DE3013675A1 - Cephalosporin-derivate, verfahren zu deren herstellung und antibakterielle arzneimittel, welche die derivate enthalten - Google Patents

Description

HOFFMANN · EIWLR & PARTNER

DR. ING. E. HOFFMANN (1930-1976) . DIPL-ING. W.EITLE · DR. RER. NAT. K. HOFFMANN . DIPU-ING. W. LEHN

DIPL.-ING. K. FOCHSLE · DR. RER. NAT. B. HANSEN ARABELLASTRASSE 4 (STERNHAUS) · D-8000 MÖNCHEN 81 . TELEFON (089) 911087 . TELEX 05-29619 (PATHE)

-S-

33 277 o/fg

EISAI CO., Ltd., Tokyo / Japan

Cephalosporin-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung und antibakterielle Arzneimittel, welche die Derivate enthalten.

Die Erfindung betrifft neue Cephalosporin-Derivate der allgemeinen Formel (I)

Rl₁-/ V-CH-CO-NH

COOH (I)

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deren nicht-toxischen Salze, worin R₁ , R₉ und R jeweils Hydroxy, Acyloxy oder Wasserstoff bedeuten unter der Bedingung, dass zwei oder drei von R₁, R₂ und R^ nicht gleichzeitig Wasserstoff sind, und R. Wasserstoff oder Hydroxy bedeutet. Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen und antibakterielle Arzneimittel, welche diese enthalten.

Verbindungen der allgemeinen Formel (II)

CH-CO-NH '

ir

^^ CH₂OCOCH₃ COOH

worin R. = H ist, sind als Cephaloglycin bekannt und werden in der BE-PS 635 137 (1964) beschrieben. Verbindungen der allgemeinen Formel (II), worin R₄ = OH sind gleichfalls bekannt und werden in der GB-PS 1 240 687 (1971) beschrieben.

Aufgabe der Erfindung ist es, neue antibakterielle Arzneimittel zu zeigen, indem man die Aminogruppe in dem Phenylglycin- und p-Hydroxyphenylglycinrest dieser Verbindungen acyliert.

Beispiele für die Acyloxygruppe bei Verbindungen (I) gemäss der Erfindung sind Acetoxy, Propionyloxy und Benzoyloxy.

Beispiele für Salze dieser Verbindungen der allgemeinen Formel (I) sind Natriumsalze, Kaliumsalze, Calciumsalze, Ammoniumsalze,

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Triäthylaminsalze, Dicyclohexylaminsalze, Procainsalze und dergleichen.

Die erfindungsgemässen Verbindungen werden nach dem folgenden Verfahren hergestellt.

Eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) kann man herstellen, indem man eine Verbindung der allgemeinen Formel (II) oder ein Salz davon oder ein Hydrat mit einer Verbindung der allgemeinen Formel (III)

O 3

R₂

oder einem Derivat davon, worin R₁, R~ und R- die vorher angegebene Bedeutung haben, oder einem reaktiven Derivat davon umsetzt.

Wird die Carbonsäure der allgemeinen Formel (III) bei dieser Umsetzung verwendet, so wird die Umsetzung vorzugsweise in Gegenwart eines KondensLerungsmittels, wie N,N¹-Dicyclohexylcarbodiimid, Ν,Ν'-Diäthylcarbodiimid, Ν,Ν'-Dipropylcarbodiimid, N-Cyclohexyl-N ''-morpholinoäthyl-carbodiimid, Trialkylphosphit, Äthylpolyphosphat, Phosphoroxychlorid, Oxalylchlorid und dergleichen vorgenommen. Beispiele für reaktive Derivate der Carbonsäuren der allgemeinen Formel (III) sind z.B. Säurehalogenide, wie ein Säurechlorid oder ein Säurebromid,oder ein symmetrisches Anhydrid, ein gemischtes Anhydrid mit Chlorkohlensäureester, Trimethylessigsäure, Thioessigsäure, Diphenylessigsäure und dergleichen, oder ein reaktiver Ester, der sich von 2-Mercaptopyridin, Cyanomethanol, p-Nitrophenol, 2,4-Dinitrophenol oder Pentachlorphenol ableitet, oder ein reaktives

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Säureamid, wie N-Acylsaccharin und N-Acylphthalimid.

Die Umsetzung zwischen Verbindungen der allgemeinen Formel (II) und Verbindungen der allgemeinen Formel (III) können in einem inerten Lösungsmittel im Temperaturbereich von -50 bis 50⁰C, vorzugsweise im Temperaturbereich zwischen -20 und 30⁰C in Gegenwart oder Abwesenheit eines basischen oder Silierungsmittel durchgeführt werden.

Beispiele für inerte Lösungsmittel sind Aceton, Tetrahydrofuran, Ν,Ν-Dimethylacetamid, Dioxan, Chlormethan, Chloroform, Benzol, Toluol, Äthylacetat und Mischungen davon.

Beispiele für basische Reagentien sind z.B. Alkalyhydroxide, wie Kaliumhydroxid, Natriumhydroxid und dergleichen, Alkalihydrogencarbonate, wie Kaliuinhydrogencarbonat und Natriumhydrogencarbonat und Amine, Wie Triäthylamin, Pyridin oder N-Methylmorpholin.

Beispiele für Silierungsmittel sind z.B. Ν,Ο-bis(Trimethylsilyl)-acetamid und Hexamethyldisxlazan.

Die Chromoncarbonsäure (III), die als Ausgangsmaterial verwendet wird, erhält man im allgemeinen durch Oxidation eines Aldehyds der allgemeinen Formel (IV)

R ^V'

R₂ ι

^R3

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"~ 9 —

worin R₁, R₉ und R-, die vorher angegebene Bedeutung haben, ausgenommen/ dass sie nicht Hydroxygruppen bedeuten, mit Jones-Reagens (siehe Reagents for Organic Synthesis, Band 1, S. 142).

Die Chromonearbonsäuren, bei denen alle R₁, R₀ und R Hydroxygruppen sind, erhält man, indem man die Aldehyde (IV), die Acyloxygruppen enthalten* anstelle von Hydroxygruppen nach dem vorerwähnten Verfahren oxidiert und anschliessend die Acyloxygruppen hydrolysiert.

Die Chromoncarbonsäurehalogenide der Formel (III) erhält man, indem man die Säure der Formel (III) mit einem Halogenierungsmittel, wie Phosphorpentachlorid oder Thionylchlorid,umsetzt.

Den Aldehyd der Formel (IV) kann man in üblicher Weise erhalten, z.B. nach dem Verfahren gemäss Tetrahedron 2Q^, 3553 (1974).

Alternativ kann man die Verbindung der allgemeinen Formel (I) worin R., R„ und R- jeweils Hydroxy oder Wasserstoff bedeuten, mit der Bedingung, dass zwei oder drei von R₁ , R₂ und R-, nicht gleichzeitig Viasserstoff sind, herstellen, indem man die Acyloxygruppen der Verbindung (I), worin R₁, R₂ und Rg jeweils Acyloxy oder Wasserstoff bedeuten, unter der Bedingung, dass zwei oder drei von R₁, R₂ und R nicht gleichzeitig Wasserstoff bedeuten, hydrolysiert.

Alkalyhydrogencarbonate, wie Natriumhydrogencarbonat, Kaliumhydrogencarbonat und dergleichen, kann man für diese Hydrolyse verwenden.

Typische Verbindungen gemäss der Erfindung, sind die folgenden Verbindungen und deren Natriumsalze:

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7/5-[-D-2-(6,7-Diacetoxychromon -3-carboxaraido )-2-pheny lace tamid ο l-S-acetoxymethyl-S-cephem-i)-car bonsäure

Ίβ-[D-?-(6,7-Diacetoxychromon '-3-carboxamido)-2-('!-hydroxyphenyl )acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-i|-carbonsäure

7/9-[D-2-(6,7-Dihydroxychroraon -3-carboxamido)-2-phenylacetamido]~3-acetoxymet hy l-3-cephem-'l-car bonsäure

7^-[D-2-(6,7-Dihydroxychromon -3-carboxamido)-2- (²J-hydroxy phenylacetamidol-S-acetoxymethyl-S-cephem-¹! -car bonsäure

7^-[D-2-(7 ι 8-Diacetox.ych^omon - 3 -car boxamido) -2- phenyl ace t ami do]-3-ace toxy me thy 1-3-cephem-¹!-car bonsäure

7^_[D_2-(7,8-Diacetoxychromon -3-carboxamido)-2-(ⁱlhydr oxy phenyl) ace t amido ]-3-acetoxyme thy 1-3 -cephem-¹! -car bon- "

Iß-{.^-2-{1, 8-Di hydroxy ehr omon r3-carboxamido)-2-phenylacetamido]-3-acetoxymethyl-3-.cephem-^I4-carbon.säure -.

Tp-[D-2-(7,8-Dihydroxyehromon -3-carboxamido)-2-(^-hydro xyphenyl ) ace tamrdo]-3-aceto.xymethyl-3-eepehm- 4 -car bensäure

7/9-[D-2-( 6 , 8-Diacetoxychrornon -3-carboxamido )-2-phenylacetamidoJ-S-acetoxymethyl-S-cephem-^-carbcnsäure ..^j.. .

7/⁸-[D-2-(6,8-Diacetoxychromon -3-carboxamido)-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-^-carbonsäure "■' ^:

7/9~[D-2-(6 , 8-Dihydroxychromon -3-carboxamido )-2-phenylacetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-^J4-carbaisäure . .-.J.

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7/5-[D-2-(6,8-Dihydroxychromon -3-carboxamido)-2-( dihydroxy phenyl)acetamido]-3-acetoxymethyl-S-cepehm-iJ-carbonsäure

7/⁰-[D-2-( 6,7, 8-Triacetoxy chromone-3-carboxamid ο)-2-phenyl ■ acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-^-carbonsäure

7^_[D-2-(6,7,8-Triacetoxychromon'-3-carboxamido)-2-(ll-hydroxy phenyl) acetamido]-S-acetoxymethyl-B-cephera-i-

carboögäure -··--

7_/e-[D-2-(6,7,8-Trihydroxychromon -3-carboxamido)-2-phenylacetaraido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-U-carbonr'· säure "

7/s-[D-2-(6,7 ,8-Trihydroxychromon --3-carboxamido)-2-(ti-hydroxypheny 1) acetamido]-3-acetoxyme thy l-S-cephem-i)-

carbonsäure . "

Die erfindungsgemässen Cephalosporin-Derivate haben eine ausgezeichnete antibakterielle Aktivität und sind nicht nur gegen gram-positive sondern auch gegen gram-negative Bakterien wirksam. Die Cephalosporin-Derivate zeichnen sich insbesondere dadurch aus, dass sie wirksam sind gegen Pseudomonas aeruginosa, wodurch bisher kaum heilbare Infektionen erzeugt wurden.

Es wurde auch in einem Toxizitätsversuch bestätigt, dass die erfindungsgemässen Verbindungen eine niedrige Toxizität haben. Z.B. liegen die akuten Toxizität swerte [LD₁-Q (Maus oral)] der folgenden Verbindungen über 5 g/kg:

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_ 1 O _

Natriumsalz von 7ß-[D-2-(6,7-Diacetoxychromon-3-carboxamido)-2-phenylacetamido]-S-acetoxymethyl-S-cephem^-carbonsäure?

Natriumsalz von 7ß-[D-2-(6,V-Dihydroxychromon-S-carboxamido)-2-phenylacetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure;

Natriumsalz von 7ß-[D-2-(6,T-Diacetoxychromon-S-carboxamido)-2-(4-hydroxyphenyl) acetamido] -S-acetoxymethly-S-cephem^- carbonsäure;

Natriumsalz von 7ß-[D-2-(6^-Dihydroxychromon-S-carboxamido)-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure.

Die Dosierung der erfindungsgemässen Verbindungen in antibakteriellen Arzneimitteln liegt im allgemeinen im Bereich von 2 bis 300 mg/kg/Tag und vorzugsweise bei 10 bis 100 mg/kg/Tag. Die erfindungsgemässen Verbindungen können oral oder parenteral verabreicht werden.

Pharmazeutische Zubereitungen, welche die erfindungsgemässen Verbindungen enthalten, können nach üblichen Herstellungsverfahren hergestellt werden. Die Erfindung schliesst deshalb auch Zusammensetzungen ein, welche wenigstens eine der erfindungsgemässen Verbindungen enthält, und die für die medizinische Behandlung von Menschen geeignet sind. Solche 'Zusammensetzungen werden in üblicher Weise mit dem benötigten pharmazeutischen Trägern oder Verdünnungsmitteln hergestellt.

Tabletten oder Kapseln für orale Verabreichung können in Einheitsform vorliegen und können übliche Excipientien, wie Sirup, Gummi arabicum, Gelatine, Sorbit, Tragacanth oder Polyvinylpyrrolidon, oder Verdünnungsmittel, wie Lactose, Maisstärke, Calciumphosphat, Sorbit oder Glycerin, Gleitmittel, wie Magnesiumstearat, Talkum, Polyäthylenglycol oder Siliciumdioxid, oder

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Zerfallmittel, wie Kartoffelstärke, oder zulässige Befeuchtungsmittel, wie Natriumlaurylsulfat, enthalten.

Die Tabletten können in üblicher Weise beschichtet sein.

Flüssige Zubereitungen für orale Verabreichung können in wässriger oder Emulsion, Lösung als Sirup oder als Elexir oder dergleichen vorliegen.

Alternativ können sie auch trockene Produkte sein, die in Wasser oder anderen geeigneten Trägern vor der Verabreichung wieder aufgelöst werden können.

Solche flüssigen Zubereitungen können übliche Additive, wie Suspendierungsmittel, z.B. ein Sorbitsyrup, Methylcellulose, Glucose/Zucker-Sirup, Gelatine, Hydroxäthylcellulose, Carboxymethlycellulose, Aluminiumstearatgel und hydrierte essbare Fette enthalten, oder Emulgatoren, wie Lecithin, Monooleinsäuresorbitan und Gummi arabicum, oder nicht-wässrige Träger, wie Mandelöl, fraktioniertes Kokosöl, ölige Ester, Propylenglycol und Äthanol, und Antiseptica, wie Methyl-p-hydroxybenzoat, Propyl-p-hydroxybenzoat und Sorbinsäure.

Zusammensetzungen für Injektionen werden in Ampullen oder in Fläschchen, denen Antiseptika zugefügt wurden, aufbewahrt. Die Zusammensetzungen können als Suspensionen, Lösunge oder Emulsionen in einem öligen oder wässrigen Träger vorliegen, und sie können Formulierungsmittel, wie Suspensionsmittel, Stabilisatoren und/oder Dispergiermittel enthalten. Andererseits kann der aktive Bestandteile auch als Pulver vorliegen, das man vor der Verabreichung in einem geeigneten Träger, z.B. in sterilem pyrogenfreiem Wasser, wieder auflöst.

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Zubereitungen für Injektionen kann man unter Verwendung von isotonischem Mitteln, wie Glucose, Natriumchlorid, Sorbit und dergleichen, und gewünschtenfalls unter Verwendung von Suspensionsmitteln , oberflächenaktiven Mitteln, pH-Kontrolliermitteln und dergleichen herstellen. Alternativ können die Zubereitungen für die Injektionen in Form von Pulver vorliegen, das man vor der Verabreichung auflöst.

Suppositorien können auf Basis von Kakaobutter, PoIyäthylenglycol, Witepsol (Handelsbezeichnung der Dynamit-Nobel AG), und dergleichen, hergestellt werden und gewünschtenfalls ein oberflächenaktives Mittel enthalten.

Versuch 1

Herstellung von Chromon-3-carbonsäure, die Zwischenprodukte bei den erfindungsgemässen Verbindungen sind.

A) 6,7-Diacetoxychromon-3-carbonsäure

6,7—Diacetoxychromon-S-carbonsäurealdehyd (17,8g) wurden in 1 1 Aceton gelöst. Zu dieser Lösung wurde unter Rühren Jones-Reagens (32,8ml), das zuvor hergestellt worden war durch Auflösen von Chromsäure (113,6 g) in konzentrierter Schwefelsäure (115 ml ) verdünnt mit Wasser auf ein Volumen von 500 ml, gegeben.

Das Reaktionsgemisch wurde auf 100 ml konzentriert und in 900 ml Wasser gegossen. 6,5 g des ausgefallenen Niederschlags wurden durch Filtrieren gesammelt und aus Äthylacetat umkristallisiert, wobei man die gewünschte Verbindung in einer Menge von 5,9 erhietl.

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B) 6,7-Dihydroxychromon-3-carbonsäure

Zu 15,3 g der gemäss A) hergestellten 6,7-Diacetoxychromon-3-carbonsäure wurden 300 ml Essigsäure und 100 ml konzentrierte Salzsäure gegeben, und das Gemisch wurde 20 Minuten bei etwa 70⁰C gerührt und dann gekühlt.

Die Niederschläge wurden durch Filtrieren gesammelt und aus Dimethylformamid/Wasser unter Erhalt der gewünschten Verbindung (8,9 g) gesammelt.

7,8-Diacetoxychromon-3-carbonsäure und 7,8-Dihydroxychromon-3-carbonsäure wurden nach den Verfahren gemäss A) und B) hergestellt. Die Eigenschaften der erhaltenen Verbindungen werden in Tabelle 1 gezeigt.

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Tabelle

Il COOH

O OQ Ο»

Nr.

IR-Spektrum (cm , nujol)

Molekularformel Schmelzpunkt( C)

HO- HO- H 3370, 3300, 1730, C₁ H_ßO

1635, 1620 ^Ί°

CH₃COO- CH₃COO- H

HO-

HO-

H CH₃COO- CH₃COO-

1780, 1760, 1730 C^H^Og 1620 186-188

3380, 3275, 1725, C₁₀HgOg 1620 265-270 *

1780, 1760, 1740, C₁₄H₁₀O₈ 1625 178-179

Elementaranalyse berechnet: gefunden: C H	2,72
54,06	2,60
54,05	3,29
54,91	3,08
54,95	2,72
54,06	2,53
53,65 .	3,29
54,91	3,25
54,90

*Zersetzung

Beispiel 1

7β-ΪΡ-2- (6, 7-Diacetoxychromon*-3-carboxamido)-2-phenyl acetamido]-S-acetoxymethyl-S-cephem^-carbOKSäure und deren Natriumsalz

a) 6i2

Eine Mischung aus 6,7~Diacetoxychromon-3-carbonsäure (918 mg, 3 mMol), Benzol (20 ml), Thionylchlorid (260 μΐ, 3,6 mMol) und N,N-Dimethylformamid (0,2 ml) wurde zwei Stunden unter Rückfluss behandelt und das Lösungsmittel wurde entfernt. Dazu wurden 5 ml Benzol gegeben und dann abgedampft. Dies wurde zweimal wiederholt, um auch Spuren von Thionylchlorid zu entfernen. Der zurückbleibende Feststoff wurde gesammelt und bestand aus der gewünschten Verbindung.

IR-SpekLrum (cm"¹, Kujol): 1780, 1775, 1660, 1625

N,O-bis(Trimethylsilyl)acetamid (1.483 ml, 6 mMol) wurden zu einer gerührten Suspension von Cephaloglycin (811 mg, 2,0 mMol) in Dichlormethan (16 ml) bei 0^⁵C gegeben. Die Mischung wurde bei 0⁰C 20 Minuten gerührt und dann wurde" tropfenweise eine Suspension des Acylchlorids (2 mMol) beschrieben in a) in Dichlormethan (10 ml) zugegeben. Es wurde weitere 0,5 h bei 0⁰C und dann 5 h bei Raumtemperatur gerührt und das Lösungsmittel wurde entfernt. Der Rückstand wurde in Äthylacetat (250 ml) aufgenommen und nacheinander mit 0,5 η Chlorwasserstoffsäure (40 ml χ 2),Wasser (40 ml χ 2) und gesättigter Kochsalzlösung ( 40 ml χ 2) gewaschen und dann über MgSO.

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getrocknet. Nach Entfernung des Lösungsmittels wurde der Rückstand mit Äthyläther trituriert, wobei man die gewünschte Verbindung erhielt (92Ö mg, 66%).

Schmelzpunkt 170 - 175 C (Zersetzung) Elementaranalyse für C₃₂H₂₇N₃O₁₃S

	C	41	3	H	6	N
berechnet (%)	55,	38	3	,92	5	,06
gefunden (%)	54,		,86	,05

IR-Spektrum (CM~¹, Nujoi): 1780, 1735, 1690, 1665, 1620

c) Natriumsalz_der_Verbindun.2_gemäss_b)_

Natrium-2-äthylhexanoat (0,S- m Lösung in Äthylacetat, 2 ml) wurde zu einer Lösug der Verbindung gemäss b) (694 mg, 1 mMol) in einer Mischung aus Aceton (30 ml) und N,N-Dimethylformamid (2 ml) gegeben. Zu dem Gemisch wurde Äthylacetat/Äthyläther (1:1, 30 ml) und anschliessend Äthyläther (50 ml) gegeben und der gebildete Niederschlag wurde abfiltriert und mit Äthylacetat/Äthyläther (1:1) gewaschen und dann getrocknet, wobei man die gewünschte Verbindung (306 mg, 43 %) erhielt.

Schmelzpunkt: 165-180⁰C (Zersetzung)

Elementranalyse für C₃₂H₂₆NoNaO ..S

CHN

berechnet (%) 53,77 3,66 5,87 gefunden (%) 42,35 3,83 5,37

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IR-Spektrum (cm"¹, Nujol): 1785, 1770, 1742, 1670, 1605

NMR-Spektrum ($ DMSO-dg):

2,00 (3H, s), 2,37 (3H, s),

2,38 (3H, s), 3,13 (1H, d, J=17 Hz),

3,43 (1H, d, J=17Hz), 4,78 (1H, d, J=12Hz),

4,94 (1H, d, J=4,5 Hz), 5,02 (1H, d, J=12Hz),

5,61 (1H, dd, J=8Hz), 5,94 (1H, d J=8Hz)

7,25 - 7,7 (5H, m), 7,92 1H, s),

8,12 (1H, s), 9,09 (1H, s),

9,49 (1H, d, J=8Hz), 10,15 (1H, d, J=8Hz).

Beispiel 2

7ß~lD-2~ (ey^

P^gQYlIgggtamido2-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure und deren Natriumsalz

Eine Mischung aus 6^-Diacetoxchromon-S-carbonsäure (18,4 g, 60 mMol), Benzol (450 ml), Thionylchlorid (8,6 g, 72 mMol) und Ν,Ν-Dimethylformamid (3ml) wurde eine Stunde unter Rückfluss gehalten und dann auf Raumtemperatur gekühlt. Nach der Zugabe von η-Hexan (300 ml) wurde der entstandene Niederschlag abfiltriert und ergab die gewünschte Verwindung (17,6 g)

IR-Spektrum (cm~¹, Uujol): 1780, 1755, 1660, 1625

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N,O-bis(Trimethylsilyl)acetamid (1 molare Lösung in Dichlormethan, 5 ml) wurde zu einer gerührten Suspension von 7ß-[D-3-amino-(6,7-diacetoxychromon-3-carboxamido)-2-(4-hydroxyphenyl)-acetamido] -S-acetoxymethyl-S-cephem-'l-carbonsäure (475 mg) in Äthylacetat (5ml) bei O°C;gegeben. Die Mischung wurde 20 Minuten bei 0⁰C gerührt und dann wurde eine Lösung des in a) beschriebenen Säurechlorids (325 mg) in Dichlormethan (5 ml) zugegeben. Nach 4-stündigem Rühren bei 0⁰C wurde das Reaktionsgemisch mit Äthylacetat verdünnt und nacheinander mit Wasser, 0,5 η Chlorwasserstoffsäure, Wasser und gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und dann getrocknet (MgSO₄). Das Lösungsmittel wurde abgedampft und der Rückstand wurde mit Äthyläther/ n-Hexan (2:1) fc&turiert, wobei man die gewünschte Verbindung (526 mg) erhielt.

Schmelzpunkt: 210 bis 220⁰C (Zersetzung) Elementaranalyse für ^C32^H27^N3°14^S

CHN berechnet (%): 56,16 3,84 5,92

gefunden (%): 52,54 3,83 5,69

IR-Spektrum (cm~¹, Nujol): 1769-1790, 1735, 1665, 1620

NMR-Spektrum (5,DMS0-d_g):

2.05 (3H, S), 2,36 (3H, s),

2,37 (3Z, s), 3,41 (1H, d, J=18Hz), 4,98 (1H, d, J=13Hz), 5,05 (1H, d, J=5Hz),

5.6 - 5,9 (.2H, m) , 6,75 (2H, d, J=9Hz) , 7,28 (2H, d, J=9Hz) , 7,88 (ΊΗ, s) ,

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8,07 (1H, s), 9,05 (1Η, s), 9,59 (1Η, d, J=8Hz), 10,00 (1H, d, J=8Hz).

c) Natriumsalz_der_in_b)__bes-chriebenen_Verbindun2

Nachdem in Beispiel 4-c beschriebenen Verfahren erhält man die gewünschte Verbindung ('379 mg) aus der in b) beschriebenen Verbindung (497 mg)· _;

Schmelzpunkt:etwa 230⁰C (Zersetzung) Elementaranalyse für C₃₂H₂₆N

	C	53	3	H	5	N
berechnet (%)	52,	85	4	,58	5	,74
gefunden (%)	49,		,11	,54

IR-Spektrum (cm ¹, Nujol): 1720-1789, 1668, 1610

Beispiel 3 -"■"'

7ß- [D-2-(6,7-Dihydroxychromon-3-carboxamido)-2-phenyl acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure und deren Natriumsalz

Eine Mischung aus 6,7-Dihydroxychromon-3-carbonsäure (9,0 g, 4mMol) und Thionylchlorid (150 ml) wurde 45 Minuten unter Rückfluss gehalten und das Thionylchlorid wurde abgedampft. Nach der Zugabe von Benzol wurde die Mischung zur Trockne eingedampft und der Rückstand wurde mit η-Hexan trituriert, wobei man die gewünschte Verbindung (9,1 g, 93,4 %) erhielt.

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-22- 3Q1367S

IR-Spektrum {cm ¹, Nujol): 1780, 1765, 1645, 1625

acetamido ]_~3-acetOYmethYl-4-carbonsäure

Ν,Ο-bis(Trimethylsilyl)acetamid (44,8 g, 54,4 ml, 220 mMol) V7urden zu einer gerührten Suspension von Cephaloglycin (16,2 g, 40 mMol) in Dichlormethan (400 ml) bei 2°C gegeben. Die Mischung wurde 2 h bei 2 C gerührt und dann wurde Säurechlorid (8,7 g, 36 mMol) beschrieben in a) zugegeben und weitere 1,5 h bei 2°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Jithylacetat (1 1) verdünnt und nacheinander mit eisgekühlter, gesättigter Kochsalzlösung und_ einer eisgekühlten Mischung aus 0,5 η Chlorwasserstoffsäure und gesättigter Kochsalzlösung gewaschen (viermal) und getrocknte (MgSO₄). Das Lösungsmittel wurde abgedampft und der Rückstand wurde mit η-Hexan trituriert, wobei man ein Rohprodukt (8,25 g) erhilet. Eine Suspension eines Teils (1,8 g) des Produktes in Aceton (60 ml) wurde 2 Tage bei Raumtemperatur gerührt und nach dem Entfernen des Acetons wurde der Rückstand mit Äthyläther trituriert und mit η-Hexan gewaschen, wobei man die gewünschte Verbindung (1,5 g; Ausbeute des unbehandelten Rohproduktes: 28,2 %) erhielt.

Schmelzpunkt: 240 - 255°C (Zersetzung)

Elementaranalys	e fur C	28H23N	3°11S	6	N
		C	H	4	,89
berechnet (%):	55	,17	3,80		,41
gefunden (%)	40	,37	3,68

-1

IR-Spektrum (cm~', Nujol): 1780, 1735, 1710, 1660, 1630

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NMR-Spektrum (δ, DMSO-dg):

2,05 (3H, s), 3,40 (1H, d, J=18Hz),

3,52 (1H, d, J=18Hz), 4,70 (1H, d, J=12Hz),

4,98 (1H, d, J=12Hz), 5,03 (1H, d, J=5Hz),

5,74 (1H, dd, J=8Hz, 5Hz), 5,87 (1H, d, J=8Hz)

7,05 (1H, s), 7,20-7,52 (5H,m),

7,44 (1H, s), 8,88 (1H, s),

9,50 (1H, d, J=8Hz), 10,42 (1H, d, J=8Hz)

c) Natriumsalz_der_in_b)__beschriebenen_Verbindun2

Natrium-2-äthylhexanoat (,0.5 m Lösung in Äthylacetat, 6,0 ml) wurde tropfenweise zu einer Lösung der in b) beschriebenen Verbindung (1,83 g, 3 mMol) in einer Mischung aus Aceton (850 ml) und N,N-Dimethylformamid (13 ml) gegeben. Das Gemisch wurde 20 Minuten bei Raumtemperatur gerührt und dann wurden nacheinander Äthylacetat/Äthyläther (1:1, 800 ml) und Äther (200 ml) zugegeben. Nach 30-minütigem Rühren bei Raumtemperatur wurde der Niederschlag abfiltriert, mit Äthylacetat gewaschen und getrocknet, wobei man die gewünschte Verbindung (1,24 g, 65,4 %) erhielt.

Schmelzpunkt: 185-195°C (Zersetzung) Elementaranalyse für C₃QH₂₂N

	C	3	H	6	N
53	,25	3	,67	5	,65
48	,73	,74	,53

berechnet
gefunden

IR-Spektrum (cm""¹, N.ujol) : 1765, 2759, 1660, 1630, 1610

030043/0862

NMR-Spektrum (δ, DMSO-dg):

2,01 (3H, s), 3,20 (1H, d, J=18Hz),

3.42 (1H, d, J=18Hz), 4,80 (1H, d, J=12Hz), 4,94 (1H, d, J?5Hz) , 5,01 (111, d, J=12Hz), 5,59 (1H, br.s), 5,90 (1H, d, J=8Hz),

6,80 (1H, s), 7,20-7,60 (5H, m) , 7,29 (1H, s), 8,76 (1H, s),

9.43 (1H, br.s), 10,64 (1H, d, J=8Hz).

Beispiel 4

7ß- [D-2- (e^-Dihydroxychromon-S-carboxamido) -^-^-hydroxyphenyl·) acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure und deren Natriumsalz

Eine Mischung aus 6,7-Dihydroxychromon-3-carbonsäure (888 mg, 4 mMol) und Thionylchlorid (25 ml) wurde 1 h unter Rückfluss gehalten und dann wurde das Thionylchlorid abgedampft. Nach Zugabe von Benzol wurde das Gemisch nochmals bis zur Trockne eingedampft und der Rückstand wurde mit Dichlormethan trituriert, wobei man die gewünschte Verbindung (719 mg) erhielt

IR-Spektrum (cm"¹, Nujol): 1780, 1765, 1645, 1625 b) 7ß- [D-2-^6 ,7-DihYdroxYchromon-3-carboxamido)_-2-

Ν,Ο-bis (Trimethylsilyl)acetamid (742 μΐ) wurde zu einer gerührten Suspension von 7ß-[D-2-amino-2-(4-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure (238 mg) in Äthylacetat

0300A3/0882

3Q13675

(10 ml) bei 0⁰C gegeben. Die Mischung wurde 20 Minuten bei 0⁰C gerührt und dann wurde das Säurechlorid, das gemäss a) hergestellt worden war (120 mg) zugegeben. Nach 4-stündigem Rühren bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch mit Äthylacetat verdünnt, nacheinander mit Wasser und gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und über MgSO. getrocknet, und das Lösungsmittel wurde abgedampft.

Zu dem Rückstand wurde Aceton gegeben und das Gemisch wurde bei Raumtemperatur über Nacht stehen gelassen. Nach der Entfernung von Aceton wurde der Rückstand mit Äthyläther trituriert, wobei man.die gewünschte Verbindung erhielt ( 101 mg).

Schmelzpunkt: etwa 250⁰C (Zersetzung) Elementaranalyse für C_3;?EL,.N_O.. 2^

	57	C	3	H	6	N
berechnet (%)	51	,96	3	,44	5	,24
gefunden (%)	,84	,96	,76

IR-Spektrum (cm ¹, N.ujol) : 1785, 1730, 1715, 1660, 1630, 1610 NMR-Spektrum (δ, DMSO-dg):

2,05 (3H, s), 3,40 (1H, d, J=18Hz), 3,59 (1H, d, J=18Hz), 4,67 (1H, d, J=13Hz), 4,99 (1H, d, J=13,Hz), 5,05 (1H, d, J=5Hz), 5,67 - 5,88 (2H, m), 6,74 (2H, d, J=8,5Hz), 7,00 (1H, s), 7,27 (2H, d, J=8,5Hz), 7,44(1H, s), 8,88 (1H, s), 9,36 (1H, d, J=8Hz), 10,28 (1H, d, J=8Hz)

030043/0862

c) Natriumsalz_der_Verbindun2_2emäss_b)_

Natrium-2-äthylhexanoat (0,5 m Lösung in Äthylacetat, 0,24 ml) wurde zu einer Lösung der Verbindung (80 mg) in Aceton/N,N-Dimethylformamid (2:1, 3 ml) gegeben. Zu der Mischung wurde Äthylacetat/Äthyläther (1:1, 10 ml) gegeben.

Der gebildete Niederschlag wurde abfiltriert, mit Äthylacetat/ Äthyläther (1:1) gewaschen und getrocknet, wobei man die gewünschte Verbindung (67 mg) erhielt.

Schmelzpunkt: etwa 235 C (Zersetzung) Elementaranalyse für C₃₃H₂ N

	C	H	N
berechnet (%)	55,25	3,19	6,05
gefunden (%)	50,03	4,06	7,05

IR-Spektrum (cm"¹, nujol) : 1730-1780, 1660, 1600-1630

NMR-Spektrum (δ,

2,05 (3H, s), 3,16 (1H, d, J=18Hz),

3,48 (1H, d, J=18Hz), 4,74 (1H, d, J=13Hz),

4,90 (1H, d, J=13Hz), 4,91 (1H, 3, J=5Hz),

5,60 (1H, d, J=5Hz), 5,65 (1H, s),

6,80 (2H, d, J=8,5HZ), 7,03 (1H, s),

7,31 (2H, d, J=8,5Hz, 7,44 (1H, s),

8,83 (1H, s)

030043/0862

Beispiel 5

7B-[D-2- (6,7-Dihydroxychromon-3-carboxamido)-2-phenylacetamidol-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure

Natriumhydrogencarbonat (1 m Lösung in Wasser, 0,698 μΐ) wurde zu einer Lösung der in Beispiel 1-c beschriebenen Verbindung ( 200 mg, 0,279 mMol) in Wasser (160 ml) gegeben. Die Mischung wurde 7 Tage bei Raumtemperatur stehen gelassen, auf pH 2,0 angesäuert und dann mit Äthylacetat extrahiert (50 ml χ 4). Die organische Schicht wurde nacheinander mit Wasser und gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und über MgSO. getrocknet und eingedampft. Beim Triturieren des Rück-Standes mit Äthyläther erhielt man die gewünschte Verbindung (51 mg, 3.0 %) . Diese Verbindung ist identisch '.mit der gemäss Beispiel 3-b) erhaltenen und stimmt[im NMR, IR und bei der Dünnschichtchromatografie (Kieselgel, Merck 5715, Benzol) Dioxan/Essigsäure = 4 ; 1:1)] überein.

Beispiel 6

7ß-[D-2-(6,7-Dihydroxychromon-3-carboxamido)-2-(4-hydroxyphenyl) acetamido] -3-acetoxymethyl--3~cephem-4-carbonsäure

Natriumhydrogencarbonat (1 η Lösung in Wasser, 546 μΐ) wurde zu einer Lösung der in Beispiel 2-b) beschriebenen Verbindung (200 mg) in Wasser (15,45 ml) gegeben. Man liess die Mischung über Nacht bei Raumtemperatur stehen und stellte sie mit 1 η Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 ein und extrahierte dann mit Äthylacetat. Die organische Schicht wurd nacheinander mit Wasser und gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO^ getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wurde durch Dünnschichtchromatografie über Kieselgel gereinigt, wobei man die gewünschte Verwindung (108 mg) erhielt. Diese Verbindung

030043/0882

ist identisch mit der in Beispiel 4-b) beschriebenen und stimmt hinsichtlich NMR, IR und Dünnschichtchromatografie (Kieselgel (Merk 5715, Benzol/Dioxan/Essigsäure = 4:1:1) überein.

Beispiel 7"

7ß-[D-2-(7,S-Diacetoxychromon-S-carboxamido)-2-pheny!acetamido3 3-acetoxymethyl·-3-cephem-4-carbonsäure

a) 7_i8-DiacetoxYchromon3-carbonYlchlorid

Eine Mischung aus 7,8-Diacetoxy-3-carbonsäure (9,5 g, 31 mMol), Thionylchlorid (2,6 ml), Ν,Ν-Dimethylformaitiid (0,1 ml) und Benzol (300 ml) wurde 1,5 h unter Rückfluss behandelt. Nach der Zugabe von Thionylchlorid (2,6 ml) und N,N-Dimethylformamid (0,1 ml) wurde das Gemisch eine weitere Stunde unter Rückfluss gehalten und dann zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde mit η-Hexan trituriert, wobei man die gewünschte Verbindung erhielt (9,3 g, 92,6%).

IR-Spektrum (cm"¹, Wujol): 1780, 1770, 1670, 1620

b) 7β-_[0-2χ7_Λ8

phenYlacetamido]_-3-acetoxYmethYl-3-cep_hem-4-carbonsäure

N,O-bis(Trimethylsilyl)acetamid (1 m Lösung in Dichlormethan, 5,0 ml) wurde tropfenweise zu einer gerührten Suspension von Cephaloglycin (405 mg, 10 mMol) in üthylacetat (10 ml) bei 0⁰C gegeben. Die Mischung wurde 1 h bei O⁰C berührt und dann wurde das Säurechlorid, das gemäss a) erhalten worden war (325 mg, 1,0 mMol) zugegeben. Nach 4-stündigem Rühren bei 0 C wurde das Reaktionsgemisch mit Äthylacetat ( 300 ml) verdünnt und nacheinander mit Wasser (40 ml), 0,5 η Chlorwasserstoffsäure

03Q043/0S62

(40 ml χ 2), Wasser (40 ml x 2) und gesättigter Kochsalzlösung (40 ml χ 2) gewaschen und über MgSO. getrocknet.

Nach der Entfernung des Lösungsmittels erhielt man hellgelbe Kristalle (402 mg). Ein Teil dieser Kristalle (108 mg) wurde durch präparative Dünnschichtchromatografie über Kieselgel gereinigt (Entwicklungslösungsmittel: Chloroform/ Methanol/Ameisensäure = 90:10:4) wobei man die gewünschte Verbindung erhielt (24 mg, Ausbeute des unbehandelten Rohproduktes : 14,0 %).

Schmelzpunkt 150-160 C (Zersetzung)
Elementaranalyse für ^C32^H27^N3°13^S

CH N

berechnet gefunden

IR-Spektrum (cm~¹, Nujol): 1780, 1740, 1720, 1685, 1670, 1615

NMR-Spektrum (ö, DMSO-d,)

2,03 (3H, s), 2,38 (3H, s),

2,44 (3H, s), 3,42 (1H, d, J=18Hz)

3,52 (1H, d, J=18Hz), 4,66 (1H, d, J=14Hz),

4,95 (1H, d, J=14Hz), 5,04 (103, d, J=5Hz) ,

5,76 (1H, dd, J=8H6, 5Hz), 5,84 (1H, d, J=8Hz),

7,35-7,50 (5H, m), 7,57 (1H, d, J=8,5Hz),

8,16 (1H, d, J=8,5Hz), 9,00 (1H, s),

9,52 (1H, d, J=8Hz), 10,09 (1H, d, J=8Hz)

55	/40	3	/92	6	,06
54	,64	4	,10	4	,85

0300A3/0862

Beispiel 8

7ß- [D-2-(7,S-Diacetoxychromon-S-carboxamido)-2-(4-hydroxyphenyl) acetamido]-3-acetoxymethy1-3-cephem-4-carbonsäure

a) 7,e-Di

Eine Mischung aus 7,8 Diaceto'xychromon-3-carbonsäure (9,5 g, 31 mMol/, Thionylchlorid (2,6 ml), N,N-Dimethylformamid (0,1 ml) und Benzol (300 ml) wurde 1,5 h unter Rückfluss gehalten. Nach der Zugabe von Thionylchlorid (2,6 ml) und N,N-Dimethylformamid (0,1 ml) wurde die Mischung eine weitere Stunde unter Rückfluss gehalten und dann zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde mit η-Hexan trituriert, wobei man die gewünschte Verbindung (9,3 g, 92,6 %) erhielt.

IR-Spektrum (cm"¹, Nujol): 1780, 1770, 1670, 1620 acetamido] -S^

N,O-bis(Trimethylsilyl)acetamid (1,23 ml) wurde tropfenweise zu einer Suspension von 7ß-[D-2-amino-2-(4-hydroxyphenyl)-acetamido] 3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure (211 mg) in Äthylacetat (5 ml) bei 0⁰C gegeben. Das Gemisch wurde 1 h bei 0⁰C gerührt und dann wurde das Säurechlorid (162 mg), das in a) beschrieben wurde, zugegeben. Nach 4-stündigem Rühren bei 0 C wurde das Reaktionsgemisch mit Äthylacetat (150 ml) verdünnt und nacheinander mit Wasser, 0,5 η Chlorwasserstoffsäure, Wasser und gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und dann über MgSO. getrocknet. Das Lösungsmittel wurde abgedampft und Aceton (10 ml) wurde zum Rückstand gegeben. Die Mischung wurde 4 h bei Raumtemperatur stehen gelassen, dann auf ein Volumen von etwa 5 ml konzentriert und durch Dünnschichtchromatografie über

030043/0882

C	16	" 3	H	5	N
54,	34	3	,84	6	,92
50,		,75	,34

Kieselgel gereinigt, wobei man die gewünschte Verbindung (24 mg) erhielt.

Schmelzpunkt: 200 - 210⁰C (Zersetzung) Elementaranalyse für C-^H N-OS

Berechnet
gefunden

_2

IR-Spektrum (cm , Nujol):

1785, 1775, 1770, 1740, 1710, 1675, 1655, 1630, 1610, 1600 NMR-Septkrum( δ, DMSO-d,):

2,05 (3H, s), 2,39 (3H, s),

2,45 (3H, s), 3,48 (2H, m),

4,68 (1H, d, J=13Hz),4,96 (1H, d, J=13Hz),

5,04 (1H, d, J=5Hz), 5,72 (1H, d, J=8Hz),

5,76 (1H, m), 6,74 (2H, d, J=8,5 HZ),

7,26 (2v, d, J=8,5 Hz), 7,58 (1H, d, J=9Hz),

8,14 (1H, d, J=9Hz), 9,00 (1H, s),

9,40 (1H, d, J=8Hz), 9,46 (1H, s),

9,97 (1H, d, J=8Hz).

Beispiel 9

7ß-[D-2-(7,S-Dihydroxychromon-S-carboxamido)-2-phenylacetamido] 3-acetoxymethly-3-cephem-4-carbonsäure und deren Natriumsalz

a) 7,e-Dihydroxychromon-S-carbonylchlorid

Eine Mischung aus 7,e-Dihydroxychromon-S-carbonsäure (6,6 g, 30 mMol) und Thionylchlorid (25 ml) wurde 1 h unter Rückfluss

030043/086

gehalten und dann wurde das Thionylchlorid entfernt. Nach der Zugabe des Benzols zu dem Rückstand wurde das Gemisch bis zur Trockne eingedampft und der Rückstand wurde mit n-Hexan trituriert, wobei man die gewünschte Verbindung erhielt (7,2 g).

IR-Spektrum (cm~¹ , .Nujol) : 1775, 1660, 1620 b) Iß-^D-g^^^ie

N,O-bis(Trimethylsilyl)acetamid (13,6 ml, 55 mMol) wurde tropfenweise zu einer gerührten Suspension von Cephaloglycin (4,05 g, 10 mMol) in Dichlormethan (100 ml) bei 0⁰C gegeben. Die Mischung wurde 1 h bei 0°C gerührt und dann wurde das Säurechlorid (2,3 g, 9,5 mMol) zugegeben. Nach 1,5-stündigem Rühren bei 0⁰C wurde das Reaktionsgemisch mit Äthylacetat (500 ml) verdünnt, nacheinander mit gesättigter Kochsalzlösung, 1 η Chlorwasserstoffsäure (1:1, 200 ml χ 4) und gesättigter Kochsalzlösung (200 ml χ 6) gewaschen und über MgSO. getrocknet.

Die Entfernung des Lösungsmittels ergab den Feststoff, zu dem Aceton (100 ml) gegeben wurde. Die Mischung wurde bei 25 C über Nacht gerührt und dann auf ein Volumen von 10 ml konzentriert. Nacheinander wurden zu dem Rückstandsgemisch Äthylacetat und η-Hexan gegeben. Der gebildete Niederschlag wurde abfiltriert und getrocknet, wobei man die gewünschte Verbindung erhielt (1,1 g, 18,8 %).

Schmelzpunkt: 235-250⁰C (Zersetzung)

Elementaranalyse für C_?fiH

030043/0882

	55	C	3	H	6	N
berechnet	53	,17	3	,80	5	,89
gefunden (	,21	,47	,45
:%)

IR-Spektrum (cm"¹, Nujol): 1780, 1740, 1720, 1660, 1615 NMR-Sepktrum (δ, DMSO-dg)

2,03 (3H, S), 3,44 (1H₇ d, J=18Hz),

3,48 (1H, d, J=18Hz), 4,68 (1H, d, J=13Hz),

4.96 (1H, 3, J=13Hz), 5,05 (1H, d, J=5Hz),

5,76 (1H, m), 5,86 (1H, d, J=8Hz),

7,05 (1H, d, J=8Hz), 7,28-7,52 (5H, m),

7,56 (1H, d, J=8Hz), 8,92 (1H, s),

9,59 1H, d, J=8Hz), 10,34 (1H, d, J=8Hz)

c) Natriumsalz_der_Verbindung_von_b)__

Eine Suspension der Verbindung von b) (0,98 g, 1,6 mMol) in Aceton (200 ml) wurde filtriert und zum Filtrat wurde Natrium-2-äthylhexanoat (0,5 η Lösung in Äthylacetat, 3,04 ml) gegeben und anschliessend Äthylacetat/Äthyläther (1:1, 200 ml). Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Äthylacetat/Äthyläther (1:1) gewaschen und getrocknet, wobei man die gewünschte Verbindung erhielt (0,871 g, 85,8 %).

Schmelzpunkt: 230-240 C (Zersetzung) Elementaranalyse für C₂₈H₃₂N

berechnet gefunden

	C	3	H	6	N
53	,25	3	,67	5	,65
49	,67	,29	,00

030043/0802

IR-Spektrum (cm ¹, Nujol): 1760, 1660, 1610 NMR-Spektrum (δ, DMSO-dg)

2,00 (3H, s), 3,18 (1H, d, J=18Hz),

3,40 (1H, d, J=18Hz), 4,64 .(1H, d, J=12Hz),

4,98 (211, m) , 5,60 (1H, m) , -

5,78 (1H, d, J=8Hz), 7,04 (1H, d, J=8Hz),

7,12-7,56 (6H, m), 8,90 (1H, s),

9,40 (1H, br.s), 10,42 (1H, d, J=8Hz).

Die in diesen Beispielen beschriebenen Verbindungen wurden in vitro auf ihre antibakteriellen Aktivitäten untersucht.

Beispiel 10

7ß-[D-2-(7,8-Dihydroxychromon-3-carboxamido)-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure und deren Natriumsalz

Eine Mischung aus 7,8-Dihydroxychromon-3-carbonsäure (6_f6 g, 30 mMol) und Thionylchlorid (25 ml) wurde 1 h unter Rückfluss gehalten und das Thionylchlorid wurde entfernt. Nach Zugabe von Benzol zu dem Rückstand wurde das Gemisch zur Trockne eingedampft und der Rückstand mit η-Hexan trituriert, wobei man die gewünschte Verbindung (7,2 g) erhielt.

IR-Spektrum (cm"¹, Kujol): 1775, 1660, 1620

0300Α3/08Θ2

b) 7ß-[D-2-(7 f S-Dihydroxychromon-S-carboxamido)-2-(4-hydroxyphenyl) acetamido] -S-acetoxymethyl-S-cephem^-carbonsäure

N,O-bis(Trimethylsilyl)acetamide (17,3 ml) wurden tropfenweise zu einer gerührten Suspension aus 7ß-[D-2-amino-2-(4-hydroxyphenylacetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure (4,8 g) in Äthylacetat (200 ml) bei 2°C gegeben. Die Mischung wurde 2 h bei Raumtemperatur gerührt und dann auf 2 C gekühlt und dann wurde das in a) hergestellte Säurechlorid (2,4 g) zugegeben. Nach 4-stündigem Rühren bei 2°C wurde die Reaktionslösung in eisgekühlte 0,5 η Chlorwasserstoffsäure (800 ml) gegossen und das Gemisch wurde 30 Minuten auf einem Eisbad gerührt. Der gebildete Niederschlag wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet, wobei man ein Rohprodukt (6,5 g) erhielt. Ein Teil des Produktes (5,6 g) wurde in Methanol (200 ml) 2 h bei Raumtemperatur gerührt und das Gemisch wurde filtriert. Das Filtrat wurde auf eine Volumen von 30 ml konzentriert und die gebildeten Kristalle wurden abfiltriert, nacheinander mit Methanol und Äthyläther gewaschen, wobei man die gewünschte Verbindung erhielt (1,2 g)

Schmelzpunkt: 220-250⁰C (Zersetzung) Elementaranalyse für C₉PH₉-(N₀O₁₉S

	C	H	N
berechnet (%)	53,76	3,71	6,7
gefunden (%)	50,34	3,78	6,34

IR-Spektrum (cm ¹, Nujol): 3250, 1770, 1720, 1665, 1615

NMR-Spektrum (δ, DMSO-dg): 2,05 (3H, 2), 3,48 (2H, m),

030043/0862

4,68 (1H, d, J=14Hz), 5,00 (1H, d, J=14Hz), 5,04 (1H, d, J=5Hz), 5,76 (2H, m), 6,75 (2H, d, j=8Hz), 7,96 (1H, d, J=8,5Hz), 7,29 (1H, d, J=8Hz), 7,56 (1H, d, J=8,5Hz), 8,94 (1H, s), 9,38 (1H, d, J=8Hz), 10,25 (1H, d, J=8Hz)

Nach dem in Beispiel 4-c beschriebenen Verfahren wurde die gewünschte Verbindung -(623 mg) aus der in b) beschriebenen Verbindung (626 mg) erhalten.

Schmelzpunkt: 210-230°C (Zersetzung) Elementaranalyse für C₂₈H₃₂N₃NaO^₂S

CH N

berechnet (%) 51,93 3,42 .6,49 gefunden (%) 49,46 3,88 6,67

IR-Spektrum (cm"¹, Nujol): 3250, 1770, 1670, 1620 NMR-Septkrum (δ, DMSO-dg):

2,02 (3H, S), 3,24 (1H, d, J=18Hz),

3.44 (1H, d, J=18Hz), 4,80 (1H, d, J=12 Hz), 4,94 (1H, d, J=4,5Hz), 5,04 (1H, d, J=12Hz), 4,68 (2H, m), 6,76 (2H, d,J=8Hz),

7,00 (1H, d, J=8,5 Hz), 7,28 (2H, d,J=8Hz),

7.45 (1H, d, J=8,5HZ), 8,88 (1H, s), 9,02 (4H, bs), 10,36 (1H, d, J=8Hz)

Die in diesen Beispielen hergestellten Verbindungen wurden in vitro auf ihre antibakterielle Aktivität untersucht.

030043/0862

Hethode

Die Winimuminhibierungs-Konzentration (MIC) wurde nach einer Stand.ard-Agar-Verdünn.ungsmethode gemäss der Japan Society of Chemotherapy durchgeführt,

Die in den Beispielen 1, 2, 3; 4, 9 und 10 beschriebenen Verbindungen wurden in destilliertem Wasser gelöst und die in den Beispielen 7 und 8 beschreibenen Verbindungen wurden in Aceton/ Wasser (1:1) gelöst und die Kontrollverbindungen/ Cephaloglycin und Cephalexinmonohydrat wurden in einer 3%-igen Natriumhydrogencarbonatlösung aufgelöst.

Es wurden dann Serien-zweifach-Verdünnung aus diesen Lösungen hergestellt.

1 ml Aliquote jeder Verdünnung wurde mit 9 ml Heart-Infusions-Agcir oder Müller-Hinton-Agar in Petrischalen vermischt, wobei man Agar-Platten erhielt, welche die Verbindung in Serienverdünnungskonzentraionen enthielten. Nach dem das Agar gehärtet war, wurden die Platten in einen Brutapparat bei 37°C während 1,5 bis 2 h gestellt, wobei die Verschlüsse etwas geöffnet waren, damit das Aceton von den Platten verdampfen konnte.

Die Testorganismen wurden während 18h bei 37 C auf Tripticase Sojabrühe wachsen gelassen und in Kochsalz auf annähernd 10 koloniebildende Einheiten pro ml verdünnt. Eine Spachtelspitze jeder Zellsuspension wurde auf die vorher erwähnten Λg^ιr-Platten aufgetragen und die Platten wurden 18 h bei 37 C inkubiert und dann wurden die MIC bestimmt.

Die MIC-Werte der in den Beispielen 1,2,3,4,9 und 19 beschriebenen Verbindungen wurden anhand der Natriumsalze bestimmt,

030043/0862

während bei den Verbindungen der Beispiele 7 und 8 die freien Carbonsäuren verwendet wurden.

Die Ergebnisse werden in Tabelle 2 gezeigt.

030043/0862

Tabelle 2	κ	Cephaloglycin	Staphylococus	**	0,8	MIC	(jug/ml)	Proteus	Pseudomonas	Serratia
Test-.	* Cephalexin -	aureus	1,56	Escherichia	Klebsiella	inorganii	aeruginosa	marcescens
^^^^fc^ W *a T^ J- λ ■** ·! Λ*η ^^^^_ JaJ Cl Jv L· G J. .L1 ς~11	Monohydrate	209P		coli"..	pneumoniae	EP-lit	EP-172	ES-75
verbindung —.		3,13	NIHJ	EK-6	50	0,8	0,ü
1*	6,25	1, 56	<0,1	100	3,13	6,25
2**	1,56	12, 5	0,2	12,5	0,8	0,2
3*	3,13	0,8		50	••3,13	3rl3
H**	1,56	3,13	0,2-	3,13	1,56	0,8
7*	■5 ,25	0,8	<0,l	25	3,13	25
8**	1,56	3,13	0,4	12,5	1,56	1,56
9*	0 ,8	Ϊ 3,13	0,2	100	1,56	100
10**	12,5	0,2
		25	>100	>100
3,13	1,56	>100	>100	>100
6,25	3,13

* Heart-Infusions-Agar wurde verwendet ** Mueller Hinton-Agar wurde verwendet

Beispiel 11

Eine Glasflasche, die 125 mg des Natriumsalzes von 7ß-[D-2-(6,7-Diacetoxychromon~3-carboxamido)-2-phenylacetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure enthielt, wurde aseptisch versiegelt. Für den Gebrauch wurden 5 ml destilliertes Wasser für Injektionszwecke zugegeben, wobei man eine injizierbare Zubereitung erhielt. ,

Beispiel 12 Tabletten:

Natriumsalz von 7ß-[D-2-(6,7,dihydroxychromon-3-carboxamido)-2-phenylacetamido] -S-acetoxymethyl-S-cephein^- carbonsäure Kristalline Cellulose Calciumsalz von Carboxymethylcellulose ..-Calciumstearat

1 Tablette 370 mg

Die Tabletten wurden aus der obigen Formulierung in üblicherweise hergestellt.

Beispiel 13

Formulierung für eine Tablette:

250	mg
80	mg
38	mg
2	mg

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7ß-[D-2-(6,T-Dihydroxychromon-S-carboxamido)-2-(4-hydroxyphenyl) acetamido] -3-acetoxymel^tyl-

3-cephem-4-carbonsäure Kristalline Cellulose Calcimsalz von Carboxymethylcellulose Calciumstearat

1 Tablette 370 mg

Die Tablette wurde in üblicher Weise aus der obigen Formulierung hergestellt.

250	mg
80	mg
38	mg
2	mg

030043/0862

Claims (12)

1. EISAI CO., LTD., Tokyo / Japan

   Cephalosporin-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung und antibakterielle Arzneimittel, welche die Derivate enthalten

   Patentansprüche 1. Ein Cephalosporin-Derivate der allgemeinen Formel

   f ^N

   ^C00H

   R₃

   worin bedeuten:

   R., R„ und R_ jeweils Hydroxy, Acyloxy und Wasserstoff mit der Bedingung, dass zwei oder drei von R., R„ und I

   030043/0862

   nicht gleichzeitig Wasserstoff sind, R- Wasserstoff oder Hydroxy,
   sowie die nicht-toxischen Salze.
2. 2. Verbindung gemäss Anspruch 1, nämlich 7ß- [D-2- (6,7-Diacetoxychrom-3-carboxamido)'-2-phenylacetamido] -3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.
3. 3. Verbindung gemäss Anspruch 1, nämlich 7ß-[D-2-v6,7-Diacetoxychromon-3-carboxamido)-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-S-acetoxymethyl-S-cephem^-carbonsäure und deren Salze.
4. 4. Verbindung gemäss Anspruch 1 , nämlich 7ß-[D-2-(6,7-Dihydroxychromon-3-carboxamido)-2-phenylacetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.
5. 5. Verbindung gemäss Anspruch 1, nämlich 7ß-[D-2-(6,7-Dihydroxychromon-3-carboxoamido)-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.
6. 6. Verbindung gemäss Anspruch 1, nämlich 7ß-[D-2- (7, 8-Diacetoxychromon-3-carboxamido.)-2-phenylacetamido]-3-acetoxy- iuethyl-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.
7. 7. Verbindung gemäss Anspruch 1, nämlich 7ß-[D-2—(7,8-Diacetoxychromon-3-carboxamido)-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.
8. 8. Verbindung gemäss Anspruch 1, nämlich 7ß-[D-2- (7,8-Dihydroxychromon-3-carboxamido)-2-phenylacetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.
9. 9. Verbindung gemäss Anspruch 1, nämlich 7ß-[D-2-dihydroxychromon-3-carboxamido) -2- (4-hydroxyphenyl,)acetamido] -3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.

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10. 10. Verfahren zur Herstellung einer Cephalosporin-

    Derivates gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeich net, dass man eine Verbindung der allgemeinen Formel II

    R_ir-<W>-CH-C0NH_v

    H « <^II}

    COOH

    worin R₄ Wasserstoff oder Hydroxy bedeutet oder ein Salz davon oder ein Hydrat, mit einer Verbindung der allgemeinen Formel ΙΓΙ

    H ^(III)

    V ,<^\/>\ ^COOH ·

    worin R_n, R_ und R_ die vorher angegebene Bedeutung haben, oder einem reaktiven Derivat davon, umsetzt.
11. 11. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (I)-1 '

    ¹Tj

    ■^co 0

    _/7 "v^-—CH₂OCOCH₃ (D _ί

    COOH

    ^R3

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    und R₃ ¹ jeweils Hydroxy oder Wasserstoff

    bedeuten mit der Bedingung, dass zwei oder drei von R-', R ' und R₃ ¹ nicht gleichzeitig Wasserstoff sein dürfen, und R^ Wasserstoff oder Hydroxy bedeutet oder deren nichttoxischen Salze, dadurch gekennzeichnet , dass man einer Verbindung der allgemeinen Formel (I)-2

    /""V-CH-

    CONH

    •ο'

    CH₂OCOCH₃

    COOII

    worin R₁", R₇ ¹' und R₃" jeweils Acyloxy oder Wasserstoff bedeuten mit der Bedingung, dass zwei oder drei von R₁"/ R₉ ¹¹ und R₃"¹ nicht gleichzeitig Wasserstoff sind, und R. Wasserstoff oder Hydroxy bedeutet, hydrolysiert.
12. 12. Antibakterielles Arzneimittel gekennzeichnet durch einen Gehalt an einem Cephalosporin-Derivat der allgemeinen Formel (I) gemäss Anspruch 1, oder einem nicht-toxischen Salz davon neben üblichen' Träger- und Verdünnungsmitteln.

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