KR100941323B1 - 메틸렌블루의 색상 변화를 이용한 정액 진단 방법, 진단 키트 및 이를 이용한 품질 판단 가능한 정액. - Google Patents

메틸렌블루의 색상 변화를 이용한 정액 진단 방법, 진단 키트 및 이를 이용한 품질 판단 가능한 정액. Download PDF

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바이오컬쳐(주)
이장희
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Abstract

본 발명은 메틸렌블루 용액과 정액을 혼합하여 혼합된 정액의 변화된 색상에 의하여 육안적으로 정액의 품질(활력 및 생존성)을 간편하게 진단할 수 있는 정액에 관한 것으로, 정액의 변화된 색상을 포함할 수 있는 칼라코드(기준색상표)를 이용하여 간편하게 정액의 품질을 진단하는 방법 및 진단 키트 그리고 이 정액 품질 진단 방법을 이용한 안심 정액에 관한 것이다.
본 발명의 원리는 메틸렌블루(methylene blue) 용액과 정액을 혼합하였을 때 활력이 높은 신선한 정액의 경우에는 빠른 시간 내에 메틸렌블루 용액의 색상이 정자의 호흡과정에서 본래의 청색이 엷어지거나 없어지는 변화 정도에 의하여 정액의 품질을 간접적으로 진단할 수 있기 때문에 이러한 원리를 응용하여 정액과 메틸렌블루 용액을 스트로우 내에 포장하여 사용직전에 간편하게 품질을 진단할 수 있는 정액을 제조하는 방법과 한편 샘플정액을 스트로우 내부에 흡입시켜 메틸렌블루 용액과 반응토록 하여 간편하게 정액의 품질을 진단하는 키트 제작방법과 사용 직전 간편 품질 진단 가능 정액을 샘플정액으로 운용하여 대용량 정액에 대해서도 간편하게 품질을 진단할 수 있는 간편 진단 안심 정액 제조방법에 관한 것이다.
메틸렌블루, 환원반응, 색상변화, 기준색상표, 정액, 품질평가

Description

메틸렌블루의 색상 변화를 이용한 정액 진단 방법, 진단 키트 및 이를 이용한 품질 판단 가능한 정액.{The diagnostic method of semen using methylene blue liquid and the diagnostic kit for the quality of semen using thereof}
본 발명은 메틸렌블루 용액을 정액과 혼합하여 혼합된 정액의 변화된 색상에 의하여 현미경이나 실험실적 기기를 사용하지 않고 육안적으로 정액의 품질(활력 및 생존성)을 간편하게 평가할 수 있는 진단 키트에 관한 발명으로, 변화될 수 있는 색상을 포함할 수 있는 칼라코드를 설정하고 정액과 메틸렌블루용액의 혼합 후 나타나는 색상을 육안으로 기준색상표(여러 단계 농담으로 구분된 칼라코드)를 비교하여 간편하게 정액의 품질을 평가할 수 있도록 구성한 정액 진단 키트에 관한 발명 및 이 진단 키트를 이용하여 우수한 정액을 제조하는 방법에 관한 발명이다.
일반적으로 정액의 활력은 정액 1방울을 슬라이드 글라스 위에 떨어뜨린 다음 생리식염수 1방울과 혼합하여 cover glass를 덮고 현미경 하에서 관찰한다. 즉 현미경 100X의 배율에서 전반적인 운동을 개관한 다음(4, 3, 2, 1, 0 점으로 평가), 200-400X하에서 10마리의 정자를 직관하고 그 중 움직이는 정자를 센 후 slide glass를 약간 움직여서 다시 10마리의 정자를 세어(5-10회 반복) 움직이는 정자의 비율을 구하여 활력을 평가한다.
통상적으로 사용 전의 정액은 동결보존되어 있거나 희석된 상태로 수일간까지 보존되기도 한다(통상 7주일 이내). 하지만 사용 직전의 정액은 제조시 또는 보관상 문제가 발생하여 사용 가능한 유효한 정액인지 판단하기 위해서는 다시 현미경 검사나 실시할 수 밖에 없고 이러한 실험실적 검사를 거치는 동안에는 외부에 노출된 정액의 품질이 저하 될 수 밖에 없다.
만약 품질이 불량한 정액이 그대로 사용될 경우에는 수정 또는 수태가 이루어지지 않은 관계로 더 큰 손실을 초래하게 된다. 따라서 사용 직전에 정액의 품질을 간편하게 판단(또는 진단)할 수 있다면 품질이 양호한 정액을 사용함으로써 수정율 또는 수태율을 더욱 향상 시킬 수 있으며 불량한 정액의 사용을 미연에 방지할 수가 있다.
그러나 상기의 선행 정액 품질 진단 방법은 정액을 채취 후에 보관하는 방법상의 문제점과 현미경을 사용하여 정액의 우수성여부를 판별하는 방법은 시간이 많이 걸리는 문제점 그리고 현미경 조작상의 까다로움이 산재하고 있어 질 좋은 동물의 정액을 채취하는 데는 많은 문제점이 있었다.
본 발명은 정자와 메틸렌블루액과 혼합에서 환원반응을 이용하여 정액의 활력 및 생존성에 따라 메틸렌블루의 색상이 변화되는 단계를 설정하여 기준색상표를 작성한 후 메틸렌블루와 혼합된 정액의 청색이 정자의 활동도에 따라 메틸렌블루의 색깔이 변화하는 것을 기준색상표와 비교하여 우수한 정자를 구별해 내는 수단을 취한다.
이런 방법을 통하여 정액의 품질을 현미경이나 실험실적 분석을 통하지 않고 육안으로 간편하게 평가할 수 있고, 이러한 방법을 응용하여 정액과 메틸렌블루 용액을 정액 스트로우(straw; transparent tube)에 흡입하여 제조한 정액을 체외수정 및 인공수정 등 사용 직전에 간단한 방법으로 품질을 테스트하여 품질 좋은 정액을 사용할 수 있는 방법을 제공하거나 불량정액의 사용을 방지하는 방법을 제공한다.
정액과 메틸렌블루용액과의 혼합 후 정액의 활력 및 생존성에 따라 혼합직전의 청색이 무색으로 환원되는 단계를 통상 6단계로 설정한 바 아주 엷은 청색이나 무색단계(사용가능 정액), 다소 밝은 청색이거나 하늘색(의심스런 정액), 혼합직전의 청색 또는 어두운 청색(사용불가능 정액)에 대해서 표준적인 칼라코드(기준색상표)를 설정하여 정액과 메틸렌블루 용액이 혼합 후의 색상변화 단계별 정액의 품질을 대변하는 칼라코드와 색상을 대비하여 현미경이나 실험실적 분석을 거치지 않고 간편하게 정액을 품질을 평가할 수 있는 효과를 제공하게 된다.
본 발명은 체외수정 및 인공수정을 위한 정액을 투명한 정액 스트로우(transparent tube, Minitub(독일제, FHK, 일본제), 일명 스트로우)내에, 부피 비(v/v)로 정액 보존액으로 희석된 정액 층 0.1-0.4, 공기 층 0.01-0.04, 차단액 층 0.01-0.06, 공기 층 0.01-0.04 및 메틸렌블루 용액 층 0.01-0.04를 구분하여 차례로 위치시킨다.
그리고 상기 정액 스트로우는 통상의 밀봉 수단으로 밀봉시킨다.
이때 메틸렌 블루 용액과 정액의 혼합비율은 정자 농도에 따라 1:10-50범위로 희석되게 된다. 바람직하게는 희석된 정액의 농도는 최소 ml당 3-5천만 마리 이상이어야 한다
정액을 이용하기 직전에 정액의 품질(활력 및 생존성)을 평가하고자 한다면 중층(이중 층)으로 구성된 공기 층을 튕겨 상부로 향하게 하면 공기층과 차단층으로 분리되어 있던 정액과 메틸렌블루 용액이 섞이게 되어 정자와 메틸렌블루의 환원반응이 진행되게 하거나 사용 직전 정액의 일부(10~400 ㎕)을 취하여 미리 제작된 정액검사 키트용 스트로우 내에 흡입시켜 메틸렌블루용액과 혼합하여 환원반응이 진행되게 한다.
따라서 정자의 활력 또는 생존성에 따라 메틸렌블루의 색상이 당초 청색에서 서서히 엷어지거나 무색(또는 흰색)으로 변하게 되는 데 정액의 활력이 높은 경우 에는 무색으로 변하는 기간이 매우 짧고(수 분 이내), 활력이 낮은 경우에는 청색이 거의 변하지 않고 그대로 남게 된다.
이와 같이 정액과 혼합된 메틸렌블루의 농담(濃淡)에 따라 정자의 활력의 높고 낮음을 알려주게 되므로 정액 스트로우 내 정액의 활력의 평가는 미리 준비된 기준색상표와 서로 대비하여 판정할 수 있게 된다.
통상의 체외수정 및 인공수정에 있어서, 정액을 사용하기 직전에 정액 스트로우 내에 보관된 정액은 제조시 또는 보관상 문제가 발생할 수 있다.
따라서 정자가 사멸한 경우이거나 생존성 및 활력이 유효하지 않을 정도로 낮을 경우가 발생하였는지 아닌지는 매우 의심스러울 수밖에 없고, 이를 확인하기 위해서는 정액 샘플의 일부를 취하여 현미경 검사나 기타 실험실적 검사를 실시하여 정액의 품질을 확인할 수 밖에 없다.
이러한 검사는 실험실 내의 많은 장비와 검사소요 시간이 많이 필요로 하기 때문에 매우 번거롭다. 또한 이러한 검사과정에 소요되는 시간관계로 정액 품질에 악영향을 미치게 되어 실제 품질 평가 후에는 더 나쁜 정액을 이용하게 되는 단점이 있게 된다.
본 발명은 이러한 단점과 번거로움을 줄이기 위하여 상기에서 정액을 앞서 언급한 바와 같이 메틸렌블루용액, 공기 중층, 차단층과 함께 구획하여 포장된 정액을 사용 직전에 중층에 구성된 공기층을 손가락으로 튕겨 스트로우 내의 정액과 메틸렌블루 용액이 혼합되게 하여 변화된 색상을 기준색상표(일반적으로 6단계 칼 라코드) 색상과 대비하여 정액의 품질을 신속하고도 간편하게 평가할 수 있도록 구성한 것을 특징으로 한다.
본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 정액을 정액 스트로우 내에 부피 비(v/v)로 정액 보존액으로 희석된 정액 층 0.1-0.4, 공기 층 0.01-0.04, 차단액 층 0.01-0.06, 공기 층 0.01-0.04 및 메틸렌블루 용액 층 0.01-0.04 를 구분하여 차례로 위치시킨다.
그리고 상기 정액 스트로우는 통상의 밀봉재로 밀봉시킨다. 정액 스트로우의 밀봉재 중 PVA는 통상적으로 공기는 잘 통하고 액체는 접촉과 동시에 녹아 굳어짐으로써 밀봉하는 효과가 달성된다. 상기의 밀봉재는 통상적으로 유리볼, 목화솜, 합성섬유, PVA, 플라스틱 바(bar) 등 다양하게 채용할 수 있다.
본 발명에서 정액의 포장과 밀봉에 대한 실시예의 일예로 정액 스트로우(한쪽 끝에는 닫힌 면으로 섬유층, 중간에 PVA 분말층, 그 다음에 다시 섬유층이 내장되어 닫혀 있고 반대편은 열려있는 플라스틱 투명관)의 닫힌면을 실리콘 튜브와 연결된 주사기를 이용하여 스트로우 반대편 입구로부터 차례대로 정액, 공기, 차단액, 공기 및 메틸렌블루용액을 부피 비율에 맞게 흡입시키면 최종 정액이 PVA분말 층에 맞닿아 밀봉되고 반대편 입구는 통상의 방법으로 밀봉시킨다. 이때 PVA 분말은 정액이 스트로우 내에 흡입되어 접촉되는 순간 녹으면서(용해) 굳어져 밀폐효과를 가지게 된다.
다만, 상기의 정액 스트로우 내의 정액과 메틸렌블루용액을 공기 및 차단액으로 분리하게 하는 어떠한 수단도 허용됨은 자명한 사항이다.
그리고, 상기한 정액 스트로우 내에 부피 비(v/v)로 정액보존액으로 희석된 정액 층 0.1-0.4 , 공기 층 0.01-0.04, 차단액 층 0.01-0.06, 공기 층 0.01-0.04 및 메틸렌블루 용액 층 0.01-0.04를 층으로 구분하여 차례로 위치시켜 반대편의 입구를 통상의 방법으로 밀봉한다.
한편 정액의 품질을 진단하기 위한 키트(kit)용 스트로우는 정액스트로우를 이용하여 부피비율(v/v)로 공기 층 0.1-0.4, 희석액 층 0.04-0.4, 공기층 0.01-0.04, 메틸렌블루용액 층 0.01-0.04로 흡입하고 나머지부분은 공기층으로 구분하여 위치시킨 다음 통상의 방법으로 흡입되었던 입구를 밀봉하여 제작한다. 바람직하게는 플라스틱 바(bar)로 밀봉시킨다.
정액의 희석은 채취한 후에 유효한 정자 농도(정자수)가 되도록 난황, 구연산나트륨, 포도당 등을 주성분으로 하는 정액보존액으로 희석한다. 정액보존액은 정자가 사멸되지 않고 오랫동안 보존될 수 있는 통상의 용액을 의미한다. 장기보존을 위해 동결시킬 경우에는 상술한 희석액에 그리세린(침투성 동해보호제), sucrose(비침투성 동해보호제) 등을 첨가하여 0.25 또는 0.5ml의 스트로우에 흡입(또는 주입)시켜 밀폐한 다음, 4℃에서 2∼6시간 냉각시킨 후 액체질소 증기(vapor)에서 예비동결시키고 액체질소(-196℃)에 침지시켜 동결 보존하게 된다. 따라서 동물의 종류에 따라서 정액보존액의 종류와 사용량은 다양할 수 있다는 것은 자명한 사항이다.
본 발명의 실시의 일예로 정액보존액으로서 난황구연산 희석액을 제조하는데 이는 2.5~3.5 %(w/v,weight/volume) 구연산 나트륨(sodium citrate) 용액 80ml에 난황 20~40ml를 더하여 제조하며, 바람직하게는 2.9 % 구연산 나트륨 용액 80ml에 난황 20ml를 더하여 제조한다.
다시 메틸렌블루용액의 제조에는 3.0~4.0 % 구연산나트륨(sodium citrate)용액 (sodium citrate 3.0~4.0 g/100ml 증류수) 100 ml에 메틸렌블루 30~60 mg을 용해하여 제조한다. 바람직하게는 3.6 % 구연산나트륨(sodium citrate)용액 100 ml에 메틸렌블루 50 mg을 용해하여 제조한다.
상기의 메틸렌블루용액 제조는 혼합될 정액 내의 정자수(농도)와 정액량에 따라 그 농도와 희석배율이 조정될 수 있음은 자명한 사항이다.
이와 같이 정액에 미리 제조된 정액보존액인 난황구연산액을 첨가하여 희석한다. 희석배율은 동물의 종류에 따라 다르며, 일반적으로 소의경우 1 : 100~200(정액 : 정액보존액), 돼지; 1 : 20-40, 사람 ; 1 : 4-10 정도로 희석한다.
이렇게 처리된 희석한 정액을 부피 비(v/v)로 0.1-0.4 정도로 정액 스트로우 내에 흡입(또는 주입)하여 층을 형성한다.
그리고 공기 층을 부피 비(v/v)로 0.01-0.04 정도로 스트로우 내에 형성시킨다.
그런 후에, 차단액을 부피 비(v/v)로 0.01-0.06 정도로 스트로우 내에 흡입하여 형성한다. 이 차단액은 정액과 메틸렌블루용액의 혼합을 한시적으로 차단하는 기능을 한다.
차단액으로 사용하는 것은 percoll 용액, 미네랄오일, 2가 알코올(글리콜류), 3가 알코올류(글리세린류) 등이 될 수 있으며, 정액과 메틸렌블루용액이 물로 구성되어 있기 때문에 물과 잘 섞이지 않아서 두 층을 뚜렷이 구분할 수 있는 물질이어야 하며 정자의 활동성에 크게 영향을 주지 않고 생체에 거의 무해한 물질이어야 한다.
그 이유는 메틸렌블루 층과 정액 층이 공기층에 의해서도 구분이 되어 있으나 공기 층은 스트로우의 위치에 따라 유동적으로 이동될 수 있으므로 차단액 층이 실질적으로 더욱 안정하게 두 층(정액 vs. 메틸렌블루용액)을 구분하게 되는 것이다. 다만 바람직하게는 percoll 용액, 미네랄오일, 글리세린 류가 정자의 활동성에 영향을 주지 않아서 좋다.
그리고, 다시 공기 층을 부피 비(v/v)로 0.01-0.04 정도로 스트로우 내에 형성시킨다.
다음으로, 메틸렌블루 용액 층을 부피비(v/v)로 0.01-0.04 정도로 스트로우 내에 형성시킨다.
마지막으로 스트로우를 상기한 바와 같이 통상의 방법으로 밀봉하여 필요한 온도에서 보관한다.
그런 다음, 정액이 품질이 양호(유효)한지 불량한지 여부를 평가(진단)하려면, 정액, 메칠렌 블루 용액 그리고 공기를 섞는 행위, 즉 상기의 스트로우에 약간의 진동을 주어 정액, 메틸렌블루용액 및 차단액이 공기의 상하 이동으로 섞는다.
그러면 메틸렌블루용액과 혼합된 정액 내 정자는 활력에 따라 정자의 대사 과정을 통하여 수소이온을 배출하는데 메틸렌블루는 수소와 반응하여 무색의 루코메틸렌블루(leucomethylene blue)로 환원되며 이 때 정자의 활력에 따라 메틸렌블루의 색상의 변화가 일어난다.
양질의 정액은 3 ~ 6분 이내에 청색이 소멸되는데, 7~ 9분 이상 청색을 그대로 유지하는 정액은 살아 있는 정자의 수가 유의하게 적거나 활력이 거의 없는 것으로 판정된다. 이와 같은 원리로 정자의 생존성 및 활력에 따라 변화되는 색상을 기준색상표로 작성한 색상과 대비하여 정액의 품질을 간편하게 평가하게 된다.
상기의 메틸렌블루와 정자와의 반응원리를 상세히 설명하면 이러하다.
정자는 에너지 대사과정에서 산소를 소비하고 수소(水素)를 생산하는데, 청색의 메틸렌블루(methylene blue)는 수소와 반응하여 무색의 루코메틸렌블루(leucomethylene blue)로 환원된다. 루코메틸렌블루로 환원되는 데 소요되는 시간은 정액 내 정자의 수와 활력에 의해 영향을 받는다. 즉, 활력 정자를 많이 함유한 정액은 활력이 불량한 정액에 비하여 더 빠른 속도로 산소를 소비하고 수소를 다량 생산하기 때문에 메틸렌블루의 환원시간(MRT; methylene blue reduction time)이 단축된다.
<원리> 2H2O + 정자 ----------> 4H+ + O2 (정자의 에너지대사에 의한 산소 소비) Methylene blue + H+ ----> Leucomethtlene blue(흰색)
즉 메틸렌블루의 청색이 정자의 활력(농도가 일정 수준 이상일 때)에 따라 무색으로 변하게 되는 것이다.
그러므로 정자수가 많거나 활력이 높으면 MRT가 짧아지고 정자수가 적거나 활력이 낮으면 MRT가 길어지거나 색상의 변화가 일어나지 않게 되는 것이다.
1. 상기의 방법으로 동물의 정액의 품질을 측정하는 방법을 제공한다.
상기한 바와 같이 통상의 투명한 정액 스트로우 내에, 부피 비(v/v)로 정액보존액으로 처리된 정액 층 0.1-0.4 , 공기 층 0.01-0.04, 차단액 층 0.01-0.06, 공기 층 0.01-0.04, 메틸렌블루 용액 층 0.01-0.04를 층으로 구분하여 차례로 위치시키고 통상의 방법으로 밀봉한다.
그리고 이렇게 만들어진 진단용 정액은 메틸렌블루용액과 정액을 혼합하여 3~5분이 경과한 시점에서 색상이 변화된 정도를 판단하여 정액의 품질을 측정하는 방법을 제공한다. 이 경우 색상이 변화된 정도는 미리 표준 정액으로 측정하여 작성한 기준 색상표와 진단용 정액의 색상변화를 대비하여 정액의 품질을 육안으로 식별한다.
2. 상기의 방법에 의하여 동물의 정액의 품질을 간편하게 검사하는 진단 키트를 제공한다.
상기한 바에 따라, 정액 스트로우 내에 부피 비(v/v)로 공기 층 0.1-0.4, 희석액 층 0.04-0.4, 공기층 0.01-0.04, 메틸렌블루용액 층 0.01-0.04로 흡입하고 나머지부분은 공기층으로 구분하여 위치시킨 다음 상기한 바와 같은 스트로우를 밀봉하는 통상의 방법으로 흡입되었던 입구를 밀봉하여 정액품질 검사 키트를 제작하고 필요시 입구를 절개(또는 개봉)하여 검사하고자 하는 정액시료 0.04-0.4를 흡인한 후 밀봉하여 흔들어서 혼합시켜 메틸렌블루 환원반응을 진행시켜 정액의 품질을 진단한다. 검사하고자 하는 정액의 품질 측정 방법은 상기의 기준색상표와 색상대비를 통하여 실시하게 된다.
3. 상기한 바와 같이 동물의 정액 품질 간편 진단 방법으로 제조된 정액을 제공하게 된다.
품질 좋은 유효한 정액을 사용하기 위하여, 종래의 방법은 정액의 시료를 일부 취하여 현미경으로 관찰한 후 품질의 유효성을 확인하고 사용하는 방법을 채택하였다.
하지만 상기한 바와 같은 메틸렌블루와 혼합된 정액을 사용하면 즉시 정액의 품질을 확인하고 사용할 수 있다.
따라서, 정액 스트로우 내에 부피 비(v/v)로 정액보존액으로 처리된 정액 층 0.1-0.4 , 공기 층 0.01-0.04, 차단액 층 0.01-0.06, 공기 층 0.01-0.04, 메틸렌블루 용액 층 0.01-0.04로 구성되는 것을 특징으로 하는 간편한 품질 진단(판별)가능 정액을 제공하게 된다.
또한 상기한 바와 같이 정액의 품질을 간편하게 검사할 수 있도록 구성한 정액을 샘플정액으로 하여 대용량정액에 부수적으로 첨부시켜 대용량 정액의 품질을 샘플정액으로 간편하게 진단할 수 있도록 구성한 간편한 안심 정액을 제공하게 된다. 다만 판매용 정액으로는 동물 정액으로 한정할 수 있음은 물론이다.
도 1 : 색상대비 간편 품질 평가 정액 스트로우
도 2 : 기준색상표의 일례
도 3 : 정액 진단 키트의 일례
① 정액보존액으로 희석된 정액 ② 공기층
③ 차단액 층 ④ 메틸렌블루 용액
⑤ 정액 스트로우 상부 및 하부 밀폐 층
10 : 색상대비 간편 품질평가 정액 스트로우
10-1 : 정액보존액으로 희석된 정액
10-2 : 공기층
10-3 : 차단액 층 (미네랄 오일, Percoll 용액, 글리세린 등)
10-4 : 메틸렌블루 용액
10-5 : PVA 분말 (Sealing powder)
10-6, 7 : 유리볼 또는 목화 솜
20 : 정액 품질을 판단할 수 있는 메틸렌블루 용액에 대한 색상대비표
20-1 : 정액과 메틸렌블루(MB)용액의 혼합 후 사용 불가능한 색상
20-2 : 정액과 메틸렌블루(MB)용액의 혼합 후 사용 불가능한 색상
20-3 : 정액과 메틸렌블루(MB)용액의 혼합 후 사용이 의심되는 색상
20-4 : 정액과 메틸렌블루(MB)용액의 혼합 후 사용이 의심되는 색상
20-5 : 정액과 메틸렌블루(MB)용액의 혼합 후 사용 가능한 색상
20-6 : 정액과 메틸렌블루(MB)용액의 혼합 후 사용 가능한 색상
30 : 정액 진단 키트
30-1, 2, 4, 5 : 정액 및 메틸렌블루가 포함된 정액 스트로우

Claims (7)

  1. 정액 보존액으로 희석된 정액과 메틸렌블루 용액을 혼합하여 농담(발색) 정도에 따라 정액의 품질이 정상, 의심, 불량인지를 판단할 수 있도록 도 2에 제시된 색상 기준표와 비교하여 정액의 품질을 검사하는 방법.
  2. 정액 스트로우 내에 부피 비(volume/volume)로 정액 보존액으로 희석된 정액 층 0.1-0.4, 공기 층 0.01-0.04, 차단액 층 0.01-0.06, 공기 층 0.01-0.04 , 메틸렌블루 용액 층 0.01-0.04를 구분하여 차례로 위치시켜 밀봉시킨 후 사용 시 정액층과 메틸렌블루 층을 혼합하여 농담(발색) 정도에 따라 정액의 품질이 정상, 의심, 불량인지를 판단할 수 있도록 도 2에 제시된 색상 기준표와 비교하여 정액의 품질을 검사하는 방법.
  3. 제 2항에 있어서,
    차단액 층의 차단액은 percoll 용액, 미네랄오일, 2가 알코올(글리콜류), 3가 알코올류(글리세린류) 중에서 선택하여 사용하는 것을 특징으로 하는 정액의 품질을 검사하는 방법.
  4. 정액 스트로우 내에 부피 비(v/v)로 공기 층 0.1-0.4, 정액보존액 층 0.04-0.4, 공기층 0.01-0.04, 메틸렌블루용액 층 0.01-0.04로 흡입하고 나머지부분은 공기층으로 구분하여 위치시킨 후 밀봉하고 필요시 입구를 절개(또는 개봉)하여 검사하고자 하는 정액시료 0.04-0.4를 부피비로 흡인한 후 재밀봉하여 흔들어서 혼 합시켜 메틸렌블루 환원반응을 진행시켜 정액의 품질을 진단할 수 있는 정액 품질 진단 키트.
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 삭제
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