DE3587835T2 - Sandwich-immunotestverfahren für antigene bei ophthalmischen störungen. - Google Patents
Sandwich-immunotestverfahren für antigene bei ophthalmischen störungen.Info
- Publication number
- DE3587835T2 DE3587835T2 DE3587835T DE3587835T DE3587835T2 DE 3587835 T2 DE3587835 T2 DE 3587835T2 DE 3587835 T DE3587835 T DE 3587835T DE 3587835 T DE3587835 T DE 3587835T DE 3587835 T2 DE3587835 T2 DE 3587835T2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- antibodies
- monoclonal
- herpes simplex
- simplex virus
- monoclonal antibodies
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 44
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 43
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 32
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims abstract description 31
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 claims abstract description 31
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 31
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 26
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 27
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 claims description 26
- 230000003602 anti-herpes Effects 0.000 claims description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 20
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 19
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 12
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 10
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 7
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 6
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 claims description 5
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 claims description 4
- 230000003263 anti-adenoviral effect Effects 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 claims description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 claims description 2
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 claims 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 claims 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000007790 scraping Methods 0.000 abstract description 3
- 208000005100 Herpetic Keratitis Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 abstract description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 abstract description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 abstract description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 23
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 14
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 10
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 10
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 7
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 7
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 7
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 5
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 208000001860 Eye Infections Diseases 0.000 description 4
- 208000022873 Ocular disease Diseases 0.000 description 4
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 4
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 4
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 3
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 3
- 208000011323 eye infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 2
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000012549 training Methods 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000010370 Adenoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 108700026758 Adenovirus hexon capsid Proteins 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- HFZDHVOXZVBBNW-UHFFFAOYSA-N C1(=CC=C(C=C1)N(C1=CC=C(C=C1)N=NC1=CC=CC=C1)C1=CC=C(C=C1)C1=CC=CC=C1)C1=CC=CC=C1 Chemical compound C1(=CC=C(C=C1)N(C1=CC=C(C=C1)N=NC1=CC=CC=C1)C1=CC=C(C=C1)C1=CC=CC=C1)C1=CC=CC=C1 HFZDHVOXZVBBNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 208000007190 Chlamydia Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010010726 Conjunctival oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010010736 Conjunctival ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 208000006069 Corneal Opacity Diseases 0.000 description 1
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010073931 Genital herpes simplex Diseases 0.000 description 1
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 1
- 208000001688 Herpes Genitalis Diseases 0.000 description 1
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 1
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 1
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 208000007993 Kaposi Varicelliform Eruption Diseases 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588621 Moraxella Species 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 1
- 238000011803 SJL/J (JAX™ mice strain) Methods 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 206010064996 Ulcerative keratitis Diseases 0.000 description 1
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004534 cecum Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 208000028512 chlamydia infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 231100000269 corneal opacity Toxicity 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 206010014197 eczema herpeticum Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010081400 fluorescein isothiocyante avidin Proteins 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 201000004946 genital herpes Diseases 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000013198 immunometric assay Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 206010023332 keratitis Diseases 0.000 description 1
- 201000010666 keratoconjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000011475 meningoencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000003660 reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 208000018196 severe conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007485 viral shedding Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/56927—Chlamydia
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56994—Herpetoviridae, e.g. cytomegalovirus, Epstein-Barr virus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
- Diese Erfindung bezieht sich auf diagnostische Kits zum Nachweis Antigenen zuzuschreibender, ophthalmischer Erkrankungen. Genauer bezieht sich diese Erfindung auf diagnostische Kits, die ein Antikörper-Immuntestsystem zum Nachweisen der Anwesenheit von Antigenen in einer Flüssigkeitsprobe, wie Tränen, Urin, Speichel, Blut, Rückenmarksflüssigkeit oder in Lösung gebrachtem, von der befallenen Fläche abgeschabtem Gewebe einsetzen.
- Es gibt derzeit kein rasches, wohlfeiles und wirksames Verfahren zum Nachweisen vieler Typen Antigenen zuzuschreibender Erkrankungen. Dies trifft insbesondere für Augenerkrankunken zu, wie etwa Infektionen mit dem Herpes simplex-Virus. Zwei Verfahrenstypen werden gegenwärtig zum Nachweisen von Infektionen mit dem Herpes simplex-Virus verwendet. Eines dieser Verfahren erfordert, daß die Viruszellen in Kultur gezüchtet werden, was drei bis sieben Tage dauern kann, während das andere Verfahren die Verwendung der Fluoreszenzmikroskopie umfaßt und die Anwesenheit von ausgebildetem Bedienungspersonal erfordert. Kein Verfahren erlaubt den Nachweis des Virus durch den Augenarzt während des Besuchs des Patienten in seiner Praxis. Falls eine Virusinfektion diagnostiziert wird, steht dafür eine wirksame Therapie zur Verfügung. Falls die Infektion nicht sofort behandelt wird, können verheerende Wirkungen auftreten, einschließlich schwerer Konjunktivitis, Epitheliumserosionen und Erkrankungen der Stroma oder der Netzhaut. Tatsächlich ist Herpes simplex ein Hauptgrund von Erblindung aufgrund einer Hornhautulzeration und Uveitis.
- Es gibt eine Anzahl im Handel erhältlicher diagnostischer Kits zum Testen auf die Anwesenheit genitaler Herpes simplex I- und Herpes simplex II-Viren. Die Kits, die das ELISA-System verwenden, schließen das als MA-Bioproducts vertriebene Kit, das die in Seren vorhandene Antikörpermenge mißt, und ein von Dakopatts vertriebenes Kit ein, das die Virusmenge mißt. Dakopatts vertreibt ferner eine Peroxidase-verstärkte Ausführung, die eine Zellanfärbetechnik verwendet. Electro-Nucleonics Labs vertreibt ein Kit als HSVI FITC, das eine Zellanfärbetechnik verwendet, und Genetic Systems stellt ein Kit bereit, das ebenfalls eine Zellanfärbetechnik verwendet. Alle diese Kits sind eher zur Verwendung beim Nachweis von genitalem als okulärem Herpes bestimmt.
- Keines der derzeit auf dem Markt befindlichen diagnostischen Systeme zum Messen Augeninfektionen verwendet Techniken mit monoklonalen Antikörpern. Techniken mit monoklonalen Antikörpern verwendende Immuntests werden jedoch zum Beispiel im an Hybritech, Incorporated, übertragenen US-Patent Nr. 4 376 110 beschrieben. Dieses Patent beschreibt im Stand der Technik als "Vorwärts"-Tests bekannte immunometrische Tests, bei denen der Antikörper an eine Festphase gebunden ist, und die Festphase mit der zu testenden Probe in Berührung gebracht wird, um das Antigen aus der Probe durch Bilden eines binären Festphasen-Antikörper-Antigen-Komplexes zu extrahieren. Nach einem geeigneten Inkubationzeitraum wird der feste Träger zum Entfernen der Reste der flüssigen Probe gewaschen. Der feste Träger wird anschließend mit einer Lösung in Berührung gebracht, die eine bekannte Menge markierten Antikörper enthält. Der feste Träger wird zum Entfernen von unumgesetztem, markiertem Antikörper erneut gewaschen. Schließlich wird der Träger zum Nachweisen der Anwesenheit markierten Antikörpers getestet. Diese Art Test wird auch als "Zwei-Seiten"- oder "Sandwich"-Test bezeichnet, da das Antigen zwei an verschiedene Orte seiner Oberfläche gebundene Antikörper besitzt.
- Das US-Patent Nr. 4 376 110 beschreibt ferner einen zweiten, "simultaner" oder "umgekehrter" Test genannten Testtyp. Dieser Testtyp umfaßt einen einzelnen Inkubationsschritt, bei dem eine zu testende Probe und der markierte Antikörper gleichzeitig dem an den festen Träger gebundenen Antikörper zugesetzt werden.
- Reste irgendeiner flüssigen Probe und unkomplexierten' markierten Antikörpers gewaschen.
- Beide vorstehend beschriebenen Techniken wurden ursprünglich mittels sogenannter "polyklonaler" Antikörper entwickelt. Wenn eine immunogene Substanz in einen lebenden Körper eingebracht wird, reagiert das Immunsystem des Körpers durch Erzeugen von Antikörpern an jeder Stelle, an der es das Immunogen erkennt. Ein großes immunogenes Proteinmolekül kann Dutzende von Stellen besitzen und eine Fremdzelle kann Hunderte besitzen. Während auf diese Weise jede Antikörper produzierende Zelle Antikörper produziert, die auf eine einzelne antigene Stelle spezifisch sind, produziert das Immunsystem insgesamt große Mengen Antikörper, die auf Hunderte oder Tausende verschiedener Antigene spezifisch sind. Daher sind die meisten Antikörper in einer vorgegebenen Antiserumprobe für das interessierende Antigen nicht spezifisch. Dementsprechend sind die von diesen Antiseren herrührenden Antikörper, die sogenannten polyklonalen Antikörper, sehr schwierig zu reinigen.
- Das US-Patent Nr. 4 376 110 offenbart ein Verfahren zum Erhöhen der Empfindlichkeit dieser Vorwärts- und Rückwärts-Immuntests durch Ersetzen der polyklonalen Antikörper durch monoklonale Antikörper. Die Herstellung monoklonaler Antikörper umfaßt das Injizieren eines Immunogens in ein Tier, Entnehmen von Milzzellen aus dem Tier und Fusionieren dieser Zellen mit Myelomzellen unter Herstellen von "Hybridomen", die sich in vitro vermehren. Die Hybridome produzieren Antikörper, die gescreent werden können, um die Isolierung der die gewünschten Antikörper produzierenden Zellen zu erlauben. Die Zellen können anschließend kloniert werden und die Antikörper können in Kultur gezüchtet werden. Von derartige monoklonale Antikörper verwendenden Immuntests ist gezeigt worden, daß sie eine viel größere Empfindlichkeit gegenüber der Anwesenheit der antigenen Substanzen als die Tests mittels der polyklonalen Antikörper besitzen.
- Die EP-A-0 063 810 bezieht sich auf Vorrichtungen und Kits zur immunologischen Analyse, wobei die Vorrichtung aus einem porösen, festen Träger besteht, der eine vorgewählte Anordnung begrenzter Adsorptionsflächen von Antigenen und/oder Immunglobulinen enthält. Die Vorrichtung ist nicht als zur ophthalmischen Verwendung geeignet beschrieben. Die EP-A-0 017 460 bezieht sich auf ein immunfluoreszenztestverfahren mittels eines stabilisierten, aus C. trachomatis herrührenden Retikulumkörpers als Antigen, um die Bildung eines Antigen-Antikörper-Komplexes nachzuweisen
- Es ist ein Gegenstand der vorliegenden Erfindung, ein diagnostisches immuntestkit zu entwickeln, das den einfachen, raschen Nachweis der Anwesenheit durch den Herpes simplex-Virus, Adenovirus, Chlamydien oder andere bakterielle oder virale Mittel verursachter Augeninfektionen erlaubt
- Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist, ein diagnostisches Kit zu entwickeln, das den Nachweis von Augeninfektionen innerhalb eines kurzen Zeitraums erlaubt.
- Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist, ein diagnostisches Kit bereitzustellen, das wohlfeil ist, keine größere Ausrüstung erfordert und ohne besondere, umfassende Ausbildung verwendet werden kann.
- Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist, äußerst empfindliche diagnostische Kits bereitzustellen, die Immuntests mit monoklonalen Antikörpern einsetzen.
- Noch ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist, diagnostische Kits bereitzustellen, die zum Nachweisen des Herpes simplex-Virus I und II bei Augenerkrankungen spezifisch sind, und ein Verfahren zum Nachweisen okulären Herpes simplex- Virus I und II mittels dieser Kits bereitzustellen.
- Zum Erfüllen dieser Gegenstände stellt die vorliegende Erfindung ein diagnostisches Kit bereit, das an den Nachweis Antigen zuzuschreibender, ophthalmischer Erkrankungen in einer Zeitspanne von dreißig Minuten oder weniger angepaßt ist, umfassend:
- (a) ein festes Substrat, an welches monoklonale Antikörper gebunden sind, die komplementär zu einem Antigen sind, das mit der zu testenden ophthalmischen Probe bereitgestellt wird;
- (b) eine erste Waschlösung;
- (c) eine Lösung, die markierte monoklonale Antikörper enthält, welche komplementär zu dem Antigen sind, das mit der zu testenden ophthalmischen Probe bereitgestellt wird; und (d) eine zweite Waschlösung.
- Die Erfindung stellt ferner ein Verfahren zum Nachweis Antigenen zuzuschreibender, ophthalmischer Erkrankungen in einer Zeitspanne von dreißig Minuten oder weniger bereit, umfassend:
- a) Bereitstellen eines festen Substrates, an welches monoklonale Antikörper, die komplementär zu einem bestimmten Antigen sind, gebunden sind;
- b) In Berührung bringen des festen Substrates mit einer das Antigen enthaltenden ophthalmischen Flüssigkeitsprobe, mit dem Antigen infizierten Zellen oder nicht infizierten Zellen;
- c) Waschen des erhaltenen mit ophthalmischer Flüssigprobe behandelten Substrates;
- d) In Berührung bringen des gewaschenen Substrates mit einer Nachweissondenlösung, die markierte monoklonale Antikörper, die komplementär zu dem betreffenden Antigen sind, enthält;
- e) Waschen des erhaltenen Produktes; und
- f) In Berührung bringen des Substrates mit einer Lichtquelle von ausreichender Wellenlänge, um den visuellen Nachweis jedes an dem Substrat enthaltenden markierten monoklonalen Antikörpers zu erlauben.
- Es wird nun auf die die Anmeldung begleitenden Zeichnungen Bezug genommen, in welchen
- Fig. 1 die Testtheorie des diagnostischen Kits veranschaulicht und
- Fig. 2 das Testverfahren veranschaulicht.
- Wie vorstehend angegeben bezieht sich diese Erfindung auf ein diagnostisches Kit zum Nachweisen von Augenerkrankungen, die Antigenen zuzuschreiben sind, wobei das Kit von einem monoklonalen Antikörper-Immuntestsystem Gebrauch macht. Die Antigene, die mittels des Kits der vorliegenden Erfindung nachgewiesen werden können, schließen zum Beispiel Viren, wie etwa Herpes simplex- Viren I und II (HSV I und II), Adenovirus, Varicella zoster- Virus, Cytomegalovirus, Epstein-Barr-Virus, Newcastle-Virus, Masern-Virus, Coxsackievirus und Human-T-Zellen-Leukämievirus (HTLV III, gemeinhin als "AIDS"-Virus bekannt); Bakterien, wie etwa Chlamydien, Streptococcus, Staphylococcus aureus, Haemophilus, Pseudomonas, Neisseria, Pneumococcus, Moraxella und Rikkettsia; und Pilze wie etwa Candida ein.
- Das diagnostische Kit dieser Erfindung ist besonders zum Nachweis ophthalmischer Infektionen, wie etwa Infektionen mit dem Herpes simplex-Virus (Typ I und/oder II), Adenovirus und Chlamydien-Infektionen, geeignet. Wie vorstehend ausgeführt, gibt es derzeit kein schnelles, wirksames und wohlfeiles diagnostisches Verfahren zum Nachweis derartiger Krankheitserreger, insbesondere von Augeninfektionen. Das diagnostische Kit dieser Erfindung ist zum raschen Erhalten positiver oder negativer Ergebnisse aus dem Test gestaltet und ist besonders zur Verwendung in der Augenarztpraxis ausgelegt.
- Das diagnostische Kit dieser Erfindung beruht auf der Verwendung monoklonaler Antikörper beim Nachweis. Wie bekannt verursacht der Herpes simplex-Virus Typ I (HSV-I) eine Vielfalt klinischer Zustände einschließlich akuter primärer Infektionen, chronischer Infektionen mit andauernder oder zeitweiser Virusausschüttung und klinischer Wiederherstellung. Die Primärinfektion mit dem Herpes simplex-Virus I verursacht akute Gingivostomatitis, Rhinitis, Keratokonjunktivitis, Meningoenzephalitis, Ekzema herpeticum und traumatischen Herpes, einschließlich Herpes- Umlauf und allgemeinem Herpes simplex der Haut.
- Bei derartigen Zuständen können auch eine follikuläre Konjunktivitis mit Chemosis, Liederödem und Bindehautgeschwüre beobachtet werden. Die Hornhaut kann an primären oder wiederkehrenden Infektionen beteiligt sein, wobei die meisten dieser Infektionen auf HSV-I zurückzuführen sind. Somit ist HSV-I der führende Grund von Hornhauttrübung in den Vereinigten Staaten. Bei Laboratoriumstieren führt eine HSV-I-Infektion zur Verbreitung von HSV-I von den Infektionsstellen entlang den Sinnesnerven zum Zentralnervensystem und sobald der HSV-I-Virus einmal im Zentralnervensystem ist, kann er sich im Gehirn vermehren und den Wirt töten.
- Es ist berichtet worden, daß der passive Transfer HSV-I-spezifischen Antikörper noch achtundvierzig Stunden nach der Infektion die Genesung von einer Augen-HSV-I-Infektion durch Hemmen der Ausbreitung des Virus innerhalb des Gehirns nach seinem Eindringen in das zentrale Nervensystem fördern kann. Davis et al., J. Infect. Dis. 140, 534-539 (1979). Der Mechanismus, durch welchen der Antikörper die Virusverbreitung innerhalb des Zentralnervensystems hemmt, ist nicht klar.
- Frühere Untersuchungen haben gezeigt, daß virusspezifische Antikörper mit den Glykoproteinen gA/B, gC und gD an den Stellen oder Oberflächen mit HSV-I infizierter Zellen in vitro in Wechselwirkung treten können, um die Immunzytolyse in Anwesenheit entweder von Komplement oder Leukozyten aus peripherem Blut zu vermitteln; siehe Briar et al., PNAS, U.S.A. 68, 3073-3077 (1976). Außerdem können diese Glykoproteine, wenn sie sich an der Oberfläche von HSV-Virionen befinden, als Ziele zum Neutralisieren eines Antikörpers dienen. Derzeit ist es nicht bekannt, welcher dieser Glykoproteine oder Kombinationen von Glykoproteinen mit dem Antikörper in vivo in Wechselwirkung treten können, um die Genesung von der Augen-HSV-I-Infektion einzuleiten. Es ist auch nicht klar, ob die durch jede dieser Glykoproteine in vitro vermittelte Immunzytolyse und Virusneutralisierung zur Entfernung von HSV-I in vivo beiträgt.
- Die vorliegende Erfindung stellt daher ein diagnostisches Kit bereit, das zum Bereitstellen sowohl eines frühen Nachweises einer ernsten Augenerkrankung, welche zu Komplikationen und sogar Blindheit führen kann, als auch zum Nachweisen vieler anderer Typen okulärer und nicht-okulärer Störungen ausgelegt ist. Das diagnostische Kit der vorliegenden Erfindung beruht auf der Idee des Verwendens von immunologischer Technologie bei der ophthalmischen Diagnose.
- Das diagnostische Kit erfordert die Verwendung monoklonaler Antikörper (MAB), die an ein festes Substrat gehängt sind. Eine flüssige Probe, wie etwa eine Träne oder eine ein in Lösung gebrachtes, von der befallenen Fläche abgeschabtes Gewebe enthaltende Flüssigkeit wird anschließend auf das feste Substrat aufgebracht und lange genug inkubiert, um den in der flüssigen Probe enthaltenen, gelösten Antigenen das Komplexieren mit den auf dem Substrat vorhandenen, immobilisierten, Antigen-spezifischen, monoklonalen Antikörper zu erlauben. Auf diese Inkubation folgend wird das feste Substrat mit einer ersten Waschlösung gewaschen. Das feste Substrat wird anschließend mit einer Lösung inkubiert, die markierte monoklonale Antikörper enthält, die für das immobilisierte Antigen spezifisch sind, das auf dem festen Substrat vorhanden ist. Diese Inkubation muß über eine ausreichende Zeit andauern, um den markierten monoklonalen Antikörpern zu erlauben, sich mit dem immobilisierten Antigen zu verbinden. Der feste Träger wird anschließend ein oder mehrere Male mit einer neutralen Waschlösung gewaschen, um irgendwelche ungebundenen, markierten monoklonalen Antikörper zu entfernen, da derartige ungebundene, markierten Antikörper einen falschen, zu hohen Wert ergeben würden.
- Das vorstehend beschriebene diagnostische Kit stellt einen Test bereit, der durch die Verwendung monoklonaler Antikörper für ein Antigen hochspezifisch sein kann. Der Test ist schneller als die Verwendung einer Kultur oder eines ELISA und der Test erfordert keine anspruchsvolle Ausrüstung, wie etwa die von speziellen ELISA-Lesegeräten oder Fluoreszenzmikroskopen erforderten. Weiter sind die diagnostischen Kits und Tests speziell für die Bedürfnisse des praktischen Augenarztes ausgelegt.
- Ein grundlegender Aspekt der Erfindung ist, einen Träger oder ein Substrat bereit zustellen, auf dem die monoklonalen Antikörper immobilisiert werden können. Der Träger kann jedes bekannte Substrat oder Matrix sein, auf welche Proteine dauerhaft aufgebracht werden können. Geeignete feste Träger schließen Papier, Nylonmembranen oder -fasern, Latexperlen, Zuckerperlen, Glasperlen, Agaroseperlen, Aluminiumperlen, Glasobjektträger, Plastik, Acetat, Polyvinylchlorid oder irgendeine andere Matrix ein, auf welche Proteine dauerhaft aufgebracht werden können. Die im US-Patent Nr. 3 888 629 beschriebenen Matrixunterlagen stellen einen bevorzugten Substrattyp dar. Die monoklonalen Antikörper werden mittels Standardproteinbindungstechniken an den Träger gebunden. Dieser Schritt führt zu einem Komplex, der aus dem festen Träger und entweder immobilisierten monoklonalen Antikörpern oder einem immobilisierten Antigen besteht.
- Die flüssige Probe ist vorzugsweise Tränen. Wahlweise kann eine sterile Flüssigkeit verwendet werden, die in Lösung gebrachte Gewebeabschabungen von der befallenen Fläche oder der an die befallene Fläche angrenzenden Fläche enthalten.
- Mögliche Markierungen für die monoklonalen Antikörper schließen Enzyme ein, wie etwa Peroxidase, Phosphatase und Oxidase, und Farbstoffe oder Farbstoffkomplexe, wie etwa Fluoreszeinisothiocyanat (FITC), FITC-Avidin/Biotin oder FITC-Staph A, oder andere Enzyme oder Farbstoffe, die den visuellen Nachweis erlauben, wenn sie mit Licht geeigneter Wellenlänge in Berührung gebracht werden. Die die markierten monoklonalen Antikörper enthaltende Lösung wird mit dem festen Trägerkomplex während einer ausreichenden Zeit inkubiert, um den markierten monoklonalen Antikörpern das Verbinden mit dem immobilisierten Antigen zu erlauben.
- Verschiedene Mittel zum Nachweisen der Anwesenheit markierter monoklonaler Antikörper auf dem festen Substrat kann verwendet werden. Falls FITC als Markierung des monoklonalen Antikörpers verwendet wurde, kann seine Anwesenheit mittels ultravioletten Lichts nachgewiesen werden. Dieses ultraviolette Licht kann durch eine Spaltlampe unter Anregen des Farbstoffs zugeführt werden. Eine Lampe dieses Typ ist eine gebräuchliche Beleuchtungseinrichtung in der Praxis eines Augenarztes. Andere Nachweisverfahren, wie etwa Identifizierung einer positiven Farbe, Fällungsfleck oder Agglutination können ebenfalls verwendet werden.
- Es gibt eine Anzahl von Vorteilen bei der Verwendung des vorstehend beschriebenen diagnostischen Testkits. Das Kit ist in sich geschlossen und steril und besitzt eine Mindestlagerfähigkeit von drei bis sechs Monaten, liefert eine JA/NEIN-Antwort zur Anwesenheit eines spezifischen Antigens (z. B. ein ophthalmischer Virus) in verhältnismäßig kurzer Zeit (d. h. in der Größenordnung von etwa dreißig Minuten oder weniger) und kann ohne spezielle Ausrüstung oder Training verwendet werden. In einer bevorzugten Ausführungsform enthalten die Kits die folgenden Bestandteile:
- 1) Papier-, Plastik- oder Membranstreifen, die mit monoklonalen Antikörpern imprägniert sind, welche zu dem Zielantigen komplementär sind
- 2) neutrale, sterile, jeweils in getrennte Flaschen verpackte Waschlösungen und
- 3) ein eine Nachweissondenlösung enthaltendes Gläschen.
- Benutzer des Kits (z. B. ein Augenarzt) stellt normalerweise die Lichtquelle in Form einer Spaltlampe oder einer anderen Quelle ultravioletten oder kurzwelligen Lichts bereit.
- Es gibt eine Anzahl im Handel erhältlicher monoklonaler Antikörper, die in dem diagnostischen Kit der vorliegenden Erfindung Verwendung finden können. Zum Beispiel sind die als 9150 IgM, 9151 IgG1 und 9152 IgG1 gekennzeichneten monoklonalen anti-Herpes-simplex-Virus-I-Antikörper von Biotech Products erhältlich. Die Bethesda Research Laboratories halten gegen Herpes simplex- Virus I und 11 wirksame monoklonale Antikörper bereit, die als 35004 IgG2a Anti gp D gekennzeichnet werden. Die Cappel Laboratories stellen einen als 0238-2967 IgG1 Anti p 40-45 Nucleocapsid gekennzeichneten anti-Herpes-simplex-Virus-I-Antikörper her. anti-Adenovirus-Antikörper, die in dem Kit der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, schließen diejenigen des im an das Massachussetts Institute of Technology übertragenen US-Patent Nr. 4 487 829 beschriebenen Typs, insbesondere den als 2Hx- 2 gekennzeichneten Antikörper ein. Diese Antikörper werden weiter in dem folgendem wissenschaftlichen Artikel: Sharp et al., "Adenovirus Hexon Monoclonal Antibody that is Group Specific and Potentially Useful as a Diagnostic Reagent", Journal of Clinical Microbiology, Bd. 17, Seiten 360-364 (1983), und US- Patent 4 487 829 beschrieben. Zusätzliche, zur Verwendung in dem Kit der vorliegenden Erfindung geeignete anti-Adenovirus-Antikörper werden in dem "The Application of a Solid-Phase Immunofluorometric Assay to the Selection of Monoclonal Antibody Specific for Adenovirus Group-Reactive Hexon Antigen" betitelten Artikel von Heirholzer et al., Archives of Virology, Bd. 80, Seiten 1-10 (1984) beschrieben. Von den von Heirholzer et al. beschriebenen Antikörpern wird von den als 2/6 und 20/11 gekennzeichneten angenommen, daß sie zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung besonders geeignet sind.
- Die anti-Chlamydia-Antikörper, die in der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, schließen diejenigen des in den folgenden wissenschaftlichen Artikeln beschriebenen Typs ein: Cho-Chou Kuo et al., "Sensitivity of Immunofluorescence with Monoclonal Antibodies for Detection of Chlamydia Trachomatis Inclusions in Cell Culture", Journal of Clinical Microbiology, Bd. 16, Seiten 4-7 (1982), und Cho-Chou Kuo et al., "Monoclonal Antibodies to Chlamydia Trachomatis: Antibody Specifities and Antigen Characterization", The Journal of Immunology, Bd. 128 (1982), insbesondere Antikörper des durch die als 2Cl und 1 H 8 bezeichneten Hybridome produzierten Typs. Derartige Antikörper sind auf Chlamydia trachmonatis gruppenspezifisch.
- Eine bevorzugte Ausführungsform dieser Erfindung verwendet durch Hybridome mit den folgenden Bezeichnungen und Spezifitäten produzierte monoklonale Antikörper: Bezeichnung Spezifität
- Diese Hybridome wurden bei Alcon Laboratories, Inc., entwickelt. Die Hybridome wurden aus der Fusion der Myelome Sp2/0 und geeignet sensibilisierter Lymphozyten aus der Milz einer mit HSV-I immunisierten Balb/C-Maus erhalten. Diese Hybridome sind bei der American Type Culture Collection (ATCC), Rockville, Maryland, hinterlegt worden.
- Eine weitere bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung verwendet aus Hybridomen ausgeschiedene monoklonale anti-Herpes-simplex-Virus-I-Antikörper. Die Hybridome, aus denen die Antikörper ausgeschieden werden, werden durch Fusion einer Myelomzellinie und geeignet sensiblisierter Lymphozyten ausgeschieden, wobei die Lymphozyten von einer SJL/J-Maus stammen. Die Hybridome, aus denen die monoklonalen Antikörper ausgeschieden werden, werden als Hybridome D8AB, G8C, H7E und F3AB gekennzeichnet. Diese Hybridome wurden bei der American Type Culture Collection (ATCC), Rockville, Maryland, hinterlegt und ihnen wurden die Zugangsnummern wie folgt zugeordnet:
- DBAB HB8364
- G8C HB8367
- H7E HB8365
- F3AB HB8366
- Wie von dem Fachmann einzusehen ist, können verschiedene andere Typen Antikörper ebenfalls in dem diagnostischen Kit der vorliegenden Erfindung verwendet werden.
- Es wird nun Bezug auf die die Anmeldung begleitenden Zeichnungen genommen, bei welchen zu erkennen ist, daß Fig. 1 die Testheorie der Erfindung und Fig. 2 das Testverfahren beschreibt. Aus Fig. 1 ist zu ersehen, daß der Streifen, auf den Bezug genommen wird, zum Beispiel ein Papierstreifen ist, der mit monoklonalen anti-Herpes-simplex-Virus-I- und II-Antikörpern imprägniert worden ist. Bei der Berührung der Körperflüssigkeit wie etwa Tränen mit dem Papierstreifen ergibt sich daraus wie in Figur I dargestellt der Papierstreifen, an den die Virusteilchen befestigt sind. Das imprägnierte Papier, in welchem die Virusteilchen vorliegen, wird anschließend mit der Sonde inkubiert, die FITC oder einen anderen Farbstoff enthält, um den visuellen Nachweis zu erlauben. Nach dem Waschen wie vorstehend beschrieben kann anschließend ein positiver Test durch die Lichtquelle nachgewiesen werden.
- Fig. 2 gibt das Testverfahren an, woraus zu ersehen ist, daß der erste Schritt den Papierstreifen (1) umfaßt, der mit den Tränen imprägnierte monoklonale anti-Herpes-simplex-Virus-I- Antikörper enthält. Dieser Papierstreifen wird anschließend vorzugsweise wie in (2) dargestellt gewaschen, wonach der den Virus enthaltende gewaschene Streifen in (3) mit der den Farbstoff wie etwa FITC-Farbstoff enthaltenden Sonde inkubiert wird.
- Dieser Schritt wird von einer weiteren Waschung (4) gefolgt und schließlich wird die Lichtquelle zum Nachweis in (5) benützt. Es ist daher zu erkennen, daß die Testheorie und das Testverfahren der vorliegenden Erfindung schnell und bequem sind.
- Das feste Substrat kann eine Anzahl alternativer Ausführungsformen annehmen.
- Zum Beispiel kann ein Papierstreifen mit einer begrenzten Fläche oder Flächen mit darauf vorhandenen immobilisierten monoklonalen Antikörpern hergestellt werden. Der Papierstreifen und die darauf vorhandenen Antikörper können in ein Reagenzglas verbracht werden, das auf dem Boden einen Vorrat der Probenflüssigkeit enthält. Der Papierstreifen wirkt anschließend als Docht' wobei die Probenlösung den Streifen hinaufwandert und sich in der (den) begrenzten Fläche(n) mit den monoklonalen Antikörpern anreichert. Dieses Verfahren besitzt den Vorteil des Konzentrierens des in der Probe enthaltenen Antigens in einer kleineren Fläche, wodurch eine viel geringere Antigenkonzentration nachweisbar gemacht wird. Wahlweise können dieselben Ergebnisse mit einem Papierdocht unter Verwenden einer Trockenschichtchemie-Technologie erreicht werden. Der Papierdocht kann für eine größere Bequemlichkeit auch am Ende eines Auftragstäbchens angebracht sein.
- In einer weiteren Ausführungsform kann ein Kapillarröhrchen hergestellt werden, das eine Festphasenmatrix enthält, auf der die monoklonalen Antikörper immobilisiert sind'. Die Matrix wird in den Probenflüssigkeitsvorrat am Boden des Glases eingetaucht' so daß die Probenflüssigkeit über die Matrix das Glas hinauffließt. Die Matrix kann anschließend aus dem Lösungsvorrat entnommen werden. Eine Wasserlösung und/oder monoklonale Antikörpersonde enthaltende Spritze kann am oberen Ende des Kapillarröhrchens befestigt sein. Die Lösung kann anschließend in das obere Ende des Röhrchens eingeführt und ihr kann gestattet werden, durch die Kapillare zu fließen. Der Nachweis wird durch Beleuchten des Röhrchens mit Licht bewerkstelligt.
- In noch einer weiteren Ausführungsform kann das feste Substrat eine Kapsel umfassen, wie etwa eine OcusertTM-ähnliche Kapsel, die an dem Ende eines Stäbchens befestigt ist. Die äußere Oberfläche der Kapsel wird durch Poren unterbrochen, die groß genug sind, um dem Protein das Eindringen zu erlauben. Der monoklonale Antikörper wird auf der Innenkernmatrix immobilisiert. Es ist diese Innenkernmatrix, an die das Antigen gebunden wird. Diese Kapsel kann in den Blindsack des Auges verbracht werden. Die Kapsel kann anschließend entnommen, in eine Waschlösung getaucht und in eine Reinigungslösung zum Beseitigen von Material aus den Poren getaucht werden. Die Kapsel kann anschließend in die Sondenlösung des monoklonalen Antikörpers getaucht und sich entwickeln lassen werden. Eine Lichtquelle kann anschließend zum Nachweis auf die Kapsel angewandt werden.
- Das diagnostische Kit und das Verfahren der vorliegenden Erfindung werden weiter durch das Beispiel illustriert, welches folgt.
- Ein diagnostisches Kit gemäß der vorliegenden Erfindung kann wie folgt hergestellt werden. Zuerst wird ein Teststreifen durch Anbringen und Immobilisieren monoklonaler Antikörper auf einem Streifen aus Nitrocellulosepapier (Biorad) oder einer Nylonmembran (Pall) mit Abmessungen von ungefähr 30 · 5 mm hergestellt. Die Antikörper werden auf der Oberfläche des Teststreifens in Flächen getrennter Flecken von ungefähr 1 bis 3 mm Durchmesser angebracht. Der Teststreifen kann anschließend auf einer Matrixsubstanz wie etwa einem Filterpapier befestigt werden, welche die Absorption und Dochtwirkung der Flüssigkeiten erlaubt. Als nächstes werden die Flächen der Teststreifen, die keine monoklonalen Antikörper enthalten, durch Überziehen des Streifens mit einer gelatinehaltigen, gepufferten Kochsalzlösung blockiert, wodurch die getrennten Flecken der monoklonalen Antikörper isoliert und immobilisiert werden.
- Das diagnostische Kit wird durch das Herstellen von Gläsern mit einer ersten und zweiten Waschlösung, wobei jedes der Gläser 1 bis 2 ml einer Waschlösung enthält, die aus einer gepufferten Kochsalzlösung, Tween 20 und einem inerten Proteinfüllstoff enthält, und das Herstellen eines Glases vervollständigt, das eine Nachweissonde enthält, die aus einem Gemisch monoklonaler Antikörper besteht, welche mit Biotin komplexiert sind und daran gebundenes, fluoreszeinmarkiertes Avidin als Verstärkungsmolekül enthalten.
- Das vorstehend beschriebene diagnostische Kit kann gemäß dem Verfahren der vorliegenden Erfindung zum Nachweisen von Herpes simplex-Virus I und II am Auge wie folgt verwendet werden. Zuerst wird eine Probe von 1 ul bis 30 ul, die Virus, virusinfizierte Zellen und/oder nicht-infizierte Zellen enthält, 10 Minuten bei Raumtemperatur auf den Teststreifen angewandt. Überschüssige Probe wird durch Eintauchen des Teststreifens in das erste Glas mit Waschlösung und 5 Minuten Einweichen des Streifens mit zeitweisem Rühren entfernt. Der Teststreifen wird anschließend unter zeitweisem Rühren 10 Minuten bei Raumtemperatur in das die Nachweissonde enthaltende Glas eingetaucht. Überschüssige Probe wird durch 5 Minuten Eintauchen des Streifens unter Rühren in das Glas mit der zweiten Waschlösung entfernt. Der Streifen wird anschließend an der Luft getrocknet. Nach dem Trocknen wird der Streifen unter einer kurzwelligen Lichtquelle untersucht. Eine positive Probe wird durch das hellgrüne Aussehen der einzelnen Flecken sichtbar gemacht, wenn eine kurzwellige Lichtquelle auf den Teststreifen gerichtet wird.
Claims (11)
1. Diagnostisches Kit, das an den Nachweis von Antigen
zuzuschreibenden ophthalmischen Erkrankungen in einer
Zeitspanne von 30 Minuten oder weniger angepaßt ist, umfassend:
(a) ein festes Substrat, an welches monoklonale Antikörper
gebunden sind, die komplementär zu einem Antigen sind, das
mit der zu testenden ophthalmischen Probe bereitgestellt
wird;
(b) eine erste Waschlösung;
(c) eine Lösung, die markierte monoklonale Antikörper
enthält, welche komplementär zu dem Antigen sind, das mit
der zu testenden ophthalmischen Probe bereitgestellt wird;
und
(d) eine zweite Waschlösung.
2. Diagnostisches Kit gemäß Anspruch 1, worin die
monoklonalen Antikörper ausgewählt sind aus der Gruppe
bestehendend aus monoklonalen Anti-Herpes-Simplex-
Virus Antikörpern, ausgewählt aus monoklonalen Anti-
Herpes-Simplex-Virus I Antikörpern, monoklonalen Anti-
Herpes-Simplex-Virus II Antikörpern und monoklonalen Anti-
Herpes-Simplex-Virus I und II Antikörpern; monoklonalen
Anti-Chlamydien Antikörpern; monoklonalen Anti-Adeno-Virus
Antikörpern; und monoklonalen Anti-Human T Zell Leukämie-
Virus Antikörpern.
3. Diagnostisches Kit gemäß Anspruch 2, worin die monoklonalen
Antikörper mit einem Farbstoff oder Enzym markiert sind,
welches, falls mit einer Lichtquelle geeigneter Wellenlänge
in Berührung gebracht, den visuellen Nachweis ermöglicht.
4. Diagnostisches Kit gemäß Anspruch 3, worin das feste
Substrat, an welches die monoklonalen Antikörper gebunden
sind, aus der Gruppe bestehend aus Papier, Nylonfasern,
Nylonmembranen, Latexperlen, Zuckerperlen, Albuminperlen,
Agaroseperlen, Glasperlen, Glasplättchen, Plastik, Acetaten
und Polyvinylchlorid ausgewählt ist.
5. Diagnostisches Kit gemäß Anspruch 3, worin die monoklonalen
Antikörper monoklonale Anti-Herpes-Simplex-Virus Antikörper
umfassen, die von einem Hybridom abgeschieden werden, wobei
das Hybridom durch Fusion einer Myeloma Zellinie und
geeignet sensibilisierten Lymphocyten, die von einer Balb/C
Maus herrühren, hergestellt worden ist.
6. Diagnostisches Kit gemäß Anspruch 5, worin das feste
Substrat, an welches die monoklonalen Antikörper gebunden
sind, aus der Gruppe bestehend aus Nylonmembranen und
Papier ausgewählt ist, die Waschlösungen neutrale sterile
Lösungen von Wasser, die in getrennten Flaschen verpackt
sind, sind und die die markierten monoklonalen Antikörper
enthaltende Lösung ein Container ist, der zur sterilen
Verwendung mit einem Tropfenzähler versehen ist.
7. Verfahren für das Nachweisen von Antigenen zuzuschreibenden
ophthalmischen Erkrankungen in einer Zeitspanne von 30
Minuten oder weniger umfassend:
a) Bereitstellen eines festen Substrates, an welches
monoklonale Antikörper, die komplementär zu einem
bestimmten Antigen sind, gebunden sind;
b) In Berührung bringen des festen Substrates mit einer das
Antigen enthaltenden ophthalmischen Flüssigkeitsprobe, mit
dem Antigen infizierten Zellen oder nicht infizierten
Zellen;
c) Waschen des erhaltenen mit ophthalmischer Flüssigprobe
behandelten Substrates;
d) In Berührung bringen des gewaschenen Substrates mit
einer Nachweissondenlösung, die markierte monoklonale
Antikörper, die komplementär zu dem betreffenden Antigen
sind, enthält;
e) Waschen des erhaltenen Produktes; und
f) In Berührung bringen des Substrates mit einer
Lichtquelle von ausreichender Wellenlänge, um den visuellen
Nachweis jedes an dem Substrat enthaltenden markierten
monoklonalen Antikörpers zu erlauben.
8. Verfahren gemäß Anspruch 7, worin die monoklonalen
Antikörper ausgewählt sind aus der Gruppe
bestehend aus monoklonalen Anti -Herpes -Simplex-Virus
Antikörpern, monoklonalen Anti-Herpes-Simplex-Virus I
Antikörpern, monoklonalen Anti-Herpes-Simplex-Virus II
Antikörpern und monoklonalen Anti-Herpes-Simplex-Virus I
und II Antikörpern; monoklonalen Anti-Chlamydien
Antikörpern; monoklonalen Anti-Adeno-Virus Antikörpern; und
monoklonalen Anti-Human T Zell Leukämie-Virus Antikörpern.
9. Verfahren gemäß Anspruch 8, worin die monoklonalen
Antikörper monoklonale Anti-Herpes-Simplex-Virus Antikörper
umfassen, die von einem Hybridom abgeschieden werden, wobei
das Hybridom durch Fusion einer Myeloma Zellinie und
geeignet sensibilisierten Lymphocyten, die von einer Balb/C
Maus herrühren, hergestellt worden ist.
10. Verwendung von markierten monoklonalen Anti-Herpes-Simplex-
Virus Antikörpern für die Herstellung einer Zusammensetzung
für den Nachweis von Antigenen zuzuschreibenden
ophthalmischen Erkrankungen in einer Zeitspanne von 30 Minuten
oder weniger durch das Nachweisverfahren gemäß Anspruch 7,
wobei die monoklonalen Antikörper von einem Hybridom
abgeschieden werden, das durch die Fusion einer Myeloma
Zellinie und geeigneten sensibilisierten Lymphozyten, wobei
die Lymphozyten von einer Balb/C Maus herrühren,
hergestellt sind und wobei die monoklonalen Antikörper aus
der Gruppe bestehend aus monoklonalen Anti-Herpes-Simplex-
Virus I Antikörpern, monoklonalen Anti-Herpes-Simplex-Virus
II Antikörpern, monoklonalen Anti-Herpes-Simplex-Virus I
und II Antikörpern ausgewählt sind.
11. Verwendung von markierten monoklonalen Anti-Herpes-Simplex-
Virus Antikörpern gemäß Anspruch 10, worin die Antikörper
monoklonale Anti-Herpes-Simplex-Virus I und II Antikörper
sind.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US66700284A | 1984-10-31 | 1984-10-31 | |
PCT/US1985/002146 WO1986002733A1 (en) | 1984-10-31 | 1985-10-31 | Sandwich immunoassay of antigens involved in ophthalmic disorders |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE3587835D1 DE3587835D1 (de) | 1994-07-07 |
DE3587835T2 true DE3587835T2 (de) | 1994-10-20 |
Family
ID=24676417
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE3587835T Expired - Fee Related DE3587835T2 (de) | 1984-10-31 | 1985-10-31 | Sandwich-immunotestverfahren für antigene bei ophthalmischen störungen. |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0200767B1 (de) |
JP (1) | JPS62500686A (de) |
AT (1) | ATE106565T1 (de) |
DE (1) | DE3587835T2 (de) |
WO (1) | WO1986002733A1 (de) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2621128B1 (fr) * | 1987-09-30 | 1994-05-06 | Sanofi | Trousse et methode de dosage immunometrique applicables a des cellules entieres |
US6461825B1 (en) | 1987-09-30 | 2002-10-08 | Sanofi (Societe Anonyme) | Immunometric assay kit and method applicable to whole cells |
US5122449A (en) * | 1988-10-07 | 1992-06-16 | Eastman Kodak Company | Use of a protease in the extraction of chlamydial, gonococcal and herpes antigens |
MY104234A (en) * | 1988-11-17 | 1994-02-28 | Becton Dickinson Co | Immunoassay on a preblocked solid surface |
US5155021A (en) * | 1989-02-09 | 1992-10-13 | Eastman Kodak Company | Method and kit for determination of herpes simplex viral antigen by direct binding to polymeric particles |
US5188937A (en) * | 1989-04-06 | 1993-02-23 | Becton, Dickinson And Company | Layered sandwich assay method for chlamydia and materials therefor |
EP1054259A1 (de) * | 1999-05-19 | 2000-11-22 | Remacle, José | Verfahren zur Identifizierung von einer Zielverbindung |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4427415A (en) * | 1979-01-05 | 1984-01-24 | Cleveland Patrick H | Manifold vacuum biochemical test method and device |
DK138080A (da) * | 1979-04-02 | 1980-10-03 | Research Corp | Fremgangsmaade til serologisk undersoegelse af kilder som mistaenkes for at indeholde antistoffer mod chlamydia trachomatis |
IT1117218B (it) * | 1979-05-18 | 1986-02-17 | Depa Sas | Procedimento per la produzione di un prodotto per la diagnosi dei tumori delle parti molli o carcinomi e prodotto ottenuto |
US4376110A (en) * | 1980-08-04 | 1983-03-08 | Hybritech, Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
US4430437A (en) * | 1980-08-27 | 1984-02-07 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Test methods employing monoclonal antibodies against Herpes simplex virus types 1 and 2 nucleocapsids proteins |
EP0051096B1 (de) * | 1980-11-05 | 1987-04-01 | Home Office Reference Laboratory, Inc. | Verfahren zum Nachweis von Antigenen und Antikörpern unter Verwendung von Oberflächen entaktivierenden Mitteln |
AR231590A1 (es) * | 1981-04-29 | 1984-12-28 | Ciba Geigy Ag | Dispositivo de analisis inmunologico y procedimiento para obtenerlo |
US4514508A (en) * | 1982-07-06 | 1985-04-30 | Biond Inc. | Assaying for a multiplicity of antigens or antibodies with a detection compound |
US4535057A (en) * | 1982-07-26 | 1985-08-13 | Amf Incorporated | Immunoassay employing monoclonal herpes simplex antibody and biotin-avidin detection system |
JPS5954966A (ja) * | 1982-09-22 | 1984-03-29 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | 免疫学的測定試薬 |
EP0113075A3 (de) * | 1982-12-06 | 1985-05-02 | Fielder Gillespie Davis Limited | Tragbares Immunoassay-Reaktionssystem, Verfahren zur Diagnose durch eine Immunbestimmung und Sonde oder Träger zur Durchführung des Verfahrens |
JPS59163565A (ja) * | 1983-03-08 | 1984-09-14 | Toray Ind Inc | 高分子抗原の微量定量法 |
-
1985
- 1985-10-31 JP JP60504914A patent/JPS62500686A/ja active Pending
- 1985-10-31 DE DE3587835T patent/DE3587835T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-10-31 WO PCT/US1985/002146 patent/WO1986002733A1/en active IP Right Grant
- 1985-10-31 AT AT85905580T patent/ATE106565T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-10-31 EP EP85905580A patent/EP0200767B1/de not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ATE106565T1 (de) | 1994-06-15 |
EP0200767B1 (de) | 1994-06-01 |
EP0200767A1 (de) | 1986-11-12 |
DE3587835D1 (de) | 1994-07-07 |
WO1986002733A1 (en) | 1986-05-09 |
EP0200767A4 (de) | 1989-02-22 |
JPS62500686A (ja) | 1987-03-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE69627668T2 (de) | Verfahren und vorrichtung für den chlamydiennachweis | |
DE2905558C2 (de) | ||
DE69824099T2 (de) | Analytisches verfahren, testsatz und vorrichtung | |
DE3882705T2 (de) | Immunoglobulin-bestimmungsverfahren. | |
Haston et al. | Neutrophil leucocyte chemotaxis: a simplified assay for measuring polarising responses to chemotactic factors | |
EP0407904B1 (de) | Verfahren zur Bestimmung eines Analyten | |
DK160336B (da) | Poroest baerelegeme og saet til immunologisk analyse samt deres anvendelse | |
DE68912342T2 (de) | Verfahren zum nachweis des menschlichen papillomavirus (hpv) für diagnosezwecke. | |
DE19649389A1 (de) | Antigenspezifischer IgM-Nachweis | |
DE2134928B2 (de) | Immunologisches Reagens und Verfahren zu seiner Herstellung | |
DE69106002T2 (de) | Testverfahren und reagenziensatz dafür. | |
EP0058780B1 (de) | Antigen/Antikörper-Bestimmungsmethode | |
DD202178A5 (de) | Verfahren und reagens zur untersuchung von antigen-antikoerper-reaktionen | |
DE3587835T2 (de) | Sandwich-immunotestverfahren für antigene bei ophthalmischen störungen. | |
DE69008743T2 (de) | Extraktionszusammensetzung, Testsatz und deren Verwendung zum Nachweis von Herpes-Simplex-Antigen. | |
DE2334061A1 (de) | Verfahren zum identifizieren von streptokokken | |
Water et al. | Sensitive streptavidin-biotin enzyme-linked immunosorbent assay for rapid screening of chloramphenicol residues in swine muscle tissue | |
EP0265851B1 (de) | Verfahren zur Bestimmung von Anti-HIV, Mittel dazu und ihre Verwendung in diesem Verfahren | |
Coons | I. Antibodies and antigens labelled with fluorescein | |
DE69022889T2 (de) | Diagnostischer Testsatz und Verfahren zum Nachweis des Chlamydia-Antigens unter Verwendung einer Membran mit Hydroxylgruppen an der Oberfläche. | |
DE68919981T2 (de) | Diagnostischer Testsatz und Verfahren zur Bestimmung von chlamydialen oder gonokokkalen Antigenen mit Gebrauch einer mikroporösen Membran. | |
DE19500862A1 (de) | Reaktionssäulen für simultane Mehrfachmessung und Verfahren zur Bestimmung von Verbindungen | |
DE3650635T2 (de) | Monoklonale Antikörper | |
DE3722271A1 (de) | Hochempfindlicher nachweis von antikoerpern, die eine aids-exposition anzeigen | |
DE3854603T2 (de) | Teststreifen für diagnose durch multi-immunoassay system. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8364 | No opposition during term of opposition | ||
8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |