DE2616715B2 - Verfahren zur Reinigung des schwangerschaftsspezifischen ß, -Glycoproteins - Google Patents

Verfahren zur Reinigung des schwangerschaftsspezifischen ß, -Glycoproteins

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DE2616715B2 DE19762616715 DE2616715A DE2616715B2 DE 2616715 B2 DE2616715 B2 DE 2616715B2 DE 19762616715 DE19762616715 DE 19762616715 DE 2616715 A DE2616715 A DE 2616715A DE 2616715 B2 DE2616715 B2 DE 2616715B2
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Description

In der deutschen Patentanmeldung 21 57 610 ist ein in der Plazenta vorkommendes Glycoprotein beschrieben, dem die Bezeichnung »Schwangerschaftsspezifisches £i-G!ykoprote:n« (SPi) zukommt. Ferner äst in der genannten Patentanmeldung ein Verfahren zur Isolierung dieses Glycoproteins beschrieben.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Adsorptionsverfahren, das gestattet, das schwangerschaftsspezifische ^!-Glycoprotein, das bei den genannten Verfahren in einer Reinheit von 60 bis zu 95% anfällt, weiter zu reinigen und praktisch rein darzustellen.
Das Verfahren isi dadurch gekennzeichnet, daß man eine das schwangerschaftsspezifische ßi-Glycoprotein enthaltende wäßrige, phosphaltige Lösung (in einem pH-Bereich von 5 bis 8.5 und einer Molarität der Phosphate von 0,001 bis 0,01) mit Hydroxylapatit in Berührung bringt, das Hydroxylapatit von der Losung abtrennt und aus dieser das SPi gewinnt.
Die Adsorptionsbedingungen werden dabei so gewählt, daß das schwangerschaftsspezifische 0i-Glykoprotein nicht adsorbiert, sondern lediglich die daneben noch vorhandenen Verunreinigungen an Hydroxylapatit gebunden werden.
Die Adsorption wird in einem phosphathaltigen wäßrigen Milieu vorgenommen, vorteilhaft in einem phosphathaltigen Puffer wie Kaliumphosphatpuffer oder Natriumphosphatpuffer in einem pH-Bereich von 5—8,5 vorzugsweise 6—8 und einer Molarität der Phosphate von 0,001 —0,01, vorzugsweise 0,005.
Die Adsorption der Verunreinigungen kann sowohl in einem Batch-Verfahren als auch wie eine Säulenchromatographie durchgeführt werden,
ι" Bei Einhaltung der vorgenannten Bedingungen wird nach diesen Verfahren das schwangerschaftsspezifische /?i-Glykoproiein in einer Reinheit von >99% erhalten.
Die Reinheit der Präparation wird vorteilhaft mit immunologischen Verfahren unter Verwendung von Antiseren bestimmt, die sowohl Antikörper gegen das schwangerschaftsspezifische /Si-Glykoprotein a'·= auch gegen einige oder mehrere im Plazentenextrakt, im Blut oder Urin von Schwangeren vorkommende Antigene enthalten.
Beispiel
Zur Hochreinigung von schwangerschaftsspezifischem /?i-Glykoprotein werden 50 mg des 60—95% reinen Präparates, in 10 ml 0,005 m Natriumphosphatpuffer (pH 6,0) gelöst und auf eine mit Hydroxylapatit (Fa. Serva, Heidelberg) gefüllten Säule (2x8 cm), die vorher mit einem 0,005 m Phosphatpuffer pH 6,8 equilibriert worden war, aufgetragen. Bei der Elution der Säule mit 0,005 m Phosphatpuffer wandert das
w schwangerschaftsspezifische /?i-Glykoprotein durch die Säule hindurch, die Verunreinigungen dagegen werden an Hydroxylapatit adsorbiert. Der proteinhaltige Durchlauf enthält schwangerschaftsspezifisches /JrGIykoprotein in reiner Form; er wird zur Entfernung der Salze gegen das I Of ache Volumen dialysiert und anschließend lyophilis rl. Ausbeute ca. 40 mg j3|-Glykoprotein. ßi-Glykoprotein. Die Reinheit beträgt >99%, d. h. nach immunologischen Verfahren ist keine der vor der Reinigungsoperation nachgewiesenen Bcimcngun-
*o gen nachweisbar.

Claims (1)

  1. Patentanspruch:
    Verfahren zur Reinigung des schwangerschaftsspezifischen ^!-Glycoproteins, dadurch gekennzeichnet, daß man eine das schwangerschaftsspezifische ßi-Glycoprotein enthaltende wäßrige, phosphathaltige Lösung (in einen pH-Bereich von 5 bis 8,5 und einer Molaritäi der Phosphate von 0,001 bis 0,01) mit Hydroxylapatit in Berührung bringt, das Hydroxylapatit von der Lösung abtrennt und aus dieser das SPi gewinnt.
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