DE2918954A1 - 3''-acylierte makrolidantibiotika - Google Patents

Description

KRAUS & WEISERT

PATENTANWÄLTE 2 V I O vj O

DR. WALTER KRAUS DIPLOM CH EM I KER · D R.-l N S. AN ISI EKÄTE WEISERT DIPL-[NG. FACHRICHTUNG CHEMIE IRMSARDSTRASSE 15 - D-BOOO MÜNCHEN 71- · TELEFON 089/797077-797078 · TELEX O5-212 156 kpat ü

TELEGRAMM KRAUSPATENT

2167 WK/rm _■■< _

TOYO JOZO KABUSHIKI KAISHA Tagata / Japan

3"-acylierte Makrolidantibiotika

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Beschreibung

Die Erfindung betrifft neue 3"-acylierte Makrolidantibiotika der allgemeinen Formel:

für ein Wasserstoffatom oder eine

R₂ für ein Wasser stoff atom oder eine

in der F

gruppe stellt,

kanoylgrupps steht, wobei mindestens eine der Gruppen FL und Li₂ ein Wasserstoff a torn darstellt, und eine der Gruppen R¹ und R" eine Gruppe R-* und die andere eine Gruppe R^ ist, wobei R, eine C₂_g-Alkanoylgruppe und Ri eine C₂_^-Alkanoyl-

gruppe ist, sowie ihre Salze.

Unter Salzen sollen hierin physiologisch annehmbare Salze verstanden werden. Bevorzugte Beispiele für Salze sind anorganische Salze, wie Hydrochloride, Sulfate oder Phosphate, oder organische Salze, wie Acetate, Propionate, Tartrate, Citrate, Succinate, Malate, Aspartate oder Glutamate. Auch andere nicht-toxische Salze können eingeschlossen sein.

Die neuen Verbindungen (1) haben eine erhöhte antibakterielle Aktivität gegen empfindliche oder resistente Stämme im Ver-

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gleich zu bekannten 16-gliedrigen Makrolidantibiotika£ wie Antibiotika der Leucomycingruppe, wie z.B. «Iosamycin, Antibiotika der SF-837-Gruppe, Antibiotika der YL-704-Gruppe und Antibiotika der Espinomycingruppe. Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind insbesondere gegen Stämme wirksam, die gegenüber anderen Makrolidantibiotika, wie Oleandomycin, Erythromycin, Carbomycin und Spiramycin, resistent sind. Dazu kommt noch, daß eine Entacylierung in 4"-Stellung, die ein Grund für die Inaktivierung von 16™gliedrigen Makrolidantibiotika ist, nicht leicht auftreten kann, so daß der aufrechterhaltene Blutspiegel erhöht ist. Weiterhin ist bei den erfindungsgemäßen Substanzen der starke kontinuierliche bittere Geschmack, der eine allgemeine Eigenschaft von Makrolidantibiotika ist, vermindert. Es können daher vorzugsweise Sirups für Kinder, denen keine Tabletten oder Kapseln verabreicht werden können, hergestellt werden« Es wird erwartet, daß die erfindungsgemäßen Antibiotika (1) ausgezeichnete klinische Effekte in der Infektionstherapie zeigen.

Bei der Nomenklatur der Verbindung (1) gemäß der Erfindung ist ein Substituent in 3-Stellung oder ein Substituent in 3"-Stellung und 4"-Stellung der Formel (1) zu beachten. Wenn daher die 3"-Stellung acyliert ist und wenn die ursprüngliche Acylgruppe in 4"-Stellung nicht im Rahmen einer Acylumlagerung in die 3"-Stellung umgelagert worden ist, d.h. im Falle einer Verbindung der Formeis

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CH₁

[1Ί

worin R^ für eine C₂_g-Alkanoylgruppe steht, R» für eine

C₂ e-Alkanoylgruppe steht und R₁ und R₂ die oben angegebenen Bedeutungen haben_s die Nomenklatur auf dem bekannten Antibiotikum der unten angegebenen Formel (2) als Ausgangsmaterial aufgebaut.

lienn die ursprünglich® Acylgruppe in 4 "-Stellung im Rahmen ®inev Aeylumlagerraig in 3"-Stellung umgelagert worden ist, doIi» im Fall© einer Yerbiadune der Formel:

B₈O-

14

p R

P. Α

_s äasia ist d,i© ifoasjajislaiawj? aiasT Ls^e-'Γ-.:.:.:731ώ "U₉ einem JarfeibiotilSiSa do? Formel (2)_D ^Gi/Ia R^ ft!? ii^styl stellt und Ri
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lasao'Sas^ap;/⁷³; Sana 21_:,

■— -3 —

CH.

-CHO OH

GH,

worin R₁ und R/ die oben angegebenen Bedeutungen haben, angegeben. Die Formel umfaßt folgende Antibiotika:

Antibiotika R.

Ry

Leucomycin A₁

Il
Il
It

*3

Josamycin (=Leucomycin YL-704 A₄ Leucomycin A₄ Il J^

YL-704 B₃ Leucomycin Ag YL-704 A₁ SF-837 A₂ Espinomycin A₂ SF-837
SF-837 A₁ YL-704 B₁ Espinomycin A₁ YL-704 C₂ Espinomycin A₃ H H H H

COCH₃ 11

Il Il

Il Il

Il Il ti Il I! 11

it

Il

COCH₂CH(CH₃)₂

COCH₂CH₂CH₃

COCH₂CH₃

COCH

COCH₂CH(CH₃)₂

COCH₂CH₂CH₃

COCH₂CII₃

COCH₂CH₃

COCH₃

COCH₂CH(CH₃), COCH₂CH₂CH₃

COCH(CH₃)2

COCH₂CH₃

It

COCH₃

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ORIGINAL INSPECTED

- 1C -

Das Antibiotikum der Formel (2), bei dem R₁ für ein Wasserstoff atom steht, hat vier Hydroxylgruppen in 3-, 9-, 2¹- und 3"-Stellung. Wenn IL, für eine Acetylgruppe oder eine Propionylgruppe steht, dann hat dieses Antibiotikum drei Hydroxylgruppen in 9-, 2¹- und 3"-Stellung. In diesen Gruppen werden die Hydroxylgruppen in 3-, 9- und 2'-Stellung leicht acyliert und es wurde daher von vielen acylierten Derivaten berichtet. Jedoch wurde hinsichtlich der Hydroxylgruppe in 3"-Stellung berichtet, daß diese inaktiv ist.

In neuerer Zeit wurde über acylierte Derivate der Hydroxylgruppe in 3"-Stellung berichtet (JA-OS'en 49-124 087 und 51-26 887). Diese Verbindungen haben ursprünglicherweise eine Propionylgruppe in 3-Stellung und eine Acylgruppe in 9-Stellung. Um die Acylderivate in 3"-Stellung (die nachstehend als 3"-Acylderivate etc. bezeichnet werden), welche mindestens eine Hydroxylgruppe in 3- und 9-Stellung haben, herzustellen, insbesondere indem man die Acylgruppe nur in 3"-Stellung der bekannten "'intibiotika einführt, ist die bekannte Acyliermigsaethode in der Praxis bislang nicht anwendbar gewesen, was auf die hochreaktiven Hydroxylgruppen in anderen Stellungen als 3" zurückzuführen ist.

Es wurde nun gefunden, daß Hydroxylgruppen in anderen Stellungen als 3"-Stellung, insbesondere die Hydroxylgruppe in 3- und/oder 9-Stellung, durch eine Schutzgruppe geschützt werden können, die leicht entfernt werden kann, ohne daß eine 3"-Entacylierung nach vorhergegangener Acylierung der Hydroxylgruppe in 3"-Stellung stattfindet.

Aufgabe der Erfindung ist es, neue Antibiotika zur Verfügung zu stellen, die bei der Verabreichung höhere Blutspiegelwerte ergeben und die eine höhere Aktivität gegenüber empfindliche und resistente Stämme haben. Die angestrebten Anti-

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blotika sollen weiterhin einen weniger bitteren Geschmack
haben.

Die erfindungsgemäße Verbindung (1) kann nach folgenden Verfahren hergestellt werden«

Verfahren (A): Eine Verbindraig (1¹)» k©i der R^ für eine Cp^-Alkanoylgruppe steht und Rp für ein Wasserstoffatom
steht, d.h. eine Verbindung der Formeis

HO

worin R^₁ für eine C die oben angegebenen gestein; werden:

=Alkanoylgr-upp® steht und R, raid R^ L₉ kann wie folgt her=

[3]

- ΛΖ -

worin R₁- für eine halogenierte Acetyl-, p-IIitrobenzoyl- oder Silylgruppe steht, Rg für ein Wasserstoffatom oder eine Rg*- Gruppe steht, worin Rg₁ eine C_2-^-Alkanoylgruppe bedeutet, und R^ und R, die oben angegebenen Bedeutungen haben, wird mit einem aliphatischen C₂_g-Carbonsäurehalogenid unter Erhitzen und in Gegenwart eines organischen Lösungsmittels und eines tertiären organischen Amins acyliert, wodurch ein Gemisch aus einer Verbindung der Formel:

GE

OH.

[4]

» R5

worin Ro eine Rg^- oder R-z-Gruppe ist und R-j-j,

und Rg^ die oben angegebenen Bedeutungen haben, und einer

Verbindung der Formeis

_ 13 -

worin R^, R-*, Ra, Rc und Rg die oben angegebenen Bedeutungen haben, erhalten wird.

Wenn R₅ für eine halogenierte Acetyl- oder p-IIitrobenzoylgruppe steht, dann wird das erhaltene Gemisch mit Ammoniak in Methanol oder Äthanol behandelt, um die Schutzgruppe in 9-Stellung zu entfernen. Danach wird es in Methanol erhitzt, um die Acylgruppe in 2'-Stellung zu entfernen. Wenn R,- für eine Silylgruppe steht, dann wird das genannte Gemisch zur Entfernung der Silylgruppe und der Acylgruppen in 18- und 2'~ Stellung nach folgenden Verfahrensweisen behandelt?

(a) Die Silylgruppe und Acylgruppe in 18- und 2'-Stellung wird durch Erhitzen in einem wäßrigen niedrigen Alkanol, der eine Base enthalten kann, entfernt;

(b) die Silylgruppe und Acylgruppe in 18-Stellung wird bei Nicht-Erhitzungsbedingungen mit einem wäßrigen niedrigen Alkanol in Gegenwart einer Base behandelt und danach wird die Acylgruppe in 2'-Stellung durch Erhitzen in Methanol, das Wasser enthalten kann, entfernt ;

(c) die Acylgruppe in 18-Stellung wird durch Behandlung mit Methanol, das Ammoniak enthält, entfernt und die Silylgruppe und Acylgruppe in 2'-Stellung wird durch

• Erhitzen in wäßrigem niedrigen Alkohol entfernt; oder

(d) die Acylgruppe in 18-Stellung wird durch Behandlung mit Methanol, das Ammoniak enthält, entfernt und danach wird die Acylgruppe in 2'-Stellung durch Erhitzen mit Methanol entfernt und die Silylgruppe wird durch Behandlung mit wäßriger Säure entfernt.

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Die obengenannte Verbindung (3) ist eine Verbindlang, bei der die bevorzugte Schutzgruppe in 9-Stellung des Antibiotikums der Formel (2) eingeführt worden ist, um die Acylierung der Hydroxylgruppe in 9-Stellung bei der Stufe der 3"-Acylierungsreaktion zu verhindern. Die genannte Schutzgruppe ist eine Gruppe, die leicht ohne Zerstörung der chemischen Struktur nach 3"-Acylierung selektiv entfernt werden kann. Beispiele hierfür sind eine halogenierte Acetylgruppe, wie eine Chloracetyl-, Dichloracetyl-, Trichloracetyl- oder Trifluoracetylgruppe, eine p-Nitrobenzoylgruppe oder eine Silylgruppe. Von diesen Schutzgruppen ist die Einführung einer chlorierten Acetylgruppe, z.B. eine Chloracetyl- oder Dichloracetylgruppe, bereits in der JA-OS 50-96 584 beschrieben worden. Die Einführung der anderen Schutzgruppen kann gemäß den Methoden dieser Druckschrift durchgeführt werden, d.h. indem man mit dem Carbonsäurehalogenid, vorzugsweise dem Carbonsäurechlorid, in Gegenwart eines tertiären organischen Amins und in einem inerten organischen Lösungsmittel umsetzt.

Die Einführung der Silylgruppe kann erfolgen, indem man das Antibiotikum der Formel (2) oder sein 2'-Acylderivat mit einem geeigneten Silylierungsmittel, z.B. einem trisubstituierten Halogensilan oder einem hexasubstituierten Silazan, siliert. Beispiele für trisubstituierte Halogensilane sind Triniedrigalkylhalogensilane, wie z.B. Trimethylchlorsilan. Beispiele für hexasubstituierte Silazane sind Hexaniedrigalkylsilazane, wie z.B. Hexamethylsilazan. Alle beliebigen Silylierungsmittel können verwendet werden, wenn die eingeführte Silylgruppe nicht durch Wasser entfernt werden kann.

Die obige Silylierungsreaktion wird gewöhnlich in einem inerten organischen Lösungsmittel, wie Dichiormethan, Chloroform oder Methylisobutylketon, bei Raumtemperatur oder darunter

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durchgeführt. Die Menge des Silylierungsmittels kann etwa 1 bis 1,8 molare Äquivalente betragen. Bei der Silylierungsreaktion durch trisubstituierte Halogensilane wird vorzugsweise ein tertiäres organisches Amin als Dehydrohalogenierungsmittel verwendet. Als Beispiele können Pyridin, Chinolin, N-MethyImorpholin oder Dimethylanilin genannt werden.

Das silylierte Produkt der Formel (3) kann erhalten werden, indem man das Reaktionsgemisch in Wasser eingießt und mit einem geeigneten, mit Wasser nicht mischbaren organischen Lösungsmittel extrahiert. Die Silylgruppe der Verbindung (3) ist gegenüber Wasser stabil und sie kann in"Gegenwart von Wasser nicht entfernt werden.

Wie obenstehend im Zusammenhang mit dem Schutz der Hydroxylgruppe in 9-Stellung des Antibiotikums (2) erläutert, kann die Hydroxylgruppe in 2'-Stellung gegebenenfalls durch eine Schutzgruppe geschützt werden» Beispiele für solche Schutzgruppen sind Cg^-Alkanoylgruppen,, vorzugsweise eine Acetylgruppe. Die 2' -Acetylierung kann nach dem Verfahren gemäß der JA-PS 53-7434 erfolgen.

Die obige Verbindung (3) wird durch ein aliphatisches Carbonsäurehalogenid 3 n-acyliert«, Die Reaktion wird in Gegenwart eines tertiären organischen Amins und in einem inerten organischen Lösungsmittel unter Erhitzen durchgeführt. Beispiele für geeignete inerte organische Lösungsmittel sind Aceton, Methyläthylketo3a_f Äthylacetat, -Dimethoxyäthan, Tetrahydrofuran j Dioxan, Benzol oder"Toluol. Beispiele für tertiäre organische Amine sind Pyridin_f Picolin oder Collidin. Auch andere bekannte organische Amine-, ζ ο B. "Triäthylamin, Dimethylanilin j Trit»enzylanin^ H-Methylpiperidi3a₉ N-Methylmorpholin, Chinolin oder Isochinolin, können verwendet werden« Bei-

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spiele für geeignete Carbonsäurehalogenide sind aliphatische Cp_g-Carbonsäurehalogenide, wie z.B. Acetylchlorid, Propionylchlorid, Butylylchlorid, Isobutylylchlorid, Isovalerylchlorid oder Caproylchlorid. Die Erhitzungstemperatur kann 50 bis 120⁰C sein. Die Reaktionszeit kann je nach der Reaktionstemperatur variiert werden. Da der Fortschritt der Reaktion durch Kieselgel-Dünnschichtchromatographie überwacht werden kann, kann die Beendigung innerhalb des Bereichs von 1 bis 150 h bestimmt werden.

Bei der obigen Acylierungsreaktion wird die Hydroxylgruppe in 3"-Stellung acyliert, wobei eine Verbindung mit

17 18 17 18

[-CH=CHOR₃] in 17- und 18-Stellung anstelle von [-CH₂-CHO] als Nebenprodukt gebildet wird. Wenn eine Hydroxylgruppe in 3-Stellung vorliegt und eine zuvor nicht-geschützte Hydroxylgruppe in 2'-Stellung vorhanden ist, dann werden diese Hydroxylgruppen ebenfalls acyliert. Die Menge des aliphatischen Carbonsäurehalogenids sollte daher je nach der Anzahl der zu acylierenden Hydroxylgruppen variiert werden.

Bei der Reaktion, bei der eine Verbindung (3)₉ bei der R^ ein Wasserstoff a torn ist, verwendet wird und unterschiedliche Acylgruppen in 3- und 3"-Stellungen eingeführt werden, d.h. anders ausgedrückt, wenn die Verbindung (4), bei der R₁^ und R, verschiedene Acylgruppen sind, hergestellt werden soll, dann wird eine Acylgruppe, z.B. eine Acetylgruppe oder eine Pfopionylgruppe, zuvor in die Hydroxylgruppe in 3-Stellung der obigen Verbindung (3) eingeführt, wonach in 3"-Stellung acyliert wird.

Das so erhaltene Gemisch aus Verbindungen (4) und (4^H) kann isoliert werden, wenn das Reaktionsgemisch durch Alkali auf einen pH-Wert von 8 bis 10 in Wasser eingestellt wird. Es

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_ 17 -

wird ausgefällt und filtriert. Wenn das Reaktionslösungsmittel ein mit Wasser nicht mischbares organisches Lösungsmittel ist, dann wird das Reaktionsgemisch in Wasser gegossen und der pH-Wert wird auf 8 bis 10 eingestellt, worauf mit einem mit Wasser nicht mischbaren organischen Lösungsmittel extrahiert wird. Eine weitere Reinigung kann durch Chromatographie erfolgen, wobei Kieselgel, aktives Aluminiumoxid oder ein Adsorptionsharz verwendet wird und beispielsweise mit Benzol-Aceton eluiert wird.

Die Entfernung der Schutzgruppen in 9-, 18- und 2"-Stellungen des Gemisches aus der Verbindung (4) und der Verbindung (4·) hängt von der Schutzgruppe in 9-Stellung ab. Wenn R₁- für eine halogenierte Acetyl- oder p-Hitrobenzoylgruppe steht, dann wird eine Schutzgruppe in 9-Stellung durch Behandlung mit Ammoniak in Methanol oder Äthanol bei Raumtemperatur entfernt. Der Fortschritt der Reaktion kann durch Kieselgel-Dünnschichtchromatographie überwacht werden. Die Reaktion kann abgebrochen werden, wenn ein Flecken der Verbindung (4) und (4^S) nicht festgestellt wird. Durch diese Reaktion wird eine

17 18
Gruppe [-CH=CHOR^] der Verbindung (4¹) in die ursprüngliche

17 18
Gruppe [-CH₂CHO] verändert. Ammoniak und Alkohol werden aus dem Reaktionsgemisch abdestilliert, wodurch eine Verbindung erhalten wird, bei der die Schutzgruppen in 9- und 19-Stellung entfernt worden sind. Die Verbindung wird in Methanol, das Wasser enthalten kann, erhitzt, um die Acylgruppe in 2'-Stellung zu entfernen. Das Erhitzen erfolgt durch Rückflüssen mrt Methanol. Die Reaktion kann durch Kieselgel-Dünnschichtchromatographie überwacht werden.

Wenn R₁- eine Silylgruppe ist, dann können die Schutzgruppen in 9-, 18- und 2«-Stellungen wie folgt entfernt werden:

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_ 18 -

(A) Die SiIy!gruppe und die Acylgruppe in 18- und 2'-Stellung werden entfernt, indem mit einem wäßrigen niedrigen Alkanol, der eine Base enthalten kann, erhitzt wird;

(B) die SiIy!gruppe und die Acylgruppe in 18-Stellung werden entfernt, indem unter IJicht-Erhitzungsbedingungen in einem wäßrigen niedrigen Alkanol und in Anwesenheit einer Base behandelt wird. Die Acylgruppe in 2-Stellung wird durch Erhitzen in Methanol, das Wasser enthalten kann, entfernt;

(C) die Acylgruppe in 18-Stellung wird entfernt, indem mit Methanol, das Ammoniak enthält, behandelt wird. Die Silylgruppe und die Acylgruppe in 2'-Stellung werden entfernt, indem in einem wäßrigen niedrigen Alkohol erhitzt wird; oder

(D) die Acylgruppe :ai 18-Stellung wird entfernt, indem in Methanol, das Ammoniak enthält, behandelt wird. Die Entfernung der 2'-Acylgruppe erfolgt durch Erhitzen in Methanol und die Entfernung der Silylgruppe erfolgt durch Behandlung mit einer wäßrigen Säure.

Bei den obigen Verfahrensweisen ist der niedrige Alkanol vorzugsweise Methanol oder Äthanol. Bei der Methode (A) und (B) können als Beispiele tertiäre organische Amine, Alkalicarbonate oder basische Harze genan rt werden. Das Erhitzen kann in der Weise durchgeführt werden, daß in dem organischen Lösungsmittel am Rückfluß erhitzt wird. Bei der Methode (B) bedeuten "Nichfe-Erhitzungsbedingungen" oder eine nicht-angegebene Temperatur, daß bei Raumtemperatur oder darunter gearbeitet wird. Der Endpunkt der Reaktion kann durch Kieselgel-Dünnschichtchromatographie ermittelt werden.

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Die gewünschte Verbindtang (1a) kann nach dem nachstehenden Verfahren aus der so hergestellten Verbindung erhalten werden:

Verfahren (B): Eine Verbindung (1')» bei der R₁ für ein Wasserstoffatom steht und R₂ für eine C₂_.-Alkanoylgruppe steht, d.h. eine Verbindung der Formel:

N(CH₃)

OR,

CH.

bei der R₂₁ für eine C₂ . --Alkanoylgruppe steht und R, und R, die oben angegebenen Bedeutungen haben, kann erhalten werden, indem man eine Verbindung der Formeis

OH

CH,

worin Rg für ein Wasserstoffatom oder eine R/-..-Gruppe steht, wobei Rg₁ eine Cg^-Alkanoylgruppe bedeutet, und Rp und R^ die oben angegebenen Bedeutungen haben, mit einem aliphatischen C₂_^-Carbonsäureanhydrid in Gegenwart einer anorganischen Base behandelt wird, wodurch eine Verbindung der Formel:

OR₄

t6l

worin Ry eine Rg₁- oder R₂₁-Gruppe bedeutet, und R₂₁, R^ und die oben angegebenen Bedeutungen haben, hergestellt wird,

Diese Verbindung (6) wird mit einem aliphatischen Co g-Carbonefturehalogenid In Gegenwart eines tertiären organischen Amins In einem Inerten organischen Lösungsmittel unter Erhitten umgesetzt, wodurch eine Verbindung der Formelt

OH.

(71

60Θ847/Ο7Ι0

worin R₂₁, R^, R^ und Ry die oben angegebenen Bedeutungen haben, erhalten wird. Die Schutzgruppe in 18-Stellung wird entfernt, indem mit einer methanolischen Lösung von Ammoniak oder einer äthanolischen Lösung von wäßrigem Alkalicarbonat behandelt wird. Sodann wird die 2·-Acylgruppe durch Erhitzen in Methanol entfernt.

Die obige Verbindung (5) bedeutet das Antibiotikum (2), bei dem R^ für ein Wasserstoffatorn steht, beispielsweise Leucomycin-A-j, -Ac, -A₇, -Ag oder Acylderivate davon. Das Acylderivat ist das 9-Acyl-, 2'-Acyl- oder 9,2'-Diacylderivat.

Die Einführuxg der Schutzgruppe in 3- und 18-Stellung der Verbindung (5) erfolgt durch Umsetzung mit dem entsprechenden Carbonsäureanhydrid in Gegenwart einer anorganischen Base.

Beispiele für anorganische Basen sind Alkalihydroxide, wie z.B. Kaliumhydroxid oder Natriumhydroxid, Alkalicarbonate, wie z.B. Kaliumcarbonat oder Natriumcarbonat, und Alkalihydrogencarbonate, wie z.B. Natriumbicarbonat. Bevorzugte Beispiele sind Alkalicarbonate oder Alkalihydrogencarbonate. Entsprechende Carbonsäureanhydride sind beispielsweise Cp_λ-Carbonsäureanhydride, wie Essigsäureanhydrid, Propionsäureanhydrid oder Milchsäureanhydridο Die Temperatur der Einführung der Schutzgruppe ist 30 bis 100⁰C, vorzugsweise 40 bis 60°C.

Wenn das Antibiotikum (5), das zuvor in 9-Stellung acyliert worden ist, verwendet wird, dann wird der Flecken des Antibiotikums (5) auf dem Dünnschichtchromatogramm hinsichtlich der Beendigung der Reaktion überwacht. Wenn das Antibiotikum (5), bei dem in 9-Stellung eine Hydroxylgruppe vorliegt, verwendet wird, dann wird der Flecken des acylierten Derivats der Hydroxylgruppe auf die Beendigung der Reaktion überwacht.

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Durch die obige Reaktion wird die Aldehydgruppe in 18-Stellung acyliert. Die Hydroxylgruppe in 3-Stellung wird durch Ringschluß zwischen dem Kohlenstoffatom in 18-Stellung und dem Sauerstoffatom in 3-Stellung geschützt. Auch dann, wenn die Hydroxylgruppe in 9-Stellung zuvor nicht acyliert worden ist, und/oder die Hydroxylgruppe in 2-Stellung'zuvor nicht durch eine Acylgruppe, vorzugsweise eine Acetylgruppe, acyliert worden ist, können diese Hydroxylgruppen auch acyliert werden. Da dieser Schutz der 3- und 18-Stellungen der am meisten bevorzugte Schutz für die selektive Reaktion ist und weil die Verbindungen ziemlich stabil sind, ist diese Schutzgruppe eine sehr gute und geeignete Schutzgruppe für die Hydroxylgruppe

in 3-Stellung. »

Die Abtrennung des Produkts (6) aus dem Reaktionsgemisch kann nach dem gleichen Verfahren der Trennung und Reinigung, wie hinsichtlich der Verbindung (4) beim obigen Verfahren (A) beschrieben, erfolgen.

Die Acylierung in 3 "-Stellung der Verbindung (6) kann nach dem gleichen Verfahren der 3"-Acylierung der Verbindung (3), wie beim Verfahren (A) beschrieben, erfolgen. Die dabei erhaltene Verbindung (7) kann nach der gleichen Verfahrensweise, wie hinsichtlich der Verbindung (4) beim Verfahren (A) beschrieben, isoliert und gereinigt werden.

Die Entfernung der Schutzgruppen in 3- und 18-Stellung der Verbindung (7) kann quantitativ erfolgen, indem man bei Raumtemperatur in einer methanolischen Lösung, die Ammoniak enthält, oder einer äthanolischen Lösung, die wäßriges Alkalicarbonat enthält, stehen läßt. Die Reaktion kann durch Kieselgel-Dünnschichtchromatographie überwacht werden, wobei ein Verschwinden des Fleckens der Verbindung (7) die Beendigung der Reaktion anzeigt.

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Die 2·-Acylgruppe in dem 9»2',3^M-Triacylderivat, das durch Vakuumkonzentrierung des Reaktionsgemisches erhalten wird, wird durch Erhitzen in Methanol , das Wasser enthalten kann, entfernt. Das Erhitzen kann durch Rückflüssen in Methanol erfolgen. Die Reaktion kann durch Überwachung des Kieselgel-DUnnschicht ehr oma tograiims beendigt werden, wenn ein Flecken des obengenannten 9,Z^% ,3ⁿ-Triacylderivftts nicht mehr festgestellt wird.

Das durch Abdestlllieren des Methanols erhaltene Produkt wird, wie unten im Zusammenhang mit der Verbindung C 1b) erläutert, abgetrennt und gereinigt.

Verfahren (C): Eine Verbindung (1')_f bei 4er R₁ und R₂ für Wasserstoff atome stehen, d.h. eine Verbindung (1c) der Formelt

tlcj

tforin fl« und R* die oben angegebenen Bedeutungen haben» kann hergestellt werden, indem »an eine Verbindung (β) der Formelt

009047/07*0

17

18

CHO OH₆ ^x(Päg) a

5 VOH

[8]

worin Rc₁ für eine chlorierte Acetylgruppe steht, Rg für ein Wasserstoffatom oder eine Rg₁-Gruppe steht, wobei Rg₁ eine Cp α-Alkanoylgruppe bedeutet, und R» die oben angegebene Bedeutung hat, mit einem aliphatischen Cp_-A-Carbonsäureanhydrid in Gegenwart eines aliphatischen C₂__^-Säureanhydrids und in Gegenwart einer anorganischen Base umsetzt, wodurch eine Verbindung (9) der Formel:

18

CH

R_rt O

1OE_{21 0R} N (G£

OH

ο(

'Λ

ο—( ^xo—(

CH.

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worin R^ für eine Rg₁-Gruppe oder eine

₁ -Gruppe steht, wobei Rp₁ eine Cp_>-Alkanoylgruppe bedeutet, und R₁₅₁, Rg₁ und R, die oben angegebenen Bedeutungen haben, erhalten wird, und indem die Verbindung (9) in 3"-Stellung mit einem aliphatischen C2_g-Carbonsäurehalogenid in Gegenwart eines tertiären organischen Amins in einem inerten organischen Lösungsmittel umgesetzt wird.
Die Verbindung (1c) kann auch wie folgt hergestellt werden.

Das 2'-Acylantibiotikum (10) der Formel:

CHO OR₈₁ N(CH₃) τ!

CH,

[10]

worin R^ und Rg₁ die oben angegebenen Bedeutungen haben, wird in 3- und 9-Stellungen durch ein chloriertes Acetylhalogenid in Gegenwart eines tertiären organischen Amins und in einem inerten organischen Lösungsmittel geschützt, wodurch eine Verbindung (11) der Formel:

CH.

CHO

OR.

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[11]

worin R/, R₁-* und Rg., die oben angegebenen Bedeutungen haben, hergestellt wird. Die Verbindung (11) wird durch ein aliphatisches C₂_g-Carbonsäurehalogenid in Gegenwart eines tertiären organischen Amins und in einem inerten organischen Lösungsmittel 3"-acyliert, wodurch eine Verbindung (12) der Formel:

17 18

CH

worin

^{die oben} angegebenen Bedeutun

gen haben, oder eine Verbindung (13) der Formel:

CH₃

-CHO

OR.

OR.

[13]

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die oben angegebenen Bedeutungen ha-

worin FU, R^, R^₁ und R
ben, erhalten wird.

Die genannte Verbindung (12) oder (13) wird mit Ammoniak in Methanol oder Äthanol behandelt, wodurch eine Verbindung (14) der Formel:

a (CH₃)

OR.

[14]

worin R

R. und

,, R. und Rg die oben angegebenen Bedeutungen haben, erhalten wird. Die Verbindung (14) wird in Methanol, das Wasser enthalten kann, behandelt, um die Acylgruppe in 2'-Stellung zu entfernen.

Die obige Verbindung (8) ist das Antibiotikum (2), in das zuerst die Schutzgruppe für die Hydroxylgruppe in 9-Stellung zur Verhinderung der Acylierung der Hydroxylgruppe in 3- und 9-Stellung bei der folgenden 3"-Acylierungsreaktion eingeführt worden ist. Die genannte Schutzgruppe ist eine Gruppe, die leicht entfernt werden kann, ohne daß die chemische Struktur nach der 3"-Acylierung zerstört wird. Vorzugsweise ist sie eine chlorierte Acetylgruppe, z.B. eine Chloracetyl-, Dichloracetyl- oder Trichloracetylgruppe.

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Diese 9-geschützte Verbindung kann erforderlichenfalls an der Hydroxylgruppe in 2'-Stellung zuvor oder danach geschützt werden. Als bevorzugtes Beispiel für eine Schutzgruppe kann eine Cp A-Alkanoylgruppe, z.B. eine Acetylgruppe, genannt werden.

Sodann wird die Hydroxylgruppe in 3-Stellung der Verbindung (8) geschützt, indem mit dem entsprechenden Carbonsäureanhydrid, vorzugsweise Essigsäureanhydrid, in Gegenwart einer anorganischen Base umgesetzt wird, um die 3- und 18-stellungen zu schützen. Die Einführung kann nach der gleichen Verfahrensweise wie beim vorstehend beschriebenen Verfahren (B) erfolgen. Das Verschwinden des Fleckens der Verbindung (8) auf dem Kieselgel-Dünnschichtchromatogramm kann die Beendigung der Reaktion anzeigen. Die Verbindung (9) kann nach der gleichen Verfahrensweise, wie die Isolierungsverfahrensweise beim Verfahren (A), erhalten werden.

Bei diesem Verfahren kann die Verbindung (11) anstelle der Verbindung (4) verwendet werden, wodurch die Verbindung (1c) erhalten wird.

Die Verbindung (11) ist eine Verbindung, bei der die Schutzgruppe für die Hydroxylgruppe in 3- und 9-Stellung eingeführt worden ist, um die Acylierung bei der nachfolgenden 3"-Acylierung zu verhindern. Die Hydroxylgruppe in Zustellung sollte vorzugsweise durch die andere Schutzgruppe geschützt werden. Ein bevorzugtes Beispiel hierfür ist eine Acetylgruppe. Die Hydroxylgruppen in 3- und 9-Stellung des 2^l-acylierten Antibiotikums (10) werden durch eine geeignete Schutzgruppe geschützt. Bevorzugte Beispiele sind chlorierte Acetylgruppen, z.B. eine Chloractyl-, Dichloractyl- oder Trichloracetylgruppe. Die Einführung der Schutzgruppe erfolgt mit der 2- bis 3-fachen überschüssigen Menge des chlorierten Acetylhalogenide.

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Die Isolierung der Verbindung (4) beim Verfahren (A) kann auch zum Erhalt der Verbindung (12) oder (13) durch 3"-Acylierung der Verbindung (9) oder (11) angewendet werden.

Die Entfernung der Schutzgruppen in 9-, 3- und 18-stellung der Verbindung (12) oder in 3- oder 9-Stellung der Verbindung (13) kann durch Behandlung mit methanolischer oder äthanolischer Lösung, die Ammoniak enthält, erfolgen. Die Reaktion kann bei Raumtemperatur ablaufen. Die Beendigung der Reaktion kann durch Verschwinden der Verbindung (12) oder (13) auf dem Kieselgel-Dünnschichtchromatogramm überwacht werden.

Die Verbindung (14), die durch Abdestillation des Ammoniaks und des Methanols aus dem Reaktionsgemisch erhalten wird, wird in Methanol erhitzt, das Wasser enthalten kann, um die 2·-Acetylgruppe zu entfernen. Das Erhitzen erfolgt durch Rückflüssen in Methanol. Das durch Abdestillation des Methanols erhaltene Produkt kann gereinigt werden, wodurch die Verbindung (1c) hergestellt wird.

Die Verbindung (1c) kann weiterhin wie folgt hergestellt werden:

Die Verbindung (21) der Formel:

CH

[21]

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worin R« für eine Silylgruppe steht, R, und Rg die oben angegebenen Bedeutungen haben, wird mit einem aliphatischen C₂_g-Carbonsäurehalogenid unter Erhitzen in einem inerten organischen Lösungsmittel acyliert, wodurch ein Gemisch aus der Verbindung (22) der Formel:

OR.

[22]

worin Rg für eine Rg-Gruppe oder eine R^-Gruppe steht, wobei R,, R., R₅, und Rr^ die oben angegebenen Bedeutungen haben, und aus der Verbindung (22') der Formel:

17 IB

CH.

309847/0730

worin R,, R^, R« und R_Q die oben angegebenen Bedeutungen haben, erhalten wird.

Das Gemisch wird wie folgt behandelt:

(A) Die Silylgruppe und die Acylgruppen in 18- und 2'-Stellung werden durch Erhitzen in einem wäßrigen niedrigen Alkanol, der eine Base enthalten kann, entfernt;

(B) die Silylgruppe und die Acylgruppe in 18-Stellung werden durch Behandlung bei Nicht-Erhitzungsbedingungen in einem wäßrigen niedrigen Alkanol in Gegenwart einer Base entfernt und die 2 ·-Acylgruppe wird durch Erhitzen in Methanol, das Wasser enthalten kann, entfernt;

(C) die Acylgruppe in 18-Stellung wird durch Behandlung mit Methanol, das Ammoniak enthält, entfernt, wonach die Silylgruppe und die 2·-Acylgruppe durch Erhitzen mit einem wäßrigen niedrigen Alkohol entfernt wird; oder

(D) die Acylgruppe in 18-Stellung wird durch Behandlung mit Methanol, das Ammoniak enthält, entfernt, wonach die 2^f-Acylgruppe durch Erhitzen mit Methanol entfernt wird und die Silylgruppe durch Behandlung mit einer wäßrigen Säure entfernt wird.

Die Verbindung (21) kann nach dem gleichen Verfahren wie bei der Herstellung der Verbindung (3)_f wobei R^ für eine Silylgruppe steht, beim vorstehend beschriebenen Verfahren (A) hergestellt werden. Die Menge des Silylierungsmittels ist vorzugsweise ein 2- bis 5-molarer Überschuß gegenüber dem Antibiotikum (2) oder seinem 2^f-Acylderivat.

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Die Verbindungen (22) und (22¹)» die durch 3"-Acylierung der Verbindung (21) hergestellt werden, können nach dem gleichen Verfahren zur Herstellung des Gemisches der Verbindung (4) und (4¹) erhalten werden, indem in 3"-Stellung der Verbindung (3), wie oben beim Verfahren (A) beschrieben, acyliert wird.

Die weitere Entfernung der Silylgruppe und der 18- und 2'-Acylgruppe des Gemisches der Verbindungen (22) und (22·) kann nach dem gleichen Verfahren wie beim oben beschriebenen Verfahren (A) erfolgen, wobei die Silylgruppe und die 18- und 2^f-Acylgruppe des Gemisches der Verbindungen (4) und (4·), wobei Rc eine Silylgruppe bedeutet, entfernt wird.

Verfahren (D): Eine Verbindung (1"), bei der R^ für eine C_2--Z-Alkanoylgruppe steht und R₂ für ein Wasserstoff a torn steht, d.h. eine Verbindung (1d) der Formel:

CH₅ lld]

worin R₁₁ für eine Cg^-Alkanoylgruppe steht und R, und R^ die oben angegebenen Bedeutungen haben, kann wie folgt hergestellt werden:

Ein 2'-Acylantibiotikum (15) der Formel:

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CH

N(CiI₃)

[15]

worin Rg.. eine Cp^-Alkanoylgruppe bedeutet und R₁ und R^ die oben angegebenen Bedeutungen haben, wird mit einem p-Nitrobenzoylhalogenid in Gegenwart eines tertiären organischen Amins in einem inerten organischen Lösungsmittel umgesetzt, wodurch eine Verbindung (16) der Formel:

CH

[16]

worin

^fur eine p-Nitrobenzoylgruppe steht und

und

die oben angegebenen Bedeutungen haben, erhalten wird. Die Verbindung (16) wird durch Erhitzen mit einem C_2-g-aliphatischen Carbonsäureanhydrid in Gegenwart eines Alkalicarbonate oder einer tertiären organischen Base acyliert, wodurch

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ein Gemisch aus der Verbindung (17) der Formel:

CH

CHOR₃ OR₈ N(OH₃)

«52°

OR,

O-OR,

worin R-j-jf R-z» R^» R₅₂ ^und % ^{die oben} angegebenen Bedeutungen haben, und der Verbindung (18) der Formel:

CH,

CHO OR« M(CH₃)S

»52°

[18]

worin R-j-jf R^f R/.» Rep ¹^ ^e ^{die ol)en} aiigegebenen Bedeutungen haben, erhalten wird. Das Gemisch wird mit Ammoniak in Äthanol behandelt, um die Schutzgruppe in 9-Stellung und die Acylgruppe in 18-Stellung zu entfernen. Sodann wird in Methanol, das Wasser enthalten kann, zur Entfernung der 2'-Acylgruppe erhitzt.

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Das obengenannte 2'-Acylantibiotikum (15) kann nach bekannten Methoden hergestellt werden, beispielsweise nach dem Verfahren gemäß der JA-PS 53-7434 und "J. Med. Chem.", 20, (5), 732 bis 736 (1977).

Der Schutz der Hydroxylgruppe in 9-Stellung des 2'-Acylantibiotikums (15) kann erfolgen, indem man mit einem p-Nitrobenzoylhalogenid, vorzugsweise p-Nitrobenzoylchlorid, in Gegenwart eines tertiären organischen Amins und in einem inerten organischen Lösungsmittel umsetzt. Beispiele für inerte organische Lösungsmittel sind Aceton, Methyläthylketon, Dichlormethan, Äthylacetat, Dimethoxyathan, Tetrahydrofuran und Dioxan. Beispiele für tertiäre organische Amine sind Pyridin, Picolin oder Collidin, wobei aber auch andere bekannte tertiäre organische Amine verwendet werden können. Die genannte Reaktion schreitet unter Eiskühlung oder bei Raumtemperatur voran.

Wenn eine chlorierte Acetylgruppe, z.B. eine Monochloracetyl- oder Dichloracetylgruppe, anstelle der p-Nitrobenzoylgruppe als Schutzgruppe für die 9-Stellung verwendet wird, dann wird die Acylgruppe in 3-Stellung gleichzeitig mit der Entfernung der Schutzgruppe bei dem folgenden Verfahren entfernt, so daß eine p-Nitrobenzoylgruppe als Schutzgruppe für die 9-Stellung vorzuziehen ist. %

Die auf diese Weise gebildete Verbindung (16) kann beispielsweise im Falle, daß das Reaktionsmedium ein mit Wasser mischbares organisches Lösungsmittel ist, isoliert werden, indem man den pH-Wert des Mediums auf 8 bis 10 einstellt und den gebildeten Niederschlag abfiltriert. Wenn das Reaktionsmedium ein mit Wasser nicht-mischbares organisches Lösungsmittel ist, dann kann die Verbindung in der Weise erhalten wer-

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den, daß man nach dem Eingießen des Reaktionsgemisches in Wasser und Einstellung des pH-Werts auf 8 bis 10mit einem mit Wasser nicht-mischbaren organischen Lösungsmittel extrahiert. Eine weitere Reinigung kann erforderlichenfalls durch Chromatographie unter Verwendung von Kieselgel, Aluminiumoxid oder Adsorptionsharzen erfolgen.

Bei der Einführung von verschiedenen Acylgruppen in 3- und 3"-Stellungen der Verbindung (15), bei der R₁ für ein Wasserstoff atom steht, nämlich im Falle, daß die Verbindungen (17) und (18) erhalten werden, wobei R^ und R, unterschiedliche Acylgruppen sind, wird die gewünschte Acylgruppe, z.B. eine Acetyl- oder Propionylgruppe, zuvor in die Hydroxylgruppe in 3-Stellung der Verbindung (16) eingeführt.

Die Acylierung der Verbindung (16) mit dem entsprechenden aliphatischen Carbonsäureanhydrid erfolgt weiterhin, indem in Anwesenheit einer Base erhitzt wird. Beispiele für geeignete Basen sind Alkalicarbonate, wie z.B. Kaliumcarbonat oder Natriumcarbonat, und tertiäre organische Amine, wie Pyridin, Picolin oder Collidin. Auch andere bekannte tertiäre organische Amine als Pyridin können verwendet werden. Die Reaktionstemperatur kann gewöhnlich 50 bis 120°C, vorzugsweise 80 bis 100⁰C, betragen. Die Reaktionszeit kann je nach der Reaktionstemperatur variiert werden, da der Fortschritt der Reaktion durch Kieselgel-Dünnschichtchromatographie überwacht werden kann, wobei das Verschwinden eines Fleckens der Verbindung (16) auf dem Chromatogramm die Beendigung der Reaktion anzeigt. Gewöhnlich beträgt die Reaktionszeit 1 bis 100 h.

Als Ergebnis der obigen Reaktion wird die ursprüngliche 4"-Acylgruppe in 3"-Stellung umgelagert und eine C₂_g-Alkanoylgruppe, nämlich eine Acetyl- oder Propionylgruppe, wird in

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4"-Stellung eingeführt. Weiterhin wird im Falle des 2'-Acylantibiotikums (15)» bei dem R^ ein Wasserstoffatom ist, die Hydroxylgruppe in 3-Stellung acyliert. Weiterhin wird die Aldehydgruppe in "IS-Stellung zu einem erheblichen Teil acyliert. Auf diese Weise werden die Verbindungen (17) und (18) hergestellt.

Das so erhaltene Gemisch aus Verbindungen (17) und (18) kann erforderlichenfalls gesondert gereinigt werden. Jedoch kann auch das Gemisch selbst für die folgende Reaktion eingesetzt werden.

Als nächstes kann die Entfernung der Schutzgruppe in 9-Stellung der Verbindungen (17) und (18) erfolgen, indem mit Ammoniak in Methanol oder Äthanol bei Raumtemperatur behandelt wird. Durch diese Reaktion wird die Acylgruppe in 18-Stellung der Verbindung (17) entfernt. Die Beendigung der Reaktion kann durch Kieselgel-Dünnschichtchromatographie überwacht werden, wobei sie sich durch ein Verschwinden des Fleckens, der den Verbindungen (17) und (18) entspricht, auf dem Dünnschichtchromatogramm anzeigt.

Die Verbindung, bei der die Schutzgruppe in 9-Stellung entfernt worden ist, wird erhalten, indem Ammoniak und Alkohol aus dem Reaktionsgemisch abdestilliert werden. Die Entfernung der 2'-Acylgruppe der Verbindung erfolgt, indem mit Methanol, der Wasser enthalten kann, am Rückfluß erhitzt wird.

Das Produkt (1d) kann durch Abdestillieren des Methanols und Reinigung erhalten werden.

Verfahren (E): Eine Verbindung (1")» bei der R₁ für ein Wasserstoffatom steht und R₂ für eine C-_^-Alkanoylgruppe steht, d.h. eine Verbindung (1e) der Formel:

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CH,

[le]

worin R₂₁ für eine C₂ ^-Alkanoylgruppe steht und R₅ und R^ die oben angegebenen Bedeutungen haben, kann hergestellt werden, indem man eine Verbindung (5) mit einem aliphatischen Cp λ -Carbonsäureanhydrid in Gegenwart einer anorganischen Base umsetzt. Auf diese Weise wird die Verbindung (6) erhalten. Die Verbindung (6) wird mit einem aliphatischen C₂_g-Carbonsäureanhydrid unter Erhitzen in Gegenwart eines Alkalicarbonate oder eines tertiären organischen Amins acyliert, wodurch die Verbindung (19) der Formel:

17 18

CH

CHOR₈₁ OB₇

R₂₁O

N(CH₃)

[19]

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worin R₂₁, R*, R^ und R₁₇ die oben angegebenen Bedeutungen haben, erhalten wird. Die Schutzgruppe in 18-Stellung der Verbindung (19) wird entfernt, indem mit Ammoniak in Methanol oder wäßrigem Alkalicarbonat in Äthanol behandelt wird. Sodann wird die 2'-Acylgruppe durch Erhitzen mit Methanol entfernt.

Die Herstellung der Verbindungen (5) und (6) wird beim Verfahren (B) erläutert.

Die Acylierung der Verbindung (6) durch das entsprechende Carbonsäureanhydrid zur Herstellung der Verbindung (19) kann nach dem gleichen Verfahren wie zur Herstellung der Verbindungen (17) und (18) aus der Verbindung (16) gemäß oben beschriebenem Verfahren (D) erfolgen.

Die Entfernung der Schutzgruppe in 3- und 18-Stellung der Verbindung (19) kann erfolgen, indem man die Verbindung (19) mit Methanol, das Ammoniak enthält, oder Äthanol, das wäßriges Alkalicarbonat enthält, bei Raumtemperatur oder erforderlichenfalls unter Erhitzen behandelt. Durch diese Reaktion wird die Acylgruppe in 18-Stellung entfernt, wodurch die ursprüngliche Aldehydgruppe gebildet wird. Die Reaktion kann verfolgt werden, indem man das Verschwinden eines Fleckens, der der Verbindung (19) entspricht, auf dem Kieselgel-Dünn-Schichtchromatogramm überwacht.

Das 9,2^I,3^II-Triacylderivat davon, das durch Abdestillation des Ammoniaks und des Methanols oder des Äthanols aus dem Reaktionsgemisch erhalten werden kann, wird nach der gleichen Verfahrensweise wie beim Verfahren (D) behandelt, wobei die Entacylierung in 2»-Stellung in der Weise erfolgt, daß man mit Methanol (der Wasser enthalten kann) zur Entfernung

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der 2»_Acylgruppe erhitzt. Nach der Abdestillation des Methanols und der Reinigung wird die Verbindung (1e) erhalten.

Verfahren (F): Eine Verbindung (1«)_f bei der R₁ und R₂ für Wasserstoffatome stehen, d.h. die Verbindung (1f) der Formelι

CH.

CHO

OR,

[If]

worin R, und R. die oben angegebenen Bedeutungen haben, wird hergestellt, indem man die Verbindung (8) mit einem Cp_. aliphatischen Carbonsäureanhydrid in Gegenwart einer anorganischen Base umsetzt, um die Verbindung (9) herzustellen. Die Verbindung (9) wird acyliert, indem sie mit einem aliphatischen Coc-Carbonsäureanhydrid in Gegenwart eines Alkalicarbonats oder eines tertiären organischen Amins erhitzt wird, wodurch die Verbindung (20) der Formel:

CH

worin R^<j für eine chlorierte Acetylgruppe steht, R₇ für eine Rg₁- oder eine R₂₁ -Gruppe steht und R₂-j» ^Rgi» ^R3 u*¹*³- % ^die oben angegebenen Bedeutungen haben, erhalten wird. Die Schutzgruppen in 9-Stellung und 3- und 18-Stellungen werden entfernt, indem man mit Ammoniak in Methanol behandelt. Sodann wird die 2'-Acylgruppe durch Erhitzen mit Methanol entfernt.

Das Herstellungsverfahren der Verbindungen (8) und (9) wird beim oben beschriebenen Verfahren (C) erläutert.

Die Acylierung der Verbindung (9) durch ein Carbonsäureanhydrid zur Herstellung der Verbindung (20) kann nach der gleichen Verfahrensweise erfolgen, wie sie bei der Herstellung der Verbindungen (17) und (18) aus der Verbindung (16) beim Verfahren (D) angewendet wird.

Die Entfernung der Schutzgruppen in 9-Stellung und in 3- und 18-Stellung kann durchgeführt werden, indem man die Verbindung (20) mit Ammoniak in Methanol bei Raumtemperatur behandelt. Durch diese Reaktion wird die Acylgruppe in 18-Stellung entfernt und in die ursprüngliche Aldehydgruppe umgewandelt. Die Reaktion wird überwacht, indem auf das Verschwinden eines Fleckens, der der Verbindung (20) entspricht, auf dem Kieselgel-Dünnschichtchromatogramm geachtet wird.

Das 2^f,3"-Diacylderivat, das durch Abdestillieren des Ammoniaks und des Methanols aus dem Reaktionsgemisch erhalten wird, wird in Methanol (das Wasser enthalten kann) gemäß der gleichen Verfahrensweise wie bei der 2 ·-Entacylierung beim Verfahren (D) erhitzt, um die Acylgruppe in 2'-Stellung zu entfernen. Das durch Abdestillieren des Methanols erhaltene Produkt wird abgetrennt und gereinigt, wodurch das Produkt (1f) erhalten wird.

Ι09847/Θ73®

Die Isolierung der Verbindung (1) aus dem Reaktionsgemisch erfolgt gemäß bekannten Trenn- und Reinigungsmethoden für Makrolidantibiotika, beispielsweise durch Konzentrierung, Extraktion, Waschen, Übertragungsextraktion und Umkristallisation und Chromatographie unter Verwendung von Kieselgel, aktivem Aluminiumoxid, Adsorptionsharze oder Ionenaustauscherharze.

Die antimikrobiellen Spektren der Verbindung (1) gemäß der Erfindung werden in der Tabelle angegeben. Diese ^werte zeigen, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen (1) eine erhöhte antimikrobiell Aktivität nicht nur gegenüber empfindlichen Stämmen, sondern auch gegenüber resistenten Stämmen im Vergleich zu bekannten Antibiotika haben.

909847/O73G

Tabelle

	Testorganismus	Minimale Hemmkonzentration	3"-Propio- nyl LM-A5	Substanz 3"-Butylyl LM-A5	(MHK) ug/ml	9,3"-Diace tyl LM-A5	3"-Acetyl LM-A5	I
	Staph.aureus 6538P	3"-Acetyl LM**-A5	0,8	0,8	3,3"-Diace tyl LM-A5	0,8	1,6	-!> V>J
	Staph.aureus MS353	1,6	1,6	1,6	1,6	1,6	1,6	I
	Stapbuaureus MS353 036	1,6	0,8	0,4	1,6	0,8	1,6
	Strept.faeealis 150'	0,4	0,8	0,8	0,8	1,6	1,6
es	^Staph.aureus MS 353AO	I 0,8	>100	>100	1,6	>100	100
O CD	^Staph.aureus 0116	>100	12,5	50	>100	12,5	12,5
	*Staphoaureus 0119	6,3	>100	100	50	100	>100
	100	0,4	0,8	>100	0,4	0,8
	■»Strept.pyogenes 1022 0,4	1,6

* Gegenüber Erythromycin, Oleandomycin, und 16-gliedrige makrolide resistente Stämme
aus klinischen Isolaten (makrolid-resistente Stämme der Α-Gruppe), Größe des Inokulum 10 /ml, Brüheverdünnungsmethode

*«· LM ξ Leucomyoin

Fortsetzung Tabelle

Substanz »-Acetyl-3"- LM-A= butylyl LM-A₅ * °

CD CD OO

1,6
1,6

0,8 0,8

>1OO
6,3

1,6 1,6

1,6 1,6

>100 >1OO >100

LM-A,

3,1 3,1

1,6

3,1

>100 >100 >100 >100

OO CO cn

Die Erfindung wird in den Beispielen erläutert. Wenn nichts anderes angegeben ist, dann wurden die Rf-Vierte in den Beispielen durch Dünnschichtchromatographie wie folgt bestimmt:

Träger: Kieselgel 60 (Art. 5721, Merck Co.) Entwickler:

A: n-Hexan/Benzol/Aceton/Äthylacetat/Methanol (90 : 80 : 25 : 60 : 30)

B: Benzol/Aceton (3 i 1)

C: Benzol/Aceton (5:1)

Beispiel 1

3,3"-Diacetylleucomycin Acs

Zu 9-Dichloracetylleucomycin A_c (Rf_A = 0,55, Rf_B = 0,11) (10 g), gelöst in trockenem Aceton (250 ml) wurden trockenes Pyridin (11,5 ml) und Acetylchlorid (9,5 ml) zugesetzt. Es wurde 18 h bei 50⁰C umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde in Eiswasser (250 ml) eingegossen, durch Zugabe von wäßrigem Ammoniak auf einen pH-Wert von 9,5 eingestellt und zweimal mit Chloroform (250 ml) extrahiert. Die Chloroformschicht wurde durch wasserfreies Natriumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch ein braunes Pulver (9,82 g) von 3,2^f,3"-Triacetyl-9-dichloracetylleucomycin A^ (Rf_B = 0,62, Rf_c = 0,35) als Hauptkomponente erhalten wurde.

Dieses Pulver wurde in mit Ammoniak gesättigter Methanollösung (300 ml) aufgelöst, 1h lang bei Raumtemperatur stehen gelassen und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Auf diese Weise wurde pulverförmiges 3,2^I,3ⁿ-Triacetylleucomycin A_c (Rf_A = 0,67, Rf_B = 0,27, Rf_c = 0,09) als Hauptkomponente erhalten.

§09847/0730

Das Pulver wurde in Methanol (300 ml) aufgelöst, 20 h lang am Rückfluß erhitzt und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule unter Eluierung mit Benzol/Aceton (7:1) chromatographiert. Fraktionen mit einem Rf^-Wert von 0,58 wurden gesammelt und im Vakuum konzentriert, wodurch das Produkt (875 mg) erhalten wurde.

Rf_A = 0»58, Rf_B = 0,15

Masse (m/e): 855 (M⁺), 796 (M⁺-59), 768 (M⁺-87). IiMR (CDCl₃, 100 MHz): 1,43 (3"-Stellung:CH₃) 2,02 (3¹¹-

Stellung:OAc), 2,29 (3-Stellung: OAc),

9,79 (CHO) ppm.

Das oben erwähnte 9-Dichloracetylleucomycin Ac wurde nach dem Verfahren gemäß der JA-OS 50-96 584 hergestellt.

Beispiel 2

3"-Acetylleucomycin A₃:

Zu 2^I-Acetylleucomycin A₃ (2 g), gelöst in trockenem Dichlormethan (10 ml) wurden trockenes Pyridin (0,7 ml) und Dichloracetylchlorid (0,7 ml) unter Rühren und unter Eiskühlen zugesetzt. Danach wurde 1 h bei Raumtemperatur stehen gelassen. Zu dem Reaktionsgemisch wurde Wasser (10 ml) gegeben und der pH-Wert wurde durch Zugabe von 1 N-HCl auf 2 eingestellt. Nach dem Abtrennen der wäßrigen Schicht wurde die Dichlormethanschient mit Wasser und gesättigter Natriumbicarbonatlösung in dieser Reihenfolge gewaschen. Nach dem Trocknen mit wasserfreiem Natriumsulfat wurde die Lösung im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch 2^l-Acetyl-9-dichloracetylleucomycin A₃ erhalten wurde.

§09847/0736

Dieses Produkt wurde in trockenem Aceton (10 ml) aufgelöst und mit trockenem Pyridin (2 ml) versetzt. Nach der Zugabe von Acetylchlorid (1,4 ml) unter Kühlen und unter Rühren wurde 20 h lang bei 50⁰C weitergerührt. Das Reaktionsgemisch wurde zu Eiswasser (100 ml) gegeben und der pH-Wert wurde durch Zugabe von konzentriertem wäßrigen Ammoniak auf 9,5 eingestellt. Auf diese Weise wurde ein Niederschlag erhalten, der abfiltriert und mit Wasser gewaschen wurde. Er wurde dann vollständig getrocknet. Das getrocknete Material wurde auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (18 : 1) entwickelt wurde. Die Fraktionen, die die Hauptkomponente enthielten, wurden im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch 2¹,3"-Diacetyl-9-dichloracetylleucomycin A-, (Rf_B = 0,62, Rf_c= 0,36)(460 mg) erhalten wurde.

Nach Auflösung des Produkts in mit Ammoniak gesättigter Methanollösung (10 ml) und 2-stündigem Stehenlassen wurde das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde in Methanol (20 ml) aufgelöst und 17 h am Rückfluß erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum zur Trockene eingedampft und der Rückstand wurde durch Kieselgel-Säulenchromatographie behandelt, wobei mit Benzol/Aceton (6:1) eluiert wurde. Die eluierten Fraktionen mit Rf. =0,62 wurden gesammelt und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch das Produkt erhalten wurde. Ausbeute: 310 mg.

• Rf_A = 0,62, Rf_B = 0,17
Masse (m/e): 869 (M⁺), 810 (M⁺-59), 768 (M⁺-101).

Das obengenannte 2 *-Acetylleucomycin A^ wurde nach dem Verfahren gemäß der JA-PS 53-7434 hergestellt.

Beispiel 3

9,3«-Diacetylleucomycin A^:

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Zu Leucomycin A₅ (Rf_A = 0,38, Rf_B = 0,04, Rf_c = 0,01) (20 g), gelöst in Essigsäureanhydrid (40 ml), wurde Natriumhydrogensulfat (17,A g) gegeben. Es wurde 1 h bei Raumtemperatur und 5 h bei 60⁰C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde zu Eiswasser (400 ml) gegeben und der pH-Wert wurde durch Zugabe von wäßrigem Ammoniak auf 9,5 eingestellt. Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet, wodurch ein pulverförmiges Produkt (22,4 g) erhalten wurde. Das Produkt wurde durch Kieselgel-Säulenchromatographie behandelt, wodurch mit Benzol/Aceton (9:1) eluiert wurde. Die eluierten Fraktionen mit Rf. = 0,76 wurden gesammelt und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch 9,18,2^I-Triacetyl-3,18,0-cycloleucomycin Ac (15,8 g) erhalten wurde.

Rf_A = 0,76, Rf_B = 0,50, Rf_c = 0,22

Masse (m/e): 897 (M⁺), 810 (M⁺-87), 750 (M⁺-87, -60) NMR (CDCl₅, 100 MHz): 2,06 (2'-0Ac), 2,10 (18-0Ac),

2,20 (9-0Ac) ppm.

Pp: 106 bis 111°C (kein klarer Schmelzpunkt) UV: 4

Das obige Produkt (5 g), gelöst in trockenem Äthylacetat (50 ml)s wurde mit trockenem Pyridin (5 ml) und tropfenweise mit Acetylchlorid (4,0 ml) unter Rühren und unter Eiskühlen versetzt» Mach 10 min wurde 45 -h lang Tbei 6O⁰C weiter umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde zu Eiswasser (500 ml) gegeben, durch' Zugabe von wäßrigem Ammoniak auf einen pH-Wert von 9»5 eingestellt und zweimal mit Chloroform (300 ml) extrahiert. Die Chloroforms chi ent wurde mit Wasser gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und im Yakuum zur Trockene eingedampft, wodurch ein Pulver, enthaltend 9,18,2',3"-Tetraacetyl-SjiS-O-cycloleiacoiiycin Ac (Rf_B = 0,71, Kf₀ = 0,46) (5»06 g)₉ erhalten wurde.

B0984?/i73G

Zu diesem Pulver, gelöst in Äthanol (150 ml), wurde 5%ige wäßrige Natriumcarbonatiösung (11,5 ml) gegeben und es wurde 48 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Das Äthanol wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand wurde in Chloroform aufgelöst. Nach dem Waschen der Lösung mit Wasser wurde das Chloroform abdestilliert. Der Rückstand wurde in Methanol (50 ml) aufgelöst, 18 h lang am Rückfluß erhitzt und das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der so erhaltene Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (10 : 1) eluiert wurde. Die eluierten Fraktionen mit Rf^ =0,67 wurden im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch das Produkt erhalten wurde.

Ausbeute: 1,26 g Rf_A = 0,67, Rf_B = 0,28

Masse (m/e): 855 (M⁺), 796 (M⁺-59), 768 (M⁺-87). NMR (CDCl₃, 100 MHz): 1,43 (3"-CH₃), 2,03 (3"-0Ac), 2,03 (9-0Ac), 9,91 (CHO) ppm.

Beispiel 4
3"-Acetylleucomycin A₃:

Im Beispiel 3 wurde Leucomyein A₅ durch 9-Dichloracetylleuco mycin Ac ersetzt, wodurch 18,2'-Diacetyl-9-dichloracetyl-3,18-0-cycloleucomycin Ac (14,7 g) erhalten wurde.

Rf_A = 0,79, Rf_B = 0,51, Rf₀= 0,22

NMR (CDCl₃, 100 MHz): 2,06 (2'-0Ac), 2,11 (18-0Ac), 6,38 (9-COCHCl₂) ppm.

Zu der obigen Verbindung (1 g), gelöst in trockenem Äthylace tat (10 ml), wurde ^-Collidin (1,5 ml) und tropfenweise Ace

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tylChlorid (0,72 ml) unter Rühren und unter Eiskühlen gegeben. Danach wurde 20 h bei 60⁰C und 24 h bei 70⁰C weitergerührt. Das Reaktionsprodukt wurde in Chloroform (60 ml) aufgelöst und mit 0,1N-HCl, Wasser, gesättigter wäßriger Natriumbicarbonatlösung und Wasser in dieser Reihenfolge gewaschen. Die Lösung wurde durch Zugabe von wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck konzentriert. Der Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule (20 g) chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (15 : 1) eluiert wurde. Die eluierten Fraktionen mit Rf_B = 0,74 wurden zur Trockene eingedampft, wodurch 18,2·,3"-Triacetyl-3,18-0-cyclo-9-dichloracetylleucomycin Ac erhalten wurde (Rf_B = 0,74, Rf_c = 0,51) (604 mg).

Die genannte Verbindung wurde in mit Ammoniak gesättigtem Methanol (10 ml) aufgelöst, 20 h lang stehen gelassen und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in Methanol (20 ml) aufgelöst, 15 h lang am Rückfluß erhitzt und sodann im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der so erhaltene Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule (10 g) chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (3:1) eluiert wurde. Fraktionen mit Rf. =0,45 wurden im Vakuum konzentriert, wodurch das Produkt (450 mg) erhalten wurde.

Rf _A = 0,45, Rf_B = 0,10

Masse (m/e): 813 (M⁺), 754 (M⁺-59), 726 (M⁺-87). ' NMR (CDCl₃, 100 MHz): 1,43 (3"-CH₃), 2,02 (3"-0Ac), 9,88 (CHO) ppm.

Beispiel 5

3«4"-Diacetvl-3"-butvlleucomycin V:

Zu 2'-Acetylleucomycin A₅ (2 g), gelöst in trockenem Dichlormethan (20 ml), wurden trockenes Pyridin (0,46 ml) und

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p-Nitrobenzoylchlorid (960 mg) gegeben und es wurde 15 h lang bei Raumtemperatur umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde zu Wasser (10 ml) gegeben und der pH-Wert wurde durch Zugabe von 1 N-HCl auf 2 eingestellt. Die wäßrige Schicht wurde abgetrennt und die Dichlormethanschicht wurde mit Wasser und gesättigter wäßriger Natriumbicarbonatlösung in dieser Reihenfolge gewaschen. Nach Trocknen der Lösung mit wasserfreiem Natriumsulfat wurde diese im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch fast quantitativ 2'-Acetyl-9-p-nitrobenzoylleucomycin Ac erhalten wurde. Zu dieser Verbindung, gelöst in trokkenem Pyridin (20 ml), wurde Essigsäureanhydrid (2,5 ml) gegeben und die Reaktion wurde 3 Tage lang bei 100⁰C weitergeführt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck konzentriert und der Rückstand wurde in Chloroform (20 ml) aufgelöst. Wasser (10 ml) wurde zugesetzt und der pH-Wert wurde durch Zugabe von 1N-HCl auf 2 eingestellt. Die abgetrennte Chloroformschicht wurde mit Wasser und gesättigter wäßriger Natriumbicarbonatlösung in dieser Reihenfolge gewaschen und sodann mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde mit mit Ammoniak gesättigter Methanollösung (50 ml) versetzt, über Nacht stehen gelassen und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde in Methanol (50 ml) aufgelöst, über Nacht am Rückfluß erhitzt und im Vakuum zur- Trockene eingedampft» Der so gebildete Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule chromatogra»= pfaiert, wobei mit Benzol/Aceton (6:1) entwickelt wurde» Das KLuat 'mit Rf« =0,58 wurde im Vakuum konzentriert, wodurch das Produkt erhalten "wurde. AusTbetates 225 mg.

Rf_A = 0,58, Rf_B - 0,17

Masse (m/e): 855 (VL⁺), 796 (Ji*"-59)₉ 768 (M⁺-S?)

Das obengenannte Z'-Acetylloncoiaycin Ac wurde nach dem fahren gemäß der JA-PS 53-7434 hergestellt.

Beispiel 6

4"-Acetyl-3"-isovalerylleucomycin U;

Zu 2'-Acetylleucomycin A, (1 g)_f gelöst in trockenem Dichlormethan (20 ml), wurden trockenes Pyridin (0,43 ml) und p-NitrobenzoylChlorid (896 mg) gegeben und es wurde 3 Tage lang bei Raumtemperatur umgesetzt. Zu dem Reaktionsgemisch wurde Wasser (10 ml) zugefügt und der pH-Wert wurde durch Zugabe von 1N-HCl auf 2 eingestellt. Die wäßrige Schicht wurde abgetrennt und die Dichlormethanschicht wurde mit Wasser, gesättigter wäßriger Natriumbicarbonatlösung und Wasser in dieser Reihenfolge gewaschen. Nach dem Trocknen mit Natriumsulfat wurde die Lösung zur Trockene eingedampft, wodurch 2·-Acetyl-9-p-nitrobenzoylleucomycin A, erhalten wurde. Dieses Produkt wurde in trockenem Pyridin (20 ml) aufgelöst, mit Essigsäureanhydrid (2,5 ml) versetzt und 3 Tage lang bei 100⁰C umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum konzentriert, mit Chloroform (20 ml) und Wasser (20 ml) versetzt. Die wäßrige Schicht wurde auf einen pH-Wert von 2 eingestellt und sie wurde abgetrennt. Die Chloroformschicht wurde mit Wasser und gesättigter wäßriger Natriumbicarbonatlösung gewaschen und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in mit Ammoniak gesättigtem Methanol (50 ml) aufgelöst, 3 Tage lang bei Raumtemperatur stehen gelassen und sodann im Vakuum konzentriert. Der so erhaltene Rückstand wurde in Methanol (50 ml) aufgelöst, 20 h lang am Rückfluß erhitzt und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benuol/Aceton (7:1) entwickelt wurde. Die eluierten Fraktionen mit Rf. «= 0,60 wurden gesammelt und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch das Rrodukt erhalten wurde. Ausbeute: 190 mg.

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Rf_A = 0,60, Rf_B = 0,16

Masse (m/e): 896 (M⁺), 810 (M⁺-59), 768 (M⁺-101).

Beispiel 7 -

9,4"-Diacetyl-3 "-butylylleucomycin V;

Zu g^S^'-Triacetyl^jie-O-cycloleucomycin A₅ (5,0 g), erhalten im Beispiel 3, und in trockenem Pyridin (30 ml) gelöst, wurde Essigsäureanhydrid (15 ml) gegeben und es wurde 39 h lang bei 100° C umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde zu Wasser (500 ml), das wäßriges Ammoniak (pH 9,5) enthielt, gegeben und es wurde zweimal mit Chloroform (300 ml) extrahiert. Der Extrakt wurde mit Wasser (500 ml) gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trokkene eingedampft, wodurch ein Pulver, enthaltend 9,18,2',4"-Tetraacetyl-3"-butylyl-3,18-0-cycloleucomycin V als Hauptkomponente (5,05 g), erhalten wurde.

Rf_B> 0,73, Rf_c =0,50

Masse (m/e): 939 (M⁺), 880 (M⁺-59), 852 (M⁺-87).

Zu diesem Pulver, gelöst in Äthanol (150 ml), wurde 59&Lge wäßrige Natriumcarbonatlösung (11,5 ml) gegeben und es wurde 45 h lang bei Raumtemperatur und sodann 12h lang bei 70°C stehen gelassen. Das Äthanol wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand wurde in Chloroform (150 ml) aufgelöst. Die Lösung wurde zweimal mit Wasser (100 ml) gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch ein Pulver (4,73 g) erhalten wurde. Das Pulver wurde in Methanol (50 ml) aufgelöst, 17 h lang am Rückfluß erhitzt und sodann im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule chro-

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matographiert, wobei mit Benzol/Aceton (10 : 1) entwickelt wurde. Die eluierten Fraktionen mit Rf. =0,66 wurden gesammelt und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch das Produkt erhalten wurde. Ausbeute: 2,12 g.

Rf_A = 0,66, Rf_B = 0,28

Masse (m/e): 855 (M⁺), 796 (M⁺-59), 768 (H⁺-87) HMR (CDCl₃, 100 MHz): 1,44 (3''-CH₅), 2,02 (9-0Ac), 2,15 (4"-0Ac), 9,90 (CHO) ppm.

Beispiel 8

4.'!—;AceHbyl—3 "—bvrfcylyllLexaoomycin. V;

Im Beispiel 3 wurde Leucomycin A-* durch 9-Chloracetylleucomycin Ac ersetzt, wodurch 18,2'-Diacetyl-g-chloracetyl^,18-0-cycloleucomycin A_c .erhalten wurde.

Ausbeute: lh%

Rf_A = 0,78, Rf_B = 0,50, Rf_c =0,22

KMR (CDCl₃, 100 MHz): 2,07 (3H, 2'-0Ac), 2,12 (3H, 18-OAc), 4,31 (2H, 9-COCH₂Cl) ppm.

Die obige Substanz (5 g), gelöst in Essigsäureanhydrid (15 ml), wurde mit Kaliumcarbonat (3,5 g) versetzt. Es wurde 26 h lang bei 90⁰C und 6 h lang bei 100°C umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde in Wasser (200 ml) gegossen und der pH-Wert wurde durch Zugabe von wäßrigem Ammoniak auf 9,5 eingestellt. Es wurde zweimal mit Chloroform (200 ml) extrahiert. Der Extrakt wurde mit Wasser gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch ein pulverförmiges Produkt (5,07 g) erhalten wurde. Das Pulver wurde auf einer Kieselgelsäule Chromatograph!ert, wobei

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mit Benzol/Aceton (16 : 1) eluiert wurde. Die Eluate mit Rf =0,72 wurden gesammelt und im Vakuum konzentriert, wodurch 18,2«,4"-Triacetyl-3"-butylyl-9-chloracetyl-3,18-0-cycloleucomycin V (Rf_ß - 0,72 , Rf_c = 0,47) (2,47 g) erhalten wurde. Diese Substanz wurde in einer mit Ammoniak gesättigten Methanollösung (60 ml) aufgelöst und 17 h lang bei Raumtemperatur stehen gelassen. Sodann wurde im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in Methanol (60 ml) aufgelöst und 20 h lang am Rückfluß erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum zur Trockene eingedampft und auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (4:1) entwickelt wurde. Die eluierten Fraktionen mit Rf. = 0,45 wurden gesammelt und zur Trockene eingedampft, wodurch das Produkt erhalten wurde. Ausbeute: 1,72 g.

Rf_A m 0,45, Rf_B = 0,10

Masse (m/e): 813 (M⁺), 754 (M⁺-59), 726 (M⁺-87) NMR (CDCl₃, 100 MHz): 1,44 (3"-CH₃), 2,16 (4"-0Ac), 9,93 (CHO) ppm.

Beispiel 9 3"-Acetvl-SF-837:

Zu der Substanz SF-837 (4,0 g), gelöst in Aceton (40 ml), wurde Essigsäureanhydrid (2,5 ml) gegeben und es wurde 3 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Zu dem Reaktionsgemisch wurde Eiswasser (400 ml) gegeben und der pH-Wert wurde durch Zugabe von 796igem wäßrigen Ammoniak auf 8,5 eingestellt. Es wurde zweimal mit Benzol (200 ml) extrahiert. Die Benzolschicht wurde mit wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch die Substanz 2'-Acetyl-SF-837 erhalten wurde (Rf_A « 0,66, Rf _ß = 0,33) (4,15 g, Ausbeute: 98,696).

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Zu dieser Substanz, gelöst in Aceton (40 ml), wurde trockenes Pyridin (1,34 ml) gegeben und es wurde tropfenweise Dichloracetylchlorid (1,07 ml) unter Kühlen zugesetzt. Sodann wurde 1 h und 20 min unter Kühlen gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde zu Eiswasser (400 ml) gegeben und der pH-Wert wurde mit 7%igem wäßrigen Ammoniak auf 9,5 eingestellt. Der Niederschlag wurde abfiltriert, gewaschen und im Vakuum vollständig getrocknet, wodurch pulverförmige Substanz 2^f-Acetyl-9-dichloracetyl-SF-837 (Rf _A = 0,83, Rf_B = 0,71, Rf_c = 0,45) (4,13 g) erhalten wurde.

Zu der Substanz 2'-Acetyl-9-dichloracetyl-SF-837 (1 g), gelöst in trockenem Äthylacetat (10 ml), wurde JT-Collidin (1,5 ml) gegeben. Dann wurde tropfenweise Acetylchlorid (0,73 ml) unter Eiskühlen zugesetzt. Es wurde 2 h lang bei Raumtemperatur und 48 h lang bei 70°C weitergerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in Eiswasser (50 ml) gegossen und der pH-Wert wurde durch Zugabe von 7%igem wäßrigen Ammoniak auf 5,7 eingestellt. Es wurde zweimal mit Chloroform (50 ml) extrahiert.

Der Extrakt wurde mit wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde in Aceton (10 ml) aufgelöst, zu Eiswasser (100 ml) gegeben und der pH-Wert wurde durch Zugabe von wäßrigem Ammoniak auf 9_t5 eingestellt. Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet, wodurch das Produkt (850 mg) erhalten wurde.' Das Produkt wurde auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (20 : 1) entwickelt wurde. Das Eluat mit Rf_c =0,71 wurde im Vakuum konzentriert, wodurch die Substanz 2',3"-Diacetyl-9-dichloracetyl-SF-837 (Rf_B = 0,87, Rf_e = 0,71) (550 mg) erhalten wurde.

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Die Verbindung wurde in mit Ammoniak gesättigter Methanollosung (10 ml) aufgelöst, 2 h "bei Raumtemperatur stehen gelassen, im Vakuum zur Trockene eingedampft, in Methanol (20 ml) aufgelöst und über Nacht auf 70°C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum zur Trockene eingedampft und der Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (5 : 1) eluiert wurde. Das Eluat mit Rf. = 0,58 wurde im Vakuum konzentriert, wodurch das Produkt (420 mg) erhalten wurde*

_A = 0,58, Rf_B = 0,22
Masse (m/e): 855 (M⁺), 796 (M⁺-59), 782 (M⁺-73) NMR (CDCl₃, 100 MHz): 1,43 (3"-CH₃), 2,01 (3"-Ac), 2,57 [3·-Ν(0Η₃)₂], 3,58 (4-CH₃), 9,72 (CHO) ppm.

Beispiel 10
3-Acetyl-3"-propionylleucomycin Απί

Im Beispiel 2 wurde 2·-Acetylleucomycin A₃ durch 2'-Acetylleucomycin Ac ersetzt, wodurch 2'—Acetyl-9-dichloracetylleucomycin Ak hergestellt wurde.

Zu 2*-Acetyl-9-dichloracetylleucomycin Ac (2 g), gelöst in trockenem Aceton (10 ml), wurde trockenes Pyridin (1,6 ml) gegeben. Weiterhin wurde Acetylchlorid (1,3 ml) unter Eiskühlung zugesetzt und es wurde 2,5 h lang bei 45°C umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde zu Eiswasser (IQO ml) gegeben und der pH-Wert wurde mit wäßrigem Ammoniak auf 9,5 eingestellt« Es wurde zweimal mit Chloroform (50 ml) extrahiert. Die Chloroformschicht wurde durch wasserfreies Natriumsulfat entwässert und zur Trockene eingedampft, wodurch 3,2"-Diacetyl-9-dichloracetylleucomycin A^ (2,02 g) erhalten wurd.

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Rf_A = 0,84, Rf_B = 0,67, Rf_c = 0,36

Zu dem 3,2"-Diacetyl-9-dichloracetylleucomycin A₅ (1,5 g), gelöst in trockenem Dioxan (15 ml), wurde t -Collidin (2,26 ml) gegeben und es wurde unter Kühlen PropionylChlorid (1,39 ml) zugesetzt. Es wurde 44 h lang bei 100⁰C umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde zu Eiswasser (150 ml) gegeben und es wurde mit Benzol (150 ml) extrahiert. Die Benzolschicht wurde mit verdünntem wäßrigen Ammoniak gewaschen und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde in einer kleinen Benzolmenge aufgelöst und auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (25 : 1) eluiert wurde. Das Eluat mit Rf _n = 0,74 wurde zur Trockene eingedampft, wodurch 3,2"-Diacetyl-9-dichloracetyl-3^ll-propionylleucomycin A₁- (562 mg) erhalten wurde.

Rf_B = 0,83, Rf_c = 0,74

NMR (CDCl₃, 100 MHz): 1,43 (3"-CH₃), 2,03 (2'-Ac), 2,29 (3-Ac), 2,46 D'-N(CH₃)₂], 3,52 (4-OCH₃), 6,04 (9-COCHCl₂), 9,76 (CHO) ppm.

Das erhaltene Produkt wurde in einer mit Ammoniak gesättigten Methanollösung (10 ml) aufgelöst und 1 h lang stehen gelassen. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum konzentriert und der Rückstand wurde in Methanol (20 ml) aufgelöst, 16 h lang am Rückfluß erhitzt und sodann im Vakuum zur Trockene eingedampft; Der Rückstand wurde in einer kleinen Benzolmenge aufgelöst und auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (10 : 1) eluiert wurde. Die Fraktionen mit Rf. =0,57 wurden im Vakuum zur Trockene eingedampft,wodurch das Produkt (420 mg) erhalten wurde.

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ORlGfNAL INSPECTED

Rf_A = O,"57, Rf_B = 0,19

Masse (m/e): 869 (M⁺), 796 (M⁺-73), 782 (M⁺-87)

NMR (CDCl₃, 100 MHz): 1,44 (3"-CH₃), 2,30 (3-Ac), 2,60

[3'-N(CH₃)₂], 3,59 (4-0CH₃), 9,75 (CHO) ppm.

Beispiel 11

3-Acetyl-3"-propionylleucomycin Ac:

Im Beispiel 10 wurde 2'-Acetyl-9-dichloracetylleucomycin A₅ durch 2^l-Acetyl-9-chloracetylleucomycin A₅ ersetzt, wodurch das Produkt (400 mg) erhalten wurde.

Das genannte 2^l-Acetyl-9-chloracetylleucomycin Ac wurde durch Acetylierung von 9-Chloracetylleucomycin, erhalten nach dem Verfahren gemäß der JA-OS 50-96 584, in 2»-Stellung (2'-Acetylierung), gemäß der JA-PS 53-7434 hergestellt.

Beispiel 12

9-Acetyl-3"-propionylleucomycin Ar:

9,18,2^l-Triacetyl-3,18-0-cycloleucomycin A₅ (10 g), erhalten beim Verfahren des Beispiels 3, wurde in Äthylacetat (100 ml) aufgelöst, mit ^-Collidin (16 ml) versetzt, weiterhin unter Kühlen,mit PropionylChlorid (9,69 ml) versetzt und 4 Tage lang bei 70°C gerührt. Chloroform (200 ml) wurde zu dem Reaktionsgemisch zugesetzt und es wurde zweimal mit ^wasser (200 ml) und einmal mit verdünntem wäßrigen Ammoniak (200 ml) gewaschen. Die Chloroformschicht wurde mit wasserfreiem Natriumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in einer kleinen Benzolmenge aufgelöst und auf einer Kieselgelsäule chromatographi«rt, wobei mit Benzol/Aceton (17 : 1) eluiert wurde.

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Die Fraktionen mit Rf_ß =0,75 wurden im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch 9,i8,2^l-Triacetyl-3,18-0-cyclo-3"-propionylleucomycin A₅ (Rf_ß = 0,75, Rf_c =0,56) (4,02 g) erhalten wurde.

Die genannte Substanz wurde in mit Ammoniak gesättigter Methanollösung (40 ml) aufgelöst. Es wurde 17 h lang stehen gelassen und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in Methanol (50 ml) aufgelöst, 17 h lang am Rückfluß erhitzt und sodann im Vakuum zur Trockene eingedampft.

Der Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (7:1) eluiert wurde. Die Fraktionen mit Rf. =0,67 wurden gesammelt und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch das Produkt (3,1 g) erhalten wurde.

Rf_A = 0,67, Rf_B = 0,33, Rf_c = 0,13

Masse (m/e): 869 (M⁺), 796 (M⁺-73), 783 (M⁺-87) NMR (CDCl₃, 100 MHz): 1,42 (3"-CH₃), 2,00 (9-Ac),

2,54 [3'-N(CH₃),,], 3,53 (4-0CH₃), 9,84

(CHO) ppm.

Beispiel 13
3f-Propionylleucomyc±n A=:

le^'-Diacetyl-g-dichloracetyl-S.ie-O-cycloleucomycin A₅ (5 g), erhalten im Beispiel 4, wurden in trockenem Dioxan (50 ml) aufgelöst und mit trockenem X'-Collidin (7,5 ml) versetzt und tropfenweise unter Eiskühlen mit Eropionylchlorid (4,5 ml) versetzt. Das Gemisch wurde 20 h lang bei 90°C gerührt. Benzol (500 ml) wurde zugesetzt und es wurde zweimal mit Wasser (50 ml) und einmal mit verdünntem wäßrigen Ammoniak (500 ml)

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gewaschen. Die Benzolschicht wurde mit wasserfreiem Natriumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch ein Pulver (5,1 g) erhalten wurde. Das Pulver wurde auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (18 : 1) eluiert wurde. Die Fraktionen mit Rf_B = 0,78 wurden zur Trockene eingedampft, wodurch 18,2'-Diacetyl-9-dichloracetyl-3,i8-0-cyclo-3"-propionylleucomycin A₃ (2,8 g) erhalten wurde.

Durch Umkristallisation aus Benzol/η-Hexan wurden farblose Kristalle, Pp 177 bis 179⁰C, erhalten.

Die Kristalle wurden in einer mit Ammoniak gesättigten Methanollösung (50 ml) aufgelöst, 4 h lang bei Raumtemperatur stehen gelassen und im Vakuum zur Trockene eingedampft.

Der Rückstand wurde in Methanol (50 ml) aufgelöst, 16 h lang am Rückfluß erhitzt und sodann im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in einer kleinen Benzolmenge aufgelöst und auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (6:1) eluiert wurde. Die Fraktionen mit Rf. =0,47 wurden zur Trockene eingedampft, wodurch das Produkt (2,1 g) erhalten wurde.

Rf_A = 0,47, Rf_B = 0,14

Masse (m/e): 827 (M⁺), 754 (M⁺-73), 740 (M⁺ -87) "" HMR (CDCl₃, 100 HHzs 1,44 (3"-CH₃), 2,57 [3^I-N(CH₃)₂],

3,56 (4-OCH₃)j 9*86 (CHO) ppm.

Beisgiel_JL4 -

3^Ü8-Butyiylleticomycin A=S .

Zu 18₉2⁸-Diacetyl-3si6-0-cyclo-9-d.ichloracetylleucomycin A^

(5 g), erhalten im Beispiel 4 und in trockenem Dioxan (50 ml) gelöst, wurde trockenes ^f-Collidin (7,51 ml) gegeben. Es wur de Butylylchlorid (5,37 ml) unter Eiskühlen zugesetzt und das Gemisch wurde 16 h lang bei 90⁰C gerührt. Benzol (500 ml) wurde zu dem Reaktionsgemisch gegeben und dieses wurde zweimal mit Wasser und einmal mit verdünntem wäßrigen Ammoniak (500 ml) gewaschen. Die Benzolschicht wurde mit wasserfreiem Natriumsulfat entwässert und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (20 : 1) eluiert wurde. Die Fraktionen mit Rf_c =0,65 wurden im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch 18,2'-Diacetyl-3,18-0-cyclo-9-dichloracetyl-3"-butylleucomycin Ac (2,72 g) erhalten wurde.

Rf_B = 0,80, Rf_c = 0,65

NMR (CDCl₃, 100 MHz): 1,43 (3"-CH₃), 2,06 (2'-Ac), 2,11 (18-Ac), 2,48 [3'-N(CH,.),,J, 3,46 (4-OCH₃), 6,36 (9-COCHCl₂)

Fp: 196 bis 198⁰C (farblose Kristalle, umkristallisiert aus Benzol/n-Hexan)

Das obige Produkt wurde in mit Ammoniak gesättigter Methanollösung (20 ml) aufgelöst, und das Gemisch wurde 16 h lang stehen gelassen und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in Methanol (50 ml) aufgelöst, 16 h lang am Rückfluß erhitzt und sodann zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (6:1) eluiert wurde. Die Fraktionen mit Rf = 0,48 wurden zur Trockene eingedampft, wobei das Produkt (1,7 g) erhalten wurde.

Rf_A = 0,48, Rf_B = 0,15

Masse (m/e): 841 (M⁺), 754 (M⁺-87).

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ORIGINAL INSPECTED

NMR (CDCl₃, 100 MHz): 1,42 (3"-CH₃), 2,57 [3^f--H(CH₃)₂], 3,55 (4-OCH₃), 9,84 (CHO) ppm.

Beispiel 15

4"-Acetyl-3.3"-dipropionvlleucomycin V:

Die Substanz 2'-Acetyl-SF-837 (1 g), erhalten im Beispiel 9, wurde in trockenem Dichlormethan (10 ml) aufgelöst und mit trockenem Pyridin (0,23 ml) und p-Nitrobenzoylchlorid (480 ml) versetzt. Das Gemisch wurde 17 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Zu dem Reaktionsgemisch wurde die gleiche Menge von Wasser gegeben und es wurde gut gerührt. Die abgetrennte Dichlormethanschicht wurde mit Wasser (10 ml) und gesättigter wäßriger Natriumbicarbonatlösung (10 ml) gewaschen. Nach dem Entwässern mit wasserfreiem Natriumsulfat wurde die Lösung zur Trockene eingedampft, wodurch die Substanz 2^!-Acetyl-9-p-nitrobenzoyl-SF-837 (Rf_B = 0,72, Rf_c = 0,44) erhalten wurde. Diese Substanz wurde in trockenem Pyridin aufgelöst und mit Essigsäureanhydrid (1,2 ml) versetzt. Das Gemisch wurde 3 Tage lang bei 90°C umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum konzentriert und in Chloroform (10 ml) aufgelöst. Es wurde in dieser Reihenfolge mit verdünnter Salzsäure (10 ml), Wasser (10 ml) und gesättigter wäßriger Natriumbicarbonatlösung (10 ml) gewaschen. Der Rückstand wurde in einer kleinen Benzolmenge aufgelöst und auf einer Kieselgelsäule chromätographiert, wobei mit Benzol/Aceton (20 : 1) eluiert wurde. Das Haupteluat wurde im Vakuum konzentriert und in mit Ammoniak gesättigtem Methanol (15 ml) aufgelöst. Es wurde 2 h lang bei Raumtemperatur stehen gelassen, im Vakuum zur Trockene eingedampft, mit Methanol (20 ml) versetzt und 18 h lang am Rückfluß erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum zur Trockene eingedampft und auf einer Kieselgelsäule

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chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (7:1) eluiert wurde. Das Eluat mit Rf^ =0,56 wurde zur Trockene eingedampft, wodurch das Produkt (280 mg) erhalten wurde.

Rf_A = 0,56, Rf_B = 0,18

Masse (m/e): 855 (M⁺), 796 (M⁺-59), 782 (M⁺-73).

Beispiel 16

3"-Butylvl-4"-propionvlleucomvcin V:

18,2-Diacetyl-9-dichloracetyl-3,i8-0-cycloleucomycin A₅ (5 g), erhalten im Beispiel 4, wurde in trockenem Pyridin (30 ml) aufgelöst und mit Propionsäureanhydrid (15 ml) versetzt. Das Gemisch wurde 40 h lang bei 100°C umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde in Eiswasser (500 ml) gegossen und der pH-Wert wurde mit wäßrigem Ammoniak auf 9,5 eingestellt. Es wurde zweimal mit Chloroform (300 ml) extrahiert. Die Chloroformschicht wurde mit Wasser gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat entwässert und sodann im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch ein Pulver (5,13 g) erhalten wurde. Dieses Pulver wurde auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (18 : 1) eluiert wurde. Das Eluat mit Rfρ = 0,63 wurde zur Trockene eingedampft, wodurch 18,2'-Diacetyl-? "-butylyl-3,18-0-cyclo-9-dichloracetyl-4"-propionylleucomycin V (1,5 g) erhalten wurde.

Diese Substanz wurde in mit Ammoniak gesättigter Methanollösung (30 ml) aufgelöst und die Lösung wurde 16 h lang stehen gelassen und dann im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in Methanol (50 ml) aufgelöst, 20 h lang am Rückfluß erhitzt und sodann im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der gebildete Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule

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chromatographiert, wobei mit Benzol/Aeeton (6 j 1) eluiert wurde. Das Eluat mit Rf. =0,46 wurde im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch das Produkt (1,2 g) erhalten wurde.

Rf_A = 0,46, Rf_B = 0,11

Masse (m/e): 827 (M⁺), 754 (M⁺-73), 740 (M⁺-87). NMR (CDCl₅, 100 MHz); 1,43 (3"-CH₃), 2,57 [3'-N(CIL)₂J, 3,54 (4-OCH₃), 9,87 (CHO) ppm.

Beispiel 17

3 "-Isovalerylleucomycin At-:

Zu 2'-Acetylleucomycin Ak (5 g), gelöst in trockenem Dichlormethan (25 ml), wurde trockenes Pyridin (1,64 ml) und tropfenweise Dichloracetylchlorid (1,77 ml) unter Eiskühlen gegeben. Das Gemisch wurde 1 h lang gerührt. Kaltes Wasser wurde zu dem Reaktionsgemisch zugesetzt und es wurde mit Dichlormethan (25 ml) extrahiert. Nach dem Trocknen der Dichlormethanschicht mit wasserfreiem Magnesiumsulfat wurde im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch quantitativ 2'-Acetyl-3,9-dichloracetylleucomycin A_c erhalten wurde.

Zu dem obigen Produkt (5 g), gelöst in trockenem Dioxan (50 ml), wurde if-Collidin (7»87 ml) und tropfenweise Isovalarylchlorid (6,62 ml) unter Kühlen gegeben. Das Gemisch wurde sodann· 80 h lang bei 90⁰C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in kaltes Wasser (500 ml) gegossen und zweimal mit Benzol (400 ml) extrahiert. Die Benzolschicht wurde durch Zugabe von wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft» Der Rückstand wurde in Methanol (20 ml) aufgelöst, mit mit Ammoniak gesättigter Methanollösung (20 ml) versetzt und 30 min lang bei Raumtemperatur ge-

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rührt. Das Reaktionsgemisch wurde in kaltes Wasser (500 ml) gegossen, zweimal mit Benzol (400 ml) extrahiert, mit wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trokkene eingedampft. Der Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei eine stufenweise Elution mit Benzol/Aceton (15 : 1, 7 : 1 und 5:1) durchgeführt wurde. Die Hauptfraktionen wurden gesammelt und im Vakuum zur Trokkene eingedampft, wodurch rohes 2-Acetyl-3"-isovalerylleucomycin A₅ (1,25 g) erhalten wurde. Das Produkt wurde in Methanol (20 ml) aufgelöst, 20 h lang am Rückfluß erhitzt und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde erneut auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/ Aceton (9:1) eluiert wurde. Die Fraktionen mit Rf_A =0,48 wurden getrocknet, wodurch das Produkt (830 mg) erhalten wurde,

Rf_A = 0,48

Masse (m/e): 855 (M⁺), 768 (M⁺-87), 754 (M⁺-101).

MMR (CDCl₃, 100 MHz): 1,42 (3"-CH₃), 9,89 (CHO) ppm.

Beispiel 18 3"-Acetylleucomycin A-j:

Zu 2^f-Acetylleucomycin A₁ (5 g), gelöst in trockenem Dichlor methan (25 ml), wurden trockenes Pyridin (1,64 ml) und tropfenweise Dichloracetylchlorid (1,77 ml) unter Eiskühlen gegeben.' Das Gemisch wurde 1 h lang gerührt. Zu dem Reaktionsgemisch wurde kaltes Wasser (25 ml) gegeben und es wurde mit Dichlormethan (25 ml) extrahiert. Die Di chlorine thans chi cht wurde mit wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch die quantitative Menge von 2^f-Acetyl-3,9-dichloracetylleucomycin A₁ erhalten wurde.

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Zu dem obigen Produkt (5g), gelöst in trockenem Äthylacetat (50 ml), wurde JT-Collidin (9,4 ml) unter Eiskühlen gegeben. Sodann wurde Acetylchlorid (4,6 ml) zugegeben und das Gemisch wurde 72 h bei 70°C gerührt.

Das Reaktionsgemisch wurde in kaltes Wasser (250 ml) gegossen und es wurde zweimal mit Chloroform (150 ml) extrahiert. Die Chloroformschicht wurde mit verdünnter Salzsäure (pH 2), wasser und gesättigter wäßriger Natriumbicarbonatlösung in dieser Reihenfolge gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in Methanol (10 ml) aufgelöst, mit mit Ammoniak gesättigter Methanollösung (10 ml) versetzt und sodann 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in kaltes Wasser (250 ml) gegossen und zweimal mit Chloroform extrahiert. Die Chloroformschicht wurde mit wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (8:1) eluiert wurde. Das ELuat wurde konzentriert, wodurch rohes Pulver (1,4 g) von 2', 3 "-Diacetylleucomycin A^ erhalten wurde. Dieses rohe Pulver wurde in Methanol (20 ml) aufgelöst und die Lösung wurde 20 h lang am Rückfluß erhitzt und im Vakuum getrocknet. Der Rückstand wurde erneut auf einer Kieselgelsäule chromatographiert, wobei mit Benzol/Aceton (6:1) eluiert wurde. Das Eluat mit Rf. =0,46 wurde im Vakuum getrocknet, wodurch das Produkt (716 mg) erhalten wurde.

Rf_A = 0,46

Masse (m/e): 827 (M⁺), 768 (M⁺-59), 726 (M⁺-101). NMR (CDCl₃, 100 MHz):1,43 (3"-CH₃), 2,00 (3"-0Ac), 9,89 (CHO) ppm.

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Beispiel 19
3"-Acetylleucomycin A₅:

Zu 2^!-Acetylleucomycin A₅ (65 g), gelöst in trockenem Dichlormethan (300 ml), wurden trockenes Pyridin (44 ml) und Trimethylchlorsilan (39 ml) gegeben. Danach wurde das Gemisch 1 h bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in Wasser (2 1) gegossen und mit Chloroform (500 ml) extrahiert. Der Extrakt wurde mit 0,1N-HCl, Wasser und wäßrigen Ammoniak in dieser Reihenfolge gewaschen, mit v/asser fr eiern Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch rohes 2'-Acetyl-3,9-di-(trimethylsilyl)-leucomycin Ac (69 g) erhalten wurde.

Die genannte Substanz wurde In trockenem Äthylacetat (200 ml) aufgelöst und die Lösung ii/urde mit Tribenzylamin (227 g) versetzt. Weiterhin wurde Acetylchlorid (5I ml) unter Eiskühlung zugesetzt und hierauf wurde 40 h lang bei 70⁰C gerührt. Das Reaktionsgemiscli wurde in Wasser (2 1) gegossen und der pH-Wert vrarde mit wäßrigem Ammoniak auf 9,5 eingestellt. Sodann wurde mit Chloroform (1 l) extrahiert. Der Extrakt wurde mit Wasser genraschen, mit wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum konzentriert, wodurch 2«₉3"-Diacetyl-3»9-di-(trimethylsilyl)-leucomycin Ac erhalten ivurde. In diesem war eine geringe Menge von 18,2' , 3^II"-ΐ^lΓiacetyl~3,9~di-(trimethylsilyl)-17-dehydrQleucomycin A^ und eine große Menge von Tribenzylamin enthalten. Hierzu wurde unter Eiskühlung eine mit Ammoniak gesättigte Methanollösung (250 ml) gegeben und es ifurde 1,5 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde In Wasser (2 1) gegossen und es wurde mit Chloroform (1 l) extrahiert. Der Extrakt wurde mit Wasser gewaschen, mit wasserfreiem Magnesiumsulfat

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entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in kaltem Methanol (600 ml) aufgelöst und das unlösliche Tribenzylamin wurde abfiltriert. Das Filtrat wurde 20 h lang am Rückfluß erhitzt und sodann im Vakuum zur Trokkene eingedampft, wodurch rohes 3"-Acetyl-3»9-di-(trimethylsilyl)-leucomycin Ac (69 g) erhalten wurde.

Diese Substanz wurde in Essigsäure/Tetrahydrofuran/Wasser (3:1 : 1) (250 ml) aufgelöst und die Lösung wurde 1 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Zu dem Reaktionsgemisch wurde Chloroform (11) gegeben und es wurde mit 3%igem wäßrigen Ammoniak gewaschen. Die Chloroformschicht wurde mit wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch das rohe 3"-Acetylleucomycin Ac (64 g) erhalten wurde. Dieses Produkt wurde in einer kleinen Benzolmenge aufgelöst und auf eine Säule mit Kieselgel aufgebracht. Die Elution erfolgte allmählich mit Benzol/Aceton (10 : 1 8:1-6:1). Die einzelnen Fraktionen wurden durch Kieselgel-Dünnschichtchromatographie überprüft. Die Fraktionen mit Rf. = 0,45 wurden gesammelt und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch das gereinigte Produkt (45,5 g, Ausbeute 70,0%) erhalten wurde.

Rf_A = 0,45, Rf₃ =0,10

Masse (m/e): 813 (M⁺), 754 (M⁺-59), 726 (M⁺-87) Aktivität: 2850 JT/mg (im Vergleich zu dem Standard-Leucomycin).

Beispiel 20

3 "-Propionylleucomycin A,-:

Zu 2'-Acetylleucomycin Ac (65 g), gelöst in trockenem Di-

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chlorine than (300 ml), wurden trockenes Pyridin (44 ml) und Trimethylchlorsilan (39 ml) gegeben. Das Gemisch wurde 1 h bei Raumtemper_atur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in V/asser (2 1) gegossen und mit Chloroform (500 ml) extrahiert. Der Extrakt wurde mit 0,1N-HCl, Wasser und 3?oigem wäßrigen Ammoniak in dieser Reihenfolge gewaschen, mit wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch rohes 2 ·-Acetyl-3,9-di-( trimethylsilyl )ieucomycin A,- (70 g) erhalten wurde.

Zu der obengenannten rohen Substanz, gelöst in trockenem Dioxan (200 ml), wurde Tribenzylamin (230 g) gegeben. Weiterhin wurde Propionylchlorid (65 ml) unter Eiskühlen zugesetzt und das Gemisch wurde 24 h bei 90°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in Wasser (2 1) gegossen und der pH-Wert wurde mit wäßrigem Ammoniak auf 9,5 eingestellt. Es wurde mit Chloroform (1 1) extrahiert. Der Extrakt wurde mit wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und zur Trockene eingedampft, wodurch 2'-Acetyl-3,9-di-(trimethylsilyl)-3"-propionylleucomycin A^ erhalten wurde, das eine geringe Menge von 2'-Acetyl-3,9-di-(trimethylsilyl)-18,3•-dipropionyl-^-dehydroleucomycin A^ und eine große Menge von Tribenzylamin enthielt. Das Produkt wurde mit mit Ammoniak gesättigter Methanollösung (250 ml) versetzt und das Gemisch wurde 1,5 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in Wasser (2 1) gegossen und mit Chloroform (1 l) extrahiert. Der Extrakt wurde mit Wasser gewaschen, mit wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in kaltem Methanol aufgelöst und unlösliches Tribenzylamin wurde abfiltriert. Das FiItrat wurde 20 h lang am Rückfluß erhitzt und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch das rohe 3,9-Di-(trimethylsilyl)-3"-propionylleucomycin Ac erhalten wurde. Diese Substanz wurde in Essigsäure/Tetrahydro-

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furan/Wasser (3 ί 1 ϊ 1) (250 ml) aufgelöst und. das Gemisch wurde 1 h lang bei Raumtemperatur gerührt«, Das Reaktionsgemisch wurde mit Chloroform (1 1) versetzt und es wurde mit 3%igem wäßrigen Ammoniak gewaschen. Die Chloroformschicht wurde mit wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft„ wodurch das rohe 3"-Propionylleucomycin A^ (60 g) erhalten wurde. Dieses wurde in einer kleinen Benzolmenge aufgelöst und auf eine Kieselgelsäule aufgegeben. Die Elution erfolgte mit Gemischen von Benzol/Aceton (15 : 1 - 10 : 1 -8 : 1), Jede Fraktion wurde durch Kieselgel-Dünnschi chtchromatographie überprüft und die Fraktionen mit Rf. =0,57 wurden gesammelt und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch das gereinigte Produkt (52j,5 g, Ausbeute? 79,4%) erhalten wurde»

Rf_A = 0,57, Rf_B = 0,14

Masse (m/e)s 827 (M⁺)₉ 754 (H⁺-73), 740 (M⁺-87) Aktivität? 2850 f/mg (im Vergleich zu dem Standard-

Leucomycin)o

Beispiel 21

3"-Acetylleucomycin A» (3₉3"=Diacetylleucomycin A,- )s

Zu 2'-Acetylleucomycin A,- (30 g), gelöst in trockenem Dichlormethan (150 ml)^ wurden trockenes Pyridin (6 ml) unter Eiskühlen und Trimethylchlorsilan (5*69 ml) gegeben« Das Gemisch wurde 1 h bei Raumtemperatur gerührt» Das Reaktionsgemisch wurde mit 0,1N-HCl, Wasser und 3%igem wäßrigen Ammoniak in dieser Reihenfolge gewaschen,, mit wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft j wodurch rohes 2^s-Acetyl«-9-trimethylsilylleucomycin Ac (30,2 g) erhalten wurde«,

'©T3©

Das rohe Material wurde in trockenem Dioxan (50 ml) aufgelöst, mit Tribenzylamin (113 g) und AcetylChlorid (25 ml) versetzt und das Gemisch wurde 40 h bei 80⁰C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in Wasser (11) eingegossen und mit wäßrigem Ammoniak auf einen pH-Wert von 9,5 eingestellt. Es wurde mit Chloroform (500 ml) extrahiert. Der Extrakt wurde mit wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum konzentriert. Zu dem Rückstand wurde mit Ammoniak gesättigte Methanollösung (50 ml) gegeben und es wurde 2 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in Wasser (1,5 1) eingegossen und mit Chloroform (500 ml) extrahiert. Die Chloroformschicht wurde mit wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in kaltem Methanol (200 ml) aufgelöst und das unlösliche Tribenzylamin wurde abfiltriert. Das Filtrat wurde 20 h lang am Rückfluß erhitzt und zur. Trockene eingedampft, wodurch das rohe 3,3"-Diacetyl-9-trimethylsilylleucomycin Ac erhalten wurde.

Dieses rohe Material wurde in Essigsäure/Tetrahydrofuran/Wasser (3 : 1 : 1) (125 ml) aufgelöst und 2 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Chloroform (500 ml) versetzt und mit 396igem wäßrigen Ammoniak gewaschen. Die Chloroformschicht wurde mit wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert und im Vakuum getrocknet, wobei das rohe 3,3"-Diacetylleucomycin Ac (29,8 g) erhalten wurde. Diese Substanz wurde in einer kleinen Benzolmenge aufgelöst, auf eine Säule von Kieselgel gegeben und mit Benzol/Aceton (10:1-8:1-6 j 1) unter Abstufung eluiert. Die Fraktionen wurden durch Kieselgel-Dünnschichtchromatographie überprüft und die Fraktionen mit Rf. >= 0,58 wurden gesammelt und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wodurch das gereinigte Produkt (21,2 g, Ausbeute: 67,2%) erhalten wurde.

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_A = 0.58, Rf_B = 0,15
Masse (m/e): 855 (M⁺), 796 (M⁺-59), 768 (M⁺-87).

Ende der Beschreibxang.

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Claims (15)

1. Patentansprüche

   \ 1. 3"-acylierte Makrolidantibiotika der allgemeinen For

   Cri,

   in der R^ für ein Wasserstoff a torn oder eine Cp_-2-Alkanoylgruppe steht, R₂ für ein Wasserstoffatom oder eine C₂_^-A1-kanoylgruppe steht, wobei mindestens eine der Gruppen R^
   und R₂ ein Wasserstoffatom darstellt, und eine der Gruppen R¹ und R" eine Gruppe R^ und die andere eine Gruppe R^ ist, wobei R^ eine Cp_g-Alkanoylgruppe und R^ eine C₂_(--Alkanoylgruppe ist, sowie ihre Salze.
2. 2. Makrolidantibiotika nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel:

   ^Cri3 γ- CHO _0H

   CH.

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   worin R₁ für ein Wasserstoffatom oder eine Cp_,-Alkanoylgruppe steht, Rp für ein Wasserstoffatorn oder eine Cp r-Alkanoylgruppe steht, wobei mindestens eine der Gruppen R₁ und R₂ ein Wasserstoffatorn ist, R, für eine C₂_g-Alkanoylgruppe steht und R^ für eine Cpc-Alkanoylgruppe steht, sowie ihre Salze.
3. 3. Makrolidantibiotika nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß R₁ für eine Cg^-Alkanoylgruppe steht, R₂ für ein Wasserstoffatom steht und R^, und R/ die in den Ansprüchen 1 und 2 angegebenen Bedeutungen besitzen, sowie ihre Salze.
4. 4. Makrolidantibiotika nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß R^ für eine Propionyl-, Butylyl- oder Isovalerylgruppe steht und R₁, Rp und R, die in den Ansprüchen 1 und 2 angegebenen Bedeutungen haben, sowie ihre Salze.
5. 5. Makrolidantibiotika nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß R₁ für ein Wasserstoffatom steht und Rp für eine C^. -Alkanoylgruppe steht und R, und R/ die im Anspruch 2 angegebenen Bedeutungen haben, sowie ihre Salze.
6. 6. Makrolidantibiotika nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß R^ für eine Butylyl- oder Isovalerylgruppe steht und daß R₁, R₂ und R, die im Anspruch 3 angegebenen Bedeutungen haben, sowie ihre Salze.
7. 7. Makrolidantibiotika nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß R₁ oder R₂ für ein Wasserstoffatom steht und R, und R^ die im Anspruch 2 angegebenen Bedeutungen haben, sowie ihre Salze.

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   - κ
8. 8. Makrolidantibiotika nach Anspruch 7, dadurch g e kennzeich net, daß R^ für eine Butylyl- oder Isovalerylgruppe steht und R₁, R₂ und R^ die im Anspruch 7 angegebenen Bedeutungen haben, sowie ihre Salze.
9. 9. Makrolidantibiotika nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel:

   --'No/

   in der R₁ für ein Wasserstoffatom oder eine Cp_,-Alkanoylgruppe steht, Rp für ein Wasser stoff a torn oder eine Cp λ -Alkanoylgruppe steht, wobei mindestens eine der Gruppen R₁
   und R₂ ein Wasserstoffatom ist, R^ für eine Cp_g-Alkanoylgruppe steht und R^ für eine Coc-Alkanoylgruppe steht, sowie ihre Salze.
10. 10. ' Makrolidantibiotika nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß R₁ für eine C₂_,-Alkanoylgruppe steht und R₂ für ein Wasserstoff atom steht, sowie
    ihre Salze.
11. 11. Makrolidantibiotika nach Anspruch 10, dadurch g e kennzeichnet , daß R^ für eine Eropionyl-, Butylyl- oder Isovalerylgruppe steht, sowie ihre Salze.

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12. 12. Makrolidantibiotika nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet , daß ILj für ein Wasserstoffatom steht und Rp für eine Cp_,,-Alkanoylgruppe steht, sowie ihre Salze.
13. 13. Makrolidantibiotika nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet , daß R^ für eine Butylyl- oder Isovalery!gruppe steht, sowie ihre Salze.
14. 14» Makrolidantibiotika nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß R^ und Rp für Wasserstoffatome stehen, sowie ihre Salze.
15. 15. Makrolidantibiotika nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet , daß R^ für eine Butylyl- oder Isovalerylgruppe steht, sowie ihre Salze.

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