DE2651060A1 - Differential-diagnostische spermauntersuchung - Google Patents
Differential-diagnostische spermauntersuchungInfo
- Publication number
- DE2651060A1 DE2651060A1 DE19762651060 DE2651060A DE2651060A1 DE 2651060 A1 DE2651060 A1 DE 2651060A1 DE 19762651060 DE19762651060 DE 19762651060 DE 2651060 A DE2651060 A DE 2651060A DE 2651060 A1 DE2651060 A1 DE 2651060A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- differential diagnostic
- stained
- methylene blue
- staining
- cresyl violet
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)
Description
BOEHRINGER MAKIiHEIM GMBE 7 2106
Differential-diagnostische Spermauntersuchung
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein verbessertes Verfahren zur differential-diagnostischen Spermauntersuchung
sowie die Verwendung vorgefärbter Objektträger zur Durchführung dieses Verfahrens.
Die wesentlichen Bestandteile des Spermas sind die Spermato.oen und die Rundzellen, die ihrerseits in die Leukozyten
und die Zellen der Spermiogenese zerfallen. Die morphologische Untersuchung von Spermatozoen ist für die Andrologie von
großer Bedeutung. Die Unterscheidung zwischen normalen und pathologischen Spermien gibt wichtige Aufschlüsse bei Fertilitätsuntersuchungen.
Eine genaue Unterscheidung dieser normalen und pathologischen Formen unter dem Mikroskop ist nur dann
möglich, wenn die Spermien vorher angefärbt werden. Für die Anfärbung stehen eine Reihe von Methoden (z.B. die Methode
nach Mayer/Stiasny sowie die Methode nach Papanicolaou) zur Verfügung, die aber in ihrer Anwendung meist sehr kompliziert
sind.
So werden beispielsweise nach Papanicolaou (siehe C. Schirren,
Praktische Andrologie, Berlin 1971, Seite 20) die Ausstriche 24 Stunden lang luftgetrocknet und 5 Minuten in einem Gemisch
von 95 %igen Alkohol und Äther (1:1) fixiert. Die Ausstriche werden danach einer umfangreichen Behandlung unterzogen, die
nacheinander folgende Teilschritte umfaßt: ,
9 8 1l9 /0460
jeweils 10 Sekunden eintauchen in eine absteigende Alkoholreihe (80 %, 7O %, 5O %)
10 Sekunden in destilliertes Wasser" 3 Minuten in Haematoxilinlösung
10 Minuten oder langer in fließendes Wasser 2 Sekunden in 0,5 %ige Salzsäure
5 Minuten in fließendes Wasser
jeweils IO Sekunden in aufsteigende Alkoholreihe (50 %, 7O %, 80 %, 95 % Äthanol)
2 Minuten Färbung in Orange G Lösung 5 Sekunden in 95 % Äthanol
5 Sekunden in 95 % Äthanol
2 Minuten Färbung in Polychromlösung ea 65
jeweils 5 Sekunden abspulen des überschüssigen Farbstoffes
in drei verschiedenen Gefäßen mit je 95 % Äthanol
2 Minuten eintauchen in absolutem Alkohol
2 Minuten in einem Gemisch aus absolutem Alkohol und Xylol (1:1)
20 Minuten in Xylol
Diese Vorschrift ist ganz offensichtlich sehr umständlich, zeitraubend und nur von geschultem Laborpersonal durchführbar.
Es stellte sich daher die Aufgabe, ein wesentlich einfacheres, weniger zeitaufwendiges und auch von ungeschultem Laborpersonal
durchführbares Verfahren zur differential-diagnostischen Spermauntersuchung zu suchen.
Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß die morphologischen
Eigenschaften der Spermien in hervorragender Weise darstellbar sind, wenn auf vorgefärbte Blutbild-Objektträger,
wie sie beispielsweise in den Deutschen Offenlegungsschrxften
15 966 und 21 53 673 beschrieben sind, 1 Tropfen Ejakulat aufgebracht, mit einem Deckgläschen bedeckt und nach Entwicklung
der Anfärbung mikroskopisch untersucht wird. Hierbei stellen sich die Spermien in einer sehr kontrastreichen
Färbung dar, während der Untergrund farblos bleibt.
809 8ί9/0 46 0
Um gute, zuverlässige Ergebnisse zu erhalten, empfiehlt es
sich, als Entwicklungszeit für die Anfärbung mindestens 3O Minuten anzusetzen. Als besonders vorteilhaft hat sich
ein Zeitraum von 1 bis 2 Stunden erwiesen- Sollen lediglich Übersichtsbestxmmungen durchgeführt werden, kann
schon nach einer Wartezeit von 5 bis 10 Minuten mikroskopiert v/erden.
Die Spermatozoen weisen die folgenden Farbdifferenzierungen
auf:
Innerhalb der Köpfe wird der Kern dunkelpurpur angefärbt. Das Plasma erscheint je nach Fokussierung orange bis hellviolett. Die Mitte erscheint bei pathologischer Vergrößerung
ebenfalls hellviolett, während der Schwanz nur schwach angefärbt wird, aber deutlich zu sehen ist. Diese Art der
Färbung gestattet eine hervorragende Differenzierung der
verschiedenen normalen und pathologischen Spermatozoenformen.
Von den Rundzellen werden die Leukozyten so angefärbt, wie
es in der Deutschen Offenlegungsschrift 25 15 966 beschrieben ist: Purpurfarbener Kern und je nach Art der Leukozyten
fast farbloses, gelbes oder orangerotes Plasma.
Bei den Zellen der Spermiogenese (Spermatogonien, Spermatocyten
und Spermiden) werden, wie bei den Spermatozoen, die Kerne dunkelpurpur und das Plasma hellviolett angefärbt,
so daß sie aufgrund ihrer Morphologie leicht von den Leukozyten zu unterscheiden sind.
Dieses erfindungsgemäße Verfahren weist demnach gegenüber den herkömmlichen Anfärbemethoden die folgenden wesentlichen,
technisch fortschrittlichen Merkmale auf:
8098ί9/0460
- Die bisher übliche 24-stündige Lufttrocknung entfällt, so daß die differential-diagnostische Spermauntersuchung
am selben Tage möglich ist.
- Für die Entwicklung der Anfärbung sind im allgemeinen lediglich 3O bis 120 Minuten Wartezeit erforderlich
und nicht eine ca. einstündige, zahlreiche Manipulationen erfordernde Tätigkeit.
- Die Anfärbung selbst ist extrem einfach durchführbar und auch von ungeschultem Personal zu bewerkstelligen.
Die Differenzierung durch den Arzt ist ebenfalls einfach
und problemlos.
Im Vergleich mit der herkömmlichen Papanicolaou-Färbung wurde überraschenderweise festgestellt, daß die erfindungsgemäße
Methode
- eine bessere oder zumindest ebenso gute Differenzierung zwischen normalen und pathologischen Spermien
- eine Verminderung der Gefahr der Deformation und damit der Zahl der fälschlich als pathologisch einzuordnenden
Formen
bewirkt.
In folgenden Beispielen soll die Erfindung näher erläutert werden:
8098Ϊ9/0 46 0
— 5 —
Beispiel 1
Erfindungsgemäß verwendbare, vorgefärbte Objektträger können beispielsweise nach dem in der Deutschen Offenlegungsschrift
25 15 966 beschriebenen Verfahren hergestellt werden.
Hierzu wird unter Verwendung entsprechend gereinigter Farbstoffe die folgende Lösung hergestellt:
Methylenblau N-Hydrochlorid 130 mg
Kresylviolettacetat 270 mg
Methanol ad 100 ml
Diese Lösung wird aus einer 0,5 mm Breitstrahldüse (SS 60 67228-45 der Fa. Spraying Systems) mit einem Sprühwinkel
von ca. 25° im Abstand von 20 cm durch eine Maske in einer Breite von 3 cm auf Objektträger gesprüht, die mit einer
Geschwindigkeit von 1,5 m/min unter der Düse vorbeigeführt
werden.
Sprühdruck: 1,2 atü; Flüssigkeitsdurchsatz durch die Düse:
10 ml/min.
Bei einer mittleren Tröpfchengröße von ca. 20 /u beträgt
die aufgebrachte Farbstoffmenge ca. 3 /ug/cm .
Auf einen so hergestellten vorgefärbten Objektträger wird
ein Tropfen verflüssigtes Ejakulat mittels einer Platinöse von 3 mm Durchmesser aufgebracht und mit einem Deckglas
bedeckt. Nach ca. 30 bis 120 Minuten wird die Anfärbung' unter dem Mikroskop bei ca. 1000-facher Vergrößerung unter
Verwendung eines Ölimmersionsobjektives beurteilt.
8098Ϊ9/0460
Zehnmalige Untersuchung eines Ejaculates mit einem hohen
Anteil normaler Formen ergab gute Übereinstimmung mit der Papanicolaou-Färbung:
74 + 3 % (Is-Streuung) normale Spermatozoen nach dem
erfindungsgemäßen Bestimmungsverfahren gegenüber 73 + 2 %
nach der Papanicolaou-Methode.
In gleicher Weise/ wie in Beispiel 1 beschrieben, wurde ein
Ejakulat mit relativ wenig Normalformen untersucht. Hierbei zeigte sich, daß bei der Papanicolaou-Methode die Normalformen
unterschätzt werden. Dies ist offenbar auf eine Deformation der Zellen durch das Färbeverfahren nach Papanicolaou
zurückzuführen, die bei niedrigem Anteil an Normalformen stärker ins Gewicht fällt als bei hohem:
40 + 3 % normale Spermien nach dem erfindungsgemäßen Verfahren
gegenüber
33 + 5 % nach der Papanicolaou-Methode.
33 + 5 % nach der Papanicolaou-Methode.
20 Ejakulate mit unterschiedlichen Normalformenanteilen
an Spermatozoen wurden sowohl nach dem erfindungsgemäßen
Verfahren, wie in Beispiel 1 beschrieben, als auch nach
der Papanicolaou-Methode untersucht. In Übereinstimmung^ mit dem in den Beispielen 1 und 2 erhaltenen Ergebnis
wurde bei hohem Anteil an Normalformen mit beiden Methoden übereinstimmende Werte, bei niedrigen Anteilen an Normalformen
mit der erfindungsgemäßen Methode höhere Werte als
mit der Papanicolaou-Methode gefunden. Die Ergebnisse sind in Abb. 1 zusammengestellt.
809819/0460
Claims (7)
1. Verbessertes Verfahren zur differential-diagnostischen
Spermauntersuchung, dadurch gekennzeichnet, daß man die
zu bestimmende Probe auf einen vorgefärbten Blutbild-Objektträger gibt und nach Entwicklung der Anfärbung
mikroskopisch untersucht.
2. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß ein vorgefärbter Blutbild-Objektträqer verwendet wird, der als Farbkomponente Methylenblau N und
Kresylviolettacetat enthält.
3. Verfahren gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet,
daß ein vorgefärbter Objektträger verwendet wird, der als Farbkoniponente chromatographisch reines Methylenblau
N und Kresylviolettacetat im Verhältnis 1 ι 1,5 bis 1:5 enthält. '
4. Verfahren gemäß den Ansprüchen 1 bis 3 dadurch gekennzeichnet,
daß nach einer Entwicklungszeit für die Anfärbung von 5 bis 120 Minuten mikroskopiert wird.
5. Verwendung vorgefärbter Blutbild-Objektträger zur differential-diagnostischen Spermauntersuchung.
6·» Verwendung vorgefärbter Objektträger, die als Farbkomponente Methylenblau N und Kresylviolettacetat enthalten,
zur differential-diagnostischen Spermauntersuchung.
8 0 98 i'S/0460
ORIG!MAL
7. Verwendung vorgefärbter Objektträger, die als Farbkomponente
chromatographisch reines Methylenblau Ή und Kresylviolettacetat im Verhältnis 1 : 1,5 bis
1:5 enthalten, zur differential-diagnostischen Spermauntersuchung.
Priority Applications (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE2651060A DE2651060C3 (de) | 1976-11-09 | 1976-11-09 | Differential-diagnostische Spermauntersuchung |
US05/842,003 US4185085A (en) | 1976-11-09 | 1977-10-13 | Differential diagnostic sperm examination |
JP13404077A JPS5386295A (en) | 1976-11-09 | 1977-11-08 | Improvement in differential diagonostic sperm test |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE2651060A DE2651060C3 (de) | 1976-11-09 | 1976-11-09 | Differential-diagnostische Spermauntersuchung |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE2651060A1 true DE2651060A1 (de) | 1978-05-11 |
DE2651060B2 DE2651060B2 (de) | 1979-10-04 |
DE2651060C3 DE2651060C3 (de) | 1980-06-26 |
Family
ID=5992706
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE2651060A Expired DE2651060C3 (de) | 1976-11-09 | 1976-11-09 | Differential-diagnostische Spermauntersuchung |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4185085A (de) |
JP (1) | JPS5386295A (de) |
DE (1) | DE2651060C3 (de) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1983000392A1 (en) * | 1981-07-25 | 1983-02-03 | Mettler, Lieselotte | Method allowing to assay for antibodies against the sperm by means of either enzymatic or radio-immunoassays |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NZ207393A (en) * | 1983-08-05 | 1987-03-31 | Neal Lloyd First | Staining dna in living cells |
US4826416A (en) * | 1988-06-02 | 1989-05-02 | The Goodyear Tire & Rubber Company | System for injection molding tire treads |
US5935800A (en) * | 1994-10-31 | 1999-08-10 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Assays and kits for determining male fertility |
KR100941323B1 (ko) * | 2008-10-07 | 2010-02-10 | 바이오컬쳐(주) | 메틸렌블루의 색상 변화를 이용한 정액 진단 방법, 진단 키트 및 이를 이용한 품질 판단 가능한 정액. |
CN108036988A (zh) * | 2017-12-15 | 2018-05-15 | 黄道连 | 一种精子快速染液 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3796594A (en) * | 1970-10-30 | 1974-03-12 | Gen Electric | Stain coated slides for differentially staining blood |
US3906120A (en) * | 1970-10-30 | 1975-09-16 | Gen Electric | Method for preparing slides for blood evaluation |
DE2515966C3 (de) * | 1975-04-11 | 1979-11-22 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Vorgefärbte Objektträger für die Blutunte rsuchung |
-
1976
- 1976-11-09 DE DE2651060A patent/DE2651060C3/de not_active Expired
-
1977
- 1977-10-13 US US05/842,003 patent/US4185085A/en not_active Expired - Lifetime
- 1977-11-08 JP JP13404077A patent/JPS5386295A/ja active Granted
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1983000392A1 (en) * | 1981-07-25 | 1983-02-03 | Mettler, Lieselotte | Method allowing to assay for antibodies against the sperm by means of either enzymatic or radio-immunoassays |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS6259264B2 (de) | 1987-12-10 |
JPS5386295A (en) | 1978-07-29 |
DE2651060B2 (de) | 1979-10-04 |
DE2651060C3 (de) | 1980-06-26 |
US4185085A (en) | 1980-01-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE69031682T2 (de) | Thionin Färbungstechnik | |
EP0226860B1 (de) | Verfahren zum gleichzeitigen Färben und dauerhaften Verformen von Haaren | |
DE3208629C2 (de) | ||
DE3304795C2 (de) | ||
DE3109252A1 (de) | Verfahren und zusammensetzung zur bestimmung einzelner leukozyten durch metachromatische farbstoffdifferentialabsorption | |
DE2725961A1 (de) | Reagens fuer untersuchung auf protein und verfahren zur untersuchung auf protein | |
Cowdry | The relations of mitochondria and other cytoplasmic constituents in spinal ganglion cells of the pigeon... | |
DE2031008B2 (de) | Indophenole, Verfahren zu deren Herstellung und Färbemittel für Keratinfasern | |
DE2651060C3 (de) | Differential-diagnostische Spermauntersuchung | |
DE3875997T2 (de) | Faerbeloesung fuer nicht durch saeuren entfaerbbare bazillen. | |
DE2515966C3 (de) | Vorgefärbte Objektträger für die Blutunte rsuchung | |
DE2521402C3 (de) | Diagnostisches Mittel zum Nachweis von Urobilinogen | |
DE2424955C3 (de) | Verfahren zum Herstellen eines mikroskopischen Objektträgers | |
Sulkin | Histochemical studies on mucoproteins in nerve cells of the dog | |
DE2125699B2 (de) | Praeparation von zellen zur messung von dns | |
EP0017661B1 (de) | Schnelldiagnostika zur Bestimmung occulten Blutes und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
EP0062177B1 (de) | Thiazinfarbstoffe enthaltende Färbelösung und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
DE2019778A1 (de) | Verfahren zur Bestimmung der Zellverteilung von Ribonukleinsaeuren | |
DE2832491A1 (de) | Mittel und verfahren zur anfaerbung von zellabstrichen | |
DE2623087B2 (de) | Teststreifen zum Nachweis von Bilirubin | |
DE1648852A1 (de) | Abfaerbemittel fuer biologische Materialien sowie ein Verfahren zu seiner Anwendung | |
DE1798285C3 (de) | Neues Mittel und Verfahren zur Lipasebesti m mu ng | |
DE467604C (de) | Differenzierungsmittel zur Herstellung von Blutbildern | |
AT286500B (de) | Zytobakteriologische Färbelösung und Verfahren zur Herstellung derselben | |
DE10246811B4 (de) | Verfahren zur Erkennung und Eingrenzung des Risikos für Brustkrebs durch den Mikronukleustest an zweikernigen Zellen |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
OD | Request for examination | ||
C3 | Grant after two publication steps (3rd publication) |