DE2314263C2 - Synthetischer Kontrollstandard zur Analyse der cerebrospinalen Flüssigkeit und seine Herstellung - Google Patents

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf einen synthetischen Kontrollstandard für die Bestimmung der Bestandteile von cerebrospinaler Flüssigkeit und auf ein Verfahren zu seiner Herstellung.

Cerebrospinale Flüssigkeit ist eine klare, farblose Flüssigkeit, die in den subarachnoiden Räumen von Gehirn und Rückenmark und in den Ventrikeln des Gehirns enthalten ist Sie enthält einige Lymphozyten und hat einen Proteingehalt von etwa 15—45 mg/ 100 ecm (mg%). Bei bestimmten Erkrankungen, wie z. B. Hirnschäden, Gehirn- oder Spinaltumoren, ist es zweckmäßig, den gesamten Proteingehalt und andere Parameter der cerebrospinalen Flüssigkeit zu bestimmen.

Das Gesamtvolumen der cerebrospinalen Flüssigkeit beim normalen Erwachsenen beträgt etwa 125—150 ecm und wird etwa alle 3—4 Stunden erneuert Normalerweise ergibt eine Rückenmarkspunktur eine Probe von nur etwa 5—10 ecm, und wiederholte Punkturen sollen vermieden werden. Bei einer durchschnittlichen Probe von 6 ecm werden gewöhnlich 4 ecm für Laboratoriumsanalysen des Patienten benötigt, was pro Patient nur etwa 2 ecm für andere Zwecke zurückläßt. In einem 300-Betten-Krankenhaus dauert es im allgemeinen durchschnittlich etwa 9 Monate, um 1 1 überschüssige cerebrospinale Flüssigkeit vom Menschen zu sammeln. Somit lyophilisierte cerebrospinale Flüssigkeiten kostbare Proben.

' Bei der Bestimmung des Proteingehaltes der cerebrospinalen Flüssigkeit ist es, wie bei anderen biologischen Flüssigkeiten, zweckmäßig, Kontrollstandaids einer bekannten Zusammensetzung zum Vergleich mit der Probe des Patienten zu verwenden. Bisher bestanden diese Kontrollstandards aus sorgfältig gesammelter und behandelter menschlicher cerebrospinaler Flüssigkeit Aufgrund der relativ geringen Menge an verfügbarem Material ist das Produkt jedoch teuer. Da cerebrospina-Ie Flüssigkeit weiterhin in solch kleinen Mengen gesammelt wird, neigt das Material innerhalb der normalen Lagerdauer, die zum Sammeln einer geeigneten Menge für den Verkauf, wie z. B. I I oder mehr, erforderlich ist, zum Zersetzen. Enzyme in der Flüssigkeit reagieren mit anderen Bestandteilen und ergeben Abbauprodukte. Aufgrund der zahlreichen kleinen Proben, aus denen jedes größere, gesammelte Volumen besteht ist das Risiko einer bakteriellen Verunreinigung größer als beim Sammeln von normalem Blutserum. Weiterhin ist menschliche cerebrospinale Flüssigkeit bei der Verarbeitung schwer zu handhaben, da sie nicht leicht lyophilisiert werden kann. Da ihre Masse relativ klein ist bildet sie ein feines Pulver, das sich an den oberen Wänden und dem Verschluß der Probengläser sammelt, wodurch beim öffnen des Verschlusses und beim Auffüllen mit Wasser vor der Verwendung Material verloren geht

Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist daher, die Schaffung eines synthetischen Kontrollstandard: zur Verwendung bei der Bestimmung der cencirospinaisn Flüssigkeit der sich leichter lyophiiisieren läßt als natürlich vorkommendes Material.

Gelöst wird die Aufgabe erfindungsgemäß durch einen synthetischen Kontrollstandard für die Bestimmung der Bestandteile von cerebrospinaler Flüssigkeit bestehend aus normalem Blutservm, das mit einem wäßrigen, 40—200 mg/100 ecm Glucose und 80—130 Milliäquivalente/I Chloridionen enthaltenden Verdünnungsmittel in solcher Weise verdünnt ist daß die Gesamtproteinkonzentration zwischen 30—145 mg/ 100 ecm liegt

Das Verfahren zu seiner Herstellung ergibt sich aus Patentanspruch 2.

Das Chloridion' kann durch Verwendung einer wäßrigen Lösung eines Alkalimetallchlorids, vorzugsweise Natriumchlorid, geliefert werden. Das Chloridsalz und die Glucose sind vorzugsweise Materialien in analytischer Reinheit oder Reagenz-Reinheit.

Für manche Zwecke kann es erwünscht sein, in dem erfindungsgemäßen synthetischen Kontrollstandard eine geringe Menge Pre-albumin, vorzugsweise etwa I—3mg%, mitzuverwenden. Pre-albumin ist eine besondere, aus Blutserum erhaltene Fraktion und wird z. B. von Got et al in »Isolement et caract6risation d'une prealbumine du serum humain«, Protides of the Biological Fluids, Bd. 10, H. Peeters ed, Amsterdam, Elsevier (1963), Seiten 125— 126;Schultze und Hermans in »Molecular Biology of Human Proteins«, Bd. 1, Amsterdam, Elsevier (1965), Seiten 184-185, beschrieben.

Nach Verdünnung des Blutserums mit wäßriger Glucose und Kochsalzlösung odei einem anderen, chloridhaltigen Ion mit oder ohne zugefügtes Pre-albuimn kann die wäßrige Lösung zu einem trockenen Material lyophilisiert werden. Das lyophilisierte Material kann durch Zugabe einer geringen Menge von Akaziengummi vor der Lyophilisierung verbessert werden, und zwar z. B. in einer Größenordnung von etwa 0,1%. Dieses lyophilisierte, trockene Material kann vor der Verwendung ohne Verlust an Produkt auf dem Behälterverschluß leicht mit Wasser rekonstituiert werden.

Der erfindungsgeffiäBe synthetische Kontrollstandard für cerebrospinale Flüssigkeit liefert in der praktischen Verwendung wesentlich schärfere Bänder im elektrophoretischen Muster als man sie mit der normalen menschlichen cerebrospinalen Flüssigkeit erhält. Dies ist ein zusätzlicher Vorteil der vorliegenden Erfindung, wodurch eine erhöhte Genauigkeit der Kontrollverfahren möglich wird.

Die folgenden Beispiele erläutern die vorliegende Erfindung.

Beispiel 1

Ein synthetischer Kontrollstandard zur Verwendung bei der Bestimmung der cerebrospinalen Flüssigkeit wurde wie folgt hergestellt:

Menschliches Blutserum, aus welchem die Gerinnungsfaktoren entfernt worden waren, wurde mit einer wäßrigen Lösung aus Glucose und Natriumchlorid, die 638 g NaCI und 600 mg Glucose pro I enthielt, verdünnt. Dadurch wurde das Serum durch Mischen von

65 Vol.-Teilen der Verdünnungslösung mit 1 Vol.-Teil Serum auf eine Gesamtproteinkonzentration von 110 mg/100 ecm verdünnt Zu 1 Liter des verdünnten Serums wurden dann 10 ecm einer 10%igen Lösung aus Akaziengummi in Wasser zugefügt. Dann wurde die erhaltene Lösung in Aliquoten von 3 ecm in 5 ecm Flaschen abgefüllt und lyophilisiert Das lyophilisierte, trockene Material wurde bei 2—8°C bis zur Verwendung gelagert Zur Verwendung wurde das trocken:· Material durch Verdünnung mit 3 ecm dest Wasser pro Flasche rekonstruiert Nach dem Auffüllen wurden die folgenden Bestimmungswerte erhalten:

Bestandteil

Wert

Chlorid; Milliäquivalent/1 Glucose: Mübaquivaieni/iSU ecm

Gesamtprotein; mg/100 ecm Pre-albumin; % des gesamten Proteins Albumin; des gesamten Proteins «,-Globulin; % des gesamten Proteins aj-Globulin; % des gesamten Proteins /-Globulin; % des gesamten Proteins /-Globulin; % des gesamten Proteins

kolloidales Gold (Lange's Test) 105

110

1111100000

Beispiel 2

Die in Beispiel 1 und 2 hergestellten Kontrollstandards werden in derselben Weise wie eine unbekannte

Beispiel 1 wurde wiederholt, wobei der Lösung vor μ cerebrospinale Flüssigkeit zum Vergleich mit der Probe der Lyophilisierung 1—3mg% Pre-albumin zugefügt eines Patienten verwendev, um einen Vergleich bei der

wurden.

analytischen Untersuchung zu ergeben.

Claims (3)

Patentansprüche:

1. Synthetischer Kontrollstandard für die Bestimmung der Bestandteile von cerebrospinaler Flüssigkeit, bestehend aus normalem Blutserum, das mit einem wäßrigen, 40—200 mg/100 ecm Glucose und 80—130 Milliäquivalente/1 Chloridion enthaltenden Verdünnungsmittel in solcher Weise verdünnt ist, daß die Gesamtproteinkonzentration zwischen 30—145 mg/100 ecm liegt

2. Verfahren zur Herstellung eines synthetischen Kontrollstandards für die Bestimmung der Bestandteile von cerebrospinaler Flüssigkeit, dadurch gekennzeichnet, daß man normales Blutserum mit einem wäßrigen Verdünnungsmittel, das 40—200 mg/100 ecm Glucose und 80—130 Viiiiiäquivalente/1 Chloridion enthält, in solcher Weise verdünnt, daß die Gesamtproteinkonzentration zwischen 30—145 mg/100 ecm liegt

3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet daß man den flüssigen Kontrollstandard noch mit etwa 0,1% Akaziengummi mischt und zu einem trockenen, pulverisierten Material lyophilisiert

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