DE2338787A1

DE2338787A1 - Biologisch wirksame verbindungen und zubereitungen

Info

Publication number: DE2338787A1
Application number: DE19732338787
Authority: DE
Inventors: Geb Loan Irene Stirling; Hamish Christopher Swan P Wood
Original assignee: Wellcome Foundation Ltd
Current assignee: Wellcome Foundation Ltd
Priority date: 1972-08-01
Filing date: 1973-07-31
Publication date: 1974-02-14
Also published as: FR2194438A1; IL42858A0; HU171199B; ES442673A1; DK138019B; BE803090A; DK138019C; JPS4955692A; NL7310579A; SE407576B; AU5873273A; ES417415A1; US3963719A; CA1019736A; FR2194438B1; CH609985A5; ZA735210B; IL42858A; FI55662C; FI55662B

Description

DR. BERG DIPL.-ING. STAPF

PATENTANWÄLTE ■

8 MÖNCHEN 86, POSTFACH 860245 ..

cJob /87

Dr. Berg Dfpl.-Ing. Stapf, 8 München 86, P. O. Box 88 0245

Ihr Zeichen Unser Zeichen 8 MÖNCHEN 80 3 1. JULI 1973

Your ref. Our ref. MauerkircnerstivBe 45

Anwaltsakte 24 167
Be/Ro

The Wellcome Foundation Limited London / England

"Biologisch wirksame Verbindungen und Zubereitungen"

Die vorliegende Erfindung betrifft Pteridxnderivate, ihre Herstellung und pharmazeutische Formulierungen, die diese Derivate enthalten. Beschrieben werden weiterhin Zubereitungen und pharmazeutische Formulierungen, die diese Pteri dine in Kombinationen enthalten, die zur Behandlung von Mikrobeninfektionen brauchbar sind.

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Es ist bereits bekannt, daß die Verbindungen 2-Amino-4-hydroxy-6-hydroxymethyl-7.7-dimethyl-7. 8-dihydropteridin und 2-Amino-4-hydroxy-6-me thyl-7.7-dime thyl-7.8-dihydropteridin oder ihre Tautomeren oder pharmazeutisch verträglichen Salze bakteriostatische Wirksamkeit, im besonderen gegenüber Cl. perfringens und Derm, dermatonomous aufweisen, wie dies in den Beschreibungen der Britischen Patentschrift Nr. 1303171 und der Anmeldung Nr. 36289/70 (Belgische Patentschrift Nr. 770.577) beschrieben ist.

Es wurde nunmehr gefunden, daß die neuen Pteridine der allgemeinen Formel (I) oder ihre Tautomeren oder pharmazeutisch verträglichen Salze

worin R eine Niedrxgalkylgruppe ist, die gegebenenfalls mit einer Hydroxygruppe substituiert ist, und die Reste

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R und R gleich oder verschieden sind, und jeder der Reste, unabhängig voneinander, eine Niedrxgalkylgruppe ist, wobei sie zusammen wenigstens 3 Kohl ens to ff atome auf ^-

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weisen, oder die Reste R und R , zusammen mit dem Kohlenstoffatom in dem Pteridinring einen Spirocycloalkylring mit 4 bis 6 Kohlenstoffatomen außerhalb des Pteridinrings

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bilden, ebenso als Antagonieten des mikrobiellen Metabolismus brauchbar sind.

Wie hier verwendet und innerhalb der Beschreibung, ist unter der Bezeichnung "Niedrigalkylgruppe" eine gerade oder verzweigtkettige Alkylgruppe zu verstehen, die, es sei denn, daß dies anders angegeben ist, 1 bis 4 Kohlenstoffatome aufweist.

In der oben angegebenen allgemeinen Formel werden Verbindungen bevorzugt, worin R eine Hydroxyalkylgruppe, im besonderen eine Hydroxymethylgruppe' ist. Därüberhinaus wer-

₁ ρ dem

den solche Verbindungen, worin R und R , zusammen mit/kohlenstoffatom in dem Pteridinring eine Spirocyclohexylgruppe bilden, oder besonders solche Verbindungen, worin beide

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Reste R und R Alkylgruppen, im besonderen Athylgruppen sind, weiter bevorzugt. Es sind daher die Verbindungen 2-Amino-4-hydroxy-6-hydroxymethyl-7.7-diäthyl-7·8-dihydropteridin und weniger bevorzugt 2-Amino-4-hydroxy-6-hydroxymethyl-T-spirocyclohexyl-?.8-dihydropteridin besonders brauchbar zur Behandlung von Mikrobeninfektionen.

Die vorliegende Erfindung schafft daher in einer Hinsicht neue Verbindungen der Formel (I).

Die oben angegebenen Verbindungen und ihre Salze inhibieren eines der Enzyme, die bei der Biosynthese der Dihydrofölsäure, nämlich der Hydroxymethyldihydropteridin-Pyro-

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phosphokinase gebildet werden, die für das Wachstum yon Mikroorganismen, beispielsweise Bakterien, essentiell ist.

Sie können daher in pharmalcologischen Untersuchungen in vitro in klinischen und diagnostischen Untersuchungen, die beispielsweise die Eigenschaften von Bakterien betreffen, verwendet werden. Wenn sie als Bakteriostatika verwendet werden, können sie in einer Konzentration von 50 bis 500, im besonderen von 110 bis 180 mg Base/ml Lösung, in der der Organismus ohne eine Verbindung wächst, verwendet werden. Eine weitere Verwendung der Verbindungen, sofern sie sich in Lösung befinden, ist die Behandlung von Wunden, beispielsweise nach chirurgischen Eingriffen, zur Vermeidung von Bakterienwuehs. Darüberhinaus weisen die Verbindungen der Formel (I) und ihre Salze unerwartet niedere Toxizität bei Säugern und Vögeln, z.B. bei Geflügel, auf, wodurch sie beson- -

ders geeignet sind zur Verabfolgung gegen Mikrobeninfektionen bei solchen Wirten unter den nachfolgend noch be- j

j schriebenen Umständen. :

i j Tetrahydrofolat-Kofaktoren sind wesentliche Metabolite in allen Zellen für die Biosynthese von Purinen, Thymidylsäure, Serin und verschiedene andere biologisch bedeutende Verbindungen. Die meisten dieser Kofaktoren sind Ein-Kohlenstoffaddukte von Tetrahydrofölsäure. Die lebensnotwendige Quelle aller dieser Verbindungen für höhere Tiere und Menschen ist die Nahrung, die vorgebildete Polate gewöhnlich in Form von Vitaminen enthält.

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In Mikroorganismen werden die Kofaktoren aus einfacheren chemischen Verbindungen hergestellt. Im allgemeinen wird bei dem bio-synthetischen Verfahren zunächst "Dihydropteridin" (Pt), d.h. 2-Amino-4-hydroxy-6-hydro:xymethyl-7.8-dihydropteridin-(HMPt)-pyrophosphatester aus seinem unmittelbaren Prekursor HMPt in Gegenwart des Enzyms Hydroxymethyldihydropteridin-Pyrophosphokinase (HMPPS) gebildet. Pt kondensiert dann mit p-Aminobenzoesäure (pAB) in Gegenwart der Enzym-Dihydropteroatsynthetase unter Bildung von Dihydropteroinsäure (DPtA). Dieses Zwischenprodukt kondensiert weiter mit einem Glutamat unter Bildung von Dihydrofolsäure (DFA oder "Folat"), die dann unter Bildung des essentiellen Tetrahydrofolats in beispielsweise Bakterien und anderen Mikroorganismen enzymatisch reduziert wird.

Es ist bekannt, daß die Bildung des "lOlats" aus den Bausteinen, das heißt Pteridin, pAB, und Glutamat, und die weitere Umwandlung des Polats in das letrahydrofolat in zweierleiweise inhibiert werden kann«, Beispielsweise verdrängen Sulfonamide pAB in dem oben angegebenen Reaktionsablauf. Wegen ihrer engen strukturellen Ähnliohkeit mit pAB treten die Sulfonamide oder ähnliche andere "Kompetitoren" in die Biosynthese ein und verhindern die Bildung von DPtA und DI¹A, und wirken daher als Antimetabolite für den Metabolit pAB. Es ist weiterhin bekannt, daß Verbindungen, die "Inhibitoren" der Enzymdihydrofolsäure-Eeduk-

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tase sind, die synthetische Stufe "blockieren, die zu dem Tetrahydrofolat führt. Eine beträchtliche Anzahl der Pyrimidinderivate zeigen wesentliche antimikrobielle Eigenschaften auf der Grundlage einer solchen Sperrwirkung.

Es wurde später festgestellt, daß solche Inhibitoren synergistisch mit Sulfonamiden wirken können, d.h. daß eine als Folge auftretende doppelte Blockierung und eine starke wechselseitige Potenzierung der antibakteriellen Wirkungen der beiden Materialien eintreten kann. Der Bereich der durch solche Kombinationen ausgeübten antimikrobiellen Wirkung ist beträchtlich größer als er aus der Aktivität von einer der Drogen erwartet werden dürfte, und Organismen, die nur gering gegen die einzelnen Mittel empfindlich sind, werden, bzw. sind gegenüber diesen Kombinationen hoch empfindlich.

Es wurde weiterhin hypothetisch angenommen, daß Antimetabolite zu Pt die Biosynthese von DPtA (und DPA) (siehe Hitehings and Burchall Advances in Enzymology, 27, 417-468 (1965)) inhibieren könnten, aber soweit Verbindungen in dieser Hinsicht untersucht wurden, waren sie enttäuschend und entweder inaktiv oder zu toxisch oder mitunter beides (siehe die in der Britischen Patentschrift 981.506 und 987.916 beschriebenen Verbindungen).

Es wurde weiterhin festgestellt, daß es für antimikrobielle Zwecke für den wirksamen Antagonismus von Pt eine Vorbe-

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dingung ist, daß die Verbindung ein Inhibitor für HMPPS sein sollte, ohne daß sie ebenso als Antimetabolit zu dem Dihydropteridin wirkt, das als Kofaktor für die-Hydroxylierung von Phenylalanin und Tyrosin dient, die Prekursoren der Catecholamine, wie Norepinephrin, sind, und die bedeutende Wirkungen als Regulatoren des kardiovaskulären Systems haben. Eine solche antimetabolische Wirkung könnte zu einer prohioitiven Toxizität. bei Vögel- oder Säugerspecies führen, die normalerweise mit den Mikroben infizierte flirte sind.

Es wurde nunmehr gefunden, daß Verbindungen der Formel (I) und ihre Salze, den oben angegebenen Erfordernissen entsprechen, d.h. HMPPS inhibieren unter gleichzeitiger geringer Toxizität gegenüber der Wirtspecies, wie dies bei- ■ spielsw,eise bei Küken und Ratten gezeigt werden kann. Es wurde festgestellt, daß diese Verbindungen nicht nur das Wachstum von Mikroorganismen als solches inhibieren, obgleich dies in einem beschränkten Ausmaß bei bestimmten Bakterien, wie Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus faecalis, Escherichia coli, Salmonella typhi, Proteus vulgaris, Pseudomonas aerugenosa, Pasteurella multocida unter anderen geschieht, sondern daß sie mit einem höchst bemerkenswerten synergistischen Ergebnis wirken, wenn sie mit einem Kompetitor der p-Aminobenzoesäure, d.h. SuI-phonamiden und ähnlichen Verbindungen, oder mit selektiven Inhibitoren der Dihydrofolreduktase, d.h. Pyrimidinen und

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verwandten Verbindungen, oder mit einer Kombination dieser beiden Arten antimikrobieller Mittel kombiniert eingesetzt werden. Diese potenzierende Wirkung dieser Verbindungen der Formel (I) ist Gegenstand der gleichzeitig anhängigen in sachlichem Zusammenhang stehenden Britischen Patentanmeldung Nr. 36774/71.

In dieser Anmeldung ist eine Zubereitung der Untersuchung und Behandlung von Mikrobensystemen oder -infektionen beschrieben, die eine wirksame potenzierende Menge einer Verbindung der 3?ormel (I) zusammen mit einer wirksamen Menge eines !Competitors und/oder Inhibitors, wie vorausgehend definiert, enthält.

Die Mikrobeninfektionen, gegen die diese Kombinationen wirksam sind, sind Infektionen von Protozoen oder Bakterien, die durch solche Mikroorganismen verursacht sind, die wenigstens einen wesentlichen Teil ihres Tetrahydrofolat-Kofaktorbedarfs bilden. Im besonderen sind diese infizierenden Mikroorganismen solche, die ausreichend die hier beschriebenen pharmazeutischen Kombinationen absorbieren, und in denen diese Kombinationen eine synergistische Wirkung in der Weise ausüben, daß sie die de novo Synthese der benötigten Tetrahydrofolat-Kofaktoren beeinträchtigen, bzw. unterbinden. So wurde beispielsweise festgestellt, daß die beschriebenen Zubereitungen zur Behandlung von Staphylococcus aureus, Pseudomonas aerugenosa und Pasteurella multocida

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verursachte Infektionen geeignet sind.

Es wurde im besonderen gefunden, daß, wenn Verbindungen der Formel (I) mit einer Menge des !Competitors und/oder Inhibitors kombiniert werden, die als solche gewöhnlich nicht ausreichend ist, als antimikrobielles Mittel wirksam zu sein, die Kombination einer Verbindung der Formel (I) mit dieser normalerweise nicht wirksamen Menge des Kompetitors und/oder Inhibitors eine Zubereitung bildet, die in ihrer Gesamtheit als wirksames Mittel gegen Mikroben wirkt. Dies ist besonders dann von Bedeutung, wenn die Menge der Verbindung der Formel (I) so gering ist, daß sie im wesentlichen bei der gegebenen Menge keine Mikrobenwirkung hat, aber in der Kombination eine Potenzierung eintritt, die in manchen Fällen sehr markant ist. Es ist daher unter Verwendung einer wirksamen potenzierenden Menge einer Verbindung der Formel (I) zusammen mit dem Kompetitor und/oder Inhibitor möglich, die Menge des Kompetitors und/oder Inhibitors, die zur Inhibierung des Wachstums dieser Bakterien erforderlich ist, wesentlich zu verringern.

Entsprechend der vorausgehenden Ausführungen bedeutet die Bezeichnung "eine wirksame Menge", soweit sie in Verbindung mit den Bezeichnungen Dihydrofolsäure-ßeduktase-"Inhibitor" und para-Aminobenzoesäure-"Kompetitor" verwendet wird, entweder (a) eine Menge "Inhibitor" oder "Kompetitor", die bei einem gewissen Grad als Mittel gegen Mikroben als solche

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wirksam ist, die aber durch die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) potenziert wird, oder (b) eine Menge "Inhibitor" oder "Kompetitor", die als Mittel gegen Mikroben als solche nicht wirksam ist, die aber wenn sie mit einer Verbindung der Formel (I) kombiniert wird, eine Zubereitung bildet, die ein wirksames Mittel gegen Mikroben ist. Unter einer "wirksamen potenzierenden Menge" ist eine Menge der Verbindung der Formel (I) zu verstehen, die die Wirksamkeit eines Inhibitors und/oder Kompetitors so erhöht, daß eine verbesserte oder ausreichende Wirksamkeit für die gesamte Kombination erreicht wird.

Es sollte darauf hingewiesen werden, daß die auf diese Weise erreichte Inhibierung des biοsynthetischen Verfahrens als kompetiver Antagonismus in allen drei Fällen bezeichnet werden könnte, und daß man von einer Potenzierung zwischen allen diesen drei Arten von Mitteln sprechen könnte. Die Bezeichnungen^Inhibitor", "Kompetitor" und "Potenzierung" durch eine Verbindung der Formel (I), sind willkürlich und sollen nur dazu dienen, als geeignete Bezeichnungen für die entsprechenden Arten der Komponenten in den Kombinationsprodukten, die in der Beschreibung der voraus bezeichneten gleichzeitig anhängigen Anmeldung beschrieben sind, zu dienen.

Die Inhibierungswirksamkeit gegen HMPPS einer ausgewählten Verbindung der Formel (I), kann beispielsweise dadurch ge-

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prüft werden, daß man die Überführung des endständigen Phosphats von Adenosintriphosphat ATP-T-P zu "Dihydropteridin" untersucht. Es wurde festgestellt, daß die Konzentrationen, die zur 5Obigen Inhibierung der Bildung von Pt (ΙΟ™) bei solchen Untersuchungen erforderlich sind, in guter Wechselwirkung und innerhalb der Fehlergrenzen liegen, die man bei anderen entsprechenden Untersuchungen in dieser Hinsicht erhält, wobei man als Maßstab die Inhibierung von jedem der beiden Enzyme wählt, die zur Bildung von KVIPt und DPtA führen. Eine solche Inhibierung kann beispielsweise leicht und einfach in der Weise durchgeführt werden, daß man einen Extrakt von E. coli mit pAB-7-0 , ATP, Mg und "Dihydropteridin" bebrütet. Die Bildung des . Dihydr.opteroats-C kann durch quantitative Analyse nach Abtrennen des nicht umgesetzten pAB-Substrats, beispielsweise mittels Chromatographie nachgewiesen werden. Es wurde festgestellt, daß Verbindungen, die bei solchen Untersuchungen einen ICp-Q-Wert von etwa 100/uM oder weniger, gewöhnlich unter 50/uM aufweisen, Verbindungen sind, die eine brauchbare potenzierende Wirkung aufweisen, vorausgesetzt, daß ihre Toxizität in den entsprechenden Vertebraten annehmbar ist. Vorzugsweise liegt der V/ert bei 25 /uM oder weniger, wie im Bereich zwischen 2 bis 12/uM.' Im allgemeinen ist ein Wert unter 7/uM wünschenswert.

Wie oben ausgeführt, ist es für den hier beschriebenen Zweck wesentlich, daß die Verbindung der Formel (I) keine

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— I c."~

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prohibitive Toxizität gegen die cardiovaskulären Systeme der Sauger- und Vogelwirte aufweist. Während eine geringe Toxizität daher eine wesentliche Voraussetzung ist, beinhaltet ein therapeutischer Index sowohl die Werte der Wirksamkeit als auch Toxizität entsprechend der vorliegenden Beschreibung und er kann daher vorteilhaft zur Auswahl der potenzierenden Verbindungen der Formel (I) verwendet werden.

Der therapeutische Index ist als das Verhältnis der maximal tolerierten Dosis zu der minimal wirksamen Dosis definiert und ist in den meisten Fällen größer als 10, geeigneterweise wenigstens 5, und in außergewöhnlichen Fällen wenigstens etwa 3 bei Menschen, jedoch möglicherweise so nieder wie 2 bei Tieren.

Obgleich viele Verbindungen dem Fachmann als Kompetitoren der para-Aminobenzoesäure bekannt sind und Mittel gegen Mikroben sind, werden hier die Schwefelverbindungen, die als Mittel gegen Mikroben von der Seite 994 oben bis zur Seite 1007 im Merck Index, 8. Ausgabe, 1968, veröffentlicht sind, hier nur in beispielhafterweise angegeben.

Von den bekannten Verbindungen, die Kompetitoren sind, werden die folgenden SuIfonamidverbindungen (oder ihre pharmazeutisch verträglichen Salze) für die hier beschriebenen Zwecke bevorzugt:
Sulfanilamid, Sulfadiazin, SuIfamethisazoi, üulfamethizol,

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~ ¹³ -

Sulfapyridin, Sulfathiazol, SuIfamerazin, SuIfamethazin, Sulfisoxazol, Sulfadoxin, Sulfasomidin, Sulfachlorpyridazin, 2-(p-Aminobenzol)-sulfonamido-3-methoxypyrazin(Kelfizina), of-Amino-p-toluolsulfonamid, 5-Sulfanilamido-2.4-dimethylpyrimidin, 4-(N^f -Acetylsulfanilamido)-5 < > 6-dimethoxypyrimidin, 3-Sulfanilamido-4.5-dimethylisoxazol, 4-Sulfanilairido-5-methoxy-6-decyloxypyrimidin, SuIf autonome thoxin, 4-p-(8-Hydroxy-ehinilinyl-4-azo)-phenylsulfanilamido-5, 6-Dimethoxypyrimidin, Sulfadimethoxin, SuIfametiioxazol, Sulfaohinoxalin und p-(2-Methyl-8-hydroxy-chinolinyl)-(5)-azo)phenylsulfanilamido-5.6-dimetiioxypyrimidin. Beispiele für einen !Competitor des Nioht-Sulfonamidtyps sind p-Aminosalicylsäure (TAS) und pep'-Diaminodiphenylsulfon.

Obgleich viele Verbindungen bekannt sind, die die Dihydrofolsäure-Reduktase inhibieren und als Mittel gegen Mikroben wirken, werden in gleicher Weise die in den folgenden Patentschriften beschriebenen Verbindungen als Beispiele für Verbindungen benannt, die zur Verwendung für den hier beschriebenen Zweck geeignet sind.

US-Patentschriften Nrn. 2658.897, 2.767.183, 3.021.332, 2.937.284, 3.322.765, 2.909.522, 2„624.732, 2.579.259, 2.945.859, 2o576.939, 2.926.166, 2.697-710, 2.749.345 und 2.749.344.

Es werden jedoch die folgenden Inhibitoren (oder ihre pharmazeutisch verträglichen Salze) für die beschriebenen Kom-409807/1143 __u_

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binationen bevorzugt:

2.4-Diamino-6-äthyl-5-p-chlorphenylpyrimidin (Pyrimethamin), 2,4-Diamino-5--(3^l4^l ,5 '-Trimethoxybenzyl)-pyrimidin (Trimethoprim) , 2„4-Diamino-5-(3'4'-dimethoxybenzyl)-pyrimidin (Diaveridin), 2.4-Diajmino-5-(2^l-Isopropyl-4'-chlorphenoxy)-pyrimidin, 2.4-DiaMno-5-methyl-6-sec-butylpyrido-(2,3-d)-pyrimidin, 2.4-Diamino-5-methyl-6-benzylpyrido(2,3-d)-pyrimidin, 2.4-Diamino-6-benzylpyrido(2,3-d)-pyrimidin, 2.4-Diamino-5-6-trimethylen-chinazolin, 2·4-Diamino-5·S-tetramethylenchinazolin, 2.4-Diamino-5-(2',4'5'-trimethoxybenzyl)-pyrimidin, 2o4-Diamino-5-(2'-äthyl-4^l,5-dimethoxybenzyl)-pyrimidin, 2.4-Diamino-5-(2'-methyl-4',5'-dimethoxybenzyl)-pyrimidin.

Jedoch gehören zu den insbesondere bevorzugten Kombinationen solche, bei denen eine Verbindung der Formel (I), besonders eine solche, worin R eine Hydroxymethylgruppe ist, und bei-

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de Reste R und R Athylgruppen sind, mit Sulfadiazin, SuI-famethoxazol, Sulfadoxin oder Sulfachinoxalin als Kompetitoren oder mit Trimethoprim, Diaveridin oder Pyrimethamin als Inhibitoren kombiniert wird. Im Hinblick auf mögliche synergistische Vorteile bei der Verwendung bestimmter Kompetitoren und Inhibitoren in Kombination gegen besondere Krankheiten, und im Hinblick auf die potenzierende Wirkung von Verbindungen der formel (I) bei diesen beiden Arten von antibakteriellen Verbindungen, wird es bevorzugt, Dreierkombinationen zu formulieren, die eine Verbindung der Por-

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mel (I) mit einem der oben erwähnten bevorzugten Kompetitoren, und einem der erwähnten Inhibitoren, enthalten. Beispielsweise liefern Kombinationen von Sulfadiazin/Trimethoprim, Sulfajnethoxazol/Trimethoprim, Sulfadoxin/Trimethoprim oder Sulfachinoxalin/Diaveridin, jede zusammen mit einer Verbindung der Formel (I), verbesserte Wirksamkeit im Vergleich zu der alleinigen oder paarweisen Verwendung der Komponenten.

Die Verbindungen der Formel (I) können entweder allein oder zusammen mit dem Kompetitor und/oder Inhibitor, zusammen mit einem Träger, in pharmazeutischen Formulierungen dargeboten werden, die zur parenteralen, örtlichen, rektalen oder oralen Verabfolgung geeignet sind. Me Formulierungen zur oralen oder rektalen Verabfolgung werden vorteilhafterweise in getrennten Einheiten, wie Tabletten, Kapseln, Gachetten, Ampullen oder Suppositorien dargeboten, wobei jede Einheit eine vorausbestimmte Menge jeder Verbindung enthält, können aber auch als Pulver, als Granulate, als Lösung oder Suspension in einer wäßrigen oder nicht-wäßrigen Flüssigkeit oder als Salbe oder Paste zur örtlichen Verabfolgung dargeboten werden. Zur parenteralen Verwendung müssen die Formulierungen, die einen wäßrigen oder nioht-wäßrigen, flüssigen Träger beinhalten, steril sein und in verschlossenen Behältern dargeboten werden. Die Formulierungen können nach irgendeinem der bekannten Verfahren hergestellt werden und sie können einen oder mehrere der nachfolgenden zusätzlichen

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Bestandteile enthalten:

Verdünnungsmittel, Streckmittel, gelöste Stoffe, die die Lösung mit dem Blut isotonisch machen, Puffer, Geschmackstoffe, Bindemittel, Dispergierungsmittel, oberflächenaktive Mittel, Eindickmittel, Gleitmittel und Beschichtungsmaterialien, Konservierungsmittel, Bakteriostatika, Antioxidationsmittel, Suppositorien- und Salbengrundlagen und irgendwelche weitere annehmbare Excipienten.

In weiterer Hinsicht betrifft daher die vorliegende Erfindung eine pharmazeutische Formulierung, die eine Verbindung der Formel (I) zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger enthält. In weiterer Hinsicht betrifft die vorliegende Erfindung aber auch ein Verfahren zur Herstellung einer pharmazeutischen Formulierung, wozu man die Verbindung der Formel (I) mit einem Träger mittels bekannter Verfahren mischt. In der Beschreibung der obenerwähnten gleichzeitig anhängigen Patentanmeldung ist weiterhin eine pharmazeutische Formulierung beschrieben, die eine Zubereitung wie vorausgehend definiert, zusammen mit einem Träger enthält, sowie ein Verfahren zu deren Herstellung,, wozu man die Zubereitung mit dem Träger mittels bekannter Verfahren mischt»

Formulierungen, die die Verbindung der Formel (I) zusammen mit einem Kompetitor oder einem Inhibitor enthalten, können ebenso in Form einer Ausrüstung dargeboten werden, die getrennt verpackte Einheiten oder Dosierungen dieser Komponen-

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ten mit Hinweisen für ihre Verwendung in kombinierter Form enthält. Die Hinweise können ebenso die Art und Weise der Verabfolgung und Indikationen angeben, für welche die IOrmulierung geeignet ist.

Me Verbindungen der Formel (I) können entweder zur alleinigen Verwendung oder zusammen mit einem !Competitor und/oder Inhibitor und ebenso die Kompetitoren und Inhibitoren in Form ihrer pharmazeutisch verträglichen Salze von einem Mineral oder organischen Säuren, beispielsweise Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Essigsäure, Zitronensäure, Apfelsäure, Milchsäure, Maleinsäure oder Salicylsäure, oder besonders der Sulfonamidkompetitor als Salze einer Base, wie Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Tetramethylammoniumhydroxid oder Ammoniak dargeboten werden.

Die Verhältnisse, in denen die therapeutisch wirksamen Verbindungen der Formel (I) in den in dieser Beschreibung beschriebenen Zubereitungen verwendet werden, kann in weiten Grenzen variieren. Abhängig von der Natur und den umständen der Verwendung, können die Zubereitungen dfe Verbindung der Formel (I) zusammen mit dem !Competitor und/oder dem Inhibitor in geeigneten Anteilen und Dosierungen enthalten.

der
Beispielsweise ist es im Falle/in vivo Verwendung oftmals wünschenswert, einen bestimmten Anteil der Komponenten in dem Blutserum oder den Gewebeflüssigkeiten, vorzugsweise längere Zeit beizubehalten. Abhängig von den verschiedenen

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Absorptions-, Abbau- oder Zerfallsgeschwindigkeiten der Komponenten, können die Anfangsmengen und Anteile der Bestandteile der Formulierung unterschiedlich sein von denen, wie man sie in den Geweben in vivo wünscht. Die Formulierungen und Dosierungen, die für die allgemeine Behandlung einer besonderen menschlichen oder tierischen Erkrankung empfohlen werden, müssen entsprechend den jeweiligen Erfordernissen der Patienten, der bekannten Aktivitäten der Kompetitor- oder xnhibitorkomponenten gegen den causativen Organismus nach der chemischen Halbwertszeit und der Toxizität der Komponenten in vivo und anderen praktischen Gegebenheiten bzw. Forderungen eingestellt werden.

Beispielsweise kann die Zubereitung oder pharmazeutische Formulierung von etwa 1 bis 30 Gewichtsteile, vorzugsweise 5 bis 15 Teile der Verbindung der Formel (I) oder eine äquivalente Menge ihres Salzes und 1 bis 30 Teile, vorzugsweise 5 bis 15 Teile einen Kompetitor oder eine äquivalente Menge seines Salzes, und/oder einen Teil Inhibitor oder eine äquivalente Menge seines Salzes enthalten.

Die Dosierung wird abhängig sein von dem infizierenden Organismus, wobei jedoch unter gewöhnlichen Umständen bis zu etwa 60 mg/kg jeweils eine Verbindung der Formel (I) und Kompetitor, und bis zu etwa 7_f5 mg/kg Inhibitor zusammen täglich in mehreren Dosen verabfolgt werden können. Die Zubereitung oder pharmazeutische Formulierung kann Menschen-

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Patienten in Dosierungseinheiten verabfolgt werden, die "bis zu 750 mg der Verbindung der Formel (I) und bis zu 750 mg !Competitor und/oder bis zu 25 mg Inhibitor enthalten.

Vorzugsweise sollte bei Dosierungen für Erwachsene die Menge der Verbindung der Formel (I) etwa 200 mg, die des Kompetitors etwa 200 mg und/oder die des Inhibitors etwa 25 mg

betragen.

Die pharmazeutische Formulierung, die die Verbindung der Formel (i) zusammen mit dem Kompetitor und/oder Inhibitor enthält, kann ebenso in Lösung zum Spülen von Wunden, beispielsweise nach chirurgischen Eingriffen verwendet werden, um auf diese Weise das V/achsen von Bakterien zu verhindern* Beispielsweise kann eine antibakterielle Lösung mit der ■ nachfolgenden bevorzugten Konzentration der Komponenten verwendet v/erden:

1-30 mg/ml Verbindung der Formel (I), ,1 - 30 mg/ml Kompetitor und/oder 0,03 - 1 mg/ml Inhibitor in einem pharmazeutisch verträglichen Lösungsmittel, das zur äußeren Anwendung geeignet ist.

Die potenzierende Wirkung der Verbindungen der Formel (I) kann in vitro relativ leicht für Untersuchungen für praktische Zwecke demonstriert und verwendet werden. Zu solchen Möglichkeiten gehören Diagnose und Identifizierung der bakteriellen Flora der Individuen und die nachfolgende Auswahl der klinischen Behandlungsschemen.

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Die verschiedenen Kombinationen können in poröse Scheiben (wie Filterpapierscheiben) oder in Agar-Nährmitteln oder anderen Medien für den bakteriellen Wuchs zur Bestimmung der Empfindlichkeit bzw. Aufnahmebereitschaft eingebracht werden. Solche Artikel, in die die Verbindung der Formel (I) mit einer !Competitor- und/oder Inhibitorverbindung eingebracht ist, können an Ärzte, Krankenhäuser und Kliniken für die oben angegebenen Zwecke verteilt werden. Eine typische Untersuchungsscheibe kann mit einer Lösung imprägniert werden, die 5 bis 50/ug/ml einen para-Aminobenzoesäurekompetitor, 0,5 bis 5/ug/ml einen Dihydrofolsäure-Reduktaseinhibitor, und etwa 10 bis 100/Ug/ml eine Verbindung der Formel (I) in einem Medium enthält, was ein Gemisch einer wäßrigen Infusion und Papaindigest von Pferdemuskeln enthält.

Weiterhin können solche pharmakologisehen Untersuchungen, die potenzierte Kompetitoren oder Inhibitoren betreffen, ebenso brauchbar sein zur Charakterisierung von Bakterien entsprechend ihrer Empfindlichkeit bzw. Aufnähmebereitschaft und ihrer besonderen Widerstandsfähigkeit, beispielsweise gegenüber einem Kompetitor, wenn dieser allein verwendet wird, und solche Untersuchungen, die eine Vielzahl von Formulierungen, wie hier beschrieben, erforderlich machen, bilden ebenso die Basis zur Bestimmung der Zubereitungen ausgewählter Formulierungen für allgemeine Behandlungszwecke. Die Toxizität der Verbindungen der Formel

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(I) ist im allgemeinen beträchtlich geringer als die der üblicherweise verwendeten Kompetitoren oder Inhibitoren, wodurch es für den Kliniker möglich wird, die Wirksamkeit der antibakteriellen Aktivität der .Formulierung, unter gleichzeitiger Erhöhung des therapeutischen Verhältnisses oder Senken der toxischen oder Nebenwirkungen des Medikaments, beizubehalten oder zu erhöhen.

Weiterhin wurde festgestellt, daß die oben angegebenen Verbindungen der Formel (I) die Wirksamkeit der vorausbezeichneten Kompetitoren und/oder Inhibitoren potenzieren gegenüber Infektionen mit Mikroorganismen bei Haustieren, einschließlich Geflügel, beispielsweise gegenüber Pasteurella multocida, jjedoch besonders gegenüber, durch Protozoen verursaohte Kokzidiose. Solche Dreierformulierungen, die eine Verbindung der Formel (I) zusammen mit einer Verbindung, wie Sulfaohinoxalin und einen Inhibitor, wie Diaveridin, enthalten, sind in geringeren Konzentrationen wirksam als die Kompetitor- oder Inhibitorkomponenten allein und besitzen eine erhöhte Wirksamkeit, wobei sie gegen alle relevanten Eimeria-Species wirksam sind, die diese Erkrankung bei Geflügel verursachen.

Die Verbindungen der Formel (I) können dadurch hergestellt werden, daß man eine Verbindung der Formel (II) reduktiv cyclisiert,

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(H)

(D

worin die Reste R, R¹ und H die oben definierte Bedeutung haben, und Z ein Keton-Sauerstoffatom oder eine hierfür vorgesehene Schutzgruppe, wie eine Semicarbazongruppe oder eine Oximgruppe ist, wobei die Verbindung der Formel (II) nach Verfahren hergestellt wird, wie sie von Pfleiderer und Zondler (Ohem. Ber. 99, 3008 (1966)) und in den Beschreibungen der Britischen Patentschrift Nr. 1303171 und der gleichzeitig anhängigen Britischen Patentanmeldung Nr. 36289/70 (Belgische Patentschrift Nr. 770.577) beschrieben sind«

Das in der Patentanmeldung Nr. 36289/70 beschriebene Verfahren wird jedoch besonders bevorzugt,

1 2 In diesem Verfahren unterwirft man eine Verbindung RRO=

CHR (VI), worin R, R¹ und R² die oben definierte Bedeutung haben, einer AdditionsreaJction mit ainem nitrosylhalogenide das in situ hergestellt ist, und wandelt dann das erhaltene Nitrosohalogenid (V) in das Oxim (IV) durch Umsetzung mit

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Ammoniaklösung um. Durch Umsetzung des Oxims (IV) mit einem 2-Amino-4-halogen-6-hydroxy-5-nitropyrimidin (III) erhält man das Pyrimxdinketoxim (II), das man"dann reduktiv unter Bildung des Pteridin (I) cyclisiert, wie dies in dem folgenden Reaktionsablauf dargestellt ist«

R¹ R^{1 N0} ρ¹

\ \ I \ Il

^C=CH.R NOHaI ^G-CH.R NH,/ Q-O-R R ΈΓ Hal MeOH R^ NH₃+ HaI-

(VI) (V) (IV)

(III) " (II)

Die Verbindung der Formel (VI), worin R eine Hydroxyalkylgruppe ist, kann ihrerseits aus dem Keton R R 0=0 (IX), dadurch hergestellt werden, daß man dieses Keton mit einem Trialkylphosphonoester (VIII) umsetzt, und den so gebildeten Ester (VII) unter Bildung des Alkohols (VI) reduziert.

-24-409807/1 U3

NaH

^G6^H6

(IX)

(YIII)

233878?

O=O + (Alk O)₂.P.CH₂.CO₂AIk
₅2X " _π2

C=CH-CO₂AIk

(VII)

LiAlH,

C=CH.CH₂OH

(VI)

1 2

Wenn man ein Pteridin, bei dem die Reste R und R unterschiedliche Substituenten sind, wünscht, wird man dann ein racemisch.es Gemisch der "beiden Stereoisomeren des Nitrosohalogenids (Y) im Hinblick auf das vorhandene asymetrische Kohlenstoffatom erhalten. Die Trennung der beiden Isomeren mittels herkömmlicher,dem Fachmann bekannter. Verfahren, kann bei dieser Stufe vorteilhaft sein.

Die vorliegende Erfindung betrifft daher in weiterer Hinsicht ί

1) Die hier beschriebenen Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I) mittels wirksamer reduktiver Cyclisierung der Verbindungen der Formel (II).

-25-

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2) Die hier beschriebenen Verfahren zur Herstellung irgendeiner der Verbindungen der Formel (II), worin Z eine Oximgruppe ist, aus Verbindungen (IV), (IV) aus (V) oder (VI) und (VI) aus (IX).

3) Verbindungen der Formel (I), (II), sofern Z eine Oximgruppe ist, (IV) und (V), sofern sie nach einem Verfahren, wie es unter (1) oder (2) definiert ist, hergestellt sind.

4) Als neue wertvolle Verbindungen chemische Zwischenprodukte i Nämlich die Verbindungen der Formel (II), (IV) und (V), und

5) eine pharmazeutische Formulierung, die eine Verbindung der Formel (I) oder ein Salz derselben zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger enthält, sofern sie
nach dem hier beschriebenen Verfahren hergestellt ist.

Die nachfolgenden Beispiele erläutern die Erfindung, ohne den Erfindungsbereich einzuschränken.

Die Temperaturen sind in Grad Celsius angegeben.

Beispiel A* Herstellung von 2-Amino-4-hydro3:y-6-hydroxy-methyl-7.7-

diäthyl-7.8-dihydropteridin (I,R=OH₂OH| R¹=R²=A't)

Beispiel 1

Äthyl-3-äthylpent-2-enoat (VII) (R¹=R²=A*t)

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Man gibt Natriumhydrid (6 g) in einen Kolben mit mittels Natrium getrocknetem Benzol (100 ml) und spült den Kolben mit Sauerstoff-freiem, trockenem Stickstoff. Zu dieser Lösung gibt man Triäthylphosphonacetat (VIII) (AIk=At) (61,7g) in leichtem Überschuß während 1,5 h und hält während der Zugabe die (Temperatur bei <15°C Das Gemisch rührt man bei dieser Temperatur eine weitere Stunde und behandelt es dann tropfenweise mit Pentan-3-on (IX), (R¹=R²=Ät) (21,5 g). Nach beendeter Zugabe des Ketons wurde das Reaktionsgemisch bei Raumtemperatur gerührt, bis das feste Natriumdiäthylphosphat sich niedergeschlagen hat (ungefähr 10 h). Die Mutterlauge dekantiert man von dem Feststoff, den man mit Benzol (4 x 25 ml) wäscht. Die Benzolextrakte gibt man zusammen und verdampft sie unter Vakuum unter Bildung eines blaßgelben Öls (29 g), das unter Vakuum destilliert Äthyl-3-äthylpent-2-enoat (VII) (21,8 g, Ausbeute 5696) als farbloses öl, Siedepunkt 52 - 54°0/4 Torr liefert.

Beispiel 2(a)

S-Äthylpent-a-en-i-ol.(VI)(R¹=R²=Ät)

Äthyl-3-äthylpent-2-enoat (VII) (42,3 g) in trockenem Äther (400 ml) behandelt man tropfenweise mit einer 70#igen Lösung (in Benzol) von Natriumdihydrobisäthoxymethoxyaluminat (S,D.A.) (86,1 g) in leichtem Überschuß, wobei man die Temperatur bei 0° hält, bis die Zugabe des Reduaierungsmittels beendet ist. Das Reaktionsgemisch rührt man dann bei Raumtemperatur 6 h und zerstört den S.D.A.-Überschuß durch sorg»

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fältige Zugabe von Wasser. Das feste Natriumaluminat, das sich ausgefällt hat, filtriert man ab und extrahiert das Filtrat mit Äthylacetat (4 x 50 ml). Die zusammengegebenen Extrakte wäscht man mit Salzlösung, trocknet sie über Natriumsulfat und entfernt das Lösungsmittel. Das erhaltene blaßgelbe öl (23 g) destilliert man unter Bildung von 3-Äthylpent-2-en-1-ol (VI) (18,5 g, Ausbeute 60$) als .farblosem, viskosem Öl, Siedepunkt 60°C/4 Torr.

Beispiel 2(b)

3-Äthylpent-2-en-1-ol (YI) (R¹=R²=Ät)

Eine Aufschlämmung von Lithiumaluminiumhydrid (L.A.H.) (8,2 g) in trockenem Äther, gibt man tropfenweise zu einer Lösung von Äthyl-3-äthylpent-2~enoat (VII) (33,7 g) in trockenem Äther (100 ml) bei 0°. Nach beendeter Zugabe des L ^A. H. rührt man das Gemisch bei Raumtemperatur 2 Stunden. Das überschüssige L.A.H. zerstört man bei 0° durch Zugabe einer gesättigten Lösung von Natriumsulfat. Man filtriert die Lösung und extrahiert das Fil.trat mit Äthylacetat und arbeitet sie wie in Beispiel 2(a) beschrieben aif, wodurch man den Alkohol (VI) (19 g, Ausbeute Ufo) erhält.

Beispiel 3

3-0hlor-3-äthyl-2-nitroso-pentan-1-öl. (V) (R=CH₂OHi

R¹=R²=Ät)

Konzentrierte Salzsäure (23 ml) gibt man tropfenweise während 1,5 h zu einem Gemisch von 3-Äthylpent-3-en-1-ol

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(VI) (23 g) und Amylnitrit (22,4 g) in Eisessig (46 ml) bei 0° (Eis-Salzbad). Each beendeter Zugabe der Säure rührt man das Gemisch bei dieser Temperatur 30 Minuten, kühlt dann in einem Aceton-Kohlendioxidbad 15 Minuten, wodurch sich eine weiße Paste bildet. Man filtriert den Feststoff ab, wäscht mit Wasser und kaltem Methanol und nach Umkristallisieren aus Benzol erhält man das NitrosoChlorid (V) (13 g, Ausbeute 36$) als farblose Kristalle j Schmelzpunkt 110⁰G.

Beispiel 4

3-Amino-3-äthyl-1-hydroxy-pentan-2-on-oxiInhydrochlorid (IV) (R=GH₂OH; R¹=R²=Ät)

3-Chlor-3-äthyl-2-nitroso-pentan-1-ol (V) (10 g) gibt man in einen Dreihals-Rundbodenkolben und behandelt es mit einer gesättigten Lösung von Ammoniak in Methanol. Der Kolben wurde verschlossen, wobei jeder Stopfen mit einem Kupferdraht gesichert wurde und das Gemisch bei Raumtemperatur 2 Tage gerührt. Man erhielt eine klar-gelbe Lösung. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum bei Raumtemperatur entfernt und das erhaltene gelbe Öl wurde mit heißem Benzol trituriert und das Benzol dekantiert. Der Rückstand wurde in Äthanol gelöst und das vorhandene unlösliche Ammoniumchlorid abfiltriert. Das Äthanol wurde unter Vakuum bei Raumtemperatur entfernt und das rückständige gelbe Öl wurde mit heißem Aceton behandelt, wodurch man einen weißen Feststoff erhielt, der abfiltriert, mit Ace-

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ton gewaschen und aus Butan-2-ol umkristallisiert wurde unter Bildung des KetoximhydroChlorids (IVJ (5g} Ausbeute 46$) als farblose Nadeln; Schmelzpunkt 182 - 184⁰G.

Beispiel 5

2-Amino-4-hydroxy-6 (1. i-diäthyl^-hydroxy^-hydroxyimino-

¹=R²=

propylamino)-5-nitropyrimidin (II) (R=GHnOHi R¹=R²=Ä'.t) Eine Suspension von 2-Amino-4-chlor-6-hydroxy-5-nitropyrimidn (III) (HaI=Cl) (2,6 g) in trockenem Äthanol (50 ml) wurde mit 3-Amino-3-äthyl-1-hydroxy-pentan-2-onoximhydroChlorid (IV) (2,66 g) und trockenem Triäthylamin (2,89 g) behandelt und das Gemisch 8 Stunden unter Rückfluß genommen. Die Lösung wurde filtriert und das Piltrat zur Trockne unter Vakuum bei Raumtemperatur -verdampft. Das erhaltene öl wurde mit kaltem Wasser behandelt und der gelbe Peststoff, der ausgefällt wurde, wurde abfiltriert und mit Wasser gewaschen. Durch Umkristallisation aus Wasser in Gegenwart von Holzkohle erhielt man Nitropyrimidinoxim (II) (1,3 gf Ausbeute 30$) als feinen, weißen Feststoff j Schmelzpunkt >250°C (Zerfall).

Beispiel 6

2-Amino-4-hydroxy-6-hydroxyme thyl-7.7-diäth;yl-7.8-dihydropteridin (I) (R=OH₂OHi R¹=R²=lt) Natriumdithionit wurde portionsweise au einer warmen Lösung von 2-Amino-4-hydroxy-6-(i.1-diäthyl-3-hydroxy-2-hydroxyiminopropylamino)-5-nitropyrimidiii (II) (450 mg)

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in 0,1M Natriumhydroxid zugegeben, bis sich die Farbe von rot in sehr blaßes Gelb änderte. Ein festes Produkt wurde weder naoh Kühlen noch nach Einstellen des p„-Wertes erhalten. Um das Produkt von anorganischem Material abzutrennen, wurde die Lösung verdampft und das Produkt mit Äthanol extrahiert und das anorganische Material abfiltriert. Diese Extraktion wurde wiederholt und die zusammengegebenen Extrakte wurden zur Trockne unter Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde in einer minimalen Wassermenge gelöst und in eine Kolonne von Amberlit (CG.50) Ionenaustauscherharz (2,5 χ 28 cm) gegeben. Eluieren mit Wasser lieferte zwei fluoreszierende Hauptbanden. Das Verdampfen der Lösung, die die erste Bande enthielt, lieferte das 6-Carboxaldehydderivat der in der Überschrift bezeichneten Verbindung (10 mg} Ausbeute 3$) als hell-oranges Pulver, während die zweite Bande 7.8-Dihydropteridin (I) (160 mg, Ausbeute 44,5$) als hellgelbes Pulver lieferte; Schmelzpunkt > 300⁰C (Zerfall).

Beispiel Bi Herstellung von 2-Amino-4-hydroxy-6~hydroxymethyl-7-spirocyclohexyl«-7.8-dihydropteridin (I) (R=OH₂OHj R¹R²=Spirocyclohexyl).
Beispiel 1

Äthyloyolohexylidenacetat (VII) (R R =Spirocyclohexyl) Mit Natrium getrocknetes Benzol (200 ml) wurde zu einem Kolben zugegeben, der Natriumhydrid (16 g) enthielt, und der Kolben wurde mit Sauerstoff-freiem trockenem Stick-

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stoff gespült. Zu diesem Gemisch gab man während 1 Stunde einen leichten Überschuß von Triäthylphosphonoacetat (VIII) (AIk=At) (164,5 g)> wobei die Temperatur bei O⁰C behalten wurde. Das Reaktionsgemisch wurde eine weitere Stunde bei O⁰G gerührt und dann mit Cyclohexanon (IX) (R¹R²=Spirocyclohexyl) (65,4 g) bei der gleichen Temperatur behandelt.

Nach beendeter Zugabe des Cyclohexanone (^ 40 Min.) wurde das Gemisch bei Raumtemperatur 3 Stunden gerührt; das Rühren wurde nach dieser Zeit infolge einer gummi.artigen Ausfällung von Natriumdiäthylphosphat schwierig»

Das Gemisch wurde dann bei 60 - 65⁰C 15 Minuten erhitzt, wobei es während dieser Zeit ohne Schwierigkeit gerührt werden konnte. Das Gemisch wurde auf 15°C gekühlt und die Benzollösung dekantiert und der Feststoff mit Benzol gewaschen. Die zusammengegebene Mutterlauge und die Waschlaugen wurden verdampft unter Bildung eines blaß-gelben Öles, das nach Destillation Äthylcyclohexylidenacetat (VII) (62 g| Ausbeute 55,4$) als farbloses Öl lieferte j Siedepunkt 86 - 88°C/2 Torr.

Beispiel 2(a)

2-Cyclohexylidenäthanol (VI) (E¹R²=Spirooyolohexyl) Eine 70#ige Löeung (in Benzol) von Hatriumdihydrobisäthoxymethoxyaluminat (100 g) wurde portionsweise zu Äthylcyclohexylidenacetat (VII) (58,8 g) in trockenem Äther (300· ml) bei O⁰C zugegeben. Das Reaktionsgemisch

409807/1U3 ~³²~

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wurde 6 Stunden bei Eaumtemperatur gerührt und das überschüssige Reduzierungsmittel duroh Zugabe von Wasser zerstört. Das feste Natriumaluminat wurde abfiltriert und das Filtrat mit Athylacetat (4 χ 50 ml) extrahiert. Die zusammengegebenen Extrakte wurden mit Salzwasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel unter Vakuum verdampft. Man erhielt ein blaß-gelbes Öl, das nach Destillation 2-Cyelohexylidenäthanol (VI) (31 gj Ausbeute 70$) als farbloses öl lieferte; Siedepunkt 80°0/2 Torr.

Beispiel 2(b)

2-Cyclohexylidenäthanol (VI) (R¹R²=Spirocyclohexyl) Eine Lösung von Äthylcyclohexylidenacetat (VII) (60 g) in trockenem Äther (300 ml) wurde auf O⁰O gekühlt und portionsweise mit einer Schlämme von Lithiumaluminiumhydrid (15 g) in trockenem Äther (150 ml) behandelt, wobei die Temperatur unter 5°G während der Zugabe gehalten wurde. Das Reaktionsgemisch wurde 15 Minuten bei dieser Temperatur und weitere 20 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Das überschüssige Hydrid wurde mit gesättigtem Natriumsulfat zerstört und die ätherische Lösung wie oben aufgearbeitet unter Bildung des Alkohols (VI) (23 g; Ausbeute 5196) als farblosem Öl.

Beispiel 3

3-0hlor-2-nitroso-3-spircyclohexylpropan-1-ol (V) (R=OH₂OH; R¹R²=Spirocyclohexyl).

2-Cyclohexylidenäthanol (VI) (23 g) wurde in Eisessig 4098Ü7/1U3

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(76 ml) gelöst. Amylnitrit (21,5 g) wurde zugegeben und das Gemisch in einem Eis-Salzbad gekühlt. Die gekühlte Lösung wurde tropfenweise mit kalter konzentrierter Salzsäure (23 ml) unter Rühren behandelt. Nach dem die Zugabe der Säure beendet war, wurde das Gemisch bei der gleichen Temperatur 30 Minuten gerührt, danach in einem Aceton-Kohlendioxidbad 10 Minuten gekühlt. Der braungefärbte Feststoff wurde filtriert, mit kaltem Methanol gewaschen und aus AGeton umkristallisiert unter Bildung des NitrosoChlorids (Y) (15 g; Ausbeute 43$) als farblose Nadeln; Schmelzpunkt 130⁰C.

Beispiel 4

3-Amino-1-hydroxy-3-spirocy clohexylpropan'-2-on-oximhydroChlorid (IY) (E=CH₂OH; R¹R²=Spirocyclohexyl) Eine Lösung von Methanol, gesättigt mit Ammoniak, wurde zu 3-Chlor-2-nitroso-3-spirocyclohexylpropan-1-ol (Y) (Hf 5 g) in einen dicht gesichert verschlossenen Kolben gegeben und das Gemisch wurde 3 Tage bei Saumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde dann 1,5 h in einer Ammoniakatmosphäre unter Rückfluß genommen, dann gekühlt und filtriert. Das Lösungsmittel wurde entfernt und das rückständige gelbe öl mit heißem Benzol gewaschen und dekantiert. Der Feststoff wurde aus Äthanol umkristallisiert unter Bildung des OximhydroChlorids (IV) (7,8 g; Ausbeute 50$) als farblose Kristalle j Schmelzpunkt 197⁰C.

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Beispiel 5

2-Amino-4-hydroxy-6~(3-hydroxy-2-hydroxyimino-1-spirocyclohexylpropylamino)-5-nitropyrimidin (II) (R=CH₂OHi R¹R²=Spirocycloliexyl)

Eine Suspension von 2-Amino-4-chlor-6-hydroxy-5-nitropyrimidin (III) (HaI=Cl) (2,3 g) in trockenem Äthanol wurde mit 3-Amino-1~hydroxy-3-spiroeyclohexylpropan-2-onoximhydrochlorid (IV) (2,5 g) und trockenem Triethylamin (2,7 g) behandelt und das G-emisoh 7 Stunden unter Rückfluß genommen. Das Reaktionsgeraisch wurde filtriert und der Peststoff mit heißem Äthanol gewaschen. Das Lösungsmittel wurde aus dem Piltrat entfernt und das erhaltene gelbe öl wurde mit kaltem Wasser trituriert, wodurch man einen gelben Peststoff erhielt, der nach Umkristallisation in Gegenwart von Holzkohle das Nitropyrimidin (II) (1,85 gi Ausbeute 47,4^0) als weißliches Pulver lieferte; Schmelzpunkt> 300⁰G (Serfall),

Beispiel 6

2-Amino-4~hydroxy~6-hydroxymethyl--7-gpiiOcyclohexyl-7»8-dihydropteridin (I) (R=GH₂OHi (E¹R²=Spirooyclohexyl). 2-Amino-4-hydros:y~6- (S-hydroxy-^-hydroxyimino-1 -spirocyelohexylpropylamino)~5-nitropyrimidin (II) (500 mg) wurden in einem Minimum von 0,1M Natriumhydroxid unter Erwärmen auf d«?m Dampfbad gelöst. Hatriumdithionit wurde portionsweise zugegeben, bis eine fast farblose Lösung erhalten wurde. Naoh Kühlen wu.rd?? das Dihydropteridin ab-

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getrennt und abfiltriert und gereinigt, wozu man es in 2M HGl löst und erneut durch Zugabe von 0,88 Ammoniak auf Ptt8 ausgefällt. Nach Stehenlassen wurde das Dihydropteridin (I) (150 mg; Ausbeute 38$) als blaßgelber, kristalliner Feststoff erhaltenι Schmelzpunkt 300⁰C (Zerfall).

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Beispiel G

Potentielle Pteridin-Antagonisten der Formel (I) können dadurch geprüft werden, daß man die Inhibitierungswirkung untersucht, die sie auf Enzyme ausüben, die für die Biosynthese von Dihydropteroinsäure (DPtA), nämlioh Hydroxymethyldihydropteridinpyrophosphokinase (HMPPS) und Dihydropteroatsynthetase, nachfolgend als "Synthetase" bezeichnet, ausüben. In den nachfolgenden Reaktionsgleichungen werden die Verbindungen durch ihre abgekürzten Formen bezeichnet, die auf Seite 5 der Beschreibung definiert sind.

1. HMPPS

„2+

HMPt + ATP Pt + AMP

2. Synthetaee

Pt + pAB DPtA + Pyrophosphat

(a) Is wurde eine Untersuchung für HMPPS entwickelt, bei

32 der die Übertragung des endständigen Phosphats von ATP-T-P^ zu Pt festgestellt werden und mit der Inhibierungsmenge von HMPPS durch die unter Versuch stehende Verbindung in Wechselbeziehung gestellt werden konnte.

Die Verbindung der Formel (I), die untersucht wurde, wurde in verschiedene Metabolite und Enzyme enthaltenden Formulierungen, die in Untersuchungsröhrchen enthalten waren, eingebracht, wie dies in Tabelle I angegeben ist.

Die Komponenten des Gemische waren:

—37— U0 9 8 0 7/1U 3

I - 2-Amino-4-hydroxy-6-hydroxymethyl-7.8-dihydropteridin (HMPt) in einer Konzentration von 800 /uM, d.h./umolar

II - Eine Quelle für HMPPS, die man aua einem Extrakt von E. coli erhält, und das man aus der "Synthetase" auf Sephadex G-100 (Warenzeichen) nach dem Verfahren von Richey und Brown in J. Biol. Chem. 244, 1582-1592 (1969) erhält.

III - 3mM

IV - 0,10 M ATP neutralisiert (nicht indiziert oder nicht mit Isotopen markiert).

V - 0,021 MgGl₂.6H₂O.

VI - 0,1 M MgCl₂o6H₂0.

VII - Quelle von HMPPS und »Synthetase».

VIII - Die VersuchsverMndung in einer Konzentration von

,14

0,95x10*" ³ M.

IX - 0,4mM pAB-C

Wie der Tabelle I zu entnehmen ist, enthielten die Röhren 1 bis 9 insgesamt eine Quelle für HMPPS, indiziertes ATP und 0,02 M MgOl₂.6H₃O und die Röhren 2 bis 9 enthielten zusätzlich HMPt und die Röhren 4 bis 9 weiterhin die unter Versuch stehende Verbindung. Die Kontrollröhren 10 bis 12 enthielten eine Quelle, sowohl für HMPPS als auch Synthetase, nicht indiziertes ATP, 0,1M MgCl₂.6H₃O und indiziertes pAB.

Die Röhren 1 bis 9, die die in der Tabelle angegebenen Mengen der Komponenten enthielten, wurden auf 200 /ul mit

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destilliertem Wasser gefüllt, 60 Minuten bei 37°C bebrütet und dann auf Eis abgeschreckt. Dextrose (20/Ul mit einem Gehalt von 72,1 mg/ml) und Hexokinase (5/ul mit einem Gehalt von 2000 Einheiten/ml) wurden zu. der Lösung zugegeben, die man dann bei Raumtemperatur 15 Minuten stehenließ. ^MDarco-G-60" (Warenzeiohen) (10 mg) wurden jeder Röhre zugegeben und der Inhalt periodisch 10 Minuten gemischt· Die Holzkohle wurde .mittels einein "Millipore AP 250 2200" (Warenzeichen) filter entfernt und das !filter mit drei 10 ml Portionen kaltem Wasser gewaschen. Die Holzkohle und das Filter wurden dann radioaktiv gezählt.

Die radioaktive Auszählung aus dem Inhalt der Röhren 2 und 3 wurde als maximale Auszählung genommen, weil diese Röhren keine Versucheverbindung enthielten und daher eine GjfcLge Enzyminhibierung aufwiesen, Der Prozentsatz der In— hibierung, der durch den Gehalt der verbleibenden Röhren gebildet wurde, konnte dann dadurch errechnet werden, daß man ihre radioaktive Auszählung gegenüber dem Maximum, wie oben bestimmt, in Beziehung setzt·

Der Inhalt der Röhren 10 und 12 wurde chromatographisch wie unter Seil (b) beschrieben, analysiert und als Kontrolle verwendet, wobei die Röin-en 10 und 11, die keine unter Verauch stehende ?erbindung enthielten (und daher eine 0?6ige Iniiibierong aufwiesen) den Wert 100$ erhielten. Der Prozentsatz der Inhibiörung der durch den Iniialt der Röhren in

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Teil (b) des Versuches erreicht wurde, konnte dann im Verhältnis zu der Kontrolle durch Vergleich der entsprechenden Chromatogramme errechnet werden.

(b) Die JUctivität der unter Versuch stehenden Verbindung der Formel (I) gegen "Synthetase" wurde wie folgt durch Bestimmen der Bildung von Dihydropteroat C bestimmt.

Ein Vorrat an Pt wurde aus neutralisiertem ATP (50 /ul, 0,1M), MgCl₂.6H₂O(50/ul,0,1M), Dithiothreit(ol) (100/ul, 0,1M), tris-Puffer (100/Ul, 0,4M, p_H 8,3), HMPt (25/ul, 876/UM) und 170/ul einer HMPPS enthaltenden Lösung hergestellt. Das Gemisch wurde 60 Minuten bei 37°G bebrütet, kurz auf Eis abgeschreckt und dann wurden Dextrose (100/ul mit einem Gehalt von 72,1 mg/ml) und Hexokinase (20/ul mit einem Gehalt von 2000 Einheiten/ml) bei Raumtemperatur der Lösung zugegeben, die gekühlt und bei dieser Temperatur 15 Minuten stehengelassen wurde.

Eine Lösung von MgCl₂.6HgO (10/ul, 0,1M), pAB-C¹⁴ (10/ul, 0,4mM), Dithiothreit (20/ul, 0,1M) und tris-Puffer (20,ul, 0,4M, Pg8,3) wurde in jedem der fünf TJntersuchungsröhrohen hergestellt und dann wurden 80 /Ul des Inhalts des Vorrats zu jeder Röhre, zusammen mit Synthetase und/oder der unter Versuch stehenden Verbindung der Formel (I), wie in der Tabelle II angegeben, zugegeben. Die Lösung wurde dann mit destilliertem Wasser auf 200/ul aufgefüllt.

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Zwei Kontrolluntersuehungen wurden in der Weise hergestellt, daß man in die Höhrehen ATP (10/ul, 0,1M), MgGl₂-6H₂O (1OyUl, 0,1M), Sithiothreit (20 /ul, 0,1M) tris-Puffer (20/ul, 0,4M, p_H 8,3), pAB-C¹⁴ (10,ul, 0,4mM) und 20/ul einer Lösung, die HMPPS und "Synthetase" "bekannter Aktivität enthält, einbringt. Die zur Untersuchung vorgesehene Yerbindung wurde dann zu dem zweiten dieser beiden Röhrchen Ms auf eine Endkonzentration von 10 M zugegeben, und die Röhrchen wurden dann mit destilliertem Wasser auf n00/ul aufgefüllt.

Alle sieben Röhrchen wurden dann 30 Minuten bei 37°0 bebrütet, auf Eis abgeschreckt und dann zusammen mit den Kontrollröhren 10 bis 12 von Teil (a) chromatographisch wie folgt analysiert:

100/ul des Inhalts von jedem der Röhrchen wurde auf Whatman Hr. 3MM Chromatographiepapier (2x20 cm) beim "Ausgangspunkt" aufgetragen, wobei man jeden Ablauf in einem Sirenson-Puffer von Kalium- und Natriumphosphaten (0,11, Ptt7»0) 10 bis 15 cm absteigen ließ. Aus den relativen Stellungen der ELecken, die aus dem Inhalt der verschiedenen Röhrchen erhalten wurden, konnten die verschiedenen Prozentsätze der Inhibierung der Synthetase unter Bezugnahme auf die Kontrollröhrchen 10 und 11, die eine 0?6ige Inhibierung aufwiesen, bewertet werden.

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Verbindungen, bei denen festgestellt wurde, daß sie als Ergebnis dieser Untersuchungen eine 50$ige Inhibierung bei einer Konzentration von 100yuM oder weniger aufweisen, können dahingehend bewertet werden, daß sie eine brauchbare •potenzierende Wirkung aufweisen, und soweit ihre Toxizität günstig ist, können sie in die in dieser Beschreibung beschriebenen Zubereitungen eingebracht werden,.

Es wurde festgestellt, daß 2-Amino-4-hydroxy-6-hydroxymethyl-7.7-diäthyl-7.8-dihydropteridin eine 50#ige Inhibierung bei einer Konzentration von 2,1/uM aufweist.

Beispiel D

Bei diesem Versuch wurden die Inhibitorbereichsdaten zur Bewertung der synergistischen Aktivität von 2-Amino-4-hydroxy-6-hydroxymethyl-7.7-diäthyl-7.8-dihydropteridin bei seiner Kombinierung mit Trimethoprim (ΐΜΡ) und/oder SuIfamethoxazol (SMX) gegen Staphylococcus aureus bestimmt.

Das Pteridin wurde in ein Soja-Petonmedium mit niederem Thymidingehalt ("Welleotest Sensitivity test agar"), das sich in einer Petri-Schale befand, zugegeben, und die andere (n) Komponente(n) wurde(n) der Impfstelle zugegeben, die man durch Entfernen eines kleinen Pfopfens aus dem Medium erhält. Die Oberfläche des Mediums wurde mit dem unter Versuch stehenden Organismus geimpft und dann bebrütet. Das Ausmaß der Inhibierungszone ist in !Tabelle III angegeben, wobei die Zahlen die vollständige Inhibierungs-

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zone (d.iu die Anzahl ier Centimeter von der Kante der Impfstelle nach etwa 6-facher Vergrößerung) und die Zahlen in Klammern die Bereiche der leilinhibierung angeben.

Sie Ergebnisse zeigen, daß das Pteridin einen Synergismus mit TMP und SMX allein und einen mehrfachen Synergismus mit beiden gegen Staphylococcus aureus aufwies.

Beispiel"E

(Eablettenformulierunfi

Verbindung der Formel (1) (H=CH₂OHiR¹ =R²=lt) (rein)

100 mg

trimethoprim (rein) 25 mg

SuIiaguanidin (B.P.C) 100 mg

+ Maisstärke, Laktose, Gelatine, Talkum und Magnesiumstearat

Herstellung! Me oben angegebenen Bestandteile wurden miteinander unter Verwendung bekannter pharmazeutischer Verfahren unter Bildung einar Granulierung gemischt, die dann in tabletten verpreßt wurden.

Beispiel ff Sablettenformulierung

"Pyremathimin" (Pyrimethamin) B»P. 15 mg

Verbindung der Formel (I) (R=OH₉ ¹² (rein) ~ 15.0 mg

5al;lette2iiierst-elluiig wie in Beispiel Ξ* Baisrial G-

ti» im H ii ι nlFi'WMi ι μ °%wim*yH>w

T ab! e -stenfornmli β twoa -43-

k Q 9 8 0 7 .' ι H Z

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Sulfanilamid B.P.G. 150 mg

Verbindung der Formel (I) (H=GH₂OHf

R¹=R²=lt) (Rein) 1-75 mg

Tablettenherstellung wie in Beispiel B*

Beispiel H Kapselheratellung

Trimethoprim (rein) 20 mg

Verbindung der Formel (I) (R=OH₂OH;

R¹=R²=Ät) (rein) 100 mg

Herstellung!

Die Verbindungen wurden in körniger Form zusammen mit Laktose, Maisstärke und Magnesiumstearat gemischt. Das Pulver wurde in eine zweiteilige G-elatinekapsel mit harter Schale unter Verwendung einer Kapselfüllmaschine eingefüllt.

Beispiel I Ausspüllösung

Verbindung der Formel (I) (R=OH₂OHj

R¹=R²=Ät) (rein) 1 mg/ml ■

Trimethoprim (rein) 0,2 mg/ml

Lösungsmittel V/asser

Beispiel J Spüllösung Verbindung der Formel (I) (R=CH₂OH;

R¹=R²=Ät) (rein) · 2 mg/ml

cf-Amino-p-toluolsulfonamid (rein) 2 mg/ml

-44-409807/1143

Beispiel K Lösung

Verbindung der Formel (I) (R=OH₂OH;

R¹=R²=It) (rein)

Diaveridin B. Yet 0 Kelfizina

Lösungsmittel

233878?

1,5 mg/ml 0,5 mg/ml 1,0 mg/ml Wasser

Beispiel L Tablettenformulierung

Verbindung der Formel (I) (R=CH₂OHj

R¹=R²=Ät) (rein)

Mikrokristalline Cellulose Stärke

Magne s iums t e arat

Methylhydroxyäthylcellulos e

500 mg 100 mg 40 mg 10 mg

653 mg

Das Pteridin (I), mikrokristalline Cellulose und Stärke wurden mit einer Lösung der Methyihydroxyäthylcellulose in 50#igem wäßrigem Äthylalkohol granuliert. Das Magnesiumstearat wurde zu den trockenen Granulaten zugegeben und das Ganze dann verpreßt.

-45-

409807/1143

Tabelle I

Röhrchen I	-	Kontrollen	5/Ul	II	III	IV	V	VI	VII	VIII	IX
Nr.	5/Ul / Il	10 11	/ Il							Endkonzentration
1	It	12	100/Ul	15/ul	-	1OyUl	-	-	-	-
2	Il	Il	Il	-	It	—	—	-	-
3	Il	Il	ti		ti		_
4	Il	ti	ti	—	It	—	-	2,5x10"^bM	_
5	ti	It	Il		Il			It
^ 6	Il	Il	ti	_	ti	_	_	1,0x10"⁵M
7	Il	Il		Il			It	^_-
ι 8	Il	It	—	H	- —	_	913x10"⁵M
9	ti	It		It	—		ti

-	-	10/Ul II/	-	10/ul Il /	20/Ul M/		10/Ul ti/
-	-	M	-	Il	It	1,0x10"^pM	It

Tabelle II

Röhrchen Synthetase- Nr. Überschuß	unter Versuch stehende Verbindung Endkonzentration	10"⁵M 10" Zu 10"^bM
1 2 + 3 + 4 + 5 ♦ Kontrollen	8,7 x 1,0 χ 2,5 x	10"⁵M
6 7	1,0 χ

Tabelle III Staphylococcus aureus

JLrzneimittel TMP SMX TMP + SMX

pug/ml) (30) (300) (5) (100)

H = OH₂OH 12,5(17,0) 12,5(17,0) 12,5(17,0)

IT =

(30)

12..
R=IT = At

to ,

ο » 10,5(13,0) 10,5(14,0) 11,0(14,5)

^ (10)

^w »' 8,5 (10,5) 6,5 (12,5) 10,5 (12,5)

(5)

Claims

233878?

Patentansprüche j "u Verbindung der Formel (I) oder ihre tautomere 3?orm,

worin R eine ÜJiedrigalkylgruppe ist, die gegebenenfalls mit einer Hydroxygruppe substituiert ist, und die Reste

1 2

R und R gleich oder verschieden sind, und jeder, unabhängig voneinander, eine Medrigalkylgruppe ist, wobei sie zusammen wenigstens 3 Kohlenstoffatome aufweisen, .

1 2

oder die Reste R und R , zusammen mit dem Kohlenstoffatom in dem Pteridinring einen Spirocycloalkylring mit 4 bis 6 Kohlenstoffatomen außerhalb des Pteridinrings bilden.

2. Verbindung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet , daß R eine Hydroxyalkylgruppe ist.

3β Verbindung gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß R eine Hydroxymethylgruppe ist.

-48-409807/1143

■ - 48 -

233878?

4. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Reste

1 2

R und R Medrigalkylgruppen sind.

5 β Verbindung gemäß Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet , daß die Alkylgruppen gleich sind, und daß sie Äthylgruppen sind.

6. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Reste

1 2

R und R , zusammen mit dem Kohlenstoffatom in dem Pteri-

dinring eine Spirocyclohexylgruppe bilden.

7. 2-Amino-4-hydroxy-6-hydroxymethyl-7.7-diäthyl-7·8-dihydropteridin oder eine tautomere Form desselben·

8. 2-Amino-4-hydroxy-6-hydroxymethyl-7-spirocyclohexyl-7.8-dihydropteridin oder eine tautomere form desselben

9. Pharmazeutisch verträgliches Salz einer Verbindung der Pormel (I), wie sie in einem der vorausgehenden Ansprüche definiert ist oder ihrer tautomeren Formen.

10. Salz gemäß Anspruch 9 einer Base oder einer Mineralsäure oder organischen Säure.

11. Salz gemäß Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet , daß die Mineralsäure Salzsäure

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233878?

12. Pharmazeutische Formulierung einer Verbindung der Formel (i) oder eines Salzes derselben, wie in einem der vorausgehenden Ansprüche definiert, zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger.

13. Pharmazeutische Formulierung gemäß Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß sie in Form von Dosierungseinheiten vorliegt.

14. Pharmazeutische Formulierung gemäß einem der Ansprüche 12 und 13, im wesentlichen wie hier unter Bezug auf Beispiel Ii beschrieben·

15. Verfahren zur Herstellung einer pharmazeutischen Formulierung gemäß einem der Ansprüche 12 bis 14, dadurch gekennzeichnet, daß man die Verbindung der Formel (I) oder ein Salz derselben mit einem Träger mittels bekannter Verfahren mischt.

16. Verfahren gemäß Anspruch 15, im wesentlichen wie hier unter Bezugnahme auf Beispiel L beschrieben.

17. Pharmazeutische Formulierung gemäß einem der Ansprüche 12 bis 14, sofern sie nach einem Verfahren gemäß einem der Ansprüche 15 und 16 hergestellt ist,

18. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) oder eines Salzes derselben gemäß einem der Ansprüche

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1 bis 11, dadurch. gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der Formel (II)

worin R, R¹ und R² die im Anspruch 1 definierte Bedeutung haben, und Z ein Saueretoffatom oder eine dafür bestimmte Schutzgruppe ist, reduktiv cyclisiert.

19. Verfahren gemäß Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet , daß man als Schutzgruppe eine Oximgruppe oder Semicarbazongruppe verwendet»

20. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 18 und 19» dadurch gekennzeichnet, daß man die reduktive Cyclisierung unter Verwendung von Natriumdithionit durchführt.

21. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 18 bis 20, dadurch gekennzeichnet, daß man die Verbindung der Formel (II), worin Z eine Oximgruppe ist, dadurch herstellt, daß man eine Verbindung der Formel (IV) oder ein Salz derselben

-51-409807/1143

233878?

R (IV) ,

UOH

12
worin R, E und R die im Anspruch. 1 definierte Bedeutung haben,mit einem E-umsetzt.

22. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (II) gemäß Anspruch 21, dadurch gekennz e i chnet , daß man eine Verbindung der Formel (IV), wie in Anspruch 21 definiert, oder ein Salz derselben, mit einem 2-Amino-4-halogen-6-hydroxy-5-nitropyrimidin umsetzt.

23. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 21 und 22, dadurch gekennzeichnet, daß man als Salz das Hydrochlorid verwendet.

24. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 21 bis 23, dadurch gekennzeichnet, daß man das Pyrimidinderivat 2-Amino-4-chlor-6-hydroxy-5~nitropyrimidin verwendet.

25. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 21 bis 24, dadurch gekennzeichnet, daß man die Reaktion mit dem Pyrimidinderivat in Gegenwart eines Säu-

409807/1143

233878?

rebindemittels durchführt.

26. Verfahren gemäß Anspruch 25, dadurch gekennzeichnet, daß man als Säurebindemittel ein tertiäres Amin verwendet.

27. Verfahren gemäß Anspruch 26, dadurch gekennzeichnet , daß man als Amin Triethylamin verwendet.

28. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 21 bis 27, dadurch gekennzeichnet, daß man die Verbindung der Formel (IV) oder ein Salz derselben, dadurch herstellt, daß man mit Ammoniak eine Verbindung der Formel (V),

J NO

OH.

C OH.R (V)

1 2

worin R, R und R die in Anspruch 1 definierte Bedeutung haben, und Hai ein Halogenatom ist, umsetzt.

29· Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (IV), gemäß Anspruch 21, oder ein Salz derselben, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der Formel (V), wie in Anspruch 28 definiert, mit Ammoniak umsetzt.

/»09807/1143 -53-

233878?

30. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 28 und 29» d a du'roh gekennzeichnet, daß das Halogenatom ein Chloratom ist,

31. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 28 bis 30, da-' durch gekennzeichnet, daß man Ammoniakgas durch das Eeaktionslösungsmittel perlt.

32. Verfahren gemäß Anspruch 31, dadurch gekennzeichnet , daß man als Lösungsmittel ein Alkanol verwendet.

33. Verfahren gemäß Anspruch 32, dadurch gekennzeichnet , daß man als Alkanol Methanol verwendet·

34. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 28 bis 33, d a duroh gekennzeichnet, daß man die Verbindung der Formel (V) dadurch herstellt, daß man eine Verbindung der Formel (VI),

E¹

E²

C = GH.E (VI)

1 2
worin E, E und E die im Anspruch 1 definierte Bedeutung

haben, mit einem Nitrosylhalogenid umsetzt.

35. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel

409807/1143 -54-

(V) gemäß Anspruch 28, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der Pormel (VI), wie in Anspruch 34 definiert, mit einem Nitrosylhalogenid umsetzt.

36. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 34 und 35» dadurch gekennzeichnet, daß man das Nitrosylhalogenid in situ aus einem Nitrosierungsmittel und einer konzentrierten Halogenwaaserstoffsäure herstellt.

37. Verfahren gemäß Anspruch 36, dadurch gekennzeichnet , daß man als Nitrosierungsmittel Amylnitrit verwendet.

38. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 34 bis 37, dadurch gekennzeichnet, daß man als Nitrosylhalogenid Nitrosylchlorid verwendet.

39· Verfahren gemäß einem der Ansprüche 34 bis 38, d a durch gekennzeichnet, daß man die Verbindung der formel (VI), worin R eine Hydroxyalkylgruppe ist, dadurch herstellt, daß man eine Verbindung der Formel (VII)

C = CH.CO₂AIk (VII)

1 2

worin die Reste R¹ und R die im Anspruch 1 definierte Be-

409807/1143 -55-

deutung haben und Alk eine Niedrigalkylgruppe ist, reduziert.

40. Verfahren gemäß Anspruch 39» dadurch gekennzeichnet , daß man die Reduktion mit Natriumdihydrobisäthoxymethoxyaluminat durchführt.

41. Verfahren gemäß Anspruch 39» dadurch gekennzeichnet , daß man die Reduktion mit Lithiumaluminiumhydrid durchführt.

42. Verfahren gemäß Anspruch 39 bis 41, dadurch gekennzeichnet , daß man die Verbindung der Formel (VII) dadurch herstellt, daß man eine Verbindung

der Formel (VIII),

(AIkO)₂P.OH₂.0O₂AIk, (VIII) ,

worin Alk eine Niedrigalkylgruppa ist, mit einer Verbindung der Formel (IX),

R¹

^O = 0 (IX)

R²/

worin R¹ und R die im Anspruch 1 definierte Bedeutung
haben, umsetzt.

43. Verfahren gemäß Anspruch 42, dadurch gekennzeichnet, daß man als Verbindung der Formel (VIII) Triäthylphosphonaoetat verwendet.

409807/1143 _.

44. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 42 und 43> da durch gekennzeichnet, daß man die Reaktion in einem Lösungsmittel in Gegenwart einer starken Base durchführt.

45· Verfahren gemäß Anspruch 44» dadurch gekennzeichnet , daß man als. Lösungsmittel Benzol verwendet·

46. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 44 und 45» dadurch gekennzeichnet, daß man als. Base Natriumhydrid verwendet.

47. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 18 "bis 46, im wesentlichen wie hier unter Bezugnahme auf die Beispiele A· und B."beschrieben.

48. Verbindung der Formel (I) oder ein Salz derselben, wie in irgendeinem der Ansprüche 1 Ms 11 definiert, sofern sie nach einem Verfahren gemäß einem der Ansprüche 18 bis 47 hergestellt ist.

49· Verbindung der Formel (II), wie in Anspruch 18 definiert, oder eine tautomere Form derselben.

50. Verbindung der Formel (II), wie in Anspruch 21 definiert, oder eine tautomere Form derselben, sofern sie nach einem Verfahren gemäß einem der Ansprüche 21 bis 47

409807/1143 ~⁵⁷"

hergestellt ist.

51. Verbindung der Formel (IV), wie in Anspruch 21 definiert, oder ein Salz derselben.

52. Verbindung der Formel (IV), wie in Anspruch 21 definiert, oder ein Salz derselben, sofern sie nach einem Verfahren gemäß einem der Ansprüche 28 bis 47 hergestellt ist.

53. Verbindung der Formel (V), wie in Anspruch 28 definiert.

54. Verbindung der Formel (V), wie in Anspruch 28 definiert, sofern sie nach einem Verfahren gemäß einem der Ansprüche

34 bis 47 hergestellt ist.

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