DE3134526A1

DE3134526A1 - Haemverbindungen als aktiver wirkstoff

Info

Publication number: DE3134526A1
Application number: DE19813134526
Authority: DE
Inventors: Antrag Auf Nichtnennung
Original assignee: TIGGEMANN DR; Tiggemann Dr 7753 Allensbach
Current assignee: TIGGEMANN DR 8039 PUCHHEIM DE
Priority date: 1981-09-01
Filing date: 1981-09-01
Publication date: 1983-03-17
Also published as: DE3134526C2

Description

Hämverbindungen als aktiver Wirkstoff
Die Erfindung betrifft Hämverbindungen als aktiver Wirkstoff in pharmazeutischen Präparaten.
Pharmazeutische Präparate mit Hämverbindungen als enzymatisch aktivem Wirkstoff befinden sich im Handel. Als Wirkstoff wird von den Herstellern ein aus äthanolischer Lösung dialysiertes Konzentrat aus deproteinisiertem, angedautem Kälberblut angegeben. Allerdings ist bislang die chemische Zusammensetzung des Enzyms selbst nicht erkannt worden.
Angesichts dieser Gegebenheiten hat sich der Erfinder das Ziel gesetzt, einen peroxydatisch aktiven Wirkstoff für pharmazeutische Präparate zu finden, der eine im Vergleich zu den handelsüblichen Präparaten einfachere und kostengünstigere Herstellung ermöglicht.
Zur Lösung dieser Aufgabe führt die Verwendung von Hämpeptiden mit einem Molekulargewicht von etwa 1500 bis 2000 Dalton-Einheiten als peroxydatisch aktiver Wirkstoff.
Die als Mikroperoxydasen bekannten }Iämpeptide lassen sich erfindungsgemäß auf einfache Weise wie folgt mittels proteolytischer Enzyme aus Cytrochrom C herstellen:

Ä A M---

P

-PHE-VAL-GLN-LYS-CYS-ALA-GLN-CYS-HIS-THR-VAL-GLU-LYS-GLY-

Pepsin | Pe ti t

Trypsin Trypsin

H-8-P

I- H-9-P .'

i-11-P

Bei der enzymatischen Spaltung des Cytochrom C ergeben sich folgende Hämpeptide: Häm-8-Peptid mit acht Aminosäuren, Häm-9-Peptid mit neun Aminosäuren, und Häm-ll-Peptid mit elf Aminosäuren.
Die Bindungsstellen des Hämrings an die Peptidketten sind ebenso bekannt wie deren Aminosäuresequenzen. Das Molekulargewicht der Hämpeptide ist abhängig von der Kettenlänge.
Der Isoelektrische Punkt der Hämpeptide liegt weit im sauren Bereich bei etwa pI 4. Das Absorptionsmaximum der Hämpeptide kann spektroskopisch ermittelt werden und liegt bei 400 nm.
Die peroxidatische Aktivität wird indirekt wie folgt bestimmt: Die Substratumsetzung H20 H20+0 wird spektoskopisch in Gegenwart von Diaminobenzidin (DAB) bei 465 nm bestimmt, indem die oxidative Polymerisation des DAB zu einem Phenazinpolymer gemessen wird.
Vergleichende Untersuchungen an handelsüblichen Präparaten und den vorstehend genannten Hämpeptiden haben ergeben, daß die bekannten Präparate offensichtlich ein Molekül als Komponente enthalten, das den Hämpeptiden sehr ähnlich oder sogar gleich ist.
Zur Identifikation der Hämpeptide in den handelsüblichen Präparaten werden die folgenden bekannten Methoden angewandt: - Bestimmung der peroxydatischen Aktivität; - VergLeich der Präparate mit hochreinen Hämpeptiden in der isoelektrischen Fokussierung; - Präparation eines gereinigten Antikörpers gegen zuvor mit Glutaraldehyd vernetzte Hämpeptide; - Affinitätschromatographische Isolation eines Hämpeptids aus den Präparaten, nachdem der Anti-Hämpeptid-Antikörper kovalent an eine Matrix gebunden wurde; - Immunodiffusion, die zu Kreuzreaktionen führt.
Toxikologische Untersuchungen an den Hämpeptiden haben zumindest an Zellkulturen gEzeigt, daß das Zellwachstum nicht beeinträchtigt wird wenn den Zellen die Substanz bis zu einer Konzentratiot, von J05M zugegeben wird. Gesichert ist auch, dalS lebende Lcberzellen die Mikroperoxidasen aktiv endozytieren.
Durch die erfindungsgemäß zu verwendenden Hämpeptide ergeben sich im Vergleich zu den bekannten handelsüblichen Präparaten wesentliche Vorteile.
Die enzymatische Aktivität der Hämpeptide im Organismus kann in Abhängigkeit der Konzentration nicht nur beliebig variiert, sondern auch exakt eingestellt werden. Die Dosierung kann somit sehr genau erfolgen und auf den individuellen Organismus optimal abgestimmt werden. Die handelsüblichen Präparate bieten diese Möglichkeit nicht, zumal die Hersteller das Enzym als Komponenten ihrer Präparate nicht kennen.
Die Hämpeptide sind nicht toxisch; sie werden von in vitro wachsenden Zellkulturen rasch endozytiert. Sie können schnell in großen Mengen aus cytochrom C-haltigen pflanzlichen oder tierischen Organen hergestellt werden und ihre Herstellungskosten werden im Vergleich zu den handelsüblichen Präparaten drastisch gesenkt.

Claims

PATENTANSPRüCHE ~=~==~==========~~==========~ 1. Hämverbindungen als aktiver Wirkstoff in pharmazeutischen Präparaten gekennzeichnet durch die Verwendung von Hämpeptiden mit einem Molekulargewicht von etwa 1500 bis 2000 Dalton-Einheiten als peroxydatisch aktiver Wirkstoff.
2. Hämpeptide nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie acht, neun und/oder elf Aminosäuren aufweisen.
3. Hämpeptide nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß sie durch Spaltung von Cytochrom C mit proteolytischen Enzymen, insbesondere Pepsin und Trypsin, hergestellt sind.