DE2631610A1 - Serum hepatitis test - Google Patents
Serum hepatitis testInfo
- Publication number
- DE2631610A1 DE2631610A1 DE19762631610 DE2631610A DE2631610A1 DE 2631610 A1 DE2631610 A1 DE 2631610A1 DE 19762631610 DE19762631610 DE 19762631610 DE 2631610 A DE2631610 A DE 2631610A DE 2631610 A1 DE2631610 A1 DE 2631610A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- antibodies
- haa
- hepatitis
- reagent
- associated antigen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims description 17
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 title description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 31
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 18
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 17
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 15
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 12
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 10
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 9
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 claims description 9
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims description 8
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 8
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000010703 silicon Substances 0.000 claims description 8
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 5
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 3
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 claims description 3
- 150000004756 silanes Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000012549 training Methods 0.000 claims description 3
- PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N (16alpha,17betaOH)-Estra-1,3,5(10)-triene-3,16,17-triol Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(C(O)C4)O)C4C3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N Digoxin Natural products O([C@H]1[C@H](C)O[C@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@](C)([C@H](O)C4)[C@H](C4=CC(=O)OC4)CC5)CC3)CC2)C[C@@H]1O)[C@H]1O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N 0.000 claims description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 claims description 2
- LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N digoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)[C@H](O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N 0.000 claims description 2
- 229960005156 digoxin Drugs 0.000 claims description 2
- LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N digoxine Natural products C1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(C)OC(OC2C(OC(OC3CC4C(C5C(C6(CCC(C6(C)C(O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)CC2O)C)CC1O LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N estriol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H]([C@H](O)C4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N 0.000 claims description 2
- 229960001348 estriol Drugs 0.000 claims description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 5
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000004982 aromatic amines Chemical class 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- JBHRGAHUHVVXQI-UHFFFAOYSA-N 1-triethoxysilylpropan-1-amine Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)C(N)CC JBHRGAHUHVVXQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000006087 Silane Coupling Agent Substances 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 241001233037 catfish Species 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 239000005289 controlled pore glass Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005350 fused silica glass Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002444 silanisation Methods 0.000 description 1
- 125000005624 silicic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/804—Radioisotope, e.g. radioimmunoassay
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/82—Hepatitis associated antigens and antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Nachweis von
Hepatitis - assoziiertem Antigen in Seren.
Stoffe lassen sich ,in fluiden Medien auch bei sehr geringer
Konzentration durch radioaktive Kennzeichnung nachweisen. Bei der radioaktiven Iinmunprüfung (B.IA, radioimmunoassay)
werden radioaktiv gekennzeichnete Stoffe in einer AntikÖrper-Antigenumsetzung
zum. Nachweis oder zur .Konzentrationsmessung von Stoffen verwendet, für die Antikörper bestehen. Die
Prüfung macht sich die Beobachtung zu Nutze, daß eine bekannte Menge des radioaktiv gekennzeichneten Stoffs mit einer
radioaktiv nicht gekennzeichneten, unbekannten Menge dieses Stoffes bei der Besetzung einer begrenzten Menge komplexbildender Stellen auf dem Antikörper in Wettbewerb tritt.
Durch radioaktive Zählung der Umsetzungsprodukte kann die unbekannte Konzentration ermittelt werden.
609886/0776
263161 Q
Ein wesentlicher Schritt hierbei ist die Trennung der -immunchemisch
komplexgebundenen Stoffe von der Iiifctibätionslösuiig,
die möglichst vollständig, einfach und rasch möglich sein7 .soll.
Wesentlich erleichtert wird diese Trennung durch Verwendung"
von Antikörpern oder Äntigeneii, welche durch ■ Arüief tung oder
Bindung an wasserunlösliche Träger immobilisiert wurden (soger;..
f estphasige RIA oder SPRIA, solid phase' radio iiiii.amo as cay).
Aufgabe der Erfindung ist ein rasch^ zuverlässig und mit '
großer Sfachweisempfindlichkeit durchführbares Verfahren suq
Nachweis von HAA In Seren auf G-rundlage der SPRIA.
Zur Lösung wird erfindungsgemäS vorgeschlagen, daß eine" Seruniprobe
mit einem Reagens infcubiert wird, welches Anti-Hepatitis assoziiertes
Antigen-Antikörper über einen Silankuppler !covalent
an siliziumhaltige Partikel mit einer Oberfläche von wenigstens 1 qm/g und falls diese porös sind, einem durchschnittlichen
Porendurchmesser von wenigstens 1000 K gebunden enthält, wobei
die Inkubation unter eine Komplexbildung von Hepatitis - ass'osiiertem
Antigen mit den Antikörpern erlaubenden .Bed.indungen durchgeführt
wird, das Reagens- abgetrennt und mit einer Lösung von
radioaktiv gekennzeichneten Anti-Hepatitis — assoziierten Antiken-Antikörpern
unter eine Kömplexbildung dieser gekennzeichneten
Antikörper mit den zuvor gebildeten Komplexen des Reagens inkubiert
wird, die Umsetzungsprodukte abgetrennt und auf Radioaktivität gemessen werden^-
6 0 -.··■:&/ 0 77 B
_ 1Z _
Es ist "bekannt, Antikörper und Antigene an die verschiedensten
Träger zu "binden, so z.B. an organische Träger, US-PS
3,555,143, oder über Silankuppler an anorganische Stoffe, US-PS 3,652,761. Die US-PS (Ser. Nr. 447,252) beschreibt
SPRIA Verfahren zur Konzentrationsmessung von Digoxin, Insulin und Estriol. Hierbei werden Antikörper verwendet, welche
mit diesen Stoffen Komplexbildungen eingehen und über Silane an Glaspartikel im /um und noch kleineren Bereich gekoppelt
werden.
Ein brauchbares, rasches und mit guter Empfindlichkeit arbeitendes
SPRIA Verfahren zum Nachweis von HAA fehlt jedoch bisher, vgl. "Radioassay Test Kits and Components", Laboratory Management,
Sept. 1974, S. 29 - 42, und US-PS 3,867,517, wonach zum
Nachweis HAA sandxo.chartig zwischen einem immobilisierten Anti-HAA-Antikörper
und einem gekennzeichneten Anti-HAA-Antikörper angeordnet werden muß. Nach einer Ausbildung sollen die ungekennzeichneten
Antikörper durch Anheftung an die Innenwand eines Reagenzglases immobilisiert werden.
Das erfindungsgemäß vorgeschlagene Verfahren ermöglicht demgegenüber
die rasche und sehr empfindliche, genaue Prüfung in relativ einfacher und zuverlässiger Weise.
S0UÜ8G/0776
Each, "bevorzugter. Ausgestaltung werden die lachwelsmittel In
einer etwa 10. - 300/ug Kompositum pro. Test in 0,1 -..0,2, ml ..
Wasser enthaltenden Suspension vorgesehen, wobei die Anti- -.. körper an Kieselsäure- oder poröse Glaspartlkel der durchschnittlichen
Größe 0,1 - 10/um, vorzugsweise 0,1 - 3/um"gekoppelt
sind. Die bevorzugten Serumproben reichen von etwa, 100 - 1000 /L und die erste Inkubation dauert etwa 5 Minuten.
Die zweite Inkubation wird vorzugsweise mit durch I ^ gekennzeichneten
Antl-HAA-Antikörpern mit einer radioaktiven
Zahlung von wenigstens 20 000 cpm durchgeführt.
Ein wesentliches Umsetzungmittel zur Durchführung des Verfahrens
besteht aus einem als G-S-Ab kennzeichenbaren Kompositum, worin G einen Träger aus siliziumhaltigen Partikeln,
insbesondere aus Kieselsäure oder porösem Glas, S ein Silankupplungsmittel
mit einer (an der Oberfläche G in bekannter Weise gebundenen) silizitimfunktioiiellen Gruppe und einer zur
kovalenten Bindung an Ab, (einen Anti-HAA-Aiitikörper) modifizierbaren
organofunktionellen Gruppe bezeichnet. Die Bindung von Ab über S-G ist nicht Gegenstand der Erfindung, vgl. hierzu
US-PS 3,652,761. Jedoch sind die physikalischen und chemischen
Eigenschaften des Trägers G für die Prüfempfindlichkeit und Geschwindigkeit von großer Bedeutung.
Die physikalischen Eigenschaften und Grenzwerte des Trägers erhellen aus einem Prüfbeispiel. Das Äusgangsmaterial (das Umsetzungmittel
G-S-Ab) wird mit einer unbekannten Serumprobe
SO9886/077S - 5 -
inkubiert. Ist HAA vorhanden, so entsteht unter immunchemischer
Komplexbildung"des HAA mit der Ab Komponente G—S-Ab-HAA, das
sodann seinerseits mit einer Lösung der gekennzeichneten Antikörper (Ab ) inkubiert wird und als Umsetzungsprodukt G-S-Ab.
HAA.Ab bildet, unter immunchemischer Komplexbildung der Ab
-j or
Komponente (mit I gekennzeichnetes Anti-HAA) mit HAA. Ein gen
nauer HAA Nachweis erfordert eine im wesentlichen vollständige Trennung des Umsetzungsproduktes von der Lösung der gekennzeichneten
Antikörper. Sie wird durch Wahl einer Partikelgröße gewährleistet,
welche groß genug ist, um mit dem in klinischen Laboratorien verfügbaren Zentrifugen auszentrifugiert zu werden.
Plierfür sollte die durchschnittliche Partikelgröße wenigstens etwa 0,1 /um betragen.
Angesichts der Größe der verschiedenen entstehenden Komplexe
kommt der Trägeroberfläche und Porösität große Bedeutung zu. So gestattet beispielsweise im Regelfall eine große Oberfläche
eine vergleichsweise starke Beschickung mit Ab und letzten Endes einen sehr empfindlichen, genauen Nachweis. Eine Oberfläche
kann durch Zerkleinerung von Partikeln und/oder poröse Partikel vergrößert v/erden. Im vorliegenden !"alle hat die zulässige
durchschnittliche Porengroße aber eine praktische untere Grenze, bedingt durch die Größe der Komplexe und die erforderliche
Diffusion, die bei etwa 1 qm/g liegt 9 und durch Zerkleinerung
bis auf eine durchschnittliche Korngröße von etwa 0,1 - 10 /um oder durch Verwendung sorgfältig ausgewählter Porengrößen erreicht
werden kann.
60.9886/0770 " 6 "
Die Größe des für den Nachweis verwendeten sandwichartigen Komplexgebildes "beträgt etwa· 1 χ 10 Dalton. Durch eine Reihe
von Versuchen konnten die praktischen Mindestvoraussetzungen der physikalischen Trägereigenschaften ermittelt werden. Zur"
Aufnahme der Komplexe und für die Diffusion der Umsetzungsteilnehmer sollte bei Wahl eines porösen Trägers die durchschnittliche
Porenweite (Durchmesser) etwa 1000 Ä betragen. Diese Größenordnung erhält man z.B. bei Partikelgrößen von
200 - 400 mesh. Derart große Partikel bleiben allerdings nicht lange in Suspension und erfordern die Durchführung im Kolonnenverfahren
oder bei absatzweisem Vorgehen Rührung bzw. Bewegung. Bevorzugt wird die Durchführung mit einer Suspension von Partikeln
im Mikronbereich. Die verwendbaren Porengrößen (>- 1000 Ä)
nehmen zusammen mit der durchschnittlichen Korngröße ab. Die physikalischen Eigenschaften der für den Nachweis geeigneten
Träger sind also das Ergebnis einer spezifischen, gegenseitigen Abhängigkeit der Korngrößen, der erforderlichen Oberfläche,. Diffusion,
Trennung und Mindestporengröße.
Es wurde z.B. gefunden, daß porösen Glas mit einer durchschnittlichen
Korngröße von 1 - 3/um und einer durchschnittlichen Porenweite von 550 1 kein rationeller Träger ist, weil der größere
Teil der vergleichsweise großen Gesamtoberfläche durch Poren gebildet
wird, die zur Aufnahme des 1 χ 10 Dalton großen Komplexes
zu klein sind. Dagegen kann ein aus Glas mit 550 £ großen Poren auf 0,1 - 0,4/um (im Durchschnitt) -zerkleinerten Partikeln erfolgreich
eingesetzt werden, weil die verfügbare Gesamtoberfläche
609886/07?8
im wesseitlichen, durch den Oberflächenbereic.h und nicht.durch
die inneren· Poren gebildet wird. An dem entgegengesetzten
Extrem sind unpor.ö&e. Partikel der.- Größe 200 - 400 mesh wegen
de%fpinima;lßn. G-esgmtoberfläche für die praktische Verwendung
nicht ,geeignet* -:.-.. . : · . ■ . .
Die .bisher günstigsten Träger sind unporöse Partikel,der
durchschnittlichen Größe 1 - 3/um. Sie bieten eine ausreichende Fläche.für eine starke Beschickung (und gute Empfindlichkeit)
, können zur optimalen Diffusion der Umsetzungsteilnehmer während der Inkubation suspendiert werden,r und sind
relativ einfach zu handhaben.
Die durchschnittliche Partikelgriüße (2/um) liefert eine Gesamtoberfläche
von etwa 7 qm/g. Ebenfalls geeignet, wenn auch nicht ganz so günstig, waren unporöse Partikel der durchschnittlichen
Große von 5 - 10 /um (etwa 3 qm/g Gesamtoberfläche).
Die größten, praktisch brauchbaren, unporösen Partikel sind etwa 10/um im Durchschnitt.
Die Tabelle I enthält verschiedene Kombinationsmöglichkeiten von Gesamtoberflächen, durchschnittlichen Poren- und Partikelgroßen
von siliziumhaltlgen Trägern, sowie eine Zusammenfassung der Prüfergebnisse für jeden Träger, wobei "-" nicht gut
brauchbar, "+" praktisch sehr brauchbar, "1/2+" einigermaßen
praktisch brauchbar bezeichnen.
609886/0711 ' " 8 "
Trägereigenschaften Prüfergebnisse
Oberfläche Partikelgröße porös Porenweite
qm/g (durchschnitt1.) ja/nein (durchschnittl.)
>100
1 - | ja | 550 S |
2 - | ja | 250 Ä |
- 3/um | nein | - |
- 5/um | nein | - |
200/400 mesh | ja | "550" |
5 - | nein | - |
0,1 | ja | 1500 |
1 ■ | ja | 2500 |
5 ■ | ||
- 10/um | ||
I - 4/um | ||
- 3 /um | ||
- 10/um | ||
200/400 mesh |
Den Versuchen ist zu entnehmen, daß die Träger eine Gesamtoberfläche
von wenigstens etwa 1 qm/g, eine Partikelgröße von wenigstens etwa 0,1 und im Falle poröser Träger eine durchschnittliche
Porenweite von wenigstens etwa 1000 S. haben sollten . Dies erreicht
man durch Verwendung von siliziumhaltigem Ausgangsmaterial mit Oxid- oder Hydroxidgruppen an der Oberfläche, welche mit dem
Siliziumfunktionellen Teil des Silankupplers in Umsetzung treten können. Sie sind im Handel erhältlich (z.B. Syloid poröse Kieselsäure,
CPG-controlled pore glass) oder können nach der US-PS
3,549,524 hergestellt werden; es hat meist Porenweiten von 100 - 2500 S, wobei der praktisch brauchbare Bereich hier 1000 2500
ϊ ist.
609886/0776
!fach ganz besonders günstiger Ausbildung haben die porösen
oder unporösen Partikel durchschnittliche Mindest- und Höchstwerte,
von 0,1 - 3/um, um einerseits das Zentrifugieren zu erleichtern^
.andererseits eine für die optimale Umsetzung und Diffusion günstige Suspension im wässerigen Medium zu erhalten.
Die Herstellung des Kompositums erfordert zwei Yerfahrenssehritte.
Zunächst werden die Partikel mit einem Silankoppler umgesetzt, um eine organische Basis für die Kopplung der Antikörper
zu erhalten. Hierzu müssen die Partikel sauber sein und zur Bindung mit dem Siliziumfunktionellen Teil des Silans an
der Oberfläche verfügbare Oxid- oder Hydroxidgruppen aufweisen. Die evtl. erforderliche Säuberung kann in bekannter Weise erfolgen.
Nach Ansetzung mit dem ,Silan wird der Körper als
"silanisiert" bezeichnet, oder nach der organofunktionellen
Gruppe an der Oberfläche bezeichnet, z.B. Arylamin V.OPG·1'
(geregelt poröses Glas- controlled porous glass), oder Alkylamin
GPG.. Im einzelnen vgl. US-PS 3,519,538 und 3,652,761,
sowie Ser. Nr. 447252. Nach der Silanisierung werden die organfunktionellen
Teile des Silans meist zur Kopllung mit den Antikörpern modifiziert., z.B. diazotiert, und sodann mit dem Anti-HAA-Antikorpern
in einer Lösung unter Bedingungen umgesetzt, welche eine maximale Bindung der Antikörper in einem aktiven
(funktionellen) Zustand gewährleisten. Es wird angenommen, daß
die Anti-HAA-Antikörper ihre komplexbildende Fähigkeit bei mehreren verschiedenen Kopplungsumsetzungen beibehalten.
609886/07 7'6
-ίο- 263 Ί
Zur Sicherung einer maximalen Antikörperbeschicfcung wird i.d.R.
die Menge der mit dem modifizierten Silanträger umgesetzten Antikörper auf Trockengewichtsbasis im Bereich von etwa 100
für 1 ml unfraktioniertes Antikörpers erum. pro g Träger gehalten.
Nach Immobilisierung der Antikörper auf dem Träger werden sie zur Verwendung vorzugsweise in wässerige Suspension gebracht,
Z0B. durch Schallbehandlung, Eine bevorzugte Suspension für
einen einzelnen 7ersuch bzw, Nachweis besteht aus etwa 10 —
300/Ug Kompositum pro 0,1 - 0,2 ml wässerige Lösung, vorzugsweise
mit 0,05M phosphatgepufferter Salzlösung zur Aufrecht—
erhaltung eines pH Bereichs von 6,5 - 8 gepuffert.
Das Umsetzungsmittel für einen Serum-Hepatitisnachweis besteht aus dem bis zum Gebrauch in einem verschlossenen Reagenzglas
aufbewahrten Kompositum in wässeriger lösung.
Pur einen Nachweis werden etwa 200 χ des menschlichen Blutserums
zu etwa 200 χ Suspension gegeben und vorzugsweise bei 45 C während 10 Minuten inkubieren gelassen. Etwa vorhandenes
HAA geht dann mit den immobilisierten Anti-HAA-Antikörpern eine
Komplexbildung ein, wobei die entstehende Komposita als
G - S - Ab·HAA
bezeichnet werden können, worin G- der Träger, S das Silan,
Ab der Anti-HAA-Antikörper ist, und HAA an diesen komplexgebunden ist.
- 11 -
g09886/077S
Das Kompositum wird dann gewaschen, "beispielsweise, indem die
Partikel auszentrifugiert, in einer Waschiösung erneut suspendiert, und wiederum auszentrifugiert werden. Eine Wäsche reicht meist aus, um das Kompositum von anderen Stoffen wie Serumproteinen oder überschüssigem Antigen zu befreien. Nach der
Wäsche ist das Kompositum je nach der Serumprobe
Partikel auszentrifugiert, in einer Waschiösung erneut suspendiert, und wiederum auszentrifugiert werden. Eine Wäsche reicht meist aus, um das Kompositum von anderen Stoffen wie Serumproteinen oder überschüssigem Antigen zu befreien. Nach der
Wäsche ist das Kompositum je nach der Serumprobe
G - S - Ab'HAA oder
G-S-Ab.
G-S-Ab.
Es wird abgetrennt, mit 200 χ Lösung von gekennzeichneten
Anti-HAA-Antikörpern versetzt un<
20 Minuten, inkubieren gelassen.
Anti-HAA-Antikörpern versetzt un<
20 Minuten, inkubieren gelassen.
Anti-HAA-Antikörpern versetzt und, vorzugsweise bei 45 C während
Da HAA mit mehr als einem Anti-HAA-Antikörper komplexbildend
sein kann, entsteht bei Vorhandensein von HAA in der Serumprobe der Komplex
sein kann, entsteht bei Vorhandensein von HAA in der Serumprobe der Komplex
G-S- Ab«HAA«Ab*,
worin Ab* den radioaktiv gekennzeichneten Antikörper bezeichnet,
125
wofür I bevorzugt wird. Die vorstehenden Ausführungen dienen nur der Erläuterung. Die wirklichen Bindungen und Komplexbildungsabläufe sind meistens komplizierter.
wofür I bevorzugt wird. Die vorstehenden Ausführungen dienen nur der Erläuterung. Die wirklichen Bindungen und Komplexbildungsabläufe sind meistens komplizierter.
Nach der Inkubation mit den gekennzeichneten Antikörpern werden
die festphasigen Inkubationsprodukte z.B. durch Zentrifugieren mit 2000 UpMin. während 1 Minute abgetrennt, und entweder die
abgetrennten Komposita oder das verbleibende Medium auf Radioaktivität gezahlt und damit festgestellt, ob die Serumprobe HAA
abgetrennten Komposita oder das verbleibende Medium auf Radioaktivität gezahlt und damit festgestellt, ob die Serumprobe HAA
609806/077«
- 12 -
enthielt. Zur Berücksichtigung von Spurenrest en "des gekenn— · ' ■ '■■
zeichneten -Materials und "von: Häuschen·,- Störungen etc. sollte"
der HachweisTinter Herä-nziehung von positiven oder negativen
Vergleichspröben durchgeführt werden, wob ei i.d»R. das' mittlere :
Zählverhältnis der positiven zu negativen Vergleichsproben · - ■
wenigstens 3 i Ί"betragen sollte. Ein sehr-hohes Verhältnis
der Probenzahlwerte zu negativen Vergleichszählwerten "ist' · :- . ■■ ■
für die Auswertung und den klaren'Nachweis' eines positiven Befundes
günstig, da nur als Grenzwerte angezeigte positive Be- ■
funde u.U. noch bestätigt werden müßten.
In beispielsweise durchgeführten Versuchen wurden Anti-HAA-Antikörper
mit verschiedenen slliziumhaltigen Partikeln Innerhalb
der für Suspensionsfälligkeit und Nachweis empfindlichkeit ■
erforderlichen Poren- und Partikelgrößengrenzen gekoppelt. Es wurden etwa 2 - 5 g Abschnitte unter Verwendung der oben
beschriebenen Träger hergestellt. Die bevorzugten Stoffe wurden durch Silanisierung der Träger mit a-Aminopropyltriäthoxysilan
(A-1100 Union Carbide) zur Bildung einer Arylaminoberfläche
bereitet, wobei die letztere anschließend in bekannter Weise zur Bildung einer gegenüber einer Lösung der Anti-HAA-Antikörper
stark umsetzungsfreudigen, diazotierten Oberfläche modifiziert wird. Etwa 1 ml rohes Antikörperserum wird mit je 1 g diaziertera
Träger umgesetzt und ergibt ein Kompositum G-S-Ab, dessen Ab über Azoketten gekoppelt ist. In den unten aufgeführten Versuchen
bestand der bevorzugte Träger aus unporösen Schmelzkies elsäurepartikeln mit der durchschnittlichen Korngröße 1 - 3/um.
609886/0770
- 13 -
Die "besonders gute Brauchbarkeit dieses Trägers wurde in
diesen Versuchen dadurch nachgewiesen, daiS er mit der Suspension zur Hachweisbestätigung in bekannter oder bezogenen, .
HAA enthaltenden Blutproben eingesetzt wurde. Der HAA-Nach- ' :.
weis gilt dabei als erfolgreich geführt, wenn das Zählverhältnis (cpm) einer positiven Probe zu einer bekannten,
negativen Vergleichsprobe wenigstens 3 : 1 beträgt. Dies wurde in den unten aufgezeichneten Versuchen sogar über- .
schritten.
Die folgenden Tabellen II und III zeigen die Titrierverfahren
für die verwendeten HAA-Proben und Anti-HAA-Antikörper im Vergleich
zu den durch G-egenstromelektrophorese (CEP, counterelectrophoresis)
erhaltenen Ergebnissen.
T a b e 1 1 e II
/Titrierverfahren für HAA-Antigen
Das verwendete Hepatitis-Antigen wurde in PBS/BSA Puffer gelöst,
Das verwendete Hepatitis-Antigen wurde in PBS/BSA Puffer gelöst,
(+) GPM
Ag | Lösung | : 20 | (-) GPM |
Vergleiche | : 200 | 210 278 |
|
1 | : 2000 | ||
1 | : 20.000 | ||
1 | : 200.000 | ||
1 | |||
1 |
787 778 |
(1 : | 1000 CEP) |
13109 13228 111509 11163 |
■- | |
4476 4376 |
||
1179 1192 |
||
359 426 |
-H-609886/0776
-H-
Die Proben werden inkuMert, gewaschen, mit Reiiienlösungen
des Antikörpers "versetzt, 30 Minuten inkubiert, gewaschen,
zentrifugiert und abgesaugt.
1200
1190
201 189
220 215
305 291
491 501
1100 1200
Aus diesen Versuchen wurde der 'liter der nassen Antikörperlösung
mit 1 : 10.000 ermittelt. Dies ist die stärkste Verdünnung, welche eine Bindung des gekennzeichneten Antikörpers
an das Antigen verhindert.
Vergleiche | : 10 | 190 201 |
1 | : 100 | 209 190 |
1 | : 1000 | 273 216 |
1 | : 10.000 | 199 181 |
1 | : 100.000 | 111 210 |
1 | 101 290 |
- 15 -
60988 6/07 76
T ab el I e IV
Versuche _ zur HAA Irtkubationsäauer.. . ;■ _.
Der immobilisierte Hepatitis Antikörper (100 * JOOyUg (Mlkrogramm)
Kompositum in' 100 ^PBS-BSA Puffer)wurde mit .0,2 ml Serumprqben
bei 40^e 1Ö:Min.ut8ii bis-2 Stunden inkUbiert,, einmal gewaschen,-mit
0,2 ml Hepatitis Antikörper versetzt/ JO. Miaa.uten.bei 45 G . ;
inlmbiert, zweimal gewaschen und gezählt.
Antigen ' '"■ = ■-.....■_..-■■
10 Minuten 550 2f63
400 2100
30 Minuten 515 2497
518 2561
60 Minuten 605 2301
519 2675
120 Minuten 563 2738 -
482 2269
Wie die Versuche zeigen, ist die Ag-Ab Umsetzung nach etwa
10 Minuten beendet.
' " ' Tabelle .7 " ■.
Probengrößen und Empfihdlichkeitserhöhung .
Hierzu wurd die Größe der Proben verändert.. Die positiven Proben
bestanden aus einem im Handel bezogenen GBP, Vergleich in der änderung 1 : 500
1210
- 16 -
206 267 |
586 488 |
201 - · 302 |
783 894 |
194 199 |
1217 1112 |
204 | 1212 1210 |
609886/0778 |
In Grenzfällen, kann die Probe vergrößert und erneut getestet
werden.
Wie diese Versuche zeigen, ermöglichst das erfindungsgemäße Umsetzungsmittel einen raschen Fachweis (+:- Verhältnis ^3 : 1).
Die erste Inkubation dauert nur 10 Minuten, G-esamtprüfdauer ist
oft nur 30 Minuten, im Vergleich zu bisher 3 Stunden und mehr.
- 17 -
609886/0776
Claims (3)
- -17- ' bJ 1-610Patentansprüche1J Verfahren zum Nachweis -von Hepatitis-assoziiertem Antigen (HAA) in Seren, dadurch gekennzeichnet, daß eine Serumprobe mit einem Reagens inkubiert wird, welches Anti-Hepatitis-assoziiertes Antigen-Antikörper über einen Silankuppler kovalent an siliziumhaltige Partikel mit einer Oberfläche von wenigstens 1 qm/g und falls diese porös sind, einem durchschnittlichen Porendurchmesser von wenigstens 1000 Ä gebunden enthält, wobei die Inkubation unter eine Komplexbildung von Hepatitis-assoziiertem Antigen mit den Antikörpern erlaubenden Bedingungen durchgeführt wird, das Reagens abgetrennt und mit einer Lösung von radioaktiv gekennzeichneten Anti-Hepatitis-assoziierten Antigen-Antikörpern unter eine Komplexbildung dieser gekennzeichneten Antikörper mit den zuvor gebildeten Komplexen des Reagens ermöglichenden Bedingungen inkubiert wird, die Umsetzungsprodukte abgetrennt und auf Radioaktivität gemessen werden.
- 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Serumprobe mit dem Reagens in wässeriger Lösung umgesetzt wird.
- 3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die siliziumhaltigen Partikel 0,1 - 10/um groß sind.- 18 -Θ09886/0776Ein wesentliclier Schritt hierbei ist die Trennung der iinmunchemisch komplexgebundenen Stoffe von der Inkubationslösung, die möglichst vollständig, einfach und rasch möglich sein soll. Wesentlich erleichtert wird diese Trennung durch Verwendung von Antikörpern oder Antigenen, welche durch Anheftung oder Bindung an wasserunlösliche Träger immobilisiert wurden (sogen, festphasige RIA oder SPRIA, solid phase radioimmunoassay).Aufgabe der Erfindung ist ein rasch, zuverlässig und mit großer nachweisempfindlichkeit durchführbares Verfahren zum Hachweis von HAA in Seren auf Grundlage der SPRIA.Zur Lösung wird erfindungsgemäß vorgeschlagen, daß eine Serumprobe mit einem Reagens inkubiert wird, welches Anti-Hepatitisassoziiertes Antigen-Antikörper über einen Silankuppler kovalent an siliziumhaltige Partikel mit einer Oberfläche von wenigstens 1 qm/g und falls diese porös sind, einem durchschnittlichen Porendurchmesser von wenigstens 1000 Ä gebunden enthält, wobei die Inkubation unter eine Komplexbildung von Hepatitis-assoziiertem Antigen mit den Antikörpern erlaubenden Bedingungen durchgeführt wird, das Reagens abgetrennt und mit einer Lösung von radioaktiv gekennzeichneten Antl-Hepatitis-assoziierten Antigen-Antikörpern unter eine Komplexbildung dieser gekennzeichneten Antikörper mit den zuvor gebildeten Komplexen des Reagens ermöglichenden Bedingungen inkubiert wird, die Umsetzungsprodukte abgetrennt und auf Radioaktivität gemessen werden.609806/0776Es ist "bekannt, Antikörper -und Antigene an die verschiedensten Träger zu "binden, so z.B. an organische Träger, US-PS 3 »555,143,- oder über Silankuppler an 'US-PS 3,652,761. Die US-PS 3,975,511 beschreibt fahren zur Konzentrationsmessung von Digoxin, Insulin und Estriol. Hierbei werden Antikörper verwendet, welche mit diesen Stoffen Komplexbildungen eingehen und über Silane an Glaspartikel im /um und noch kleineren Bereich gekoppelt werden.Ein brauchbares, rasches und mit guter Empfindlichkeit arbeitendes SPHIA Yerfahren zum Nachweis von HAA fehlt jedoch bisher, vgl. "Radioassay Test Kits and Components", Laboratory-Management, Sept. 1974, S. 29-42 und US-PS 3,867,517, wonach zum Nachweis HAA sandwichartig zwischen einem immobilisierten Anti-HAA-Antikörper und einem gekennzeichneten Anti-HAA-Antikörper angeordnet werden muß. Nach einer Ausbildung sollen die ungekennzeichneten Antikörper durch Anheftung an die Innenwand eines Reagenzglases immobilisiert werden.Das erfindungsgemäß vorgeschlagene Verfahren ermöglicht demgegenüber die rasche und sehr empfindliche, genaue Prüfung in relativ einfacher und zuverlässiger Weise.609886/0776
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US05/597,359 US4034072A (en) | 1975-07-21 | 1975-07-21 | Serum hepatitis test |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE2631610A1 true DE2631610A1 (de) | 1977-02-10 |
DE2631610C2 DE2631610C2 (de) | 1985-12-05 |
Family
ID=24391172
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE2631610A Expired DE2631610C2 (de) | 1975-07-21 | 1976-07-14 | Verfahren zum Nachweis von Hepatitis in Seren |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4034072A (de) |
JP (1) | JPS607231B2 (de) |
DE (1) | DE2631610C2 (de) |
FR (1) | FR2319130A1 (de) |
GB (1) | GB1527397A (de) |
IT (1) | IT1154004B (de) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4474878A (en) * | 1975-09-29 | 1984-10-02 | Cordis Laboratories, Inc. | Sandwich EIA for antigen associated with hepatitis |
US4642285A (en) * | 1975-09-29 | 1987-02-10 | Diamedix Corporation | Sandwich EIA for antigen |
SE7610683L (sv) * | 1975-09-29 | 1977-06-10 | Cordis Corp | Metod for bestemning av nervaron av ett antigen associerat med hepatit |
US4197287A (en) * | 1977-06-10 | 1980-04-08 | Ventrex Laboratories Inc. | Method and apparatus for performing in nitro clinical diagnostic tests using a solid phase assay system having special utility for use with automatic pipetting equipment |
US4230683A (en) * | 1978-08-09 | 1980-10-28 | Abbott Laboratories | Hapten conjugated antibody for antibody or antigen detection |
US4293538A (en) * | 1979-04-20 | 1981-10-06 | Merck & Co. Inc. | Assay for hepatitis A antigen |
US4562159A (en) * | 1981-03-31 | 1985-12-31 | Albert Einstein College Of Medicine, A Division Of Yeshiva Univ. | Diagnostic test for hepatitis B virus |
EP0062286A1 (de) * | 1981-03-31 | 1982-10-13 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Diagnostischer Nachweis von Hepatitis-B-Virus |
US4927750A (en) * | 1986-04-09 | 1990-05-22 | Jeanette Simpson | Cell separation process |
US4927749A (en) * | 1986-04-09 | 1990-05-22 | Jeanette Simpson | Reagent for cell separation |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3652761A (en) * | 1969-09-04 | 1972-03-28 | Corning Glass Works | Immunochemical composites and antigen or antibody purification therewith |
US3867517A (en) * | 1971-12-21 | 1975-02-18 | Abbott Lab | Direct radioimmunoassay for antigens and their antibodies |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE343949B (de) * | 1966-06-02 | 1972-03-20 | Pharmacia Ab |
-
1975
- 1975-07-21 US US05/597,359 patent/US4034072A/en not_active Expired - Lifetime
-
1976
- 1976-07-14 DE DE2631610A patent/DE2631610C2/de not_active Expired
- 1976-07-19 GB GB29905/76A patent/GB1527397A/en not_active Expired
- 1976-07-19 JP JP51085903A patent/JPS607231B2/ja not_active Expired
- 1976-07-20 FR FR7622087A patent/FR2319130A1/fr active Granted
- 1976-07-21 IT IT25529/76A patent/IT1154004B/it active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3652761A (en) * | 1969-09-04 | 1972-03-28 | Corning Glass Works | Immunochemical composites and antigen or antibody purification therewith |
US3867517A (en) * | 1971-12-21 | 1975-02-18 | Abbott Lab | Direct radioimmunoassay for antigens and their antibodies |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Biochem. J., Vol. 117, 1970, S.257-261 * |
K.E.Kirkham u. W.M.Hunter (Herausgeber), Radioimmunoassay Methods, Edinburgh 1971, S. 405-412 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US4034072A (en) | 1977-07-05 |
JPS5212923A (en) | 1977-01-31 |
GB1527397A (en) | 1978-10-04 |
FR2319130B1 (de) | 1981-09-18 |
JPS607231B2 (ja) | 1985-02-22 |
DE2631610C2 (de) | 1985-12-05 |
FR2319130A1 (fr) | 1977-02-18 |
IT1154004B (it) | 1987-01-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE3884979T2 (de) | Agglutinationsimmunotest und Satz zur Bestimmung einer mehrwertigen Immunspezies unter Verwendung einer gepufferten Salzwasch-Lösung. | |
DE3781335T2 (de) | Immunoassay mit verwendung von kolloidalem gold. | |
DE69121849T2 (de) | Bindung von Liganden an Gold | |
DE2522086C2 (de) | Reagenz zum Abtrennen und Bestimmen von in biologischen Fluiden vorhandenen AK:Ag-Komplexen | |
DE3689618T2 (de) | Magnetische polymerteilchen. | |
DE69812329T2 (de) | Multiplex-zufluss-immunotest mit magnetischen teilchen als festphase | |
DE3650513T2 (de) | Verzögerter immunologischer Test in fester Phase | |
DE3685600T2 (de) | Stabilisierte fluoreszierende seltenerd-indikatoren und physiologisch-reaktive kennsatz-spezies. | |
EP0305337B1 (de) | Verfahren zum Nachweis von Antigenen und/oder Antikörpern sowie Testausrüstung zur Durchführung des Verfahrens | |
DE3781180T2 (de) | Pruefung unter verwendung von bindungspaargliedern auf teilchen und auf einem filter oder einer membran. | |
DE3136579C2 (de) | ||
DE69815298T2 (de) | Teilchen mit polyaldehyd-dextran-überzug, die verkleinerte matrixeffekte aufweisen | |
DE69116236T2 (de) | Bestimmung von Analyten, die Bindungsstellen für mindestens zwei Bindungsgruppen haben | |
DE2902676A1 (de) | Immunoassays unter verwendung von f(ab') tief 2 -untergruppen | |
DE3872500T2 (de) | Verwendung eines mit biotin verknuepften immobilisierten rezeptors in einer testvorrichtung, einem testsatz und einer methode zur bestimmung eines liganden. | |
DE2943648A1 (de) | Kombinierte heterogene spezifische bindungs-untersuchung zur gleichzeitigen bestimmung von einer mehrzahl von verschiedenen liganden in einer einzigen fluessigkeitsprobe | |
DE2505268A1 (de) | Verfahren zur konzentrationsmessung von digoxin | |
EP0849595B1 (de) | Synthetische Partikel als Agglutinationsreagenzien | |
DE2751588A1 (de) | Verfahren zur bestimmung eines liganden oder der liganden-bindungskapazitaet in einem fluessigen medium | |
DE3435744A1 (de) | Traegermaterial zur verwendung fuer immunbestimmungen | |
DE3718621C2 (de) | ||
DE2653032A1 (de) | Radioimmun-nachweisverfahren fuer ein schilddruesenhormon und dafuer geeignetes reagens | |
EP0001223A2 (de) | Mit einer Polyhydroxyverbindung beschichteten Latex, Verfahren zur Herstellung dieses Latex, immunologisches Reagenz enthaltend diesen Latex, Verfahren zur Herstellung dieses Reagenzes, Verwendung dieses Reagenzes, Bestimmungsverfahren unter Verwendung dieses Reagenzes und Reagenziengarnitur enthaltend dieses Reagenz. | |
DE2631610A1 (de) | Serum hepatitis test | |
DE3883729T2 (de) | Immunobestimmung mit Nichtmetallmarkierungen. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8128 | New person/name/address of the agent |
Representative=s name: HERZFELD, A., RECHTSANW., 6370 OBERURSEL |
|
8110 | Request for examination paragraph 44 | ||
D2 | Grant after examination | ||
8364 | No opposition during term of opposition | ||
8327 | Change in the person/name/address of the patent owner |
Owner name: CIBA CORNING DIAGNOSTICS CORP., MEDFIELD, MASS., U |
|
8328 | Change in the person/name/address of the agent |
Free format text: REINHARD, H., DIPL.-CHEM. DR.RER.NAT. SKUHRA, U., DIPL.-ING. WEISE, R., DIPL.-ING., PAT.-ANWAELTE, 8000 MUENCHEN |
|
8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |