DE2645144A1 - Cephalosporinverbindungen, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende pharmazeutische mittel - Google Patents

Description

Cephalosporinverbindungen, Verfahren zu deren Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Mittel

Die Erfindung betrifft neue synthetische Cephalosporinverbindungen, die als antibakterielle Mittel zur oralen und parenteralen Verabreichung bei der Behandlung von Infektionskrankheiten, die durch gram-positive und gram-negative Bakterien verursacht wurden, bei Geflügel und Tieren sowie beim Menschen wertvoll sind. Die Verbindungen sind darüberhinaus von Nutzen als Futtermittelzusatz und als Mittel zur Behandlung von Mastitis bei Rindern.

Die Erfindung betrifft insbesondere die Kondensationsprodukte von Aldehyden, mit Ausnahme von Formaldehyde und Acetaldehyd, mit in 3-Stellung thiolierten Cephalosporinen, die in 7-Stellunc einen c<- -Aminophenylacetamido-Substituenten aufweisen, der am Benzolring unsubstituiert oder mit einer, zwei oder drei

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Gruppen substituiert sein kann, die gegenüber Aldehyden nicht reaktiv sind, und bevorzugt mit einer para-Hydroxy- oder para-Acetoxy-Gruppe.

"In 3-Stellung thioliertes Cephalosporin" bezeichnet ein Derivat der Cephalosporansäure, bei dem die Acetoxygruppe durch ein Thiol ersetzt ist, um die 3-Acetoxymethylgruppe in eine 3-(substituierte)-Thiomethylgruppe umzuwandeln; bevorzugte Thiole sind solche, bei denen die Mercaptogruppe an ein Kohlenstoffatom in einem 5- oder 6-gliedrigen heterocyclischen Ring gebunden ist, der 1 bis 4 (und bevorzugt oder 4) N-, 0- oder S-Atome enthält, wobei dieser Ring gegebenenfalls mit einer oder zwei Alkyl- oder Alkoxygruppen substituiert sein kann, die 1 bis 4 Kohlenstoffatome, Methylthio oder Trifluormethyl enthalten.

Die erhaltenen Kondensationsprodukte in Form der Natrium- und Kaliumsalze zeigen die gewünschte Löslichkeit, Stabilität und Absorption. Die bevorzugten Verbindungen hydrolysieren rasch und vollständig im Körper, wobei sie das ursprüngliche amphotere, in 3-Stellung thiolierte Cephalosporin ergeben; bei den entsprechenden Kondensationsprodukten mit Acetaldehyd, Formaldehyd oder Aceton, die vollständig, aber auf unerwünscht langsame Weise hydrolysieren, ist dies nicht der Fall.

Man erhält somit die Natrium- oder Kaliumsalze des äquimolaren Kondensationsprodukts von

a) einem Aldehyd, mit Ausnahme von Formaldehyd oder Acetaldehyd , mit

b) einem amphoteren, in 3-Stellung thiolierten Cephalosporin, das eine oc -substituierte- Λ. -Aminoacetamido-Gruppe in 7-Stellung aufweist und in der Zwitterionenform eine Wasserlöslichkeit von weniger als 125 mg/ml hat, und

gemäß einer bevorzugten Ausführungsform erhält man das

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Natrium- oder Kaliumsalz des äquimolaren Kondensationsprodukts

2 2

a) einem Aldehyd der Formel R -CHO, worin R Carboxyl oder

2-Furyl oder einen aliphatischen, aromatischen oder heterozyclischen Rest bedeutet, an den auch eine stark saure Gruppe in Form des Natrium- oder Kaliumsalzes gebunden ist,

mit '

b) einem amphoteren, in 3-Stellung thiolierten Cephalosporin, j

i das in 7-Stellung eine X-substituierte-oC-Aminoacetamido-

Gruppe enthält und in Zwitterionenform eine Wasserlöslich- \ ί keit von weniger als 125 mg/ml aufweist.

i Gemäß einer noch bevorzugteren Ausführungsform ist der Aldehyd,

i der die Säuregruppe trägt, 5-Formyl-2-furansulfonsäure,

o-Benzaldehydsulfonsäure, 4-Methoxybenzaldehyd-3-sulfonsäure, I 4-Hydroxybenzaldehyd-3-sulfonsäure, o- und p-Formylphenoxy- ; essigsäure, 5-Formyl-salicylsäure, p-Formylzimtsäure, [ Glyoxalsäure, Phthalaldehydsäure, p-Formyl-benzoesäure, ! Acetaldehydsulfonsäure-Natriumsalz oder Acetaldehyddisulfonsäure-Natriumsalz.

ⁱ Derivate verschiedener «.-Amino-cephalosporine mit nitroj substituierten heterocyclischen Aldehyden sind in der ; US-PS 3 647 781 beschrieben. Reaktionsprodukte verschiedener ' -X-Amino-cephalosporine mit Formaldehyd sind in der Südafrikanischen Patentschrift 72/8475 beschrieben, solche mit Acetaldehyd in der Südafrikanischen Patentschrift 72/8474 und mit verschiedenen Aldehyden und Ketonen in der Südj afrikanischen Patentschrift 72/8476.

Cephalosporinderivate, die in der Acylamidogruppe in 7-Stellung I eine oL-Aminogruppe aufweisen, die mit einem Aldehyd umgesetzt

wurde (jedoch eingeschränkt auf Methyl oder Acetoxymethyl in ¹ 3-Stellung) sind in den US-PSen 3 880 842 und 3 887 546 und

in Farmdoc 498O4W beschrieben.

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Die Reaktionsprodukte von Aceton mit verschiedenen c*.-Amino- ! cephalosporinen sind in der Patentliteratur wie folgt be-

! * schreiben:

(1) mit Cephaloglycin, in US-PS 3 303 193;

(2) mit Cephalexin, in US PS 3 714 146 und GB-PS 1 314 758 und US-PS 3 780 028;

(3) mit 7-/OC-Amino-(2'-thienyl)-acetamidoZ-cephalosporansäure in US-PS 3 311 621;

(4) mit bestimmten ring-substituierten Cephaloglycinen in US-PS 3 464 985; und

(5) mit bestimmten ring-substituierten Cephalexinen und Cephaloglycinen in US-PSen 3 489 750; 3 489 751 und 3 489 752.

Weiter entfernt verwandt sind die Zwischenprodukte, die man erhält, wenn man einen Cephalosporinkern, beispielsweise 7-ACA oder 7-ADCA, mit einem reaktionsfähigen Derivat einer X-Aminosäure acyliert, bei dem die ⁰^--Aminogruppe durch vorherige-Umsetzung mit einer ß-Diketoverbindung, wie Methylacetoacetat, Methylacetoacetamxd oder Acetylaceton geschützt worden war; diese sind beispielsweise in Farmdoc 2285OW und 60669V > beschrieben.

Auf dem Gebiet der Penicilline wurden diejenigen Penicilline, die eine (X.-Aminogruppe im 7-Acylamidosubstituenten aufweisen, beispielsweise Ampicillin, mit Ketonen und Aldehyden offensichtlich zuerst von Johnson et al. (US-PS 3 198 804) und Granatek (US-PS 3 198 788) beschrieben. Ähnliche Reaktionsprodukte, die aus verschiedenen solchen Penicillinen durch Umsetzung mit den gleichen oder verschiedenen Aldehyden und Ketonen hergestellt worden waren, wurden später in den US-PSen 3 230 214, 3 316 247 (Diketone), 3 325 479 (Diketone), 3 489 746, 3 549 746, 3 558 602, 3 635 953, 3 641 000, 3 647 781 (welche einige Cephalosporine umfaßt), 3 725 389,

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3 780 028, 3 784 562 (Diketone), 3 886 140, 3888 848, 3 905 und 3 904 604 und in der GB-PS 1 267 936 beschrieben.

Die Erfindung betrifft die Verbindung der Formel I:

worin

A Wasserstoff, Hydroxy, Methyl oder Methoxy,

R Wasserstoff, Natrium oder Kalium, bedeuten,

2
R Carboxyl oder 2-Furyl oder ein aliphatischer,

aromatischer oder heterozyclischer Rest ist, an den auch eine stark saure Gruppe in Form seines Natrium- oder Kaliumsalzes gebunden ist, und

R die Bedeutungen 1,2,3-Triazol-5-yl, Tetrazol-5-yl, l,2,4-Thiadiazol-5-yl, 1,3,4-Thiadiazol-2-yl, 1,3,4-0xadiazol-3-yl oder 1,2,4-Triazol-5-yl besitzt, wobei jede dieser Gruppen unsubstituiert oder mit einer oder zwei Niedrigalkylgruppen mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen substituiert sein kann. In den bevorzugten Ausführungsformen ist das an den Benzolring gebundene Kohlenstoffatom (in para-Stellung zu der Hydroxylgruppe) in D-Konfiguration.

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Die Erfindung schafft somit wasserlösliche, pharmazeutisch verträgliche Derivate der amphoteren Cephalosporine der Struktur II:

.CH₃-S-R³

v/orin A, R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen. Bei den bevorzugten Ausführungsformen hat das Kohlenstoffatom, das die ;v-Aminogruppe trägt, die D-Konfiguration. Dies sind Derivate, welche

(1) bei Zugabe von Wasser wirkliche Lösungen zur parenteralen Verabreichung ergeben,

(2) in festem Zustand eine akzeptable Wärmestabilität aufweisen,

(3) in wässriger Lösung bei Raumtemperatur eine Gebrauchsfähigkeit von mindestens einigen Stunden haben, und

(4) bei intravenöser oder intramuskulärer Injektion die Muskeln oder Venen nur wenig oder gar nicht reizen.

Die Erfindung schafft insbesondere Alkalimetallsalze, insbesondere Natrium- und Kaliumsalze der Reaktionsprodukte dieser amphoteren Cephalosporine mit Aldehyden und bevorzugt mit Furfuraldehyd oder einem Aldehyd, der eine sauere Gruppe, beispielsweise 2-Furansulfonsäure, enthält.

Die erfindungsgemäßen Produkte zeigen die gewünschte Löslichkeit, Stabilität und Absorption. Die bevorzugten Verbindungen hydrolysieren rasch und vollständig im Körper und ergeben das ursprüngliche amphotere Cephalosporin der Formel II;

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dies ist bei den entsprechenden Derivaten aus Formaldehyd, Acetaldehyd oder Aceton nicht der Fall, welche völlig, aber unerwünscht langsam hydrolysieren. Die erfindungsgemäßen Verbindungen beseitigen somit die Probleme der Instabilität bei hohen pH-Werten und der häufigen relativen Unlöslichkeit in der Zwitterionenform des amphoteren Cephalosporins der Formel II.

Bei den erfindungsgemäßen bevorzugten Ausführungsformen ist der Aldehyd mit saurer Funktion ausgewählt unter:

H-C

SO₃Na

S-Formyl^-furansulfonsäure-Natriumsalz,

CHO

o-Benzaldehydsulfonsäure,

CHO

OCH.

4-Methoxybenzaldehyd-3-sulfonsäure,

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4-Hydroxybenzaldehyd-3-sulfonsäure,

CHO

CHO

OCH₂COOH

CH₂COOH

ο- und p- Formylphenoxyessigsäure

0OH

5-Formyl-salicylsäure CHO

CH=CHCOOH p-Formyl-zimtsäure,

OCH - COOH Glyoxalsäure

COOH

Phthalaldehydsäure,

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CHO

COOH p-Formyl-benzoesäure

OHC-CH SO Na

Acetaldehydsulfonsäure-Natriumsalz und

OHC - CH(SO₃Na)₂

Acetaldehvd-disulfonsäure-Natriumsalz

Weitere bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung sind die

2 Verbindungen der Formel I, worin A Wasserstoff ist, R von einem der obengenannten Aldehyde abgeleitet und am bevorzugtesten

oder —

ist und R*

w—N

-CH

3 oder

bedeutet.

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to

Die erfindungsgemäßen Verbindungen lösen das Problem, relativ wasser-unlösliche (weniger als 125 mg/ml) amphotere, in 3-Stellung thiolierte Cephalosporine für intravenöse Injektionen zu formulieren, wofür echte Lösungen benötigt werden, welche eine Konzentration von etwa 250 mg in nur 1 oder 2 Milliliter für Bolus-Injektion aufweisen. Darüber hinaus kann eine solche Dosierungsform auch als Trockenfüllung (nur ein Fläschchen mit Pulver) vertrieben werden, welche kurz vor der Verwendung aufbereitet werden, indem man steriles Wasser zugibt, aber zu diesem Zeitpunkt muß sie sich innerhalb von wenigen Minuten völlig, auflösen, um für eine solche Verwendung geeignet zu sein.

Wenn man darüber hinaus die Verbindung (nach einer derartigen Aufbereitung) zu einem größeren Volumen Infusionsflüssigkeit für intravenösen Tropf gibt, wobei sich eine Konzentration im Bereich von 10 bis 25 mg/ml ergibt, darf die Verbindung über den Zeitraum von 4 bis 6 Stunden, der für die Infusion benötigt wird, nicht weniger als 10 % ihrer Bioaktivität verlieren.

Amphotere in 3-Stellung thiolierte Cephalosporine, welche in Zwitterionenform eine Wasserlöslichkeit von weniger als etwa 125 mg/ml aufweisen sind deutlich nicht geeignet und können darüberhinaus (im Gegensatz zu ihren nicht-amphoteren Gegenstücken, wie Cephalotin etc.) im allgemeinen nicht in gewöhnliche, lösliche Natriumsalze umgewandelt werden, da der benötigte pH so hoch ist, daß er Zersetzung verursacht und man außerdem der Ansicht ist, daß die freie Aminogruppe die bei diesem pH existiert, die Zersetzung noch katalysiert.

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- Up -

Die Erfindung schafft auch ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel I:

CH₂-S-R³

COOR^J

worin

A Wasserstoff, Hydroxy, Methyl oder Methoxy, R Wasserstoff, Natrium oder Kalium bedeuten,

2
R Carboxyl oder 2-Furyl oder ein aliphatischer,

aromatischer oder heterocyclischer Rest ist, an den auch eine stark saure Gruppe in Form ihres Natrium- oder Kaliumsalzes gebunden ist, und ;

R die Bedeutungen 1,2,3-Triazol-5-yl, Tetrazol-5-yl, l,2,4-Thiadiazol-5-yl, 1,3 ,4-Thiadiazol-2-yl, 1,3 ,4-Oxadiazol- _' 3-yl oder 1,2,4-Triazol-5-yl besitzt, wobei jede dieser Gruppen:

unsubstituiert oder mit einer oder zwei Niedrigalkylgruppen mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen substituiert sein kann, das j

dadurch gekennzeichnet ist, daß man

(1) eine wässrige Suspension eines amphoteren Cephalosporins der Formel II oder ein Solvat oder Hydrat davon mit _;

2 2

einem Aldehyd der Formel R CHO behandelt, worin R die

oben angegebenen Bedeutungen besitzt, und soviel wasserlösliche Natrium- oder Kaliumbase zugibt, daß der pH der Reaktionsmischung auf etwa 5,5 bis 8, und bevorzugt pH 6,2 bis 7,2, erhöht wird, und um in Lösung die gewünschte Verbindung der Formel I zu bilden, und

(2) diese Verbindung aus dieser Lösung gewinnt.

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Die Verbindungen der Formel I haben ein asymmetrisches Zentrum am Kohlenstoffatom, das an die beiden Stickstoffatome gebunden ist. Somit können die Verbindungen der Formel I als DL-Gemisch oder als einzelne D- oder L-Isomere vorliegen.

Das in Stufe (1) des vorgenannten Verfahrens verwendete Cephalosporin-Ausgangsmaterial kann in jeder Form des amphoteren Cephalosporins der Formel II vorliegen, einschließlich in Form der freien Säure des Zwitterions oder ι als Hydrat oder Solvat dieses Zwitterions.

! Die Konzentration des amphoteren Cephalosporin-Ausgangs-' materials ist nicht kritisch, und man erhält gute Ergebnisse ^; mit Konzentrationen zwischen etwa 25 bis 300 mg Cephalosporin-

■ Ausgangsmaterial pro Milliliter Lösungsmittel. Das Ausgangsmaterial ist bevorzugt zu einem feinverteilten Zustand gemahlen und gesiebt, am bevorzugtesten ist es zu einer Teilchengröße

■ von weniger als 0,074 mm (200 mesh) gemahlen, um die Oberflächenausdehnung und die Reaktionsgeschwindigkeit zu erhöhen.

Das amphotere Cephalosporin-Ausgangsmaterial wird in Wasser aufgeschlämmt, so daß es eine wässrige Suspension bildet. Eine Alternative zur Verwendung einer wässrigen Suspension in Stufe (1) wäre es, das Cephalosporin-Ausgangsmaterial in einem organischen Lösungsmittel zu suspendieren, welches (1) ein Lösungsmittel für das Alkalimetallsalz-Endprodukt darstellt, (2) mit dem Aldehyd mischbar ist, (3) bezüglich des Cephalosporin-Ausgangsmaterials und Endprodukts chemisch inert ist und (4) aus dem Endprodukt, beispielsweise durch mildes Trocknen, leicht entfernbar ist, Beispiele organischer Lösungsmittel, die verwendet werden können, sind Dimethylsulfoxyd und Dimethylformamid. Wegen der Schwierigkeit, Rückstände des organischen Lösungsmittels aus dem Alkalimetallsalz-Endprodukt zu entfernen, wird das Ausgangsmaterial bevorzugt als wässrige Suspension verwendet.

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Nachdem man eine Suspension des Cephalosporin-Ausgangsmaterials erhalten hat, wird das gewünschte Alkalimetallsalz • der Formel I in Lösung durch Zugabe des Aldehyds und einer Menge wasser-löslicher Alkalimetallbase, bevorzugt einer . Natrium- oder Kaliumbase, die ausreicht, den pH der Reaktionsmischung auf einen Wert zwischen etwa 5,5 und 8 zu erhöhen, gebildet. Wenn der pH auf einen Wert innerhalb dieses Bereichs angehoben wird, wird das Alkalimetallsalz des Reaktionsprodukts, des amphoteren Cephalosporins und des ! Aldehyds gebildet und geht in Lösung über.

■ Die Temperatur bei der Stufe (1) durchgeführt wird, ist nicht kritisch. Die Reaktion kann bei Raumtemperatur durchgeführt werden, aber höhere und niedrigere Temperaturen können verwendet werden, ι
sind bevorzugt.

wendet werden, und Temperaturen im Bereich von 50 bis 60 C

Man benötigt etwa 1 Mol des Aldehyds pro Mol Cephalosporinausgangsmaterial, aber der Aldehyd wird bevorzugt etwas in Überschuß über die theoretische Menge verwendet, um eine vollständige Umsetzung sicherzustellen, d.h. in einem geringen molaren Überschuß. Das bevorzugteste Verhältnis von Aldehyd zu Cephalosporin-Ausgangsmaterial ist etwa 1,3 bis 1,4 : 1 und oft wird ein Verhältnis von 1 :. 1 bevorzugt.

Die Alkalimetallbase kann jede wasserlösliche Base sein, die (1) Alkalimetallkationen liefern kann, bevorzugt Natrium- oder Kalium-Ionen, und (2) den pH der Reaktionsmischung auf zwischen etwa 5,5 und 8, am bevorzugtesten etwa 6,2 bis 7,2 erhöhen kann. Aufgrund der gewünschten Löslichkeitseigenschaften bevorzugte Basen sind Natrium- oder Kaliumhydroxyd. Der R -S- Rest der Verbindung I kann bei hohem pH abgespalten werden. Deshalb wird die Base so zu der Reaktionsmischung gegeben, daß der pH nicht über 8 erhöht werden.kann. Bevorzugt wird die Base in Form einer wässrigen Lösung verwendet und kann langsam unter Rühren zu der Reaktionsmischung gegeben

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werden, bis sich durch Messung des pH-Wertes ergibt, daß die Reaktion vollständig ist, sowie durch die Bildung einer Lösung oder nahezu einer Lösung. Die Menge der verwendeten Base ist nicht kritisch, aber bevorzugt wird etwa 1 Mol Base pro Mol Cephalosporin-Ausgangsmaterial verwendet.

Um beste Ergebnisse zu erhalten, filtriert man die nach Beendigung der Stufe (1) erhaltene Lösung ab, um vor der Gewinnungsstufe (2) feste Verunreinigungen zu entfernen. Vor dem Abfiltrieren kann die Lösung gegebenenfalls mit Aktivkohle behandelt werden, um irgendwelche gefärbten Verunreinigungen leichter zu entfernen.

Das gewünschte Produkt der Formel I wird dann aus der wässrigen oder nicht-wässrigen Lösung beispielsweise durch Ausfällung oder Lyophilisieren gewonnen. Die Ausfällung des Alkalimetallsalzes kann durch Zugabe eines organischen Lösungsmittels, in dem das gewünschte Salz unlöslich ist, d.h. einem Nichtlösungsmi tti=l,^erfol'?^en· Solche Nichtlösungsmittel sind beispielsweise Isopropanol, n-Propanol, t-Butanol und Acetonitril.

Das in der Ausfällungsstufe zu verwendende Lösungsmittel sollte unter Bedingungen, die nicht daz.u führen, daß irgend eine bemerkenswerte Zersetzung des Alkalimetallsalzes eintritt, leicht entfernbar sein. Das bevorzugteste Nichtlösungsmittel ist Isopropanol. Das Nichtlösungsmittel kann zu der sich aus Stufe (1) ergebenden Lösung gegeben werden, als Alternative und bevorzugt gibt man jedoch die Lösung, die das gewünschte Alkalimetallsalz enthält, unter Rühren zu einem großen Überschuß des Nichtlösungsmittels. Das Alkalimetallsalz der Formel I wird dann durch Filtrieren gewonnen, mit einem geeigneten organischen Lösungsmittel, beispielsweise Isopropanol, gewaschen und auf herkömmliche Weise, zum Beispiel durch

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Trocknen im Vakuum bei 50 bis 56 C während 24 bis 48 Stunden oder Trocknen an der Luft bei 60 C während 48 Stunden, getrocknet. Als Alternativverfahren zur Gewinnung des Endproduktes durch Ausfällung kann das Salz der Formel I auch durch Lyophilisation der in Stufe (1) hergestellten Lösung gewonnen werden.

Bei einem Alternativverfahren zur Herstellung der Verbindüngen der Formel I wird

(1) eine Suspension des amphoteren Cephalosporins oder eines ^; Solvats oder Hydrats davon in einem geeigneten inerten ; organischen Lösungsmittel gebildet, wobei dieses Lösungs-' mittel ein Lösungsmittel für das Triäthylaminsalz des Aldehyd-Reaktionsprodukts des amphoteren Cephaolsporins und ein Nicht-Lösungsmittel für das Alkalimetallsalz der Formel I darstellt;

(2) die Suspension mit dem Aldehyd und ausreichend Triäthyl-

; amin behandelt, um in Lösung das Triäthylaminsalz des

Aldehydreaktionsprodukts des amphoteren Cephalosporins ■ zu bilden; und

j (3) das gewünschte Alkalimetallsalz der Formel I durch Zugabe : einer im Lösungsmittel löslichen Natrium- oder Kaliumbase ausgefällt.

Das Ausgangsmaterial wird in einem inerten organischen Lösungsmittel aufgeschlämmt, das ein Lösungsmittel für das Triäthylaminsalz oder das Aldehyd-Reaktionsprodukt des amphoteren

' Cephalosporins ist, jedoch ein Nichtlösungsmittel für das gewünschte Alkalimetallsalz der Formel I darstellt. Das für die Stufe (1) gewählte Lösungs^mi^ttel sollte bevorzugt leicht, unter Bedingungen, die nicht zu einer nennenswerten Zersetzung

^; des Endprodukts führen, aus dem Endprodukt entfernt werden

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können. Für die Stufe (1) geeignete Lösungsmittel können ■ durch einen einfachten Test bestimmt werden.

Die Suspension, die sich in Stufe (1) gebildet hat, wird dann , mit einem Aldehyd, bevorzugt mit einem molaren Überschuß und am bevorzugtesten mit etwa 1,3 bis 1,4 Mol Aldehyd pro Mol Cephalosporin-Ausgansmaterial und ausreichend Triethylamin behandelt, damit sich in Lösung das Triäthylaminsalz des cyclischen Reaktionsprodukts des Aldehyds und des amphoteren Cephalosporins bildet. Bevorzugt wird die Reaktionsmischung mindestens etwa 30 Minuten gerührt, um eine vollständige Umsetzung zu gewährleisten. Die verwendete Menge Triäthylamin ist nicht kritisch, aber bevorzugt verwendet man 1 Mol pro Mol Cephalosporin-Ausgangsamterial. Die Reaktionsstufe (2) wird am besten bei Raumtemperatur durchgeführt, aber es können auch höhere oder niedrigere Temperaturen gewählt werden, wobei sich eine entsprechende Verringerung oder Erhöhung der Reaktionszeit ergibt.

Nachdem sich in Stufe (2) eine Lösung oder nahezu eine Lösung gebildet hat, wird die Reaktionsmischung bevorzugt mit Aktivkohle behandelt und filtriert, wie in dem zuerst beschriebenen Verfahren ausgeführt.

Das gewünschte Alkalimetallsalz der Formel I kann dann aus der Lösung von Stufe (2) durch Zugabe eines im Lösungsmittel löslichen Natrium- oder Kaliumsalzes gewonnen werden. Die bevorzugten Salze sind Natrium- oder Kaliumsalze organischer Säuren mit zwischen etwa 2 und 18 Kohlenstoffatomen, beispielsweise lösungsmittel-lösliche Salze von Säuren wie 2-Äthylhexancarbonsäure, Capronsäure, Oleinsäure, Glycolsäure, Propionsäure, Essigsäure, etc.

Bevorzugte Salze für das Methanol-Lösungsmittelsystem sind Natrium- oder Kalium-2-äthylhexanoat, am bevorzugtesten Lösungen dieser Salze in einem mit Methanol mischbaren

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organischen Lösungsmittel, wie Isopropanol. Die bevorzugtesten Alkalimetallsalze sind Lösungen von Natrium- oder Kalium-2-äthylhexanoat in Isopropanol. Das Alkalimetallsalz gibt man, bevorzugt langsam und unter Rühren, in ausreichender Menge zu, um eine maximale Menge Niederschlag aus der Lösung zu erhalten. Nach vollständiger Ausfällung wird die Reaktionsmischung gerührt, bevorzugt mindestens etwa 1 Stunde, und dann abfiltriert. Der Niederschlag wird mit einem geeigneten organischen Lösungsmittel, beispeilsweise Methanol, gewaschen und auf herkömmliche Weise getrocknet, beispielsweise im , Vakuum während 24 bis 48 Stunden, bei 50 bis 60 C oder an der Luft während 48 Stunden bei 60 °C.

Das zweite Verfahren kann auch ohne Verwendung von Triäthylamin in Stufe (2) durchgeführt werden. Bei diesem veränderten Verfahren wird die Suspension des amphoteren Cephalosporins oder eines Solvats oder Hydrats davon, bevorzugt das Methanoloder Propylenglycolsolvat oder hydratisierte Formen, und am bevorzugtesten das Methanolsolvat, in einem inerten, organischen Lösungsmittel suspendiert, welches für das Produkt der Formel I ein Nichtlosungsmittel ist, bevorzugt Methanol, und die Suspension wird dann mit dem Aldehyd behandelt, bevorzugt in einem molaren Überschuß, und einer im Lösungsmittel löslichen Natrium- oder Kaliumbase, wobei diese Base in ausreichender Menge zugegeben wird, um den pH der Reaktionsmischung auf zwischen etwa 5,5 und 8 zu erhöhen. Als Basen werden bevorzugt die Natrium- oder Kaliumsalze verwendet, die für das zweite Verfahren vorstehend als bevorzugt aufgeführt sind. Bei dem abgeänderten Verfahren geht das Cephalosporin-Ausgangsmaterial in Lösung und das unlösliche Alkalimetallsalz fällt dann nahezu sofort aus. Da nach der vollständigen Reaktion keine Lösung erhalten wird, bevorzugt man,die Reaktionsmischung bis zu mehreren Stunden zu rühren und auf etwa 4 5 bis 50 C zu erhitzen, um maximale Ausbeuten an Endprodukt zu erhalten. Das feste Produkt wird durch Filtrieren gesammelt, gewaschen

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und getrocknet, wobei sich das gewünschte Salz der Formel I ι

ergibt.

Die erfindungsgemäßen Alkalimetallsalze können zur Herstellung pharmazeutischer Formulierungen des amphoteren Cephaolsporins verwendet werden, die in festem Zustand zufriedenstellend wärmestabil sind, eine hohe Löslichkeit in Wasser haben, eine zufriedenstellende Stabilität in Wasser zeigen, bei intravenöser oder intramuskulärer Injektion die Muskeln oder Venen nur geringfügig oder gar nicht reizen, und in vivo sowohl als auch in vitro eine ausgezeichnete antibakterielle Aktivität gegen gram-positive und gram-negative Bakterien aufweisen.

Die Natrium- und Kaliumsalze der Formel I können in Wasser gelöst werden, wobei sich relativ konzentrierte Lösungen von mindestens 250 mg/ml Aktivität ergeben. Konzentrationen von 250 mg/ml Aktivität (pH 5,7 bis 6,8) dieser Salze, haben zufriedenstellende Stabilitätseigenschaften in Wasser.

In verdünnten wässrigen Lösungen hydrolysieren die erfindungsgemäßen Verbindungen zu dem ursprünglichen amphoteren Cephalosporin der Formel I. In sauren wässrigen Lösungen jeglicher Konzentration hydrolysieren die erfindungsgemäßen Verbindungen rasch zu diesem ursprünglichen Cephalosporin. Aufgrund dieser Eigenschaft sind sie zur Reinigung des ursprünglichen amphoteren Antibiotikums brauchbar, beispielsweise können sie in fester Form mit nicht-wässrigen Lösungsmitteln, gewaschen werden, um Verunreinigungen zu entfernen, die in solchen Lösungsmitteln löslich sind, und können nach einer deartigen Behandlung leicht wieder in das ursprüngliche amphotere Antibiotikum umgewandelt werden.

Die Aktivität der Verbindungen der Formel I ist im wesentlichen der des ursprünglichen amphoteren Cephalosporins äquivalent.

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Gemäß einer anderen Ausführungsform schafft die vorliegende Erfindung ein pharmazeutisches Mittel, das nach Aufbereitung mit Wasser als parenteral verabreichbare antibiotische Formulierungsform verwendet werden kann, wobei dieses Mittel eine Verbindung der Formel I und eine feste pharmazeutisch verträgliche, wasserlösliche organische Säure in geeigneter Menge enthält, daß der pH des Mittels nach Aufbereitung mit Wasser zwischen etwa 5,5 und 7,5 liegt.

j Die trockene Mischung von Salz der Formel I und organischer

: Säure in dem obengenannten Mittel, kann mit Wasser aufbe-

reitet werden, so daß sich eine hohe Konzentration, nämlich ι bis zu wenigstens 250 mg/ml ergibt, welche Lösung dann zur ; parenteralen Verabreichung geeignet ist. Das erfindungsgemäße Mittel kann auch hergestellt werden, indem man eine

Verbindung der Formel I mit einer ausreichenden Menge einer } pharmazeutisch verträglichen, wasserlöslichen organischen '. Säure vermischt, so daß der pH des Mittels nach Aufbereitung mit Wasser zwischen etwa 5 und 6 liegt.

Die in diesem Mittel verwendete organische Säure kann jede

nicht-toxische, wasserlösliche, feste organische Säure sein. [ Beispiele für geeignete Säuren sind Zitronensäure, Weinsäure, ' Glycinhydrochlorid, Ascorbinsäure, Bernsteinsäure, und der-, gleichen. Die zur Verwendung in dem erfindungsgemäßen Mittel bevorzugteste Säure ist Zitronensäure.

Die genauen Anteile an Verbindung der Formel I und fester organischer Säure sind abhängig νση den physikalischen und chemischen Eigenschaften der gewählten Säure, beispielsweise der Azidität, Löslichkeit, etc. Im allgemeinen wurde gefunden, daß der gewünschte pH-Bereich nach Aufbereitung mit Wasser von 5 bis 6 erreicht wird, wenn die organische Säure in einer Menge von etwa 4 bis 6 Gew.-%, bezogen auf die Verbindung der Formel I, verwendet wird.

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Sowohl die Verbindungen der Formel I als auch die obengenannten Mittel sind starke antibakterielle Mittel, die sowohl zur parenteralen als auch zur oralen Verabreichung bei der Behandlung von Infektionskrankheiten bei Geflügel und Tieren und auch beim Menschen, die durch gram-positve und gram-negative Bakterien versacht werden, brauchbar sind. Die Verbindungen und Mittel sind auch als Futtermittelzusätze bei Tieren und zur Behandlung von Mastitis bei Rindern geeignet.

Die erfindungsgemäßen Salze und Mischungen von Salzen und organischen Säuren können in pharmazeutische Mittel formuliert werden, die zusätzlich zu dem aktiven Bestandteil einen pharmazeutisch verträglichen Träger oder ein Verdünnungsmittel enthalten. Die Verbindungen können entweder oral oder parenteral verabreicht werden, wegen ihrer hohen Löslichkeit in Wasser sind sie für die parenterale Verabreichung besonders geeignet. Bei der Behandlung von bakteriellen Infektionen beim Menschen können die Verbindungen und Mittel in einer Menge von etwa 5 bis 20 mg/kg/Tag in aufgeteilten Dosen, beispielsweise 3 oder 4-mal täglich, verabreicht werden. Sie werden in Dosierungseinheiten verabreicht, die beispielsweise 125, 250 oder 500 mg aktiven Bestandteil enthalten.

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Herstellung des Ausgangsmaterials

Herstellung von 7-/D- d--Amino- cL- (p-hydroxyphenyl) -acetamido7-3-(1,2,S-triazol-S-ylthiomethyl)^-cephem^-carbonsäure-Methanolsolvat

In einen Dreihalskolben, der mit Rückflußkühler, Rührer und Thermometer ausgestattet ist, gibt man eine gut durchgemischte Mischung von 8,36 g (0,05 Mol) D-(-)-p-Hydroxyphenylglycin und 3,02 g (0,075 Mol) Magnesiumoxyd in 120 ml 50 %-igem wässrigem Dioxan. Man rührt die Mischung 1 Stunde und behandelt sie dann mit 10,74 g (0,075 Mol) t-Butoxycarbonylazid. Man rührt die Mischung dann und erhitzt während 17 Stunden unter N„ auf 45 bis 50 C. Man verdünnt die Lösung mit 400 ml H₃O und extrahiert zweimal mit 300 ml Äthylacetat. Die wässrige Phase wird mit 10 %-iger Zitronensäurelösung auf pH 4 angesäuert und mit NaCl gesättigt. Man extrahiert die wässrige Mischung mit 3 mal 400 ml Äthylacetat. Man trocknet die Lösung über Na~S0. und engt das Lösungsmittel ein. Den Rückstand zerreibt man mit "Skellysolve B" wobei sich D-■■X't-Butoxycarbonylamino-.oC - (p-hydroxyphenyl)-essigsäure als ein Feststoff ergibt, der 10,4 g wiegt (78,5 %).

Zu einer Suspension von 7-Amino-3-(l,2,3-triazol-5-ylthiomethyl) 3-cephem-4-carbonsäure (6,0 g, 19,0 mMol) in 100 ml trockenem Methylenchlorid gibt man 8,5 ml 1,1,1,3,3,3-Hexamethyldisilazan (40,9 mMol). Man rührt die Mischung und erhitzt 4 Stunden am Rückfluß, wonach man eine klare Lösung erhält. Das Lösungsmittel wird eingeengt und das Rückstandsöl über Nacht bei Raumtemperatur unter Hochvakuum gehalten. Der schaumige Rückstand wird, in 85 ml trockenem Tetrahydrofuran (THF) gelöst und auf etwa -15 C gekühlt, bevor er in die nächste Reaktionsmischung gegeben wird.

7 0 9 8 1 S / 1 1 6 4

m/17 234 -*β-- zb4b 144

4,4 g (16,5mMol) D-cC -t-Butoxycarbonylamino-O^- (4-hydroxyphenyl) essigsäure löst man in 145 ml trockenem THF. Man rührt die Lösung und kühlt sie auf -20 C.

1,6 g (16mMol) N-Methylmorpholin und 2,3 g (16,8 mMol) Isobutylchlorformiat gibt man nacheinander derart zu, daß die Temperatur der Mischung nicht über -10 C erhöht wird. Dann rührt man die sich ergebende Mischung 20 Minuten bei -12 ° bis -15 °C, kühlt dann auf -20 °C und gibt die THF-Lösung der silylierten 7-Amino-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure auf einmal.zu. Die Temperatur steigt auf etwa -12 C. Man hört mit dem Kühlen von außen auf, bis die Temperatur auf etwa 0 ⁰C gestiegen ist. Von diesem Zeitpunkt an verwendet man ein Eiswasserbad und rührt die Mischung drei Stunden bei 2 bis 3 C. Danach hört man 1 Stunde mit dem Kühlen von außen auf, und die Temperatur steigt auf 20 . Man gibt insgesamt 30 ml Methanol zu und rührt 15 Minuten bei Raumtemperatur weiter. Nach Einengen der Lösungsmittel bei verringertem Druck suspendiert man den Rückstand in 300 ml Äthylacetat. Der suspendierte Feststoff wird abfiltriert (11,8 g). Die Äthylacetatlösung wird dreimal mit 5 %-iger NaHCO₃ Lösung extrahiert. Die vereinigten Natriumbicarbonatextrakte werden in einem Eisbad gekühlt, mit Äthylacetat beschichtet und mit 42,5 %-iger H-PO. auf pH 2,5 angesäuert. Die Phasen werden geschüttelt und dann getrennt. Die Äthylacetatlösung wird dann getrocknet, indem man sie durch Natriumsulfat gibt und dann auf etwa 15 bis 20 ml einengt. Diese Lösung gibt man dann tropfenweise zu gerührtem Cyclohexan ( -- 400 ml) in eine Erlenmeyerkolben. Nachdem man 1/2 Stunde gerührt hat, wird der ausgefällte Feststoff durch Filtrieren gesammelt. Die gesammelte feste l-/_ D-oC't-Butoxycarbonylamino- X- (p-hydroxyphenyl) -acetamido/-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl) -3-cephem-4-carbonsäure wird an der Luft getrocknet, sie wiegt 1,7 5 g.

3,5 g 7-/ D-.rt-t.-Butoxycarbonylamino-oC- (p-hydroxyphenyl) - acetamido/^-(1,2 ,3 ,-triazol-5-ylthi'omethyl) -3-cephem-4-carbonsäure

709815/1 164

M/17 234 * - «■ - 26 A 5 1 44

wird in 80 ml 98 - 100 %-iger HCOOH gelöst und 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die HCOOH wird bei verringertem Druck eingeengt (Badtemperatur nicht höher als 40 C) und schließlich dreimal mit 30 ml Toluol azeotrop destilliert. Der Feststoff wird über Nacht im Vakuum über P₀O getrocknet.

^ 5

Man erhält insgesamt 3,5 g Schaum. Der Schaum, 2 g, wird mit 300 ml H₂O: CH₃OH (8 : 2) gerührt. Etwas Feststoff, (0,3 g) werden vom Lösungsmittel abfiltriert, mit 700 mg Aktivkohle "Darko KB" behandelt, durch Diatomeenerde ("Celite") filtriert und gefriergetrocknet, wobei sich 0,9 g r.ohe 7-/D- o^-AminocL~(p-hydroxyphenyl)-acetamido/-3-(1,2,3-triazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure ergibt. Zur Kristallisation wird das folgende Verfahren verwendet. Eine Suspension von· 0,2 g des rohen Materials in 6 ml 99 %-igem Methanol erhitzt man in einem Reagenzglas zum Sieden. Das Sieden wird unmittelbar unterbrochen und die Schmelze mit Impfkristallen zerrieben. Die Schmelze verfestigt sich zu einer kristallinen Masse. Auf diese Weise erhält man insgesamt 0,211 g 7-/D-CC-amino-pc-(p-hydroxyphenyl)-acetamido/-3-(l,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure aus 0,400 g rohem Material. Das Material wird bei 56 /0,1 mm über P₀O₅ während 20 Stunden getrocknet, Fp. >200 ° (Zers.). Die IR und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur. Das NMR-Spektrum zeigt die Anwesenheit von 1/3 Mol CH₃OH an.

Analyse C_1QH.. _QN^0_c

lö XO D D

O *	H2° *	1/3CH3OH:	N	/10	S	/09
C		H	17	/84	13	/18
44,	83	4,38	15		6
43,	97	4,36

berechnet:
gefunden:

Insgesamt 6,5 g (11,55 mMol) 7-/ D- ·* -t-Butoxycarbonylamino-&*-(p-hydroxyphenyl)acetamidcy-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure löst man in 175 ml 98 - 100 %-iger Ameisensäure unter wasserfreien Bedingungen. Man rührt die

709815/1164

9*

Mischung 2,5 Stunden bei Raumtemperatur. Ein Teil der Lösung, 125 ml, wird bei verringertem Druck zu einem bersteinfarbenen öl eingeengt. Das Öl wird dann 3 mal mit 70 ml Toluol bei verringertem Druck azeotrop destilliert. Der Rückstand wird in 700 ml einer 80 : 20 Lösung von H.O-CH OH suspendiert und 0,5 Stunden gerührt bis sich nahezu aller Feststoff gelöst hat und dann abfiltriert. Das Filtrat wird mit 1,5 g ("Darko") Aktivkohle etwa 20 Minuten behandelt. Die Aktivkohle wird durch ein "Celite"-Polster abfiltriert und die Lösung wird dann in 9 getrennten 100 ml Rundbodenkolben gefriergetrocknet. Das gefriergetrocknete Material .wiegt 2,415 g. Es wird in Chargen von O,200 g wie oben beschrieben umkristallisisert, wobei man insgesamt 0,923 g 7-/D- .-/ -Amino- -C- (p-hydroxyphenyl) ■ acetamido/^-(1,2,3-tr iazol-5-ylthiome thy I)-3-cephem-4-carbonsäure erhält. Das NMR-Spektrum steht in Einklang mit der Struktur und zeigt die Anwesenheit von 1/3 Mol CH OH.

Analyse C₁₀H₁₀N^O₁-S₀ . H₀O χ 1/3CH-,OH:

CH NS berechnet: 44,83 4,38 17,10 13,09

gefunden 45,77 4,44 16,61 13,01

44,36 4,34 16,52 13,01

I _

j Herstellung von kristallinem Methanolsolvat von 7-/_ D-o6-Amino-

! cL - (p-hydroxyphenyl) -acetamidc-7-3- (1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)

3-cephem-4-carbonsäure

j 1) 50 g 7-/D-öC-Ämino- oC- (p-hydroxyphenyl) -acetamido_7-3- ! (l,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure ! werden in 250 ml 95 Vol.-% Methanol/Wasser (95 % Methanol) j bei 22 bis 25 ⁰C aufgeschlämmt.

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2) Man gibt unter raschem Rühren konz. Chlorwasserstoffsäure bis zu einem pH von 1,3 bis 1,5 zu. Man erhält eine Lösung oder nahezu eine Lösung.

3) Man stellt den pH mit Triäthylamin auf 1,7 ein.

4) Man gibt 7,5 g aktivierte Aktivkohle ("Darco G-60") zu und schlämmt 0,5 Stunden auf.

5) Man entfernt die Aktivkohle durch Filtrieren und wäscht mit 75 ml Methanol, das man zu dem Filtrat gibt.

Die Stufen 2, 3 und 4 sollten innerhalb 5 Stunden beendet sein.

6) Die vereinigte Waschflüssigkeit und das Filtrat aus Stufe 5 wird rasch gerührt. Man gibt während 5 Minuten bis zu einem pH 4,5 Triäthylamin zu. Die Kristallisation beginnt in etwa 1 bis 3 Minuten. Die Mischung wird 1 Stunde aufgeschlämmt.

7) Die Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt, mit 100 ml Methanol gewaschen und im Vakuum bei 56 C während 24 Stunden getrocknet. Bio-Ausbeute 75 bis 90 %; Biotest = 850-900 T/mg;

NMR-IR = im Einklang mit der Struktur für 1 Mol Methanol; % H₂O (nach Karl Fischer) 2 - 4,0.

Herstellung von kristallinem 1,2-Propylenglycolsolvat von 7-/D- .^-Amino-<x~(p-hydroxyphenyl)-acetamido/^-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure

1) 25 g des wie oben .hergestellten Methanolsolvats von 7-/D- o^-Amino- >%-(p-hydroxyphenyl)-acetamid£7~3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure werden in 150 - 200 ml 75 Vol.-% Propylenglycol/Wasser bei 20- 25°C

709815/116 4

SG

aufgeschlämmt.

! ' 2) Konzentrierte Chlorwasserstoffsäure wird bis zu einem i

pH von 1 - 1,2 zugegeben, um eine Lösung oder nahezu eine

Lösung zu erhalten.

3) Man gibt unter raschem Rühren langsam Triäthylamin zu, um einen pH von 1,7 bis 1,8 zu erhalten.

4) Man gibt 5 g "Darco G-60" zu und schlämmt die Mischung _: 0,5 Stunden auf. Die Aktivkohle wird durch Filtrieren entfernt (das Filtrieren ist langsam, es wird ein 18,5 cm SS Nr. 576 Papier vorgeschlagen). Der Aktivkohlefilterkuchen wird mit 40 ml 75 Vol.-% Propylenglycol-Wasser gewaschen und die Waschflüssigkeit wird zu dem Filtrat gegeben.

Die Stufen 2, 3 und 4 sollten innerhalb 5 Stunden vollendet sein.

5) Man gibt zu der rasch gerührten Filtrat-Waschflüssigkeitsmischung aus Stufe 4 während 10 Minuten Triäthylamin bis zu einem pH 4,5 zu. In etwa 1 bis 3 Minuten bilden sich Kristalle. Die Mischung wird 1 Stunde aufgeschlämmt.

6) Die Kristalle des Propylenglycolsolvats der 7-/D- ν,-Aminc— Ch- (p-hydroxyphenyl) -acetamid£7~3- (l,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure werden durch Filtrieren gesammelt. Die Filtration ist langsam (es wird ein 12,5 bis 15,0 cm SS No. 604 Papier vorgeschlagen). Die Kristalle werden nacheinander mit 50 ml 7 5 %-igem Propylenglycol, 50 ml Methanol, 50 ml Aceton gewaschen und bei 56 C während 24 Stunden im Vakuum getrocknet. Bioausbeute; 80 - 95 %.

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Eigenschaften des 7-/D- ^-Amino- O^ - (p-hydroxyphenyl) -acetamido/-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)^-cephem^-carbonsäure-Propylenglycolsolvats

a) Biotest = 850 - 900 T/mq

b) IR-NMR in Einklang mit einer Struktur die 1,0 bis 1,5 Mol Propylenglycol (14-19 % Propylenglycol·) enthält. Kein Verlust der 3-Triazol-Seitenkette ersichtlich.

c) % Wasser, nach Karl Fischer =1-3,0

d) Kristallmorphologie = 100 % kristallin, (Mikrokristalle, | Triangelform).

e) Fp = 182 - 184 °C (D, heiße Phase).

f) \di ^⁵ (C = 1 %, In-HCl) = +53°

g) Wasserlöslichkeit = annähernd 10 mg/ml in Wasser von 23 C. h) Verlust der Bioaktivität bei Lagerung bei erhöhten Temperaturen: 100 ⁰C, 24 Stunden = <6 %, 48. Stunden = <12 %,

56 °C, 1 Monat = <10 %.

Herstellung von kristallinem Methanolsolvat aus kristallinem Propylenglycolsolvat

Das wie oben beschrieben hergestellte Propylenglycolsolvat von 7-/E)- cS'-Amino-ÖL- (p-hydroxyphenyl) -acetamido7-3-(1,2 ,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (50 g) wird in 250 ml 95 Vol.-% Methanol/Wasser bei 22 bis 25 °C aufgeschlämmt. Man gibt unter raschem Rühren konzentrierte HCl bis zu einem pH von 1,1 bis 1,5 zu, wonach man eine Lösung oder nahezu eine Lösung erhält. Der pH wird mit Triäthylamin auf 1,7 eingestellt und man gibt 7,5 g Aktivkohle zu, wobei man 0,5 Stunden aufschlämmt. Die Aktivkohle wird durch Abfiltrieren entfernt und mit 75 ml Methanol gewaschen. Die Waschlösung gibt man dann zum Filtrato (Die Verfahrensstufen von der Zugabe der HCl bis zu diesem Punkt sollten innerhalb 5 Stunden durchgeführt sein.)

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Die miteinander vereinigte Waschflüssigkeit und das Filtrat werden rasch gerührt und man gibt während 5 Minuten Triäthylamin zu, bis ein pH von 4,5 erreicht ist. Die Kristallisation beginnt in etwa 1 bis 3 Minuten. Man schlämmt die Mischung 1 Stunde auf und entfernt die Kristalle durch Abfiltrieren, wäscht mit 100 ml Methanol und trocknet im Vakuum während 24 Stunden bei 56 °C. Die Bioausbeute beträgt 75-90 %. Biotest = 850-900 /'/mg;

NMR-IR = im Einklang mit der Struktur die 1 Mol Methanol enthält;
% HLO (nach Karl Fischer) =2-4,0.

Herstellung von kristallinem 7-/D-~x-Amino- ο—(p-hydroxyphenyl)-acetamido/^-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure-sesquihydrat

15 g 7-/D-O^-Amino- es.- (p-hydroxyphenyl) -acetamido/^- (1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure-Methanolsolvat werden in 60 ml Wasser aufgeschlämmt. Man erhöht den pH auf 6,5 durch Zugabe von 4n NaOH und gibt die Mischung durch einen Filter mit einer Maschenweite von 0,074 mm Maschenweite (200 mesh)- Die Reaktionsmischung wird bei Raumtemperatur 2 Stunden lang aufgeschlämmt, wobei man während dieser Zeit den pH bei 6,5 aufrechterhält. Die Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt, mit 20 ml Wasser gewaschen und bei 37 C 24 Stunden an der Luft getrocknet, wobei man 11,5 g des kristallinen Titelprodukts erhält.

Biotest = 924 ?Vmg (durchschnittl. % HO, nach Karl Fischer = 5,26).

NMr und IR stehen in Einklang mit der Struktur und zeigen, daß das Produkt kein Methanol, aber eine Spur Propylenglycol enthält.

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S3

Herstellung von kristallinem 7-/D--S. -Amino-^- (ρ-hydroxyphenyl)-acetamido/-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure-Sesquihydrat und Bildung anderer kristalliner Hydrate

7-/Ό- <^--Amino- tC - (p-hydroxyphenyl) -ac et amido/-3- (1,2 ,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure-Methanolsolvat (0,074 mm (200 mesh), 10,O g), das im wesentlichen frei von Propylenglycol . ist, wird in 30 bis 40 ml entionisiertem Wasser bei Raumtemperatur (20 - 25 C) aufgeschlämmt, wobei sich eine wässrige Suspension mit einem pH 3 - 4 ergibt. 40 %-ige NaOH wird unter raschem Rühren langsam zugegeben, um den pH auf 6,3 bis 6,7 zu erhöhen. Bei pH 6,3 bis 6,7 wird die Mischung 2 Stunden aufgeschlämmt. Die Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und bei Raumtemperatur 24 Stunden an der Luft getrocknet, wobei man eine 75 - 80 Gew.-%-ige Ausbeute von 950 - 1000 'j/mg an Kristallen von 7-/D- jC-Amino- ^L- (p-hydroxyphenyl) -acetamido/-3-(1,2,3,triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure-Dihydrat erhält. Die IR und NMR-Analysen stehen in Einklang mit der Struktur und zeigen, daß das Produkt kein Methanol, aber eine Spur Propylenglycol enthält. H„0 (nach Karl Fischer) = 6,56.

Eine Probe des kristallinen Dihydrats wird während 24 Stunden bei 37 °C an der Luft getrocknet, wobei sich das kristal'line Sesquihydrat von 7-/D- X.-Amino- "*■ - (p-hydroxyphenyl) -acetamido_7- -3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure

ergibt.

HO (nach Karl Fischer) = 4,26.

Eine zweite Probe des Dihydrats wird 24 Stunden bei 45 C an der Luft getrocknet, wobei sich das kristalline Sesquihydrat ergibtc .

Η»0 (nach Karl Fischer) = 5,5.

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co

Eine Probe des Dihydrats wird 24 Stunden bei 56 C an der Luft getrocknet, wobei sich das kristalline Monohydrat von 7-/D- rC-Amino-oC-(p-hydroxyphenyl) -acetamido/^-(1,2 ,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure ergibt. H₉O (nach Karl Fischer) =4,38 (berechnete % H₉O für Monohydrat - 3,75) .

Eine Probe des Dihydrats wird 24 Stunden bei Raumtemperatur im Vakuum über P„0^ getrocknet, wobei sich das kristalline Hemihydrat von 7-/D- r^-Amino- x- (p-hydroxyphenyl) -acetamido/-3- (1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)i-3-cephem-4-carbonsäure ergibt, HO (Nach Karl Fischer)= 2,63 (berechnete % HO für das Hemihydrat = 1,91).

Eine Probe des Dihydrats wird 24 Stunden bei 56 C im Vakuum getrocknet, wobei sich das kristalline Hemihydrat ergibt. H₉O (nach Karl Fischer) =1,6-2,0.

D-(-)-2-(3'-Methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycylchlorid-hydrochlorid wird mit hoher Reinheit und Effektivität durch folgendes Verfahren hergestellt:

Etwa 0,06 Mol D-(-)-2-(3'-Methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycin werden in 100 ml Dioxan aufgeschlämmt. Man rührt die Aufschlämmung und leitet COCl₉ (Phosgen) ein, wobei man die Temperatur der Aufschlämmung bei 50 bis 58 C hält. Das COCl₉ wird insgesamt 3,5 Stunden eingeführt. Man erhält eine gelbe Lösung, welche mit Stickstoff gereinigt wird, um überschüssiges COCl zu entfernen. 2,5 Stunden lang wird HCl-Gas durch die Lösung geperlt, diese wird dann gerührt und eine geringe Menge wird mit etwas Äther verdünnt, um einige Kristalle zu erhalten, die als Impfkristalle zu der Charge gegeben werden. Man rührt die Lösung 16 Stunden bei 20 bis 25 C. Die sich ergebende Aufschlämmung von kristallinem D-(-)-2-(3'-Methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycylchlorid-Hydrochlorid wird filtriert um

7 0 9 8 15/1164

M/17 234

264S1U

das Produkt zu sammeln. Der Filterkuchen wird mit Dioxan und

j Methylenchlorid gewaschen und dann in einem Vakuum-Exsikkator . über P₅O₁- getrocknet, wobei man etwa 7 g D- (-) -2- (3' -Methyl-4 ' hydroxyphenyl)-glycylchlorid-hydrochlorid erhält.

2-(3'-Methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycin

Eine Lösung von 59,02 g (0,6 Mol) 75 %-iger Glyoxalsäure in 100 ml Wasser gibt man zu einer Suspension von 54,6 g (0,5 Mol) 2-Methylphenol und 140 ml konz. Ammoniumhydroxyd in : 400 ml Wasser bei Raumtemperatur. Die Temperatur der Mischung steigt auf 37 C. Man rührt die Mischung 65 Stunden bei Raumtemperatur. Die Lösung mit einem Ausgangs-pH von 10,1 wird mit 6 η Chlorwasserstoffsäure auf pH 6,8 eingestellt, wodurch das Produkt kristallisiert. Das Produkt wird durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und im Vakuum über Phosphorpentoxyd getrocknet, wobei man 31,5 g (34,8 %) 2-(3'-Methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycin erhält; Zers. 196 - 199 C. Die IR und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur des gewünschten Produkts. Vergleich: Belgisches Patent 774 029 der Beecham Group Limited, 1972 (Farmdoc 27, 122T), welches einen Schmelzpunkt von 205 bis 207 °C angibt.

Analyse C H₁ -,NO-

	2	O Λ ft H O	C	,66	H	,13	N	,73	Η2°
berechnet:		59	,68	6	,23	7	,47
gefunden:		57	,06	6	,12	7	,67	2,
korrig. für		59	6	7

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j M/17 234 _ J₁^. _

ι 62

D,L-N-Chloracetyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycin

Eine Suspension von 20,2 g (0,112 Mol) DL-2-(3'-Methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycin in 175 ml Wasser stellt man mit 20 %-igem Natriumhydroxyd auf pH 10,3 ein, wodurch sich eine Lösung ergibt. Man kühlt die Lösung in einem Eisbad, gibt auf einmal 38,2 g (0,224 Mol) Chloressigsäureanhydrid zu und hält den pH der Reaktionsmischung bei pH 10, indem man 20 %-iges Natriumhydroxyd zugibt bis man keine weitere pH-Veränderung mehr feststellen kann. Man rührt die Reaktionsmischung weitere 10 Minuten in der Kälte, dann säuert man die Reaktionsmischung mit 6 η Chlorwasserstoffsäure auf pH 2,0 an, wodurch das Produkt kristallisiert. Das Produkt wird durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und an der Luft getrocknet. Umkristallisation aus 200 ml heißem Wasser ergibt 13,7 g (47,4 %) DL-N-Chloracetyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycin. Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur des gewünschten Produkts.

Analyse C,,H NO4Cl .	1 H2°	47	C	5	H	N	,081
		48	,92	5	,118	5	,15
berechnet:			,11		,16	5
gefunden:

D-(-)-N-Chloracetyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycin.

5,0 g (0,0194 Mol) D,L-N-Chloracetyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl) -glycin und 6,1 g (0,0213 Mol) L-Ephenamin löst man in 50 ml Isopropylalkohol, indem man auf einem Dampfbad erhitzt. Man gibt 50 ml Wasser zu und nach Abkühlen kristallisiert das L-Ephenaminsalζ. Es wird durch Filtrieren gesammelt und an der Luft getrocknet.

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234 ' -~ 2645H4

CV

Man suspendiert das Salz in 30 ml Wasser und 50 ml Methylenchlorid und stellt den pH der Mischung mit 2O %-igem Natriumhydroxyd auf pH 10,0 ein. Man trennt die Phasen und extra- ! hiert die wässrige Phase zwei weitere Male mit Methylenchlorid.

Die wässrige Lösung wird dann mit 6n Chlorwasserstoffsäure auf pH 2,0 eingestellt, wodurch das Produkt kristallisiert. Es wird dann durch Filtrieren gesammelt, und im Vakuum über Phosphorpentoxyd getrocknet, wobei man 0,9 g (36,1 %) D-(-)-N-Chloracetyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycin erhält; Fp. 170 - 172 °C,

[cc] J⁴ = 185,9 ° (Cl, 95 % ÄthOH) .

■ Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur ι des gewünschten Produkts.

¹ Analyse C₁₁H₁

ι berechnet:
j gefunden:

l,2-Diphenyl-2-methylaminoäthanol, allgemein Ephenamin genannt (Federal Register, 7. Juni 1951), hat die Struktur

C	,27	4	H	N	,436
51	,21	4	,696	5	/29
51		,77	5

CH - CH I I

OH NH

CH,

Die Verbindung wird auch N-Methyl-l^-diphenyl^-hydroxyäthylamin oder alpha,beta-Diphenyl-beta-hydroxy-N-methyläthylamin, oder l,2-Diphenyl-2-methylamino-l-äthanol genannt.

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M/17 234 -

Dieses Verfahren verwendet nur das Ievo-erythro-Isortiere. Herstellungsverfahren und Umsetzung mit Penicillin G sind in den US-Patentschriften 2 645 638 (V.V. Young) und 2 768 081 (F.H. Buckwalter) beschrieben. Letztere zitiert ältere Literatur wie auch W.B. Wheatley et al., J. Org. Chem., 18(11), 1564-1571 (1953). Es wird nach Sheehan et Al., J. Am. Chem. Soc, 81, 3089-3094 (1959) verwendet, um racemisches Phenoxymethylpenicillin zu spalten; vergl. insbesondere Seite 3091.

D-(-)-(3-Methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycin

11,1 g (0,0431 Mol) D-(-)-N-Chloracetyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl) -glycin vereinigt man mit 100 ml 2n Chlorwasserstoffsäure und kocht die Mischung 1,5 Stunden am Rückfluß. Man kühlt die Lösung und stellt den pH mit 20 %-igem Natriumhydroxyd auf pH 5,0 ein, wodurch das Produkt kristallisiert. Es wird durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und im Vakuum über Phosphorpentoxyd getrocknet, wobei man 7,4 g (94,7 %) D-(-)-2-(3'-Methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycin erhält; Zers. 205 - 209 °C,

[cNij ο=" 152,6 ( C 1, In HCl) .

Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur des gewünschten Produkts.

Analyse

„Η,,

C	,66	H	/13	N	,73	H2O
59	,62	6	/49	7	/78
58	5	7	1,

berechnet:

gefunden:

korrigiert für 1,46 % H₃O:

59,48 5,41 7,84.

709815/1 164

H/17 234 ' -**- 26451U

D-(-)-N-t-Butoxycarbonyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycin

Zu einer Aufschlämmung in 200 ml H„0-Dioxan (1:1) von 7,2 g (0,0397 Mol) D-(-)-2-(3'-Methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycin und 3,2 g (0,08 Mol) pulverisiertem Magnesiumoxyd, die bei Raumtemperatur gerührt wird, gibt man tropfenweise 9,7 g (0,068 Mol) t-Butoxycarbonylazid. Dann erhitzt man die Reaktionsmischung 19 Stunden unter Stickstoffatmosphäre auf 42 bis 45 C und verdünnt dann mit 100 ml Eiswasser. Man beschichtet die Lösung mit Äthylacetat und filtriert ab, um etwas unlösliches Material, das sich abgetrennt hat, zu entfernen. Die wässrige Phase des Filtrats wird abgetrennt und zwei weitere Male mit Äthylacetat extrahiert. Dann wird die wässrige Lösung mit 42 %-iger Phosphorsäure auf pH 5 eingestellt und 5 mal mit Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte werden 3 mal mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel wird bei verringertem Druck entfernt, wobei ein Öl zurückbleibt. Das Öl wird im Vakuum über Phosphorpentoxyd getrocknet, wobei man 10,6 g (95 %) D-(-)-N-t-butoxycarbonyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycin erhält. Das IR-Spektrum steht in Einklang mit der Struktur

der gewünschten Verbindung.

7-/D-2-t-Butoxycarbonylamino- (3_|_-methyl-4 ' -hydroxyphenyl) acetamid£7-3-(l,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4- carbonsäure

i A) Gemischtes Anhydrid

Eine Lösung von 2,8 g (0,01 Mol) D-(-)-N-t-Butoxycarbonyl- \ 2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycin in 100 ml Tetrahydrofuran kühlt man in einem Eis-Salz-Aceton-Bad auf -15 C. ' Man gibt 1,01 g (0,01 Mol) N-Methylmorpholin zu und anschließend 1,37 g (0,01 Mol) Isobutylchlorformiat und rührt die Reaktionsmischung 8 Minuten bei -15 bis -20 C= Es ! fällt sofort ein Niederschlag, von N-Methylmorpholinhydro- ^; Chlorid aus.

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tG

B) Kupplung

3,1 g (0,01 Mol) 7-AmInO-S-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure suspendiert man in 100 ml Wasser und gibt 1,01 g (0,01 Mol) N-Methylmorpholin zu. Man erhält keine vollständige Lösung. Dann gibt man tropfenweise 1,1,3,3-Tetramethylguanidin zu dieser gerührten Lösung bis man eine klare Lösung erhält. Diese wird dann in einem Eisbad auf 4 C gekühlt und bei -15 C zu dem gemischten Anhydrid gegeben. Man entfernt das Kühlbad und rührt die Mischung 1,5 Stunden. Dann entfernt man das Tetrahydrofuran bei verringertem Druck "und beschichtet das wässrige Konzentrat mit Äthylacetat. Man stellt die wässrige Phase mit 42 %-iger Phosphorsäure auf pH 2,0 ein, wodurch unlösliches Material abgetrennt wird. Der Feststoff wird durch Filtrieren gesammelt. Man trennt die wässrige Phase des Filtrats ab und extrahiert noch zweimal mit Äthylacetat. Die vereinigten organischen Extrakte werden zweimal mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel wird bei verringertem Druck entfernt, wobei ein viskoser öliger Rückstand bleibt. Das Öl wird mit "Skellysolve B"_; das eine kleine Menge Diäthyläther enthalt, zerrieben, wobei sich ein Feststoff ergibt. Dieser Feststoff wird durch Filtrieren gesammelt, mit "Skellysolve B" gewaschen und an der Luft getrocknet. Dünnschichtchromatographie (Silicagel; Lösungsmittel 97:3 Aceton-Essigsäure) des Produkts zeigt, daß das Material eine Mischung des gewünschten Produkts und der Seitenkettensäure ist. Dieses Material wird dann 1 Stunde mit 100 ml wasserfreiem Diäthyläther gerührt. Der unlösliche Feststoff wird durch Filtrieren gesammelt und an der Luft getrocknet, wobei man 0,95 g (16,4 %) 7-_i/D-2-t-Butoxycarbonylamino-(3 '-methyl-4 '-hydroxyphenyl)-acetamido/-3-(1,2,S-triazol-ö-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure erhält. Ein Dünnschichtchromatogramm (Silicagel; Lösungsmittel 97:3 Aceton-Essigsäure) zeigt,

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2645U4

M/17 234 - »

daß diese Probe nur eine Spurenmenge der Seitenkettensäure enthält. Das IR-Spektrum steht in Einklang mit der Struktur des gewünschten Produkts.

7-/D-2-t-Butoxycarbonylamino-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)-acetamido7-3-(l,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure

A) Gemischtes Anhydrid

j '

I Eine Lösung von 14,06 g (0,05 Mol) D-(-)-N-t-Butoxycarbonyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)-glycin in 500 ml Tetrahydrofuran kühlt man in einem Eis-Salz-Aceton-Bad auf -15 C. Ί Man gibt 5,06 g (0,05 Mol) N-Methylmorpholin und dann 6,83 g j (0,05 Mol Isobutylchlorformiat zu und rührt die Reaktionsi mischung 10 Minuten bei -13 bis -17 °C. Es fällt sofort ein Niederschlag von N-Methylmorpholin-hydrochlorid aus.

¹ B) Silylester

; Eine Mischung von 8,0 g (0,025 Mol) 7-Amino-3-(1,2,3-triazol-I 5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure, 7,0 ml (0,05 Mol) j Triäthylamin, 6,9 ml (0,0545 Mol) Ν,Ν-Dimethylanilin, 9,5 ml ' (0,075 Mol) Chlortrimethylsilan und 650 ml Methylenchlorid , erhitzt man 3 Stunden zum Rückfluß. Nach der ersten Stunde Rückflußerhitzen gibt man weitere 1,6 ml Chlortrimethylsilan zu. Die trübe Lösung wird gekühlt und das Methylenchlorid bei verringertem Druck entfernt. Den Rückstand [ nimmt man in 500 ml Tetrahydrofuran auf.

^; C) Kupplung

i Die Silylester-Lösung wird in einem Eisbad auf 10 bis 15 C

gekühlt und auf einmal zu der Lösung des gemischten Anhy-¹ drids, die eine Temperatur von -15 C hat, gegeben. Man ent-

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ι Μ/17 234 - *β--

! 6*

I fernt das Kühlbad und rührt die Reaktionsmischung 2 Stunden. Dann gibt man 500 ml Wasser zu und entfernt das Tetrahydrofuran bei verringertem Druck, wodurch sich ein harziges Öl abtrennt. Das Öl wird in Äthylacetat extrahiert und die Phasen werden getrennt. Die wässrige Phase (pH 3,8) wird mit Äthylacetat beschichtet, wodurch sich etwas Feststoff abtrennt. Der Niederschlag wird durch Filtrieren gesammelt, und die wässrige Phase wird vom Filtrat getrennt. Dann j wird die wässrige Lösung auf pH 2,3 mit 4 2 %-iger Phosphor- ! säure eingestellt und wieder mit Äthylacetat extrahiert. ; Die vereinigten Äthylacetatextrakt wäscht man dreimal mit

Wasser, trocknet über Natriumsulfat und entfernt das I Lösungsmittel bei verringertem Druck wobei ein viskoses > Öl zurückbleibt. Man rührt das Öl 1,5 Stunden mit 100 ml

wasserfreiem Diäthyläther, wodurch sich ein Feststoff er- : gibt. Das Produkt wird filtriert, mit wenig wasserfreiem J Diäthyläther gewaschen und an der Luft getrocknet. i Dünnschichtchromatographie (Silicagel, Lösungsmittel 99 : 1 i Aceton-Essigsäure) des Produkts ergibt, daß das Material j eine Mischung des gewünschten Produkts mit der Seitenketten- ! säure und einem dritten, nicht identifizierten Bestandteil ist. Man rührt das Material wieder 1,5 Stunden in I 100 ml wasserfreiem Diäthyläther. Der unlösliche Feststoff ; wird durch Filtrieren gesammelt und an der Luft getrocknet, ' wobei sich 10,7 g (74,4 %) 7-0-2-t-Butoxycarbonylamino-(3'-ί methyl-4'-hydroxyphenyl)acetamid£7-3-(l,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure ergeben. Dünnschichtchromatographie (Silicagel, Lösungsmittel 99:1 Aceton-Essigsäure) zeigt, daß diese Probe nur eine Spurenmenge der Seitenkettensäur.e und eines dritten, nicht identifizierten Bestandteils enthält.
i

^: Das IR-Spektrum steht in Einklang mit der Struktur des gewünschten Produkts.

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H/17 234 ' -~- ^2645U4

7-/_D-2-t-Butoxycarbonylamino- (3 ' -methyl-4 ' -hydroxyphenyl) - : acetamid£7~3-(1/2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure

A) Gemischtes Anhydrid

Eine Lösung von 12,2 g (0,0434 Mol) D-(-)-N-t-Butoxycarbonyl-2-(3'-methyl-4·-hydroxyphenyl)-glycin in 425 ml Tetrahydro-

o ' furan kühlt man in einem Eis-Salz-Aceton-Bad auf -15 C.

Man gibt 4,35 g (0,0434 Mol) N-Methylmorpholin zu und anschließend 5,87 g (0,0434 Mol) Isobutylchlorformiat und rührt die Reaktionsmischung 10 Minuten bei -15 C. Es fällt sofort ein Niederschlag von N-Methylmorpholin-hydrochlorid aus.

B) Silylester

Eine Mischung von 6,8 g (0,0217 Mol) 7-Amino-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure, 6,02 ml (0,043 Mol) Triäthylamin, 6,0 ml (0,0473 Mol) N,N-Dimethylanilin, 8,26 ml (0,0651 Mol) Chlortrimethylsilan und 550 ml Methylenchlorid erhitzt man 2 Stunden zum Rückfluß. Man kühlt die .trübe Lösung und entfernt das Methylenchlorid bei verringertem Druck. Den Rückstand nimmt man in 425 ml Tetrahydrofuran auf.

C) Kupplung

Man kühlt die Silylesterlösung in einem Eisbad auf 10 C und gibt sie auf .einmal zu der Lösung des gemischten Anhydrids, die eine Temperatur von -15 C hat. Man entfernt das Kühlbad und rührt die Reaktionsmischung 2 Stunden lang. Dann gibt man 425 ml Wasser zu und rührt die Mischung 5 Minuten. Das Tetrahydrofuran wird bei verringertem Druck entfernt, wodurch sich ein harziges Öl abtrennt. Das Öl wird in Äthylacetat extrahiert und etwas unlöslicher

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Feststoff, der sich abgetrennt hatte, wird durch Filtrieren entfernt. Die wässrige Phase des Filtrats wird abgetrennt, mit 42 %-iger Phosphorsäure auf pH 2,0 eingestellt und noch zweimal mit Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Äthylacetatextrakte werden dreimal mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel wird bei verringertem Druck entfernt, wobei ein viskoses Öl zurückbleibt. Man löst das Öl in 30 ml Aceton und gibt diese Lösung tropfenweise zu gut gerührtem wasserfreiem Diäthyläther mit einem Volumen von 300 ml. Die Mischung rührt man dann 2,5 Stunden bei Raumtemperatur. Der unlösliche Feststoff, der sich abgetrennt hatt, wird durch Filtrieren gesammelt und an der Luft getrocknet. Dunnschichtchromatogramm (Silicagel, Lösungsmittel 99:1 Aceton-Essigsäure) des Produkts zeigt, daß das Material eine Mischung des gewünschten Produkts, der Seitenkettensäure und eines dritten, nicht identifizierten Bestandteils ist. Der Feststoff wird wieder 1 Stunde in 80 ml wasserfreiem Diäthyläther gerührt. Das unlösliche Material wird durch Filtrieren gesammelt, mit wenig Diäthyläther gewaschen und an der Luft getrocknet, wobei sich 5,8 g (46,5 %) 7-/D-2-t-Butoxycarbonyl· amino-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)-acetamido/-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure ergibt. Ein Dunnschichtchromatogramm (Silicagel, Lösungsmittel 99 : Aceton-Essigsäure)zeigt, daß diese Probe nur eine Spur der Seitenkettensäure und der dritten nicht identifizierten Verbindung enthält. Das IR-Spektrum steht in Einklang mit der Struktur der gewünschten Verbindung.

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M/17 234 - «r -

7-/D-2-Amino-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)-(1,2,3,-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure

0,95 g (0,002 Mol) 7-/D-2-t-Butoxycarbonylamino-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)-acetamid£7~3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure gibt man zu 15 ml kalter Trifluoressigsäure und rührt die Lösung 15 Minuten. Dann gießt man die Trifluoressigsäurelösung in 200 ml 2:1 "Skellysolve B"-wasserfreier Diäthyläther und kühlt die Mischung. Das ausgefällte Trifluoressigsäuresalz des Produkts, 7-/D-2-Amino-(3'-methyl-4 ' -hydroxyphenyl) -acetamido/-3-"(l,2 ,3-triazol-5-ylthiomethyl) 3-cephem-4-carbonsäure, wird durch Filtrieren gesammelt, mit 2:1 "Skellysolve B"-wasserfreier Diäthyläther gewaschen und im Vakuum über Phosphorpentoxyd getrocknet, wobei man 0,75 g Material erhält.

Das Salz (0,75 g) wird in 50 ml Wasser, 25 ml Amberlite LA-I Harz Acetatform (25 % in Methylisobutylketon) und 25 ml Methylisobutylketon suspendiert und 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt.

Man trennt die Phasen und extrahiert die Methylisobutylketon-Schicht einmal mit Wasser. Man vereinigt die wässrigen Phasen und extrahiert dann 8 mal mit Diäthyläther. Man filtriert die wässrige Phase und entfernt das Lösungsmittel bei verringertem Druck. Den Rückstand zerreibt man mit Methylisobutylketon um einen Feststoff zu erhalten. Das Material wird durch Filtrieren gesammelt, mit Methylisobutylketon, Aceton gewaschen und bei 65 C im Vakuum über Phosphorpentoxyd getrocknet, wobei man 0,36 g (59,0 %) 7-/p-2-Amino-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)-acetamido/-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure erhält; Zers. >150 °C. Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der .Struktur des gewünschten Produkts.

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m/17 23« ' -*»- 2645H4

LA-l-Harz ist eine Mischung sekundärer Amine, worin jedes sekundäre Amin die Formel

R¹

CH₃(CH₂)₁₀CH₂NHC - R²

R³

12 3 hat, worin jeder der Reste R , R und R ein monovalenter

1 2 aliphatischer Kohlenwasserstoffrest ist und worin R , R und R im Gemenge ^von H bis 14 Kohlenstoffatome aufweisen. Diese spezielle Mischung sekundärer Amine, die nachfolgend manchmal als "flüssige Aminmischung Nr. II" bezeichnet ist, ist eine klare, bernsteinfarbene Flüssigkeit mit folgenden physikalischen Eigenschaften: Viskosität bei 25 C 70 Cps, spezifisches Gewicht bei 20 C 0,826, Brechungsindex bei 25 °C 1,4554; Destillationsbereich bei 10 mm bis zu 170 °C -0,5 %, 170-220 °C - 3 %, 220 - 230 °C - 90 % und oberhal 230 °C 6,5 %.

7-/D-2-Amino-(3'-methyl-4'-hydroxyphenyl)-acetamido/^-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure wird auch als BL-S638 bezeichnet.

2-(3'-Methoxy-4'-hydroxyphenyl)-glycin

Eine Lösung von 59,2 g (0,6 Mol) 7 5 %-iger Glyoxalsäure in 100 ml Wasser gibt man zu einer Suspension von 62,07 g (0,5 Mol) 2-Methoxyphenol und 140 ml konz. Ammoniumhydroxyd in 400 ml Wasser bei Raumtemperatur. Die Temperatur der Mischung steigt auf 35 C. Man rührt die Mischung 65 Stunden bei Raumtemperatur.

Das kristallisierte Produkt wird durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser und dann mit Aceton gewaschen und im Vakuum über

Phosphorpentoxyd getrocknet, wobei man 57,4 g (58,2 %)

2-(3'-Methoxy-4'-hydroxyphenyl)-glycin erhält; Zers. 218 - 220 ⁰C

(Lit. 240 ⁰C).

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H	62	N	10
5,	91	7 ,	97
5,	6,

Die IR- und NMR-Sprektren stehen in Einklang mit der Struktur ■ des gewünschten Produkts. '

Analyse C_H NO.:

berechnet: 54,82

gefunden: 53,77 5,91 6,97 1,13

korrigiert für 1,13 % H₃O:

54,38 5,85 7,05 Lit.: B. Block, Z.Physiol. Chem.., 98, 226 (1917).

Spaltung von 2-(3'-Methoxy-4'-hydroxyphenyl)-glycin A) 2-(3'-Methoxy-4'-hydroxyphenyl)-methylglycinat

Eine gekühlte Suspension von 94 g (0,476 Mol) 2-(3'-Methoxy 4'-hydroxyphenyl)-glycin in 500 ml absolutem Methanol wird 20 Minuten lang rasch mit HCl-Gas durchperlt. Zuerst erhält man eine klare Lösung und dann fällt kristallines Produkt quantitativ aus. Nach 20 Stunden wird das Methylesterhydrochlorid abfiltriert und sparsam mit Methanol gewaschen; nach dem Trocknen erhält man 99,6 g. Eine gekühlte Lösung des Hydrochlorids in 800 ml Wasser wird mit NaOH auf pH 8 eingestellt, wodurch sich ein kristalliner Niederschlag der freien Esterbase ergibt. Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur.

Analyse C₁₀H₁₃NO₄

berechnet:
gefunden:

C	,86	H	,20	N	,63	H2O
56	/46	6	,28	6	,55
56	6	6	0,5

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M/17 234 - «--

B) D-(-)-2-(3'-Methoxy-4'-hydroxyphenyl)-glycin

Eine Mischung von 50 g (0,237 Mol) 2-(3'-Methoxy-4'-hydroxy-" phenyl)-glycinmethylester, 19 ml (0,333 Mol) Essigsäure und 1 Liter i-PrOH (Isopropylalkohol) erhitzt man zum Sieden, was eine teilweise Lösung ergibt. Man gibt unter kräftigem Rühren 89,2 g (0,237 Mol) Dibenzoyl-d-weinsäure-monohydrat zu und erhitzt die Mischung dann zum Rückfluß. Bald beginnt das Salz zu kristallisieren. Man stellt die Wärmezufuhr ab und läßt den Kolben langsam auf Raumtemperatur abkühlen. Nach Kühlen in einem Eisbad wird der Niederschlag durch Filtrieren gesammelt. Das Filtrat wird auf etwa ein Drittel seines ursprünglichen Volumens eingeengt, wobei sich eine geringe zweite Menge Salz ergibt; Gesamtausbeute beider Ernten 54,1 g nach dem Trocknen (Feststoff A; siehe unten) .

Das Filtrat wird eingeengt und das Lösungsmittel entfernt. Der viskose Rückstand wird mit 300 ml In HCl vereinigt und die Mischung wird mit 400 ml CHCl-. extrahiert. Die CHCl-. Phase wird zweimal mit 100 ml Anteilen In HCl extrahiert. Die vereinigten HCl-Extrakte werden kurz eingeengt, um zurückgebliebenes CHCl- zu entfernen und 1 Stunde am Rückfluß gekocht. Man engt die Lösung auf ein geringes Volumen ein, wodurch das HCl-SaIz der Aminosäure kristallisiert. Das Produkt wird durch Filtrieren gesammelt und aus 50 ml In HCl umkristallisiert. Eine Lösung des Produkts in 200 ml Wasser wird mit NaOH auf pH 4,5 eingestellt. Man erhitzt die Mischung nahezu zum Sieden und läßt dann abkühlen, um D-(-)2-(3·-Methoxy-4'-hydroxyphenyl)-glycin als flaumige nadelähnliche Kristalle auszufällen. Nach Abkühlen über Nacht wird das Produkt durch Filtrieren gesammelt, mit wenig Wasser und Methanol gewaschen und bei 40 C getrocknet;

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8,7 g, ^

Die IR- und NMR-Spektren stehen völlig im Einklang mit der Struktur.

Analyse CgH11N	O4 . H2O	C	23	H	,09	N	/51	H	2°
		50,	43	6	,23	6	/51	8	/37
berechnet:		50,		6		6		8	/95
gefunden:

C) L-(+)-2-(3'-Methoxy-4'-hydroxyphenyl)-glycin

Der oben genannte Feststoff A (54,1 g) wird in 300 ml In HCl und 500 ml CHCl., unter kräftigem Rühren suspendiert. Das Salz zerfällt in diesem System nicht leicht, deshalb wird das CHCl- so gut wie möglich entfernt und unter kräftigem Rühren werden 300 ml MIBK zugegeben. Die MIBK Phase wird mit weiteren 200 ml In HCl in 3 Anteilen extrahiert. Die vereinigten und filtrierten HCl-Extrakte werden kurz eingeengt, um Lösungsmittelrückstände zu entfernen und 1 Stunde am Rückfluß gekocht, um den Ester zu hydrolysieren. Die Reaktionsmischung wird auf ein kleines Volumen eingeengt. Nach Abkühlen in einem Eisbad wird das kristalline Aminosäure-HCl-salz durch Filtrieren gesammelt. Das Salz wird aus 75 ml In HCl umkristallisiert, durch Erwärmen in 500 ml Wasser gelöst und die Lösung wird filtriert (polish filtered) und mit NaOH auf pH 4,5 eingestellt, wodurch das Zwitterion kristallisiert. Man erhitzt die Mischung zum Sieden, filtriert ab und läßt dann in der Kälte stehen, damit das kristalline Produkt, L-(+)-2-(3'-Methoxy-4'-hydroxyphenyl)-glycin, ausfällt. Das Produkt wird durch Filtrieren gesammelt, sparsam mit Wasser· und Methanol gewaschen und an der Luft bei 40 C getrocknet; 9,6 g.

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M/17 234 -

H	,09	N	,51	H	2°
6	,06	6	,62	8	,37
6	6	7	,46

24° ο

" = +127,2 (c 1 In HCl). Die IR- und NMR-Spektren

stehen in Einklang mit der Struktur.

Analyse C H NO. . H»0

berechnet: 50,23

gefunden: 50,53

D-N-(2-Methoxycarbonyl-l-methylvinyl-oC-amino-°C- (3'-methoxy-4 ' -hydroxyphenyl) -natriumacetat'

Zu einer gerührten Lösung von 3,02 g (0,078 Mol) NaOH in 320 ml Methanol gibt man 0,08 Mol D-(-)-2-(3'-Methoxy-4'-hydroxyphenyl)-glycin und kocht die sich ergebende Mischung am Rückfluß, während man eine Lösung von 9,6 ml (0,088 Mol) Methylacetoacetat in 80 ml Methanol über einen Zeitraum von 30 Minuten zugibt. Nach weiteren 30 Minuten Rückflußkochen wird das Methanol abdestilliert wobei entsprechend Toluol zugegeben wird, so daß in etwa das gleiche Volumen beibehalten wird. Wenn die Innentemperatur 100 C erreicht wird die Lösung 4 Stunden in Eiswasser gekühlt, abfiltriert und gut mit Toluol gewaschen, an der Luft und im Vakuum über Ρ₂°ς ^{auf ein konstantes} Gewicht getrocknet, wobei man festes D-N-(2-Methoxycarbonyl-l-methylvinyl)-oC-amino-OC-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)-natriumacetat erhält.

D-(-)-2-(3'-Methoxy-4'-hydroxyphenyl)-glycylchlorid-hydrochlorid

wird in hoher Reinheit und sehr nutzbringend durch folgendes Verfahren hergestellt:

Etwa 0,06 Mol D-(-)-2-(3'-Methoxy-4'-hydroxyphenyl)-glycin werden in 100 ml Dioxan aufgeschlämmt. Man rührt die Aufschlämmung und leitet COCl₂ (Phosgen) ein, wobei man die Temperatur der

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Aufschlämmung bei 50 bis 58 C hält. Das COCl wird während einer Gesamtzeit von 3,5 Stunden eingeleitet. Man erhält eine gelbe Lösung, die mit Stickstoff gespült wird, um überschüssiges COC1„ zu vertreiben. Man perlt während 2,5 Stunden HCl-Gas durch die Lösung, rührt die Lösung und verdünnt eine geringe Menge mit etwas Äther, um einige Kristalle zu erhalten, welche als Impfkristalle zu der Charge gegeben werden. Man rührt die Lösung 16 Stunden bei 20 bis 25 ⁰C und filtriert die sich ergebende Aufschlämmung von kristallinem D-(-)-2-(3'-Methoxy-4'-hydroxyphenyl)-glycylchlorid-hydrochlorid ab, um das Produkt zu sammeln. Der Filterkuchen wird mit Dioxan und Methylenchlorid gewaschen und dann in einem Vakuum-Exsikkator über Ρ₂°ς getrocknet, wobei man etwa 7 g D-(-)-2-(3'-Methoxy-4'-hydroxyphenyl)-glycylchlorid-hydrochlorid erhält.

D-(-)-N-(t-Butoxycarbonyl)-2-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl) glycin

Eine Mischung von 8,6 g (0,04 Mol) D-(-)-2-(3'-Methoxy-4'-hydroxyphenyl) -glycin, 3,2 g (0,03 Mol) Magnesiumoxyd, 9,7 g (0,068 Mol) t-Butoxycarbonyl-azid und 240 ml 1:1 Dioxan-Wasser rührt und erhitzt man bei 45 bis 50 °C 20 Stunden.unter Stickstoffatomosphäre. Die gekühlte Reaktionsmischung wird mit 240 ml Eiswasser verdünnt, abfiltriert und einmal mit Äthylacetat extrahiert. Die angesäuerte (pH 2) wässrige Phase wird 5-mal mit Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten und getrockneten (Na_S0 ) Äthylacetatextrakte werden bei verringertem Druck eingeengt, um das Lösungsmittel zu entfernen, wobei sich das Produkt als viskoses Öl ergibt; 6,3 g.

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Spaltung von 2-(3-Methoxy-4-hydroxyphenyl)-glycin

A) (-)-2-(3-Methoxy-4-hydroxyphenyl)-glycin-d-10-camphersulfonat

Eine Mischung von 5,0 g 2-(3-Methoxy-4-hydroxyphenyl)-glycin, 50 ml Eisessig und 2,5 ml H„0 wird erhitzt, wobei man eine Lösung erhält. Die heiße Lösung wird feinfiltriert und bei Raumtemperatur 18 Stunden stehen gelassen, um zu kristallisieren, wobei man 1,78 g des Salzes erhält. Umkristallisation aus Essigsäure und anschließendes Trocknen bei 40 C ergibt 1,54 g (-)-2-(3-Methoxy-4-hydroxyphenyl)-glycin-d-10-camphersulfonat; teilweise Zersetzung 164-170 C, dann Zersetzung bei 175 - 180 °C.

Die vereinigten Essigsäurefiltrate werden bei verringertem Druck auf ein geringes Volumen eingeengt. Der kristalline Feststoff wird abfiltriert und aus 15 ml Essigsäure umkristallisiert, wobei man nach Trocknen bei 40 C eine zweite Ernte von 2,48 g Produkt erhält, Zers. 164-170 ,

⁴ = -32,2 ° (C 1 H₂O) .

B) (-)-2-(3-Methoxy-4-hydroxyphenyl)-glycin

Eine Menge von 1,2 g der ersten Ernte von (-)-2-(3-Methoxy-. 4-hydroxyphenyl)-glycin-d-lO-camphersulfonat löst man in 12 ml Wasser und stellt die Lösung mit verdünnter wässriger NH.OH auf pH 4,5 ein. Man erhitzt die Mischung, wobei sich eine Lösung ergibt, diese läßt man zuerst bei Raumtemperatur und dann bei 5 °C abkühlen, damit die Aminosäure kristallisiert. Das Produkt wird abfiltriert, sparsam mit wenigen

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C	,82	H	,62	N	,10	H2°
54	,37	5	,90	7	,21
54	5	7	0,7

Tropfen Wasser und Methanol gewaschen und bei 40 C ge trocknet, wobei man 0,37 g (-)-2-(3-Methoxy-4-hydroxyphenyl) -gl ein erhält; Zers. 210 - 212 °, [rt.j24 ₌ __137/6° (_C χ _ln

Analyse C₍

berechnet gefunden

C) (-)-2-(3-Methoxy-4-hydroxyphenyl) -glycin

Eine Mischung von 200 g 2-(3-Methoxy-4-hydroxyphenyl)-glycinhydrat, 26O g d-10-Camphersulfonsaure, 2 1 Eisessig und 100 ml Wasser wird erhitzt, damit man eine Lösung erhält und dann feinfiltriert. Die Lösung wird beimpft und bei Raumtemperatur 3 Tage stehengelassen, damit das Salz ■kristallisiert; man erhält 76 g. Das Salz wird aus 400 ml Essigsäure umkristallisiert, wobei man 71,0 g erhält.

Das Filtrat aus der ersten Salzmenge wird auf etwa die Hälfte seines ursprünglichen Volumens eingeengt und das Produkt kristallisieren gelassen; man erhält 118,5 g. Das Produkt wird aus 5OO ml Essigsäure umkristallisiert, wobei man nach dem Trocknen 105,2 g (-)-2-(3-Methoxy-4-hydroxyphenyl) -glycin-d-lO-camphersulfonat erhält.

Unter kräftigem Rühren gibt man tropfenweise NH.0H zu einer Lösung von 71,0 g des Camphersulfonatsalzes in 150 ml Wasser plus 150 ml Methanol. Die Mischung, die bald sehr dick wird, erhitzt man auf 50 °C und gibt tropfenweise NH.OI bis ein pH 4,5 erreicht ist. Nach Kühlen mit Eis wird

709815/1 164

M/17 234 -SO

SO

das Produkt filtriert, sparsam mit kaltem 1:1 MeOH-Wasser und kaltem Methanol gewaschen wodurch man nach Trocknen in einem Vakuumofen bei 40 °C 34,5 g ((-)-2-(3-Methoxy-4-hydroxyphenyl)-glycin erhält; Zers. 204 - 206 C,

t~ = -132,4 (C 1 In HCl).

C	23	H	,09	N	,51
50,	96	6	,12	6	,61
49,	6	6

Analyse C

berechnet gefunden

(-)-2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-glycin

Eine Mischung von 9,2 g (-)-2-(3-Methoxy-4-hydroxyphenyl)-glycin und 50 ml 48 %-iger Bromwasserstoffsäure wird 4 Stunden am Rückfluß gekocht. Man kühlt die Lösung in Eis, wodurch man einen kristallinen Niederschlag erhält, der durch Filtrieren gesammelt und bei 40 C getrocknet wird; die Ausbeute beträgt 1,8 g, Fp = 248 - 250 °C Zars. mit vorherigem Eindunkeln oberhalb ca. 200 °C,

[oC] p² = -42,1° (C 1 H₂O) .

Analyse C-H NO. . HBr . 1/2H₂O

berechnet: 35,18

gefunden: 3 5,26

Von diesem Material wurde angenommen, daß es eine 3 : 1 Mischung von (-) und (+)-Isomeren von 2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-glycinhydrobromid ist.

	H	5	N	H	2°
4	,06	5	,13	3	,30
4	,01	,32	3	,20

709815/ 1 164

Das Filtrat wird auf ein geringes Volumen eingeengt. Das kristalline Salz, das ausfällt, wird durch Filtrieren gesammelt (das Filtrat wird aufbewahrt). Das rohe Produkt wird aus 20 ml Essigsäure umkristallisiert. Das Produkt wird auf dem Filter mit Methylisobutylketon und wasserfreiem Äther gewaschen, wobei man 3,0 g weißes kristallines (-)-2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-glycin-hydrobromid erhält; FP. = 106 - 109 °C,

' ~) — -Rt^ in τ ti r\\

Analyse C_gH NO. . HBr

C	,06	H	,29	N	,97	H	2°.
34	,07	4	,17	4	,99	6	,37
43	4	4	6	,80

berechnet:
gefunden:

Das Eissigsäurefiltrat wird eingeengt, um das Lösungsmittel daraus zu entfernen. Zu dem öligen Rückstand gibt man 75 ml Methylisobutylketon und läßt das Produkt erst bei Reumtemperatur und dann in einem Eisbad kristallisieren. Das Produkt wird abfiltriert, mit Methylisobutylketon und wasserfreiem Äther gewaschen, wobei man weitere 1,5 g weißes, kristallines (-)-2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-glycin-hydrobromid erhält; Fp. = 106 - 108 °C

00°

[oC] ο = -84,5° (C 1 H₂O) .
Analyse C₈H NO. , HBr . H₀O:

berechnet: 34,06

gefunden: 33,79

Das Filtrat des rohen HBr-Salzes wird eingeengt, um das Lösungsmittel daraus zu entfernen. Den kristallinen Rückstand löst man in 8 ml Wasser und stellt die Lösung mit konz. wässriger NH.OH auf pH 4,5 ein, wodurch das Zwitterion kristallisiert. Man verdünnt die Mischung mit einem gleichen Volumen Methanol

7 0 9 8 15/1164

H	,29	N	,97	H	2°
4	,31	4	,94	6	,39
4	4	7	,08.

und kühlt sie 1/2 Stunde in Eis. Das Produkt, (-)-2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-glycin wird abfiltriert, mit wenig 1:1 MeOH-H„O und MeOH gewaschen und 2 Stunden bei 40 C getrocknet; die Ausbeute beträgt 0,536 g, undeutliche Zersetzung bei 234-238°C mit vorherigem Dunkelwerden oberhalb ca. 220 °C; 22° _nr._o ,o

[öl] ²² = -158,2° (C 1 In HCl). Analyse CgH NO.

	C	H	,95	N	,65
berechnet:	52,46	4	,03	7	,75
gefunden	51,82	5	7

7-/D-c<-Amino-(3'-methoxy-4·-hydroxyphenyl)-acetamido/-^- (1,2,3-triazol-4-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure

Eine Mischung von 4,27 g (0,01365 Mol) 7-Amino-3-(1,2,3-triazol-4-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure, 6,64 g (0,041 Mol) 1,1,1,3,3,3-Hexamethyldisilazan und 200 ml Methylenchlorid kocht man 4 Stunden am Rückfluß, wobei sich eine klare Lösung ergibt. Nachdem man über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen hat, wird das Lösungsmittel bei verringertem Druck entfernt. Den Rückstand löst man in 150 ml Tetrahydrofuran und kühlt die Lösung vor der Verwendung auf Null bis 5 C.

Man gibt 3,06 ml (0,0273 Mol) N-Methylmorpholin und 3,48 ml (0,0273 Mol) Isobutylchlorformiat zu einer Lösung von 8,1 g (0,0273 Mol) D-(-)-N-(t-Butoxycarbonyl)-2-(3'-methoxy-4^I-hydroxyphenyl)-glycin in 300 ml Tetrahydrofuran bei -15 C.

Man rührt die Mischung 6 Minuten bei -15 °C, damit sich das

gemischte Anhydrid bildet.

Man gibt die Tetrahydrofuranlösung des Silylesters von Null bis 5 °C zu dem gemischten Anhydrid von -15 °C. Nach 10 Minuten wird das Kühlbad entfernt und die Mischung weitere 2,5 Stunden

709815/1164

M/17 234 - «■>·- oc / C 1 / /

£ä I b 4 ο I 4

gerührt. Man gibt 250 ml Wasser zu der Reaktionsmischung und engt diese bei verringertem Druck ein, um den größten Teil des Tetrahydrofurans zu entfernen. Das wässrige Konzentrat wird mit 42 %-iger Phosphorsäure angesäuert und dreimal mit Äthylacetat extrahiert. Während der ersten Extraktion wird die Mischung filtriert, um eine geringe Menge unlösliches Material zu entfernen. Die vereinigten Äthylacetatextrakte werden einmal mit Wasser gewaschen, über Na„SO. getrocknet und zur Trockne eingeengt. Den Rückstand zerreibt man mit wasserfreiem Äther, wobei man 2,8 g Feststoff erhält.

Eine Lösung des Feststoffs (2,8 g) und 50 ml 97 %-ige Ameisensäure rührt man 2 Stunden bei Raumtemperatur. Die Ameisen-, säure wird bei verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird mit Toluol azeotrop destilliert, um die Ameisensäure völlig zu entfernen. Dann zerreibt man den Rückstand mit feuchtem Äthylacetat, wobei man (nach 2 Stunden Trocknen im Vakuum bei 65 ⁰C über Phosphorpentoxyd) 1,42 g 7-/D-r<-Amino-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)-acetamido/-^-d#2,3-triazol-4-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure erhält; allmähliche Zersetzung oberhalb etwa 165 C. Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur. 7-/D- oc-Amino-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)-acetamidoZ-S-(l,2_/3-triazol-4-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure wird auch BL-S689 genannt.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden hergestellt durch

2 2

Umsetzung eines Aldehyds der Formel R -CHO (worin R die oben angegebenen Beduetungen besitzt) mit einem Cephalosporin der Formel II

II

COOR¹

709815/ 1 164

si

1 3
worin A, R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen.

Bei den bevorzugten Ausführungsformen hat das Kohlenstoffatom, das die cC-Aminogruppe trägt, die D-Konfiguration. Die letztgenannten Verbindungen der Formel II werden durch die allgemeinen und oft auch speziellen Verfahren hergestellt, die in den nachstehenden Patenten beschrieben sind:

US-PS 3 641 021 US-PS 3 899 394 US-PS 3 855 213 US-PS 3 867 380 SüdAfrianische-PS 73/4055 BE-PS 776 222 (Farmdoc 38983T) BE-PS 810 477 (Farmdoc 57268V) DT-PS 2 364 192 (Farmdoc 49048V) DT-PS 2 500 386 (Farmdoc 49692^rV) BE-PS 814 27 2 (Farmdoc 82562V) DT-PS 2 404 592 (Farmdoc 57268V)

Ein Alternativverfahren zur Herstellung der erfindungsgemäß als Ausgangsprodukte verwendeten amphoteren Cephalosporine besteht darin, daß man die Seitenkettensäure, beispielsweise 2-Phenylglycin oder Tetrazol-Essigsäure, wie zuvor gemäß den US-PSen 3 813 388 und 3 759 904 und 3 850 916 verwendet, durch das geeignete p-Hydroxy-2-phenylglycin ersetzt, (welches einen weiteren Substituenten enthalten kann und in dem die cC -Aminogruppe während der Acylierung auf herkömmliche Weise bevorzugt geschützt ist), um entweder in 3-Stellung thiolierte Cephalosporine herzustellen oder in 7-Stellung substituierte Cephalosporansäuren zu.erhalten, bei denen die 3-Acetoxygruppe dann durch das gewünschte Thiol ersetzt wird. Siehe beispielsweise US-PSen 3 757 012 und 3 757 015.

7 0 9 8 15/1164

Die nachstehend als BL-S64O bezeichnete Verbindung ist 7-/E)- ot-Amino - < ν- (p-hydroxyphenyl) -acetamido/^- (1, 2 , 3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure, die auch Cefatrizin genannt wird. Das erwähnte Propylenglycolat davon ist das 1,2-Propylenglycol-solvat, das vorstehend beschrieben ist. BL-S643 bezeichnet 7-/D- <*:-Amino-<>:- (p-hydroxyphenyl) -acetamido-3-(2-methyl-l,3,4-thiadiazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure, die auch als Cefaparol bekannt ist.

Die nachstehenden Beispiele sollen die Erfindung näher erläutern, ohne sie jedoch einzuschränken.

709815/1164

M/17 234

Beschreibung bevorzugter Ausführungsformen

Beispiel

H 0

D, L

Zu 0,34 ml Furfural (2-Furfuraldehyd), gelöst in 10 ml Wasser gibt man unter Rühren 2 g (1 Äquivalent) des Methanoisolvats von 7-/D-o<LAmino- °c- (p-hydroxyphenyl) -acetamido7-3-(l,2 ,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure. Unter raschem Rühren gibt man 4n Natriumhydroxyd zu, um den pH bei 6,2 - 6,5 zu halten. Die Lösung, die sich gebildet hat, laßt man 1 Stunde bei Raumtemperatur stehen und lyophilisiert dann, wobei sich das Natriumsalz des Produkts als Feststoff ergibt.

Eigenschaften des Materials:

IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur des Produkts.

ß-Lacfcam intakt,
Triazol - intakt.

709815/1164

M/17 234

Beispiel 2

Man wiederholt das Verfahren gemäß Beispiel 1 mit der Ausnahme, daß man anstelle des darin verwendeten Methanolsolvat Ausgangsmaterials eine äquimolare Menge 7-/D-oc-Amino- ⁰C-(p-hydroxyphenyl) -acetamido_7-3-cephem-4-carbonsäure-sesguihydrat verwendet. Man erhält das Natriumsalz, das mit dem in Beispiel 1 erhaltenen identisch ist.

Beispie. 1 3

Herstellung von BL-S1O52; dem Natriumsalz des Reaktionsprodukts von 2-Furfuraldehyd und BL-S64O

Struktur BL S1052

.H₂O

Verfahren:

1) 2 7/10 ml (3,13 g, 1,1 Äquivalente) 2-Furfuraldehyd löst man in 50 ml rasch gerührtem Wasser von 20 bis 30 °C.

709815/1164

2) Man gibt 15 g des Methanoladdukts von BL-S64O während 10 Minuten zu, wobei man gleichzeitig 40 %-iges Natriumhydroxyd bis zu pH 5,5 - 6,0 zugibt (der pH-Wert darf nicht über 6,5 ansteigen). Man erhält eine hell organgefarbene Lösung

oder nahezu eine Lösung.

3) Die Lösung wird entsprechend abfiltriert, um Partikelchen, Pyrogene und Bakterien zu entfernen. Die Stufen 1 und 2 zusammen sollten innerhalb 2 Stunden beendet sein.

4) Man lyophilisiert 48 Stunden und hält die Feststoffe dann 24 Stunden bei 50 bis 56 C im Vakuum. Der sich ergebende Feststoff ist BL-S1O52 (BL-S1O52 kann auch aus der Lösung von Stufe 3 durch Ausfällung mit 15 bis 20 Volumina sterilem Isopropanol erhalten werden).

Eigenschaften von BL-S1O52

1) Biotest = 775-800 (T/mg

2) IR- NMR = a) gut definiert, mit der Struktur übereinstimmend,

b) Bei etwa 60 mg/ml in D„0 zeigen sich zwei Produkte, 40 % zyklisches Addukt, 60 % nichtzyklisches Addukt.

c) ß-Lactam und 3-Triazol sind intakt.

3) Löslichkeit: größer als 400 mg/ml

4) Papierstreifenchromatographie = eine einzige Zone beim R_f-Wert von BL-S64O (Konzentration = 0,2 mg/ml)

5) Flüssigkeitschromatographie (Konzentration = 1 mg/ml)

Zeit, Stunden % anwesende

freie BL-S64O

0 69,2

1 74,2

2 94,5

7 0 9 8 15/1164

M/17 234

6) Analysenwerte:

	gefunden	bezogen auf trockene Sub stanz	berechnet
% HO KF	5,35	—	__
% C	47,45	50,2	49,2
% H	3,72	3,4	3,39
% N	14,45	15,29	14,95
% S	10,34	10,92	11,4
% Asche als Na	2,18	2,51	4,1

709815/1164

Antibiotisches Spektrum in Nährbrühe

MIC ( ,/7ml)

Organismus	(ίο"·5)**	(ΙΟ"·5)	A9585	BL-S64O	BL-SlO	.06
S. pneumoniae*	•(io"5)**	(1O"2)	A96ok	ο.οβ	0	.03
Str. pyogenes*	(10 ""^)	(lot}	A9537	0.03	0	.13
S. aureus Smith	S. aureus+50^ serum (IO )	(1° )	A9537	0.13	0
S. aureus BXI633		A9Ö06	2	2	.25
S. aureus BX1633	(ΙΟ*4)	Α9βθβ	0.25	0
S. aureus Meth-Res	(ΙΟ"J)	A15O97		2
SaI. enteritidis	(10 )	A9531	8	4	.13
E. coil Juni	(IO""4)	A15119	0.25 .	0
E. coil	J1'	A9675	0.5	1
K. pneumoniae	(ΙΟ"*)	A9977	2	2	.5
K. pneumoniae	(ίο")	A1513O	0.5	0
Pr. mirabilis	(10,)	A99OO	1	1	.5
Pr. morganii	-(ίο-)	A15153	0.5	O
Ps. Aeruginosa	(io"4)	A9843A	32	32
Ser. marcescens		A20019	>125	>125
Ent. cloacae	Α9β5β	>125	>125
Ent. cloacae	Α9β57	>125	>125	.5
Ent. cloacae	Α9β59	0.5	0,
32	32

cn -p-

+ 45 % AAB + 5 % Serum + 50 % der oben aufgeführten Brühe

Verdünnung von über Nacht erhaltener Kulturbrühe.

^ ' Angepaßt für einen Gehalt von 79,5 % BL-S64O.

In anderen Worten, es wurden die Zahlenwerte gesenkt, d.h. verbessert. Diese Anpassung wurde auch in den nachstehenden Versuchen vorgenommen, oder es wurde alternativ eine größere Gewichtsmenge verwendet, um eine äquivalente Dosierung zu erhalten.

Blutspiegel bei der Maus nach i.m.-Verabreichung von 10 mg/kg Körpergewicht:

	Anzahl	Blutspiegel <	( ^/ml)	8
Verbindung	der Mäuse	0,25 0,5	1 1,5	8
		Stunden nach der	Verabreichung
BL-S1O52	16	15,1 15,1	11,5 7,
BL-S64O	32	15,7 13,2	9,5 6,

Die Verbindungen wurden in 0,01 % Phosphatpuffer hergestellt. BL-S64O wurde als Standard für alle Verbindungen verwendet.

Blutspiegel bei der Maus nach oraler Verabreichung von 100 mg/kg Körpergewicht:

Anzahl Blutspiegel (Jf /ml)

Verbindung der Mäuse' 0,5 1 2 3,5 Stunden nach der Verabreichung

BL-S1052 16 45,2 48,1 31,9 14,4 BL-S64O 32 53,4 45,4 27,2 1O,7

Die Verbindungen wurden in Tween-CMC hergestellt. BL-S64O wurde als Standard für alle Verbindungen verwendet.

709815/116 4

M/17 234

Wiedergewinnung aus dem Urin nach i.m.-Verabreichung von 50 und 10 mg/kg an Ratten:

	Dosis	Anzahl	%-Satz der verabreichten	wird	Dosis	42	,4
Verbindung	(mg/kg)	d. Ratten	der wiedergewonnen	0 -		24	,1
			0-6 6 -	24	47	,2
			- 24	Stunden nach der Verabreichung	25	,7
BL-S1O52	50	4	40,3 2,
	10	3	21,7 2,
BL-S64O	50	7	44,5 2,
	10	7	24,3 I1
rl
,4
r 7 Ii
,4

Die Verbindungen wurden in 0,01 % Phosphatpuffer hergestellt. BL-S64O wurde als Standard für alle Verbindungen verwendet.

Es wurden Papierchromatogramme angefertigt von Rattenurin, der zwischen Null und 2 und 2 und 4 Stunden nach i.m.-Verabreichung von BL-S1O52 und BL-S64O gesammelt wurde, um antibiotisch aktive StoffWechselprodukte zu finden, wobei absteigende Chromatographie mit System Nr. 9 (Butylacetat: n-Butanol:Eisessig:H₂0 = 80:15:40:24) verwendet wurde. Es wurden zwei identisch angeordnete Spots in allen Fällen beobachtet, jedoch mit Ausnahme der Standardverbindung (welche nicht an Ratten verabreicht worden war und jeweils einen einzelnen identischen Spot für BL-S64O und BL-S1O52 ergab). Dies zeigt die vollständige Hydrolyse des Derivats der Ausgangs verbindung BL-S64O und ihres vermuteten Stoffwechselprodukts .

7 0 9 8 15/1164

M/17 234

2645H4

Beispiel 4

Die Verbindungen der Formeln HO
HO

H O ·

I Il

C C ς

c-H I _Ni L.

=j

CH₂-S.

COONa N H

-N Il

H,C
HO

HN,

Il

•c

COONa

und

CH₃O

HO

^ffiS--„^N

0 /

N^ ^^- CH₂-S-

COONa

N' H

ιί¹

7098 15/1164

M/17 234

en

werden hergestellt, indem man das im Verfahren gemäß Beispiel 3 verwendete Cefatrizin durch eine äquimolare Gewichtsmenge des entsprechenden amphoteren Cefalosporins ersetzt.

Beispiel

Die Verbindungen der Formeln:

COONa

VTO-

COONa

N-CIL N

709815/1164

M/17 234

-VSt-

werden hergestellt, indem man bei dem Verfahren gemäß Beispiel 3 das Cefatrizin durch eine äquimolare Gewichtsmenge des entsprechenden amphoteren Cephalosporins ersetzt.

BeisDiel 6

Die Verbindungen der Formeln:

H O

709815/1 164

M/17 234

_J»

ΠΗ,Ο

C-H

Ν-τ Τ

COONa

CH,

26A5H4

und

werden hergestellt, indem man bei einem Verfahren gemäß
Beispiel 3 das Cefatrizin durch eine äquimolare Gewichtsmenge des entsprechenden amphoteren Cephalosporins ersetzt.

Beispiel 7

Reaktionsprodukt von BL-S640 und 5-Formy1-2-furansulfonsäure-Natriumsalz (BL-S1O27)

Formel (BL-S1027)

709815/1164

M/17 234 -£- 2645 UA

Herstellungsverfahren:

1) 9,0 g 5-Formyl-2-furansulfonsäure-Natriumsalz

werden in 75 ml Wasser bei 60 °C aufgeschlämmt.

2) Während 10 Minuten werden 20 g (1 Äquivalent) BL-S640

1/2-Propylenglycoladdukt unter raschem. Rühren eingetröpfelt, wobei man gleichzeitig den pH bei 6-7,0 hält. Man erhält eine Lösung oder nahezu eine Lösung.

3) Man rührt die Lösung 10 Minuten lang bei 55-60 C und pH 6 - 7,0 und kühlt dann auf 4 - 8 °C ab, wodurch sich eine geringe Menge Niederschlag bildet.

4) Dann rührt man die Mischung 15 Minuten bei 4-8 C und filtriert ab.

5) Das Filtrat gibt man dann während 5 Minuten zu 1 Liter rasch gerührtem Isopropanol, wodurch sich ein starker Niederschlag bildet, und die Mischung wird 5 Minuten aufgeschlämmt.

6) Die Feststoffe werden durch Filtrieren gesammelt, mit 200 ml Isopropanol
getrocknet.

Isopropanol gewaschen und bei 56 C 24 Stunden im Vakuum

7) Dann löst man die Feststoffe in 60 ml Wasser von 4-6 C (eine geringe Menge unlöslicher Bestandteile wird durch Filtrieren entfernt), das Filtrat wird dann 24 Stunden lyophilisiert. Die Ausbeute beträgt 23 g, Bioausbeute = 89 %

709815/1164

Eigenschaften von BL-S1O27:

1) Biotest, bezogen auf BL-S64O = 724 ff /mg, (Theorie 750 tf /mg)

2) Löslichkeit = >500 mg/ml

3) IR-NMR: Mit der Struktur übereinstimmend. Bei 70 mg/ml besteht die Verbindung aus 80 % zyklischem und 20 % nichtzyklischem Derivat.

4) Papierstreifen- und Flüssigkeitschromatographie zeigen, daß das Produkt bei 0,2 und 1,0 mg/ml Lösung in Wasser als freie BL-S64O vorliegt.

5) Das antibakterielle Spektrum der MIC-Werte ist dem von BL-S64O gleich.

6) Die oralen und intramuskulären Blutspiegel bei Ratten sind denen von BL-S640 gleich.

7) Eine Lösung dieses Produkts in Wasser bei einer Konzentration von 25 000 y/ml war mindestens 3 Tage lang bei Raumtemperatur und 14 Tage bei 6 C (Kühlschrank) stabil (behielt die volle Bioaktivität) und ergab somit eine Lösung die zur oralen Verwendung geeignet ist.

bezogen auf berechnet trockene Substanz

42,1 43,0

2,9 2,96

13,05 13,1

14,35 14,95

6,16 6,8 für Di-Na

7098 15/1164

AnalysenWerte:	gefunden
	5,14'
% H2O	40,15
C	3,10
H	12,39
N	13,6
S	5.86
Asche als Na

M/17 234 - „

Antibiotische Aktivität in Nährbrühe

MIC ( f /ml)

η . Na-SaIz d.Vej-Q) &, Cepha-

P^rK-^anism bd _q. v. Bsn.7 BL-S640® lothin

Str. pneumoniae* (IO"³)**

A9585 0.03 0.13 0.03 Str. pyogenes (IO"³)**

A9604 0.05 0.06 0.03

S. aureus Smith (IO"⁴)

A9537 0.27 0.5 0.13 S. aureus (IO"⁴)

+ 507. serum A9537 2 4 0.5 S. aureus (IO"³)

BX1633 A9606 0.5 0.5 0.13

S. aureus (IO"²)
BX1633 A9606 4 · 4 0.25

S. aureus (IO"³)
Meth-Res A15097 4-8 8_l6 I_l6

Sal. enteritidis (IO"⁴)

A9531 0-25 0.25 0.25

E. coli Juhl (IO"⁴)

A15119 1 1 16 E. coli (IO"⁴)

A9675 4 4 32

K. pneumoniae (10 )

A9977 0-5 0.5 1

K. pneumoniae (10~⁴)

A15130 ^X 2 32

Pr. mirabilis (IO"⁴)

A9900 0-5 0.5 1

Pr. morganii (IO"⁴)

A15153 32 63 >125 Ps. aeruginosa (IO"⁴)

A9843A_H >125 >125 >125

Ser. marcescens (Ip"⁴) >125 >125 >125

A20019

7098 15/1164

M/17 234

Organismen

Ent. cloacae

Ent. cloacae

Ent. cloacae

A9656 do"⁴)

A9657

do"⁴)

A9659

(00

MIC

Natriumsalz Q der Verb. ν.
Beisp. 7

>125

>125

63

Cepha-BL-S64O lothin

>125

>125

45 % AAB + 5 % Serum + 50 % der oben aufgeführten Brühe. Verdünnung von über Nacht erhaltener Kulturbrühe.

Q. Diese Werte wurden auf der Basis umgerechnet, da3 in der Probe nur 65 % BL-S64O enthalten war; mit anderen Worten, die Zahlenwerte wurden verringert, d.h. verbessert.

(2) BL-S64O = 7-/D- OL-Amino- OC--(ρ-hydroxyphenyl) -acetamido/-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure.

709815/1164

4,04

Blutspiegel bei der Maus nach oraler Verabreichung von 100 mg/kg Körpergewicht

Verbindung	gemäß	Blutspiegel	1	36,	(/>( g/ml)	3/5
		0,5	Stunden nach	39	2
	gemäß	45	53,	Verabreichung	10,4
Verbindung Beispiel 7		50,5	47	6 20,4	9,6
BL-S64O ^	54,6	24,5	8,2
Verbindung Beispiel 7	57,4	5 27,6	10,9
BL-S640 ^	29,5

Die Verbindungen wurden in Tween-Carboxymethylcellulose hergestellt und für jede Verbindung wurden 8 Mäuse verwendet.

^ BL-S64O - 7-/D-Cx: Amino- ⁰^- (p-hydroxyphenyl) -acetamido_7-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure wurde als Standard verwendet.

BL-S1O27 ist das wasserlösliche Derivat, das gebildet wird, wenn BL-S64O mit Furfural-natriumsulfonat umgesetzt wird. Die Bio-Aktivität (potency) beträgt 724 tf/ml BL-S64O Aktivität,

Wässrige Lösungen, die 250, 25 und 10 mg BL-S64O Wirksamkeit/ml als BL-S1O27 enthalten, können gekühlt (4 °c) oder bei Raumtemperatur mindestens 24 Stunden ohne bedeutsamen Verlust der Wirksamkeit aufbewahrt werden.

709815/1164

16	,1	14	,8	11	,9	8	ι
14	,6	15	,4	11	η	8	,3

Blutspiegel bei Mäusen nach intramuskulärer Verabreichung von IO mg/kg Körpergewicht

Verbindung 0,25 0,5 1 1,5 Stunden nach Verabreichung

Verbindung gemäß
Beispiel 7

BL-S64O^ 16,3 13,5 9,4 6,3

^ BL-S640 - 7-/p-(X -Amino- oC- (ρ-hydroxyphenyl) -acetamido7~ S-d^/S-triazol-S-ylthiomethyl) -3-cephem-4-carbonsäure wird als Standard verwendet.

Die Verbindungen werden in 0,01 %-igem Phosphatpuffer gelöst,

Beispiel 8

Reaktionsprodukt von BL-S64O und o-Formylphenoxyessigsäure (BL-S1O48)

OCH COONa 2 '

709815/1164

Herstellungsverfahren; 1) 375 mg o-Formylphenoxyessigsäure

CHO

OCH₂COOH

werden in IO ml Wasser aufgeschlämmt und man gibt unter raschem Rühren 4n NaOH zu, bis ein pH 7,0 erreicht ist. Man erhält eine Lösung.

2) Man gibt 2g (1 Äquivalent) BL-S640-Methanoladdukt unter raschem Rühren während 10 Minuten zu, wobeiman gleichzeitig 4n NaOH zugibt bis zu einem pH 6 - 6,5. Man erhält eine Lösung oder nahezu eine Lösung.

3) Die Lösung wird abfiltriert und 0,5 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen.

4) Dann lyophilisert man die Lösung 24 Stunden, wobei man das Produkt als einen Feststoff erhält.

Eigenschaften des Produkts:

1) IR- NMR (70 mg/ml) mit der Struktur übereinstimmend, Triazol und ß-Lactam intakt.

2) Papierstreifen-und Flüssigkeitschromatographie bei 0,2 und 1 mg/ml zeigen BL-S64O, völlig frei vom Aldehyd.

7 0 9 8 15/ 11-64

40*

Analysenwerte:

	gefunden	bezogen trockene	auf Substanz	berechnet
% Wasser	4,06	—		—
C	47,15	49,2		50,1
H	3,79	3,5		3,86
N	11,44	11,93		13,0
S	8,87	9,27		9,91
Asche als Na	5,55	5,78		6,47

3) Löslichkeit in Wasser = ^400 mg/ml.

709815/1164

Antibiotisches Spektrum Nährbrühe

Organismen

MIC ( V^ /ml. )

BL-SÖifO BL-SlO^

O CO OO

) A9537

⁵) Α9βθ6

²) Α9βοβ

³) A15O97 ^k

S. pneumoniae* (1O~^)**A9585

StTc pyogenes* (1Ο~⁵)**Α9βθ4

S. aureus Smith (ΙΟ"*¹) Α9537

Il

S. aureus +50% serum (10

S. aureus BXI633 (10

S. aureus BX1033 (10

S. aureus Meth-Res (10

Sal. enteritidis (10

. coli Juhl (10

E. coli ' (10

K. pneumoniae (10

K. pneumoniae (10

Pr. mirabilis (10

Pr. morganii (10

Ps. aeruginosa (10

Ser. marcescens (¹⁰ ) A2OO19

Ent. cloacae (ΙΟ"¹*) Α9β5β

Ent. cloacae (10"^) A9657

Ent. cloacae (1°"^) A9Ö59

-4

-4

-4

-4

) AI5II9

) A9675

) A9977

) AI513O

) A99OO

0	.06
0 π	.03
\j 2
0, ι,	.25
4 8
0,	.25
0.	.5
2
0.	.5
1
0.	5
32
>125
>125
>125
0.	5
32

0.	03
0.	03
0.	25
2
0.	5
k
k
0.	25
1 I1
4 0.	5
1
0.	5
32
>125
125
>125
1
32

ο.οβ

0.03

0.13

0.25

h
0.13

0.5 2

0.5 1

0.5 32

>125
>125
>125

0.5 32

45 % AAB + 5 % Serum + 50 % Brühe wie oben aufgeführt. Verdünnung von über Nacht erhaltener

Kultur.

M/17 234 - Ψ6

2645H4

(1) Umgerechnet für 68 % Gehalt BL-S64O

(2) umgerechnet für 67 % Gehalt BL-S64O.

Dies bedeutet, daß die Zahlenwerte verringert, d.h. verbessert wurden. Diese Anpassung wurde auch in den nachfolgenden Versuchen vorgenommen oder es wurde alternativ eine größere Gewichtsmenge verwendet, um eine äquivalente Dosis zu erhalten,

Blutspiegel bei der Maus nach i.m. Verabreichung von 10 mg/kg Körpergewicht

	Anzahl der	Blutspiegel (	25	0,	,4	15	r	5	/ml)	1	1/	8,	5
Verbindung	Mäuse	O,	Stunden nach	,8	14	der		Verabreichung	7
		15	,7	13	,1	11,8	6,	2
BL-S1O27	16	14	,1	10,3
BL-S1O48	16	15	,2	9,5	8
BL-S64O	32

Die Verbindungen wurden in 0,01 % Phosphatpuffer hergestellt. BL-S64O wurde als Standard für alle Verbindungen verwendet.

Blutspiegel bei der Maus nach oraler Verabreichung von 100 mg/kg Körpergewicht

Verbindung	Anzahl der Mäuse	Blutspiegel ( 0,5 1 Stunden nach	,8	45	der	/ml) 2 3,5 Verabreichung	9,3
BL-S1O27	16	49	,5	44	/1	24	rl 12,8
BL-S1O48	16	46	,4	45	,6	28,	r2 10,7
BL-S64O	32	53	,4	27,

Die Verbindungen wurden in Tween-CMC hergestellt. BL-S64O wird als Standard für alle Verbindungen verwendet.

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M/17 234

Rückgewinnung aus dem Urin nach i.m.-Verabreichung von 50 und 10 mg/kg an Ratten

Verbindung	Dosis mg/kg	Anzahl der Ratten	% der verabreichten Dosis die wiedergewonnen wird nach
			ο - 6 6-24 0-24 Stunden nach der Verabreichung
BL-S1O27	50	4	39,6 2,6 42,2
	10	4	30,1 1,7 31,8
BL-S1O48	50	4	32,3 2,4 34,7
	10	4	21,7 2 23,7
BL-S64O	50	7	44/5 2,7 47,2
	10	7	24,3 1,4 25,7

Die Verbindungen wurden in 0,01 % Phosphatpuffer hergestellt. BL-S64O wird als Standard für alle Verbindungen verwendet.

Papierchromatogramme wurden mit dem Rattenurin angefertigt, der zwischen Null und 2 und zwischen 2 und 4 Stunden nach i.m. Verabreichung(von 10 mg/kg und 50 mg/kg) BL-S1O27, 1O48 und 640 gesammelt wurde, um antibiotisch aktive Stoffwechselprodukte festzustellen, wobei absteigende Chromatographie mit System Nr. 9 (Butylacetat : n-Butanol s Eisessig s HO = 80 : 15 : 40 : 24) benützt wurde. Mit Ausnahme des Vergleichsmaterials (nicht vom Tier), das einen einzigen identischen Spot zeigte, erhielt man in allen Fällen zwei identische Spots. Dies weist auf die völlige Hydrolyse der beiden Derivate zur ursprünglichen Verbindung (BL-S64O) hin.

15/11

^{M/17 234} "**"" 0R/C1/A

z b 4 b I 4 4

Beispiel 9

Reaktxonsprodukt von BL-S6 4O und o-Benzaldehyd-sulfonsäure

Herstellungsverfahren

1) 870 mg o-Benzaldehydsulfonsäure-natriumsalz werden in 10 ml Wasser gelöst.

2) Dann gibt man unter raschem Rühren während 10 Minuten

2 g BL-S640-Methanoladdukt (1 Äquivalent) und gleichzeitig 4n NaOH bis zu einem pH 6,5 zu und erhält eine Lösung.

3) Die Lösung wird abfiltriert, 1 Stunde bei Raumtemperatur gehalten und 24 Stunden lyophilisiert, wobei man das gewünschte Produkt als einen Feststoff erhält.

Eigenschaften des Produkts;

1) IR-NMR= gut definiert, mit der Struktur übereinstimmend.

2) Löslichkeit in Wasser = >400 mg/ml

709815/1164

M/17 234

3) Analysenwerte

	gefunden	bezogen auf trockene Substanz	berechnet
% Wasser	3,49	...	...
C	41,88	43,4	43,3
H	3,41	3,3	3,25
N	11,53	12,1	12,35
S	13,74	14,25	14,24
Asche als Na	5,45	5,63	6,77

4) Bio-Test = 700 //mg·
*5 ) IR-NMR = a) ß-Lactam und Triazol intakt,

b) die Verbindung scheint kein zyklisches Addukt zu sein.

6) PapierStreifenchromatographie: es scheint eine doppelte Zone beim R von BL-S640 vorhanden zu sein.

7) Flüssigkeitschromatographie: Zeit in Stunden

% freie BL-S64O

0	64,0
1	70,5
2	88,0

8) Löslichkeit in Wasser: größer als 400 mg/ml

9) Code-Nummer: Dieses Produkt wird BL-S1O55 genannt,

70981 5/1164

CD CD OO

Antibiotisches Spektrum in Nährbrühe

MICR r- /ml. )

Organismen	(ΚΓ5)**Α9585	(10 )	r*A9604	BL-S1O55(1)	BL-S64O
S. pneumoniae*	ι.	(io"2)	Α9537	Ο.Ο6	0.03
Str. pyogenes*		(ΙΟ"')	Α9537	Ο.ΟΙ6	0.03
S. aureus Smith	S. aureus +50$ serum (10" )	(10 )	Α9606	Ο.Ι3	0.13
	S. aureus BXI633	(10"^)	Α9βθ6	2	2
S. aureus BXI633	(IO"4)	Α15Ο97	0.5	0.13
S. aureus Meth-Res	do" J)	Α9531	2	2
SaI. enteritidls	(10 )	Α15119		2
E. coil Juni	(10 - )	Α9675	0.35	0.13
E. coli	(ίο-;)	Α9977	1	0.5
K. pneumoniae	(ΙΟ")	Α1513Ο	4	2
K. pneumoniae	do" )	Α99ΟΟ	0.5	0.5
Pr. mirabilis	(10 )	Α15153	1	1
Pr. morganii	(ίο"2*)	Α9843Α	0.5	0.5
Ps. aeruginosa	(ΐο"ή)	Α2ΟΟ19	32	16
Ser. marcescens	Α9β56	>125	>125
Ent. cloacae	Α9β57	125	63
Ent. cloacae	Α9659	125	63
Ent. cloacae	0.5	0.5
63	63

45 % AAB + 5 % Serum + 50 % der oben aufgeführten Brühe. Verdünnung über Nacht erhaltener Kultur.

I-O CD

(1) Umgerechnet für 65 % Gehalt an BL-S64O.

Dies bedeutet, die Zahlenwerte wurden verringert, d.h. verbessert. Diese Umrechnung wurde auch bei den nachstehend beschriebenen Versuchen durchgeführt, oder es wurde alternativ eine größere Gewichtsmenge verwendet, um eine äquivalente Dosis zu erhalten.

Blutspiegel bei der Maus nach i.m. Verabreichung von 10 mg/kg Körpergewicht

	Blutspiegel· ( Ϋ /ml)	7,6	1,5
Verbindung	0,25 0,5 1 Stunden nach Verabreichung	8	6,5
BL-S1O55 C1)	10,3 9,9		5,7
BL-S64O	12,7 11,5

Die Verbindungen wurden in 0,01 % Phosphatpuffer hergestellt. Die Werte stellen Durchschnittswerte aus 3 Versuchen dar.

BL-S64O wurde als Standard verwendet.

Blutspiegel bei der Maus nach oraler Verabreichung von 100 mg/kg Körpergewicht

	Blutspiegel	,2	35	(Γ/ml)	3,	5
Verbindung	O,5 1 Stunden nach	,7	42	2 Verabreichung	11	,3
BL-S1O55(1)	38	,7 22,0	10	,1
BL-S64O	48	,4 24,0

Die Verbindungen wurden in Tween-CMC hergestellt. Die Werte stellen Durchschnittswerte aus 2 Versuchen dar.

BL-S64O wurde als Standard verwendet.

709815/1164

M/17 234

Rückgewinnung aus dem Urin nach i.m-Verabreichung von 50 mg/kg an Ratten

Verbindung Anzahl der Ratten

% verabreichte Dosis die wiedergewonnen wird nach

0-6 6-24 0-24 Stunden nach Verabreichung

BL-S1O55 BL-S64O

36,6 44,2

2,4 3,3

39 47,5

Die Verbindungen wurden in 0,01 '& Phosphatpuffer hergestellt.

BL-S64O wurde als Standard verwendet.

Papierchromatogramme wurden aufgezeichnet von Rattenurin, der zwischen 0 und 2 und zwischen 2 und 4 Stunden nach i.m.-Verabreichung von BL-S1O55 und 640 gesammelt wurde, um antibiotisch wirksame StoffWechselprodukte zu finden, wobei absteigende Chromatographie mit System Nr. (Butylacetat:n-Butanol:Eisessig:H 0 = 80:15:40:24) verwendet wurde. In allen Fällen wurde ein einziger identischer Spot beobachtet. Dies beweist komplette Hydrolyse des Derivats in die Ausgangsvertoindung (BL-S64O).

709815/1 164

M/17 234

441

Vergleich oraler PD₁. -Werte von BL-S64O-Derivaten bei der Maus

Organismen

PD₅ (mg/kg/Behandlung)

BL-S BL-S BL-S BL-S 640 1027 1048 1055 Cephalexin

E. coli
A15119

1,4 4,1

3,1

1,8 1,6

13 13

P. Mirabilis A99OO	7,2 9,6	6 2	,3 ,7	4,7 3,6	8,2 8,2	66 55
P. mirabilis A97O7	2,4	1	,8	2,4	1	50
K. pneumoniae A9977	1,6		—	0,7	1,6	43
S. pyogenes A96O4	0,4		—	0,2	0,4	11

Die Mäuse wurden 1 und 3,5 Stunden nach Hervorrufung des Infekts behandelt.

Vergleich von i.m. PD₁. Werten von BL-S64O Derivaten bei der Maus

Organismus

BL-S 640

BL-S 1027

BL-S
1048

BL-S 1055

Cephalexin

^PA9?65^abilis

1,6 · 1,6

1,6

1,6

50

709815/1164

M/17 234

Beispiel

Verbindung BL-S1O27; Reaktionsprodukt von BL-S64O und 5-Formyl-2-furansulfonsäure

Struktur der Verbindung BL-S1O27:

(D,L)

H₂O

SO,Na

Herstellung der Verbindung BL-S1O27:

1) 9 g 5-Formyl-2-furansulfonsäure-natriumsalz

OHC

SO Na

werden rasch in 75 ml Wasser von 60 bis 65 C gerührt, wobei sich der größte Teil des Feststoffs löst.

2) Man sprüht während 10 Minuten 20 g BL-S640-Propylenglycoladdukt unter raschem Rühren ein und stellt gleichzeitig den pH mit 40 %-iger NaOH auf 6,5 bis 7 ein (der pH darf nicht über 7,2 ansteigen). Man erhält eine Lösung oder nahezu eine Lösung.

709815/1164

M/17 234 - -β* -

3) Man rührt die Lösung mit einem pH von 6,5 - 7,0 15 Minuten bei 55-60 °C und kühlt dann auf 4-8° 10 Minuten bei dieser Temperatur weiter.

bei 55-60 C und kühlt dann auf 4 - 8 C ab und rührt dann

4) Es wird abfiltriert, um-etwas unlösliche Bestandteile zu ] entfernen. ^!

5) Man gibt das Filtrat (siehe Anmerkung 1) unter raschem Rühren zu 1 Liter Isopropanol. Es bildet sich ein amorpher ι Niederschlag und man rührt 5 Minuten weiter.

6) Die Feststoffe werden durch Filtrieren gesammelt, mit 100 ml Isopropanol

getrocknet.

Isopropanol gewaschen und im Vakuum bei 50 - 56 °C 18 Stunden

7) Man löst den Feststoff in 60 ml Wasser und kühlt auf 4-6 C, Es kann sich eine geringe Menge Niederschlag bilden, die durch Grobfiltrieren entfernt wird.

8) Das Filtrat wird bei Raumtemperatur entsprechend filtriert, um Teilchen, Pyrogene und Bakterien zu entfernen.

Die Stufen 7 und 8 sollten innerhalb 4 Stunden vollendet sein.

9) Man lyophilisiert 48 Stunden lang steril und erhitzt dann auf 50 - 56 °C 18 - 24 Stunden lang
an BL-S1O27 beträgt etwa 22 - 24 g.

auf 50 - 56 °C 18 - 24 Stunden lang im Vakuum. Die Ausbeute

Anmerkung 1, Stufe 5: Wenn man 18,7 g BL-S640-Methanoladdukt anstelle der 20 g BL-S6'40-Propylenglycoladdukt verwendet, kann das Filtrat auf 4 - 6°C gekühlt, grob filtriert und direkt, wie in Stufen 8-9 beschrieben, lyophilisiert werden.

709815/1 164

M/17 234 * -

Eigenschaften der Verbindung BL-S1O27

1) Biotest = 724

2) Bio-Ausbeute = 85 - 95 %

3) IR- NMR = a) Übereinstimmend mit der Struktur,

b) annähernd 80 % zyklisch, 20 % nichtzyklisch in D„0 bei 70 mg/ml.

c) etwa 0,05 Mol Isopropanol.

4) Papierstreifenchromatographie (0,2 mg/ml = 100 % BL-S64O, kein Anzeichen von Derivat

5) Flüssigkeitschromatographie (1 mg/ml in pH 7 Phosphatpuffer)=

Zeit Null = 85 % freie BL-S64O 0,5 Stunden= 94 % freie BL-S64O 1 Stunde = 100 % freie BL-S64O

6) Wasserlöslichkeit = •* 400 mg/ml

7) Analysenwerte:

gefunden bezogen auf berechnet trockene Substanz

% H2O, KF	5,14	—	—
% C	40,15	42,1	43,0
% H	3,10	2,9	2,96
% N	12,39	13,05	13,1
% S	13,6	14,33	14,95
% Asche als Na	5,86	6,16	6,5

8) Blutspiegel bei der Maus: Die Blutspi'egel nach oraler und i.m. Verabreichung sind annähernd denen des BL-S640-Propylenglykoladdukts gleich. BL-S64O zeigte sich im Urin ohne Anzeichen für das Derivat.

0 9 8 15/1164

M/17 234

26451U

9) a) Stabilität der Feststoffe: weniger als 10% Verlust bei einem Monat bei 56 C.

b) Stabilität der Lösungen: Weniger als 10 % "erlust bei 250, 25 und 10 mg/ml BL-S64O Wirksamkeit während mindestens 24 Stunden bei Raumtemperatur.

Beispiel 11

+ 2 TEA +

^cl8^Hl8^N6°5^S2

OHC

+ KEH

SO₃Na

SO₃Na

^C25^H17^N6°8^S2^NaK

709815/1164

M/17 234 - -θ« - OC / C 1 / /

Material:

1 g (0,00217 Mol) BL-S64O

429 mg (0,0217 Mol) 5-Furfuralsulfonsäure-Natriumsalz 217 mg (0,0434 Mol) Triäthylamin

1,2 g (0,0434 Mol) Kalium-2-äthylhexanoat (KEH)

Verfahren:

Zu einerSuspension von 1 g BL-S640 in 8 ml Methanol gibt man 217 mg Triäthylamin (TEA) und 429 mg 5-Furfuralsulfonsäure. Man kocht die Mischung am Rückfluß und bald sind alle Feststoffe gelöst. Man erhitzt die Lösung 3 Minuten und gibt 1,2 g KEH zu. Ein gelbes Salz wird abgetrennt, gesammelt und mit Methanol gewaschen. Das Salz wird über P₉O₁. in einem Exsikkator getrocknet, die Ausbeute beträgt 800 mg.

Analyse C2	-.H1-N^O0S0NaK .	4Η.	37	C	H	,41	N	,42
			37	,54	3	,31	11	,18
berechnet:				,30	3		10
gefunden

FP. >140 °C, Zers.

Man führt die gleiche Reaktion wie oben beschrieben durch, mit der Ausnahme, daß man Natrium-2-äthylhexanoat anstelle von KEH verwendet. Das Salz fällt aus dem Methanol nicht aus, so wird die Lösung abfiltriert und das Filtrat mit Isopropylalkohol verdünnt. Der feste Niederschlag wird gesammelt und mit Isopropylalkohol gewaschen. Das Salz ist hygroskopisch und wird deshalb im Vakuum über Ρ_ο0_ getrocknet. Die Ausbeute beträgt 800 mg, FP. >140 ⁰C, Zers.

Analyse C₃₃H₁₇NgOgS-Na₂ berechnet: gefunden:

709815/1164

	C	H	,78	N	65
42	,65	2	,94	13,	54.
41	,03	3	10,

M/17 234 - *9- - OC / C 1 / /

2645H4

Die Probe ist in Wasser löslich, und die Lösung ergibt einen pH 6,5.

Der Papierstreifen-Test wurde in Puffer und in menschlichem Serum durchgeführt. Die Probe zeigte nur einen Spot entsprechend BL-S640. Beide Proben hatten eine Löslichkeit von >100 mg/ml bei pH 6,5.

Papierstreifenchromatographie zeigte, daß die obengenannte Verbindung in gesammeltem menschlichem Serum bei pH 7 und 1 molarem Phosphatpuffer bei pH 7 völlig zu BL-S64O hydrolysiert war. Die Papierstreifen-Bioautographie wurde wie folgt durchgeführt. Die Proben wurden in einer Konzentration von 500 i*"/ml in 1 molarem pH 7 Phosphatpuffer und gesammeltem menschlichem Serum von pH 7 bei 500 f/ml gelöst. Eine 10 ul Probe BL-S64O und des obigen Produkts wurden auf einen 1/2 inch Streifen What. Nr. 1 Papier aufgetüpfelt und 16 Stunden bei 27 C in einem Butylacetat/n-Butanol/Essigsäure/Wasser System 80:15:40:24 entwickelt. Die Streifen wurden an der Luft getrocknet und auf eine Agar-Platte gegeben, die mit B. subtilis A.T.C.C. 6633 beimpft war. Nach Zeitabständen von 30 Minuten, 1 Stunde, 3 Stunden und 6 Stunden zeigte sich eine einzige Zone R_f 0,3 für alle Proben.

Hochdruck-Flüssigkeitschromatographie bei einer Konzentration von 1 mg/ml zeigte nach 1/2 Stunde eine völlige Hydrolyse zu der ursprünglichen Verbindung BL-S64O. Einzelne Proben wurden an einer u Bondak C18 Kolonne (Waters Associates) chromatographiert, wobei man als mobile Phase 0,01 m Natriumacetat, pH 4, /Methanol im Verhältnis 8/2 bei einer Fließrate von 0,52 ml/Min verwendete. Die Anzeige erfolgte durch UV bei 354 um. Proben wurden bei einer Konzentration von 1 mg/ml in der mobilen Phase gelöst, 2 u wurden injiziert und BL-S64O wurde mit dem nach 18 Minuten und der Aldehyd mit dem nach 6 Minuten anfallenden Eluat entnommen. Die BL-S64O und 5-Formylfuransulfonsäuremengen wurden unter Verwendung von p-Tolüolsulfonsäure als interner Standard bestimmt.

709815/1 164

M/17 234

/20

Beispiel 12

Verbindungen der Formel

COONa

worin R Phenyl-2-sulfonsäure, 4-Methoxyphenyl-3-sulfonsäure, 4-Hydroxyphenyl-3-sulfonsäure, 2-Carboxymethoxyphenyl, 4-Carboxymethoxyphenyl , 3-Hydroxy-4-carboxyphenyl, 4-(2'-Carboxy)-vinylphenyl, Carboxyl, 2-Carboxyphenyl, 3-Carboxyphenyl, Methansulf onsäure und Methandisulfonsäure bedeutet, werden hergestellt, indem man die 5-Formyl-2-furansulfonsäure gemäß dem Verfahren von Beispiel 7 durch eine äquimolare Gewichtsmenge des entsprech-

enden Aldehyds der Formel R -CHO ersetzt.

Beispiel 13

Die Verbindungen der Formeln

COONa

709815/1164

M/17 234

2645U4

■Ν

und

COOUa

worin . R

"^S03^Na bedeutet,

werden hergestellt, indem man das bei dem Verfahren gemäß Beispiel 7 verwendete Cefatrizin durch eine äquimolare Gewichtsmenge des entsprechenden amphoteren Cephalosporins ersetzt-

709815/1164

M/17 234

-HT-

Beispiel 14

Die Verbindungen der Formeln

COONa

COONa

COONa

COOiia

709815/1

M/17 234

26451U

worin R

I SO₃Na

bedeutet, werden hergestellt, indem man bei dem Verfahren gemäß Beispiel 7 das Cefatrizin durch eine äquimolare Gewichtsmenge des entsprechenden amphoteren Cephalosporins ersetzt.

B e i s ρ ie I

Die Verbindungen der Formeln

COONa

I	Il	— JL	I
■?■	-c I
	C-H I
HN^ ,	Rd

N'

COONa

CH,

709815/1

M/17 234

CH,0

AtH

COONa

worin R

SD₃Na

bedeutet, werden hergestellt, indem man bei dem Verfahren gemäß Beispiel 7 das Cefatrizin durch eine äquimolare Gewichtsmenge des entsprechenden amphoteren Cephalosporins ersetzt.

Beispiel

Die Verbindungen der Formeln

COONa

COONa

709815/1 1

M/17 234 -^*- 2645 U4

COONa

worin R Phenyl-2-sulfonsäure, 4-Methoxyphenyl-3-sulfonsäure, 4-Hydroxyphenyl-3-sulfonsäure, 2-Carboxymethoxyphenyl, 4-Carboxymethoxyphenyl, 3-Hydroxy-4-carboxyphenyl, 4-(2'-Carboxy) vinylphenyl, Carboxyl, 2-Carboxyphenyl, 3-Carboxyphenyl, Methan-sulfonsäure, und Methandisulfonsäure bedeutet, werden hergestellt, indem man bei dem Verfahren gemäß Beispiel 7 die 5-Formyl-2-furansulfonsäure durch eine äquimolare Gewichts-

2 menge des entsprechenden Aldehyds der Formel R -CHO ersetzt.

Beispiel 17

Die Verbindungen der Formeln

COONa

709815/116

COONa

COONa

und

N-CH-

COONa

worin R Phenyl-2-sulfonsäure, 4-Methoxyphenyl-3-sulfonsäure, 4-Hydroxyphenyl-3-sulfonsäure, 2-Carboxymethoxyphenyl, 4-Carboxymethoxyphenyl, 3-Hydroxy-4-carboxyphenyl, 4-(2'-Carboxy)-vinylphenyl, Carboxyl, 2-Carboxyphenyl, 3-Carboxyphenyl, Methansulfonsäure und Methandisulfonsäure bedeutet, werden hergestellt, indem man bei dem Verfahren gemäß Beispiel 7 die 5-Formyl-2-Furansulfonsäure durch eine äquimolare

2 Gewichtsmenge des entsprechenden Aldehyds der Formel R -CHO ersetzt.

709815/1 164

M/17 234

Beispiel 18

Die Verbindungen der Formeln

und

COONa

709815/11 6 A

M/17 234

4®

2645U4

worin R Phenyl-2-sulfonsäure, 4-Methoxyphenyl-3-sulfonsäure, 4-Hydroxyphenyl-3-sulfonsäure, 2-Carboxymethoxyphenyl, 4-Carboxymethoxyphenyl, 3-Hydroxy-4-carboxyphenyl, 4-(2'-Carboxy) -vinylphenyl, Carboxyphenyl, 3-Carboxyphenyl, Methansulf onsäure und Methandisulfonsäure bedeutet, werden hergestellt, indem man bei dem Verfahren gemäß Beispiel 7 die 5-Formyl-2-furansulfonsäure durch eine äquimolare Gewichts-

2 menge des entsprechenden Aldehyds der Formel R -CHO ersetzt.

Beispiel 19

Herstellung der Verbindung BL-S1O57; dem Natriumsalz des Reaktionsproduktes von BL-S643 und 2-Furaldehyd

Formel, BL-S1O57

•2H₂0

Verfahren:

1) Man schlämmt 1 g BL-S643 40 - 45 °C auf.

in 10 ml Wasser bei

709815/1164

2) Man gibt 0,25 g (1,25 Äquivalente) 2-Furaldehyd zu.

3) Man gibt unter raschem Rühren In Natriumhydroxyd bis zu pH 7 - 7,5 zu; in weniger als 5 Minuten erhält man eine Lösung oder nahezu eine Lösung.

4) Man kühlt die Lösung auf 22 - 24 ⁰C und filtriert geeignet ab, um Partikel, Bakterien und Pyrogene zu entfernen.

5) Man lyophilisiert 48 Stunden unter sterilen Bedingungen, um BL-S1O57-Pulver zu erhalten (BL-S1O57 kann auch durch Ausfällung aus der sterilen Lösung von Stufe 4 mit 15 bis 20 Volumina sterilem Isopropanol erfolgen.).

Eigenschaften von BL-S1O57;

a) Biotest (unter Verwendung von Cefatrizin als Standard) = 759 ^/mg.

b) IR = ß-Lactam intakt; gut definiert.

c) NMR = Gut definiert; in Übereinstimmung mit der Struktur,

annähernd 75 % zyklisches Addukt (60 mg/ml in D₃O)

d) Löslichkeit = j> 400 mg/ml in Wasser

e) Papierstreifenchromatographie = primär 1 Zone beim R_ von BL-S643

= 0,2 mg/ml)

von BL-S643 bei 37 °C nach Null und 1 Stunde (Konzentration

f) Flüssigkeitschromatographie = 100 % hydrolysiert in pH 6,1 Puffer innerhalb 1 Stunde bei Raumtemperatur (Konzentration = 1 mg/ml).

g) Fp = 180 °C (Schrumpfen) - 200 ⁰C, zersetzt sich.

709815/1 164

M/17 234

- ISO -

2645U4

Analysenwerte:

	gefunden	bezogen auf trockene Substanz	berechnet
% H2O KF	5,18	—	—
% C	45,91	48,4	48,4
% H	4,05	3,7	3,37
% N	10,81	11/4	11,8
% S	14,92	15,73	16,48
% Asche als Na	3,84	4,03	3,88

Beispiel 20

Verbindung BL-S1O58, Reaktionsprodukt von BL-S643 und Natrium-5-formyl-2-furansu Ifonsäure

Formel, BL-S1O58

N N

CH₀S Jl JJ-CH,

SO₅Na

.5H₂O

Herstellung der Verbindung BL-S1058;

1) 0,45 g 5-Formyl-2-furansulfonsäure-natriumsalz

SO₃Na

709815/1164

werden bei 40-45 C in 10 ml Wasser aufgeschlämmt. Man erhält eine Lösung oder nahezu eine Lösung.

2) Man tröpfelt unter raschem Rühren während 10 Minuten 1 g BL-S643 . 3H„0 ein und gibt gleichzeitig In Natriumhydroxyd bis zu pH 7 - 7,5 zu. Innerhalb 5 Minuten erhält man eine Lösung oder nahezu eine Lösung.

3) Man kühlt auf 20 - 23 C und gibt die Lösung durch geeignete

Filter, um Partikel, Pyrogene und Bakterien zu entfernen.

4) Man lyophilisiert 48 Stunden und erhält BL-S1O58 in Pulverform (steriles BL-S1O58 kann auch aus der Lösung" von Stufe 3 durch Ausfällung aus 15 - 20 Volumina sterilem Isopropanol erhalten werden).

Eigenschaften von BL-S1O58

a) Biotest (unter Verwendung von Cefatrizin als Standard) = 685 Γ/mg.

b) IR - NMR = 1) Gut definiert, in Einklang mit der Struktur;

2) ß-Lactam und 3-Seitenkette sind intakt;

3) 90 % zyklisches Addukt (bei etwa 60 mg/ml in D₂O) .

c) PapierStreifenchromatographie: Primär 1 Zone beim R_f von BL-S643 nach Null und 1 Stunde bei 37 °C. (Konzentration 0,2 mg/ml). Es zeigt sich eine zweite Zone.

d) Flüssigkeitschroinatographie (1 mg/ml in pH 6-Puffer) Zeit in Stunden % hydrolysiert

0 25,4

1 46,5

2 59,0

70981 5/1164

m/17 234 -ie*- 26A5 1 A4

Analysenwerte

% H₂O KF

% C

% H

% N

% S

% Asche als Na

gefunden	bezogen auf trockene Substanz	berechnet
10,17
36,5	40,5	41,6
2,89	2,4	2,74
8,52	9,49	10,01
17,09	18,98	18,6
7,04	7,93	6,63

7098 15/1 164

Antxbiotisches Spektrum von BL-S643-Derivaten in Nährbrühe

	(IO"5)**	(ΙΟ"5)	A9585	MIC ( )~ /ml )	BL-SlO57C1)	BL-S1O58(2)	BL-S643	H
	(ΙΟ"5)**	(ίο-2)	A9604	O.OI6	O.OI6	O.O3	234
Organismen	(ίο"11)	(ΙΟ"5)	A9557	O.OO8	O.OO8	O.OI6
3. pneumoniae*	3. aureus +50$ serum (10 )	(10-4)	A9537	0.5	O.25	• 0.5
3tr. pyogenes*	S. aureus BXI633	(10-4)	A9606	8	8	8
3. aureus Smith	S. aureus BXI633	(10-*)	A9606	1	0.5	1
Gl. aureus Meth-Res	(ίο'*)	AI5097	4	4	4
SaI. enteritidis	(10-4)	A9531	2	2	4	I
E. coli Juni	(10-4)	AI5119	O.25	O.13	0.25
E. coli	(10-4)	A9675	1	1	1	Hr 1
K. pneumoniae	(ΙΟ"*)	A9977	4	2	4
K. pneumoniae		AI5130	0.5	0.5	0.5
Pr. mirabilis		A99OO	4	2	4
Pr. morganii	AI5153	0.5	0.5	0.5
Ps. aeruginosa	A9843A	16	16	16	INJ Cr)
>125	>125	>125	cn

Antibiotisches Spektrum von BL-S643-Derivaten in Nährbrühe (Fortsetzung)

	Organismen	A20019 Λ9657	BL-SlO5Ti1)	MIC ( Y- /ml )'	BL-S643
	marcescens (10 ) cloacae (IO ) cloacae (10 ) cloacae (10 )	R =	125 . >125 0.5 16	BL-S1O58(2)	125 >125 k 32
Ser. Ent. Ent. Ent.			-ζ?	125 >125 0.5 16
		_JI^ ^L SO Na

-S 1^ ß-

CH-

45% AAB + 5 % Serum + 50 % Brühe wie oben aufgeführt.

++ Verdünnung über Nacht erhaltener Kulturbrühe.

(1) Umgerechnet für 80 % Gehalt an BL-S643.

(2) Umgerechnet für 59% Gehalt an BL-S643.

Dies bedeutet, daß die Zahlenwerte verringert, d.h. verbessert wurden. Diese Umrechnung wurde auch für die nachstehend aufgeführten Versuche durchgeführt, oder es wurde alternativ die Gewichtsmenge erhöht, um eine äquivalente Dosierung zu .erhalten.

COONa

M/17234 -MT-

Papierchromatogramme wurden mit Rattenurin angefertigt, der zwischen Null und 2 und zwischen 2 und 4 Stunden nach i.m-Verabreichung von BL-S1O57, 1058 und 643 gesammelt wurde, um die antibiotisch aktiven Stoffwechselprodukte zu bestimmen, wobei absteigende Chromatographie mit System Nr. (Butylacetat:n-Butanol:Eisessig-H 0 = 80:15:40:24) angewandt wurde. Es wurde ein einzelner identischer Fleck in allen Fällen beobachtet. Dies zeigt völlige Hydrolyse der beiden Derivate in die ursprüngliche Verbindung (BL-S643).

Beispiel 21

Verbindungen der Formel

worin R Phenyl-2-sulfonsäure, 4-Methoxyphenyl-3-sulfonsäure, 4-Hydroxyphenyl-3-sulfonsäure, 2-Carboxymethoxyphenyl, 4-Carboxymethoxyphenyl, 3-Hydroxy-4-carboxy-nhenyl, 4-(2'-Carboxy) -viny !phenyl, Carboxyl, 2-Carboxyphenyl, 3-Carboxyphenyl, Methan-sulfonsäure und Methandisulfonsäure bedeutet, werden hergestellt, indem man bei dem Verfahren gemäß Beispiel-20 die 5-Formyl-2-furansulfonsäure durch eine äquimolare Gewichts-

menge des entsprechenden Aldehyds der Formel R -CHO ersetzt.

7098 15/1164

M/17 234

Beispiel

Die Verbindungen der Formeln

COONa

-CH,

und

worin

,2 ,

Ό.

_CH S

CH,

COOIIa

oder

"S0,Na bedeutet,

werden hergestellt, indem man das gemäß den Verfahren der Beispiele 19 und 20 verwendete Cefaparol durch eine äquimolare Gewichtsmenge des entsprechenden amphoteren Cephalosporins ersetzt.

7 0 9 8 15/1164

M/17 234

Beispiel

Die Verbindungen der Formeln

H 0

HO

C-

HN>

■C ι

C-H

7 :N

¹I ι

i N

COONa

CK,

HO

HO

Il —c

C-H

CH.

HO

c-

Il ■c

R'

COOIia

COONa CH,

•Ν

Ίϊ

CH-

und

COOria

•C N

CH,

709815/1

M/17 234

worin R

11%

26A5UA

oder

SO Na

3 bedeutet,

werden hergestellt, indem man das bei den Verfahren gemäß den Beispielen 19 und 20 verwendete Cefaparol durch eine äquimolare Gewichtsmenge des entsprechenden amphoteren Cephalosporins ersetzt.

Beispiel

Die Verbindungen der Formeln

COOITa

COONa

N; N

JL-CH₅ und

COONa

709815/1164

M/17 234

COONa

■ worin R

26451U

I I

oder

T j] SO-iNa bedeutet,

werden hergestellt, indem man das bei den Verfahren gemäß den Beispielen 19 und 20 verwendete Cefaparol durch eine äquimolare Gewichtsmenge des entsprechenden amphoteren Cephalosporins ersetzt.

Beispiel

Die Verbindungen der Formeln

H 0

^Η0Λ\ th—?

' HN^ ^N - C-H

2 0'

COONa

CH-

COONa

.... 7 0 9 8 1 5 ■/ -11 6 k

M/17 234

HO-

/Γ\

Ηϊί>

11
•c

C-H

•a

Mo

COONa

COOIIa

Μ~ χι

CH

2645H4

und

worin R

oder

SO₃Ka bedeutet,

werden hergestellt, indem man bei den Verfahren gemäß den Beispielen 19 und 20 das Cefaparol durch eine äquimolare Gewichtsmenge des entsprechenden amphoteren Cephalosporins ersetzt.

Beispiel

Die Verbindungen der Formeln

HO

H ι	C-I Ip R^	O I!	rf—N^«	C
I -C- ι	Il -c
		S^-CH2-S

N·

COONa

709815/1

M/17 234

JNI

COONa

COONa

COONa

und

worin

R^£

oder

SO^Na bedeutet,

werden hergestellt, indem man das bei den Verfahren gemäß den Beispielen 19 und 20 verwendete Cefaparol durch eine äguimolare Gewichtsmenge des entsprechenden amphoteren Cephalosporins ersetzt.

709815/1

M/17 234

-ΝΪ

2645H4

Beispiel

Die Verbindungen der Formeln

HO

H O

I Il

c — c

HN,

'C-I I₂ R

N N

CH₂-S

N-CH

'N

COONa

N-CH

COONa

und

COONa

COONa

. worin R

^ oder—ri"' ^^ S0-,Na bedeutet,

709815/1

werden hergestellt, indem man das bei den Verfahren gemäß den Beispielen 19 und 20 verwendete Cefaparol durch eine äquimolare Gewichtsmenge des entsprechenden amphoteren Cephalosporins ersetzt.

709815/116A ORlGSNAL INSPECTED

Claims (1)

1. Patentansprüche

   IV Cephalosporine der Formel I:

   worin

   A Wasserstoff, Hydroxy, Methyl oder Methoxy bedeuter,

   R Wasserstoff, Natriur.. oder Kalium ist,

   2
   R Carboxyl oder 2-Furyl· oder ein aliphatischer, aromatischer oder heterozyklischer Rest ist, an den auch eine stark saure Gruppe in Form ihr:-ο Natrum- oder Kaliumsalzes gebunden ist, und

   R^J l,2,3-Triazol-5-yl, TetrazcL-5-yi, 1,2^-Thiadiazol-S-yl, 1,3,4-Thiadiazol-2-yl, 1,3,4-Oxadiazol-3-yl oder
   1,2,4-Triazol-5-yl bedeutet, wobei jede dieser Gruppen unsubscituiert oder mit einer oder zwei Niedrigalkylgruppen mxt I bis 4 Kohlenstoffatomen substituiert sein kann.

   7098 15/1164

   M/17 234

   2) Verbindungen gemäß Anspruch 1, wobei R die Bedeutungen 2-Furyl, 2-Furan-5-sulfonsäure, Phenyl-2-sulfonsäure/ 4-Methoxyphenyl-3-sulfonsäure, 4-Hydroxyphenyl-3-sulfonsäure, 2-Carboxymethoxyphenyl, 3-Hydroxy-4-carboxyphenyl, 4-(2'-Carboxy)-vinylphenyl, Carboxyl, 2-Carboxyphenyl, 3-Carboxyphenyl, Methansulfonsäure, Methandisulfonsäure oder 4-Carboxymethoxyphenyl besitzt.

   3) Verbindungen gemäß Anspruch 1, worin R die Bedeutung 2-Furyl besitzt.

   4) Verbindungen gemäß Anspruch 1, worin R die Bedeutung 2-Furan-5-suIfonsäure besitzt.

   5) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4, worin R Natrium ist.

   6) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei R Kalium ist.

   7) Cephalosporine der Formel

   709815/1164

   M/17 234

   1 2
   worin A, R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen

   besitzen.

   8) Verbindungen gemäß Anspruch Ί , worin R die in Anspruch angegebenen Bedeutungen besitzt.

   2 9) Verbindungen gemäß Anspruch 7, wobei R die Bedeutung

   2-Furyl besitzt.

   10) Verbindungen gemäß Anspruch 7, worin R die Bedeutung 2-Furan-5-sulfonsäure besitzt.

   11) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 7 bis 10/ worin R Natrium ist.

   12) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 7 bis 10/ wobei R Kalium ist.

   13) Cephalosporine der Formel

   H 0

   HO

   HN 'N-

   2 // R² (j

   ■Ν

   COOR^J

   709815/1164

   1 2
   worin R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen

   besitzen.

   14) Verbindungen gemäß Anspruch 13, wobei R die in Anspruch

   angegebenen Bedeutungen besitzt.

   2 15) Verbindungen gemäß Anspruch 13, wobei R die Bedeutung

   2-Furyl besitzt.

   16) Verbindungen gemäß Anspruch 13, wobei R die Bedeutung

   2-Furan-5-sulfonsäure besitzt.

   17) Verbindungen gemäß Anspruch 15 oder 16, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Natrium ist.

   18) Verbindungen gemäß Anspruch 15 oder 16, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Kalium ist.

   19) Verbindungen gemäß Anspruch 15 oder 16, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Wasserstoff ist,

   709815/1164

   M/17 234

   - ΤΓ8 -

   26A5U4

   20) Cephalosporine der Formel

   COOR^J

   -N-CHr

   1 2

   worin A, R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzen.

   21) Verbindungen gemäß Anspruch 20, wobei R die j__n Anspruch 2

   angegebenen Bedeutungen besitzt.

   22) Verbindungen gemäß Anspruch 20, wobei R die Bedeutung

   2-Furyl besitzt.

   23) Verbindungen gemäß Anspruch 20, wobei R die Bedeutung

   2-Furan-5-sulfonsäure besitzt.

   24) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 20 bis 23, worin R Natrium ist.

   709815/1

   M/17 234

   (ο

   25) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 20 bis 23, wobei R^J Kalium ist.

   26) Cephalosporine der Formel

   N-CH-

   COOR^J

   1 2
   wobei R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzen.

   27) Verbindungen gemäß Anspruch 26, wobei R die in Anspruch 2 angegebenen Bedeutungen besitzt.

   28) Verbindungen gemäß Anspruch 26, wobei R² die Bedeutung 2-Furyl besitzt.

   29) Verbindungen gemäß Anspruch 26, wobei R die Bedeutung 2-Furan-5-sulfonsäure besitzt»

   709815/1

   M/17 234

   2645UA

   3O) Verbindungen gemäß Anspruch 26 oder 27, welche die D-Konfirguration aufweisen, wobei R Natrium ist.

   31) Verbindungen gemäß Anspruch 26 oder 27, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R, Kalium ist.

   32) Verbindungen gemäß Anspruch 26 oder 27, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Wasserstoff ist

   33) Cephalosporine der Formel

   COOR¹

   N N

   H i|

   CHp-S C_v N

   CH₃

   1 2

   wobei A, R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzen.

   34) Verbindungen gemäß Anspruch 33, wobei R die in Anspruch

   2 angegebenen Bedeutungen besitzt.

   709815/1164

   M/17 234 - «Μ - 2645 HA

   35) Verbindungen gemäß Anspruch 33, wobei R die Bedeutung 2-Furyl besitzt.

   36) Verbindungen gemäß Anspruch 33/ wobei R die Bedeutung

   2-Furan-5-sulfonsäure besitzt.

   37) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 3 3 bis 36, wobei R Natrium ist.

   38) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 33 bis 36, wobei R Kalium ist.

   39) Cephalosporine der Formel

   H 0

   I Il

   HO—ν ^r~ ^{C C}

   HlI Λ j f "^, N N

   N^ I Il

   -- -' _s—C N

   COOR¹

   CH₃

   1 2
   wobei R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen

   besitzen.

   40) Verbindungen gemäß Anspruch 39, wobei R die in Anspruch

   angegebenen Bedeutungen besitzt.

   709815/1164

   ^; M/17 234

   - PS*» -

   41) Verbindungen gemäß Anspruch 39, wobei R die Bedeutung

   2-Furyl besitzt.

   42) Verbindungen gemäß Anspruch 39, worin R die Bedeutung

   2-Furan-5-sulfonsäure besitzt.

   43) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 41 oder 42, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Natrium ist.

   44) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 41 oder 42, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Kalium ist.

   45) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 41 oder 42, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Wasserstoff ist.

   46) Cephalosporine der Formel

   H O

   I H

   Cn

   i ι

   N-

   Jt

   N N

   CH₂-S

   ■Οί-

   Ο 00R¹

   1 2

   worin A, R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzen.

   709815/1164

   M/17 234

   /O

   2 47) Verbindungen gemäß Anspruch 46, wobei R die in Anspruch

   2 angegebenen Bedeutungen besitzt.

   48) Verbindungen gemäß Anspruch 46, worin R die Bedeutung 2-Furyl besitzt.

   2 49) Verbindungen gemäß Anspruch 46, wobei R die Bedeutung

   2-Furan-5-sulfonsäure besitzt.

   50) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 46 bis 49, wobei R Natrium ist.

   51) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 46 bis 49, wobei R Kalium ist.

   52) Cephalosporine der Formel

   CH₂-S

   1 2
   wobei R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen

   besitzen.

   709815/1 164

   M/17 234

   AA

   2 53) Verbindungen gemäß Anspruch 52, wobei R die in Anspruch 2

   angegebene Bedeutung besitzt.

   2 54) Verbindungen gemäß Anspruch 52, wobei R die Bedeutung

   2-Furyl besitzt.

   55) Verbindungen gemäß Anspruch 52, wobei R die Bedeutung

   2-Furan-5-sulfonsäure besitzt.

   56) Verbindungen gemäß den Ansprüchen 54 oder 55, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Natrium ist.

   57) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 54 oder 55, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Kalium ist.

   58) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 54 oder 55_f welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Wasserstoff ist.

   59) Cephalosporine der Formel

   CH-

   N-

   COOR¹

   1 2

   wobei A, R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen

   besitzen.

   709815/1164

   M/17 234 ■ - i»

   60) Verbindungen gemäß Anspruch 59, wobei R die in Anspruch

   angegebenen Bedeutungen besitzt.

   61) Verbindungen gemäß Anspruch 59, wobei R die Bedeutung

   2-Furyl besitzt.

   62) Verbindungen gemäß Anspruch 59, wobei R die Bedeutung

   2-Furan-5-sulfonsäure besitzt.

   63) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 59 bis 62, wobei R Natrium ist.

   64) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 59 bis 62, wobei R Kalium ist.

   65) Cephalosporine der Formel

   H 0

   c <r^H3

   HN N ^^ ^N

   COOR¹

   1 2

   wobei R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen

   besitzen.

   709815/1184

   M/17 234

   2645H4

   66) Verbindungen gemäß Anspruch 65, wobei R die in Anspruch angegebenen Bedeutungen besitzt.

   67) Verbindungen gemäß Anspruch 65, worin R die Bedeutung 2-Furyl besitzt.

   68) Verbindungen gemäß Anspruch 65, wobei R die Bedeutung 2-Furan-5-Sulfonsäure besitzt.

   69) Verbindungen gemäß Anspruch 67 oder 63, welche in der D-Konfiguration vorliegen, wobei R Natrium ist.

   70) Verbindungen gemäß Anspruch 67 oder 68, welche in der D-Konfiguration vorliegen, wobei R .Kalium ist.

   71) Verbindungen gemäß Anspruch 67 oder 68, welche in der D-Konfiguration vorliegen, wobei R Wasserstoff ist.

   72) Cephalosporine der Formel

   N ,N-

   ^XC^H

   D-

   COOR¹

   N C-CH.

   CH₂-S-

   Il

   N x/

   709815/1164

   2645H4

   M/17 234 - *

   1 2 worin A, R und R die in Anspruch 1 angegebenen

   Bedeutungen besitzen.

   73) Verbindungen gemäß Anspruch 72, wobei R die in Anspruch 2

   angegebenen Bedeutungen besitzt.

   74) Verbindungen gemäß Anspruch 72, wobei R die Bedeutung

   2-Furyl besitzt.

   75) Verbindungen gemäß Anspruch 72, wobei R die Bedeutung

   2-Furan-5-sulfonsäure besitzt.

   76) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 72 bis 75, wobei R Natrium ist.

   77) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 72 bis 75, wobei R Kalium ist.

   78) Cephalosporine der Formel

   COOR¹

   1 2
   wobei R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen

   besitzen.

   709815/1

   M/17 234

   2 79) Verbindungen gemäß Anspruch 78, wobei R die in Anspruch angegebenen Bedeutungen besitzt.

   80) Verbindungen gemäß Anspruch 78, wobei R die Bedeutung 2-Furyl besitzt.

   81) Verbindungen gemäß Anspruch 78, wobei R die Bedeutung 2-Furan-5-sulfonsäure besitzt.

   82) Verbindungen gemäß Anspruch 30 oder 81, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Natrium ist.

   83) Verbindungen gemäß Anspruch 80 oder 81, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Kalium ist.

   84) Verbindungen gemäß Anspruch 30 oder 81, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Wasserstoff ist.

   85) Cephalosporine der Formel

   Nt=-N ·

   N-CH.

   COOR^J

   2
   di

   1 2
   wobei A, R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzen.

   709815/1164

   M/17 234 -

   86) Verbindungen gemäß Anspruch 85, wobei R die in Anspruch angegebenen Bedeutungen besitzt.

   87) Verbindungen gemäß Anspruch 35, wobei R die Bedeutung 2-Furyl besitzt.

   88) Verbindungen gemäß Anspruch 85, wobei R die Bedeutung 2-Furan-5-sulfonsäure besitzt.

   89) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 85 bis 88, wobei R Natrium ist.

   90) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 85 bis 88, wobei R Kalium ist.

   91) Cephalosporine der Formel

   H 0 Il

   HN,

   A-C

   L </

   1 2 wobei R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzen.

   709815/1164

   M/17 234 - MKP- 2645144 I

   2 ;

   92) Verbindungen gemäß Anspruch 91, wobei R die in Anspruch 2 ■ angegebenen Bedeutungen besitzt.

   93) Verbindungen gemäß Anspruch 91, wobei R die Bedeutung

   2-Furyl besitzt.

   94) Verbindungen gemäß Anspruch 91, wobei R die Bedeutung

   2-Furan-5-Sulfonsäure besitzt.

   95) Verbindungen gemäß Anspruch 93 oder 94, welche in D-Konfiguration vorliegen, wobei R Natrium ist.

   96) Verbindungen gemäß Anspruch 9 3 oder 94, welche in D-Konfiguration vorliegen, wobei R Kalium ist.

   97) Verbindungen gemäß Anspruch 93 oder 94, welche in

   D-Konfiguration vorliegen, wobei R Wasserstoff ist.

   98) Cephalosporine der Formel

   1 2

   wobei A, R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzen.

   709815/1164

   M/17 234

   99) Verbindungen gemäß Anspruch 98, wobei R die in Anspruch angegebenen Bedeutungen besitzt.

   2 100) Verbindungen gemäß Anspruch 98, wobei R die Bedeutung

   2-Furyl besitzt.

   2 101) Verbindungen gemäß Anspruch 98, wobei R die Bedeutung

   2-Furan-5-sulfonsäure besitzt.

   102) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 98 bis 101/ wobei R Natrium ist.

   103) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 98 bis 101, wobei R Kalium ist.

   104) Verbindungen der Formel

   1 2
   wobei R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen

   besitzen.

   709815/1 164

   M/17 234 - l·**

   105) Verbindungen gemäß Anspruch 104, wobei R die in Anspruch 2 angegebenen Bedeutungen besitzt.

   106) Verbindungen gemäß Anspruch 104, wobei R die Bedeutung

   2-Furyl besitzt.

   107) Verbindungen gemäß Anspruch 104, wobei R die Bedeutung

   2-Furan-5-sulfonsäure besitzt.

   108) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 106 oder 1Ο7, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Natrium ist,

   109) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 106 oder 107, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Kalium ist.

   110) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 106 oder 1Ο7, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Wasserstoff ist.

   Ill) Cephalosporine der Formel

   A
   X H 0

   HO-^ "V-C- G

   CHo

   COOR·¹·

   12
   wobei A, R und R die in Anspruch 1'angegebenen Bedeutungen

   besitzen.

   7 0 9 815/1164

   M/17 234

   2645H4

   2 112) Verbindungen gemäß Anspruch 111, wobei R die in Anspruch 2 angegebenen Bedeutungen besitzt.

   2 113) Verbindungen gemäß Anspruch 111, wobei R die Bedeutung

   2-Furyl besitzt.

   114) Verbindungen gemäß Anspruch 111, wobei R die Bedeutung 2-Furan-5-sulfonsäure besitzt.

   115) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 111 bis 114, wobei R Natrium ist.

   116) Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 111 bis 114, wobei R Kalium ist.

   117) Cephalosporine der Formel

   HO

   H Q

   J.

   HN

   N N

   COOR-¹

   1 2
   wobei R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen

   besitzen.

   709815/1164

   M/17 234 - »4--

   118) Verbindungen gemäß Anspruch 117/ wobei R die in Anspruch

   2 angegebenen Bedeutungen besitzt.

   2 119) Verbindungen gemäß Anspruch 117, wobei R die Bedeutung

   2-Furyl besitzt.

   2 120) Verbindungen gemäß Anspruch 117/ wobei R die Bedeutung

   2-Furan-5-sulfonsäure besitzt.

   121) Verbindungen gemäß Anspruch 119 oder 120/ welche die D-Konfiguration aufweisen/ wobei R Natrium ist.

   122) Verbindungen gemäß Anspruch 119 oder 120, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R . Kalium ist.

   123) Verbindungen gemäß Anspruch 119 oder 120, welche die D-Konfiguration aufweisen, wobei R Wasserstoff ist.

   124) Das Natrium- oder Kaliumsalz des äquimolaren Kondensationsprodukts von a) einem Aldehyd, mit Ausnahme von Formaldehyd oder Acetaldehyd, mit b) einem amphoteren in 3-Stellung thiolierten Cephalosporin, welches in 3-Stellung die

   3 3

   Gruppe -CH₂-S-R aufweist/ wobei R 1,2,3-Triazol-5-yl

   bedeutet, welches unsubstituiert oder mit einer oder zwei Niedrigalkylgruppen mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, welche eine oc-substituierte^ X-Amino-acetamido-Gruppe in 7-Stellung aufweisen, substituiert ist, welches in seiner Zwitterionenform eine Wasserlöslichkeit von weniger als 125 mg/ml aufweist.

   709815/1164

   M/17 234 - *«

   125) Das Natrium- oder Kaliumsalz des äquimolaren Kondensations-

   2 produkte von a) einem Aldehyd der Formel R -CHO, wobei

   2
   R 2-Furfuraldehyd, Carboxyl oder ein aliphatischer, aromatischer oder heterozyklischer Rest ist, an den auch stark saure Gruppen in Form ihrer Natrium- oder Kaliumsalze gebunden sind, mit b) einem amphoteren, in 3-Stellung thiolierten Cephalosporin, welches in 3-Stellung die Gruppe -CH-S-R aufweist, wobei R die Bedeutung 1,2,3-

   Triazol-5-yl hat, welches unsubstituiert oder mit ein oder zwei Niedrigalkylgruppen mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen substituiert ist, welches eine oc-substituierteiX--Amino-acetamido-Gruppe in 7-Stellung aufweist und in seiner Zwitterionenform eine Wasserlöslichkeit von weniger als 125 mg/ml hat.

   2 126) Verbindungen gemäß Anspruch 125, wobei R die Bedeutung

   2-Furan-5-sulfonsäure aufweist.

   127) Ein Natrium- oder Kaliumsalz des äquimolaren Kondensations-

   2 Produkts von a) einem Aldehyd der Formel R -CHO, wobei

   2
   R 2-Furfuraldehyd, Carboxyl oder ein aliphatischer, aromatischer oder heterozyklischer Rest ist, an den auch eine stark saure Gruppe in Form ihres Natrium- oder Kaliumsalzes gebunden ist, mit b) einem amphoteren, in 3-Stellung thiolierten Cephalosporin, welches in 3-Stellung

   3 3

   die Gruppe -CH₉-S-R aufweist, wobei R 1,2,3-Triazol-5-yl ist, welches unsubstituiert oder mit einer oder zwei Niedrigalkylgruppen mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen substituiert ist, eine -X-substituierte- oC-Aminoacetamidogruppe in 7-Stellung aufweist und in seiner Zwitterionenform eine Wasserlöslichkeit von weniger als 125 mg/ml hat; wobei der Aldehyd, der die saure Gruppe trägt,

   709815/1164

   M/17 234

   25

   o-Benzaldehyd-sulfonsäure, 4-Methoxy-benzaldehyd-3-sulfonsäure, 4-Hydroxybenzaldehyd-3-sulfonsäuren o- und p-Formylphenoxyessigsäure, 5-Formylsalicylsäure, p-Formylzimtsäure, Glyoxalsaure, Phthala .ehydsäure, p-Formyl-benzoesäure, Acetaldehydsulfonsäure-Natriumsalz oder Acetaldehyd-disulfonsäure-Natriumsalz oder 5-Formyl-2-furansulfonsäure ist.

   128) Verbindung gemäß Anspruch 127, wobei der Aldehyd 5-Formyl-2-furansulfonsäure ist.

   129) Verfahren zur Herstellung der Cephalosporine nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man

   (1) eine wässrige Suspension eines amphoteren Cephalosporins der Formel II

   CH₂-S-R³

   COOK¹

   II

   worin A, R und R- die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzen, oder ein Solvat oder ein Hydrat davon, mit einem Aldehyd der Formel

   R²- CHO

   worin R die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzt, und einer ausreichend wasserlöslichen Natrium- oder' Kaliumbase, um den pH der Reaktionsmischung auf zwischen 5,5 und 8 zu erhöhen und in Lösung das gewünschte Salz der Formel I zu bilden, behandelt, und

   70981 5/1164

   M/17 234 - i*¥

   Vt

   (2) das gewünschte Salz der Formel I aus der Lösung gewinnt.

   130) Verfahren gemäß Anspruch 129, dadurch gekennzeichnet, daß das amphotere Cephalosporin-Ausgangsmaterial der Formel II in F orm des Methanol- oder Propylenglykolsolvats oder -sesquihydrats vorliegt.

   131) Verfahren gemäß einem der Ansprüche 129 oder 130, dadurch gekennzeichnet, daß die Base Natrium- oder Kaliumhydroxyd ist.

   132) Verfahren gemäß einem der Ansprüche 129 bis 131, dadurch gekennzeichnet, daß die gewünschte Verbindung durch Lyophilisation aus der Lösung gewonnen wird.

   133) Verfahren gemäß einem der Ansprüche 129 bis 131, dadurch gekennzeichnet, daß in Stufe (2) das gewünschte Produkt durch Zugabe eines organischen Lösungsmittels, in dem das Salz nicht löslich ist, aus der Lösung ausgefällt wird.

   134) Verfahren gemäß Anspruch 133, dadurch gekennzeichnet, daß das organische Lösungsmittel Isopropanol ist.

   135) Verfahren gemäß einem der Ansprüche 129 bis 134, dadurch

   gekennzeichnet, daß man als R die in Anspruch 2 angegebenen Reste verwendet.

   70981 5/1164

   M/17 234

   136) Verfahren gemäß einem der Ansprüche 129 bis 135, dadurch

   2
   gekennzeichnet, daß man als R den 2-Furyl-Rest verwendet.

   137) Verfahren gemäß einem der Ansprüche 129 bis 135, dadurch

   gekennzeichnet, daß man als R den 2-Furan-5-sulfonsäure-Rest verwendet.

   138) Verfahren gemäß einem der Ansprüche 129 - 137, dadurch gekennzeichnet, daß man als R den 1,2,3-Triazol-5-yl-Rest verwendet.

   139) Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel IV

   CHo-

   •N

   ³X/

   • H

   worin R Natrium oder Kalium bedeutet, dadurch gekennzeichnet, daß man

   (1) eine Suspension von 7-/D- oc-Amino- K-(p-hydroxyphenyl)-acetamidoZ-S-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure oder eines Solvats oder Hydrats davon in einem geeigneten inerten organischen Lösungs-

   709815/1164

   M/17 234 -

   mittel bildet, wobei dieses Lösungsmittel ein Lösungsmittel für das Triäthylaminsalz des Furfuralreaktionsprodukts von 7-/p-3i-Amino-C>c- (p-hydroxyphenyl) -acetamido/ 3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure und ein Nicht-Lösungsmittel für das Alkalimetallsalz der Formel IV ist;

   (2) die Suspension mit Furfural und ausreichend Triäthylamin behandelt, damit sich in Lösung das Triäthylaminsalz des Furfural-Reaktionsprodukts von 7-/D-Ä_-Amino-OC-(p-hydroxyphenyl)-acetamido/-3-(1,2, 3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure bildet, und

   (3) das gewünschte Alkalimetallsalz der Formel I durch Zugeben einer im Lösungsmittel löslichen Natrium- oder Kaliumbase aus der Lösung ausfällt.

   140) Verfahren gemäß Anspruch 139, dadurch gekennzeichnet, daß *-aan das 1-/O-Oi.-Amino-«.- (p-hydroxyphenyl) -acetamido/^- (l,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-S-cephem^-carbonsäure-Ausgangsmaterial in Form des Methanol- oder Proyplenglycolsolvats oder des Sesquihydrats verwendet.

   141) Verfahren gemäß Anspruch 140, dadurch gekennzeichnet, daß das in Stufe (1) verwendete Lösungsmittel Methanol ist.

   142) Verfahren gemäß Anspruch 141, dadurch gekennzeichnet, daß das in Stufe (3) verwendete Natrium- oder Kaliumsalz Natrium-2-äthylhexanoat oder Kalium-2-äthylhexanoat ist.

   709816/1164

   : M/17 234

   143) Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel IV

   worin R Natrium oder Kalium bedeutet, dadurch gekennzeichnet, daß man

   (1) eine Suspension von 7-/D-X-Amino- <*-- (p-hydroxyphenyl) acetamido_7-3-(1, 2 ,S-triazol-S-ylthiomethyl) -3-cephem-4-carbonsäure-methanolsolvat in Methanol herstellt;

   (2) die Suspension mit einem molaren Überschuß Furfural und ausreichend Triäthylamin behandelt, damit sich in Lösung das Triäthylaminsalz des Furfural-Reaktionsprodukts von 7-/p- °^--Amino- ÖL- (p-hydroxyphenyl) -acetamid£7~3-(1,2,S-triazol-S-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure bildet; und

   (3) das gewünschte Alkalimetallsalz der Formel I durch Zugabe einer Lösung von Natrium- oder Kalium-2-äthylhexanoat in Isopropanol aus der Lösung ausfällt.

   144) Verfahren gemäß Anspruch 143, dadurch gekennzeichnet, daß die in Stufe (2) erhaltene Lösung vor der Ausfällung in Stufe (3) filtriert wird.

   709815/1164

   M/17 234

   - *♦*■ -

   145) Verfahren gemäß Anspruch 144, dadurch gekennzeichnet, daß man die Lösung, die man in Stufe (2) erhalten hat, vor dem Abfiltrieren mit Aktivkohle behandelt.

   146) Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel IV

   CHo-

   -N

   ⁵V/

   worin R Natrium- oder Kalium bedeutet, dadurch gekennzeichnet, daß man

   (1) eine Suspension von 1-/O-Ol -Amino- CK- (p-hydroxyphenyl)-acetamido/-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure oder eines Solvats oder-Hydrats davon, in einem geeigneten inerten organischen Lösungsmittel bildet, wobei dieses Lösungsmittel ein Nicht-Lösungsmittel für das Alkalimetallsalz der Formel I ist;

   (2) die Suspension mit Furfural und einer im Lösungsmittel löslichen Natrium- oder 'Kaliumbase behandelt, wobei man ausreichend Base verwendet, um den pH der Reaktionsmischung auf zwischen etwa 5,5 und 8 zu erhöhen; und

   709815/1164

   M/17 234 - **8

   (3) das gewünschte Produkt der Formel IV aus der Reaktionsmischung gewinnt.

   147) Verfahren gemäß Anspruch 146, dadurch gekennzeichnet, daß das 7-/p-~v-Amino-<>L- (p-hydroxyphenyl) -acetamido/-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure-Ausgangsmaterial in Form des Methanol- oder Propylenglycol-Solvats oder Sequihydrats verwendet wird.

   148) Verfahren gemäß Anspruch 147, dadurch gekennzeichnet, daß das inerte organische Lösungsmittel Methanol ist.

   149) Verfahren gemäß Anspruch 148, dadurch gekennzeichnet, daß die in Stufe 2 verwendete Base Natrium- oder Kalium-2-äthylhexanoat ist.

   150) Verfahren gemäß Anspruch 146, dadurch gekennzeichnet, daß man

   (1) eine Suspension von 7-/D-^Amino-oc-(p-hydroxyphenyl) acetamido/·—3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure-methanolsolvat in Methanol bildet;

   (2) die Suspension mit einem molaren Überschuss Furfural und genügend Lösung von Natrium- oder Kalium-2-äthylhexanoat in Isopropanol behandelt, um den pH der Reaktionsmischung auf zwischen etwa 5,5 und 8 zu erhöhen; und

   (3) das gewünschte Produkt der Formel IV durch Filtrieren gewinnt.

   709815/1164

   2645U4 i

   M/17 234 - ΤΉ- - i

   j 151) Pharmazeutisches Mittel, enthaltend mindestens eine j Verbindung nach Anspruch 1 und eine feste, pharma- | zeutisch verträgliche, wasserlösliche organische Säure, welche in ausreichender Menge enthalten ist, damit der pH der Formulierung nach der Aufbereitung mit Wasser zwischen etwa 5 und 6 liegt, und gegebenenfalls übliche, pharmazeutische Träger und/oder Zusätze.

   152) Mittel gemäß Anspruch 151, dadurch gekennzeichnet, daß

   2
   der als R verwendete Rest die in Anspruch 2 angegebenen

   Bedeutungen besitzt.

   2 153) Mittel gemäß Anspruch 151, wobei R die Bedeutung 2-Furyl besitzt.

   2" 154) Mittel gemäß Anspruch 151, wobei R die Bedeutung 2-Furan-5-sulfonsäure hat.

   155) Mittel gemäß einem der Ansprüche 151 bis 154, in dem die feste organische Säure in einer Menge von etwa 4- 6 Gew.-% der Verbindung der Formel I enthalten ist.

   156) Mittel gemäß einem der Ansprüche 151 - 154, dadurch gekennzeichnet, daß die verwendete feste organische Säure Zitronensäure ist.

   709815/1164