DE2937322A1 - Verfahren zur bestimmung von harnstoff - Google Patents
Verfahren zur bestimmung von harnstoffInfo
- Publication number
- DE2937322A1 DE2937322A1 DE19792937322 DE2937322A DE2937322A1 DE 2937322 A1 DE2937322 A1 DE 2937322A1 DE 19792937322 DE19792937322 DE 19792937322 DE 2937322 A DE2937322 A DE 2937322A DE 2937322 A1 DE2937322 A1 DE 2937322A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- salicylate
- instead
- compound
- ing
- nitroprusside
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/58—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving urea or urease
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Beschreibung Verfahren zur Beschreibung von Harnstoff
Die Erfindung betrifft ein vereinfachtes Verfahren zur enzymatisch - kalorimetrischen Bestimmung von Harnstoff,
das auf der Verwendung von lediglich zwei Reaktionssystemen beruht.
Bekanntlich hydrolysiert das Enzym Urease Harnstoff unter
Bildung von COp und NH, (dies ist der enzymetische Teil
der Bestimmung, I).
Es ist weiterhin bekannt, daß Ammoniak mit Phenol und
Hypochlorit unter Bildung von Indophenolblau in alkalisohem
Medium reagiert; das Indophenolblau kann photometrisch gemessen werden (dies ist der nichtenzymatische Teil der
Bestimmung, bekannt als Berthelot - Reaktion; Berthelot hat diese Reaktion 1859 beschrieben - II), III), IV).
Die Abfolge der Reaktion, von denen Gebrauch gemacht wird
lautet folgendermaßen:
I) Harnstoff +
II) NH3 + OCl"
III) NH2Cl +
IV) 0 =
Urease
Nitroprussidv
CO2 + 2NH5
NH2Cl + OH"
- OH
-NCl +
0^
ClN =
=N
030012/0932
/2
Die Reaktionefolge II, III, IV1 wurde von Weichselbaum et al
(Anal. Chem. 4I-, 848, 1969) untersucht und beschrieben sowie
vor kurzem von Patton et al (Anal. Chem. 49, 464, 1977).
Bei der Reaktion II wirkt die Nitroprussid-Verbindung als
Katalysator und kann durch andere Substanzen, beispielsweise Aquopentacyanoferrat ersetzt werden.
Fatton hat in seiner Veröffentlichung auch einige Verbindungen
beschrieben, die anstelle von Phenol für die Reaktion III und IV eingesetzt werden können. Hierzu gehört auch das 2-Carboxylderivat, allgemein als Salicylsäure bekannt. Salicylsäure oder
besser Natriumsalicylat wird in einigen handelsüblichen Testpackungen oder Testsätzen (Kit) für die quantitative Bestimmung
von Harnstoff verwendet (beispielsweise im Rochet Kit).
Alle Veröffentlichungen und handelsüblichen Testsätze, die für die quantitative Bestimmung von Harnstoff bakannt sind, sehen
drei voneinander getrennte Reaktionssysteme vor, nämlich:
a) Urease-Puffer
b) Phenol (oder substituiertes Phenol)-Nitroprussid-Verbindung
c) Alkalihypochlorit (oder eine Substanz mit gleichartiger Funktion).
Die Bestimmung des Harnstoffes damit erfolgt ebenfalls in drei Stufen, nämlich:
1) Vermischen der Probe mit Urease-Puffer und Inkubation,
2) Zugabe von Phenol-Nitroprussidkomplex,
3) Zugabe von Hypochlorit, Inkubation und photometrische Ablesung.
/3
030012/0932
und Stufen kann aus folgenden Gründen nicht verringert werden:
A) Phenol und/oder Hypochlorit können nicht mit Urease vermischt werden, weil dieses Enzym durch die beiden Substanzen
schnell denatuiert bzw. zerstört wird.
B) Phenol und Hypochlorit können nicht im voraus zusammengemischt werden, weil diese Hisohung rasch ihre Reaktionsfähigkeit
verliert; wahrscheinlich aufgrund der Bildung von chlorierten Phenolderivaten, die für die oben genannte Reaktionsabfolge
ungeeignet sind.
Diese seit langem tief verwurzelten Vorstellungen wurden bisher
als gültig angesehen, auch für Substanzen, die anstelle von Phenol oder Hypochlorit treten können,
Erfindungsgemäß wurde nun gefunden, das dies in einigen Fällen nicht zutrifft. Wird z. B. Salicylat anstelle von Phenol verwendet, so kann die Urease gleichzeitig damit eingesetzt werden
und die Reaktionsäbfolge lautet dann folgendermaßen:
1. Vermischen der Probe mit einem Reagens, das Urease - Puffer -Salicylat (oder eine äquivalente Verbindung) - Nitroprussidkomplex enthält und Inkubation;
2. Zugabe des Hypochlorits, Inkubation und photometrische Ablesung.
Die Zahl der Reagentien bzw. Reaktionsstufen verringert sich damit von drei bei den bisher bekannten Systemen auf zwei beim
neuen, erfindungsgemäßen Verfahren. In gleicher Weise wird die
Anzahl der Zugaben auf zwei verringert; dies bringt eine erhebliche Vereinfachung mit sich, sowohl wenn die Harnstoffbestimmung manuell durchgeführt wird (geringere Anzahl an
Pipe.tt ie rangen ) als auch wenn die Bestimmung automatisch vorgenommen wird (vereinfachte Vorrichtung).
/4 030012/0932
ORIGINAL INSPECTED
U-52 653 -M 5
Die Reaktionen.von denen Gebrauch gemacht wird, sind bekannt und werden seit langem genutzt· Erfindungsgemäß aber
ist es möglich geworden, in einem einzigen Reagens die Urease, den Puffer, das Salicylat und die Nitroprussldverbindung
miteinander zu kombinieren.
Wie oben bereits gesagt, kann das Salicylat durch eine Verbindung mit äquivalenter Funktion ersetzt werden. Hierzu gehören u. a. folgende Substanzen, die sich als günstig erwiesen
haben: 3-Methylsalioysäure, 4-Methylsalicysäure und 3-Hydroxybenzoesäüre, weiterhin kann auch die Nitroprussidverbindung
ersetzt werden, beispielsweise durch Aquopentaoyanof errat.
Dieses Ergebnis war auf Grund der bekannten Verfahrensweisen nicht vorsehbar.
Das folgende Beispiel dient zur näheren Erläuterung der Erfindung.
A) (mit Salicylat)
Komponenten für 100 ml
Urease 2 000 -20 000 Einheiten pH 7,5- 10,5
B) (mit 3-Methylsalicylsäure)
Komponenten für 100 ml Lösung:
K2HPO4 150 - 2 300 mg
3-Methylsalicylsäure 30 - 300 mg
Urease 2 000 - 20 000 Einheiten pH 7,5- 10,5
/5 030012/0932
1A-52 655
Sie Reagentien A) und B) wurden zusammen mit dem folgenden
Reagens C) verwendet, dessen für sofortige Verwendung geeignete Konzentration lautet:
Reagens C) verwendet, dessen für sofortige Verwendung geeignete Konzentration lautet:
Natriumhypochlorit 2 - 12 Millimol
HaOH 50 - 250 Hillimol.
HaOH 50 - 250 Hillimol.
2,5 ml Reagens (A+B) und 0,020 ml Probe wurden 5 bis 10 Hinuten
inkubiert und darauf 2,5 ml Reagens C) zugegeben; die erhaltene Lösung wurde weitere 5 bis 10 Hinuten inkubiert·
Sie entstandene Farbe bzw. Färbung wurde im Spektrophometer bei 580 bis 700 m um gemessen.
Sie entstandene Farbe bzw. Färbung wurde im Spektrophometer bei 580 bis 700 m um gemessen.
030012/0932
Claims (5)
1. Verfahren zur enzymatisch-kolorimetrischen Bestimmung
von Harnstoff durch Spaltung mittels Urease und Umsetzung mit einer Nitroprussidverbindung, Phenolverbindung und Hypochlorit,
dadurch gekennzeichnet, daß man
a) die Probe mit einem Reagens vermischt, das Urease, einen Puffer, ein Salicylat und eine Nitroprussid-Verbindung enthält,
inkubiert, und dann erst das
b) Hypochlorit zugibt, erneut inkubiert und dann photometrisch abliest.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet , daß man anstelle von Salicylat 3-Methylsalicylsäure
verwendet.
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man anstelle von Salicylat 4-Methylsalicylsäure
verwendet.
A. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man anstelle von Salicylat 3-Hydroxybenzoesäure
verwendet.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet , daß man anstelle der Nitroprussidverbindung
Aquopentacyanoferrat verwendet.
030012/0932 ORFSINÄinNSPECTED
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IT27718/78A IT1098851B (it) | 1978-09-15 | 1978-09-15 | Metodo per la determinazione dell'urea |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE2937322A1 true DE2937322A1 (de) | 1980-03-20 |
DE2937322B2 DE2937322B2 (de) | 1980-09-25 |
DE2937322C3 DE2937322C3 (de) | 1982-04-15 |
Family
ID=11222196
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE2937322A Expired DE2937322C3 (de) | 1978-09-15 | 1979-09-14 | Verfahren zur Bestimmung von Harnstoff |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4507388A (de) |
JP (1) | JPS5542594A (de) |
CA (1) | CA1132888A (de) |
DE (1) | DE2937322C3 (de) |
FR (1) | FR2436185A1 (de) |
GB (1) | GB2030295B (de) |
IT (1) | IT1098851B (de) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2544742B1 (fr) * | 1983-04-22 | 1986-02-28 | Biotrol Sa Lab | Procede de selection de derives phenoliques capables de former un melange stable avec l'urease en solution aqueuse et application au dosage de l'uree |
FR2654436A1 (fr) * | 1989-11-14 | 1991-05-17 | Nantes Ctre Hospitalier Rgl Un | Procede pour le dosage de l'uree et de l'urease, et coffret des reactifs necessaires pour la mise en óoeuvre de ce procede. |
DE4436948A1 (de) * | 1994-10-15 | 1996-04-18 | Merck Patent Gmbh | Mittel und Verfahren zur Bestimmung von Ammoniumionen |
US20050191704A1 (en) * | 2004-03-01 | 2005-09-01 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Assay devices utilizing chemichromic dyes |
DE102009057050A1 (de) * | 2009-12-04 | 2011-06-09 | Torsten Beel | Urin-Indikator-Mittel |
JP6994024B2 (ja) * | 2016-09-20 | 2022-01-14 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | アンモニウムの定量方法 |
CN108489985A (zh) * | 2018-07-07 | 2018-09-04 | 中国科学院新疆理化技术研究所 | 一种可视化快速检测次氯酸根的试剂 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR1321659A (fr) * | 1961-03-20 | 1963-03-22 | Albert L Chaney Chemical Lab | Méthode de dosage de l'azote dans les fluides biologiques |
USRE26125E (en) * | 1962-05-08 | 1966-12-13 | Reagents and analysis of nitrogen | |
US3432395A (en) * | 1966-06-08 | 1969-03-11 | Uni Tech Chem Mfg Co | Salicylate method for the quantitative determination of ammonia nitrogen |
US3542649A (en) * | 1967-04-07 | 1970-11-24 | Hoffmann La Roche | Color developing composition consisting of an enzyme,a salicylate and a hypochlorite donor |
US3592741A (en) * | 1968-06-05 | 1971-07-13 | Leonard A Hughes | Method for analysis of urea |
US3876502A (en) * | 1971-10-20 | 1975-04-08 | Mallinckodt Inc | Reagent formulations for assaying urea nitrogen in biological specimens and methods of preparing and using same |
US3769172A (en) * | 1972-05-01 | 1973-10-30 | Sigma International Ltd | Stabilized phenol nitroprusside reagent and analysis of nitrogen |
-
1978
- 1978-09-15 IT IT27718/78A patent/IT1098851B/it active
-
1979
- 1979-09-11 GB GB7931423A patent/GB2030295B/en not_active Expired
- 1979-09-13 JP JP11679379A patent/JPS5542594A/ja active Pending
- 1979-09-14 CA CA335,662A patent/CA1132888A/en not_active Expired
- 1979-09-14 DE DE2937322A patent/DE2937322C3/de not_active Expired
- 1979-09-14 FR FR7922994A patent/FR2436185A1/fr active Granted
-
1981
- 1981-07-09 US US06/281,722 patent/US4507388A/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
NICHTS-ERMITTELT * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA1132888A (en) | 1982-10-05 |
IT7827718A0 (it) | 1978-09-15 |
DE2937322C3 (de) | 1982-04-15 |
FR2436185A1 (fr) | 1980-04-11 |
JPS5542594A (en) | 1980-03-25 |
FR2436185B1 (de) | 1983-12-09 |
GB2030295A (en) | 1980-04-02 |
GB2030295B (en) | 1982-12-22 |
DE2937322B2 (de) | 1980-09-25 |
US4507388A (en) | 1985-03-26 |
IT1098851B (it) | 1985-09-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE2122255A1 (de) | Verfahren und Reagens zur spezifischen Bestimmung von Creatinin | |
EP0016947B1 (de) | Verfahren und Reagenz zur enzymatischen Bestimmung von Enzymsubstraten | |
DE69021389T2 (de) | Verfahren und reagenz zur bestimmung eines analyten auf enzymatischem wege mittels eines eisen-iii-zyan /eisen -iii-verbindungssystems. | |
EP0009076B1 (de) | Verfahren zur quantitativen enzymatischen Bestimmung von ADP und Reagenz zur Durchführung des Verfahrens | |
DE69204481T2 (de) | Prozedur und Medium zum Nachweis von Bakterien des Genus Listerias. | |
EP0015437A1 (de) | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung der Creatinkinase | |
DE2937322A1 (de) | Verfahren zur bestimmung von harnstoff | |
DE2326756C3 (de) | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Harnsäure | |
DE2705859C2 (de) | ||
DE2144136A1 (de) | Mittel und verfahren zur bestimmung von calcium | |
DE1940816B2 (de) | Verfahren und diagnostisches mittel zur enzymatischen be stimmung von glucose | |
DE2256331C3 (de) | Verfahren zur quantitativen kolorimetrischen Harnsäurebestimmung | |
DE2721681A1 (de) | Kontroll-loesung fuer diagnostische nachweisverfahren von im urin enthaltenen stoffen | |
DE3780938T2 (de) | Reagens zur bestimmung von chloridionen. | |
DE2509156A1 (de) | Verfahren zur bestimmung der cholesteringesamtmenge in einer serumprobe und einzelreagens zur durchfuehrung dieses verfahrens | |
DE2323609A1 (de) | Verfahren zur quantitativen bestimmung von triglycerid | |
DE2032270A1 (de) | Diagnostische Reagenzien für die Bestimmung von gamma-Glutamyltranspeptidase im menschlichen Serum | |
EP0049849A2 (de) | Verfahren zur Bestimmung der Streptokokken-Desoxiribonuclease B nach der Toluidinblau O-Methode | |
EP3721236B1 (de) | Quantitative acetaminophen-analytik | |
DE3779519T2 (de) | Analytisches element mit erhoehtem alkalischem phosphatase-isoenzym und verfahren zur bestimmung von theophyllin. | |
DE3854127T2 (de) | Stabiles alpha-amylase-reagenz. | |
DE2642321A1 (de) | Methode zur bestimmung der alkalischen phosphatase in koerperfluessigkeiten | |
DE69231584T2 (de) | Verfahren zur bestimmung von metallen in biologischen proben und reagenz dafür | |
EP0017909B1 (de) | Verfahren zur Bestimmung von Anti-Hyaluronidase und hierfür verwendbares Mittel | |
DE68918517T2 (de) | Bestimmung des Ammoniakspiegels im Blut. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
OAP | Request for examination filed | ||
OD | Request for examination | ||
8325 | Change of the main classification |
Ipc: C12Q 1/58 |
|
C3 | Grant after two publication steps (3rd publication) | ||
8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |