DE3316933C2 - Peptide und sie enthaltende pharmazeutische Mittel - Google Patents

Peptide und sie enthaltende pharmazeutische Mittel

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Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Peptide der Formel
R¹-Gly-Glu-Ser-R²
und sie enthaltende pharmazeutische Mittel gemäß den Patentansprüchen.
In den letzten Jahren wurden verschiedene Peptide, die in der Thymusdrüse vorkommen, mit der Entwicklung und Aufrechterhaltung der immunologischen Kompetenz bei Mensch und Tier in Verbindung gebracht. Die Bedeutung des Immunsystems bei der Abwehr von Krebs- und Tumor-Zellen ist heutzutage weitgehend anerkannt. In den vergangenen Jahren wurden einige Polypeptide, von denen gezeigt werden konnte, daß sie die Reifung, Differenzierung und Funktion von T-Zellen stimulieren, aus Rinder-Thymus isoliert. Unter ihnen wurde das saure Peptid Thymosin α₁ besonders intensiv untersucht. Seine Struktur und Aktivität ist beispielsweise in US-PS 40 79 127 beschrieben.
Darüber hinaus beschrieben Goldstein e t al. (J. of Reticuloendothelial Society 23, 253 [1978]) teilweise gereinigtes Thymosin β₃ und β₄ als Bestandteile der teilweise gereinigten Thymosinfraktion 5. Low und Goldstein haben gezeigt (Year in Hematology 1978, Siber et al. ed. [Plenum Publ. Co. 1978], S. 281), daß teilweise gereinigtes Thymosin β₃ und β₄ TdT-positive (TdT = terminale Deoxynucleotidyltrans­ ferase) Zellen in T-Zell-Populationen anregen. Es ist ferner berichtet worden, daß Thymosin β₃ und β₄ das Wieder­ auftreten von TdT-positiven Zellen im Thymus nach Steroid- induzierter Immunsuppression beschleunigen (Low et al., PNAS 78, 1162 [1981]; Hu et al., Mol. Cell. Biochem. 41, 49 [1981]) und die Wanderung von Macrophagen hemmen (Thurman et al., Lymphokines and Thymic Hormones: Their Potential Utilization in Cancer Therapeutics, Goldstein & Chirigos (Herausgeber), Raven Press, 1981, S. 145).
Bei der Synthese von Thymosin α₁ in flüssiger Phase verwendete Wang die geschützten Carboxyl-endständigen Octa-, Undeca- und Tetradecapeptide von Thymosin α₁ als Zwischenprodukte. Diese Verbindungen wurden durch Hydro­ genolyse und anschließende Behandlung mit HF in die freie Form übergeführt und als aktiv in der Regulierung und Differenzierung von T-Zellen beschrieben (US-PS 41 48 788).
Schließlich wurden die Peptide H-Ala-Gly-Glu-Ser-OH, H-Gln-Ala-Gly-Glu-Ser-OH und H-Ile-Glu-Gln-Glu-Lys-Gln- Ala-Gly-Glu-Ser-OH durch Abbau von Thymosin β₄ mit Trypsin und Thermolysin erhalten (Low et al., PNAS 78, 1162 [1981]).
Die Formel I umfaßt Peptide mit den folgenden Aminosäuresequenzen:
Die erfindungsgemäßen Peptide können verwendet werden zur Stimulation der Produktion TdT-positiver Prothymocyten.
Die Verbindungen der Formel I können in an sich bekannter Weise, d. h. in flüssiger Phase oder nach der Festphasen- Methode, hergestellt werden.
Nach der Flüssigphasen-Methode können die Verbindungen der Formel I entweder durch sukzessiven Aufbau der Amino­ säurekette erhalten werden oder durch ein Verfahren, bei dem zunächst bestimmte Peptidfragmente synthetisiert werden, die dann zu dem gewünschten Peptid zusammengefügt werden. Der konventionell letzte Schritt bei dieser Methode besteht in der Abspaltung der Schutzgruppen des ge­ schützten Peptids.
Die Festphasen-Synthese wird in an sich bekannter Weise durchgeführt, beispielsweise wie von Merrifield oder Barany et al. beschrieben (J. Am. Chem. Soc. 85, 2149-2154 [1963]; The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology, Vol. 2, 1-284 (1980)].
In einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung werden die Verbindungen II-VIII nach der Fest­ phasen-Synthese hergestellt. Kommerziell erhältliches Chlormethylpolystyrolharz wird mit Nα-Boc-O-Benzyl-L- serin in Gegenwart von Dicyclohexyl-carbodiimid (DCC) acyliert zu Nα-Boc-O-Benzyl-L-seryl-Harz. Das acylierte Harz wird in das Reaktionsgefäß einer nach der Festphasen-Synthese automatisch arbeitenden Apparatur gegeben. Diese wird dann so programmiert, daß die folgenden geschützten Aminosäuren in der angegebenen Reihenfolge eingesetzt werden:
(1) Boc-Glu(OBzl)-OH
(2) Boc-Gly-OH (Stop für Synthese des Tripeptids VIII)
(3) Boc-Ala-OH @ (4) Boc-Gln-ONp @ (5) Boc-Lys(Z)-OH (Stop für Synthese des Hexapeptids VII)
(6) Boc-Glu(OBzl)-OH (Stop für Synthese des Heptapeptids VI)
(7) Boc-Gln-ONp (Stop für Synthese des Octapeptids V)
(8) Boc-Glu(OBzl)-OH (Stop für Synthese des Nonapeptids IV)
(9) Boc-Ile-OH @ (10) Boc-Thr(Bzl)-OH (Stop für Synthese des Undecapeptids III)
(11) Boc-Glu(Bzl)-OH (Stop für Synthese des Dodecapeptids II).
Boc bedeutet t-Butyloxycarbonyl, OBzl bedeutet die Benzylestergruppe, ONp bedeutet die p-Nitrophenylestergruppe und Z bedeutet Benzyloxycarbonyl.
Statt der vorstehend angegebenen geschützten Aminosäuren können auch äquivalente Verbindungen eingesetzt werden. So kann z. B. Boc-Gln-ONp (Stufen 4 und 7) und Boc-Lys(Z)-OH (Stufe 5) ersetzt werden durch Boc-Gln-OH und Boc-Lys(2-ClZ)-OH, nach einem Verfahren, das dem von Wang et al., Int. J. Peptide Protein Rest. 18, 413-415 (1981), beschriebenen analog ist.
In einer anderen bevorzugten Ausführungsform der vor­ liegenden Erfindung werden die Verbindungen IX-XIII nach der Festphasenmethode hergestellt, wobei kommerziell erhältliches Chlormethylpolystyrolharz mit Nα-Boc-O-Benzyl-L-threonin in Gegenwart von DCC zu Nα-Boc-O-Benzyl-L-threonyl-Harz acyliert wird. Das acylierte Harz wird in das Reaktionsgefäß eines nach der Festphasensynthese automatisch arbeitenden Apparates gegeben. Der Apparat wird dann so programmiert, daß die in den folgenden Kolonnen A-E angegebenen ge­ schützten Aminosäuren sukzessive eingesetzt werden:
In jeden Kupplungsschritt (120 Minuten) kann ein vierfacher Überschuß an Boc-aminosäure und DCC eingesetzt werden. Die Abspaltung der Boc-Schutzgruppe erfolgt durch 30minütige Behandlung mit 33%iger Trifluoressigsäure in Methylenchlorid. Die Abspaltung der geschützten Peptide vom Harz unter gleichzeitiger Abspaltung der Schutzgruppe erfolgt durch Behandlung mit wasserfreiem HF-Anisol. Die rohen Peptide werden über eine Sephadex® G-10- Säule gegeben und dann durch Säulenchromatographie, beispielsweise an DEAE-Sephadex® A-25, gereinigt.
Werden die erfindungsgemäßen Peptide in flüssiger Phase synthetisiert, so können hierbei die üblichen Schutz­ gruppen verwendet werden: für Carboxyl- und Hydroxy-Gruppen beispielsweise Aryl-Gruppen, insbesondere Phenyl oder durch nieder-Alkyl, Halogen, Nitro, Mercapto oder Thiogruppen, wie C1-7-Alkylthio, substituiertes Phenyl; für Amino-Gruppen beispielsweise Butyloxycarbonyl (Boc) oder Benzyloxycarbonyl (Z).
Die Verbindungen der Formel I der vorliegenden Erfindung sind aktiv im Hinblick auf die Regulierung, Differenzierung und Funktion der T-Zellen. Sie sind Inducer für die nicht- Matrizen-abhängige DNA-Polymerase, die als terminale Deoxynucleotidyl-Transferase (TdT) bekannt ist. Schließlich sind sie Glucocorticoid-Antagonisten, die in-vivo z. B. dem Hydrocortisonacetat (HCA) entgegenwirken. Sie wirken auf das Thymus- und Immunsystem, indem sie die Rekonstitution von Thymozyten-Populationen innerhalb der Thymusdrüse und von TdT-positiven Thymocyten beschleunigen. Die Verbindungen der Formel I können ferner in nicht-spezifischer Weise die Macrophagen-Wanderung in Abwesenheit spezifischer Antigene hemmen, was in-vitro im MIF-Assay nachgewiesen werden kann. Schließlich können die Verbindungen der Formel I die Immunantwort in Steroid-supprimierten Säugern wieder herstellen.
Biologische Aktivität Teil A
Die in-vivo-Wirkung von Thymosin β₃, Thymosin β₄, Thymosin Fraktion 5, Verbindung V (β₄-C8-Fragment) und Ver­ bindung XIII (β₃-C12-Fragment) auf die Thymocyten-TdT- Aktivität in mit Hydrocortisonacetat (HCA) behandelten C57BL/6J-Mäusen wurde nach der Methode von Hu et al. (Fed. Proc. 38, 1079 [1979]; Mol. Cell. Biochem. 41, 49 [1981]) bestimmt. Eine 1,25-mg-HCA-Injektion pro Tier wurde am Tage Null (0) verabreicht. Auf jede Injektion folgte während 11 Tagen eine tägliche Behandlung des Tiers mit den zu untersuchenden Verbindungen und Kontrollen (d. h. kein HCA bzw. HCA-Kochsalzlösung). Es wurde der Anstieg der TdT-spezifischen Aktivität (nMol aufgenommenes dGTP pro 10⁸ Thymocyten pro Stunde) gegenüber der von mit HCA-Kochsalzlösung behandelten Tieren bestimmt. Die Ergebnisse sind in den Spalten 3 und 4 der Tabelle 1 zusammengefaßt.
Teil B
Die in-vivo-Wirkung von Thymosin β₃, Thymosin β₄, Thymosin-Fraktion 5, Verbindung V und Verbindung XIII auf die Wiederherstellung der Milz-Mitogen-Antwort in HCA- supprimierten C57BL/6J-Mäusen wurde nach der von Thurman und Goldstein in "The Biological Activity of Thymic Hormones", D. W. von Bekkum (Herausgeber), Kooyker Scientific Publications, Rotterdam, S. 261 (1975), beschriebenen Methode bestimmt.
Die Ergebnisse sind in Spalten 5 und 6 der Tabelle 1 wiedergegeben.
Der standardisierte MIF-Assay wurde nach der Methode von Thurman et al., Lymphokines and Thymic Hormones: Their Potential Utilization in Cancer Therapeutics, Goldstein und Chirigos (Herausgeber), Raven Press, New York, Seiten 145-157 (1981), für natürliches Thymosin β₄, synthetisches Thymosin β₄, Verbindung XIII (β₃-C12-Fragment), Verbindung V (β₄-C8-Fragment), Verbindung VII (β₄-C6-Fragment) und das bekannte β₄-C10-Fragment durchgeführt. Die Werte für die prozentuale unspezifische Hemmung (PNSI) wurden berechnet und in Tabelle 2 zusammengestellt.
Tabelle 2
Effekt von Thymosin β₄ und synthetischen Carboxyl- endständigen β₃- und β₄-Fragmenten auf die Hemmung der Macrophagen-Wanderung
Die Verbindungen der Formel I können warmblütigen Säugern parenteral verabreicht werden, und zwar entweder intravenös, subcutan oder intramuskulär. Diese Verbindungen sind wirksame Immunpotentiatoren bei einer täglichen Dosierung im Bereich von etwa 0,1 bis 50 mg/kg Körpergewicht bei intravenöser Verabreichung. Selbstverständlich hängt aber die notwendige Dosierung von der speziellen Krankheit, die behandelt werden soll, ihrer Schwere sowie der Dauer der Behandlung ab. Eine geeignete pharmazeutische Dosierungs­ einheit besteht aus 1 bis 5 mg einer lyophilisierten Verbindung der Formel I, die vor der Anwendung durch Zusatz von sterilem Wasser oder steriler Kochsalzlösung rekonstituiert wird.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch pharmazeutisch verträgliche Salze der Verbindungen der Formel I. Geeignete Salze sind beispielsweise die Kalium- und Natriumsalze oder Salze mit einer starken organischen Base wie Guanidin. Außerdem können als Gegenionen zu diesen Kationen, z. B. Chlorid, Bromid, Sulfat, Phosphat, Malat oder Ascorbat, in den Präparaten vorliegen.
Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen wird durch die folgenden Beispiele illustriert.
Beispiel 1
Eine Lösung von 3,511 g (11,9 mMol) Nα-Boc-O-Benzyl- L-serin in 1,50 ml (10,8 mMol) Triethylamin und 25 ml absolutem Ethanol wurde mit 10,0 g (11,9 mMol) chlor­ methyliertem Copolystyrol-1% Divinylbenzol (1,19 mMol Cl/g- Harz) umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde unter Rückfluß 48 Stunden gerührt, filtriert, dreimal mit jeweils Ethanol, Wasser, Methanol und CH₂Cl₂ gewaschen und im Vakuum getrocknet. Durchführung der unten angegebenen Reaktionsschritte (a)-(d) lieferte TFA·H-Ser(Bzl)-O-Harz.
10,0 g (2,71 mMol) dieses Harzes wurden nacheinander gekuppelt mit Boc-Glu(OBzl)-OH (3,65 g, 10,84 mMol, 4 Aequiv.) und Boc-Gly-OH (2,05 g, 10,84 mMol, 4 Aequiv.) zu dem Tripeptidyl-Harz.
Während eines Kupplungs-Zyklus wird das acylierte Harz nacheinander umgesetzt mit (a) Methylenchlorid (dreimal 5 Minuten); (b) 33%ige Trifluoressigsäure-Methylenchlorid (2 Minuten); (c) 33%ige Trifluoressigsäure-Methylenchlorid (30 Minuten); (d) Methylenchlorid (dreimal 5 Minuten); (c) 5% Diisopropylethylamin-Methylenchlorid (2 Minuten); (f) 5% Diisopropylethylamin-Methylenchlorid (10 Minuten); (g) Methylenchlorid (dreimal 5 Minuten); (h) DMF (dreimal 5 Minuten); (i) Methylenchlorid (dreimal 5 Minuten); (j) der geschützten Aminosäure (10 Minuten); (k) DCC (2 Stunden); (l) Methylenchlorid (dreimal 5 Minuten); (m) Isopropanol (dreimal 5 Minuten) und (n) DMF (dreimal 5 Minuten).
1,0 g (0,271 mMol) des Tripeptidyl-Harzes wurde während 45 Minuten mit HF (ca. 10 ml), enthaltend Anisol (1,5 ml), bei 0°C behandelt. Das HF wurde unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand mit Ether gewaschen, in 0,1 M Essigsäure extrahiert und lyophilisiert. Es wurde Glycyl-L- glutamyl-L-serin (VIII) in Form eines weißen Feststoffes erhalten.
Beispiel 2
2,439 mMol des Tripeptidyl-Harzes von Beispiel 1 wurden nacheinander mit jeweils 4 Aequivalenten Boc-Ala-OH (1,85 g, 9,76 mMol), Boc-Gln-ONp in 25 ml DMF (24 Stunden; unter Auslassung des Schrittes (k) des Kupplungs-Zyklus) und N-Boc-Nα-L-Lys-OH zu dem Hexapeptidyl-Harz umgesetzt.
1,0 g des Hexapeptidyl-Harzes wurde 45 Minuten mit HF (ca. 10 ml), enthaltend Anisol (1,5 ml), bei 0°C umgesetzt. Das HF wurde unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand mit Ether gewaschen, in 0,1 M Essigsäure extrahiert und lyophilisiert. Es wurde L-Lysyl-L-glutaminyl-L-alanyl- glycyl-L-glutamyl-L-serin (VII) in Form eines weißen Feststoffes erhalten.
Beispiel 3
1,626 mMol des Hexapeptidyl-Harzes aus Beispiel 2 wurden mit Boc-glu(OBzl)-OH (2,92 g, 8,67 mMol, 4 Aequivalente) zum Heptapeptidyl-Harz gekoppelt.
1,0 g dieses Harzes wurden 45 Minuten mit HF (ca. 10 ml), enthaltend Anisol (1,5 ml), bei 0°C behandelt. Das HF wurde unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand mit Ether gewaschen, in 0,1 M Essigsäure extrahiert und lyophilisiert. Es wurde L-glutamyl-L-lysyl-L-glutaminyl-L- alanyl-glycyl-L-glutamyl-L-serin (VI) in Form eines weißen Feststoffes erhalten.
Beispiel 4
1,355 mMol des Heptapeptidyl-Harzes aus Beispiel 3 wurden mit Boc-Gln-ONp (1,99 g, 5,42 mMol, 4 Aequivalente; unter Auslassung des Schrittes (k) des Kupplungs-Zyklus) in 25 ml DMF während 24 Stunden zu dem entsprechenden Octapeptidyl- Harz gekoppelt.
1,0 g dieses Harzes wurde während 45 Minuten mit HF (ca. 10 ml), enthaltend Anisol (1,5 ml), bei 0°C behandelt. Das HF wurde unter vermindertem Druck entfernt, der Rest mit Ether gewaschen, in 0,1 M Essigsäure extrahiert und lyophilisiert. Es wurde L-Glutamyl-L-glutamyl-L-lysyl-L- glutaminyl-L-alanyl-glycyl-L-glutamyl-L-serin (V) in Form eines weißen Feststoffes erhalten.
Beispiel 5
1,084 mMol des Octapeptidyl-Harzes aus Beispiel 4 wurden mit Boc-Glu(OBzl)OH (1,46 g, 4,336 mMol, 4 Aequivalente) zu dem entsprechenden Nonapeptidyl-Harz gekoppelt.
1,0 g des Nonapeptidyl-Harzes wurde während 45 Minuten mit HF (ca. 10 ml), enthaltend Anisol (1,5 ml), bei 0°C behandelt. Das HF wurde unter vermindertem Druck entfernt, der Rückstand mit Wasser gewaschen, in 0,1 M Essigsäure extrahiert und lyophilisiert. Es wurde L-Glutamyl-L-glutaminyl- L-glutamyl-L-lysyl-L-glutaminyl-L-alanyl-glycyl- L-glutamyl-L-serin (IV) in Form eines weißen Feststoffes erhalten.
Beispiel 6
0,813 mMol des Nonapeptidyl-Harzes aus Beispiel 5 wurde nacheinander mit jeweils 4 Aequivalenten von Boc-Ile-OH und Boc-Thr(Bzl)-OH zum entsprechenden Undecapeptidyl-Harz gekuppelt.
1,0 g des Undecapeptidyl-Harzes wurde während 45 Minuten mit HF (ca. 10 ml), enthaltend Anisol (1,5 ml), bei 0°C behandelt. Das HF wurde unter vermindertem Druck entfernt, der Rückstand mit Ether gewaschen, in 0,1 M Essigsäure extrahiert und lyophilisiert. Es wurde L-Threonyl- L-isoleucyl-L-gutamyl-L-glutaminyl-L-glutamyl-L-lysyl- L-glutaminyl-L-alanyl-glycyl-L-glutamyl-L-serin (III) in Form eines weißen Feststoffes erhalten.
Beispiel 7
0,271 mMol des Undecapeptidyl-Harzes aus Beispiel 6 wurden mit Boc-glu(OBzl)-OH (365 mg, 1,084 mMol, 4 Aequivalente) zu dem entsprechenden Dodecapeptidyl-Harz gekoppelt. Das erhaltene Produkt wurde während 45 Minuten mit HF (ca. 10 ml), enthaltend Anisol (1,5 ml), bei 0°C behandelt. Das HF wurde unter vermindertem Druck entfernt, der Rückstand mit Ether gewaschen, in 0,1 ml Essigsäure extrahiert und lyophilisiert. Es wurde L-Glutamyl-L-threonyl-L- isoleucyl-L-glutamyl-L-glutaminyl-L-glutamyl-L-lysyl-L-glu­ taminyl-L-alanyl-glycyl-L-glutamyl-L-serin (II) in Form eines weißen Feststoffes erhalten.
Beispiel 8
Eine Lösung von 3,678 g (11,9 mMol) Nα-Boc-O-Benzyl- L-threonin in 1,50 ml (10,7 mMol) Triethylamin und 25 ml absolutem Ethanol wurde mit 10,0 g (11,9 mMol) chlor­ methyliertem Copolystyrol-1% Divinylbenzol (1,19 mMol) Cl/g Harz) umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde wie in Beispiel 1 beschrieben aufgearbeitet.
Die Festphasen-Synthese wurde wie in Beispiel 1 be­ schrieben ausgeführt. 10,0 g TFA·H-Thr(Bzl)-O-Harz (3,12 mMol) wurden nacheinander mit Boc-Lys(Z)-OH (4,742 g, 12,48 mMol, 4 Aequivalente) und Boc-Ala-OH (2,360 g, 12,48 mMol, 4 Aequivalente) zum entsprechenden Tripeptidyl-Harz umgesetzt.
1,0 g (0,312 mMol) des Tripeptidyl-Harzes wurde dann nacheinander gekoppelt mit Boc-Asp(OBzl)-OH (403 mg, 1,248 mMol, 4 Aequivalente), Boc-Ser(Bzl)-OH (368 mg, 1,248 mMol, 4 Aequivalente), Boc-Glu(OBzl)-OH (421 mg, 1,248 mMol, 4 Aequi­ valente), Boc-Gly-OH (218 mg, 1,248 mMol, 4 Aequivalente) und Boc-Ala-OH (236 mg, 1,248 mMol, 4 Aequivalente). Ein ab­ schließender Kupplungs-Zyklus mit Boc-Gln-ONp (458 mg, 1,248 mMol, 4 Aequivalente) in 25 ml DMF (24 Stunden) unter Auslassung des Schrittes (k) lieferte das entsprechende Nonapeptidyl-Harz. Das erhaltene Produkt wurde während 45 Minuten mit HF (ca. 10 ml), enthaltend Anisol (1,72 ml), bei 0°C behandelt. Das HF wurde unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand mit Ether gewaschen, in 0,1 M Essigsäure extrahiert und lyophilisiert. Es wurde L-Gluta­ minyl-L-alanyl-glycyl-L-glutamyl-L-seryl-L-aspartyl-L- alanyl-L-lysyl-L-threonin (IX) in Form eines weißen Feststoffes erhalten.
Beispiel 9
1,0 g (0,312 mMol) des Tripeptidyl-Harzes aus Beispiel 8 wurde in Stufe (j) mit 441 mg Boc-Asn-ONp (1,248 mMol, 4 Aequivalente) in 25 ml DMF (24 Stunden) gekoppelt, wobei Stufe (k) des Kupplungs-Zyklus ausgelassen wurde. An­ schließend wurde jeweils mit 4 Aequivalenten Boc-Ser (Bzl)-OH (368 mg), Boc-Glu(OBzl)-OH (218 mg), Boc-Gly-OH (218 mg) und Boc-Ala-OH (236 mg) gekuppelt. Ein abschließender Kupplungs-Zyklus, in dem die Stufe (k) ausgelassen wurde, mit Boc-Gln-ONp (458 mg, 1,248 mMol, 4 Aequivalente) in 25 ml DMF (24 Stunden) lieferte das entsprechende Nona­ peptidyl-Harz. Das Reaktionsprodukt wurde während 45 Minuten mit HF (210 ml), enthaltend Anisol (1,72 ml), bei 0°C behandelt. Das HF wurde unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand mit Ether gewaschen, in 0,1 M Essigsäure extrahiert und lyophilisiert. Es wurde L-Glutaminyl-L-alanyl-glycyl-L- glutamyl-L-seryl-L-asparaginyl-L-alanyl-L-lysyl-L-threonin (X) in Form eines weißen Feststoffes erhalten.
Beispiel 10
1,0 g (0,312 mMol) des Tripeptidyl-Harzes aus Beispiel 8 wurde nacheinander mit jeweils 4 Aequivalenten Boc-Asp (OBzl)-OH (403 mg), Boc-Ser(Bzl)-OH (368 mg), Boc-Glu(OBzl)- OH (421 mg), Boc-Gly-OH (218 mg) und Boc-Sar-OH (236 mg) gekuppelt. In einem letzten Kupplungs-Zyklus, in dem die Stufe (k) ausgelassen wurde, mit Acetyl-Gln-ONp (386 mg, 1,247 mMol, 4 Aequivalente) in 25 ml DMF (24 Stunden) wurde das entsprechende Nonapeptidyl-Harz erhalten. Das Reaktions­ produkt wurde während 45 Minuten mit HF (ca. 10 ml), ent­ haltend Anisol (1,72 ml), bei 0°C behandelt. Das HF wurde unter vermindertem Druck entfernt, der Rückstand mit Ether gewaschen, in 0,1 M Essigsäure extrahiert und lyophilisiert. Es wurde N-Acetyl-L-glutaminyl-sarcosyl-glycyl-L- glutamyl-L-seryl-L-aspartyl-L-alanyl-L-lysyl-L-threonin (XI) in Form eines weißen Feststoffes erhalten.
Beispiel 11
1,0 g (0,312 mMol) des Tripeptidyl-Harzes von Beispiel 8 wurde in Stufe (j) mit Boc-Asn-ONp (441 mg, 1,248 mMol, 4 Aequivalente) in 25 ml DMF (24 Stunden) gekoppelt, wobei Schritt (k) des Kupplungs-Zyklus ausgelassen wurde. An­ schließend wurde mit jeweils 4 Aequivalenten Boc-Ser(Bzl)-OH (368 mg), Boc-Glu(OBzl)-OH (421 mg), Boc-Gly-OH (218 mg) und Boc-Sar-OH (236 mg) gekoppelt. Ein abschließender Kupplungs-Zyklus, in dem Stufe (k) ausgelassen wurde, mit Acetyl-Gln-ONp (386 mg, 1,248 mMol, 4 Aequivalente) in 25 ml DMF (24 Stunden) lieferte das entsprechende Nonapeptidyl- Harz. Das Reaktionsprodukt wurde während 45 Minuten mit HF (ca. 10 ml), enthaltend Anisol (1,72 ml), bei 0°C be­ handelt. Das HF wurde unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand mit Ether gewaschen, in 0,1 M Essigsäure extrahiert und lyophilisiert. Es wurde N-Acetyl-L-glutaminyl- sarcoxyl-glycyl-L-glutamyl-L-seryl-L-asparaginyl-L-alanyl-L- lysyl-L-threonin (XII) in Form eines weißen Feststoffes erhalten.
Beispiel 12
1,0 g (0,312 mMol) des Tripeptidyl-Harzes aus Beispiel 8 wurde mit jeweils 4 Aequivalenten Boc-Thr(Bzl)-OH (386 mg), Boc-Ile-OH (289 mg), Boc-Glu(OBzl)-OH (421 mg), Boc-Asp(OBzl)-OH (403 mg), Boc-Ser(Bzl)-OH (368 mg), Boc- Glu(OBzl)-OH (421 mg), Boc-Gly-OH (218 mg) und Boc-Ala-OH (236 mg) gekuppelt. Ein abschließender Kupplungs-Zyklus, in dem Schritt (k) ausgelassen wurde, mit Boc-Gln-ONp (458 mg, 1,248 mMol, 4 Aequivalente) in 25 ml DMF (24 Stunden) lieferte das entsprechende Dodecapeptidyl-Harz. Das Reaktionsprodukt wurde während 45 Minuten mit HF (ca. 10 ml), enthaltend Anisol (1,72 ml), bei 0°C behandelt. Das HF wurde unter vermindertem Druck entfernt, der Rückstand mit Ether gewaschen, in 0,1 M Essigsäure extrahiert und lyophilisiert. Es wurde L-Glutaminyl-L-alanyl-glycyl-L- glutamyl-L-seryl-L-aspartyl-L-glutamyl-L-isoleucyl-L- threonyl-L-alanyl-L-lysyl-L-threonin (XIII) in Form eines weißen Feststoffes erhalten.

Claims (2)

1. Peptide der allgemeinen Formel R¹-Gly-Glu-Ser-R² (I)worin R¹ Q, Q′-Ala-, Q′-Gln-Ala-, Q-Lys-Gln-Ala-, Q-Glu-Lys-Gln-Ala-, Q-Gln-Glu-Lys-Gln-Ala-, Q-Glu-Gln-Glu-Lys-Gln-Ala-, Q′-Ile-Glu-Gln-Glu-Lys-Gln- Ala-, Q-Thr-Ile-Glu-Gln-Glu-Lys-Gln-Ala-, Q-Glu-Thr-Ile- Glu-Gln-Glu-Lys-Gln-Ala- oder Q-Gln-Sar- darstellt; Q Wasserstoff oder ein Rest von aliphatischen Säuren mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen ist; Q′ Wasserstoff oder ein Rest von aliphatischen Säuren mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen ist, aber ein Rest von aliphatischen Säuren mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen, sofern R² Hydroxy bedeutet; R² Hydroxy, -A-C oder -A-B-C, wobei A Asp oder Asn, B Glu-Ile-Thr und C Ala-Lys-Thr-OH darstellen und deren pharmazeutisch verträgliche Additionssalze mit Säuren oder Basen.
10. Pharmazeutisches Mittel, enthaltend ein Peptid gemäß einem der Ansprüche 1 bis 9 und einen verträglichen Träger.
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