Verabreichung einer wirksamen Menge der gewählten Verbindung, vorzugsweise dispergiert in einem pharmazeutischen Träger. Dosiseinheiten des aktiven Bestandteils werden im Allgemeinen aus einem Bereich von 0,01 bis 100 mg/kg ausgewählt, können jedoch durch den Fachmann abhängig von dem Verabreichungsweg, dem Alter und dem Zustand des Patienten einfach bestimmt werden. Diese Dosis wird typischerweise in einer Lösung etwa 5 Minuten bis etwa 1 Stunde oder mehr vor einer Koronardarstellung verabreicht. Keine nicht-akzeptierbaren toxischen Wirkungen werden erwartet, wenn erfindungsgemäße Verbindungen in therapeutischen Mengen verabreicht werden.
Falls die erfindungsgemäße Endverbindung eine basische Gruppe enthält, kann ein Säureadditionssalz hergestellt werden. Säureadditionssalze der Verbindungen werden in herkömmlicher Weise in einem geeigneten Lösungsmittel aus der Stammverbindung und einem Überschuss an Säure wie Chlorwasserstoff-, Bromwasserstoff-, Schwefel-, Phosphor-, Essig-, Malein-, Bernstein- oder Methansulfonsäure hergestellt. Die Chlorwasserstoff-Salzform ist besonders geeignet. Falls die Endverbindung eine saure Gruppe enthält, können kationische Salze hergestellt werden. Typischerweise wird die Stammverbindung- mit einem Überschuss eines alkalischen Reagenzes wie einem Hydroxid, Carbonat oder Alkoxid mit dem geeigneten Kation behandelt. Kationen wie Na⁺, K⁺, Ca²⁺ und NH₄ ⁺ sind Beispiele für in pharmazeutisch verträglichen Salzen vorkommende Kationen. Bestimmte Verbindungen bilden innere Salze oder Zwitterionen, die auch annehmbar sein können.
Pharmazeutische Zusammensetzungen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen und/oder Derivate davon umfassen, können als Lösungen oder lyophilisierte Pulver für eine parenterale Verabreichung formuliert werden. Pulver können durch Zugabe eines geeigneten Verdünnungsmittels oder eines anderen pharmazeutisch verträglichen Trägers vor einer Verwendung wieder aufgelöst werden. Bei einer Verwendung in einer flüssigen Form werden die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen vorzugsweise in eine gepufferte, isotonische, wässrige Lösung eingebaut. Beispiele für geeignete Verdünnungsmittel sind normale isotonische Salzlösung, Standard-5%-Dextrose in Wasser und gepufferte Natrium- oder Ammoniumacetatlösung. Solche flüssigen Formulierungen sind für eine parenterale Verabreichung geeignet, können jedoch auch für eine orale Verabreichung verwendet werden. Es kann erwünscht sein, Exzipienzien wie Polyvinylpyrrolidinon, Gelatine, Hydroxycellulose, Akaziengummi, Polyethylenglykol, Mannit, Natriumchlorid, Natriumcitrat oder irgendein anderes bekanntes Exzipiens zu pharmazeutischen Zusammensetzungen hinzuzugeben, die die erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen. Alternativ dazu können die pharmazeutischen Verbindungen für eine orale Verabreichung eingekapselt, tablettiert oder als Emulsion oder Sirup hergestellt werden. Pharmazeutisch verträgliche feste oder flüssige Träger können hinzugefügt werden, um die Zusammensetzung zu verstärken oder zu stabilisieren, oder um eine Herstellung der Zusammensetzung zu erleichtern. Flüssige Träger umfassen Sirup, Erdnussöl, Olivenöl, Glycerin, Kochsalzlösung, Alkohole und Wasser. Feste Träger umfassen Stärke, Lactose, Calciumsulfatdihydrat, Teffa alba, Magnesiumstearat oder Stearinsäure, Talkum, Pektin, Akaziengummi, Agar oder Gelatine. Der Träger kann auch ein Material für eine verzögerte Freisetzung wie Glycerinmonostearat oder Glycerindistearat, alleine oder zusammen mit einem Wachs, umfassen. Die Menge an festem Träger ist unterschiedlich, beträgt jedoch vorzugsweise etwa 20 mg bis etwa 1 g pro Dosiseinheit. Die pharmazeutischen Dosen werden mit Hilfe herkömmlicher Verfahren wie Vermahlen, Mischen, Granulieren und Verpressen, falls nötig, im Fall von Tablettenformen, oder Vermahlen, Mischen und Befüllen im Fall von Hartgelatinekapselformen, hergestellt. Wenn ein flüssiger Träger verwendet wird, wird die Zubereitung in Form eines Sirups, Elixiers, einer Emulsion oder einer wässrigen oder nicht-wässrigen Suspension vorliegen. Eine solche flüssige Formulierung kann direkt verabreicht oder in eine Weichgelatinekapsel gefüllt werden. Es ist bevorzugt, dass die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen als Lösung entweder oral oder intravenös durch kontinuierliche Infusion oder durch einen Bolus verabreicht werden.
Die nachstehenden Beispiele dienen der Veranschaulichung der Erfindung. Die Beispiele sind nicht begrenzend für die Erfindung zu verstehen, sondern werden beschrieben, um zu zeigen, wie die erfindungsgemäßen Verbindungen hergestellt und verwendet werden können. In den Beispielen sind alle Temperaturen in Grad Celsius angegeben.
BEISPIEL 1
4-Iod-1-benzylpyrazol (13)
Zu einer Lösung von 4-Iodpyrazol (400 mg, 2 mmol) in DMF (4 ml) bei 0°C wurde Natriumhydrid (80 mg, 60%ige Dispersion in Mineralöl, 2 mmol), gefolgt von Benzylbromid (342 mg, 2 mmol) gegeben und das Reaktionsgemisch 2 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck einkonzentriert und der Rest durch Säulenchromatographie aufgereinigt, um N-Benzylpyrazol in fast quantitativer Ausbeute zu ergeben. ¹H-NMR 5,29 (s, 2H), 7,18–7,28 (m, 2H), 7,28–7,40 (m, 4H), 7,53 (s, 1H).
BEISPIEL 2
9-{(2R,3R,4R,5R)-3,4-Bis-(1,1,2,2-tetramethyl-l-silapropoxy)-5-[(1,1,2,2-tetramethyl-1-silapropoxy)methyl]oxolan-2-yl}-2-[1-benzylpyrazol-4-y1]purin-6-ylamin (11)
Ein Gemisch von Verbindung 1 (50 mg, 0,056 mmol), N-Benzyl-4-iodpyrazol 13 (50 mg, 0,183 mmol), Pd(PPh₃)₄ (20 mg, 15 Mol-%) und CuI (40 mg, 0,2 mmol) in DMF (1 ml) wurde 1 Stunde bei 90°C gerührt. Die Reaktion wurde unter vermindertem Druck einkonzentriert und der Rest durch präparative Dünnschichtchromatographie (Methylenchlorid : Methanol 10 : 1) aufgereinigt, um die Verbindung 11 zu liefern: ¹H-NMR (CDCl₃) δ 0,00 (s, 3H, CH3), 0,01 (s, 3H, CH3), 0,04 (s, 3H, CH3), 0,07 (s, 3H, CH3), 0,11 (s, 3H, CH3), 0,14 (s, 3H, CH3), 0,78 (s, 9H, t-bu), 0,83 (s, 9H, t-bu), 0,91 (s, 9H, t-bu), 3,80 (d, 1H), 4,05 (d, 1H), 4,11–4,12 (m, 1H), 4,33 (d, 1H), 4,50–4,52 (m, 1H), 5,35 (m, 2H), 5,65 (bs, 2H, D2O-austauschbar), 6,05 (d, 1H), 7,28–7,40 (m, 5H), 7,98 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 8,22 (s, 1H).
9-{(2R,3R,4R,5R)-3,4-Bis-(1,1,2,2-tetramethyl-1-silapropoxy)-5-[(1,1,2,2-tetramethyl-1-silapropoxy)methyl]oxolan-2-yl}-2-(1-pentylpyrazol-4-yl]purin-6-yl-amin (14)
Verbindung 14 wurde auf gleiche Weise wie Verbindung 11 hergestellt, wobei 4-Iodbenzylpyrazol durch 4-Iodpentylpyrazol ersetzt wurde, um Verbindung 14 zu liefern: ¹H-NMR (CDCl₃) 0,00 (s, 3H, CH3), 0,01 (s, 3H, CH3), 0,04 (s, 3H, CH3), 0,07 (s, 3H, CH3), 0,11 (s, 3H, CH3), 0,14 (s, 3H, CH3), 0,78 (s, 9H, t-bu), 0,80 (t, 3H), 0,83 (s, 9H, t-bu), 0,91 (s, 9H, t-bu), 1,25–1,40 (m, 4H), 1,85–1,95 (m, 2H), 3,82 (d, 1H), 4,08 (d, 1H), 4,20-4,28 (m, 3H), 4,32–4,34 (m, 1H), 4,55–4,57 (m, 1H), 5,35 (m, 2H), 5,70 (bs, 2H, D2O-austauschbar), 6,08 (d, 1H), 7,28–7,40 (m, 5H), 8,05 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 8,20 (s, 1H).
9-{(2R,3R,4R,5R)-3,4-Bis-(1,1,2,2-tetramethyl-1-silapropoxy)-5-[(1,1,2,2-tetramethyl-1-silapropoxy)methyl]oxolan-2-yl}-2-[1-methylpyrazol-4-yl]purin-6-yl-amin (15)
Verbindung 15 wurde in der gleichen Weise wie Verbindung 11 hergestellt, wobei 4-Iodbenzylpyrazol durch 4-Iodmethylpyrazol ersetzt wurde, um Verbindung 15 zu liefern: ¹H-NMR (CDCl₃) 0,00 (s, 3H, CH3), 0,01 (s, 3H, CH3), 0,04 (s, 3H, CH3), 0,07 (s, 3H, CH3), 0,11 (s, 3H, CH3), 0,14 (s, 3H, CH3), 0,78 (s, 9H, t-bu), 0,83 (s, 9H, t-bu), 0,91 (s, 9H, t-bu), 3,8 (d, 1H), 3,90 (s, 3H, N-CH3), 4,05 (d, 1H), 4,08- 4,12 (m, 1H), 4,30–4,32 (m, 1H), 4,55–4,60 (m, 1H), 5,60 (bs, 1H, D2O-austauschbar), 6,00-6,05 (m, 1H), 7,99 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,15 (s, 1H).
9-{(2R,3R,4R,5R)-3,4-Bis-(1,1,2,2-tetramethyl-1-silapropoxy)-5-[(1,1,2,2-tetramethyl-1-silapropoxy)methyl]oxolan-2-yl}-2-[1-(1-methylethyl)pyrazol-4-yl]purin-6-ylamin (16)
Verbindung 16 wurde in der gleichen Weise wie Verbindung 11 hergestellt, wobei 4-Iodbenzylpyrazol durch 4-Iod-(1-methylethyl)pyrazol ersetzt wurde, um Verbindung 16 zu liefern: ¹H-NMR (CDCl₃) 0,00 (s, 3H, CH3), 0,01 (s, 3H, CH3), 0,04 (s, 3H, CH3), 0,07 (s, 3H, CH3), 0,11 (s, 3H, CH3), 0,14 (s, 3H, CH3), 0,78 (s, 9H, t-bu), 0,83 (s, 9H, t-bu), 0,91 (s, 9H, t-bu), 1,55 (d, 6H, C(CH3)2), 3,8 (d, 1H), 4,05 (d, 1H), 4,08–4,15 (m, 1H), 4,30–4,32 (m, 1H), 4,44–4,56 (m, 2H), 5,55 (bs, 1H, D2O-austauschbar), 6,05 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 8,2 (s, 1H).
9-{(2R,3R,4R,5R)-3,4-Bis-(1,1,2,2-tetramethyl-1-silapropoxy)-5-[(1,1,2,2-tetramethyl-1-silapropoxy)methyl]oxolan-2-yl}-2-[1-(4-t-butylbenzyl)pyrazol-4-yl]purin-6-ylamin (17)
Verbindung 17 wurde in der gleichen Weise wie Verbindung 11 hergestellt, wobei 4-Iodbenzylpyrazol durch 4-Iod-(4-t-butylbenzyl)pyrazol ersetzt wurde, um Verbindung 17 zu, liefern: ¹H-NMR (CDCl₃) 0,00 (s, 3H, CH3), 0,01 (s, 3H, CH3), 0,04 (s, 3H, CH3), 0,07 (s, 3H, CH3), 0,11 (s, 3H, CH3), 0,14 (s, 3H, CH3), 0,78 (s, 9H, t-bu), 0,83 (s, 9H, t-bu), 0,91 (s, 9H, t-bu), 1,30 (s, 9H, t-bu), 3,8 (d, 1H), 4,05 (d, 1H), 4,08–4,15 (m, 1H), 4,30–4,32 (d, 1H), 4,47–4,49 (dd, 1H), 5,44 (bs, 1H, D2O- austauschbar), 6,01 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,2 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 7,99 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,20 (s, 1H).
BEISPIEL 3
(4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-benzylpyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol (12)
Eine Lösung eines Tri-TBDMS-Derivats (25 mg, 0,035 mmol) in einer 0,5 M Lösung von NH₄F in Methanol (5 ml) wurde 16 Stunden refluxiert. Das Reaktionsgemisch wurde einkonzentriert und der Rest durch präparative TLC (Methanol : Dichlormethan 9 : 1) aufgereinigt, um Verbindung 12 zu liefern: ¹H-NMR (CD3OD) 3,65 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 3,81 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,18–4,19 (m, 1H), 4,26 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,78 (dd, 1H), 5,23 (s, 2H), 5,72 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,15–7,17 (m, 2H), 7,17–7,27 (m, 3H), 7,80 (s, 1H), 8,10 (s, 2H).
(4S,2R,3R,5R)-2-[6-Amino-2-(1-pentylpyrazol-4-yl)purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol (18)
Verbindung 18 wurde in der gleichen Weise wie Verbindung 12 hergestellt. ¹H-NMR (CD3OD) 4 0,8 (t, J = 3,6 Hz, 3H), 1,20–1,26 (m, 4H), 1,76–1,80 (m, 2H), 3,67 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,85 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,03 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 4,19–4,20 (m, 1H), 4,28 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,78 (dd, 1H), 5,73 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 8,05, (s, 1H), 8,07 (s, 1H).
(4S,2R,3R,5R)-2-[6-Amino-2-(1-methylpyrazol-4-yl)purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol (19)
Verbindung 19 wurde in der gleichen Weise wie Verbindung 12 hergestellt; ¹H-NMR (CD3OD) 3,60 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 3,78 (s, 3H, N-CH3), 3,80 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,10-4,12 (m, 1H), 4,24 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,78 (dd, 1H), 5,69 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 8,01 (s, 1H).
(4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(methylethyl)pyrazol-4-yl]purin-9-y1}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol (20)
Verbindung 20 wurde in der gleichen Weise wie Verbindung 12 hergestellt. ¹H-NMR (CD3OD) 1,41 (d, J = 6,8 Hz, 6H), 3,66 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 3,80 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,16–4,18 (m, 1H), 4,25 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,40 (Septet, 1H), 4,77 (dd, 1H), 5,71 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 8,13 (s, 1H).
(4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(3-phenylpropyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)axolan-3,4-diol (21)
Verbindung 21 wurde in der gleichen Weise wie Verbindung 12 hergestellt. ¹H-NMR (CD3OD) 2,10 (t, J = 6,7 Hz, 2H, CH2), 2,51 (t, J = 6,7 Hz, 2H, CH2), 3,65 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 3,80 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,04 (t, J = 6,7 Hz, 1H), 4,16–4,17 (m, 1H), 4,25 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,79 (dd, 1H), 5,71 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,05–7,07 (m, 2H), 7,16–7,24 (m, 3H), 7,80 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 8,08 (s, 1H).
(4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(4-t-butylbenzyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol (22)
Verbindung 22 wurde in der gleichen Weise wie Verbindung 12 hergestellt. ¹H-NMR (CD3OD) 1,15 (s, 9H, t-bu), 3,55 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 3,75 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,18-4,19 (m, 1H), 4,26 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,65 (dd, 1H), 5,12 (s, 2H), 5,65 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,05 (d, 2H), 7,17 (d, 3H), 7,75 (s, 1H), 8,05 (s, 2H).
(4S,2R,3R,5R)-2-(6-Amino-2-pyrazol-4-ylpurin-9-yl)-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol (23)
Verbindung 23 wurde in der gleichen Weise wie Verbindung 12 hergestellt. ¹H-NMR (CD3OD) 3,75 (d, 1H, 5'-CH), 3,90 (d, 1H, 5'-CH), 4,15 (d, 2H, 4'-CH), 4,35 (m, 1H, 3'-CH), 4,85 (m, 1H, 2'-CH), 5,95 (d, 1H, 1'-CH), 8,20 (s, 1H, 8-H), 8,25 (s, 2H, Ar).
(4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-pent-4-enylpyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol (24)
Verbindung 24 wurde in der gleichen Weise wie Verbindung 12 hergestellt. [MS 402 (M + 1)]
(4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-decylpyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)-oxolan-3,4-diol (25)
Verbindung 25 wurde in der gleichen Weise wie Verbindung 12 hergestellt. [MS 430 (M + 1)]
(4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(cyclohexylmethyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl}oxolan-3,4-diol (26)
Verbindung 26 wurde in der gleichen Weise wie Verbindung 12 hergestellt. [MS 474 (M + 1)]
(4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(2-phenylethyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol (27)
Verbindung 27 wurde in der gleichen Weise wie Verbindung 12 hergestellt. [MS 438 (M + 1)]
(4S,2R,3R,SR)-2-{6-Amino-2-[1-(3-cyclohexylpropyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol
Verbindung 28 wurde in der gleichen Weise wie Verbindung 12 hergestellt. [MS 458 (M + 1))
(4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(2-cyclohexylethyl/pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl/oxolan-3,4-diol (29)
Verbindung 29 wurde in der gleichen Weise wie Verbindung 12 hergestellt. [MS 444 (M + 1)]
BEISPIEL 4
Erfindungsgemäße Verbindungen wurden getestet, um ihre Affinität für den A_2A-Rezeptor in einer Striatum-Membranpräparation aus Schweinen zu bestimmen. Zusammengefasst wurden 0,2 mg Schweine-Striatum-Membranen mit Adenosin-Deaminase und 50 mM Tris-Puffer (pH = 7,4) behandelt, gefolgt von einem Mischen. Zu den Schweinemembranen wurden 2 μl einer seriell verdünnten DMSO-Stammlösung der erfindungsgemäßen Verbindungen bei Konzentrationen von 100 μM bis 10 nM gegeben oder im Fall der Kontrolle 2 μl DMSO alleine gegeben und sodann der Tritium-markierte Antagonist ZM 241385 in Tris-Puffer (50 mM, pH von 7,4) hinzugegeben, um eine Endkonzentration von 2 nM zu erreichen. Nach einer Inkubation bei 23°C für 2 Stunden wurden die Lösungen mit Hilfe eines Membranernters abfiltriert, wobei die Membranen mehrfach gewaschen wurden (3 x). Die Filterscheiben wurden in einem Szintillationscocktail ausgezählt, was Aufschluss über die Menge an verdrängtem Tritium-markiertem ZM durch die erfindungsgemäßen kompetitiven Bindeverbindungen gab. Eine Kurve mit mehr als 5 Punkten wurde für die Erstellung von IC50-Werten verwendet und die Anzahl an Experimenten ist in der nachstehenden Tabelle 1 angegeben.
Tabelle 1
BEISPIEL 5
Das Ziel dieses Experiments war eine Bestimmung der Affinität und Rezeptor-Bindeselektivität einer erfindungsgemäßen Verbindung für A₁-, A_2A-, A_2B- und A₃-Adenosin-Rezeptoren. Eine molekulare Klonierung identifizierte und bestätigte die Existenz von vier Subtypen von Adenosin-Rezeptoren (AdoRs), bezeichnet als A₁-, A_2A-, A_2B- und A₃-AdoR (Linden, 1994). Diese AdoR-Subtypen weisen eine unterschiedliche anatomische Verteilung, unterschiedliche pharmakologische Eigenschaften und physiologische Funktionen auf (Shryock und Belardinelli, 1997). A₁- und A₃-AdoRs koppeln an inhibitorische G-Proteine (G_i/_o) und verringern die Aktivität von Adenylylcyclase, während A_2A- und A_2B-AdoRs den intrazellulären cAMP-Gehalt durch eine Kopplung an stimulierende G-Proteine (G_s) erhöhen.
Liganden mit einer hohen Wirksamkeit und Gewebe/Organ-Selektivität für bestimmte Adenosin-Rezeptor-Subtypen weisen therapeutische und diagnostische Möglichkeiten für eine Vielzahl von Erkrankungen (wie Arrhythmien, ischämische Herzerkrankungen, Asthma und Parkinson-Krankheit) auf und sind die Zielrichtung von beträchtlicher Forschung durch Universität und Industrie. Hier beschreiben wir die pharmakologische und funktionelle Charakterisierung einer Reihe neuer Adenosin-Analoga der Erfindung, wobei Säugerzelllinien eingesetzt werden, die endogene AdoRs oder rekombinante menschliche AdoRs exprimieren.
Materialien
Adenosin-Deaminase wurde von Boehringer Mannheim Biochemicals Indianapolis, IN, U.S.A. bezogen. [³H]ZM241385 (Charge Nr. 1) wurde von Tocris Cookson Ltd.
(Langford, Bristol, UK) bezogen. [³H]CPX (Charge Nr. 3329207) wurde von New England Nuclear (Boston, MA, USA) erworben. CGS21680 (Charge Nr. SW-3R-84 und 89H4607), NECA (Charge Nr. OXV-295E), R-PIA (Charge Nr. WY-V-23), Rolipram und HEK-hA_2A-AR-Membranen wurden von Sigma-RBI (Natick, MA) bezogen. WRC-0470 wurde gemäß K. Niiya et al., J. Med. Chem. 35: 4557–4561 (1992) hergestellt. Die erfindungsgemäßen Verbindungen 18 und 12 wurden synthetisiert und als Stammlösungen (10 mmol/l in DMSO) hergestellt.
Zellkultur und Membranherstellung
PC 12-Zellen wurden von der American Type Culture Collection bezogen und in DMEM mit 5% fötalem Rinderserum, 10% Pferdeserum, 0,5 mM L-Glutamin, 100 U/ml Penicillin, 0,1 mg/ml Streptomycin und 2,5 μg/ml Amphotericin vermehrt. HEK-293-Zellen, die stabil rekombinante menschliche A_2B-AdoRs exprimieren (HEK-hA_2B-AdoR), wurden in DMEM vermehrt, das mit 10% fötalem Rinderserum und 0,5 mg/ml G-418 supplementiert wurde. CHOK1-Zellen, die die menschlichen rekombinanten A₁-AdoR (CHO-hA₁-AdoR) und A₃-AdoR (CHO-hA₃-AdoR) stabil exprimierten, wurden als Monolayer in 150-mm-Plastikkulturschalen in Ham's F-12-Medien bei 0,5 mg/ml G-418 vermehrt, die mit 10% fötalem Rinderserum und supplementiert worden waren. Die Zellen wurden unter 5% CO₂/95% Luft bei 37°C kultiviert.
Für eine Herstellung von Membranen wurden die Zellen von den Kulturschalen in 50 mM eiskaltem Tris-HCl-Puffer (pH 7,4) abgelöst. Die Zellsuspensionen wurden mit Polytron 30 Sekunden bei der Einstellung 4 homogenisiert und 15 Minuten bei 48 000 g abzentrifugiert. Die Niederschläge wurden dreimal durch Re-Suspendieren in eiskaltem Tris-HCl-Puffer und Zentrifugieren gewaschen. Der endgültige Niederschlag wurde in einem kleinen Volumen Tris-HCl re-suspendiert, auf Portionen aufgeteilt und bei –80°C bis zu einer Verwendung für Rezeptor-Bindetests eingefroren. Die Proteinkonzentration der Membransuspensionen wurde durch das Bradford-Verfahren (Bio-Rad) mit Rinderserum als Standard bestimmt.
Kompetitions-Bindungstests
Kompetitionstests erfolgten, um die Affinitäten (K_i) der nachstehenden unmarkierten Verbindungen (Kompetitionsmittel): Verbindungen WRC-0470, Verbindung 18, Verbindung 12, NECA, CGS21680 und R-PIA für A₁-AdoRs ([³H]DPCPX-Bindestel len auf CHO-hA₁-AdoR-Zellmembranen), A_2A-AdoRs ([³H]ZM241385-Bindestellen auf PC12- und HEK-hA_2A-AR-Zellmembranen), A_2B-AdoRs ([³H]DPCPX-Bindestellen auf HEK-hA_2B-AdoR-Zellmembranen) und A₃-AdoRs ([¹²⁵I]ABMECA-Bindestellen auf CHO-hA₃-AdoR-Zellmembranen) zu bestimmen. Membransuspensionen wurden 2 Stunden bei Raumtemperatur in 50 mM Tris-HCl-Puffer (pH 7,4) mit ADA (1 E/ml), Gpp(NH)p (100 μM), Radioligand {[³H]ZM241385 (~1,5 bis 5 nmol/l), [³H]DPCPX (~2,5 bis 3,0 nmol/l im Fall von A₁ und 30 nM im Fall von A_2B) oder [¹²⁵I]ABMECA (1 nM)} und zunehmend höheren Konzentrationen der Kompetitionsmittel inkubiert. Am Ende der Inkubation wurden gebundene und freie Radioliganden durch Filtration durch Whatman GF/C-Glasfaserfilter mit Hilfe eines Brandel-Gewebeernters (Gaithersburg, MD) aufgetrennt. Eine dreifache Bestimmung erfolgte für alle Konzentrationen des Kompetitionsmittels.
Untersuchungsverlauf (Protokolle)
Die Affinität (K_i) verschiedener CVT-Verbindungen für den A₁- und A_2A-Adenosin-Rezeptor wurde durch ihr Vermögen, um [³H]CPX (A₁)- oder [³H]ZM241385 (A_2A)-Bindestellen auf von CHO-hA₁-AdoR-, PC12- oder HEK-hA_2A-AdoR-Zellen abgeleiteten Membranen zu kompetitieren, bestimmt. R-PIA und CGS21680, Agonisten, die für A₁ bzw. A_2A selektiv sind, und NECA, ein nicht-selektiver AdoR-Agonist, wurden als Kontrollen verwendet. Um einen Vergleich zu erleichtern und die Verkomplizierung vielfacher Affinitätszustände aufgrund einer Rezeptor-Kopplung an G-Proteine zu vermeiden, erfolgten die Kompetitions-Bindestudien in Gegenwart von Gpp(NH)p (100 μM), um Rezeptoren von den G-Proteinen zu entkoppeln. Die Affinität ausgewählter Verbindungen für A_2B- und A₃-Rezeptoren wurden durch ihr Vermögen bewertet, um [³H]CPX (A_2B)- und (¹²⁵I]ABMECA (A₃)-Bindestellen auf von HEK-hA_2B-AdoR- bzw. CHO-hA₃-AdoR-Zellen abgeleiteten Membranen zu kompetitieren.
Die funktionelle Wirksamkeit und Selektivität dieser Arzneimittel für A_2A- gegenüber A_2B-AdoRs wurden durch Bestimmung ihrer Wirkungen auf eine A_2A- oder A_2B- vermittelte Anhäufung von cAMP in PC12- bzw. HEK-293-Zellen bewertet. In diesen Experimenten wurden CGS21680 und NECA als Positivkontrollen verwendet.
Ergebnisse
Die Affinitäten (K_i) von WRC-0470, Verbindung 18 und Verbindung 12 für menschliche A₁- und A_2A-AdoRs aus Ratte und Mensch, wie durch Kompetitions-Bindeuntersuchungen bestimmt, sind in der nachstehenden Tabelle 2 zusammengefasst. Mit Ausnahme von Verbindung 12 zeigen alle Verbindungen eine mäßige Selektivität für den menschlichen A_2A-Rezeptor gegenüber dem A₁-Rezeptor.
Tabelle 2 – Bindeaffinitäten von Adenosin-Rezeptor-Agonisten für A_2A-AdoRs und A₁-AdoRs K_i/nmol/l (pK_i ± SEM)
Die Ergebnisse dieses Experiments zeigen, dass Verbindung 18 ein niedrig-affiner A_2A-Agonist ist.
BEISPIEL 6
Ziel dieses Beispiels war eine pharmakologische Charakterisierung der Wirkungen von Verbindungen 12 und 18 der Erfindung auf das Koronararterien-Leitvermögen. Insbesondere waren die Experimente darauf ausgerichtet, die Wirksamkeit der Verbindungen 12 und 18 zu bestimmen, und es wurde deren Wirksamkeit mit der von Adenosin und anderen ausgewählten A_2A-AdoR-Agonisten verglichen.
Im Herzen vermittelt der A_2A-Adenosin-Rezeptor die Koronarvasodilatation, die von Adenosin hervorgerufen wird, während der A₁-Rezeptor die herzsenkenden Wirkungen von Adenosin vermittelt wie die negativen chronotropen und dromotropen (AV-Blockierung) Wirkungen.
Mehrere wirksame und selektive Liganden, sowohl Agonisten als auch Antagonisten, für die A₁- und A_2A-AdoRs wurden synthetisiert. Es wurde vermutet, dass A₁-AdoRs im Herzen als Antiarrhythmika geeignet sind, während Agonisten von A_2A-AdoRs für eine selektive Koronarvasodilatation entwickelt werden.
Eine Reihe von Adenosin-Derivaten, die auf die selektive Aktivierung des A_2A-Adenosin-Rezeptors (A_2A-AdoR) gerichtet sind, wurden für eine Entwicklung von Koronarvasodilatatoren synthetisiert. Insbesondere beschreiben wir in dieser Untersuchung die Wirkung einer Reihe neuer A_2A-AdoR-Agonisten auf das Leitvermögen von Koronararterien (Vasodilatation) in isolierten perfundierten Herzen von Ratten und Meerschweinchen.
Materialien
Ratten (Sprague Dawley) und Meerschweinchen (Hartley) wurden von Simonsen bzw. Charles Rivers bezogen. WRC-0470 wurde gemäß K. Niiya et al., J. Med. Chem. 35: 4557–4561 (1992) hergestellt. Verbindung 12 und Verbindung 18 der Erfindung wurden wie vorstehend beschrieben hergestellt. CGS21680 (Charge Nr. 89H4607) und Adenosin (Charge Nr. 123HO94) wurden von Sigma bezogen. Krebs-Henseleit-Lösung wurde gemäß Standardverfahren hergestellt und 0,9%ige Kochsalzlösung wurde von McGraw, Inc. (Charge Nr. J8B246) bezogen.
Verfahren
Erwachsene Sprague Dawley-Ratten und Hartley-Meerschweinchen beiden Geschlechts mit einem Gewicht von 230 bis 260 g bzw. 300 bis 350 g wurden in dieser Untersuchung verwendet. Die Tiere wurden durch peritoneale Injektion eines Cocktails mit Ketamin und Xylazin (Ketamin 100 mg, Xylazin 20 mg/ml) anästhesiert. Der Brustkorb wurde geöffnet und das Herz schnell entfernt. Das Herz wurde kurz mit eiskalter Krebs-Henseleit-Lösung (vgl. unten) gespült und die Aorta kanuliert. Das Herz wurde sodann bei einer Flussrate von 10 ml/min mit modifizierter Krebs-Henseleit (K-H)-Lösung mit NaCl 117,9, KCl 4,5, CaCl₂ 2,5, MgSO₄ 1,18, KH₂PO₄ 1,18, Pyruvat 2,0 mmol/l perfundiert. Die K-H-Lösung (pH 7,4) wurde kontinuierlich mit 95% O₂ und 5% CO₂ begast und auf 35 ± 0,50°C erwärmt. Das Herz wurde elektrisch bei einer festen Zykluslänge von 340 ms (250 Schläge/min) mit Hilfe einer bipolaren Elektrode, die auf der linken Vorkammer angebracht war, in Schritt gehalten. Die elektrischen Stimuli wurden durch einen Grass-Stimulator (Modell 548, W. Warwick, RI) erzeugt und durch eine Stimuli-Isolationseinheit (Modell SIU5, Astro-Med, Inc., NY) als Quadratwellen-Pulse von 3 ms Dauer und einer Amplitude von mindestens dem Doppelten der Schwellenintensität zugeführt.
Der Koronarperfusionsdruck (CPP) wurde mit Hilfe eines Druckübermittlers gemessen, der mit Hilfe eines T-Verbindungsstücks, das etwa 3 cm oberhalb des Herzens positioniert war, mit der Aortakanüle verbunden war. Der Koronarperfusionsdruck wurde während des gesamten Experiments überwacht und entweder auf einem Bandschreiber (Gould Recorder 22005) oder einem computerisierten Aufzeichnungssystem (PowerLab/4S, ADinstruments Pty Ltd., Australien) aufgezeichnet. Nur Herzen mit einem CPP von 60 bis 85 mm Hg (ohne Arzneimittel) wurden in der Untersuchung verwendet. Das Koronarleitvermögen (in ml/min/mm Hg) wurde als Verhältnis zwischen der Koronarperfusionsgeschwindigkeit (10 ml/min) und dem Koronarperfusionsdruck berechnet.
Bei Experimenten, in denen eine A₁-Adenosin-Rezeptor-vermittelte negative dromotrope Wirkung gemessen wurde, wurden Elektrogramme der Vorhof- und Kammeroberfläche während einer konstanten Schrittgebung des Vorhofs aufgezeichnet. Die Wirkung verschiedener Adenosin-Rezeptor-Agonisten auf die atrioventrikuläre Überleitungszeit wurde wie von Jenkins und Belardinelli, Circ. Res. 63: 97–116 (1988) beschrieben bestimmt.
Stammlösungen der erfindungsgemäßen Verbindung (5 mM) und von CGS21680 (5 mM) wurden in Dimethylsulfoxid (DMSO) hergestellt, das von Aldrich, PS 04253MS, bezogen wurde. Eine Stammlösung von Adenosin (1 mg/ml) wurde in Kochsalzlösung hergestellt. Eine Konzentration wurde aus der Stammlösung durch Verdünnen in Kochsalzlösung, um Lösungen mit entweder 2 × 10^–4 oder 2 × 10^–5 M herzustellen, argefertigt. Diese Lösungen wurden in die Perfusionsleitung der Vorrichtung als Bolusinjektionen von 20 μl injiziert. In manchen Experimenten wurden die Lösungen in eine 30 ml-Glasspritze gegeben und die Arzneimittel bei Geschwindigkeiten infundiert, die notwendig sind, um die gewünschten Perfusatkonzentrationen (z. B. 10, 100 nM, usw.) zu erreichen.
Koronarvasodilatation von Aza-Adenosin-Rezeptor-Agonisten
Konzentrations-Reaktions-Beziehungen für die Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen (0,1 bis 400 nM) und von CGS21680 (0,1 bis 10 nM), das Koronarleitvermögen zu erhöhen, wurden erhalten. Nach dem Aufzeichnen von Kontrollmessungen des Koronarperfusionsdrucks wurden progressiv höhere Konzentrationen der Adenosin-Rezeptor-Agonisten verabreicht, bis eine maximale Koronarvasodilatation beobachtet wurde. Die Reaktionen im Fließgleichgewicht für jede Konzentration der Adenosin-Rezeptor-Agonisten wurden aufgezeichnet. Für jedes Herz dieser Reihen (4 bis 6 Herzen für jeden Agonisten) wurde nur ein Agonist getestet und nur eine Konzentrations-Reaktions-Beziehung erhalten.
Ergebnisse
Bei isolierten perfundierten Herzen (n = 36 für Ratten und 18 für Meerschweinchen), die bei einer konstanten Vorhof-Zykluslänge von 340 ms im Schritt gehalten wurden, verursachten Adenosin, CGS21680, WRC0470 und die Verbindungen 12 und 18 der Erfindung eine konzentrationsabhängige Erhöhung des Koronarleitvermögens. CGS21680 und WRC0470 waren die wirksamsten Agonisten dieser Serien. Die Verbindungen 12 und 18 waren etwa genauso wirksam wie Adenosin bei einer Erhöhung des Koronarleitvermögens. Es soll angemerkt werden, dass alle Agonisten um ein Mehrfaches wirksamere Koronarvasodilatatoren bei Rattenherzen als bei Meerschweinchenherzen waren.
Tabelle 3 – Wirksamkeit von Adenosin und A_2A-Adenosin-Rezeptor-Agonisten bei einer Erhöhung des Koronarleitvermögens in isolierten perfundierten Herzen von Ratten und Meerschweinchen
BEISPIEL 7
Das Ziel dieses Beispiels war eine Bestimmung der funktionellen Selektivität von Verbindung 18 bei einer Erzeugung von Koronarvasodilatation. Insbesondere wurde die Wirksamkeit von Verbindung 18, eine Koronarvasodilatation (A_2A-AdoR-Reaktion) und eine Verlängerung der AV-Knoten-Überleitungszeit (A₁-AdoR-Reaktion) zu erzeugen, bei Ratten- und Meerschweinchenherzen bestimmt.
Materialien
Sprague Dawley-Ratten wurden von Simonsen bezogen. Hartley-Meerschweinchen wurden von Charles River bezogen. Verbindung 18 wurde wie vorstehend beschrieben hergestellt. CVT-510 – 2-{6-[((3R)-Oxolan-3-yl)amino)purin-9-yl}(4S,3R,5R)-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol – wurde gemäß dem in der US-PS 5,789,416 beschriebenen Syntheseverfahren hergestellt. Ketamin wurde von Fort Dodge Animal Health (Charge Nr. 440444) und Xylazin von Bayer (Charge Nr. 26051 A) bezogen. Krebs-Henseleit-Lösung wurde gemäß Standardverfahren hergestellt und 0,9% Natriumchlorid wurde von McGraw, Inc. (Charge Nr. J8B246) bezogen.
Herstellung von isolierten perfundierten Herzen
Ratten und Meerschweinchen beiden Geschlechts mit einem Gewicht von 230 bis 260 g bzw. 300 bis 350 g wurden in dieser Untersuchung verwendet. Die Tiere wurden durch peritoneale Injektion eines Cocktails mit Ketamin und Xylazin (Ketamin 100 mg, Xylazin 20 mg/ml) anästhesiert. Der Brustkorb wurde geöffnet und das Herz schnell entfernt. Das Herz wurde kurz mit eiskalter Krebs-Henseleit-Lösung (vgl. unten) gespült und die Aorta kanuliert. Das Herz wurde sodann bei einer Flussrate von 10 ml/min mit modifizierter Krebs-Henseleit (K-H)-Lösung mit NaCl 117,9, KCl 4,5, CaCl₂ 2,5, MgSO₄ 1,18, KH₂PO₄ 1,18, Pyruvat 2,0 mmol/l perfundiert. Die K-H-Lösung (pH 7,4) wurde kontinuierlich mit 95% O₂ und 5% CO₂ begast und auf 35 ± 0,50°C erwärmt. Das Herz wurde elektrisch bei einer festen Zykluslänge von 340 ms (250 Schläge/min) mit Hilfe einer bipolaren Elektrode, die auf der linken Vorkammer angebracht war, in Schritt gehalten. Die elektrischen Stimuli wurden durch einen Grass-Stimulator (Modell 548, W. Warwick, RI) erzeugt und durch eine Stimuli-Isolationseinheit (Modell SIUS, Astro-Med, Inc., NY) als Quadratwellen-Pulse von 3 ms Dauer und einer Amplitude von mindestens dem Doppelten der Schwellenintensität zugeführt.
Der Koronarperfusionsdruck (CPP) wurde mit Hilfe eines Druckübermittlers gemessen, der mit Hilfe eines T-Verbindungsstücks, das etwa 3 cm oberhalb des Herzens positioniert war, mit der Aortakanüle verbunden war. Der Koronarperfusionsdruck wurde während des gesamten Experiments überwacht und entweder auf einem Bandschreiber (Gould Recorder 22005) oder einem computerisierten Aufzeichnungssystem (PowerLab/4S, ADinstruments Pty Ltd., Australien) aufgezeichnet. Nur Herzen mit einem CPP von 60 bis 85 mm Hg (ohne Arzneimittel) wurden in der Untersuchung verwendet. Das Koronarleitvermögen (in ml/min/mm Hg) wurde als Verhältnis zwischen der Koronarperfusionsgeschwindigkeit (10 ml/min) und dem Koronarperfusionsdruck berechnet.
Eine A₁-Adenosin-Rezeptor-vermittelte Senkung der AV-Knoten-Überleitungszeit (negative dromotrope Wirkung) wurde gemessen. Elektrogramme der Vorhof- und Kammeroberfläche bei Ratten und His-Bündel-Elektrogramme bei Meerschweinchen wurden während einer konstanten Schrittgebung des Vorhofs aufgezeichnet. Die Wirkung von Verbindung 18 auf die atrioventrikuläre Überleitungszeit und das Stimulus-zu-His-Bündel-Intervall (S-H-Intervall) wurden wie von Jenkins und Belardinelli (1988) beschrieben bestimmt.
Die Wirkungen von Verbindung 18 auf das Koronarleitvermögen (A_2A-Wirkung) und die atrioventrikuläre Überleitungszeit oder das Stimulus-zu-His-Bündel (S-H)-Intervall (A₁-Wirkung) wurden sodann bestimmt. Die Herzen wurden für eine kontinuierliche Aufzeichnung des Koronarperfusionsdrucks (A_2A-Reaktion) und der atrioventrikulären (AV) Überleitungszeit oder des S-H-Intervalls (A₁-Reaktion) an Geräte angeschlossen. Bei jedem Experiment wurde eine Konzentrations-Reaktions-Beziehung der Verbindung 18 (n = 5 für Ratten und 5 für Meerschweinchen), das Koronarleitvermögen zu erhöhen und die AV-Überleitungszeit oder das S-H-Intervall zu verlängern, bestimmt. Nach Kontrollmessungen des CPP, der AV-Überleitungszeit oder des S-H-Intervalls wurden progressiv höhere Konzentrationen der Verbindung 18 verabreicht, bis eine maximale Koronarvasodilatation und Verlängerung der AV-Knoten-Überleitungszeit oder des S-H-Intervalls erreicht wurden. Bei verschiedenen Rattenherzen (n = 4) wurde die Wirkung verschiedener Konzentrationen (100–400 nM) von CVT510, einem A₁-Adenosin-Agonisten (Snowdy et al., 1999), auf die AV-Knoten-Überleitungszeit bestimmt und mit der von Verbindung 18 (0,1–30 μM) verglichen.
Die Konzentrations-Reaktions-Kurven für Verbindung 18 bei einer Erhöhung des Koronararterien-Leitvermögens und einer Verlängerung der AV-Knoten-Überleitungszeit oder des S-H-Intervalls sind in den 1 und 2 gezeigt. Bei Ratten und Meerschweinchen erhöhte Verbindung 18 das Koronarleitvermögen in einer konzentrationsabhängigen Weise. Die Wirksamkeiten (EC₅₀-Werte) für Verbindung 18 bei einer Erhöhung des Koronarleitvermögens in Rattenherzen betrug 68,9 ± 9,6 nM und 203 ± 22 nM bei Meerschweinchenherzen. Im Gegensatz dazu war die Wirkung dieses Agonisten auf das S-H-Intervall etwas unterschiedlich zwischen Ratten- und Meerschweinchenherzen. Bei Rattenherzen verlängerte Verbindung 18 nicht die AV-Knoten-Überleitungszeit (1), während der A₁-AdoR-Agonist CVT510 signifikant die AV-Knoten-Überleitungszeit verlängerte (3). Verbindung 18 verursachte bei Konzentrationen von 50 μM keine Verlängerung des S-H-Intervalls bei Meerschweinchenherzen (2).
Die Ergebnisse zeigen, dass Verbindung 18 ein Koronarvasodilatator (A_2A-AdoR-vermittelte Wirkung) ist, der keine negative dromotrope Wirkung (A₁-AdoR-vermittelte Wirkung) bei Rattenherzen aufweist. Bei Meerschweinchenherzen verursachte Verbindung 18 keine negative dromotrope Wirkung. Bei beiden Spezies (Ratte und Meerschweinchen) verursacht Verbindung 18 eine maximale Koronarvasodilatation bei Konzentrationen, die keine Verlängerung der AV-Knoten-Überleitungszeit verursachen, d.h. ohne eine negative dromotrope Wirkung. Es wurde auch beobachtet, dass Verbindung 18 eine höhere Affinität (d. h. >2-/>13-fach) für A_2A- als für A₁-AdoR aufweist und dass es eine merklich größere Rezeptor-Reserve für eine A_2A-AdoR-vermittelte Koronarvasodilatation gibt als für eine A₁-AdoR-vermittelte negative dromotrope Wirkung.
BEISPIEL 8
Die vorliegende Untersuchung diente dazu, die Hypothese zu testen, dass zwischen der Affinität (K_i oder pK_i) und Wirkdauer von A_2A-Adenosin-Rezeptoren (AdoR) eine umgekehrte Beziehung besteht. Insbesondere war das Ziel der Untersuchung eine Bestimmung der Beziehung zwischen der Dauer der Koronarvasodilatation, die durch ausgewählte Serien von hoch- und niedrig-affinen A_2A-AdoR-Agonisten bei isolierten Herzen von Ratten und anästhesierten Schweinen hervorgerufen wird, und der Affinität dieser Agonisten für A_2A-AdoRs im Striatum von Schweinen zu bestimmen.
Materialien
Ratten (Sprague Dawley) wurden von Simonen bezogen. Bauernhofschweine wurden von Division of Laboratory Animal Resources, University of Kentucky, erhalten. Die erfindungsgemäßen Verbindungen 12, 18, 21 und 13 wurden wie in den vorstehend beschriebenen Verfahren hergestellt. YT-0146 wurde wie in der US-PS 4,956,345 beschrieben hergestellt. WRC-0470 wurde wie von K. Niiya et al., J. Med. Chem. 35: 4557–4561 (1992) beschrieben hergestellt. CGS21680 wurde von Research Biochemicals, Inc. und Sigma bezogen und R-PIA (Charge Nr. WY-V-23) wurde von Research Biochemicals, Inc. bezogen. HENECA war ein Geschenk von Prof. Gloria Cristalli der University of Camerino, Italien.
Anästhetika: Ketamin wurde von Fort Dodge Animal Health bezogen. Xylazin wurde von Bayer gekauft. Natriumpentobarbital wurde von The Butler Co. und Phenylephrin von Sigma bezogen. DMSO wurde von Sigma und American Tissue Type Collections gekauft. Krebs-Henseleit-Lösung wurde gemäß Standardverfahren hergestellt und 0,9% Kochsalzlösung wurde von McGraw, Inc. bezogen.
Herstellung von isolierten perfundierten Herzen von Ratten
Erwachsene Sprague Dawley-Ratten beiden Geschlechts mit einem Gewicht von 230 bis 260 g wurden in dieser Untersuchung verwendet. Die Tiere wurden durch peritoneale Injektion eines Cocktails mit Ketamin und Xylazin (Ketamin 100 mg, Xylazin 20 mg/ml) anästhesiert. Der Brustkorb wurde geöffnet und das Herz schnell entfernt. Das Herz wurde kurz mit eiskalter Krebs-Henseleit-Lösung (vgl. unten) gespült und die Aorta kanuliert. Das Herz wurde sodann bei einer Flussrate von 10 ml/min mit modifizierter Krebs-Henseleit (K-H)-Lösung mit NaCl 117,9, KCl 4,5, CaCl₂ 2,5, MgSO₄ 1,18, KHP₂O₄ 1,18, Pyruvat 2,0 mmol/l perfundiert. Die K-H-Lösung (pH 7,4) wurde kontinuierlich mit 95% O₂ und 5% CO₂ begast und aus 35 ± 0,50°C erwärmt. Das Herz wurde elektrisch bei einer festen Zykluslänge von 340 ms (250 Schläge/min) mit Hilfe einer bipolaren Elektrode, die auf der linken Vorkammer angebracht war, in Schritt gehalten. Die elektrischen Stimuli wurden durch einen Grass-Stimulator (Modell 548, W. Warwick, RI) erzeugt und durch eine Stimuli-Isolationseinheit (Modell SIUS, Astro-Med, Inc., NY) als Quadratwellen- Pulse von 3 ms Dauer und einer Amplitude von mindestens dem Doppelten der Schwellenintensität zugeführt.
Der Koronarperfusionsdruck (CPP) wurde mit Hilfe eines Druckübermittlers gemessen, der mit Hilfe eines T-Verbindungsstücks, das etwa 3 cm oberhalb des Herzens positioniert war, mit der Aortakanüle verbunden war. Der Koronarperfusionsdruck wurde während des gesamten Experiments überwacht und entweder auf einem Bandschreiber (Gould Recorder 22005) oder einem computerisierten Aufzeichnungssystem (PowerLab/4S, ADinstruments Pty Ltd., Australien) aufgezeichnet. Nur Herzen mit einem CPP von 60 bis 85 mm Hg (ohne Arzneimittel) wurden in der Untersuchung verwendet. Das Koronarleitvermögen (in ml/min/mm Hg) wurde als Verhältnis zwischen der Koronarperfusionsgeschwindigkeit (10 ml/min) und dem Koronarperfusionsdruck berechnet.
Anästhesiertes Schweinepräparat mit einem offenen Brustkorb
Bauernhofschweine mit einem Gewicht von 22–27 kg wurden in dieser Untersu- chung verwendet. Alle Tiere erhielten eine würdige Fürsorge gemäß den Richtlinien in "The Principles of Laboratory Animal Care", die von der National Society for Medical Research aufgestellt wurden, und "Guide for the Care and Use of Laboratory Animals", erstellt vom Institute of Laboratory Animal Resources und veröffentlicht von The National Institutes of Health (NIH Veröffentlichung NR. 86–23, überarbeitet 1996). Zusätzlich wurden die Tiere gemäß den Richtlinien des University of Kentucky Institutional Animal Care and Use Protocol eingesetzt.
Eine Betäubung erfolgte mit Ketamin (20 mg/kg, i. m.) und Natriumpentobarbital (15–18 mg/kg, i. v.). Die Betäubung wurde mit zusätzlichen Natriumpentobarbital (1,5–2 mg/kg, i. v.) alle 15–20 Minuten aufrecht erhalten. Eine Beatmung wurde durch Tracheotomie mit Hilfe eines Gemisches aus Umgebungsluft und 100% O₂ aufrecht erhalten. Das Tidalvolumen, die Atemfrequenz und der O₂-Anteil in der eingeatmeten Luft wurden eingestellt, um normale arterielle Blutgas (ABG)- und pH-Werte aufrechtzuerhalten. Die Körper-Kerntemperatur wurde mit einer ösophagealen Temperatursonde überwacht und mit einem Heizkissen auf 37,0–37,5°C gehalten. Ringer-Lactatlösung wurde über eine Ohr- oder Oberschenkelvene bei 5-7 ml/kg/min nach einem anfänglichen Bolus von 300–400 ml verabreicht. Ein Katheter wurde in die Oberschenkelarterie eingesetzt, um den arteriellen Blutdruck zu überwachen und ABG-Proben zu erhalten.
Das Herz wurde durch eine mittlere Sternotomie freigelegt und in einer perkardialen Schiene aufgehängt. Der linke Kammerdruck (LVP) wurde mit einem drucksensitiven 5F-Tip-Übermittler mit hoher Wiedergabetreue (Millar Instruments, Houston, TX), der über den Apex in die linke Kammerhöhlung gebracht und mit einer Tabaksbeutelnaht gesichert worden war, gemessen. Ein Segment der linken vorderen absteigenden Koronararterie (LAD), proximal zum Ursprung der ersten diagonalen Verzweigung, wurde von umgebendem Gewebe befreit. Eine Übergangszeitperivaskuläre Strömungssonde (Transonic Systems Inc., Ithaca, NY) wurde um dieses Segment angebracht, um den Koronarblutfluss (CBF) zu messen. Proximal zu der Strömungssonde wurde ein 24 g-modifizierter Angiokatheter für intrakoronare Infusionen inseriert. Alle hämodynamischen Daten wurden kontinuierlich auf einem Computermonitor angezeigt und durch einen 32-Bit-Analog-Digital-Umwandler in einen Online-Datenerfassungscomputer mit kundenspezifischer Software (Augury, Coyote Bay Instruments, Manchester, NH) eingegeben. A_2A-AdoR-Agonisten wurden in DMSO gelöst, um Stammlösungen mit 1–5 mM herzustellen, die in 0,9% Kochsalzlösung verdünnt wurden und bei Geschwindigkeiten von 1–1,5 ml/min infundiert wurden. Die A_2A-AdoR-Agonisten wurden intrakoronar verabreicht. Um den Blutdruck konstant zu halten, wurde Phenylephrin intravenös verabreicht. Die Phenylephrin-Stammlösung (30 mM) wurde in destilliertem Wasser hergestellt.
Isolierte perfundierte Herzen
Um die Dauer der A_2A-Adenosin-Rezeptor-vermittelten Koronarvasodilatation zu bestimmen, die durch Adenosin und Adenosin-Rezeptor-Agonisten hervorgerufen wird, wurden die Agonisten intervenös durch Bolusinjektion verabreicht. Protokoll: Bolusinjektionen: In jedem Herzen dieser Serien (3 bis 11 Herzen für jeden Agonisten} wurden Bolusinjektionen von Adenosin (20 μl, 2 × 10^–4 M), erfindungsgemäßen Verbindungen (20–40 μl, 2 × 10^–5 M) und anderen Adenosin-Rezeptor-Agonisten in die Perfusionsleitung injiziert. Die Zeiten bis zu einer 50%igen (t 0,5) und 90%igen (t 0,9) Umkehr der Verringerung des CPP wurden gemessen. Jedes Herz wurde maximal drei Vasodilatatoren ausgesetzt.
Beziehung zwischen der Affinität vor. verschiedenen Agonisten für den A_2A-Adenosin-Rezeptor und der Umkehrzeit ihrer Wirkung einer Erhöhung des Koronarleitvermögens: Diese Experimente erfolgten, um die Beziehung zwischen den Affinitäten der verschiedenen Agonisten für den A_2A-Adenosin-Rezeptor und der Dauer ihrer jeweiligen Wirkung auf das Koronarleitvermögen aufzustellen. Bolusinjektionen von verschiedenen Agonisten erfolgten in die Perfusionsleitung von isolierten perfundierten Herzen aus Ratten (n = 4–6 für jeden Agonisten) und der Zeitraum bis zu einer 90%igen (t 0,9) Umkehr der Verringerung des CPP wurde gemessen. Die Affinitäten der verschiedenen Agonisten für den A_2A-Adenosin-Rezeptor wurden in Schweine-Striatum-Membranen mit Hilfe eines Radioliganden-Bindetests wie vorstehend beschrieben gemessen. Die Umkehrzeit (t 0,9) der Verringerung des CPP wurde gegen ihre Affinitäten (pK_i) für den A_2A-Adenosin-Rezeptor aufgetragen.
Schwein mit offenem Brustkorb
Vor einem Starten des Experiments folgte eine 30-minütige Stabilisierungsperiode der Vervollständigung eines Anschlusses an die Geräte. Nach Erhalt der Basislinien-hämodynamischen Daten wurde die erste intrakoronare Infusion eines A_2A-AdoR-Agonisten eingeleitet. Infusionen wurden 4–5 Minuten aufrecht erhalten, um zu erlauben, dass der LAD-CBF einen stabilen Zustand erreicht, worauf die Infusion abgebrochen wurde. Die Zeit bis zu einer Rückkehr auf 50% (t 0,5) und 90% (t 0,9) des Basislinien-CBF wurde aufgezeichnet. 10–15 Minuten, nachdem der CBF zu den Werten vor einer Arzneimittelverabreichtung zurückgekehrt war, wurde eine zweite Infusion mit einem anderen Agonisten eingeleitet. In vorläufigen Untersuchungen stellte sich heraus, dass die intrakoronare Infusion von Adenosin-Agonisten eine systemische Hypotension in einem unterschiedlichen Ausmaß erzeugte und somit wurde in allen darauf folgenden Experimenten Phenylephrin intravenös verabreicht. Hämodynamische Messungen erfolgten vor und nach dem Einleiten der Infusion von Phenylephrin bei einer Dosis von ~1 μg/kg/min. Die Phenylephrin-Infusionsgeschwindigkeit wurde während und nach den Infusionen der Adenosin-Agonisten eingestellt, um den artiellen Blutdruck innerhalb von 5 mm Hg des Werts vor einer Infusion zu halten. Die Wirkung von maximal drei verschiedenen Agonisten wurde in jedem Experiment bestimmt.
Ergebnisse
Adenosin, die erfindungsgemäßen Verbindungen und andere Adenosin-Derivate wurden als Bolusinjektionen in die Perfusionsleitung bei Konzentrationen verabreicht, die gleiche oder nahezu gleiche Erhöhungen des Koronarleitvermögens her vorrufen. Obwohl Adenosin und die Agonisten gleiche maximale Erhöhungen des Koronarleitvermögens hervorriefen, war die Dauer ihrer Wirkung merklich verschieden. Die Dauer der Wirkung von Adenosin war die kürzeste, gefolgt von Verbindung 18, Verbindung 12 und Verbindung 21, während die von CGS21680, YT-146, HENECA und WRC0470 am längsten waren. Die Dauer der Koronarvasodilatation, die von Adenosin, den erfindungsgemäßen Verbindungen und anderen Agonisten hervorgerufen wurde und als Zeit bis zu einer 50%igen bzw. 90%igen (t 0,5 bzw. t 0,9) Umkehr der Erhöhung des Koronarleitvermögens gemessen wurde; ist in Tabelle 4 zusammengefasst.
Tabelle 4 – Umkehrzeit der Koronarvasodilatation durch Adenosin und Adenosin-Rezeptor-Agonisten bei isolierten perfundierten Rattenherzen
Die Umkehrzeit der Koronarvasodilatation war von der Affinität der Adenosin-Derivate für A_2A-Rezeptoren des Gehirnstriatums abhängig. Es trat eine signifikante (P < 0,05) umgekehrte Beziehung (r = 0,87) zwischen der Affinität (pK_i) der Agonisten für A_2A-AdoR und der Umkehrzeit (t 0,9) der durch die gleichen Agonisten verursachten Koronarvasodilatation auf.
Koronarvasodilatation in einem Schweinepräparat mit einem offenen Brustkorb
Bei in situ-Herzen eines betäubten Schweinepräparats mit einem offenen Brustkorb verursachten die Verbindungen 12 und 18 der Erfindung sowie CGS21680 und andere A_2A-AdoR-Agonisten (d. h. WRC-0470 und YT-146). signifikante Erhöhungen des koronaren Blutflusses (CBF). Ausgewählte Dosen dieser Verbindungen verursachten bei einer Verabreichung als kontinuierliche (4–5 Minuten) intrakoronare Infusionen 3,1- bis 3,8-fache Erhöhungen des CBF; wie nachstehend in Tabelle 5 gezeigt. Sobald festgestellt worden war, dass alle Agonisten eine nahezu gleichgroße Erhöhung des CBF (d. h. "-fache Erhöhunb") und ähnliche Veränderungen bei der Herzfrequenz und dem mittleren arteriellen Blutdruck verursachten, wurde die Umkehrzeit ihrer jeweiligen koronarvasodilatierenden Wirkungen bestimmt.
Tabelle 5 – Ausmaß einer Erhöhung des durch verschiedene Adenosin-Rezeptor-Agonisten bei betäubten Schweinen mit einem offenen Brustkorb verursachten koronaren Blutflusses
Wie in Tabelle 6 zusammengefasst, waren die t_0,5- und t_0,9-Werte der koronaren Vasodilatation, verursacht durch die verschiedenen A_2A-AdoR-Agonisten und "CVT-Verbindungen", unterschiedlich. Die Umkehrzeit der Erhöhung des CBF, verursacht durch die erfindungsgemäßen Verbindungen 12 und 18, war kürzer als die von CGS21680, WRC-0470 oder YT-146. Wichtiger ist, dass, wie bei isolierten perfundierten Herzen von Ratten, eine signifikante (P < 0,05) umgekehrte Beziehung (r = 0,93) zwischen der Affinität (pK_i) der A_2A-AdoR-Agonisten für A_2A-Rezeptoren des Gehirnstriatums aus Schweinen und der Umkehrzeit (t 0,9) der Koronarvasodilata tion auftrat. Es trat eine ausgezeichnete Übereinstimmung zwischen der Umkehrzeit der Koronarvasodilatation auf, die durch eine ausgewählte Reihe an Agonisten bei isolierten perfundierten Herzen von Ratten und bei betäubten Schweinepräparaten mit einem offenen Brustkorb hervorgerufen wurde.
Tabelle 6 – Umkehrzeit der Koronarvasodilatation, die durch verschiedene Adenosin-Rezeptor-Agonisten bei betäubten Schweinen mit einem offenen Brustkorb hervorgerufen wurde
Verbindung 18 ist ein niedrig-affiner A_2A-AdoR-Agonist und weniger wirksam (–10-fach) als der Prototyp-Agonist CGS21680. Nichtsdestotrotz ist Verbindung 18 ein vollständiger Agonist für eine Erzeugung von Koronarvasodilatation. Jedoch ist die Dauer seiner Wirkung, wie in dieser Untersuchung gezeigt, mehrfach kürzer als die hoch-affinen Agonisten CGS21680 und WRC-0470. Daher ist Verbindung 18 ein kurz wirkender A_2A-AdoR-Agonist-Koronarvasodilatator. Aufgrund seiner kurzen Wirkdauer im Vergleich zu den hoch-affinen A_2A-AdoR-Agonisten (z. B. WRC-0470, CGS21680) könnte sich dieser niedrig-affine, jedoch immer noch vollständige Agonisten-Koronarvasodilatator als ideales pharmakologisches "Belastungsmittel" während einer Radionuklid-Darstellung des Myokardiums erweisen.

Claims

Verbindung der Formel
worin R¹ -CH₂OH oder -C(=O)NR⁵R⁶ ist, R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, C_2-15-Alkenyl, C_2-15-Alkinyl, Heterocyclyl, Aryl und Heteroaryl, worin die Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl-, Heterocyclyl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, NO₂, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, N(R²⁰)₂, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, SO₂NR²⁰COR²², SO₂NR²⁰CO₂R²², SO₂NR²⁰CON(R²⁰)₂, N(R²⁰)₂ NR²⁰COR²², NR²⁰CO₂R²², NR²⁰CON(R²⁰)₂, COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, CONR²⁰SO₂R²², NR²⁰SO₂R²², SO₂NR²⁰CO₂R²², OCONR²⁰SO₂R²², OC(O)R²⁰, C(O)OCH₂OC(O)R²⁰ und OCON(R²⁰)₂, und worin jeder optionale Heteroaryl-, Aryl- und Heterocyclylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, NO₂, Alkyl, CF₃, Amino, Mono- oder Dialkylamino, Alkyl- oder Aryl- oder Heteroarylamid, NCOR²² NR²⁰SO₂R²², COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, NR²⁰CON(R²⁰)₂, OC(O)R²⁰, OC(O)N(R²⁰)₂, SR²⁰, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, CN und OR²⁰ substituiert ist, R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, C_2-15-Alkenyl, C_2-15-Alkinyl, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, Halogenatom, NO₂, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, N(R²⁰)₂, (R²⁰)₂, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, SO₂NR²⁰COR²², SO₂NR²⁰CO₂R²², SO₂NR²⁰CON(R²⁰)₂, N(R²⁰)₂, NR²⁰COR²², NR²⁰CO₂R²², NR²⁰CON(R²⁰)₂, COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, CONR²⁰SO₂R²², NR²⁰SO₂R²², SO₂NR²⁰CO₂R²², OCONR²⁰SO₂R²², OC(O)R²⁰, C(O)OCH₂OC(O)R²⁰ und OCON(R²⁰)₂, worin die Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl-, Heterocyclyl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, NO₂, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, N(R²⁰)2, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, SO₂NR²⁰COR²², SO₂NR²⁰CO₂R²², SO₂NR²⁰CON(R²⁰)₂, N(R²⁰)₂, NR²⁰COR²², NR²⁰CO₂R²², NR²⁰CON(R²⁰)₂, COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, CONR²⁰SO₂R²², NR²⁰SO₂R²², SO₂NR²⁰CO₂R²², OCONR²⁰SO₂R²², OC(O)R²⁰, C(O)OCH₂OC(O)R20 und OCON(R²⁰)₂, und worin jeder optionale Heteroaryl-, Aryl- und Heterocyclylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, NO₂, Alkyl, CF₃, Amino, Mono- oder Dialkylamino, Alkyl- oder Aryl- oder Heteroarylamid, NCOR²², NR²⁰SO₂R²², COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, NR²⁰CON(R²0)₂, OC(O)R²⁰, OC(O)N(R²⁰)₂, SR²⁰, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, CN und OR²⁰ substituiert ist, R⁵ und R⁶ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus N, C_1-15-Alkyl mit 1 bis 2 Substituenten, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, NO₂, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, N(R²⁰)₂, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, SO₂NR²⁰COR²², SO₂NR²⁰CO₂R²², SO₂NR²⁰CON(R²⁰)₂, N(R²⁰)₂, NR²⁰COR²², NR²⁰CO₂R²², NR²⁰CON(R²⁰)₂, COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂ CONR²⁰SO₂R²², NR²⁰SO₂R²², SO₂NR²⁰CO₂R²² OCONR²⁰SO₂R²², OC(O)R²⁰, C(O)OCH₂OC(O)R²⁰ und OCON(R²⁰)₂, und worin jeder optionale Heteroaryl-, Aryl- und Heterocyclylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, NO₂, Alkyl, CF₃, Amino, Mono- oder Dialkylamino, Alkyl- oder Aryl- oder Heteroarylamid, NCOR²² NR²⁰SO₂R²², COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, NR²⁰CON(R²⁰)₂, OC(O)R²⁰, OC(O)N(R²⁰)₂, SR²⁰ , S(O)R²², SO₂R²², SO2N(R²⁰)₂, CN und OR²⁰ substituiert ist, R²⁰ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus H, C_1-15-Alkyl, C_2-15-Alkenyl, C_2-15-Alkinyl, Heterocyclyl, Aryl und Heteroaryl, worin die Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Heterocyclyl-, Aryl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus Halogenatom, Alkyl, Mono- oder Dialkylamino, Alkyl- oder Aryl- oder Heteroarylamid, CN, O-C_1-6-Alkyl, CF₃, Aryl und Heteroaryl, und R²² ein Mitglied ist, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus C_1-15-Alkyl, C_2-15-Alkenyl, C_2-15-Alkinyl, Heterocyclyl, Aryl und Heteroaryl, worin die Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Heterocyclyl-, Aryl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig aus Halogenatom, Alkyl, Mono- oder Dialkylamino, Alkyl- oder Aryl- oder Heteroarylamid, CN, O-C_1-6-Alkyl, CF₃ und Heteroaryl ausgewählt sind, worin R² kein Wasserstoffatom ist, falls R¹ CH²OH ist, R³ ein Wasserstoffatom ist, R⁴ ein Wasserstoffatom ist und der Pyrazolring über C⁴ gebunden ist.
Verbindung nach Anspruch 1, worin R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, C_2-15-Alkinyl, Heterocyclyl, Aryl und Heteroaryl, worin die Alkyl-, Alkinyl-, Aryl-, Heterocyclyl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, NO₂, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, N(R²⁰)₂, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, und worin jeder optionale Heteroaryl-, Aryl- und Heterocyclylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃, CN und OR²⁰ substituiert ist, R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, C_2-15-Alkinyl, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, Halogenatom, NO₂, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, N(R²⁰)₂, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, worin die Alkyl-, Alkinyl-, Aryl-, Heterocyclyl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, NO₂, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, N(R²⁰)₂, S(O)R²², SO₂R²², SO₂N(R²⁰)₂, COR²⁰, CO₂R²⁰, CON(R²⁰)₂, und worin jeder optionale Heteroaryl-, Aryl- und Heterocyclylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃, CN und OR²⁰ substituiert ist, R⁵ und R⁶ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus N und C_1-15-Alkyl mit 1 bis 2 Substituenten, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Aryl, Heteroaryl, CF₃, OR²⁰, und worin jeder optionale Heteroaryl- und Arylsubstituent ferner gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl und CF₃ substituiert ist, R²⁰ ein Mitglied ist, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus N, C_1-6-Alkyl, Aryl und Heteroaryl, und R²² ein Mitglied ist, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus C_1-5-Alkyl, Aryl und Heteroaryl, worin die Alkyl-, Aryl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig aus Halogenatom, Alkyl CN, O-C_1-6-Alkyl und CF₃ ausgewählt sind.
Verbindung nach Anspruch 1, worin R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, Aryl mit bis zu 15 C-Atomen und Heteroaryl, worin die Alkyl-, Aryl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, S(O)R²², CO₂R²⁰ und CON(R²⁰)₂, und worin jeder optionale Heteroaryl- und Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃, CN und OR²⁰ substituiert ist, R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, Aryl mit bis zu 15 C-Atomen, Heteroaryl, Halogenatom, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, S(O)R²², CO₂R²⁰ und CON(R²⁰)₂, worin die Alkyl-, Aryl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 3 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, SR²⁰, S(O)R²², CO₂R²² und CON(R²²)₂, und worin jeder optionale Heteroaryl- und Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃, CN und OR²⁰ substituiert ist, R⁵ und R⁶ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus H und C_1-15-Alkyl mit 1 bis 2 CF₃-Substituenten, R²⁰ ausgewählt ist aus N und C_1-6-Alkyl und R²² C_1-6-Alkyl ist.
Verbindung nach Anspruch 1, worin R² unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, Aryl mit bis zu 15 C-Atomen und Heteroaryl, worin die Alkyl-, Aryl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, CO₂R²⁰ und CON(R²⁰)₂, und worin jeder optionale Heteroaryl- und Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist, R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, Aryl mit bis zu 15 C-Atomen, Heteroaryl, Halogenatom, CF₃, CN, OR²⁰, CO₂R²⁰ und CON(R²⁰)₂, worin die Alkyl-, Aryl- und Heteroarylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, Aryl, Heteroaryl, CF₃, CN, OR²⁰, CO₂R²² und CON(R²⁰)₂, und worin jeder optionale Heteroaryl- und Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl; CF₃ oder CN substituiert ist, R⁵ und R⁶ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus N und C_1-15-Alkyl und R²⁰ ausgewählt ist aus H und C_1-6-Alkyl.
Verbindung nach Anspruch 1, worin R² unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl und Aryl, worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, OR²⁰, Aryl, CF₃, CN, und worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ oder CN substituiert ist, R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, Aryl, Halogenatom, CF₃ und CN, worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, Aryl, CF₃, CN, und worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ oder CN substituiert ist, R⁵ und R⁶ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus H und C_1-15-Alkyl und R²⁰ ausgewählt ist aus N und C_1-6-Alkyl.
Verbindung nach Anspruch 1 oder 2 oder 3 oder 4 oder 5 mit der Formel
worin die Verbindungsstelle des Pyrazolrings C-4 ist.
Verbindung nach Anspruch 1 oder 2 oder 3 oder 4 oder 5 mit der Formel
worin die Verbindungsstelle des Pyrazolrings C-3 ist.
Verbindung nach Anspruch 1 oder 2 oder 3 oder 4 oder 5 mit der Formel
worin die Verbindungsstelle des Pyrazolrings C-5 ist.
Verbindung nach Anspruch 6 oder 7 oder 8, worin R¹ CH₂OH ist.
Verbindung nach Anspruch 6, worin R¹ CH₂OH ist, R² unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-10-Alkyl und Aryl worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogen atom, OR²⁰, Aryl, CF₃ und CN, und worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist, R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-15-Alkyl, Aryl, Halogenatom, CF₃ und CN, worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit einem Substituenten substituiert sind, der unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, CF₃ und CN, und R²⁰ aus H und C_1-6-Alkyl ausgewählt ist.
Verbindung nach Anspruch 6, worin R¹ CH₂OH ist, R² unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-8-Alkyl und Aryl, worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, OR²⁰, Aryl, CF₃ und CN, und worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist, R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-3-Alkyl, Aryl, Halogenatom, CF₃, CN und R²⁰ aus H und C_1-6-Alkyl ausgewählt ist.
Verbindung nach Anspruch 6, worin R¹ CH₂OH ist, R² unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-8-Alkyl und Aryl, worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehed aus Halogenatom, OR²⁰, Aryl, CF₃ und CN, und worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ d CN substituiert ist, R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, Methylgruppe und Halogenatom und R²⁰ aus H und C_1-6-Alkyl ausgewählt ist.
Verbindung nach Anspruch 6, worin R¹ CH₂OH ist, R² unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-8-Alkyl und Aryl, worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit einem Substituenten substituiert sind, der aus der Gruppe ausgewählt ist bestehend aus Halogenatom, Aryl, CF₃ und CN, und worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist, und R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und Methylgruppe.
Verbindung nach Anspruch 6, worin R¹ CH₂OH ist, R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-8-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem Substituenten, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Aryl, CF₃ und CN, und worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist, und R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und Methylgruppe.
Verbindung nach Anspruch 6, worin R¹ CH₂OH ist, R² C_1-8-Alkyl ist, gegebenenfalls substituiert mit einer Arylgruppe, die gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist, und R³ und R⁴ jeweils Wasserstoffatome sind.
Verbindung nach Anspruch 6, worin R¹ CH₂OH ist, R² C_1-6-Alkyl ist, gegebenenfalls substituiert mit einer Arylgruppe, die gegebenenfalls mit einer Alkylgruppe substituiert ist, und R³ und R⁴ jeweils Wasserstoffatome sind.
Verbindung nach Anspruch 7, worin R¹ CH₂OH ist, R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-8-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem Substituenten, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Aryl, CF₃ und CN, und worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist, und R³ und R⁴ jeweils unabhängig aus Wasserstoffatom und Methylgruppe ausgewählt sind.
Verbindung nach Anspruch 7, worin R¹ CH₂OH ist, R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-8-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem Arylsubstituenten, und worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist, und R³ und R⁴ jeweils Wasserstoffatome sind.
Verbindung nach Anspruch 7, worin R¹ CH₂OH ist, R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einer Arylgruppe, die gegebenenfalls mit einer Alkylgruppe substituiert ist, und R³ und R⁴ jeweils Wasserstoffatome sind.
Verbindung nach Anspruch 8, worin R¹ CH₂OH ist, R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl, R³ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom, C_1-6-Alkyl und Aryl, worin die Alkyl- und Arylsubstituenten gegebenenfalls mit 1 bis 2 Substituenten substituiert sind, die unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogenatom, Aryl, CF₃ und CN, und worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist, und R⁴ ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl.
Verbindung nach Anspruch 8, worin R¹ CH₂OH ist, R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und Methylgruppe und R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wass atom und C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einer Arylgruppe, die gegebenenfalls mit einer Alkylgruppe substituiert ist.
Verbindung nach Anspruch 6, worin R¹ CONHEt ist, R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-8-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einem Substituenten, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Aryl, CF₃ und CN, und worin jeder optionale Arylsubstituent gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist, und R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wassers^to^ffatom und Methylgruppe.
Verbindung nach Anspruch 6, worin R¹ CONHEt ist, R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-8-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einer Arylgruppe, die gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, ^CF3 und CN substituiert ist, und R³ und R⁴ jeweils Wasserstoffatome sind.
Verbindung nach Anspruch 6, worin R¹ CONHEt ist, R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl, gege nenfalls substituiert mit einer Arylgruppe, die gegebenenfalls mit einer Alkylgruppe substituiert ist, und R³ und R⁴ Wasserstoffatome sind.
Verbindung nach Anspruch 7, worin R¹ CONHEt ist, R² ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-8-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einer Arylgruppe, die gegebenenfalls mit Halogenatom, Alkyl, CF₃ und CN substituiert ist, und R³ und R⁴ Wasserstoffatome sind.
Verbindung nach Anspruch 7, worin R¹ CONHEt ist, R² unabhängig ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit einer Arylgruppe, die gegebenenfalls mit einer Alkylgruppe substituiert ist, und R³ und R⁴ jeweils Wasserstoffatome sind.
Verbindung nach Anspruch 8, worin R¹ CONHEt ist und R² ausgewählt ist aus Wasserstoffatom und Methylgruppe und R³ und R⁴ jeweils unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoffatom und C_1-6-Alkyl, worin die Alkylgruppe gegebenenfalls mit einer Arylgruppe substituiert ist, die gegebenenfalls mit einer Alkylgruppe substituiert ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei die Verbindung ausgewählt ist aus (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-benzylpyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-[6-Amino-2-(1-pentylpyrazol-4-yl)purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-[6-Amino-2-(1-methylpyrazol-4-yl)purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(methylethyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(3-phenylpropyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(4-t-butylbenzyl)pyrazol-4-yl}purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-(6-Amino-2-pyrazol-4-ylpurin-9-yl)-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-pent-4-enylpyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-decylpyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(cyclohexylmethyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(2-phenylethyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(3-cyclohexylpropyl)pyrazol-4-yl]purin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol, (4S,2R,3R,5R)-2-{6-Amino-2-[1-(2-cyclohexylethyl)pyrazol-4-yljpurin-9-yl}-5-(hydroxymethyl)oxolan-3,4-diol und Gemischen davon.
Pro-Pharmakon, das eine chemisch modifizierte Verbindung nach Anspruch 1 ist, die an ihrer Wirkstelle biologisch inaktiv ist und durch einen oder mehrere enzymatische oder in vivo-Vorgänge in die bioaktive Form abgebaut oder modifiziert wird.
Pro-Pharmakon nach Anspruch 29, wobei die chemische Modifikation an einer oder mehreren der Hydroxylgruppen vorliegt.
Pro-Pharmakon nach Anspruch 29, wobei die chemische Modifikation ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus spaltbaren Ester- oder Carbamatderivaten, durch Protease erkennbaren Peptiden, Derivaten, die sich an einer Wirkstelle durch Membranselektion anhäufen, und eine Kombination davon.
Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 für die Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Stimulierung der Koonardilatation bei einem Säuger.
Verwendung nach Anspruch 32, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung einer Verwendung in Verbindung mit einem radioaktiven Bildgebungsmittel zur Darstellung der Koronaraktivität dient.
Verwendung nach Anspruch 32 oder 33, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung einer Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge der Verbindung nach Anspruch in einem Bereich von etwa 0,01 bis etwa 100 mg/kg Gewicht des Säugers dient.
Verwendung nach Anspruch 32 oder 33 wobei der Säuger ein Mensch ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die die Verbindung nach Anspruch 1 und ein oder mehrere pharmazeutische Exzipienzien umfasst.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 36, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung in Form einer Lösung vorliegt.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 36, wobei die Zusammensetzung als Antiphlogistikum, bei einer unterstützenden Therapie von Angioplastie, als Blutplätichen-Aggregationshemmstoff und als Hemmstoff der Blutplättchen- und Neutrophilenaktivierung verwendbar ist.