DE2427221B2

DE2427221B2 - Verfahren zum analysieren einer fluessigen probe auf einen bestandteil und vorrichtung zur durchfuehrung des verfahrens

Info

Publication number: DE2427221B2
Application number: DE19742427221
Authority: DE
Inventors: Alexander M Bedford Village N.Y. Saunders (V.StA.)
Original assignee: Technicon Instruments Corp
Current assignee: Bayer Corp
Priority date: 1973-06-08
Filing date: 1974-06-06
Publication date: 1978-01-05
Also published as: CA1024424A; US3925018A; FR2232757A1; AU6975274A; JPS5033890A; FR2232757B1; GB1475608A; SE414973B; NL7407719A; SE7407551L; BE815426A; IT1020632B; DE2427221A1; DE2427221C3; JPS6112223B2; CH569970A5

Description

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zum

ι,-, Analysieren einer flüssigen Probe auf einen Bestandteil, bei dem eine Menge in einer Flüssigkeit suspendierter, nicht miteinander verbundener Mikrohalter, von denen jeder ein Reagenz enthält, mit der Probenflüssigkeit

vermengt und das in den Mikrohaltern enthaltene Reagenz mit der Probe zur Reaktion gebracht wird und t>ei dem ein aufgrund der Reaktion gebildetes Reaktionsprodukt ausgewertet wird. Ferner befaßt sich die Erfindung mit einer Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens.

Ein solches Verfahren ist seiner grundsätzlichen Art nach aus der DT-AS 16 48 999 bekannt. Danach werden bei einem Verfahren zur imuno-chemischen Bestimmung von Antigenen oder Antikörpern in einer in flüssigen Probe Trägerteilchen, die ein Reagenz enthalten, mit der flüssigen Probe vermischt und das Reagenz mit der Probe zur Reaktion gebracht. Aufgrund der in dem Reaktionsgemisch ablaufenden Reaktion ergibt r.ich ein Sedimentationsmuster, aus dem dann das Resultat der Analyse abgelesen wird. Damit man die Antigene und Antikörper mit hoher Empfindlichkeit nachweisen kann, wird bei dem bekannten Verfahren der Träger aus dem Reaktionsgemisch abgetrennt und in einem geeigneten flüssigen Medium suspendiert, worauf man das Sedimentationsmuster abliest.

Zum weiteren Stand der Technik wird auf die US-PS 32 41432 verwiesen, aus der es bekannt ist, flüssige Proben in Gegenwart von Reagenzien, die in der Form einer Lösung vorliegen, zu analysieren. Diese Analyse wird automatisch unter Anwendung des kontinuierlichen Durchflußprinzips durchgeführt und enthält mehrere verschiedenartige Untersuchungen an verschiedenen Teilmengen jeder Probe. Die aus der genannten Patentschrift bekannte Analysiervorrichtung benutzt für besondere Analysen einen Dialysato;·, um von einem segmentierten Strom aus flüssigen Proben, beispielsweise aus menschlichen Blutproben, diejenigen Bestandteile, beispielsweise die Proteine, zu trennen, die sonst die Diffusion der Probe in das besondere Reagenz bei jedem der zahlreichen Untersuchungen stören würden. Diese Dialyse erfordert einen getrennten Verfahrensschritt und Einrichtungen zur Durchführung dieses Schritts. Zur quantitativen Bestimmung eines interessierenden Bestandteils der Probe wird bei der bekannten Analysiervorrichtung in Verbindung mit einer Farbreaktion ein Kolorimeter benutzt. Mit Hilfe des Kolorimeters wird in einer Durchflußküvette ein Flüssigkeitsvolumen untersucht, um für eine besondere Untersuchungsreaktion bei einer besonderen Wellenlänge den Grad der Lichtabsorption oder Lichttransmission zu bestimmen. Der dabei anfallende Meßwert stellt ein quantitatives Maß für den interessierenden Bestandteil dar.

Ferner ist es bekannt, eine Suspension aus Partikeln in einen in der gleichen Richtung fließenden flüssigen Mantelstrom einzuleiten, um die Partikeln nacheinander durch einen Lichtstrahl zu leiten. Dazu wird eine Mantelstromdurchflußküvette verwendet, wie sie beispielsweise aus einem Aufsatz von P. J. Crosland-Taylor, A Device for Counting Small Particles Suspended in a Fluid strough a Tube, NATURE, 3. Januar 1953, Seite 37, bekannt ist. Darüber hinaus ist es aus der DT-OS 21 53 405 bekannt, eine Suspension w) aus Partikeln, beispielsweise aus menschlichen Zellen, in Form eines schmalen Stroms durch einen Lichtstrahl zu schicken, um bestimmte Zelleneigenschaften festzustellen und anzugeben.

Weiterhin ist es aus einem Aufsatz von Klaus i,-> Mosbach, Enzymes Bound to Artificial Matrixes, SCIENTIFIC AMERICAN, März 1971, Seiten 26-33, bekannt, Enzyme an künstliche Matrizen zu binden, um zum Studium von Enzymreaktionen und zur kommerziellen Herstellung von Verbindungen zu imitieren, wie Enzyme in lebenden Zellen an ihrem Platz gehalten werden. Auf der Seite 31 dieser Druckschrift ist eine von Howard H. W e e t a 11 und Norman W e 1 i k y entwikkelte halbquantitative biochemische Analyse beschrieben, bei der die Enzymperoxidase an die Cellulose in der Form eines Papierstreifens gebunden ist. Auf dem Streifen sind kleine Mengen eines farblosen Farbstoffs und einer Lösung aufgebracht, von der angenommen wird, daß sie Wasserstoffperoxid enthält. In Gegenwart der Enzymperoxidase wird in Abhängigkeit von der Menge des vorhandenen Wasserstoffperoxids eine kleinere oder größere Menge des Farbstoffs durch das Wasserstoffperoxid oxydiert.

Ausgehend von dem bekannten Verfahren nach dei DT-AS 16 48 999 liegt der Erfindung die Aufgabe zugrunde, ohne Ausführung eines Abtrennschrittes eine hohe Analysenempfindlichkeit zu erzielen und eine genaue quantitative Bestimmung \Orzunehmen.

Zur Lösung dieser Aufgabe ist das eingangs beschriebene Verfahren nach der Erfindung dadurch gekennzeichnet, daß die Mikrohalter, an denen sich ein in dem Flüssigkeitsgemisch unlösliches Reaktionsprodukt konzentriert, im suspendierten Zustand nacheinander durch einen Sichtbereich geleitet werden und daß das Reaktionsprodukt an den aufeinanderfolgend durch den Sichtbereich geleiteten Mikrohaltern optisch gemessen und daraus der Probenbestandteil quantitativ bestimmt wird.

Bei dem erfindungsgemäßen "Verfahren wird somit das entstehende Reaktionsprodukt an den Mikrohaltern konzentriert und nicht in dem gesamten Probenvolumen dispergiert. Das effektive Volumen für die zur Reaktion gebrachte Probe kann daher während der tatsächlichen Analyse sehr klein sein, so daß die Gesamtempfindlichkeit des Verfahrens sehr hoch ist. In Anbetracht der Konzentration des Reaktionsprodukts an den Mikrohaltern ist nämlich die Tiefe der Farbtönung des Reaktionsprodukts wesentlich größer als bei einem, dem gesamten Probenvolumen dispergierten Reaktionsprodukt.

Das erfindungsgemäße Verfahren ist insbesondere zur quantitativen kontinuierlichen Durchflußanalyse geeignet, bei der eine flüssige Probe, im allgemeinen ohne Dialyse, zusammen mit einem flüssigen Reaktionsmittel in zahlreiche ein Reagenz enthaltende Partikeln diffundiert, die im suspendierten Zustand in einem Mantelstrom durch einen Lichtstrahl geleitet werden, um ein Reaktionsprodukt an den Partikeln festzustellen sowie zu messen und dadurch den interessierenden Bestandteil der Probe quantitativ zu bestimmen. Bei dem Reaktionsprodukt handelt es sich vorzugsweise um ein dunkles Präzibitat.

Die Partikeln können aus künstlichen Matrizen bestehen, an die als Reagenz beispielsweise ein Enzym gebunden sein kann.

Zum gleichzeitigen Analysieren einer Probe auf mehrere Bestandteile in Gegenwart voneinander in einem einzigen hydraulischer. Analysenkanal zeichnet sich eine Weiterbildung des erfindungsgemäßen Verfahrens dadurch aus, daß mehrere Arten von Mikrohaltern verwendet werden, von denen jede Mikrohalterart ein £ⁿderes Reagenz für einen anderen der Bestandteile enthält und von den übrigen Mikrohalterarten durch ein feststellbares Kennmerkmal unterscheidbar ist, daß die verschiedenen Mikrohalterarten aufgrund ihrer verschiedenen Kennmerkmale voneinander unterschieden

werden und daß zur quantitativen Bestimmung der verschiedenen Bestandteile die an den Mikrohaltern der verschiedenen Arten konzentrierten Reaktionsprodukte optisch gemessen werden. Bei den unterscheidbaren Kennmerkmalen der Mikrohalterarten kann es sich um Unterschiede in der Größe und bzw. oder in der Farbe handeln.

Das erfindungsgemäße Verfahren ist somit zum Durchführen von zahlreichen verschiedenartigen Untersuchungsreaktionen geeignet und bezüglich seines Anwendungsbereiches sehr flexibel. So kann man beispielsweise das partikelförmige Reagenz in einer Reaktion zum Erzeugen eines nicht stabilen Zwischenprodukts, beispielsweise Glutathion, verwenden, und dann dieses Produkt in einer nachfolgenden Enzymreaktion als Substrat benutzen. Darüber hinaus kann man für die ein Reagenz enthaltenden Partikeln biologische Zellen benutzen. Zellen von Gewebekulturen mit kleinen, aber im wesentlichen konstanten Mengen von bestimmten Enzymen kann man zum Analysieren von ihren spezifischen Substraten benutzen.

Eine Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens ist nach der Erfindung gekennzeichnet durch eine erste Rohrleitung zum Weiterleiten eines aus der flüssigen Probe gebildeten Stroms, durch eine zweite Rohrleitung zum Weiterleiten eines aus den suspendierten Mikrohaltern gebildeten Stroms, durch eine mit entsprechenden Einlassen versehene, an die Auslässe der ersten und zweiten Rohrleitung angeschlossene dritte Rohrleitung zum Weiterleiten der zusammengeführten und darin zur Reaktion gebrachten Ströme, durch einen in der dritten Rohrleitung vorgesehenen Sichtbereich zum aufeinan derfolgenden Durchtritt der suspendierten Mikrohalter mit den daran konzentrierten Reaktionsprodukten und durch eine optische Einrichtung zum Messen des auf den aufeinanderfolgend durch den Sichtbereich tretenden Mikrohaltern konzentrierten Reaktionsprodukts und zur quantitativen Bestimmung des Probenbestandteils aufgrund des gemessenen Reaktionsprodukts.

Weitere vorteilhafte Ausgestaltungen der Erfindung sind durch Unteransprüche gekennzeichnet.

Ein bevorzugtes Ausführungsbeispiel der Erfindung wird anhand von Zeichnungen beschrieben. Es zeigt

Fig. 1 eine schematische Ansicht eines nach der Erfindung arbeitenden Analysiergerätes,

F i g. 2 eine schematische Ansicht einer Durchflußküvette und einer optischen Einrichtung für das in der F i g. 1 dargestellte Analysiergerät und

Fig.3 eine in dem Analysiergerät benutzte elektrische Schaltungsanordnung.

Ein in der Fig. 1 dargestelltes Analysiergerät enthält einen zusammendrückbaren Pumpenschlauch 10, über den von einer nicht dargestellten Probenquelle, beispielsweise von einem Probennehmer nach der US-PS 30 38 340, eine Reihe von flüssigen Proben aufeinanderfolgend zugeführt wird. Der Pumpenschlauch 10 ist in einer Proportionierpumpe 12 angeordnet, die entsprechend den Ausführungen in der US-PS 29 35 028 ausgebildet sein kann. Der nicht dargestellte Probennehmer segmentiert den Probenstrom mit Luftschüben in einer solchen Weise, daß jede Probe von ihren Nachbarproben im Probenstrom durch einen Luftschub getrennt ist. Bei den im Probenstrom fließenden Proben kann es sich um verschiedene flüssige Proben handeln, beispielswicse um Blutproben oder Blutsemmproben von verschiedenen Patienten. Diese Proben sollen im Hinblick auf mehrere in ihnen vorkommende Substanzen behandelt und analysiert werden. Bei dem beschriebenen Ausführungsbeispie sollen beispielsweise Blut- oder Blutsemmproben auf Glucose, Harnsäure und Ascorbinsäure untersucht werden. Das beschriebene Analysiergerät kann aber auch nach entsprechender Modifizierung zum Bestimmen der Menge einer beliebigen Anzahl von Substanzen verwendet werden, die in einer flüssigen Probe vorkommen.

Der über den Pumpenschlauch 10 zugeführtc

ίο luftsegmentierte Probenstrom wird während des Fließens zur quantitativen Analyse in bezug auf eine der genannten Substanzen behandelt, und zwar beispielsweise derart, daß die Probe nach einem Lichtabsorptionsverfahren analysiert werden kann. Zu diesem Zweck wird der im Pumpenschlauch 10 befindliche Probenstrom unter der Einwirkung der Pumpe 12
einer Verbindungsstelle gefördert, bei der der Probenstrom mit einem gleichzeitig über einen Pumpenschlauch 14 zugeführten inerten Gasstrom zusammengeführt wird, um den Probenstrom durch weitere Gasschübe zu segmentieren. Dieser Strom wird an einer Verbindungsstelle mit einem Reagenzstrom zusammengebracht, der über einen Pumpenschlauch 16 zugeführt wird.

Der durch den Pumpenschlauch 16 fließende Strom wird beispielsweise von einem Kolben 18 zugeführt, der eine Lösung aus einem farblosen Reagenz ode" Chromogen enthalten kann, beispielsweise 4-chloro-lnaphthol. In der Lösung im Kolben 18 sind zahlreiche Mikrohalter oder Parikeln von drei verschiedenen Arten suspendiert. Jede der Partikelarten weist beispielsweise eine Eigenschaft auf, durch die sie sich von den anderen Partikelarten unterscheidet. Bei dem beschriebenen Ausführungsbeispiel handelt es sich bei diesem unterscheidenden Merkmal um die Größe der einzelnen Partikelarten. Die Größe der ersten Partikelart kann beispielsweise 5,0 μιτι, die Größe der zweiter Partikelart 10,0 μπι und die Größe der dritten Partikelart 15,0 μπι betragen. Die Partikel einer Art können sich in ihrer Größe geringfügig voneinander unterscheiden, jedoch nicht in einem so hohen Maße daß verschiedene Partikelarten größenmäßig miteinander verwechselt werden. Die Partikeln der verschiedenen Arten tragen verschiedene, in ihnen enthaltene Reagenzien, die sich vom Reagenz der Lösung im Kolben 18 unterscheiden.

Die zur praktischen Durchführung der Analyse verwendbaren Partikeln fallen grundsätzlich in eine von zwei Klassen. Die Partikeln der einen Klasse weisen einen Träger für das in ihnen enthaltene Reagenz auf Das Reagenz kann an den Träger durch eine kovalente oder eine ionische Bindung gebunden sein. Bei dem Träger kann es sich auch um eine Gelmatrix handeln, in die das Reagenz eingebettet ist. Die Partikeln der anderen Klasse können aus Aggregaten von Moleküler bestehen, die das Reagenz enthalten. Diese Klasse vor Partikeln kann man nicht als Träger betrachten. Die Partikeln von beiden Klassen zeichnen sich in allgemeinen dadurch aus, daß sie in wäßrigen Lösunger

Wi unlöslich sind und gegenüber Wasser und kleiner aufgelösten Stoffen porös sind. Einige sind für aufgelöste Stoffe von großem Molekulargewicht un durchdringlich, während andere in der Lage sine aufgelöste Stoffe von großem Molekulargewicht um

1.5 Präzipitate aufzunehmen. Solche Partikeln zeichnei sich im allgemeinen dadurch aus, daß sie, wenn sie ii wäßrigen Lösungen suspendiert sind, transparent sine und ein spezifisches Gewicht haben, das nahe bei den

von Wasser liegt. Ferner zeichnen sich die Partikeln im allgemeinen dadurch aus, daß sie an sich Reaktionsprodukte konzentrieren, beispielsweise dunkle Präzipitate oder farbige Substanzen, so daß diese Produkte optisch analysiert werden können. Im allgemeinen haben diese Partikeln eine kugelförmige Gestalt.

Die Partikeln oder Mikrohalter, die zu der Klasse mit einem Träger gehören, können einen Träger haben, der in Übereinstimmung mit dem zu tragenden Reagenz und den in Betracht zu ziehenden chemischen Reaktionen, aber auch unter Berücksichtigung von anderen Gesichtspunkten ausgwählt sein kann, und zwar aus einer Gruppe von Stoffen, die beispielsweise Dextran, Gele, Acrylplymerisate, Polyaminosäuren, Cellulose, Glas, Polystyrol und Stärke umfassen. Die Partikeln oder Mikrohalter, die keinen Träger haben, können beispielsweise aus Enzymmolekülen gebildet sein, die unter Verwendung von bifunktionellen Verbindungen die Moleküle zu großen Aggregaten querverbinden. Darüber hinaus kommen zahlreiche andere Substanzen in Betracht.

Bei der Analyse der obengenannten Bestandteile, wie Glucose, Harnsäure und Ascorbinsäure, in einer einzigen Probe, können die zur Analyse verwendeten Partikeln derart sein, daß sich jede Partikelart von der anderen durch ihre Größe unterscheidet und alle drei Arten von Partikeln einen Träger aufweisen, der aus Polyacrylamid gebildet sein kann. Alle Reagenzien, die an solche Träger gebunden sind, weisen eine kovalente Bindung auf. An alle Träger der Größengruppe von 5,0 μπι werden die Reagenzien Glucoseoxidase und Meerrettichperoxidase zur Bestimmung des in der Probe enthaltenen interessierenden Glucosebestandteils verwendet. Ein solcher Test dient zur Diagnose und Behandlung von Diabetes oder anderen Leiden. An alle Träger der Größengruppe von 10,0 μίτι werden die Reagenzien Uricase, also Harnsäureoxidase, und Meerrettichperoxidase für die Bestimmung des in der Probe vorkommenden interessierenden Harnsäurebestandteils gebunden. Dieser Test dient zur Diagnose und Behandlung von Gicht. An die Träger der Partikeln der Größengruppe von 15,0 μίτι werden die Reagenzien Ascorbinsäureoxidase und Meerrettichperoxidase zur Bestimmung des in der Probe enthaltenen interessierenden Ascorbinsäurebestandteils gebunden. Dieser Test dient zur Bestimmung des Ernährungszustands, insbesondere zur Feststellung eines Mangels an Vitamin C. Die Gegenwart von molekularem Sauerstoff in Lösung ist für jeden der obengenannten Tests erforderlich. Die dazu erforderliche Konzentration wird durch die Luftsegmente im Probenstrom sichergestellt.

Die Reagenzsuspension wird von irgendeiner nicht dargestellten Quelle in einer geeigneten Weise über eine Leitung 20 dem Kolben 18 zugeführt. Die suspendierten Partikeln oder Mikrohalter werden in dem Kolben 18 mit Hilfe eines Rührflügels 22, der in einer nicht dargestellten, herkömmlichen Weise angetrieben wird, in Suspension gehalten. Der durch den Pumpenschlauch 16 geführte Reagenzstrom wird mit dem segmentierten Probenstrom zusammengeführt, und der vereinigte Strom durchfließt eine Mischschlange 24, von der er zu einem temperaturgeregelten Inkubator 26 gelangt. Hinter dem Inkubator 26 wird der Probenstrom mit einem Verdünnungsmittelstrom vereinigt, der über eine Leitung 28 zugeführt wird, die an einen Pumpenschlauch 30 der Pumpe 12 angeschlossen ist. Der Einlaß des Pumpenschlauchs 30 steht mit einer nicht dargestellten Verdünnungsniittelquelle in Verbindung. Der verdünnte Probenstrom gelangt dann zu einer Mischschlange 32, die für eine Wiedersuspension der Partikelreagenzien sorgt. Von der Mischschlange 32 gelangt der Strom zu einer Verzweigungsstelle 34, in der der Strom in einer herkömmlichen Weise entgast wird und die entfernten Gase über eine zum Abfluß führende Leitung 36 abgeführt werden. Der verbleibende Flüssigkeitsstrom fließt von der Verzweigungsstelle 34 über eine Leitung 38 zu einer Analysiereinheit 40, die

ίο einen Einlaß für den behandelten Probenstrom aufweist. Bei dem dargestellten Beispiel enthält die Einheit 40 eine Durchflußküvette für einen Mantelstrom und optische Einrichtungen.

Die in der F i g. 2 dargestellte Mantelstromdurchflußküvette 41 kann einen Aufbau haben, der in der US-PS 36 61 460 beschrieben ist. Eine Einzelbeschreibung der Durchflußküvette ist daher hier nicht erforderlich. Die Durchflußküvette 41 weist einen Einlaß 42 für einen behandelten Probenstrom und einen Einlaß 44 für einen Mantelstrom auf. Der Mantelstrom wird von einer nicht dargestellten Quelle der Durchflußküvette zugeführt. Im Sichtbereich 46 der Durchflußküvette wird der behandelte Probenstrom derart eingeengt, daß die im Probenstrom befindlichen genannten Partikeln praktisch nacheinander durch den Sichtbereich 46 fließen und dabei einen auf den Strom auftreffenden Lichtstrahl überqueren. Vom Auslaß der Durchflußküvette gelangt der Strom über eine Leitung 48 zum Abfluß oder zu einem Sammelbehälter.

Wie es aus der F i g. 2 hervorgeht, kommt der Lichtstrahl von einer Lampe 50 und passiert hinter der Lampe eine Kondensorlinsenanordnung 52 sowie eine zentrische Lochblende 54, bevor er im Sichtbereich 46 der Durchflußküvette auf den behandelten Probenstrom auftrifft. Nach der Bestrahlung des Probenstroms gelangt der Lichtstrahl zu einem dichroitischen Spiegel 56, der als Strahlenteiler wirkt und einen Teil des Strahls mit einer Absorptionswellenlänge durch eine zentrische Lochfeldblende 58 auf eine Fotodiode 60 wirft, die auf Licht dieser Wellenlänge anspricht Die Fotodiode 60 stellt somit einen Absorptionsdetektor dar. Derjenige Teil des Lichtstrahls, der bei einer Lichtstreuungswellenlänge den dichroitischen Spiegel 56 passiert, gelangt über eine als Fadenkreuz ausgebildete Dunkelfeldblende 62 zu einer Fotodiode 64, die auf die Streuungswellenlänge anspricht und daher einen Streuungsdetektor darstellt.

Zur Erläuterung der chemischen Reaktionen wird wieder auf den in der F i g. 1 dargestellten hydraulischen Teil des Geräts Bezug genommen, und zwar insbesondere auf den Inkubator 26, in dem die chemischen Reaktionen im Hinblick auf die zu betrachtende Mehrfachanalyse stattfinden. Der Glucosebestandteil der Blutprobe bildet in Gegenwart des von den Partikeln mit der Größe von 5,0 μπι getragenen Glycoseoxidasereagenzes Wasserstoffperoxid und andere Produkte. In Gegenwart des von den genannten Partikeln getragenen Meerrettichperoxidasereagenzes tritt das Wasserstoffperoxid in eine zweite Reaktion mit

fco dem 4-chloro-l-naphthol als Chromogen ein. Dabei entsteht Wasser und ein dunkles wasserunlösliches Präzipitat mit einem hohen Extinktionskoeffizienten. Das genannte Peroxidasereagenz wird von den genannten Partikeln im Überschuß geliefert, so daß die

b5 Menge des dunklen Präzipitats, das sich in diesen Partikeln ausbildet, durch den Absorptionsdetektor 60 meßbar ist, und zwar als eine quantitative Anzeige des interessierenden Glucosesubstrats der Reaktion,

Gleichzeitig mit der lichtabsorbierenden optischen Wirkung dieser Partikeln auf den Absorptionsdetektor 60 spricht der Streuungsdetektor 64 auf die von der Partikelgröße abhängige lichtstreuende optische Wirkung dieser Partikeln an, um die Größe der Partikeln zu bestimmen.

Der Harnsäurebestandteil des Bluts bildet in Gegenwart des von den Partikeln mit einer Größe von 10,0 μιη getragenen Enzymreagenzes Uricase oder Harnsäureoxidase Wasserstoffperoxid und andere Produkte. Das Wasserstoffperoxid dieser Reaktion tritt in Gegenwart des in diesen Teilchen gebundenen Enzymreagenzes Meerrettichperoxidase zusammen mit dem 4-chloro-inaphthol als Chromogen in eine zweite Reaktion ein, wobei Wasser und ein dunkles unlösliches Präzipität gebildet wird. Die Menge des dunklen Präzipitats, das sich an diesen Teilchen ausbildet, ist durch den Absorptionsdetektor 60 als eine quantitative Anzeige des interessierenden Harnsäuresubstrats der Reaktion meßbar. Gleichzeitig mit der lichtabsorbierenden optischen Wirkung dieser Partikeln auf den Absorptionsdetektor 60 spricht wiederum der Streuungsdetektor 64 auf die von der Partikelgröße abhängige lichtstreuende optische Wirkung dieser Partikeln an, um ihre Größe festzustellen.

Der Ascorbinsäurebestandteil der Blutprobe bildet in Gegenwart des Enzymreagenzes Ascorbinsäureoxidase, das von den Partikeln mit der Größe von 15,0 μιη getragen wird. Wasserstoffperoxid und andere Produkte. Das Wasserstoffperoxid tritt in Gegenwart des von diesen Partikeln getragenen Meerrettichperoxidasereagenzes mit dem 4-Chloro-l-naphthol in eine zweite Reaktion ein, bei der Wasser und ein dunkles unlösliches Präzipität gebildet wird. Die Menge des dunklen Präzipitats, das an diesen Teilchen ausgebildet wird und bei dem es sich um dasselbe dunkle Präzipität der zuvor beschriebenen Reaktionen handelt, ist durch den Absorptionsdetektor 60 als quantitative Anzeige der interessierenden Ascorbinsäure der Reaktion meßbar. Gleichzeitig mit der lichtabsorbierenden optischen Wirkung dieser Partikeln auf den Absorptionsdetektor 60 spricht, wie zuvor, der Streuungsdetektor 64 auf die von der Partikelgröße abhängige lichtabsorbierende optische Wirkung dieser Partikeln an, um deren Größe zu bestimmen.

Obwohl es nicht erforderlich ist, ist es von Vorteil, die Reaktionen zum Bestimmen von mehreren interessierenden Bestandteilen der Probe gleichzeitig und in Gegenwart voneinander durchzuführen, wie es bei dem Ausführungsbeispiel der Fall ist. Weiterhin ist es vorteilhaft, daß bei jeder der Reaktionen ein gemeinsames Reaktionsprodukt auftritt, beispielswiese Wasserstoffperoxid, wie bei dem Ausführungsbeispiel, und daß das zu messende Produkt, bei dem es sich beim Ausführungsbeispiel um das dunkle Präzipität handelt, allen Reaktionen gemeinsam ist. In diesem Zusammenhang sei bemerkt, daß die Partikeln der drei verschiedenen Größen bei dem beschriebenen Ausführungsbeispiel ein gemeinsames Reagenz tragen, nämlich Meerrettichperoxidase. Derartige Gemeinsamkeiten vermeiden Probleme, die sonst in Anbetracht von unterschiedlichen pH-Bedingungen und unterschiedlichen Probendiffusions- und Reaktionsgeschwindigkeiten auftreten könnten.

Die Reagenzpartikeln oder Mikrohalter der drei verschiedenen Größenarten passieren somit nacheinander in einer willkürlichen Reihenfolge den Sichtbcreich 46 der Durchfliißküvcttc 40. In der F i g. 3 ist die Signalverarbeitung zum Unterscheiden der verschieden großen Reagenzpartikeln beschrieben, die hier eine Größe von 5,0 μπι, 10,0 μιη oder 15,0 μΐη haben. Aufgrund einer Lichtstreuung gibt der Streuungsdetektor 64 über eine Leitung 66 ein Signal an einen Verstärker ab. Der Ausgang des Verstärkers ist über eine Leitung 68 an die Eingänge von Schwellwertvergleichern I bis IV angeschlossen. Dem Vergleicher 1 wird eine Eingangsbezugsspannung Vl zugeführt, die

ίο niedriger als die Eingangsbezugsspannung V2 des Vergleichers Il ist. Die Eingangsbezugsspannung V3 des Vergleichers Hl ist höher als die Bezugsspannung V2 und niedriger als die Eingangsbezugsspannung V4 des Vergleichers IV. Die verstärkten Spannungssignale, die von den Partikeln mit der Größe von 5,0 μιη stammen, fallen zwischen die Bezugsspannungen VI und V2. Die verstärkten Spannungssignale, die von den Partikeln mit der Größe von 10,0 μπι stammen, fallen zwischen die Bezugsspannungen V2 und Vi. Die verstärkten Spannungssignale, die von den Partikeln mit der Größe von 15,0 μηι stammen, fallen zwischen die Bezugsspannungen V3und V4.

Der Ausgang des Vergleichers I ist an den Eingang eines monostabilen Multivibrators 70 angeschlossen. In entsprechender Weise ist der Ausgang des Vergleichers II an den Eingang eines monostabilen Multivibrators 72, der Ausgang des Vergleichers III an den Eingang eines monostabilen Multivibrators 74 un der Ausgang des Vergleichers IV an den Eingang eines monostabilen Multivibrators 76 angeschlossen. Der Ausgang des monostabilen Multivibrators 70 führt zu dem einen Eingang eines NAND-Glieds 78. Der Ausgang des monostabilen Multivibrators 72 ist an den anderen Eingang des NAND-Glieds 78 und an den einen Eingang eines NAND-Glieds 80 angeschlossen. Der Ausgang des monostabilen Multivibrators 74 ist an den anderen Eingang des NAND-Glieds 80 und an den einen Eingang eines NAND-Glieds 82 angeschlossen. Der Ausgang des monostabilen Multivibrators 76 ist an den anderen Eingang des NAND-Glieds 82 angeschlossen.

Der Ausgang des NAND-Glieds 78 ist über eine Leitung 84 mit dem Eingang eines voreingestellten Zählers 86 verbunden, um die durch den Sichtbereich 46 der Durchflußküvette strömenden Partikeln mit der Größe von 5,0 μπι zu zählen. Der Ausgang des NAND-Glieds 80 ist über eine Leitung 88 mit dem Eingang eines voreingestellten Zählers 90 verbunden, um die durch den Sichtbereich 46 der Durchflußküvette strömenden Teilchen mit der Größe von 10,0 μπι zu

so zählen. Der Ausgang des NAND-Glieds 82 ist über eine Leitung 92 mit dem Eingang eines voreingestellten Zählers 94 verbunden, um die durch den Sichtbereich 46 der Durchflußküvette strömenden Teilchen mit der Größe von 15,0 μπι zu zählen. Die voreingestellten Zähler 86, 90 und 94 können alle auf denselben Wert voreingestellt sein, beispielsweise auf 10 000.

Immer wenn der Zähler 86 ein Teilchen zählt, gibt er über eine Leitung 96 ein Ausgangssignal an den einen Eingang eines Datentransferglieds 98 ab. In ählicher Weise gibt der Zähler 90, wenn er ein Teilchen zählt, über eine Leitung 100 ein Ausgangssignal an den einen Eingang eines Datentransferglieds 102 ab. In entsprechender Weise gibt der Zähler 94, wenn er ein Teilchen zählt, über eine Leitung 104 ein Ausgangssignal an den einen Eingangeines Datentransferglieds 106ab.

Wie es aus der F i g. 3 hervorgeht, werden die Glieder 98, 102 und 106 durch die Ausgangssignale der vorangestellten Zähler 86, 90 und 94 freigegeben. Die

Ausgänge der Glieder 98,102 und 106 führen jeweils zu dem Eingang eines zugeordneten Akkumulators 108. Die Ausgänge der Akkumulatoren 108 sind über geeignete Kabel mit den Eingängen eines Mulitplexers 110 verbunden, dessen Ausgang an den Eingang des "> Druckers 112 angeschlossen ist, um die Gesamtabsorptionswerte anzugeben, die vom Absorptionsdetektor 60 aus der Menge der von 10 000 gezählten Teilchen getragenen Reaktionsprodukte für jede der drei Größenarten gewonnen werden, wenn diese Teilchen durch den Sichtbereich 46 der Durchflußküvette strömen. Die von dem Drucker gegebene Sichtanzeige ist in drei Abschnitte unterteilt, von denen jeder Abschnitt einen interessierenden Bestandteil quantitativ angibt.

Wie es aus der F i g. 3 hervorgeht, wird das Ausgangssignal des Absorptionsdetektors 60 über eine Leitung 114 dem Eingang eines Verstärkers zugeführt. Das verstärkte Signal gelangt über eine Leitung 116 zu einem Analog/Digital-Umsetzer 118, der die Amplitude dieses Signals in eine Binärzahl umsetzt. Diese Binärzahl erscheint an einer Leitung 120, die mit jedem der anderen Eingänge der Datentransferglieder 98,102 und 106 verbunden ist. Die jeweils zugeordneten Multivibratoren 70, 72, 74 und 76 arbeiten mit den Datentransfergliedern 98,102 und 106 derart zusammen, daß sie diese Glieder für eine hinreichend lange Zeit, beispielsweise 20 μ5, offenhalten, damit die das Reaktionsprodukt der durch den Sichtbereich strömenden Partikeln quantitativ anzeigende binäre Zahl zu dem entsprechend -w zugeordneten Akkumulator 108 gelangen kann. Das besondere Partikel, das gerade durch den Sichtbereich der Durchflußküvette strömt und das Reaktionsprodukt trägt, betätigt somit einen der voreingestellten Zähler 86, 90 und 94, und dieser Zähler gibt nur das ihm zugeordnete Glied der Datentransferglieder frei, um die dem Reaktionsprodukt dieses Partikels entsprechende Binärzahl an der Leitung 120 in den zugeordneten Akkumulator 108 zu übertragen. Die Zeitspanne, während der dieses Datentransferglied durch die Multivibratorwirkung offengehalten bzw. im durchgeschalteten Zustand gehalten wird, ist kürzer als die Zeit, die zwischen dem Durchtreten von zwei aufeinanderfolgenden Partikeln durch den Lichtstrahl vergeht.

Die Arbeitsweise der in der Fig.3 dargestellten *5 Signalverarbeitungsanordnung geht somit augenscheinlich aus dem beschriebenen und gezeigten Aufbau hervor. So wirkt beispielswiese ein Teilchen oder Partikeln mit einer Größe von 10,0 μίτι, das vom Lichtstrahl getroffen den Sichtbereich 46 der Durch- so flußküvette durchströmt und eine besondere Menge des dunklen Präzipitats trägt, das in Obereinstimmung mit der beschriebenen Reaktion die interessierende Harnsäure anzeigen soll, gleichzeitig auf den Absorptionsdetektor 60 und den Streuungsdetektor 64 ein. Das verstärkte Streuungssignal an der Leitung 68 erregt die Vergleicher I und II, jedoch nicht die Vergleicher III und IV, da die verstärkte Spannung zwischen die Bezugsspannungen V2 und V 3 fällt. Die Vergleicher I und Il steuern daher die Multivibratoren 70 und 72 an, die M) daraufhin das NAND-Glied 80 durchschalten, so daß das Signal zur Leitung 88 gelangt. Das NAND-Glied 78 bleibt gesperrt bzw. geschlossen. Das Signal an der Leitung 88 aktiviert den Zähler 90, um das Partikel im Sichtbereich der Durchflußküvette zu registrieren. Der b^ voeingestellte Zähler 90 gibt dann über die Leitung 100 ein Signal an den Eingang des Datcntransferglieds 102 üb. Gleichzeitig wird das vom Absorpitionsdctektor 60 stammende verstärkte Absorptionssignal über die Leitung 116 dem Eingang des Analog/Digital-Umsetzers 118 zugeführt, der dieses Signal in Abhängigkeit von der Signalamplitude in eine Binärzahl umsetzt. Diese Binärzahl tritt an der Leitung 120 auf. Da durch das Streusignal das Datent^ansferglied 102 freigegeben bzw. geöffnet ist, kann die an der Leitung 120 liegende Binärzahl das Glied 102 passieren und zu dem an dieses Glied angeschlossenen Akkumulator 108 gelangen, um registriert zu werden. Der Akkumulator 108 wird von dem Mulitplexer 110, der den Drucker 112 ansteuert, abgetastet, um den Gesamtabsorptionswert des interessierenden Bestandteils auszudrucken, der den akkumulierten Zählwert von insgesamt 10 000 Partikeln der Größe von 10,0 μΐη darstellt. In entsprechender Weise werden die Partikeln mit der Größe von 5,0 μίτι und 15,0 μΐη von den Zählern 86 und 94 gezählt und dann die Gesamtabsorptionswerte der vollständigen Partikelzählungen für jede Partikelgröße durch den Drucker 112 ausgedruckt. Anstelle des hier beschriebenen Lichtabsorptionsverfahrens kann man zur Analyse der interessierenden Bestandteile auch ein Fluoreszenzverfahren anwenden.

Ein weiteres Beispiel einer mehrfachen Simultananalyse in einem gemeinsamen hydraulischen Kanal ist eine Analyse, bei der die interessierenden Bestandteile Glucose und Glycin sind und unterstellt wird, daß die Probe freies Wasserstoffperoxid enthält. Es werden drei verschiedene Arten von Partikeln mit Reagenzien benutzt, die in einer Lösung aus einem anderen Reagenz suspendiert sind, wie das zuletztgenannte Chromogen. Die eine Partikelart enthält als Reagenz Peroxidase, die andere enthält als Reagenzien Glucoseoxidase und Peroxidase und die dritte enthält als Reagenzien Glycinoxidase und Peroxidase. Die Reaktion der Glucose mit der Glucoseoxidase und die Reaktion des Glycin mit der Glycinoxidase ergeben beide Wasserstoffperoxid als Reaktionsprodukt.

Dieses Reaktionsprodukt und das freie Wasserstoffperoxid der Probe reagieren mit der Peroxidase von allen drei Partikelarten, um in unterschiedlichen Mengen an den Partikeln von allen drei Arten ein gemeinsames dunkles Präzipitat zu bilden. Da sich das bei den genannten Reaktionen gebildete Wasserstoffperoxid in dem Mikronahbereich der Partikeln der zweiten und dritten Art befindet, was bedeutet, daß die Wasserstoffperoxiderzeugung in Gegenwart der Peroxidase stattfindet, wird praktisch das gesamte Wasserstoffperoxidprodukt der Reaktionen in dunkles Präzipitat an den Partikeln umgesetzt. Die in die Lösung diffundierte Menge des erzeugten Wasserstoffperoxids ist so klein, daß sie gegenüber dem Gesamtvolumen der Lösung vernachlässigbar ist. Wenn man daher bei beendeter Zählung den Gesamtabsorptionswert der Partikelart, die als Reagenz nur Peroxidase enthält und damit das freie Wasseerstoffperoxid in der Probe angibt, von jedem der Gesamtabsorptionswerte der beiden anderen Partikclarten subtrahiert wird, erhält man als Subtraktionsergebnis wahre Absorptionswerte für die beiden interessierenden Bestandteile.

Wenn beispielsweise die Aktivität der En/ymamylase im Blut von Interesse ist, kann der in der Probe vorkommende Überschuß an Glycose, die die Reaktion der Rn/.yinamylase und ihre in der Reaktion vorhandenen Substrate stört, in nicht störende Substanzen aufgebrochen werden, indem man diese· Cilycosc mit Partikeln zur Reaktion bringt, die Glyeoseoxidase enthalten.

Kn/.yme, die für ähnliche Arten von Analysen als

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Reagenzien in den Partikeln benutzt werden, sind zur Bestimmung ihrer Inhibitoren wwi;sam, die beispielsweise in menschlichen Körpern vorhanden sind. Der Trypsininhibitor, der bei E.iphysemleiden abgeschwächt wirkt, ist für solche Krankheiten prognostisch Der _s Hyaluronidaseinhibitor wirkt bei besonderen Krankheiten verstärkt.

Das Verfahren und die Vorrichtung können für Reihen aus Antigenen oder Antikörpern verwendet werden. So kann man beispielsweise verschiedene Antigene mit jeweils denselben Proteinen, die kollektiv als Komplement bekannt sind, in verschiedene Partikelgrößen einbringen. Besondere Antikörper werden mit dem besonderen Antigen in der einen oder anderen Partikelgröße einen Komplex bilden. Dieser Komplex ,5 reagiert dann mit dem Komplemnt und aktiviert diesen infolge seiner Enzymfunktion. Allerdings aktivieren nicht alle Antikörper dasselbe Antigen. Andererseits sind zahlreiche Arten von Antikörper-Antigen-Komplexen bekannt, die dasselbe Komplement aktivieren. Das ·>ο Komplement enthält ein inaktives Enzym, das als Reagenz betrachtet wird. Die Partikeln sind in einer Lösung suspendiert, die beispielsweise Alphanaphthylacetat, ein Substrat für das Komplementenzym und einen Azokoppler enthält. Die verschiedenen Antigene vereinigen sich mit irgendwelchen der in der Probe vorhandenen besonderen Antikörpern und aktivieren in einer Kettenreaktion das Komplement, das in der Reagenzpartikeln enthalten ist, in denen ein Antigen Antikörper-Komplex ausgebildet wird. In der Gegen wart des aktivierten Enzyms dieser Partikeln wird da; Substrat Alphanaphthylacetat zerlegt, wobei Alpha naphthol entsteht, das mit dem Azokoppler reagiert, urr an den Partikeln, an denen die Antigen-Antikörper Komplexe ausgebildet wurden, ein zum Nachwei; dienendes wasserunlösliches Präzipitat zu erzeugen.

Bei dem beschriebenen Ausführungsbeispie! ist die Partikelgröße die Kenngröße, um bei der gleichzeitiger Vielfachanalyse in einem einzigen hydraulischen Kana verschiedene Arten von gleichzeitig anwesender Reagenzpartikeln voneinander zu unterscheiden. Untei Verwendung von geeigneten optischen und signalverar bettenden Einrichtungen kann man zum Unterscheider der verschiedenen Partikelarten auch andere Kenngrö Ben verwenden, beispielsweise die Farbe. Dazu kanr man eine Farbcodierung der verschiedenen Arten vor Reagenzparfikeln vornehmen.

Falls die Analyse lediglich für einen einziger interessierenden Bestandteil vorgenommen wird unc beispielsweise eine Farbreaktion umfaßt, kann da; Reaktionsprodukt ör Probe in bezug auf das benutzt« Mikrohalterreagenz oder die benutzten Reagenzier lösbar sein oder nicht. Im ersten Fall kann die Reaktior beispielsweise kolorimetrisch analysiert werden.

Hierzu 2 Blatt Zeichnungen

Claims

Patentansprüche:

1. Verfahren zum Analysieren einer flüssigen Probe auf einen Bestandteil, bei dem eine Menge in einer Flüssigkeit suspendierter, nicht miteinander verbundener Mikrohalter, von denen jeder ein Reagenz enthält, mit der Probenflüssigkeit vermengt und das in den Mikrohaltern enthaltene Reagenz mit der Probe zur Reaktion gebracht wird und bei dem ein aufgrund der Reaktion gebildetes Reaktionsprodukt ausgewertet wird, dadurch gekennzeichnet, daß die Mikrohalter, an denen sich ein in dem Flüssigkeitsgemisch unlöliches Reaktionsprodukt konzentriert, im suspendierten Zustand nacheinander durch einen Sichtbereich geleitet werden und daß das Reaktionsprodukt an den aufeinanderfolgend durch den Sichtbereich geleiteten Mikrohaltern optisch gemessen und daraus der Probenbestandteil quantitativ bestimmt wird.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Flüssigkeit, in der die Mikrolialter suspendiert sind, ein gelöstes Reagenz enthält, das von dem in den Mikrohaltern enthaltenen Reagenz verschieden ist.

3. Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die in der Flüssigkeit suspendierten Mikrohalter als Strom in einen kontinuierlich fließenden Probenstrom eingeleitet werden.

4. Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß das in den Mikrohaltern enthaltene Reagenz ein Enzym ist.

5. Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß mindestens einige der Mikrohaltsr mehrere Reagenzien enthalten.

6. Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß zürn Analysieren der Probe auf mehrere Bestandteile in Gegenwart voneinander mehrere Arten von Mikrohaltern verwendet werden, von dene>i jede Mikrohalterart ein anderes Reagenz für einen anderen der Bestandteile enthält und von den übrigen Mikrohalterarten durch ein feststellbares Kennmerkmal unterscheidbar ist, daß die verschiedenen Mikrohalterarten aufgrund ihrer verschiedenen Kennmerkmale voneinander unterschieden werden und daß zur quantitativen Bestimmung der verschiedenen Bestandteile die an den Mikrohaltern der verschiedenen Arten konzentrierten Reaktionsprodukte optisch gemessen werden.

7. Verfahren nach Anspruch ti, dadurch gekennzeichnet, daß die Mikrohalter mit den Reaktionsprodukten zur Unterscheidung der Mikrohalterarten und zum Messen der Reaktionsprodukte an den Mikrohaltern nacheinander als Strom durch einen Lichtstrahl geleitet werden, in dem die Mikrohalter aufeinanderfolgend bestrahlt werden, und daß jeder bestrahlte Mikrohalter zur Feststellung seines Kennmerkmals fotometrisch abgefühlt wird und gleichzeitig das Reaktionsprodukt von jedem Mikrohalter fotometrisch abgefühlt wird.

8. Verfahren nach Anspruch 6 und 7, dadurch gekennzeichnet, daß für eine selbe vorbestimmte Zahl von Mikrohaltern jeder Art das an den Mikrohaltern konzentrierte Reaktionsprodukt gemessen wird und daß die Meßergebnisse nach Art getrennt akkumuliert werden.

9. Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch eine erste Rohrleitung (10) zum Weiterleiten eines aus der flüssigen Probe gebildeten Stroms, durch eine zweite Rohrleitung (16) zum Weiterleiten eines aus den suspendierten Mikrohaltern gebildeten Stroms, durch eine mit entsprechenden Einlassen versehene, an die Auslässe der ersten und zweiten Rohrleitung angeschlossene dritte Rohrleitung (38, 42, 48) zum Weiterleiten der zusammengeführten und darin zur Reaktion gebrachten Ströme, durch einen in der dritten Rohrleitung vorgesehenen Sichtbereich (46) zum aufeinanderfolgenden Durchtritt der suspendierten Mikrohalter mit den daran konzentrierten Reaktionsprodukten und durch eine optische Einrichtung (50, 52, 54, 56, 58, 60) zum Messen des auf den aufeinanderfolgend durch den Sichtbereich tretenden Mikrohaltern konzentrierten Reaktionsprodukts und zur quantitativen Bestimmung des Probenbestandteils aufgrund des gemessenen Reaktionsprodukts.

10. Vorrichtung nach Anspruch 9, ausgebildet zur Durchführung des Verfahrens nach Anspruch 8, gekennzeichnet durch eine Einrichtung (50, 52, 54, 5t), 62, 64) zum optischen Unterscheiden der durch den Sichtbereich (46) tretenden verschiedenen Mikrohalterarten aufgrund ihrer unterscheidbaren Kennmerkmale und durch in der optischen Einrichtung (50, 52, 54, 56, 58, 60) zum Messen des Reaktionsprodukts vorgesehene Mittel zum Messen der an den Mikrohaltern der verschiedenen Arten konzentrierten Reaktionsprodukte und zur quantitativen Bestimmung der verschiedenen Probenbestandteile aufgrund der gemessenen Reaktionsprodukte.

11. Vorrichtung nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Einrichtung zum optischen Unterscheiden der verschiedenen Mikrohaiterarten mit dem Sichtbereich (46) zusammenarbeitende fotemetrische und logische Einrichtungen (50, 64, I, II, 111, IV, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 90,94, 98,102, 106, 108,110) zum Feststellen der unterschiedlichen Kennmerkmale der Mikrohalterarten enthält und daß die Einrichtung zum Messen der an den Mikrohaltern konzentrierten Reaktionsprodukte einen zwischen dem Sichtbereich (46) un die logische Einrichtung geschalteten Fotodetektor (60) enthält, der gleichzeitig während der Festellung des die Mikrohalterart betreffenden Kennmerkmals eines Mikrohalters ein Absorptionskennmerkmal dieses Mikrohalters registriert.

12. Vorrichtung nach Anspruch 10 oder 11, gekennzeichnet durch voreinstellbare Zähler (86,90, 94) zum getrennten Zählen von gleichen Anzahlen von Mikrohaltern der verschiedenen Arten und durch von den Zählern torgesteuerte Akkumulatoren (108) zum getrennten Aufsummieren der die Reaktionsprodukte der verschiedenen Mikrohalterarten darstellenden Meßsignale.