DE2431203A1 - Verfahren und vorrichtung zum nachweis von viren - Google Patents
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- G—PHYSICS
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Description
Block Engineering, Inc., 19 Blackstone Street, Cambridge, Mass./USA
Verfahren und Vorrichtung zum Nachweis von Viren
Die Erfindung bezieht sich auf ein klinisches Laboratoriumsverfahren
und eine Vorrichtung zum Nachweis und zur Klassifizierung von Viruspartikeln.
Viruspartikel, die für eine Vielzahl pflanzlicher und tierischer Krankheiten verantwortlich sind, bestehen aus winzig kleinen Partikeln,
deren Abmessung in der Größenordnung einer Wellenlänge sichtbaren Lichtes oder noch weniger liegt (3500 bis 200 Angström).
Sie bestehen im wesentlichen entweder aus Deoxyribonucleinsäure (DNA) oder aus Ribonucleinsäure (RNA) umgeben von einer Proteinschale. Das Verhältnis zwischen Nucleinsäuregehalt zu Proteingehalt
ändert sich zwischen 1:100 und 1:2.
Viren werden gewöhnlich bei Wirtstieren, Wirtsbakterien oder Wirtspflanzen
beobachtet oder in Zellkulturen, die vom Zellgewebe der Wirtspflanzen oder Wirtstieren entnommen wurden. Das Vorhandensein
von Viren abgeleitet durch Beobachtung der Entwicklung infektiöser
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Symptome bei einem Patienten infolge einer Virusinfektion. Die lange benötigte Zeit und die Gefahr der Ausbreitung
der Infektion begrenzt die Anwendbarkeit dieser Technik.
Virusverdächtige Proben können einer Vielzahl chemischer Reaktionen unterworfen werden, wobei bekannte Techniken der
Immunchemie benutzt werden, um Viren zu entdecken und wenn welche vorhanden sind, diese zu klassifizieren. Die damit
zusammenhängenden Reaktionen sind von ganz bestimmter Eigenart und es muß notwendigerweise eine große Zahl spezifischer Antikörper
untersucht werden. Zur Zeit ist jedoch nur eine begrenzte Zahl solcher Antikörper bekannt. Die Kultivierung verdächtiger
Proben und die Prüfung im Elektronenmikroskop zur Beobachtung von Unterschieden ist hinsichtlich der Wirksamkeit wegen der
langen Zeitdauer begrenzt; die die Kultivierung und Probenpräparation erfordert. Es ist auch bekannt, eine Suspension einer
verdächtigen Probe in Flüssigkeit zu erzeugen und die Suspension mit kohärentem Licht zu beleuchten und das rückgestreute Licht
durch Überlagerungsspektometrie zu beobachten, um Daten der Brown1sehen Bewegung der suspendierten artikel zu erhalten, die
mit der Größe der Partikel vergleichbar sind; in anderen Worten ausgedrückt bedeutet dies die bekannten Verfahren Messen die
Partikelgeschwindigkeit durch Beobachtung der Doppler1sehen
Verschiebung. Die Benutzung kohärenter und im wesentlichen monochromatischer Strahlung erlaubt sogar die Messung vergleichsweise
geringer Brown1scher Geschwindigkeiten. Jedoch begrenzt
die unzureichende Möglichkeit der Unterscheidung unter Virenproben und zwischen Virenpartikeln und gleich bemessenen Zellkernen
in den Proben die Nützlichkeit dieser Verfahren.
Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren und/oder eine Vorrichtung zu schaffen, um Viren zu erkennen,
wobei die oben erwähnten Nachteile bekannter Anordnungen vermieden werden.
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Ein weiteres Ziel der Erfindung besteht darin, eine Klassifizierung
unter Virenproben vorzunehmen, die in einem virenverdächtigen Probenkörper enthalten sind.
Ein weiteres Ziel der Erfindung besteht darin, eine Kurzzeitbehandlung
der Proben durchzuführen und eine Datenextraktion zu erreichen.
Ein weiteres Ziel der Erfindung besteht darin, eine billige und einfache Vorrichtung und/oder billige Verfahrensstufen
zu benutzen.
Gemäß der Erfindung werden virusverdächtige Proben nach dem
folgenden Verfahren behandelt:
a) Von dem Patienten wird eine Körperflüssigkeitsprobe abgenommen, die eine auf den Virus zu untersuchende
Suspension enthält und es wird die Probe mit einem oder mehreren fluoreszierenden Farbstoffen behandelt,
die spezifisch für eine Nucleinsäure sind.
b) Es wird die Probe mit Licht in einem Absorptionsband des Farbstoffes beleuchtet und es wird eine etwa vorhandene
Fluoreszenz von der an spektralen Extremstellen gefleckten Probe beobachtet, die der Deoxyribonucleinsäure
oder der Ribonucleinsäure zugeordnet sind,
wobei im wesentlichen gleichzeitig räumlich entweder die Erregungsbeleuchtung und/oder die emittierte Fluoreszenz
gefiltert wird, so daß die beobachteten fluoreszierenden Intensitäten der gefärbten Partikel durch die
Brown1sehe Bewegung derartiger gefärbter Partikel moduliert
wird.
Es kann auch bei Auflösungsverhalten und/oder das Ansprechen im
polarisierten Licht beobachtet werden.
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Eine räumliche Filterung der beobachteten Fluoreszenz-Intensitäten
wird gemäß der Erfindung auf einem oder auf zwei grundsätzlichen Wegen erreicht.
Bei dem ersten Verfahren wird die zur Beleuchtung der Partikel benutzte Strahlung räumlich gefiltert: Es wird z.B. ein reguläres
Gitter oder eine einfache Apertur zwischen die Beleuchtungsquelle oder die Optik und die Suspension von Partikeln gefügt,
wodurch eine oder mehrere Zonen hoher und niedriger Beleuchtung geschaffen werden.
Bei dem zweiten Verfahren wird die Fluoreszenzstrahlung selbst räumlich gefiltert, indem z.B. ein Gitter zwischen die Suspension
von Partikeln und die Betrachtungsoptik gefügt wird, wodurch Zonen geschaffen werden, in denen eine Fluoreszenz beobachtet
werden kann und solche, in denen sie nicht beobachtet werden können.
In jedem Fall bewegen sich die Partikel infolge der Brown'sehen
Bewegung von Zone zu Zone und die fluoreszierende Emission wird moduliert, um ein Spektrum mit einer Wiederholungsrate zu
schaffen, das eine Funktion der Geschwindigkeiten der fluoreszierenden Partikel ist. Die Partikelgeschwindigkeiten sind ihrerseits
eine Funktion der Partikelmassen.
Durch Filterung der Wellenlängen kann man leicht die Wellenlängen der fluoreszierenden Emission identifizieren und dadurch die
spezielle Nucleinsäure bestimmen, an die der fluoreszierende Farbstoff gebunden ist. Dies dient zusammen mit der gleichzeitigen
Beobachtung der Intensitätsmodulation der fluoreszierenden Partikel zur Unterscheidung virusartiger Partikel vom Hintergrund
und es wird somit eine nützliche Virusklassifizierungsbeschreibung geschaffen. Die Zahl der nützlichen Beschreibungen kann
durch Korrelation gleichzeitiger Beobachtungen einer Zweifarb-
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f luoreszenz-Intensitätsmodulation durch die Brown'sehe Bewegung
verbessert werden und außerdem durch Korrelation von Ansprechen bei polarisiertem Licht und Streudaten in Verbindung
mit Messungen der Intensitätsmodulation durch die Brown'sehe
Bewegung. Das erfindungsgemäße Verfahren und die erfindungsgemäße Vorrichtung sind auch nützlich in Verbindung mit dem Auffinden
und der Klassifikation anderer biologischer Partikel, die in der gleichen Größenordnung wie Viren liegen, d.h. im Submikronbereich
liegen.
Ein herkömmliches Laboratoriumsmikroskop kann durch Zufügen einer Aperturblende von Filtern und einem Flüssigprobenhalter
gemäß der Erfindung modifiziert werden, um das erfindungsgemäße Verfahren durchführen zu können. Vorzugsweise ist das Mikroskop
mit einem Vielfachdetektorkanal ausgestattet, um gleichzeitig intensitätsmodulierende Wellenlängen auszulesen, die jeweils der
Deoxyribonucleinsäure bzw. der Ribonucleinsäure entsprechen. Es kann jedoch auch ein einzelner Kanal benutzt werden, wobei die
Filter bei der aufeinanderfolgenden Beobachtung für die beiden zu beobachtenden Farben geändert werden. Getrennt oder zusammen
mit den Fluoreszenzdaten werden Streudaten abgenommen. Das Auslesen erfolgt vorzugsweise automatisch durch Fotodetektoren, die
mit Frequenzanalysatoren für jeden Auslesekanal gekoppelt sind. Der Frequenzanalyseausgang für jeden Kanal wird grafisch oder
digital als Signalintensität bei verschiedenen Frequenzen repräsentiert. Ob überhaupt ein Signal erzeugt wird, kann durch
Koinzidenz der selektiven Farbeigenschaften des Detektorsystems mit der Fluoreszenzemissionswellenlänge der Farbfluoreszenz bestimmt
werden, die dem betreffenden Viruspartikel zugeordnet ist und abhängt von der Wahl der fluoreszierenden Farbe und
davon, ob eine Zuordnung zu einem Deoxyribonucleinsäurepartikel oder zu einem Ribonucleinsaurepartikel besteht.
Nachstehend wird ein Ausführungsbeispiel der Erfindung anhand
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der Zeichnung beschrieben. In der Zeichnung zeigen:
Fig. 1 ein Blockschaltbild einer Vorrichtung zur Feststellung von Viruskörpern und zur Klassifizierung
durch Komposition einer speziellen Nucleinsäure;
Fig. 2
bis 6 grafische Darstellungen der Beziehungen von Lichtintensität zur Intensitätsmodulationsfrequenz
bei Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahren, wobei sämtlichen grafischen Darstellungen die gleichen Koordinatenmaßstäbe
zugeordnet sind.
Gemäß einer bevorzugten Ausführung der Erfindung werden bekannte Techniken bei der Gewebekulturpräparation benutzt
um virusverdächtige Proben zu erhalten. Die bekannte Technik wird soweitgehend abgewandelt, daß sie in einer Zeit durchgeführt
werden kann, die zu kurz ist, um Wachstumsflächen einer Zellzerstörung zu erzeugen, die der Präparatplätte zugeordnet
sind. Die so erhaltene Probe wird in einer Flüssigkeit suspendiert. Stattdessen kann eine natürliche körperliche Flüssigkeitssuspension
von Viruspartikeln (z.B. Plasma oder Rückgratsflüssigkeit) direkt benutzt werden. Die Suspension wird mit
farblich fluoreszierenden Farbstoffen gemischt, die in der Flüssigkeit löslich sind und die spezifisch für den Virus oder
andere kleine Nucleinsäure enthaltende Partikel ist, die festgestellt werden sollen.
Die Vorrichtung weist gemäß einer bevorzugten Ausführung der Erfindung ein modifiziertes Mikroskop mit einem Laser oder einer
anderen Lichtquelle 12 hoher Lichtintensität auf, um Licht durch ein Wellenlängenfilter l4, ein räumliches Filter 18 und eine
herkömmliche Projektionsoptik 16 zu schicken. Das Filter
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beschränkt die Beleuchtung auf ein Erregungsband der fluoreszierenden Farbe. Das räumliche Filter 18 kann
eine einzige Aperturblende aufweisen, oder ein Filter mit einer Vielzahl mit Aperturblenden sein, z.B. ein
Gitter oder dergleichen. Das räumliche Gitter wird in der Ebene des Prüfkörpers abgebildet, der in einer transparenten
Flüssigkeit in einem Prüfkörper Halteschieber 20 angeordnet wird. Das räumliche Filter kann auch vor dem Schieber
angeordnet werden, oder der Schieber kann vor dem räumlichen Filter im Lichtpfad liegen. Im letzteren Fall wird
der Prüfkörper durch die Betrachtungsoptik 22 auf dem räumlichen Filter abgebildet.
Räumliche Filter sind dem Fachmann bekannt. Sie können als Raster, als Gitterringe oder dergleichen ausgebildet sein.
Jedes Filter definiert eine oder mehrere Zonen oder Ränder zwischen einem relativ gut lichtdurchlässigen Element und
einem relativ schlecht lichtdurchlässigen Element. Es ist klar, daß dann wenn ein Partikel,bewegt durch die Brown'sehen
Kräfte, den Rand oder die Zone eines Filters kreuzt und"nach einer lichtdurchlässigen Fläche gelangt, der Detektor Jenes
Partikel etwa wie einen Lichtfleck oder in Gestalt einer Szintillation erkennt. Wenn derartige Partikel in einer geraden
Linie über ein Gitter wandern, fluktuiert die beobachtete Emissionsintensität des Partikels zwischen einem maximalen und
einem minimalen Wert mit einer Frequenz, die vom Gitterabstand und der Partikelgeschwindigkeit abhängt. Theoretisch sollte für
eine optimale Modulation und für ein optimales Arbeitsspiel der Gitterabstand wenigstens in der Größenordnung der Partikelgröße
angepaßt sein. Für Partikel von'submikrometrisehen Abmessungen
ist eine solche Anpassung eine schwierige Aufgabe. Jedoch liefern nichts desto weniger räumliche Filter, die sich hinsichtlich
der benutzten Wellenlängen den Beugungsöffnungsgrenzen annähern, recht gute Ergebnisse, obgleich hierbei die öffnungs-
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abmessungen größer sind als die Abmessungen der Viren.
Das durch den Prüfkörper hindurchtretende Licht und/oder das vom Prüfkörper emittierte Licht wird durch eine herkömmliche
Betrachtungsoptik 22, einen Strahlteiler 24 und fotoelektrische
Detektoren 26, 28, 30 betrachtet. Die Detektoren 26 und
28 besitzen Wellenlängenfilter 52 und 34, um ihre wirksamen
Spektralbereiche auf unterschiedlich fluoreszierende Bänder zu begrenzen, oder sie können begrenzte spektrale Bereiche
aufweisen. Der Detektor 30 kann ebenfalls mit einem Wellenlängenfilter
und einer bekannten Einrichtung 48 ausgestattet sein, um direkte Strahlung von der Lichtquelle 12 auszublenden,
so daß der Detektor 30 nur das Streulicht empfängt.
Die elektrischen Ausgangssignale von den Detektoren werden durch Vorverstärker 36, 38 und 40 verstärkt, und bekannten
Frequenzanalysatoren 42, 44, 46 zugeführt, die mechanisch
oder elektronisch so synchronisiert sind, daß ihnen ein gemeinsamer Zeitgeberkreis zugeordnet ist. Die Ausgänge der Frequenzanalysator
en werden einem Datenreduktionsgerät zugeführt, welches die Gestalt eines Streifenrekorders und/oder eines
Computers besitzen kann.
Um die speziell erforderliche Nucleinsäureeinfärbung, Löslichkeit und Fluoreszenzeigenschaft bei den gewünschten Wellenlängen
unter Erregung durch Licht bestimmter Wellenlängen zu gewährleisten, kann man kationische Farben benutzen: Akridin-Orange
oder Gelb GR, Chinacrin-Mustard, Äthydiumbromid, Pyronin B,
Aurophosphin, Euchrysin 2GNX und JR, Vesuvin, Rhodamin S, B und
6G3 Coriphosphin 0, Civanol, Acriflavin, Atabrin, Phosphin,
Benzoflavin, Rheonin A, Thioflavin T und Berberin. Es können zahlreiche andere Farbstoffe unter entsprechender Anpassung der
Probenkörper Chemie bzw. der Lichtquelle benutzt werden, die derartigen Farbstoffen angepaßt sind.
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Mit einem geeigneten räumlichen Filter kann die Vorrichtung gemäß Figur 1 mit einem 0,05 crrr Probenkörper benutzt werden,
der eine Partikelkonzentration von ca. 10 Partikel pro mm besitzt mit einer Partikelgröße von 200 bis 5500 Angström.
Hiermit können Klassifikationsmessungen in einer Minute oder weniger durchgeführt werden. Die Behandlung der Probenkörper
kann in einer Rate von 5 Minuten oder weniger pro Probenkörper erfolgen. Die Genauigkeit der Größenklassifikation kann innerhalb
von + yfo vorgenommen werden.
Die Ausgange des Frequenzanalysator für einen einzigen Probenkörper
sind schematisch in den Figuren 2 bis 5 dargestellt, in
denen die Intensität in Abhängigkeit von der Modulationsfrequenz (in Hertz) aufgetragen ist. Der Prüfkörper wurde mit
Akridin-Orange überprüft und seine Fluoreszenz wurde über unterschiedliche
Kanäle oder in einem einsigen Kanal unter Änderung der Detektor-Filterung zwischen den Beobachtungen gemessen.
Figur 2 ist eine grafische Darstellung mit einem Bandpaßfilter, der eine Wellenlänge von 5500 % durchtreten läßt, um das Vorhandensein
von DeoxjrribonucleinsMurepartikeln festzustellen.
Die Lage eines Jeden der Extremwerte ks B5 C in der sich ergebenden
Kurve proportional zu dem äquivalenten Diffusionsdurchmesser der verschiedenen Deoxyribonucieinsäure enthaltenden
Partikel«, Die Höhe der Extremwerte und die Flächen sind proportional
zu den Mengen der Bsxyribonucleinsäure enthaltenden
Partikel der Größen, die durch die Lage der Extremwerte bestimmt sind.
Die Kurve in der grafischen Darstellung nach Figur J5 wurde durch
einen Frequenzanalysator und dessen Ausdruckvorrichtung erreicht, wenn ein Bandpaßfilter von 5500 % benutzt wurde, um Rlnonucleinsäure
enthaltende Partikel festzustellen.
^09884/1328
Es ist klar, daß der Spitzenwert B der Kurve in der grafischen Darstellung nach Figur 2 einem Deoxyribonucleinsäure enthaltenden
Virus entspricht, weil sich kein entsprechender Spitzenwert in Figur 3 findet. In gleicher Weise entspricht der Spitzenwert
D gemäß Figur 5 einem Ribonucleinsäure enthaltenden Virus. Da Viren einer dieser Typen angehören müssen, zeigt das fortgesetzte
Vorhandensein von Spitzenwerten A und C ein etwas verschobenes Deoxyribonucleinsäure Spektralverhalten, welches eine
strukturelle Änderung der Deoxyribonucleinsäure-Anordnung anzeigt.
Diese Fluktationen in der Überlappung zwischen beiden Kanälen besitzen einen Erkennungswert.
Figur 4 zeigt das Ergebnis eines wiederholten Laufes mit einem polarisierten Filter, spezifisch für die Streuung infolge der
Gesamtpartikelmasse. Als Beleuchtungsquelle dient ein Argonlaser. Das Filter ist so gewählt, daß es einer Beleuchtung von 4880 A
entspricht.
Aus dem Vergleich von Figur 4 mit den Figuren 2 und 3 ergibt
sich, daß die Spitzenwerte E, F, G, H und I nach Figur 4 eine Folge des Vorhandenseins von Partikeln sind, die keine Nucleinsäure
enthalten und deshalb außer Betracht bleiben können.
Figur 5 zeigt das Ergebnis eines wiederholten Laufes mit einem
4880 A Polarisationsfilter mit unterschiedlicher Orientierung.
Das Verhältnis zwischen den Ablesungen in Figur 4 und 5 beschreibt
die Polarisation der Partikelstreuung und demgemäß der Partikelausdehnung.
Der Durchschnitt der Kurven gemäß Figur 4 und 5 ergibt die Gesamtpartikelmasse,
deren Verhältnis zu den Kurven nach Figur 2 und 3 das Nucleinsäure/Gesamtgewichtsverhältnis in den Partikeln
liefert.
4098 84/1328
Figur 6 ist eine ähnliche grafische Darstellung für Kalibrierzwecke
des Apparates. Auch hier ist die Intensität als Funktion der Modulationsfrequenz aufgetragen. Es wurde die Vorrichtung
gemäß Figur 1 benutzt, mit einer einzigen winzigen öffnung als räumliches Filter, um suspendierte Partikel von
88o A Polystyrolkugeln, ein bekannter Geschwulstvirus, festzustellen
und außerdem 252IO A Polystyrolkugeln. Die Polystyrolkugeln
wurden unter Streulicht beobachtet.
Die Ergebnisse sind in den Kurven, die mit 880 , mit V bzw. mit 23^0 bezeichnet sind, dargestellt. Die halbe Breite der
halben Höhen der jeweiligen Kurven liegt bei 54,5 Hz, 13,2 Hz
bzw. 27*5 Hz, was die Frequenzen angibt, die auf bekannte Partikeldurchmesser
bezogen werden können.
Es ist für den Fachmann klar, daß zahlreiche Abwandlungen getroffen
werden können, ohne vom Rahmen der Erfindung abzuweichen.
Patentansprüche: 409884/ 1328
Claims (1)
- - 12 - 2437203Patentansprüche1.) Verfahren zur Peststellung und Klassifizierung submikrometrisch dimensionierter Partikel, welche eine Nucleinsäure enthalten, in einer Flüssigkeit, dadurch gekennzeichnet, daß die Partikel durch eine fluoreszierende Farbe eingefärbt werden, die der Nucleinsäure spezifisch ist, daß die Flüssigkeit mit einer Strahlung einer Erregungswellenlänge beleuchtet wird, welche den Farbstoff fluoreszieren läßt, daß im wesentlichen jede Fluoreszenzemission beobachtet wird, die durch die Fluoreszenz infolge der Erregungsbeleuchtung emittiert wird und daß wenigstens eine der Erregungsbeleuchtung und die Fluoreszenzemission räumlich derart gefiltert wird, daß die beobachtete Fluoreszenzemission als Funktion der Brown'sehen Bewegung der eingefärbten Partikel moduliert wird.2. Verfahren nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet, daß zuerst der Probenkörper mit der fluoreszierenden Farbe eingefärbt wird.3. Verfahren nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet, daß die eingefärbten Partikel in einer Flüssigkeit suspendiert werden, um einen flüssigen Prüfkörper zu erhalten.k. Verfahren nach Anspruch 1,dadurch gekennzeichnet, daß der Farbstoff spezifisch für Deoxyribonucleinsäure ist.409884/13285· Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Farbstoff spezifisch für Ribonucleinsäure ist.6. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Partikel sowohl mit einem für Deoxyribonucleinsäure spezifischen fluoreszierenden Farbstoff als auch mit einem für Ribonucleinsäure spezifischen fluoreszierenden Farbstoff eingefärbt werden und daß die Fluoreszenzemission bei getrennten Wellenlängen gefiltert wird, entsprechend den Fluoreszenzwellenlängen der Farbstoffe, die durch die Verbindung der Fluoreszenzen für Deoxyribonucleinsäure und Ribonucleinsäure erzeugt wurden.7. Verfahren nach Anspruch ls dadurch gekennzeichnet, daß das von den Partikeln gestreute Licht beobachtet wird, und daß die Beobachtung mit der Beobachtung räumlich gefilterter Fluoreszenzemissionen in Wechselbeziehung gebracht wird, um das Verhältnis der Masse der Nucleinsäure zur Gesamtmasse der suspendierten Partikel zu bestimmen.8. Verfahren nach Anspruch 7* dadurch gekennzeichnet, daß die Fluoreszenzemissionen und das gebeugte Licht gleichzeitig betrachtet werden.9. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß nur die Erregungsbeleuchtung räumlich gefiltert wird.409884/132810. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß nur die beobachtete fluoreszierende Emission räumlich gefiltert wird.11. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sowohl die Erregungsbeleuchtung als auch die beobachtete Fluoreszenzemission räumlich gefiltert werden.12. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das FrequenzSpektrum der Modulation der Fluoreszenzemission gemessen wird.13. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß das Frequenzspektrum bei getrennten Fluoreszenzemissionswellenlängen gemessen wird, die jeweils der Deoxyribonucleinsäure bzw. der Ribonucleinsäure charakteristisch sind.14. Verfahren nach Anspruch 7* dadurch gekennzeichnet, daß die Polarisation des Lichtes gemessen wird, das von den Partikeln gestreut wird.15. Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens gemäß Anspruch 1 bis 14 zur Feststellung und Klassifizierung von in einem flüssigen Prüfkörper angeordneten submikrometrisch dimensionierten Partikel, die eine Nucleinsäure enthalten und mit einem fluoreszierenden Farbstoff eingefärbt sind, welcher für die Nucleinsäure spezifisch ist,409884/1328dadurch gekennzeichnet, daß eine Strahlungsquelle vorgesehen ist, welche eine Beleuchtung in einem Erregungsband der Fluoreszenz des Farbstoffes liefert, daß eine Vorrichtung vorgesehen ist, die die Beleuchtung auf den Prüfkörper richtet, daß eine Vorrichtung vorgesehen ist, um die Fluoreszenzemission zu betrachten, die durch die Fluoreszenz gemäß der Beleuchtung erzeugt wird und daß Mittel vorgesehen sind, um räumlich wenigstens eine der Emissionen, d.h. Beleuchtungsemission oder Fluoreszenzemission zu filtern.16. Vorrichtung nach Anspruch 15*
dadurch gekennzeichnet, daß die Einrichtung zur räumlichen Filterung im optischen Pfad zwischen der Lichtquelle und dem Prüfkörper angeordnet ist.17. Vorrichtung nach Anspruch 15*
dadurch gekennzeichnet, daß die Einrichtung zur räumlichen Filterung im optischen Pfad zwischen der Betrachtungseinrichtung und dem Prüfkörper angeordnet ist.18. Vorrichtung nach Anspruch 15*
dadurch gekennzeichnet, daß die Mittel zur räumlichen Filterung einen oder mehrere lichtdurchlässige Abschnitte aufweisen, die im wesentlichen sämtlich so dimensioniert sind, daß sie dicht der Durchschnittsabmessung der Partikel angepaßt sind, soweit es die Wellenlängen der Beleuchtungseinrichtungen erlauben.409384/132819· Vorrichtung nach Anspruch 15» dadurch gekennzeichnet, daß Mittel vorgesehen sind, um die Intensitäts-Modulation der Fluoreszenz festzustellen, die durch die Brown'sehe Bewegung der Partikel in Kombination mit den Mitteln zur räumlichen Filterung erzeugt wird.20. Vorrichtung nach Anspruch 19* dadurch gekennzeichnet, daß ein Frequenzanalysator für die Intensitäts-Modulation vorgesehen ist.21. Vorrichtung nach Anspruch 19* dadurch gekennzei chnet, daß Mittel vorgesehen sind, um die Fluoreszenzemission in eine Vielzahl von Strahlen aufzuteilen und daß der Intensitäts-Detektor mehrere Bandpaßfilter aufweist, die jeweils im Pfad eines Strahles liegen, und daß ein entsprechender Fotodetektor auf die Wellenlängen anspricht, die durch die Bandpaßfilter hindurchgetreten sind.22. Vorrichtung nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, daß ein Frequenzanalysator für die von den Fotodektoren erzeugten Signale vorgesehen ist.23' Vorrichtung nach Anspruch 15* dadurch gekennzeichnet, daß die Strahlungsquelle eine Quelle mit einem breiten Strahlungsspektrum ist, und daß wenigstens ein Bandpaßfilter vorgesehen ist.409884/132824. Vorrichtung nach Anspruch 15* dadurch gekennzeichnet, daß Mittel vorgesehen sind, um die Beugung der Beleuchtung der Partikel im wesentlichen gleichzeitig mit der Betrachtung der Fluoreszenzemission der Partikel festzustellen und zu messen.25. Vorrichtung nach Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, daß die Mittel zur Peststellung und Messung der Beugung auf die Polarisation der gebeugten Beleuchtung ansprechen.4098 8 A/1328
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Legal Events
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| OHJ | Non-payment of the annual fee |