DE4313990A1 - Tartrolone, Herstellungsverfahren, Mittel mit Tartrolonen und Sorangium cellulosum DSM 8222 zur Durchführung des Verfahrens - Google Patents
Tartrolone, Herstellungsverfahren, Mittel mit Tartrolonen und Sorangium cellulosum DSM 8222 zur Durchführung des VerfahrensInfo
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Description
Die Erfindung betrifft eine Verbindung (Tartrolon) der folgenden
allgemeinen Formel (I):
Ferner betrifft die Erfindung eine Verbindung (Tartrolon) der
folgenden allgemeinen Formel (II), wobei M ein H-Atom oder das
Kation eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes darstellt, insbe
sondere ein Alkalimetallion:
Ferner betrifft die Erfindung eine Verbindung (Tartrolon A1) der
Summenformel C₄₆H₇₂O₁₄ und mit einem UV-Spektrum (MeOH) mit
lambdamax (lg epsilon) = 232 nm (4.53) sowie den folgenden Para
metern:
IR-Spektrum (Film) mit ny = 3493, 3399, 3015, 2984, 2926, 2859, 1740, 1711, 1460, 1379, 1310, 1192, 1159, 1113, 1092, 1062, 1041, 1012, 995 und 980 cm-1 und/oder
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 1 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
IR-Spektrum (Film) mit ny = 3493, 3399, 3015, 2984, 2926, 2859, 1740, 1711, 1460, 1379, 1310, 1192, 1159, 1113, 1092, 1062, 1041, 1012, 995 und 980 cm-1 und/oder
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 1 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
Ferner betrifft die Erfindung eine Verbindung (Tartrolon A2) der
Summenformel C₄₆H₇₂O₁₄ und mit einem UV-Spektrum (MeOH) mit
lambdamax (lg epsilon) = 232 nm
(4,64) sowie den folgenden Parametern:
IR-Spektrum (Film) mit ny = 3540, 2934, 1740, 1703, 1458, 1379,
1273, 1238, 1196, 1105, 1060, 1013, 995, 951, 914, 852, 794 und
733 cm-1 und/oder
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 1 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 1 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
Ferner betrifft die Erfindung eine Verbindung (Tartrolon A3) der
Summenformel C₄₆H₇₂O₁₄ und mit einem UV-Spektrum (MeOH) mit
lambdamax (lg epsilon) = 232 nm (4,53) sowie den folgenden Para
metern:
IR-Spektrum (Film) mit ny = 3468, 2930, 1740, 1715, 1458, 1379,
1277, 1197, 1107, 1014 und 792 cm-1 und/oder
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 2 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 2 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
Ferner betrifft die Erfindung eine Verbindung (Tartrolon B) der
Summenformel C₄₆H₆₈BNaO₁₄ und mit einem UV-Spektrum (MeOH) mit
lambdamax (lg epsilon) = 232 nm (4,51) sowie den folgenden Para
metern:
IR-Spektrum (Film) mit ny = 3540, 2969, 2930, 1730, 1701, 1458,
1433, 1414, 1373, 1340, 1329, 1238, 1209, 1171, 1140, 1101,
1061, 1001, 943, 792 und 737 cm-1 und/oder
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 2 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 2 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
Ferner betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Gewinnung einer
Verbindung der allgemeinen Formel (I), insbesondere von Tartro
lon A1, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man
- (a) Sorangium cellulosum DSM 8222 in einem Kohlenstoff-Quellen und Mineralsalze enthaltenden Medium in Gegenwart eines Ad sorberharzes kultiviert,
- (b) das Adsorberharz vom Kulturmedium abtrennt und
- (c) mit Methanol und
- (d) danach mit Aceton eluiert,
- (e) das Methanol-Eluat bis zum Auftreten einer Wasserphase einengt und mit Essigester extrahiert, den Essigester- Extrakt trocknet, danach vom Lösungsmittel befreit und zu einem öligen Rohprodukt einengt,
- (f) das Aceton-Eluat einengt, den Rückstand in Methanol löst und mit n-Heptan extrahiert sowie die Methanol-Phase dem Methanol-Eluat oder dem Essigester-Extrakt gemäß Stufe (e) zuschlägt und gemäß Stufe (e) weiterverarbeitet,
- (g) das ölige Rohprodukt gemäß Stufe (e) einer Umkehrphasen- Chromatographie (Laufmittel Methanol/Wasser) unterwirft und aus der ersten produkt-haltigen Eluatfraktion die Verbindung der allgemeinen Formel (I) auskristallisiert.
Ferner betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Gewinnung einer
Verbindung der allgemeinen Formel (I), insbesondere von Tartro
lon A2, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man
- (a) die Stufen (a) bis (g) gemäß Anspruch 7 durchführt,
- (b) die Mutterlauge der Stufe (g) gemäß Anspruch 7 schwach an säuert und bis zum Auftreten einer Wasserphase einengt ,
- (c) die Wasserphase mit Essigester extrahiert, den Essigester- Extrakt trocknet, durch Abkühlen Kristalle abscheiden läßt und die Kristalle entfernt und
- (d) aus der Mutterlauge die Verbindung der allgemeinen Formel (I) gewinnt.
Ferner betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Gewinnung einer
Verbindung der allgemeinen Formel (I), insbesondere von Tartro
lon A3, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man
- (a) die Stufen (a) bis (f) gemäß Anspruch 7 durchführt,
- (b) das ölige Rohprodukt von Stufe (f) gemäß Anspruch 7 einer Umkehrphasen-Chromatographie (Laufmittel Methanol/Wasser) unterwirft und die erste adsorbens-haltige Eluatfraktion verwirft,
- (c) die zweite adsorbens-haltige Fraktion schwach ansäuert und bis zum Auftreten einer Wasserphase einengt und die Wasser phase abtrennt,
- (d) die abgetrennte Wasserphase mit Essigester extrahiert, den Essigester-Extrakt trocknet, einengt und vom Essigester be freit und die Verbindung der allgemeinen Formel (I) gewinnt.
Ferner betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Gewinnung einer
Verbindung der allgemeinen Formel (II), insbesondere von Tar
trolon B, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man
- (a) die Stufen (a) bis (e) gemäß Anspruch 7 durchführt,
- (b) das Aceton-Eluat mit Methanol löst und mit n-Heptan extra hiert,
- (c) den n-Heptanextrakt einengt und vom n-Heptan befreit,
- (d) die angefallene wachsartige Masse einer Umkehrphasen-Chro matographie (Laufmittel Methanol/Wasser) unterwirft und die erste produkt-haltige Fraktion verwirft,
- (e) die zweite produkt-haltige Fraktion bis zum Auftreten einer Wasserphase einengt und die Wasserphase mit Essigester extrahiert,
- (f) den Essigester-Extrakt abtrennt und trocknet, den getrock neten Extrakt einengt und vom Lösungsmittel befreit und die Verbindung der allgemeinen Formel (II) gewinnt und gege benenfalls die Na-Verbindung durch Kationenaustausch in ein anderes pharmazeutisch akzeptables Salz überführt.
Bei den erfindungsgemäßen Verfahren kann man als Adsorberharz
XAD-16 verwenden.
Bei den erfindungsgemäßen Verfahren kann man die Trocknung der
wasserhaltigen Extrakte und Eluate mit Natriumsulphat durch
führen.
Bei den erfindungsgemäßen Verfahren kann man zur Umkehrphasen-
Chromatographie HD-SIL-18-60-60 und/oder als Laufmittel Metha
nol/Wasser in einem Verhältnis in einem Bereich von 85 : 15 bis
95 : 5 verwenden.
Bei den erfindungsgemäßen Verfahren kann man bei Stufe (g) gemäß
Anspruch 7 auf etwa 0°C abkühlen.
Bei den erfindungsgemäßen Verfahren kann man bei Stufe (b) gemäß
Anspruch 8 und/oder bei Stufe (c) gemäß Anspruch 9 mit Natrium
dihydrogenphosphat ansäuern und/oder bei Stufe (d) gemäß An
spruch 10 mit einem Laufmittel (Methanol/Wasser) mit einem Ge
halt an etwa 0,01 M Natrium-dihydrogenphosphat arbeiten.
Bei den erfindungsgemäßen Verfahren kann man das Einengen der
Extrakte und/oder Eluate im Vakuum durchführen.
Ferner betrifft die Erfindung ein Antibiotikum mit einem Gehalt
an einer erfindungsgemäßen Verbindung neben üblichen Träger
stoffen und/oder Verdünnungsmitteln.
Schließlich betrifft die Erfindung Sorangium cellulosum DSM
8222.
Der Produktionsorganismus
wurde im November 1990 an der GBF aus einer Bodenprobe aus der
Umgebung von Braunschweig isoliert. Es handelt sich um einen
Stamm des Myxobakteriums Sorangium cellulosum (Imshenetski &
Solntseva, 1936) (= Polyangium cellulosum). Der Stamm wurde mit
So ce678 bezeichnet. Er wurde am 22.3.1993 bei der Deutschen
Sammlung von Mikroorganismen unter Nr. DSM 8222 hinterlegt.
Die vegetativen Zellen sind zylindrische Stäbchen mit runden En
den, meist um 4 mm lang. Im Phasenkontrastmikroskop erscheinen
sie dunkel. Sie bewegen sich gleitend fort. Auf manchen Nährbö
den bildet der Organismus massenhaft Fruchtkörper, so z. B. auf
Filterpapier über Mineralsalzagar. Die Fruchtkörper sind orange
gefärbte Polster und bestehen aus einer mehr oder weniger großen
Zahl von Sporangiolen, kugeligen oder durch gegenseitige Abplat
tung polyedrische Gebilde mit einer festen Wand, von 20 bis 30 µm
Durchmesser. In den Sporangiolen befinden sich Myxosporen,
stäbchenförmige Dauerzellen von ähnlicher Gestalt und Größe wie
die vegetativen Zellen, jedoch leicht lichtbrechend.
Der Stamm bildet ein antibakteriell wirkendes Antibiotikum, Tar
trolon.
Der Organismus wächst gut auf Peptonagar, z. B.
CY-Agar (Casitone, Difco. 0,3%; CaCl₂·2H₂O 0,1%; Hefeextrakt,
Difco, 0.1%; Agar 1,5%, pH 7,2), dem jedoch ein Kohlenhydrat,
z. B. Glucose oder Stärke, zugesetzt werden muß. Das Kohlenhydrat
kann in einer Konzentration von z. B. 0,1% zugegeben werden.
Gutes Wachstum erfolgt auch auf Hefeagar, z. B. VY/2-Agar
(Bäckerhefe 0,5%, bezogen auf Frischgewicht; CaCl₂·2H₂O 0,1%;
Agar 1,5%, pH 7,2).
Zur Kultur in Flüssigmedium eignet sich z. B. : Medium 1: MD1 l·m.
(Pepton aus Casein, tryptisch verdaut, Merck, 0,3%; CaCl₂·2H₂O
0,05; MgSO₄·7H₂O 0.2%), das durch ein Kohlenhydrat ergänzt wird,
z. B. Glucose, Stärke oder Cellulose, jeweils 0,1%.
Die Kultivierung kann auch in folgenden Medien erfolgen.
Medium 2 besteht aus:
0,1% Casein
0,15% MgSO₄·7H₂O
0,1% CaCl₂·2H₂O
0,2% KNO₃
0,0125% K₂HPO₄
8 mg/l Na-Fe(III)-EDTA
0,5% Glucose 2H₂O
pH 7,2
0,1% Casein
0,15% MgSO₄·7H₂O
0,1% CaCl₂·2H₂O
0,2% KNO₃
0,0125% K₂HPO₄
8 mg/l Na-Fe(III)-EDTA
0,5% Glucose 2H₂O
pH 7,2
Zur pH-Stabilisierung kann 0,2% Tris-HCl, pH 7,2 bzw. 50 mM
HEPES, pH 7,2, zugesetzt werden.
Medium 3: 0,2% Glucose H₂O
0,8% Stärke 0,2
0,2% Sojamehl, entfettet
0,2% Hefeextrakt
0,1% MgSO₄·7H₂O
0,1% CaCl₂·2H₂O
8 mg/l Na-Fe(III)-EDTA
50 mM HEPES
pH 7,4
0,8% Stärke 0,2
0,2% Sojamehl, entfettet
0,2% Hefeextrakt
0,1% MgSO₄·7H₂O
0,1% CaCl₂·2H₂O
8 mg/l Na-Fe(III)-EDTA
50 mM HEPES
pH 7,4
In diesem Medium wächst der Stamm gut und bildet auch das Anti
biotikum, neigt allerdings zur Verklumpung.
Bei Zusatz des Absorberharzes XAD 16 (Rohm & Haas) zum Medium (1%)
wird das Antibiotikum ebenfalls gebildet. Es wird an das XAD
gebunden.
Medium: 0,2% Glucose H₂O
0,8% Stärke
0,2% Sojamehl, entfettet
0,2% Hefeextrakt
0,1% MgSO₄·7H₂O
0,1% CaCl₂·2H₂O
8 mg/l Na-Fe(III)-EDTA/l
pH 7,2 nach Autoklavieren
0,8% Stärke
0,2% Sojamehl, entfettet
0,2% Hefeextrakt
0,1% MgSO₄·7H₂O
0,1% CaCl₂·2H₂O
8 mg/l Na-Fe(III)-EDTA/l
pH 7,2 nach Autoklavieren
Der pH wurde, falls erforderlich, während der Fermentation mit 5%
KOH bei 6,8 gehalten.
Der Fermentor wurde mit 2,8 l einer Vorkultur (im
Schüttelkolben) beimpft.
Startbedingungen: T = 30°C
Belüftung: 150 Nl/h
Umdrehungen: 300 min-1
Belüftung: 150 Nl/h
Umdrehungen: 300 min-1
Tartrolon wurde in Methanol gelöst und auf Testblättchen in Men
gen von 10 mg aufgetragen. Diese Testblättchen wurden auf Agar
platten gelegt, in denen verschiedene Testorganismen in niedri
ger Zelldichte eingesäht waren. Diese Testplatten wurden bei 30°C
bebrütet. Nach Wachstum der Testorganismen wurden die Hemm
höfe abgelesen. Das Ergebnis zeigt Tab. 1.
Zur Bestimmung der minimalen Hemmkonzentration wurde Tartrolon
in verschiedenen Konzentrationen in Reagenzgläser gegeben, die
eine Suspension der Testbakterien in Nährmedium enthielten. Die
Anfangs-Zelldichte war 10⁵ Zellen/ml. Die Kulturen wurden für 24
Stunden bei 30°C bebrütet. Das Ergebnis zeigt Tab. 1.
Als Medien wurden verwendet:
- 1. Für Bakterien: Pepton aus Casein, tryptisch verdaut, Merck, 0,5%; Proteose Pepton, Difco, 0,5%; Fleischextrakt, Oxoid, 0,1%; pH 7,0.
- 2. Für Pilze und Hefen: Mycophil, Phytone-Pepton BBL, 1%; Glu cose 1%.
Als Testorganismus wurde Staphylococcus aureus benutzt. Es wurde
Tartrolon A eingesetzt. In Staph. aureus wird der Einbau von
3H-Methyl-thymidin in Perchlorsäure-fällbares Material sofort
nach Zugabe von 10 mg Tartrolon/ml gehemmt.
Der Einbau von ¹⁴C-Uracil läuft 30 min stark verzögert weiter
und ist dann ebenfalls vollständig gehemmt.
Der Einbau von ¹⁴C-Alanin läuft 45 min verzögert weiter.
Aus diesen Daten kann man schließen, daß Tartrolon spezifisch
die Synthese der DNS bei Bakterien hemmt.
Nach Beendigung der Fermentation wird das Adsorberharz (z. B. 1 l
XAD-16) abzentrifugiert, mit Wasser gewaschen und in eine Glas
säule gespült. In einem Zeitraum von 4 h wird mit 4 Bettvolumen
Methanol und anschließend innerhalb 1 h mit 1 Bettvolumen Aceton
im Durchfluß eluiert. Das Methanoleluat wird im Vakuum bis zum
Auftreten der Wasserphase eingeengt, mit Wasser verdünnt und
dreimal mit Essigester extrahiert. Der Extrakt wird mit Na
triumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel im Vakuum ab
destilliert.
Das Acetoneluat wird im Vakuum eingeengt, in Methanol gelöst und
zweimal mit nHeptan extrahiert. Die Methanolphase wird mit dem
Rückstand des oben erhaltenen Essigesterextraktes vereinigt und
die Lösungsmittel im Vakuum abdestilliert. Man erhält als Rück
stand 11 g eines dunkel gefärbten zähen Öls.
Das Lösungsmittel der Heptanphase wird im Vakuum abdestilliert.
Man erhält als Rückstand 1.65 g einer gelben, wachsartigen
Masse.
1.8 g des oben erhaltenen öligen Rohproduktes (aus Essigesterex
trakt und Methanolphase des Acetoneluates) werden an
HD-SIL-18-60-60 chromatographiert (Laufmittel Methanol/Wasser,
85 : 15). Die Komponenten A₁ und A₂ eluieren zuerst als gemeinsa
mer Peak, dann folgt Komponente A₃ als getrennter Peak. Aus dem
Eluat, das den Wirkstoffkomplex A₁ und A₂ enthält, kristalli
siert beim Abkühlen auf 0°C 70 mg der Komponente A₁.
Die Mutterlauge dieser Kristallisation wird mit 1 M Natriumdihy
drogenphosphat angesäuert und im Vakuum bis zum Auftreten der
Wasserphase eingeengt. Die Wasserphase wird dreimal mit Essig
ester extrahiert, der Extrakt mit Natriumsulfat getrocknet und
das Lösungsmittel im Vakuum abdestilliert. Man erhält 290 mg des
reinen Wirkstoffkomplexes A₁ und A₂ (im Verhältnis 1 : 1). Aus dem
Wirkstoffkomplex können weitere 110 mg der Komponente A₁ in
Essigester auskristallisiert werden. Die Mutterlauge enthält 180 mg
der Komponente A₂ in 80% Reinheit.
Die oben erhaltene Chromatographiefraktion mit Komponente A₃
wird mit 1 M Natriumdihydrogenphosphat angesäuert und im Vakuum
bis zum Auftreten der Wasserphase eingeengt. Die Wasserphase
wird dreimal mit Essigester extrahiert, der Extrakt mit Natrium
sulfat getrocknet und das Lösungsmittel im Vakuum abdestilliert.
Man erhält 290 mg der Komponente A₃.
1.65 g des wachsartigen Rückstandes der Heptanphase werden an
HD-SIL-18-60-60 chromatographiert (Laufmittel Methanol/Wasser
95 : 5, 0.01 M Natriumdihydrogenphosphat). Die Komponente A₃ elu
iert als erster Peak, dann folgt Komponente B als getrennter
Peak. Die beiden Chromatographiefraktionen werden jeweils im Va
kuum bis zum Auftreten der Wasserphase eingeengt. Die Wasser
phase wird dreimal mit Essigester extrahiert, der Extrakt mit
Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel im Vakuum ab
destilliert. Man erhält 47 mg der Komponente A₃ und 120 mg der
Komponente B.
Summenformel: C₄₆H₇₂O₁₄ MG: 848
Farblose Kristalle, Smp. : 160-162°C
UV (MeOH): lambdamax (lg epsilon) = 232 nm (4,53)
IR (Film): ny = 3493, 3399, 3015, 2984, 2926, 2859, 1740, 1711, 1460, 1379, 1310, 1192, 1159, 1113, 1092, 1062, 1041, 1012, 995, 980 cm-1.
MS (FAB, 3-NBA): 847 (M-H)⁻.
MS (EI): 424 M⁺, 406 (M-H₂O)⁺.
Hochauflösung (Fragment): ber. : 424.2461 gef. : 424.2473 C₂₃H₃₆O₇ M⁺
¹H-NMR: Tab. 1
¹³C-NMR: Tab. 3
DC (DC-Alufolie 60 F254, Merck; Laufmittel Dichlorme than/Methanol 95 : 5) Rf = 0,43
Detektion durch Ansprühen mit Vanillin/Schwefelsäure-Reagenz und Erhitzen auf 120°C (brauner Fleck).
HPLC (Nucleosil 18-100-7; Laufmittel Methanol/Wasser 85/15, 1,5 ml/min; UV-Detektion 230 nm): Rt = 5,65 min.
Farblose Kristalle, Smp. : 160-162°C
UV (MeOH): lambdamax (lg epsilon) = 232 nm (4,53)
IR (Film): ny = 3493, 3399, 3015, 2984, 2926, 2859, 1740, 1711, 1460, 1379, 1310, 1192, 1159, 1113, 1092, 1062, 1041, 1012, 995, 980 cm-1.
MS (FAB, 3-NBA): 847 (M-H)⁻.
MS (EI): 424 M⁺, 406 (M-H₂O)⁺.
Hochauflösung (Fragment): ber. : 424.2461 gef. : 424.2473 C₂₃H₃₆O₇ M⁺
¹H-NMR: Tab. 1
¹³C-NMR: Tab. 3
DC (DC-Alufolie 60 F254, Merck; Laufmittel Dichlorme than/Methanol 95 : 5) Rf = 0,43
Detektion durch Ansprühen mit Vanillin/Schwefelsäure-Reagenz und Erhitzen auf 120°C (brauner Fleck).
HPLC (Nucleosil 18-100-7; Laufmittel Methanol/Wasser 85/15, 1,5 ml/min; UV-Detektion 230 nm): Rt = 5,65 min.
Summenformel: C₄₆H₇₂O₁₄ MG: 848
Farblose amorphe Substanz
UV (MeOH): lambdamax (lg epsilon) = 232 nm (4,64)
IR (Film): ny = 3540, 2934, 1740, 1703, 1458, 1379, 1273, 1238, 1196, 1105, 1060, 1013, 995, 951, 914, 852, 794, 733 cm-1.
MS (FAB, 3-NBA): 847 (M-H)⁻.
MS (EI): 424 M⁺, 406 (M-H₂O)⁺.
¹H-NMR: Tab. 1
¹³C-NMR: Tab. 3
DC (DC-Alufolie 60 F254, Merck; Laufmittel Dichlorme than/Methanol 95 : 5) Rf = 0,43
Detektion durch Ansprühen mit Vanillin/Schwefelsäure-Reagenz und Erhitzen auf 120 C (brauner Fleck).
HPLC (Nucleosil 18-100-7; Laufmittel Methanol/Wasser 85/15, 1,5 ml/min; UV-Detektion 230 nm): Rt = 5,65 min.
Farblose amorphe Substanz
UV (MeOH): lambdamax (lg epsilon) = 232 nm (4,64)
IR (Film): ny = 3540, 2934, 1740, 1703, 1458, 1379, 1273, 1238, 1196, 1105, 1060, 1013, 995, 951, 914, 852, 794, 733 cm-1.
MS (FAB, 3-NBA): 847 (M-H)⁻.
MS (EI): 424 M⁺, 406 (M-H₂O)⁺.
¹H-NMR: Tab. 1
¹³C-NMR: Tab. 3
DC (DC-Alufolie 60 F254, Merck; Laufmittel Dichlorme than/Methanol 95 : 5) Rf = 0,43
Detektion durch Ansprühen mit Vanillin/Schwefelsäure-Reagenz und Erhitzen auf 120 C (brauner Fleck).
HPLC (Nucleosil 18-100-7; Laufmittel Methanol/Wasser 85/15, 1,5 ml/min; UV-Detektion 230 nm): Rt = 5,65 min.
Summenformel: C₄₆H₇₂O₁₄ MG: 848
Farblose amorphe Substanz
UV (MeOH): lambdamax (lg epsilon) = 232 nm (4,53)
IR (Film): ny = 3468, 2930, 1740, 1715, 1458, 1379, 1277, 1197, 1107, 1014, 792 cm-1.
MS (FAB, 3-NBA): 847 (M-H)⁻.
MS (EI): 424 M⁺, 406 (M-H₂O)⁺.
Farblose amorphe Substanz
UV (MeOH): lambdamax (lg epsilon) = 232 nm (4,53)
IR (Film): ny = 3468, 2930, 1740, 1715, 1458, 1379, 1277, 1197, 1107, 1014, 792 cm-1.
MS (FAB, 3-NBA): 847 (M-H)⁻.
MS (EI): 424 M⁺, 406 (M-H₂O)⁺.
Hochauflösung (Fragment): ber.: 406.2334 gef.: 406.2355 C₂₃H₃₄O₆
(M-H₂O)⁺
¹H-NMR: Tab. 2
¹³C-NMR: Tab. 3
DC (DC-Alufolie 60 F254, Merck; Laufmittel Dichlorme than/Methanol 95 : 5) Rf = 0,41
Detektion durch Ansprühen mit Vanillin/Schwefelsäure-Reagenz und Erhitzen auf 120°C (brauner Fleck).
HPLC (Nucleosil 18-100-7; Laufmittel Methanol/Wasser 85/15, 1,5 ml/min; UV-Detektion 230 nm): Rt = 8,58 min.
¹H-NMR: Tab. 2
¹³C-NMR: Tab. 3
DC (DC-Alufolie 60 F254, Merck; Laufmittel Dichlorme than/Methanol 95 : 5) Rf = 0,41
Detektion durch Ansprühen mit Vanillin/Schwefelsäure-Reagenz und Erhitzen auf 120°C (brauner Fleck).
HPLC (Nucleosil 18-100-7; Laufmittel Methanol/Wasser 85/15, 1,5 ml/min; UV-Detektion 230 nm): Rt = 8,58 min.
Summenformel: C₄₆H₆₈BNaO₁₄ MG: 878
Farblose amorphe Substanz
UV (MeOH): lambdamax (lg epsilon) = 232 nm (4,51)
IR (Film): ny = 3540, 2969, 2930, 1730, 1701, 1458, 1433, 1414, 1373, 1340, 1329, 1238, 1209, 1171, 1140, 1101, 1061, 1001, 943, 792, 737 cm-1.
MS (EI): 878 M⁺, 860 (M-H₂O)⁺, 834, 821.
Hochauflösung: ber.: 878.4600 gef.: 878.4583 C₄₆H₆₈BNaO₁₄ M⁺
¹H-NMR: Tab. 2
¹³C-NMR: Tab. 3
DC (DC-Alufolie 60 F254, Merck; Laufmittel Dichlormethan/Diethylether 4 : 1) Rf = 0.67
Detektion durch Ansprühen mit Vanillin/Schwefelsäure-Reagenz und Erhitzen auf 120°C (brauner Fleck).
HPLC (Nucleosil 18-100-7; Laufmittel Methanol/Wasser 95/5, 1,5 ml/min; UV-Detektion 230 nm): Rt = 16,5 min.
Farblose amorphe Substanz
UV (MeOH): lambdamax (lg epsilon) = 232 nm (4,51)
IR (Film): ny = 3540, 2969, 2930, 1730, 1701, 1458, 1433, 1414, 1373, 1340, 1329, 1238, 1209, 1171, 1140, 1101, 1061, 1001, 943, 792, 737 cm-1.
MS (EI): 878 M⁺, 860 (M-H₂O)⁺, 834, 821.
Hochauflösung: ber.: 878.4600 gef.: 878.4583 C₄₆H₆₈BNaO₁₄ M⁺
¹H-NMR: Tab. 2
¹³C-NMR: Tab. 3
DC (DC-Alufolie 60 F254, Merck; Laufmittel Dichlormethan/Diethylether 4 : 1) Rf = 0.67
Detektion durch Ansprühen mit Vanillin/Schwefelsäure-Reagenz und Erhitzen auf 120°C (brauner Fleck).
HPLC (Nucleosil 18-100-7; Laufmittel Methanol/Wasser 95/5, 1,5 ml/min; UV-Detektion 230 nm): Rt = 16,5 min.
Claims (18)
1. Verbindung (Tartrolon) der folgenden allgemeinen Formel (I):
2. Verbindung (Tartrolon) der folgenden allgemeinen Formel (II),
wobei M ein H-Atom oder das Kation eines pharmazeutisch akzepta
blen Salzes darstellt, insbesondere ein Alkalimetallion:
3. Verbindung (Tartrolon A1) der Summenformel C₄₆H₇₂O₁₄ und mit
einem UV-Spektrum (MeOH) mit lambdamax (lg epsilon) = 232 nm
(4.53) sowie den folgenden Parametern:
IR-Spektrum (Film) mit ny = 3493, 3399, 3015, 2984, 2926, 2859, 1740, 1711, 1460, 1379, 1310, 1192, 1159, 1113, 1092, 1062, 1041, 1012, 995 und 980 cm-1 und/oder
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 1 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
IR-Spektrum (Film) mit ny = 3493, 3399, 3015, 2984, 2926, 2859, 1740, 1711, 1460, 1379, 1310, 1192, 1159, 1113, 1092, 1062, 1041, 1012, 995 und 980 cm-1 und/oder
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 1 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
4. Verbindung (Tartrolon A2) der Summenformel C₄₆H₇₂O₁₄ und mit
einem UV-Spektrum (MeOH) mit lambdamax (lg epsilon) = 232 nm
(4,64) sowie den folgenden Parametern:
IR-Spektrum (Film) mit ny = 3540, 2934, 1740, 1703, 1458, 1379, 1273, 1238, 1196, 1105, 1060, 1013, 995, 951, 914, 852, 794 und 733 cm-1 und/oder
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 1 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
IR-Spektrum (Film) mit ny = 3540, 2934, 1740, 1703, 1458, 1379, 1273, 1238, 1196, 1105, 1060, 1013, 995, 951, 914, 852, 794 und 733 cm-1 und/oder
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 1 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
5. Verbindung (Tartrolon A3) der Summenformel C₄₆H₇₂O₁₄ und mit
einem UV-Spektrum (MeOH) mit lambdamax (lg epsilon) = 232 nm
(4,53) sowie den folgenden Parametern:
IR-Spektrum (Film) mit ny = 3468, 2930, 1740, 1715, 1458, 1379, 1277, 1197, 1107, 1014 und 792 cm-1 und/oder
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 2 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
IR-Spektrum (Film) mit ny = 3468, 2930, 1740, 1715, 1458, 1379, 1277, 1197, 1107, 1014 und 792 cm-1 und/oder
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 2 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
6. Verbindung (Tartrolon B) der Summenformel C⁴⁶H⁶⁸BNaO¹⁴ und
mit einem UV-Spektrum (MeOH) mit lambdamax (lg epsilon) = 232 nm
(4,51) sowie den folgenden Parametern:
IR-Spektrum (Film) mit ny = 3540, 2969, 2930, 1730, 1701, 1458, 1433, 1414, 1373, 1340, 1329, 1238, 1209, 1171, 1140, 1101, 1061, 1001, 943, 792 und 737 cm-1 und/oder
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 2 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
IR-Spektrum (Film) mit ny = 3540, 2969, 2930, 1730, 1701, 1458, 1433, 1414, 1373, 1340, 1329, 1238, 1209, 1171, 1140, 1101, 1061, 1001, 943, 792 und 737 cm-1 und/oder
¹H-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 2 und/oder
¹³C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 3.
7. Verfahren zur Gewinnung einer Verbindung der allgemeinen For
mel (I) gemäß Anspruch 1, insbesondere von Tartrolon A1, dadurch
gekennzeichnet, daß man
- (a) Sorangium cellulosum DSM 8222 in einem Kohlenstoff-Quellen und Mineralsalze enthaltenden Medium in Gegenwart eines Ad sorberharzes kultiviert,
- (b) das Adsorberharz vom Kulturmedium abtrennt und
- (c) mit Methanol und
- (d) danach mit Aceton eluiert,
- (e) das Methanol-Eluat bis zum Auftreten einer Wasserphase einengt und mit Essigester extrahiert, den Essigester- Extrakt trocknet, danach vom Lösungsmittel befreit und zu einem öligen Rohprodukt einengt,
- (f) das Aceton-Eluat einengt, den Rückstand in Methanol löst und mit n-Heptan extrahiert sowie die Methanol-Phase dem Methanol-Eluat oder dem Essigester-Extrakt gemäß Stufe (e) zuschlägt und gemäß Stufe (e) weiterverarbeitet,
- (g) das ölige Rohprodukt gemäß Stufe (e) einer Umkehrphasen- Chromatographie (Laufmittel Methanol/Wasser) unterwirft und aus der ersten produkt-haltigen Eluatfraktion die Verbindung der allgemeinen Formel (I) auskristallisiert.
8. Verfahren zur Gewinnung einer Verbindung der allgemeinen For
mel (I) gemäß Anspruch 1, insbesondere von Tartrolon A2, dadurch
gekennzeichnet, daß man
- (a) die Stufen (a) bis (g) gemäß Anspruch 7 durchführt,
- (b) die Mutterlauge der Stufe (g) gemäß Anspruch 7 schwach an säuert und bis zum Auftreten einer Wasserphase einengt,
- (c) die Wasserphase mit Essigester extrahiert, den Essigester- Extrakt trocknet, durch Abkühlen Kristalle abscheiden läßt und die Kristalle entfernt und
- (d) aus der Mutterlauge die Verbindung der allgemeinen Formel (I) gewinnt.
9. Verfahren zur Gewinnung einer Verbindung der allgemeinen For
mel (I) gemäß Anspruch 1, insbesondere von Tartrolon A3, dadurch
gekennzeichnet, daß man
- (a) die Stufen (a) bis (f) gemäß Anspruch 7 durchführt,
- (b) das ölige Rohprodukt von Stufe (f) gemäß Anspruch 7 einer Umkehrphasen-Chromatographie (Laufmittel Methanol/Wasser) unterwirft und die erste adsorbens-haltige Eluatfraktion verwirft,
- (c) die zweite adsorbens-haltige Fraktion schwach ansäuert und bis zum Auftreten einer Wasserphase einengt und die Wasser phase abtrennt,
- (d) die abgetrennte Wasserphase mit Essigester extrahiert, den Essigester-Extrakt trocknet, einengt und vom Essigester be freit und die Verbindung der allgemeinen Formel (I) gewinnt.
10. Verfahren zur Gewinnung einer Verbindung der allgemeinen
Formel (II) gemäß Anspruch 2, insbesondere von Tartrolon B, da
durch gekennzeichnet, daß man
- (a) die Stufen (a) bis (e) gemäß Anspruch 7 durchführt,
- (b) das Aceton-Eluat mit Methanol löst und mit n-Heptan extra hiert,
- (c) den n-Heptanextrakt einengt und vom n-Heptan befreit,
- (d) die angefallene wachsartige Masse einer Umkehrphasen-Chroma tographie (Laufmittel Methanol/Wasser) unterwirft und die erste produkt-haltige Fraktion verwirft,
- (e) die zweite adsorbens-haltige Fraktion bis zum Auftreten ei ner Wasserphase einengt und die Wasserphase mit Essigester extrahiert,
- (f) den Essigester-Extrakt abtrennt und trocknet, den getrock neten Extrakt einengt und vom Lösungsmittel befreit und die Verbindung der allgemeinen Formel (II) gewinnt und gege benenfalls die Na-Verbindung durch Kationenaustausch in ein anderes pharmazeutisch akzeptables Salz überführt.
11. Verfahren nach einem der Ansprüche 7 bis 10, dadurch gekenn
zeichnet, daß man als Adsorberharz XAD-16 verwendet.
12. Verfahren nach einem der Ansprüche 7 bis 11, dadurch ge
kennzeichnet, daß man die Trocknung der wasserhaltigen Extrakte
und Eluate mit Natriumsulphat durchführt.
13. Verfahren nach einem der Ansprüche 11 bis 12, dadurch ge
kennzeichnet, daß man zur Umkehrphasen-Chromatographie HD-SIL-
18-60-60 und/oder als Laufmittel Methanol/Wasser in einem Ver
hältnis in einem Bereich von 85 : 15 bis 95 : 5 verwendet.
14. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß man
bei Stufe (g) auf etwa 0°C abkühlt.
15. Verfahren nach Anspruch 8, 9 oder 10, dadurch gekennzeich
net, daß man bei Stufe (b) gemäß Anspruch 8 und/oder bei Stufe
(c) gemäß Anspruch 9 mit Natriumdihydrogenphosphat ansäuert
und/oder bei Stufe (d) gemäß Anspruch 10 mit einem Laufmittel
(Methanol/Wasser) mit einem Gehalt an etwa 0,01 M Natrium
dihydrogenphosphat arbeitet.
16. Verfahren nach einem der Ansprüche 7 bis 15, dadurch ge
kennzeichnet, daß man das Einengen der Extrakte und/oder Eluate
im Vakuum durchführt.
17. Antibiotikum mit einem Gehalt an einer Verbindung gemäß ei
nem der Ansprüche 1 bis 6 neben üblichen Trägerstoffen und/oder
Verdünnungsmitteln.
18. Sorangium cellulosum DSM 8222.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19934313990 DE4313990A1 (de) | 1993-04-28 | 1993-04-28 | Tartrolone, Herstellungsverfahren, Mittel mit Tartrolonen und Sorangium cellulosum DSM 8222 zur Durchführung des Verfahrens |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19934313990 DE4313990A1 (de) | 1993-04-28 | 1993-04-28 | Tartrolone, Herstellungsverfahren, Mittel mit Tartrolonen und Sorangium cellulosum DSM 8222 zur Durchführung des Verfahrens |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE4313990A1 true DE4313990A1 (de) | 1994-11-03 |
Family
ID=6486647
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19934313990 Withdrawn DE4313990A1 (de) | 1993-04-28 | 1993-04-28 | Tartrolone, Herstellungsverfahren, Mittel mit Tartrolonen und Sorangium cellulosum DSM 8222 zur Durchführung des Verfahrens |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE4313990A1 (de) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101126073B (zh) * | 2007-07-02 | 2011-09-07 | 江南大学 | 一种纤维堆囊菌及用该菌发酵产福鸽霉素的制备方法及应用 |
| WO2018106966A1 (en) * | 2016-12-07 | 2018-06-14 | Tufts Medical Center, Inc. | Methods and compositions for prevention and treatment of apicomplexan infections |
-
1993
- 1993-04-28 DE DE19934313990 patent/DE4313990A1/de not_active Withdrawn
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101126073B (zh) * | 2007-07-02 | 2011-09-07 | 江南大学 | 一种纤维堆囊菌及用该菌发酵产福鸽霉素的制备方法及应用 |
| WO2018106966A1 (en) * | 2016-12-07 | 2018-06-14 | Tufts Medical Center, Inc. | Methods and compositions for prevention and treatment of apicomplexan infections |
| US11135231B2 (en) | 2016-12-07 | 2021-10-05 | Washington State University | Methods and compositions for prevention and treatment of Apicomplexan infections |
| AU2017371050B2 (en) * | 2016-12-07 | 2023-09-21 | Tufts Medical Center, Inc. | Methods and compositions for prevention and treatment of apicomplexan infections |
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