DE2306074A1

DE2306074A1 - Neue salze von acth-peptiden und verfahren zu ihrer herstellung

Info

Publication number: DE2306074A1
Application number: DE2306074A
Authority: DE
Inventors: Leo Dr Geller; Werner Dr Rittel
Original assignee: Ciba Geigy AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 1972-02-17
Filing date: 1973-02-08
Publication date: 1973-08-23
Also published as: IE37261B1; FR2181733B1; GB1419871A; ZA73876B; DD107020A5; IL41475A0; AR197118A1; AU5219073A; AU472611B2; CA1005050A; NL7302222A; JPS4925114A; IL41475A; IE37261L; BE795517A; FR2181733A1

Description

CIBA-GEICT AG, BASEL (SCIEs¹EIZ)
Case 4-8024/1-3

Deutschland

Neue Salze von ACTH-Peptiden und Verfahren zu
ihrer Herstellung.

Bei der therapeutischen Anwendung von ACTH-Peptiden besteht ein bisher noch nicht befriedigend gelöstes Problem darin, dass die Peptide im Körper zu schnell inaktiviert werden. Man hat auf verschiedene Weise versucht, die Wirksamkeit zu verlängern, z.B. indem man Komplexe der Peptide mit
anorganischen Stoffen wie schwerlösliehen Zinkverbindungen,
beispielsweise Zinkhydroxyd oder Zinkphcsphat, oder mit organischen Stoffen wie Gelatine, Polyvinylpyrrolidon, Phosphor-

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™* A· ™

säureestem von Polyphenplen oder Polyalkoholen, beispielsweise Polyphloretinphosphat oder alkalischen oder sauren Polyamino- . säuren beispielsweise Protamin oder Polyglutaminsäuren bildete. Abgesehen davon, dass die erzielte Wirkungsverlängerung nicht voll befriedigt, weisen gewisse der hergestellten Präparate auch den Nachteil auf, daäs sie Allergien hervorrufen können.

Es wurde nun gefunden, dass man eine wesentlich stärkere Wirkungsverlängerung als bisher erzielen kann, wenn man die Peptide in Form langkettigen fettsaurer, in Wasser schwer löslicher Säureadditionssalze zur Anwendung bringt, vorzugsweise in einem flüssigen Fettsäureester, insbesondere einem pflanzlichen OeI, wobei das Peptidsalz auch an einem Träger, vor allem einem Aluminiumsalz einer höheren Fettsäure₃ adsorbiert sein kann, oder in einem Gel, das aus einer Mischung von ca. O₅I bis 5% vorzugsweise 0,5 bis 2%, fett saurem Aluminium und einem flüssigen Fettsäureester besteht, \*ie in der Schweizer Anmeldung Ges. Nr. 2299/72 (Gase 4-8023) beschrieben, oder aber durch Suspendieren der schwerlöslichen oder unlöslichen Salze in wässeriger Lösung.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind daher langkettige fettsaure, in Wasser schwer lösliche Säureadditionssalze

von ACTH-Peptiden und Verfahren "zu ihrer Herstellung,,. Ein weiterer. Gegenstand der Erfindung ist die"Applikation von ACTH-Peptiden in Form ihrer in Wasser schwer löslichen Fettsäureadditionssalze. Insbesondere betrifft die Erfindung auch die Herstellung und Anwendung von ACTH-Peptiden in

■· ■ 309834/11@4

Form öliger Lösungen oder öliger oder wässriger Suspensionen, welche ein fettsaures Säureadditionssalz des Peptides enthalten. Die neuen mit fettsauren Salzen hergestellten

ACTH-Präparate weisen eine Verlängerung der Wirkung von mehreren Tagen, z.B. 3-7 Tagen auf. Dies konnte nach dem Stand der Technik keinesfalls vorhergesehen werden. Ueberraschend ist vor allem auch, dass diese Wirkung mit den üblichen ausserordentlich^kleinen Dosen von Peptid, z.B. schon mit Bruchteilen eines Milligrams, erreicht werden kann.

Als ACTH-Peptide werden die natürlichen ACTH-Peptide und synthetische Peptide oder Peptidamide mit kürzerer und/oder hinsichtlich einzelner Aminosäuren abgeänderter Aminosäuresequenz bezeichnet. Als ACTH-wirksame Peptide oder Peptidamide sind z.B. diejenigen mit einer N-terminalen Sequenz bis zur bis 39. Aminosäure der natürlichen Corticotropine zu nennen. In dieser Sequenz können eine oder mehrere der Aminosäuren,vor allem der Aminosäuren 1 bis 4, fehlen wie z.B. in Angew. Chemie 83, 155 (1971) gezeigt, oder es können eine oder mehrere Aminosäuren, z.B. in den Stellungen 1-5, 11, 15 - 18 und 25 - 33 durch andere Aminosäuren^Aminosäure auch durch eine Desaminocarbonsäure ersetzt sein. So können

1 3

beispielsweise die Serinreste Serin und/oder Serin durch

2

Glycin oder Alanin, Tyrosin durch Phenylalanin, Methionin durch α-Amino-niederalkylessigsäure, worin Niederalkyl 2-4 Koh-

lenstoffatome, aufweist, z.B. Norvalin, Valin, Norleucin, Leucin,

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Isoleucin, α-Aminobuttersäure, Glutaminsäure durch Glutamin, Lysin und/oder Lysin ' durch Ornithin, Arginin '

25 durch Lysin oder Ornithin, Aminosäure durch Valin ersetzt sein. Serin kann auch z.B. durch Prolin, α- oder β-Alanin, Threonin, Propionsäure, β-Aminopropionsäure, β-Hydroxypropionsäure, Buttersäure, O"- Aminobutt ersäur e, cc-Aminoisobuttersäure, Valeriansäure, Capronsäure, £-Aminocapronsäure

f oder Phenylglycin ersetzt sein. Sämtliche Aminosäuren, aussei* •derjenigen in N-terminaler !-Stellung, haben notwendigerweise L-Konfiguration. Vorzugsweise leiten sich die neuen Salze ab von ACTH-wirksamen Peptidem deren erste Aminosäure D-Konfiguration aufweist, vor allem D-Serin; weiter werden vorzugsweise Salze von Peptiden mit einer-Kettenlänge von 18-24 Aminosäuren, vor allem mit 18 Aminosäuren verwendet. Die Peptide können insbesondere auch als C-terminale N-unsubstituiete Amide vorliegen. Bevorzugt sind fettsaure Salze von Peptiden mit einer Sequenz von 18 Aminosäuren, in erster Linie D-Ser -Lys¹'³ -β^χ~ -Corticotropin-Lys -amid. Peptide mit 25 - 39 Aminosäuren weisen im Bereich 25-33 vorzugsweise die für menschliches ACTH (vgl. Nature New Biology 23J5, 114 [1972J festgestellte Sequenz auf.

Weiter sind als Peptidbasis für die fettsauren

1 IR

Salze beispielsweise zu nennen das D-Ser -Corticotropin-Arg

amid, das D-Ser¹-Orn¹¹-Lys^17sl8-ß¹"¹⁸-Corticotropin-Lys¹⁸-, das D-Ser¹-Orn¹¹'^I5~¹⁸-ß¹"¹⁸-Corticotropin-Orn¹⁸-amid,

1 1 —1R IR-

das oc-Aminoisobutyryl -ß -Corticotropin-Arg -amid, das

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D-Ser¹-Orn^17il8-ß¹"*^l8-Corticotropin-Orn^l8-amid, das D-Ser¹-Gly-³-Lys¹⁷'^l8-ß¹""^:i8-Corticotropin-Lys^l8-amid_/ das D-Ser¹-•Nle^-Lys¹⁷'^:i8-ß¹""^:L8-Corticotropin-Lys^l8-amid_/ das D-Ser¹-Lys ' -ß -Corticotropin, das β "-Corticotropin, das D-Ser¹·^¹"¹^-Corticotropin, das ß¹"¹^-Corticotropln-Pro¹^- amid, das Glu(NH₂)⁵-ß¹"¹^-Cortiootropin_< das D-Se^-Lys¹⁷'^l8-Val¹⁹-ß¹""¹⁹-Corticotropin-Val¹⁹-amld, das D-Ser¹-Nle⁴-Lys¹⁷'^l8 Val¹^-ß¹"¹^-Corticotropin-Val¹⁹-amid, das ß¹"²⁰-Cortlcotropin-

20 1 1-?O PO

.VaI -amid, das D-Ser -ß¹ ^-Corticotropin-Val^-amid, das D-Ser¹-Lys¹⁷'^l8-ß¹*"²⁰-Corticotropin-Val²⁰-amid, das a-Aminobutyryl -Glu(NH₂)⁵-ß¹"²⁰-Cortiootropin-Val²⁰-amid, das D-Ser^Lys¹⁷' ⁱ⁸-ß¹"¹⁹-Corticotropin-Pro¹⁹-amid,das a-Aminobu'cyryl^-ß¹"²⁰-Corticotropin-Val²⁰-amid, das ß¹""²¹-

1 17 lR. 1-?1 PT

Corticotropin, das D-Ser -Lys ''■^LO-ß -Corticotropin-Lys amid, das D-Se^-Lys¹⁷'^-ß¹ "^-Corticotropin-Val²²-amid, . das'ß -^-Corticotropin, das β ^-Corticotropin-Tyr ^-amid, das β-AIa -β ~ ^-Corticotropin-Tyr -^-amid, das D-Ser¹-ß¹"²^-Corticotropin-Tyr²?-amid, das D-Ser¹-Ala^-ß¹"²-^- Corticotropin-Tyr ^-amid, das GIy -ß -^-Conticotropin-Tyr -- amid, das D-Ser¹-Lys¹⁷'^l8-ß¹*'²^-Corticotropin-Tyr²^-amid_J das ß¹"²^-Corticotropin, das Glu(NH₂)^-ß¹"^22}-Corticotropin, das D-Ser¹-Orn¹⁷'^l8-ß¹""^2it-Corticotropin, das GIy¹'^-ß¹"²^- Corticotropin, das Orn¹⁷'^l8-ß¹ ""^-Corticotropin, das Lys^17>l8-

1 „pil η k ι _p2i

β ^c -Corticotropin, das D-Ser -Nie -ß -Corticotropin,

1 1-24 1 1-24

das D-Ser -ß -Corticotropin, das D-AIa -β -Corticotropin, das D-Sor¹-Gly⁵-Lys¹⁷'^l8-ß¹""²⁴-Corticotropin, das D-Ser¹-

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Nie -Lys ^ij -ß^x -Corticotropin-Pro- -amid, D-Ser -Orn ''

l -Ph oh ι h 17 ι R τ -pi

β -Corticotropin-Pro -amid, das D-Ser -Nie -Orn '' -β

Corticotropin-Pro -amid, das D-Ser -Gly-'-Lys ''^AO-ß ^ -

pil 1 17 T R 1 -P4

Cortiootropin-Pro -amid, das D-Ser -Ly.s '' °-β^χ ^-Corti-

1 17 3 R 1-P4 pil

ootropin, das D-Ser -Lys'* °-β -Corticotropin-Pro -amid, das D-Ser^Nle -Val²⁵-ß¹""²⁵-Corticotropin-Val²⁵-amid, das D-Ser^-Nle -D-Val^-ß-'-'^-Gorticotropin-D-Val^-amid, das D-Ser¹-Nva^Jf-Lys^17ll8-Val²⁵-ß¹~²⁵-Corticotropin-Val²⁵-amid,.

1-2*5 PR "1 Il 17 IR

•as β -Cortiaotropin-Val ^-amid, das D-Ser -Nie -Lys^Xf' °- Val^-ß^'^-Corfcicotropin-Val^-aniid, das Nle^-Val²⁵-ß^x"²⁵- " Cortiootropin-Val ^-amid, das Nva -Val²^-ß¹"²^-Corticotropin-Val²⁵-amid, das Nle^2f-Lys^x7'^l8-Val²⁵»ß¹°²⁵-Corticotropin-VaI ⁵-amid, das β "-Corticotropin, das ß¹ -Corticotropin, das β "-^-Corticotropin, das ß^'-^-Corticotropin, das Cortlcotropin, das D-Ser¹-ß¹"^-Corticotropin, das

1-39 1 1-39

Cortiootropirij das cc, -Corticotropin und D-Ser -cc^ -Carticotropin.

Als Fettsäuren für die Herstellung der genannten in Wasser schwer löslichen fettsauren Salze kommen langkettige gesättigte oder ungesättigte Fettsäuren mit 12-36 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise gesättigte Fettsäuren mit 18-22 Kohlenstoffatomen, z.B. Laurinsäure, Tridecylsäure, Myristinsäure, Pentadecylsäure, PaImItinsäure, Margarinsäure, Stearinsäure, Nonadecylsäure, Arachinsäure, Eicosacarbonsäure-Cl)_s Behensäure, Lignocerinsäure (Tetracosylsäure), Cerotinsäure (Hexacosyl-

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säure), Montansäure (Octacosylsäure), Melissesäure (Triacontylsäure), Laccerinsäure (Dotriacontylsäure), Gheddinsäure (Tetratriacontylsäure), Ceroplastinsäure (Pentatriacontylsäure), Hexatriacontylsäure und entsprechende ungesättigten Säuren wie z.B. Oelsäure, Elaidinsäure, Erucasäure, Brasidinsäure, Linolsäure in Betracht. Das Peptid-Säureadditionssalz enthält die der Anzahl von basischen Gruppen (ohne Histidin) minus die Anzahl der sauren Gruppen entsprechende Anzahl Fettsäurereste.

Die Herstellung der fettsauren Peptidsalze erfolgt in für die Herstellung von Peptid-Säureadditionssalzen an sich bekannter Weise. So kann man das Peptid oder vorteilhafterweise ein wasserlösliches Säureadditionssalz des Peptides, vor allem das essigsaure Salz, in einem hydrophilen Lösungsmittel oder Lösungsmittelgemisch mit der Fettsäure oder einem Alkalimetallsalz davon, vorteilhaft gelöst in einem hydrophilen Lösungsmittel, vermischen und das schwerlösliche fettsaure Salz in bekannter Weise abtrennen, z.B. durch Filtration oder durch Abdampfen des Lösungsmittels oder Lösungsmittelgemisches und gegebenenfalls Lyophilisation. Als hydrophile Lösungsmittel sind vor allem zu nennen gegebenenfalls substituierte wasserlösliche Alkohole wie Niederalkanole mit 1-4 Kohlenstoffatomen, vor allem Aethanol, Isopropanol, Trifluoräthanol, ferner Dimethylsulfoxid, Dimethylformamid, Eisessig. Bevorzugt sind Gemische von organischem Lösungsmittel und Wasser.

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Diie fettsauren Salze können, wie bereits erwähnt, an einem festen Trägermaterial, besonders einem Aluminium-Fettsäuresalz, adsorbiert werden.

Das Adsorbat des Peptids am Aluminium-Fettsäuresalz kann in verschiedener Weise hergestellt werden. So kann man das Peptid in einem wässerigen oder organischen Lösungsmittel, wie Wasser, Alkoholen, Aceton, vorzugsweise einem leicht durch Abdampfen entfernbaren Lösungsmittel, z.B. einem Niederalkanol wie Aethanol, Isopropanol, besonders Methanol, lösen oder suspendieren, das Aluminium-Fettsäuresalz zufügen und aus der so erhaltenen Suspension das Lösungsmittel entfernen, z.B. durch Abdampfen im Vakuum.

Man kann aber auch das Aluminium-Fettsäüresalz in einem organischen Lösungsmittel, z.B. unsubstituierten oder chlorierten Kohlenwasserstoffen wie Benzol, Chloroform, Methylenchlorid, Aethylenehlorid, kolloidal lösen, in dieser kolloidalen Lösung das Peptid suspendieren und dann das Lösungsmittel durch Lyophilisieren oder Abdampfen entfernen. Falls man lyophilisert, erhält man ein strukturiertes Adsorbat.

Das Mengenverhältnis von Peptid zu Aluminium-Fettsäuresalz als Adsorptionsmittel beträgt insbesondere 1:2 bis 1:20, vorzugsweise 1:5 bis 1:10.

Bei der Herstellung pharmazeutischer Präparate in Form öliger Lösungen oder Suspensionen, welche fettsaure Salze von ACTH-Peptiden enthalten, verwendet man als öliges Lösungs-

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oder Suspensionsmittel entweder ein Gel, wie es in der Schweizer Anmeldung Ges. Nr. 2299/72 (Case 4-8023) .beschrieben ist, oder, insbesondere im Fall von Peptidsalz-Adsorbaten, einen flüssigen Fettsäureester (OeI), der als Säurekomponente eine langkettige Fettsäure mit 8-36, besonders 12 - 22 Kohlenstoffatomen, wie z.B. die oben erwähnten Fettsäuren aufweist. Die Alkoholkomponente des Esters hat vorzugsweise maximal 6 Kohlenstoffatome und ist ein ein- oder mehrwertiger, z.B. ein-, zwei- oder dreiwertiger Alkohol, z.B. Methanol, Aethanol, Propanol, Butanol oder Pentanol oder deren Isomere, vor allem aber Glycol oder Glyzerin. Als Fettsäureester sind daher beispielsweise zu nennen: Aethyloleat, Isopropylmyristat, Isopropylpalmitat, "Labrafil M 2735" (Polyoxyäthylenglyzerintrioleat der Firma Gattefosse, Paris), "Miglyol 812" (Triglyzerid gesättigter Fettsäuren der Kettenlänge Co bis C-, ^ der Firma Chemische Werke Witten/Ruhr, Deutschland), besonders aber vegetabile OeIe wie Baumwollsaatöl, Mandelöl, Olivenöl, Ricinusöl, Sesamöl, Sojabohnenöl, RUböl, vor allem Erdnussöl.

Zur Herstellung öliger Lösungen oder Suspensionen wird das fettsaure Peptidsalz, gegebenenfalls an einem Träger adsorbiert, mit einem OeI oder einem öligen Gel, wie in der Schweizer-Anmeldung Ges. Nr. 2299/72 (Case 4-r8023) beschrieben, vermischt. Dabei kann man beispielsweise so vorgehen, dass man

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die erforderliche Dosis des Peptidsalzes ode.r Peptidsalzadsorbates mikronisiert, z.B. auf eine Teilchengrösse von höchstens 5OXl₅ vorzugsweise unter 20/1, und mit einer kleinen Menge des OeIs oder Gels verreibt und das erhaltene Konzentrat dann mit dem restlichen OeI bzw. Gel verdünnt, oder man kann das Peptidsalz in einem pharmazeutisch akzeptierbaren Lösungs- oder Konservierungsmittel, z.B. Benzylalkohol oder vorzugsweise tert.Chlorbutanol, auflösen und dann mit dem OeI bzw. Gel. vermischen. - . -

Zur Herstellung wässeriger Suspensionen wird das wie

oben mikronisierte fettsaure Peptidsalz mit wässerigen Medien, vorzugsweise physiologischer Natriumchloridlästmg, wässeriger Mannitlösung oder einem anderen geeigneten wässerigen Injektionsmedium, und gegebenenfalls einem Konservierungsmittel, z.B. Benzylalkohol in beliebiger Reihenfolge vermischt.

Die Herstellung der Injektionspräparate erfolgt unter antimikrobiellen Bedingungen. Dabei kann man so vorgehen, dass man die Wirkstoffe und Hilfsstoffe vorgängig der Abfüllung einer geeigneten antimikrobiellen Behandlung unterzieht. Das Abfüllen der keimfreien Präparate in geeignete Behälter sowie das Verschliessen erfolgt ebenfalls unter antimikrobiellen Bedingungen.

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Die in den Präparaten anzuwendende wirksame Dosis des Peptids ist diejenige Einzeldosis, die bei Anwendung des Peptids in Form wässeriger Suspensionen oder Lösungen üblicherweise verabreicht wird. Diese Dosis liegt z.B. bei 0,1 bis 3,0 mg/ml.

Die nachstehenden Beispiele dienen zur Illustration der Erfindung. Die Temperaturen sind in Celsiusgraden angegeben.

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Beispiel 1 :

1 17 18 1 1f! 18

200 mg D-Ser -Lys '> -β -Corticotropin-Lys -

amid, Hexaacetat-hydrat werden in 24 ml Aethanol und 1,6 ml Wasser gelöst, und es wird hierauf eine Lösung von 88 mg Laurinsäure in 10 ml Aethanol zugegeben. .Man dampft zur Trockne ein, trocknet den Rückstand über Nacht im Vakuum über Aetznatron, löst ihn dann unter Erwärmen in 25 ml tert.Butanol und 5 ml Wasser, filtriert und lyophilisiert das Filtrat. Man trocknet den Rückstand nochmals im Vakuum über Aetznatron. Man erhält 265 mg laurinsaures Salz als leichtes Pulver. Die Löslichkeit des Produktes in Wasser bei 24 ist kleiner als 0,1 % (essigsaures Salz>10%).

Beispiel 2: .

Man verfährt wie im Beispiel 1 unter Verwendung einer Lösung von 100 mg Myristinsäure in 10 ml Aethanol. Man erhält 231 mg myristinsaures Salz als leichtes Pulver. Seine Löslichkeit in Wasser bei 24° ist kleiner als 0,17o. '

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Beispiel 3 :

Man verfährt wie im Beispiel 1, indem man eine Lösung von 113 mg Palmitinsäure in 12 ml Aethanol vcr- . v?endet. Man erhält 304,mg palmitinsaures Salz als farbloses, leichtes Lyophilisat. Die Löslichkeit in Wasser bei 24° ist kleiner als 0,1%,:_::._{: ιΓΟ}._η,_ηί,,

■ - -■■ ;™ es

Beispiel 4 :

. Man verfährt wie im Beispiel 1, unter Verwendung eine" Lösung von 149. rig Behensäure in 15 ml Feinsprit. Dabei tritt sofortige Fällung des behensauren Salzes auf. Man nutscht ab, wäscht mit einem Feinsprit-Wasser (19:1)-Gemisch nach und trocknet im Vakuum über Aetznatron. Man erhält 330 mg eines festen, wasserunlöslichen Pulvers vom F. 141 - 146°.

Beispiel 5:

Man verfährt wie im Beispiel 1 unter Verwendung einer Lösung von 124 mg Stearinsäure in 12 ml Aethanol. Man erhält 300 mg stearinsaures Salz als wasserunlösliches Pulver.

Beispiel 6: 200 mg D

in, Pentaacetat-hydrat werden·in 24 ml Aethanol und 2 ml Wasser ge-

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löst, und·es wird hierauf eine Lösung von 110, mg Stearinsäure in 11. ml Aethanol zugegeben. Dann arbeitet man auf, wie im Beispiel 1 beschrieben. Man erhält 290 mg stearinsaures Salz des Nonadecapeptids als leichtes, farbloses Lyophilisat, das in Wasser schwer löslich ist.

Beispie], 7 :

Man arbeitet wie im Beispiel 1 angegeben, unter Verwendung von 200 mg D-Ser -Lys * -ß -Corticotropin, Pentaacetat-hydrat und 70 mg Laurinsäure. Man erhält 245 mg Läurat als leichtes Lyophilisat..

"- - Man löst 500 mg D-Ser¹-Gly³-Lys^17>18-ß¹"^:L-'-Corti""'

■to ■

cotropin-Lys -amid, Hexaacetat-hydrafc in 100 ml Feinspri-t durch Zusatz von 10 ml Wasser, gibt dann eine Lösung von 310 mg Stearinsäure in 30 ml Feinsprit zu und dampft zur Trockne ein. Den Rückstand trocknet man 24' Stunden im Vakuum über Aetznatron, löst ihn unter Erwärmen in einem tert.Butanol-Wasser(4:1)-Gemisch auf und lyophilisiert· die Lösung. Den Rückstand trocknet man wieder im. Vakuum über Aetznatron. Man erhält 735 mg Lyophilisat, das in Wasser praktisch unlöslich ist.

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Beispiel 9 :

Man verfährt wie im Beispiel 4 beschrieben, aber

1 "i 17 1R 1 —1 R unter Verwendung von 200 mg D-Ser -GIy -Lys · -ß

1 R
Corticotropin-Lys -amid, Hexaacetat-hydrat und erhält ca. 200 mg B eh en at als festes Pulver, das sich in Wasser nicht lösen lässt.

Beispiel 10:

(R) 1-24 '

1 g Synacthen⁰^ (ß -Corticotropin,Hexaacetathydrat) werden in 150 ml Feinsprit und 15 ml Wasser gelöst. Dann gibt man eine Lösung von 465 mg. .Stearinsäure ±ίι 50 inl Feinsprit zu, dampft ein, trocknet, den Rückstand im Vakuum über Aetznatron, löst ihn hierauf in einem tert.-Butanol-Wasser (4:1) -Gemisch unter Erwärmen auf und lyophilisiert die Lösung. Man trocknet den Rückstand im Vakuum über Aetznatron und erhält 1,25 g stearinsaures Salz des Tetracosapeptids als in Wasser schwer lösliches Pulver.

Beispiel 11 :

Man löst 1,0 g ρ " -Corticotropin-Hexaacetat-Hydrat in 15 ml Wasser, gibt 150 ml Feinsprit zu und versetzt mit einer warm bereiteten Lösung von 560 mg Behensäure in 60 ml Feinsprit. Die flockige Fällung wird nach

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18 Stunden Stehen bei 2 abgenutscht, mit einem Feinsprit "Wasser (15: 1) -Gemisch gewaschen und im Vakuum über Aetznatron getrocknet. Man erhält' 1,05 g Behenat als in Wasser unlösliches Pulver vom F. 146-225° (Zersetzung).

Beispiel 12 :

Man bereitet auf übliche Weise unter antimikrobiellen Bedingungen eine Suspension in Erdnussöl, die pro ml 2% Benzylalkohol sowie 0,5 mg Behenat von- D-Ser -Lys *

■ι ι ο 18 ·

β . -Corticotropin-Lys -amid enthält. Man homogenisiert bis. zur Partikelgrösse unter 20 JJb. ·■ ·"'."" ', · Das Präparat zeigt, in Dosen von 0,1 mg/kg, an der' Ratte bei subcutaner Injektion im Test-nach Desaulles und Rittel, Memoirs of the Soc. for Endocrinology No. 17 (Cambridge, at the University Press 1968, S. 124-137), eine corticotrope Wirkung von einer liber 72 Stunden anhaltenden Dauer.

Beispiel 13 : - ·

Man bereitet wie im Beispiel 12 angegeben eine zu einer Partikelgrösse unter 20 a homogenisierte Suspension folgender Zusammensetzung: Sesamöl 1 ml

Benzylalkohol : 10 mg Stearat vom D-Ser -Lys * " -ß -Corticotropin : 2 mg.

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Im oben.angegebenen Test nach Desaulles und Rittel zeigt das Präparat, in Dosen von 0,3 mg/kg an der Ratte eine Wirkdauer von mehr als 90 Stunden.

Beispiel 14:

Man bereitet wie im Beispiel 12 angegeben eine zu einer Partikelgrösse unter 20 lh homogenisierte Suspension folgender Zusammensetzung: Erdnussöl: 1 ml

Benzylalkohol: 15 mg

1 1 "7 1R ι ίο Stearat von D-Ser -Lys '' ' -ß --Corticotropin-

-JO .

. . ; Lys' ~cimid : 0,3 mg." Diese Einzeldosis wird z.B, 1 bis 2 mal pro Woche appliziert

Beispiel 15 :

Man bereitet, wie im Beispiel 12und 13 angegeben, eine zu einer Partikelgrösse unter 20LL·homogenisierte Suspension folgender Zusammensetzung:

Erdnussöl : 1 ml

Benzylalkohol : 20 mg

Stearat von D-Ser¹-Gly³-Lys¹⁷»¹⁸-p¹"¹⁸-

1 R

Corticotropin-Lys -amid· 0,1 mg.

3098 34/1 164

Beispiel 16 :

Man bereitet, wie in Beispiel 15, eine Suspension folgender Zusammensetzung : ' Erdnussöl : 1 ml

Benzylalkohol : 20"mg

τλ ο 1ρ/3_τ 17,18 .1-18 Stearat von D-Ser -GIy rLys -β

Corticotropin-Lys -amids . 1 rag.

• " . Beispiel 17 : - - . -·"..·.

'"'■■· Man bereitet, wie .im Beispiel 15_E eine Suspension folgender Zusammensetzung : ' ' ·

Erdnussöl : 2 ml

Benzylalkohol : ' 20 mg

Stearat von D-Ser¹-Gly³-Lys^179l8-ß¹""¹⁸-» Corticotropin-Lys -amid : ' ■■ 1 mg.

Beispiel 18 :

Man bei~eitet wip im Beispiel 15 eine Suspension folgender Zusammensetzung :

Erdnussöl : '2 ml Benzylalkohol : 20 mg

Palmitat von D-Ser -Lj'S -ß - .

rtxcotropm-Lys -amid : I mg«

0 9 8 3 4/1164

Beispiel 19 :

*- ■ ■ ■ ι ■ ■■ ■■ ■■■■ ■ ι ' ■ — _V

Man bereitet wie im Beispiel 15 eine Suspension folgender Zusammensetzung :

Sesamöl : ^{X ml}

Benzylalkohol : - . ^{20 m}S

S tear at von Synacthert^ : 2 mg.

Beispiel 20. ;

. Man bereitet wie im Beispiel 15 eine_; Suspension folgender Zusammensetzung : . .; .''.··,■■ Sesamöl : ' . 2 ml

Benzj'lalkohol : ' 40 mg

Stearat von Synacthen⁰ : 1 mg.

Beispiel 21 _:

Man bereitet wie im Beispiel 15 eine Suspension folgender Zusammensetzung :

Erdnussöl : 2 ml

Benzylalkohol : ' 20 mg

Beben at von Synactherr^ : 3

309834/1164

Beispiel 22 ;

Man bereitet eine Suspension folgender
Setzung : .

Physiologische Kochsalzlösung : Z ml

Benzylalkohol ' 20 mg,

Behenat von Synaethen^ : 5 mg.

Beispiel 23 ;

Man bereitet eine Suspension folgender Zusaininen-

physiologische Kochsalzlösung : 1

Benzylalkohol "10 rag

Behenat von Synacthen^ 1,5 rag*

Beispiel 24 :

$ian bereitet eine Suspension folgender
Setzung";

Physiologische Kochsalzlösung X ΐαΐ

Benzylalkohol 10 mg

Behenat von D-Sex" -Lys ^J -ß

1 R

Gorticotropin-Lys -aroid O₁S rag«

30983A/1T64

Beispiel 25 :

Man bereitet eine Suspension folgender Zusammensetzung:

Physiologische Kochsalzlösung : . 2 ml

Benzylalkohol : 40 mg Stearat von D-Se^-Lys¹⁷'¹⁸^¹'¹⁸-

Corticotropin-Lys -amid : 2 rag.

- Beispiel 26 : ^:

- Man bereitet eine Suspension folgender Zusammen- Setzung:

Physiologische Kochsalzlösung : 2 ml

Benzj'lalkohol : · 20 mg

Behenat von D-Ser — GIy —Lys *

1 ι ο 18'

β -Corticotropin-Lys -amid 1,5 mg.

Beispiel 27 :

Man bereitet eine Suspension folgender Zusammensetzung :

Physiologische Kochsalzlösung : 1 ml

Benzylalkohol : 10 mg

Behenat von D-Ser¹—Gly³ —Lys^17>18-

Τ 1 Q IO

β -Corticotropin-Lys -amid : 0,5 mg.

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* Beispiel 28 :

Man bereitet eine Suspension folgender "Zusammensetzung: . Physiologische Kochsalzlb'sung : ' 2 ml

Benz3'lalkohol : 20 mg

1 17 ίο ι in
Behenat von D-Ser —Lys '-ß -

Corticotropin _ - " ' 3 mg.

',..·. Beispiel. 29:

·/-■ ■ Man bereitet .eine Suspension'folgender ZxisammenW .'---.- ·_:. Setzung :

Physiologische Kochsalzlb'sung ': 2 ml

Benzylalkohol 20 mg

Laurat von D-Ser¹-Lys¹⁷'¹⁸-ß ¹^⁸- ■

1 8
Corticotropin-Lys -amid : 1,3 mg.

Beispiel 30: ·

Man er^-7'ärmt 2,0 ml eines Aluminiunidistearat-Erdnussöl- ' Gels auf ca. 30-40° und vermischt es mit der 6 mg freiem Peptid

Ί 17 Iß T-IR

entsprechenden Menge von D-Ser -Lys ' -ß -Corticotropin-

Lys -amid-llexastearat. Die Mischung wird durch Zugabe von weiterem Gel auf 20,0 ml unter Rühren verdünnt, so dass 0,3 mg Peptid pro ml Gels enthalten sind. In Ampullen antimikrobiell abge-

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füllt, kann das Präparat z.B. 1«2 mal pro Woche verabreicht werden.

Das Gel kann wie folgt hergestellt werden:

Zn 100 ml Erdnussöl wei-den 2,0 g gepulvertes Aluminiuradistearat gegeben. Diese Suspension wird gut durchgemischt und unter Rühren und langsamem Erwärmen (2 - 3* pro Minute) auf 140° erhitzt (bei ca. 115°~125° bildet sich ein klares Gel). Dann wird die Heizung abgestellt und weiter gerührt, bis die Temperatur auf 120° gefallen ist. Von dieser Temperatur an IKsst man das .Gel ohne Rühren auf Zimmertemperatur abkühlen.

..·-·''■ ·-■■;■".·■ -^: -■' Beispiel. 31: ; . . ' ' ■

250 mg Alurniniumdlstearat werden in 25 ml Benzol solange auf 50-60° erhitzt, bis eine klare kolloidale Lösung entstanden ist. Darin wird die 50 mg freiem Peptid entsprechende Menge D-Ser -

Λ 7 IR 1—1 R 18

Lye * -β ** -Corticotropin-Lys -amid-Hexastearat suspendiert.

Die Suspension wird bei ~70° eingefroren und bei -10 bis -20° lyophilisiert. Das lyophilisierte Adsorbat, das eine charakteristische Struktur aufweist, wird fein verrieben und in 50 ml Erdnussöl» dem 250 mg Phenol zugesetzt sind, suspendiert. Die Suspension wird unter antimikrobieHen Bedingungen in Ampullen zu X ml Inhalt abgefüllt. Diese enthalten 1 mg Peptid,

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Beispiel 32:

Eine 50 mg freiem Peptid entsprechende Menge von D-Ser -

17 18 1 —18 18

Lys ' -ß -Corticotropin-L3^rs -amid-Hexastearat wird in 25 ml Methanol gelöst. In der Lösung werden 250 mg Aluminiumdi~ .stearat suspendiert, die vorher mehrmals mit Methanol digeriert worden sind. Das Methanol wird dann im Vakuum bei 45° abdestilliert. Der Rückstand wird bei 30-40° im Vakuum getrocknet. Das sehr feine Adsorbat wird in 50 ml Erdnussöl, in dem vorher 250 mg Phenol gelöst worden sind, suspendiert. Man füllt die Suspension unter antind.hrobiellen Bedingungen in Ampullen-zu 1 ml Inhalt ab, Sie enthalten je 1 mg Peptid. " '-■" . . - .

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Claims

Patentansprüche :

1. Verfahren zur Herstellung in Wasser schwer löslicher Säureadditionssalze von ACTH-Peptiden, dadurch gekennzeichnet, dass man in an sich bekannter Weise Säureadditionssalze der Peptide mit gesättigten oder ungesättigten Fettsäuren mit einer Kettenlänge von 12-36 Kohlenstoffatomen herstellt.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man Salze mit gesättigten Fettsäuren einer Kettenlänge von 18 - 22 Kohlenstoffatomen herstellt.

3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man das Behenat herstellt.

4. Verfahren nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass man die fettsauren Salze dadurch herstellt, dass man das Peptid oder ein wasserlösliches Säureadditions· salz des Peptides in einem hydrophilen Lösungsmittel oder Lösungsmittelgemisch mit der Fettsäure oder einem Alkalimetallsalz davon vermischt und das gebildete schwerlösliche fettsaure Salz in an sich bekannter Weise abtrennt.

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5. .Verfahren nach einem der Ansprüche 1-4, dadurch gekennzeichnet j dass man ausgeht von ACTH-wirksamen Peptiden oder Peptidamiden mit einer N-terminalen Sequenz bis zur

16. bis 39. Aminosäure der natürlichen Corticotropine, worin gegebenenfalls eine oder mehrere der Aminosäuren 1-5, 11, 15 - 18 und 25 - 33 durch andere Aminosäuren und/oder Aminosäure 1 durch eine Desaminocarbonsäure ersetzt sind und/oder eine oder mehrere der Aminosäuren 1-4 der natürlichen Sequenz fehlen.

6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-4, dadurch gekennzeichnet j dass man ausgeht von ACTH-wirksamen Peptiden oder Peptidamiden mit einer Sequenz von 18 - 24, vorzugsweise 18 - 19 Aminosäuren vom Aminoende der Corticotropine, worin gegebenenfalls eine ,oder mehrere der Aminosäuren 1 - 5, 11 und 15 - 18 durch andere Aminosäuren ersetzt sind.

7. ' Verfahren nach einem der Ansprüche 1-4, dadurch gekennzeichnet, dass man ausgeht von ACTH-wirksamen Peptiden oder Peptidamiden mit einer Sequenz von 18 - 39 Aminosäuren, worin die erste Aminosäure eine Aminosäure mit D-Konfiguration, vor allem D-Serin, ist.

8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-4, dadurch gekennzeichnet, dass man ausgeht von D-Ser -Lys " ' -

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_X—18 r, . . . -τ 18 .j

β -Cortieotropm-Lys -amid.

9. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-4, dadurch

1 "ί IT IO

gekennzeichnet, dass man ausgeht von D-Ser -Gly -Lys ' p " -Corticotropin-Lys -amid.

10. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-4, dadurch gekennzeichnet j dass man ausgeht von D-Ser -Lys ' -ß Corticotropin oder dessen C-terminalem Amid.

11. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-4, dadurch

1-24 gekennzeichnet, dass man ausgeht von β -Corticotropin oder dessen C-terminalem Amid.

12. Verfahren zur Herstellung von fettsauren Säureadditionssalzen von ACTH-Peptiden wie in den Beispielen beschrieben.

13. Säureadditionssalze von ACTH-Peptiden mit gesättigten oder ungesättigten Fettsäuren einer Ke.ttenlänge von 12 - 36 Kohlenstoffatomen.

14. Säureadditionssalze von ACTH-Peptiden mit gesättigten Fettsäuren einer Kettenlänge von 18 - 22 Kohlenstoffatomen.

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15. Das Behenat von ACTH-Peptiden.

16. Fettsaure Salze von ACTH-Peptiden gemäss den Ansprüchen 13 - 15, welche als ACTH-Peptide Peptide oder Peptidamide mit einer N-terminalen Sequenz bis zur 16. bis 39. Aminosäure der natürlichen Corticotropine, worin gegebenenfalls eine oder mehrere der Aminosäuren 1-5, 11, 15 - 18 und 25 - 33 durch andere Aminosäuren und/oder Aminosäure 1 durch eine Desaminocarbonsäure ersetzt sind und/oder eine oder mehrere der Aminosäuren 1-4 der natürlichen Sequenz fehlen, enthalten.

17. Fettsaure Salze von ACTH-Peptiden gemäss den Ansprüchen 13 - 15, welche als ACTH-Peptide Peptide oder Peptidamide mit einer Sequenz von 18 - 24, vorzugsweise 18 - 19 Aminosäuren vom Aminoende der Corticotropine, worin gegebenenfalls eine oder mehrere der Aminosäuren 1 - 5, und 15 - 18 durch andere Aminosäuren ersetzt sind, enthalten.

18. Fettsaure Salze von ACTH-Peptiden gemäss den Ansprüchen 13 - 15, welche als ACTH-Peptide Peptide oder Peptidamide mit einer Sequenz von 18 - 39 Aminosäuren, worin die erste Aminosäure eine Aminosäure mit D-Konfiguration, vor allem D-Serin, ist, enthalten.

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19. Fettsaure Salze von ACTH-Peptiden gemäss den Ansprüchen 13 - 15, welche als ACTH-Peptid D-Ser¹-Lys¹⁷'¹⁸-

1 _-j ο ίο

p -Corticotropin-Lys -amid enthalten. .

20. Fettsaure Salze von ACTH-Peptiden gemäss den Ansprüchen 13 - 15, welche als ACTH-Peptid D-Ser¹-Gly³-Lys¹⁷'¹⁸·

1 — 1 8 18

β ~ -Corticotropin-Lys -amid enthalten.

21. Fettsaure Salze von ACTH-Peptiden gemäss den Ansprüchen 13 - 15, welche als ACTH-Peptid D-Ser^Lys¹⁷'¹⁸-

p -Corticotropin oder dessen C-terminales Amid enthalten.

22. Fettsaure Salze von ACTH-Peptiden gemäss den An-

Ί O /

Sprüchen 13 - 15, welche als ACTH-Peptid β -Corticotropin oder dessen C-terminales Amid enthalten.

23. Fettsaure Salze von ACTH-Peptiden wie in den Beispielen beschrieben.

24. Pharmazeutische Präparate enthaltend fettsaure Salze von ACTH-Peptiden gemäss den Ansprüchen 13 - 23.

25. Pharmazeutische Präparate in Form öliger Suspensionen enthaltend fettsaure Salze von ACTH-Peptiden gemäss den Ansprüchen 13-23.

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26. Pharmazeutische Präparate in Form wässeriger Suspensionen enthaltend fettsaure Salze von ACTH-Peptiden gemäss den Ansprüchen 13-23.

27. Pharmazeutische Präparate wie in den Beispielen beschrieben.

CIBA-GEIGY AG

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