DE2216496C3 - Reagenz und Verfahren zur Bestimmung des Thyroxingehaltes von Blutserum - Google Patents
Reagenz und Verfahren zur Bestimmung des Thyroxingehaltes von BlutserumInfo
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Description
55 gute Ergebnisse, doch werden von Zeit zu Zeit auch ungenaue und zu hohe T4-Werte gefunden. Die Re-
produzierbarkeit von Wiederholungsbestimmungen
ist manchmal nicht annehmbar.
Bei der Methode gemäß der US-PS 34 14 383 ist die
)ie Erfindung betrifft ein Reagenz mit den Merkma- 60 Menge des im Blut vorhandenen Thyroxins eine
nach dem Oberbegriff des Patentanspruchs 1 sowie lineare Funktion des Verhältnisses Radioaktivität in
Verfahren zur Bestimmung des Thyroxingehaltes der Reagenz-Lösung vor Entfernung einer Ionenaus-Blutserum
mit den Merkmalen nach dem Oberbc- tausch-Membrane zur Radioaktivität nach Entferf
des Patentanspruchs 7. nung dieser Membrane, wie sie mit herkömmlichen
!in solches Reagenz und ein solches Verfahren sind 65 Zählgeräten gemessen werden kann. Dieses Verhältnis,
der US-PS 34 14 383 bereits bekannt. hier in der Folge precount-postcount-Verhältnis ge-
)as im Serum befindliche Protein thyroxinbindendes nannt, ist relativ hoch, wenn die Probe eine große
bulin (TBG) hat eine vergleichsweise hohe und Menge Thyroxin enthält, weil eine relativ große Menge
3 4
von radioaktivem Thyroxin am Globulin ersetzt und zung des T4 in der Standardlösung bewirkt, daß weniaus
der Lösung durch den Ionenaustauscher entfernt ger stabiles T4 zur Verfügung steht, um radioaktives
wird. Wenn die zugefügte Menge des Thyroxins klein T4 aus dem TBG in Freiheit zu setzen. Dadurch wird
ist, dann ist das precount-postcount-Verhältnis eben- eint zu geringe Menge von radioaktivem T4 durch das
falls'niedrig. Bei dieser Methode trit. nun gelegentlich 5 Ionenaustauscherharz absorbiert, die postcount- Mescine
solche Störung auf, daß bei der Untersuchung sung ist zu hoch und das Verhältnis precount zu
eines Standardserums mit einer bestimmten Menge postcount ist zu niedrig. Wenn erfindungsgemäß dem
Thyroxin ein abnorm niedriges precount-postcount- Reagenz ein Chelatbildner hinzugefügt wird, dann wird
Verhältnis auftritt. Dieses Problem tritt auch mit dieses Problem eliminiert, und zwar wahrscheinlich da-Standardlösungen
auf, die zur Erstellung des Dia- 10 durch, daß die Kupfer- und Eisenionen komplex gegramms
verwendet werden. Wertet man dann die Er- bunden werden und so eine katalytische Zersetzung des
gebnisse von Untersuchungen unbekannter Proben Thyroxins verhindert wird.
aus, dann werden zu hohe Werte gefunden. Es ist des- Es wurde festgestellt, daß zuverlässige Ergebnisse
halb erforderlich, die Reproduzierbarkeit und Ge- nur dann erhalten werden, wenn der Chelatbildner dem
nauigkeit der Methode gemäß der US-PS 34 14 383 zu 15 TBG-Reagenz zugefügt wird. Das mag darin begrünverbessern,
det sein, daß im TBG-Reagenz bereits Ionen des Kup-Der vorliegenden Erfindung liegt nun die Aufgabe fers und des Eisens vorhanden sind. Diese Ionen gelanzugrunde,
die oben beschriebenen Nachteile des be- gen wahrscheinlich in die TBG-Lösung, wenn diese
kannten Verfahrens zu beseitigen und ein Reagenz zur durch einen Ionenaustauscher läuft, um das natürlich
Bestimmung des Thyroxingehaltes von Blutserum zur 20 vorhandene Thyroxin zu entfernen. Es wurde festge-Verfügung
zu stellen, das es gestattet, die bislang stellt, daß die Zufügung von Chelatbildnem zu den
aufgetretenen Meßfehler zu eliminieren und eine hohe Standardlösungen nicht im genügenden Maße die oben
Genauigkeit und Reproduzierbarkeit des Bestim- beschriebenen Störfaktoren eliminiert. Nur das Hinzumungsverfahrens
zu gewährleisten. fügen des Chelatbildner zur Reagenzlösung erbringt
Diese Aufgabe wird durch die Erfindung gelöst. 25 zuverläßige Werte.
Gegenstand der Erfindung ist daher ein Reagenz Wie im Beispiel 3 unten aufgezeigt wird, stellen sich
zur Bestimmung des Thyroxingehaltes von Blutserum die gelegentlichen Ungenauigkeiten bei der Methode
aus einer gepufferten Lösung von radioaktiv markiertem gemäß der US-PS 34 14 383 mehr in abnorm niedrigen
Thyroxin, das dadurch gekennzeichnet ist, daß es precount-postcount-Verhältnissen bei den Standardweiterhin
einen Chelatbildner enthält. 30 Lösungen als bei den bekannten Lösungen dar. Die
Gegenstand der Erfindung ist ferner ein Verfahren Gründe hierfür sind noch nicht völlig geklärt, aber es
zur Bestimmung des Thyroxingehaltes von Blutserum kann daran liegen, daß die Standardlösungen keine
unter Verwendung von radioaktivem Thyroxin als Serumextrakte sind, während dagegen die unbekannten
Tracer, bei welchem man zu einer bekannten Menge Proben Serumextrakte sind, die möglicherweise natüreines
Reagenzes aus einer thyroxinbindendes Globulin 35 lieh vorkommende Substanzen enthalten, die eine
und radioaktives Thyroxin enthaltenden Lösung a) durch Metallionen initiierte Zersetzung des Thyroxins
einen alkoholischen Extrakt einer Blutserumprobe, verhindern. Somit kann die erfindungsgemäße Zugabe
deren Thyroxingehalt zu bestimmen ist, und b) ein eines Chelatbüdners zu dem TBG-Reagenz die Mög-Ionenaustauscherharz
hinzufügt, die Lösung eine be- lichkeit einer Zersetzung von Thyroxin, hervorgerufen
stimmte Zeitspanne in Kontakt mit dem Ionenaus- 40 durch die Standardlösung oder durch die unbekannte
tauscherharz beläßt, dann das Ionenaustauscherharz Serumprobe, verhindern.
von der Globulinlösung abtrennt und die Radioaktivi- Es liegt eine große Auswahl von chelatbildenden
tat der Globulinlösung mit der von Globulinlösungen Reagenzien vor, die verwendet werden können; die Art
vergleicht, zu donen bekannte Mengen stabilen Thy- des; zu verwendenden Chelatbüdners ist nicht kritisch,
roxins, gelöst im gleichen Volumen Alkohol gleicher 45 Besonders brauchbare Chelatbildner sind Aminopoly·
Provenienz wie der im alkoholischen Extrakt der Blut- carbonsäuren, wie Äthylendiamintetraessigsäurc
serumprobe, hinzugefügt wurden, das dadurch gekenn- (EDTA) und deren Salze, wie Alkalisalze. Andere verzeichnet
ist, daß man dem Reagenz einen Chelatbildner wendbare Aminopolycarbonsäureverbindungen sine
zusetzt. Nitrilotriessigsäure, Diäthylentriaminpentaessigsäure
Die Erfindung wird an Hand der Zeichnungen er- 50 N-Hydroxyäthylendiamintetraessigsäure,l,2-Di-aminc
läutert. cyclohexantetraessigsäure und die entsprechender
F i g. 1 zeigt Serum-T4-Werte, die nach der Methode Salze dieser Säuren. Andere Chelatbildner, die erfin
von Brown unter Anwendung einer normalen dungsgemäß verwendet werden können, sind z. B. De
TBG-T4-Reagenzlösung erhalten worden sind; feroxamin, Natriumdiäthylthiocarbamat, Hydralazin
F i g. 2 zeigt falsche, zu hohe T4-Werte des gleichen 55 Methisazon, 8-Hydroxychinolin, 0-Mercaptovahn, Ν
Serums, die durch ein abnormes TBG-radioaktives- Acetyl-ß-mercaptovalin, 5-Amino-l-phenyl-l H-tetra
T4-Reagenz hervorgerufen wurden; zol, Isonicotinsäurehydrazid und 2,3-Dimercapto-l
Fi g. 3 zeigt normale Serum-T4-Werte des gleichen propanol.
Serums nach Verwendung einer TBG-T4-Reagenzlö- Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung
sung wie in F i g. 2, zu der 0,1 mg des Dinatriumsalzes 60 noch weiter,
der Äthylendiamintetraessigsäure pro ml Reagenz hinzugefügt worden sind. Beispiel 1
der Äthylendiamintetraessigsäure pro ml Reagenz hinzugefügt worden sind. Beispiel 1
Es kann angenommen werden, daß die gelegentlich
auftretenden Ungenauigkeiten bei Verwendung der Zu 78 ml Serum werden 1850 ml einer Barbitai
Methode gemäß der US-PS 34 14 383 auf eine kataly- 65 pufferlösung von pH 8,6 hinzugefugt, die 2,5)/„ rsa
tische Zersetzung des T4 in der Standardlösung zu- triumbarbital und 0,7% Natnumazid als Bakterie
rückzuführen ist, wenn das Reagenz Spuren von Metall- statikum enthält. Der pH-Wert wird mit Salzsaure ein
ionen, wie Cu++, Fe+++ u. dgl., enthält. Eine Zerse*- gestellt. Hierzu wird eine kleine Menge von radioakti
vem T4, ungefähr 0,13 mCi, hinzugefügt, das als Tracer
zur Bestimmung der Extraktionsrate benötigt wird.
Die Extraktionskolonne wird wie folgt hergestellt:
Eine genügende Menge von Ionenaustauscher wird in eine passende Glassäule eingefüllt; das Volumen
sollte etwa 1000 ml betragen, die Durchflußmenge etwa 10 ml/Minute. Am geeignetsten ist ein stark basischer
Anionenaustauscher mit quarternären Ammoniumbasen. Es können aber auch andere Anionen- oder Kationenaustauscher
verwendet werden.
Der Ionenaustauscher wird in Wasser aufgeschlämmt und auf die Säule gegeben. Über der Säule sollte stets
eine Wasserschicht stehen. Die Säule wird dann mit einem Behälter verbunden, der die zu extrahierende
Serumlösung enthält. Die Durchflußgeschwindigkeit beträgt 10 ml Minute. In bestimmten Zeitabständen
wird 1 ml des Eluats entnommen und dessen Radioaktivität bestimmt. Auf diese Weise kann der Extraktionsgrad
bestimmt werden. Die Radioaktivität des Eluats sollte kleiner als 10% der ursprünglichen Aktivität
pro Volumeneinheit sein.
Zu etwa 8 ml des obenerwähnten Barbitalpuffers werden genügend (0,125 g EDTA-Na2) Di-Natriumsalz
der Äthylendiamintetraessigsäure hinzugegeben, daß eine Konzentration von 0,1 mg Di-Natrium-EDTA/ml
des Eluates (extrahierte Serumlösung) erhalten wird. Das Auflösen von EDTA kann durch leichtes Erwärmen
beschleunigt werden. Nach Abkühlung auf Raumtemperatur wird diese Lösung zu dem Säuleneluat
(extrahierte Serumlösung) hinzugegeben. Zu dem Eluat wird radiaoktives Thyroxin (ungefähr 0,27 mCi) hinzugefügt.
Es empfiehlt sich, die extrahierte Serumlösung durch einen O,22-p.-Filter zu filtrieren. Anschließend
werden 11 580 ml (= 6 · das Volumen des Eluats) Barbitalpuffer, der 0,1 mg Natrium-EDTA/ml enthält,
zu dem Eluat hinzugefügt. Das so gewonnene Reagenz hat einen pH-Wert von ungefähr 8,6 und eine Di-Natrium-EDTA-Konzentration
von 0,1 mg/ml.
Man entnimmt etwa 10 ml Blut, dessen Thyroxingehalt zu bestimmen ist, und läßt es koagulieren. Das
Serum wird dann abgetrennt, 1 ml des Serums werden tropfenweise zu 2 ml von 95 %igem Äthanol in ein
Zentrifugengläschen hinzugefügt. Die Bestandteile werden gut gemischt, um die Serumproteine zu denaturien.
Diese Alkoholmischung wird dann bei 2500 Umdrehungen pro Minute etwa 4 bis 5 Minuten zentrifugiert.
0,3 ml des überstehenden Produkts werden in ein geeignetes Testgläschen überführt, welches 4 ml
der TBG/radioaktive-T4-Reagenzlösung enthält, wie sie im Beispiel 1 beschrieben wird. Auf die gleiche Art
und Weise werden 2 Standardproben hergestellt; an Stelle des äthanolischen Serumextraktes werden je
0,3 ml einer äthanolischen Lösung hinzugefügt, die eine bestimmte Menge (z. B. 0 oder 12 ng) stabiles
Thyroxin enthalten.
Zu jedem Testgläschen wird dann ein Ionenaustauschermembranstreifen
gegeben. Da Thyroxin amphoter ist, kann dieser lonenaustauscherstreifen sowohl
anionenselektiv als auch kationenselektiv sein. Viele dieser Ionenaustauscherstreifen sind als Membranen
erhältlich.
Nach Zugabe des Ionenaustauscherstreifens werden die Fläschchen verschlossen und genau 1 Stunde bei
Raumtemperatur rotiert. Es empfiehlt sich, einen Rotator zu verwenden, der speziell für diese Zwecke
konstruiert worden ist. Da die Aufnahme von radioaktivem Thyroxin durch den Streifen eine Funktion
der Rotationszeit ist, ist es wesentlich, daß sowohl für die bekannten als auch unbekannten Proben die Rotationszeit
identisch ist. Nach einer Stunde Rotationszeit wird der lonenaustauscherstreifen mit Hilfe einer
Pinzette entfernt und verworfen. Die Radioaktivität jedes Gläschens wird dann bestimmt und als postcount
registriert. Es sollten mindestens 10.000 counts per Minute (cpm) registriert werden, um einen statistisehen
Fehler von weniger als 2% zu haben. Der sogenannte precount wird bestimmt durch Messen eines
Gläschens, das nur 4 ml der TBG/radioaktiven-T4-Lösung enthält. Anschließend berechnet man das
precount-postcount-Verhältnis für jede Probe. Die für die Standardproben erhaltenen Werte werden gegen
die Menge hinzugefügten T4 in ein Diagramm eingetragen. Die so erhaltenen Punkte werden durch eine
Gerade verbunden. Der Thyroxingehalt unbekannter Proben kann aus dem Diagramm ermittelt werden.
Da die Alkoholextrakte nur etwa 80% des im Serum vorhandenen T 4 enthalten, muß der erhaltene Wert
durch 0,8 — den sogenannten Extraktionsfaktor — dividiert werden, um den tatsächlichen Gehalt an Thyroxin
im Serum zu erhalten. Dieser so korrigierte Wert stellt den Gehalt an T 4 in ng in je 0,1 ml Serum dar,
welcher numerisch äquivalent zu dem T4 μg% des
Patientenserums ist. 1 μg% = 1 μg%/100 ml Serum.
Da die Serumprobe vorher mit 2 Volumina Äthanol pro Volumen Serum verdünnt wurde und 0,3 ml des
Äthanolserumüberstandes entnommen wurden, ist tatsächlich nur 0,1 ml des Serums untersucht worden.
So enthält 0,1 ml von einem 12,0 μg% Thyroxinserum:
12,0 μg 0,1ml 12,0
100 ml Probe
Probe
12,0 ng
Probe
Probe
Die Zeichnungen verdeutlichen die Störung, die gelegentlich bei Verwendung des in der US-PS 3414383
beschriebenen Reagenzes auftritt, und wie diese Störung durch das Reagenz gemäß dieser Erfindung eliminiert
werden konnte.
Die Diagramme von F i g. 1, 2 und 3 stellen die Ergebnisse von Untersuchungen zweier Standardlösungen
nach Beispiel 2 dar. Der erste Standard war eine äthanolische Lösung, die kein Thyroxin enthielt, und
der zweite eine gleiche Lösung, die genau 12 ng T4
enthielt. Bei jeder Untersuchung wurde das precountpostcount-Verhältnis
bestimmt, und die 3 Punktpaare wurden eingetragen. So wurden die drei Standardkurven
erhalten. Jedesmal wurde der 12-ng-Wert wegen des Extraktionsgrades von 80% korrigiert. Dei
12-ng-Wert wurde deshalb bei 15 ng eingetragen. Dieser ermöglicht eine direkte Ablesung der korrigierten
T4-Werte von der Standardkurve.
Parallel mit den 0- und 12-ng-Standards wurde ein
standardisiertes Normalserum (in diesem Fall das »Unbekannte«) untersucht. Der T4-Gehalt diese;
standardisierten Normalserums wurde unabhängif voneinander nach der Murphy-Patty-Methode unc
der PBJ-(Protein-Bound-Iodine-)Methode bestimmt. Ei betrug 9,3 μg% T4. Die Murphy-Patty-Methode ist ir
der Veröffentlichimg von B. E. P. Murphy unc
C. J. P a 11 y »Determination of Thyroxine Utilisinj
the Property of Protein Binding«, Journal of din Endocrinology, Bd. 24, S. 187 (1964), beschrieben. Ii
der Literatur sind verschiedene Methoden zur Bestimmung des PBJ bekannt; vgl. auch J.Robins
und J. E. Rail »The Iodine Containing Hormones«, »Hormones in Blood«, C. H. Grey und
A. L. Bacharach, Bd. 1, 2. Auflage, Academic Press New York, S. 405 bis 413.
Bei den durchgeführten Untersuchungen waren die 0- und 12-ng-T4-Standards und das Normalserum
konstant, variable war das Reagenz, das TBG und
radioaktives T4 enthielt. Die Ergebnisse der Radioaktivitätsmessung
sind in der Tabelle angegeben. In der Zeichnungen stellen die Punkte 10, 20 und 30 die
precount-postcount-Verhältnisse für die 0-ng-Standards, die Punkte 11, 21 und 31 die entsprechender
Ablesungen für die 12-ng-Standards (korrigiert aul 15 ng) dar. Die Punkte 12, 20 und 32 steilen die Ergebnisse
der lntersuchungen des standardisierten Normalserums dar.
Probe | cpm | cpm | Verhält |
precount | postcount | nis | |
F i g. 1 O-ng-Std. | 44 060 | 23 849 | 1,84 |
12-ng-Std | 43 884 | 14 400 | 3,04 |
Std. Normai | |||
serum | 43 449 | 16 596 | 2,61 |
F i g. 2 O-ng-Std. | 30 910 | 18 668 | 1,65 |
12-ng-Std | 30 859 | 13 537 | 2,28 |
Std. Normal | |||
serum | 30 979 | 12 368 | 2,50 |
F i 2. 3 O-ng-Std. | 30 677 | 17,386 | 1,76 |
12-ng-Std | 30 865 | 10,475 | 2,95 |
Std. Normal | |||
serum | 31221 | 12 399 | 2,52 |
Bei den Untersuchungen, die in F i g. 1 dargestellt sind, war ein normales TBG/radioaktives-T4-Reagenz
verwendet worden, wie es in der US-PS 34 14 383 beschrieben ist. Die Ergebnisse sind wie erwartet. Bei den
Ergebnissen in F i g. 2 war eine andere Charge vor TBG/radioaktivem -T4-Reagenz nach Brown verwendet
worden. Diese Untersuchung ergab ein abnorm niedriges precount-postcount-Vcrhällnis für
den 12-ng-Standard (Punkt 21). Dies resultierte in einem falsch hohen Serum-T4-Wert (Punkt 22) für das
standardisierte Normalserum.
Bei den Bestimmungen in F i g. 3 war das gleiche Reagenz wie bei F i g. 2 genommen worden, nur war
in Übereinstimmung mit der vorliegenden Erfindung 0,1 mg Di-Natrium-EDTA/ml hinzugefügt worden.
Diese Änderung ergab normale Werte für den 12-ng-Standard (Punkt 31) und dementsprechend ein exakter
T4-WertfürdasstandardisierteNormalserum(Punkt32)·
Hierzu 3 Blatt Zeichnungen
Claims (10)
1. Reagenz zur Bestimmung des Thyroxingehal- ist T 4, welches radioaktives Jod, wie J-125, enthält) zu
tes von Blutserum, bestehend aus einer gepufferten 5 einer Lösung hinzufügt, die mit emern Barbiturat ge-Lösung
von radioaktiv markiertem Thyroxin, d a- pufferies TBG enthält, praktisch alles T 4 an das TBG
durchgekennzeichnet, daß es weiterhin gebunden wird. Fügt man dann zu dieser TBG-Losung
einen Chelatbildner enthält nicht radioaktives T 4 hinzu, wird das radioaktive
2. Reagenz nach Anspruch 1, dadurch gekenn- T 4 vom TBG im Verhältnis zur zugefugten Menge
zeichnet, daß das Thyroxin radioaktives Jod ent- io nicht radioaktiv markierten T 4 in Freiheit gesetzt. Anhält,
schließend wird ein weiteres T 4-bindendes Reagenz,
3. Reagenz nach Anspruch 1, dadurch gekenn- z. B. ein Ionenaustauscher, zu diesem System hinzuzeichnet,
daß es zusätzlich Blutserum enthält, aus gefügt, der das radioaktive T 4 bindet, welches vom
dem das meiste natürlich vorkommende Thyroxin TBG in Freiheit gesetzt worden ist.
extrahiert worden ist. 15 Es sind verschiedene Methoden beschrieben, die auf
4. Reagenz nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dem obengenannten Prinzip beruhen. So kann z. B.
dadurch gekennzeichnet, daß es als Chelatbildner die Menge des freigesetzten radiaoktiv markierten T4
eine Aminopolycarbonsäure oder eines ihrer Salze und damit auch die Menge des zugefügten nicht radioenthält,
aktiven Thyroxins dadurch bestimmt werden, daß
5. Reagenz nach Anspruch 4, dadurch gekenn- 20 man den Ionenaustauscher mit dem gebundenen radiozeichnet,
daß es als Chelatbildner Äthylendiamin- aktiven T4 entfernt und die in der Lösung verbleibende
tetraessigsäure oder eines ihrer Salze enthält. Radioaktivität vergleicht. Gibt man steigende Mengen
6. Reagenz nach Anspruch 5, dadurch gekenn- von stabilem T4 zu Lösungen, die gleiche Mengen von
zeichnet, daß es als Chelatbildner das Di-Natrium- radioaktivem T4 und TBG enthalten, und verfährt wie
salz der Äthylendiamintetraessigsäure enthält. 25 oben angegeben, dann sinkt die verbleibende Radio-
7. Verfahren zur Bestimmung des Thyroxinge- aktivität in der TBG-Lösung. Trägt man in ein Koorhaltes
von Blutserum unter Verwendung von radio- dinaten-System das Verhältnis Radioaktivität vor Veraktivem
Thyroxin als Tracer, bei welchem man zu suchsbeginn zu Radioaktivität nach Versuchsende
einer bekannten Menge eines Reagenzes aus einer gegen die hinzugefügte Menge stabilen T4 ein, erhält
thyroxinbildendes Globulin und radioaktives Thy- 30 man eine Gerade. Wenn unbekannte Mengen stabiles
roxin enthaltenden Lösung, a) einen alkoholischen T4 zu der TBG-Lösung hinzugefügt und identisch beExtrakt
einer Blutserumprobe, deren Thyroxinge- handelt worden sind, dann kann man die Menge des
halt zu bestimmen ist, und b) ein Ionenaustauscher- T4 dem Diagramm entnehmen.
harz hinzufügt, die Lösung eine bestimmte Zeit- Für diese Bestimmung wird als TBG-Quelle norma-
spanne in Kontakt mit dem Ionenaustauscherharz 35 lerweise verdünntes Blutserum verwendet,
beläßt, dann das Ionenaustauscherhsrz von der Zur Bestimmung von T4 im Blutserum muß das
beläßt, dann das Ionenaustauscherhsrz von der Zur Bestimmung von T4 im Blutserum muß das
Globulinlösung abtrennt und die Radioaktivität Serum-T4 zuerst von den bindenden Proteinen befreit
der Globulinlösung mit der von Globulinlösungen werden. Dies geschieht durch Denaturierung der Provergleicht,
zu denen bekannte Mengen stabilen teine mit Alkohol. Nach Zentrifugation findet man in
Thyroxins, gelöst im gleichen Volumen Alkohol 40 dem alkoholischen überstehenden Produkt etwa 80%
gleicher Provenienz wie der im alkoholischen des vorhandenen T4.
Extrakt der Blutserumprobe, hinzugefügt wurden, In der US-PS 34 14 383 wird eine sehr gut geeignete
dadurch gekennzeichnet, daß man dem Reagenz praktische Methode zur Bestimmung von Serum-T4
einen Chelatbildner zusetzt. beschrieben.
8. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekenn- 45 Bei dieser Methode wird zu einer definierten Menge
zeichnet, daß man als Chelatbildner eine Amino- Reagenz, das eine Lösung von TBG und radioaktivem
polycarbonsäure oder eines ihrer Salze verwendet. T4 enthält, eine definierte Menge des alkoholischen
9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekenn- Extrakts der Serumprobe und ein Ionenaustauscher
zeichnet, daß man als Chelatbildner Äthylendiamin- hinzugefügt. Nach einer bestimmten Zeit wird der
tetraessigsäure oder eines ihrer Salze verwendet. 50 Ionenaustauscher entfernt und die verbleibende Akti-
10. Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekenn- vität in der Lösung bestimmt. Das Ergebnis wird mit
zeichnet, daß man als Chelatbildner das Di-Na- denen nach Zugabe definierter Mengen stabilen Thytriumsalz
der Äthylendiamintetraessigsäure ver- roxins erhaltenen verglichen.
wendet. In den meisten Fällen liefert zwar diese Methode
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